CN114028617A - 一种生物材料及其制备方法和应用 - Google Patents

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Abstract

本发明提供了一种生物材料及其制备方法和应用，该生物材料包括生物材料本体、水水微液滴以及羊膜基底膜液表层，或，生物材料包括两个羊膜基底膜双层交联单元以及位于羊膜基底膜双层交联单元之间的水水微液滴。水水微液滴作为生物交联剂，将羊膜基底膜液表层与生物材料本体进行交联，或者，将羊膜基底膜双层交联单元进行交联，保留羊膜及羊膜基底膜的无免疫原性，羊膜基底膜液形成的表层和羊膜基底膜双层交联单元可实现快速内皮化并且阻隔钙盐沉积，提升了生物材料抗钙化性能，延长生物材料的使用时间；同时采用双交联方式提高整个生物材料的结构稳定性和力学强度。

Description

一种生物材料及其制备方法和应用
技术领域
本发明涉及生物医学材料技术领域，尤其涉及一种生物材料及其制备方法和应用。
背景技术
心脏瓣膜疾病是一种常见的瓣膜衰退疾病。在解剖学上表现为血液通路变窄或瓣膜关闭不全。心脏瓣膜疾病的治疗包括开胸瓣膜置换手术以及经皮心脏瓣膜置换手术。开胸手术对病人创伤大、风险高、恢复慢、需体外循环支持，很多患者无法接受。经皮心脏瓣膜置换手术因为对病人创伤小、风险低，成为未来瓣膜手术的主要趋势。机械瓣膜耐用，但需终身服用抗凝药物，血栓栓塞发生率较高，并可能造成出血并发症。生物瓣膜具备与人体心脏瓣膜相似的流体力学性能且生物相容性优于机械瓣膜，且患者仅需要短期或不服用抗凝药物。但是生物瓣膜易钙化，耐久性差，存在一定的免疫原性是目前闲置生物瓣应用的主要因素。
羊膜是胎盘的最内层，无血管、神经及淋巴，分为五层：上皮层、基底膜、致密层、纤维母细胞层和海绵层，羊膜基底膜和羊膜基质层含有大量不同胶元可以促进上皮化、抑制炎症反应和抑制实质溶解并且无免疫原性。细胞碎片或细胞膜所含的磷酸基团、戊二醛交联导致的胶原纤维羧基、醛基、氨基等基团暴露，均会促进磷酸钙晶体形成，造成生物瓣膜钙化衰败。羊膜基底膜是构成血管、皮肤等内皮细胞生长的支撑层，它有利于内皮细胞粘附并快速内皮化，阻止血液成分和组织液成分渗入、钙盐的沉积及血栓的形成。
生物瓣膜一般由猪心包膜、牛心包膜等通过戊二醛等化学交联剂交联制备而成。戊二醛交联处理具有操作简单，成本低以及胶原蛋白交联程度高的特点，是目前生物心脏瓣膜化学交联的行业首选。然而，戊二醛交联的生物心脏瓣膜存在容易降解以及钙化的问题，导致生物瓣膜只有10年左右的有效使用年限。
因此，迫切需要研制出一种抗钙化且无免疫原性的新型生物瓣膜材料，延长生物瓣膜材料的使用时间。
发明内容
有鉴于此，本发明提出了一种生物材料及其制备方法和应用，以解决或部分解决现有技术中存在的技术问题。
第一方面，本发明提供了一种生物材料，所述生物材料包括生物材料本体、水水微液滴以及羊膜基底膜液表层，所述水水微液滴位于所述生物材料本体以及羊膜基底膜液表层之间，所述水水微液滴将所述羊膜基底膜表层与所述生物材料本体进行胶联，所述生物材料本体通过将去细胞羊膜经过交联反应制备得到；
或，所述生物材料包括两个羊膜基底膜双层交联单元以及位于所述羊膜基底膜双层交联单元之间的水水微液滴，所述羊膜基底膜双层交联单元通过将羊膜基底膜经过交联反应制备得到。
优选的是，所述的生物材料，所述生物材料本体的制备方法为：将去细胞羊膜浸泡于含有氨基基团小分子物质的水溶液中；然后将浸泡后的去细胞羊膜置于含有碳二亚胺、N-羟基琥珀酰亚胺的水溶液中发生交联反应；
所述羊膜基底膜双层交联单元的制备方法为：将羊膜基底膜浸泡于含有氨
基基团小分子物质的水溶液中；然后将浸泡后的羊膜基底膜置于含有碳二亚胺、N-羟基琥珀酰亚胺的水溶液中发生交联反应。
