CN113999849A - 癌症生物分子标志物及应用 - Google Patents

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Abstract

本发明提供一种癌症生物分子标志物，属于生物医药技术领域，所述生物分子标志物为环状RNA circ_0082002，所述环状RNA circ_0082002的序列如SEQ No.1所示。所述癌症的类型包括甲状腺乳头状癌、鼻咽癌、口腔癌、卵巢癌中的一种。检测环状RNA circ_0082002的试剂为检测血清中环状RNAcirc_0082002的试剂。环状RNA circ_0082002可用于制备用于检测癌症生物分子标志物的探针组合物。本发明应用全转录组高通量测序，筛选出高表达的环状RNA circ_0082002，该环状RNA的高表达可能通过hsa‑miR‑6796‑5p/ALDH1A3信号通路调控甲状腺乳头状癌的生物学功能；通过血液检查检测环状RNA circ_0082002的表达，可以更方便快捷，减少创伤，实现稳定有效的甲状腺乳头状癌早期诊断；该环状RNAcirc_0082002通过与miRNA(hsa‑miR‑6796‑5p)的海绵作用，而使靶基因上调。

Description

癌症生物分子标志物及应用
技术领域
本发明涉及生物医药技术领域，具体涉及一种用于肿瘤辅助诊断的癌症生物分子标志物及应用。
背景技术
减少甲状腺癌、口腔癌、鼻咽癌等恶心肿瘤的发病因素、进行稳定有效的早期诊断，对癌症的控制有重要的作用。目前超声引导下甲状腺细针穿刺(FNAB)是临床上甲状腺结节诊断的主要手段之一，但仍然有大约30％为患者不能明确诊断。
环状RNA(circual RNA，circRNA)是一种新的非编码RNA，其构型与传统的线性RNA(含5’和3’末端)不同，环状RNA分子呈封闭环状结构(即5’端和3’端收尾相连)，由于没有游离的5’和3’末端，因此环状RNA比线性RNA更加保守和稳定，不容易被核酸酶降解。
某些环状RNA的表达水平远远高于其相关线性基因的表达，环状RNA以共价键形成环状结构，多数circRNA是反向拼接的产物，在机体广泛表达，大多数定位于胞质。CircRNA可以作为miRNA的分子海绵吸附miRNA、结合蛋白质、或作为基因转录和蛋白质翻译的调控因子等发挥重要的生物学功能。可以作为恶性肿瘤的生物标志物和临床治疗靶标。
发明内容
本发明的目的在于提供一种癌症生物分子标志物及应用，为肿瘤的诊断及预后提供新的思路，以解决上述背景技术中存在的至少一项技术问题。
为了实现上述目的，本发明采取了如下技术方案：
一方面，本发明提供一种癌症生物分子标志物，所述生物分子标志物为环状RNAcirc_0082002，所述环状RNA circ_0082002的序列如SEQ No.1所示。
优选的，所述癌症的类型包括甲状腺乳头状癌、鼻咽癌、口腔癌、卵巢癌中的一种。
优选的，检测环状RNA circ_0082002的试剂为检测血清中环状RNA circ_0082002的试剂。
第二方面，本发明提供一种试剂盒，包括检测如上所述的癌症生物分子标志物的试剂。
优选的，所述试剂包括实时荧光定量检测试剂。
优选的，所述实时荧光定量检测试剂中包含用于实时荧光定量检测环状RNAcirc_0082002表达的引物：
上游引物：5’-ACAATGTGAGATGTCTCCAGCAT-3’
下游引物：5’-GGTAAACAGGAGCACGAGGAT-3’。
第三方面，本发明提供一种检测如上所述的癌症生物分子标志物的试剂在制备癌症辅助诊断制剂上的应用。
第四方面，本发明提供一种如上所述的环状RNA circ_0082002在癌症诊断中的应用，所述癌症的类型包括甲状腺乳头状癌、鼻咽癌、口腔癌、卵巢癌中的一种。
第五方面，本发明提供一种如上所述的环状RNA circ_0082002在制备治疗癌症的药物中的应用，所述癌症的类型包括甲状腺乳头状癌、鼻咽癌、口腔癌、卵巢癌中的一种。
第六方面，本发明提供一种探针组合物，所述探针组合物用于检测癌症生物分子标志物，所述生物分子标志物为环状RNA circ_0082002。
本发明有益效果：应用全转录组高通量测序，筛选出高表达的环状RNA circ_0082002，该环状RNA的高表达可能通过hsa-miR-6796-5p/ALDH1A3信号通路调控甲状腺乳头状癌的生物学功能；通过血液检查检测环状RNA circ_0082002的表达，可以更方便快捷，减少创伤，实现稳定有效的甲状腺乳头状癌早期诊断；该环状RNAcirc_0082002通过与miRNA(hsa-miR-6796-5p)的海绵作用，而使靶基因上调。
本发明附加的方面和优点将在下面的描述中部分给出，这些将从下面的描述中变得明显，或通过本发明的实践了解到。
附图说明
为了更清楚地说明本发明实施例的技术方案，下面将对实施例描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本发明的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。
图1为本发明实施例所述的甲状腺细针穿刺样品(FANB)高通量测序分析的工作流程示意图。
图2为识别差异表达的circRNA的表达结果示意图。
图3为甲状腺乳头状癌(PTC)和配对相邻正常甲状腺组织中差异circRNA表达的验证结果示意图。
具体实施方式
下面详细叙述本发明的实施方式，所述实施方式的示例在附图中示出，其中自始至终相同或类似的标号表示相同或类似的元件或具有相同或类似功能的元件。下面通过附图描述的实施方式是示例性的，仅用于解释本发明，而不能解释为对本发明的限制。
本技术领域技术人员可以理解，除非另外定义，这里使用的所有术语(包括技术术语和科学术语)具有与本发明所属领域中的普通技术人员的一般理解相同的意义。
还应该理解的是，诸如通用字典中定义的那些术语应该被理解为具有与现有技术的上下文中的意义一致的意义，并且除非像这里一样定义，不会用理想化或过于正式的含义来解释。
本技术领域技术人员可以理解，除非特意声明，这里使用的单数形式“一”、“一个”、“所述”和“该”也可包括复数形式。应该进一步理解的是，本发明的说明书中使用的措辞“包括”是指存在所述特征、整数、步骤、操作、元件和/或组件，但是并不排除存在或添加一个或多个其他特征、整数、步骤、操作、元件和/或它们的组。
在本说明书的描述中，参考术语“