第二方面，本发明还提供了一种所述的生物材料的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
将水水微液滴涂布在生物材料本体表面，然后再涂布羊膜基底膜液，经过交联反应，即得生物材料；
或，所述生物材料的制备方法，包括以下步骤：
将其中一个羊膜基底膜双层交联单元浸泡在水水微液滴中，然后再将另一个羊膜基底膜双层交联单元粘附在浸泡后的羊膜基底膜双层交联单元上。
优选的是，所述的生物材料的制备方法，所述水水微液滴的制备方法为：将葡聚糖溶液、海藻糖溶液和明胶溶液加入到聚乙二醇溶液中，反应后即得到水水微液滴。
优选的是，所述的生物材料的制备方法，羊膜基底膜液的制备方法为：将羊膜基底膜粉碎后加入胰蛋白酶或核酸酶进行酶解，然后溶解于羊膜液中，即得羊膜基底膜液。
优选的是，所述的生物材料的制备方法，羊膜基底膜的制备方法为：将羊膜经过分离纤维母细胞层、海绵层、上皮细胞层和致密层，然后脱水、去细胞化后用含有青霉素、链霉素的生理盐水洗涤。
优选的是，所述的生物材料的制备方法，所述去细胞羊膜的制备方法为：将羊膜置于甘油中脱水后使用生理盐水洗涤，再加入去细胞化试剂处理后，再使用生理盐水洗涤即得去细胞羊膜；
所述去细胞化试剂包括去垢剂、表面活性剂、核酸酶、胰蛋白酶中的至少一种。
优选的是，所述的生物材料的制备方法，所述氨基基团小分子物质包括天冬酰胺、谷氨酰胺、赖氨酸、精氨酸中的至少一种；
所述含有氨基基团小分子物质的水溶液的质量浓度为1～5％。
优选的是，所述的生物材料的制备方法，所述水水微液滴的直径为3～10nm；
所述葡聚糖溶液的质量浓度为1～2％；
所述海藻糖溶液的质量浓度为0.3～0.8％；
所述明胶溶液的质量浓度为0.3～0.8％；
所述聚乙二醇溶液的质量浓度为5～8％。
第三方面，本发明还提供了一种所述的生物材料或所述的制备方法制备得到的生物材料在制备生物瓣膜、人工血管膜、人工皮肤、人工心肌瓣膜、人工骨膜以及人工血脑屏障中的应用。
本发明的一种生物材料及其制备方法和应用相对于现有技术具有以下有益效果：
(1)本发明的生物材料，水水微液滴作为生物交联剂，将羊膜基底膜液表层与生物材料本体进行交联，或者，将羊膜基底膜双层交联单元进行交联，保留羊膜及羊膜基底膜的无免疫原性，羊膜基底膜液形成的表层和羊膜基底膜双层交联单元可实现快速内皮化并且阻隔钙盐沉积，提升了生物材料抗钙化性能，延长生物材料的使用时间。同时水水微液滴能实现大部分胶原组织的稳定交联，提高整个羊膜的结构稳定性和力学强度，避免使用化学交联剂，以免破坏羊膜的蛋白活性。同时，生物材料本体通过将去细胞羊膜经过化学胶联反应制备得到，羊膜基底膜双层交联单元通过将羊膜基底膜经过交联反应制备得到，采用双交联方式提高整个生物材料的结构稳定性和力学强度。
附图说明
为了更清楚地说明本发明实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图作简单的介绍。显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本发明的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。
图1为本发明的生物材料其中一个实施例的结构示意图；
图2为本发明的生物材料另一个实施例的结构示意图。
具体实施方式
下面将结合本发明实施方式，对本发明实施方式中的技术方案进行清楚、完整的描述，显然，所描述的实施方式仅仅是本发明一部分实施方式，而不是全部的实施方式。基于本发明中的实施方式，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施方式，都属于本发明保护的范围。
本申请实施例提供了一种生物材料，包括生物材料本体、水水微液滴以及羊膜基底膜液表层，水水微液滴位于所述生物材料本体以及羊膜基底膜液表层之间，水水微液滴将羊膜基底膜表层与生物材料本体进行胶联，生物材料本体通过将去细胞羊膜经过交联反应制备得到；
或，生物材料包括两个羊膜基底膜双层交联单元以及位于羊膜基底膜双层交联单元之间的水水微液滴，羊膜基底膜双层交联单元通过将羊膜基底膜经过交联反应制备得到。
需要的说明的是，本申请实施例的生物材料，水水微液滴作为生物交联剂，将羊膜基底膜液表层与生物材料本体进行交联，或者，将羊膜基底膜双层交联单元进行交联，保留羊膜及羊膜基底膜的无免疫原性，羊膜基底膜液形成的表层和羊膜基底膜双层交联单元可实现快速内皮化并且阻隔钙盐沉积，提升了生物材料抗钙化性能，延长生物材料的使用时间。同时水水微液滴能实现大部分胶原组织的稳定交联，提高整个羊膜的结构稳定性和力学强度，避免使用化学交联剂，以免破坏羊膜的蛋白活性。同时，生物材料本体通过将去细胞羊膜经过化学胶联反应制备得到，羊膜基底膜双层交联单元通过将羊膜基底膜经过交联反应制备得到，采用双交联方式提高整个生物材料的结构稳定性和力学强度。
在一些实施例中，生物材料本体的制备方法为：将去细胞羊膜浸泡于含有氨基基团小分子物质的水溶液中；然后将浸泡后的去细胞羊膜置于含有碳二亚胺、N-羟基琥珀酰亚胺的水溶液中发生交联反应；
羊膜基底膜双层交联单元的制备方法为：将羊膜基底膜浸泡于含有氨基基团小分子物质的水溶液中；然后将浸泡后的羊膜基底膜置于含有碳二亚胺、N-羟基琥珀酰亚胺的水溶液中发生交联反应。
需要说明的是，浸泡后的去细胞羊膜或羊膜基底膜置于含有碳二亚胺、N-羟基琥珀酰亚胺的水溶液中，碳二亚胺活化去细胞羊膜或羊膜基底膜的羧基基团，而N-羟基琥珀酰亚胺使活化后的羧基基团与氨基基团发生稳定的交联，脱水缩合形成肽键，从而实现除去胶原之外的其他细胞外基质，包括弹性蛋白的稳定交联。
具体的，去细胞羊膜或羊膜基底膜置于含有碳二亚胺、N-羟基琥珀酰亚胺的水溶液中发生交联反应，反应时间为20～24h，水溶液中碳二亚胺、N-羟基琥珀酰亚胺的摩尔浓度之和为0.1～0.9M，且碳二亚胺、N-羟基琥珀酰亚胺的摩尔比为1:(1～2)。
在一些实施例中，将浸泡后的去细胞羊膜或羊膜基底膜置于含有碳二亚胺、N-羟基琥珀酰亚胺的水溶液中发生交联反应后还将反应后的去细胞羊膜或羊膜基底膜置于水中，于200～300r/min下清洗2～4h，以清除没有反应的氨基基团小分子物质以及碳二亚胺、N-羟基琥珀酰亚胺混合水溶液。
基于同一发明构思，本申请实施例还提供了一种生物材料的制备方法，包括以下步骤：
将水水微液滴涂布在生物材料本体表面，然后再涂布羊膜基底膜液，经过交联反应，即得生物材料；
或，生物材料的制备方法，包括以下步骤：
将其中一个羊膜基底膜双层交联单元浸泡在水水微液滴中，然后再将另一个羊膜基底膜双层交联单元粘附在浸泡后的羊膜基底膜双层交联单元上。
如图1所示，将水水微液滴3涂布在生物材料本体1表面，然后在生物材料本体1表面再涂布羊膜基底膜液，经过交联反应即形成羊膜基底膜液表层2，即制备得到生物材料；如图2所示，将其中一个羊膜基底膜双层交联单元4浸泡在水水微液滴中后取出后，显然在羊膜基底膜双层交联单元4负载有水水微液滴3，再将另一个羊膜基底膜双层交联单元4粘附在浸泡后的羊膜基底膜双层交联单元上，即制备得到生物材料。
具体的，将水水微液滴采用涂布机均匀涂布在生物材料本体外表面，涂布6～8层，涂布机每涂布一次即为一层；羊膜基底膜双层交联单元浸泡在水水微液滴中20-24h。
在一些实施例中，水水微液滴的制备方法为：将葡聚糖溶液、海藻糖溶液和明胶溶液加入到聚乙二醇溶液中，反应后即得到水水微液滴。
在一些实施例中，羊膜基底膜液的制备方法为：将羊膜基底膜粉碎后加入胰蛋白酶或核酸酶进行酶解，然后溶解于羊膜液中，即得羊膜基底膜液。
在一些实施例中，羊膜基底膜的制备方法为：将羊膜经过分离纤维母细胞层、海绵层、上皮细胞层和致密层，然后脱水、去细胞化后用含有青霉素、链霉素的生理盐水洗涤。
在一些实施例中，去细胞羊膜的制备方法为：将羊膜置于甘油中脱水后使用生理盐水洗涤，再加入去细胞化试剂处理后，再使用生理盐水洗涤即得去细胞羊膜。
在一些实施例中，去细胞化试剂包括去垢剂、表面活性剂、核酸酶、胰蛋白酶中的至少一种。
在上述实施例中，羊膜的获取具体为：无菌环境中获取胎膜，用含有青霉素、链霉素和青霉素的生理盐水浸泡30min，洗涤数次冲净血迹，再将羊膜从胎盘的绒毛膜上钝性分离后，将其上表面平铺于消毒的乙酸纤维素膜上。
具体的，本申请中所用的羊膜和羊膜基底膜还可以采用人工合成羊膜和人工合成羊膜基底膜。
在一些实施例中，氨基基团小分子物质包括天冬酰胺、谷氨酰胺、赖氨酸、精氨酸中的至少一种；
含有氨基基团小分子物质的水溶液的质量浓度为1～5％。
在一些实施例中，水水微液滴的直径为3～10nm，优选为5nm；
葡聚糖溶液的质量浓度为1～2％；
海藻糖溶液的质量浓度为0.3～0.8％；
明胶溶液的质量浓度为0.3～0.8％；
聚乙二醇溶液的质量浓度为5～8％。
本申请制备得到的生物材料不限于经皮介入生物心脏瓣膜所用的生物材料，也适用于开胸瓣膜置换手术所用的生物材料、皮肤置换和修复手术所用的生物材料、骨膜置换和修复手术所用的生物材料以及血脑屏障置换和修复手术所用的生物材料。
基于同一发明构思，本申请实施例还提供了上述制备得到的生物材料在制备生物瓣膜、人工血管膜、人工皮肤、人工心肌瓣膜、人工骨膜以及人工血脑屏障中的应用。
以下进一步以具体实施例说明本申请的生物材料的制备方法。
实施例1
本申请实施例提供了一种生物材料的制备方法，包括以下步骤：
S1、羊膜的获取：在无菌环境中获取胎膜，用含有青霉素、链霉素和青霉素的生理盐水浸泡30min，洗涤数次冲净血迹，再将羊膜从胎盘的绒毛膜上钝性分离后，将其上表面平铺于消毒的乙酸纤维素膜上，备用；
S2、羊膜基底膜的获取：将羊膜经过分离纤维母细胞层、海绵层、上皮细胞层和致密层，然后脱水、去细胞化后用含有青霉素、链霉素的生理盐水洗涤，得到羊膜基底膜；
S3、羊膜基底膜液的获取：将羊膜基底膜粉碎后加入胰蛋白酶、核酸酶进行酶解，然后溶解于羊膜液中，得到羊膜基底膜液；
S4、将制备好的羊膜放入甘油中脱水24h，然后使用生理盐水洗涤冲净，再加入胰蛋白酶、核酸酶在室温下处理5h，再使用生理盐水洗涤冲净得到去细胞羊膜；
S5、将去细胞羊膜浸泡于质量浓度为4％的谷氨酰胺的水溶液中浸泡24h，然后再将去细胞羊膜置于水中，于室温下、250r/min下清洗2h；
S6、再将去细胞羊膜置于含有碳二亚胺、N-羟基琥珀酰亚胺的水溶液中发生交联反应得到生物材料本体；其中，反应时间为24h，水溶液中碳二亚胺、N-羟基琥珀酰亚胺的摩尔浓度之和为0.5M，且碳二亚胺、N-羟基琥珀酰亚胺的摩尔比为1:1；
S7、将质量浓度为1.5％的葡聚糖溶液、质量浓度为0.5％的海藻糖溶液和质量浓度为0.5％的明胶溶液加入到质量浓度为6.5％的聚乙二醇溶液中于300r/min下反应10h，得到水水微液滴；
S8、将水水微液滴滴涂布在生物材料本体表面，然后再涂布羊膜基底膜液，交联反应后即得生物材料。
实施例2
本申请实施例提供了一种生物材料的制备方法，包括以下步骤：
S1、羊膜的获取：在无菌环境中获取胎膜，用含有青霉素、链霉素和青霉素的生理盐水浸泡30min，洗涤数次冲净血迹，再将羊膜从胎盘的绒毛膜上钝性分离后，将其上表面平铺于消毒的乙酸纤维素膜上，备用；
S2、羊膜基底膜的获取：将羊膜经过分离纤维母细胞层、海绵层、上皮细胞层和致密层，然后脱水、去细胞化后用含有青霉素、链霉素的生理盐水洗涤，得到羊膜基底膜；
S3、将羊膜基底膜浸泡于质量浓度为4％的赖氨酸的水溶液中浸泡24h，然后再将羊膜基底膜置于水中，于室温下、250r/min下清洗2h；
S4、再将羊膜基底膜置于含有碳二亚胺、N-羟基琥珀酰亚胺的水溶液中发生交联反应得到羊膜基底膜双层交联单元；其中，反应时间为24h，水溶液中碳二亚胺、N-羟基琥珀酰亚胺的摩尔浓度之和为0.5M，且碳二亚胺、N-羟基琥珀酰亚胺的摩尔比为1:1；
S5、将质量浓度为1.5％的葡聚糖溶液、质量浓度为0.5％的海藻糖溶液和质量浓度为0.5％的明胶溶液加入到质量浓度为6.5％的聚乙二醇溶液中于300r/min下反应10h，得到水水微液滴；
S6、将其中一个羊膜基底膜双层交联单元浸泡在水水微液滴中22h，取出后，再将另一个羊膜基底膜双层交联单元粘附在浸泡有水水微液滴的羊膜基底膜双层交联单元表面，即得生物材料。
性能测试
体外细胞实验测试实施例1～2中制备得到的生物材料的细胞毒性。
细胞毒性测试具体为：取对数生长期的小鼠成纤维细胞接种于96孔培养板中，每孔接种1.5/mL×104/mL的细胞悬液200μL，培养24小时。细胞毒性测试采用MTT细胞增殖及细胞毒性检测试剂盒进行测试：实验分为实验组、阴性对照组和阳性对照组，实验组1为是实施例1制备的生物材料，实验组2为是实施例2制备的生物材料，阴性对照组是细胞培养液，阳性对照组是人工瓣膜，将实验组、阴性对照组和阳性对照组按照试剂盒的步骤操作，最后用酶标仪测定570nm处的吸收度。计算细胞相对增殖百分率(RGR)，评定细胞毒性级别，结果如表1～2所示，表1～2中浓度指的是产生的毒素浓度。
表1-实施例1～2制备的生物材料细胞毒性实验结果
Figure BDA0003319657880000101
从上表1～2中可以看出，实验组的细胞毒性为0-1级，明显低于阳性对照组，安全性能明显提高。
体外细胞实验测试实施例2中制备得到的生物材料的力学强度
实验分为实验组和阳性对照组，实验组为按照实施例2中的方法重复三次，制备得到三个生物材料，将生物材料样品制成50mm×8mm的哑铃状，三个样品分别记为实验组一、实验组二、实验组三；对照组为市场上购买的人工瓣膜，将实验组和阳性对照组用材料力学检测仪固定样品两端，以5mm/min的速度进行拉伸，测算力学强度，结果如下表2所示。
表2-力学强度结果
Figure BDA0003319657880000102
Figure BDA0003319657880000111
从表2中可以看出，本发明制备得到的生物材料的平均力学强度为27.3±3N/mm2，与市场上购买的人工瓣膜力学强度相当，满足使用要求。
体外测试实施例1～2中制备得到的生物材料的挂钙量
实验分为实验组和阳性对照组，实验组1为实施例1中制备得到的生物材料，实验组,2为实施例1中制备得到的生物材料，对照组为人工瓣膜，将实验组和阳性对照组浸泡于含有高钙元素(20mM氯化钙CaCl2和20mM磷酸二氢钠NaH2PO4)的混合溶液中72小时，然后检测挂钙量，结果如表3所示。
表3-挂钙量实验结果
组别 挂钙量μg/L/mg组织干重)
阳性对照组 2.492
实验组1 1.563
实验组2 1.734
从表3中可以看出，实验组抗钙化性能大大提升。
体内植入检测实施例1～2中制备得到的生物材料的挂钙量
实验分为实验组和阳性对照组，实验组1为实施例1中制备得到的生物材料，实验组,2为实施例1中制备得到的生物材料，对照组为人工瓣膜，将实验组和阳性对照组植入小鼠腹部，60天后取出检测挂钙量，结果如表4所示。
表4-挂钙量实验结果
组别 挂钙量(μg/L/mg组织干重)
阳性对照组 32.783
实验组1 7.964
实验组2 8.458
从表4中可以看出，实验组抗钙化性能大大提升。
上面结合附图对本发明进行了示例性描述，显然本发明具体实现并不受上述方式的限制，只要采用了本发明的方法构思和技术方案进行的各种改进，或未经改进直接应用于其它场合的，均在本发明的保护范围之内。
上所述仅为本发明的较佳实施方式而已，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。

Claims (10)

1.一种生物材料，其特征在于，所述生物材料包括生物材料本体、水水微液滴以及羊膜基底膜液表层，所述水水微液滴位于所述生物材料本体以及羊膜基底膜液表层之间，所述水水微液滴将所述羊膜基底膜表层与所述生物材料本体进行胶联，所述生物材料本体通过将去细胞羊膜经过交联反应制备得到；
或，所述生物材料包括两个羊膜基底膜双层交联单元以及位于所述羊膜基底膜双层交联单元之间的水水微液滴，所述羊膜基底膜双层交联单元通过将羊膜基底膜经过交联反应制备得到。
2.如权利要求1所述的生物材料，其特征在于，所述生物材料本体的制备方法为：将去细胞羊膜浸泡于含有氨基基团小分子物质的水溶液中；然后将浸泡后的去细胞羊膜置于含有碳二亚胺、N-羟基琥珀酰亚胺的水溶液中发生交联反应；
所述羊膜基底膜双层交联单元的制备方法为：将羊膜基底膜浸泡于含有氨基基团小分子物质的水溶液中；然后将浸泡后的羊膜基底膜置于含有碳二亚胺、N-羟基琥珀酰亚胺的水溶液中发生交联反应。
3.一种如权利要求1～2任一所述的生物材料的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
将水水微液滴涂布在生物材料本体表面，然后再涂布羊膜基底膜液，经过交联反应，即得生物材料；
或，所述生物材料的制备方法，包括以下步骤：
将其中一个羊膜基底膜双层交联单元浸泡在水水微液滴中，然后再将另一个羊膜基底膜双层交联单元粘附在浸泡后的羊膜基底膜双层交联单元上。
4.如权利要求3所述的生物材料的制备方法，其特征在于，所述水水微液滴的制备方法为：将葡聚糖溶液、海藻糖溶液和明胶溶液加入到聚乙二醇溶液中，反应后即得到水水微液滴。
5.如权利要求3所述的生物材料的制备方法，其特征在于，羊膜基底膜液的制备方法为：将羊膜基底膜粉碎后加入胰蛋白酶或核酸酶进行酶解，然后溶解于羊膜液中，即得羊膜基底膜液。
6.如权利要求5所述的生物材料的制备方法，其特征在于，羊膜基底膜的制备方法为：将羊膜经过分离纤维母细胞层、海绵层、上皮细胞层和致密层，然后脱水、去细胞化后用含有青霉素、链霉素的生理盐水洗涤。
7.如权利要求3所述的生物材料的制备方法，其特征在于，所述去细胞羊膜的制备方法为：将羊膜置于甘油中脱水后使用生理盐水洗涤，再加入去细胞化试剂处理后，再使用生理盐水洗涤即得去细胞羊膜；
所述去细胞化试剂包括去垢剂、表面活性剂、核酸酶、胰蛋白酶中的至少一种。
8.如权利要求4所述的生物材料的制备方法，其特征在于，所述氨基基团小分子物质包括天冬酰胺、谷氨酰胺、赖氨酸、精氨酸中的至少一种；
所述含有氨基基团小分子物质的水溶液的质量浓度为1～5％。
9.如权利要求4所述的生物材料的制备方法，其特征在于，所述水水微液滴的直径为3～10nm；
所述葡聚糖溶液的质量浓度为1～2％；
所述海藻糖溶液的质量浓度为0.3～0.8％；
所述明胶溶液的质量浓度为0.3～0.8％；
所述聚乙二醇溶液的质量浓度为5～8％。
10.一种如权利要求1～2所述的生物材料或如权利要求3～9任一所述的的制备方法制备得到的生物材料在制备生物瓣膜、人工血管膜、人工皮肤、人工心肌瓣膜、人工骨膜以及人工血脑屏障中的应用。
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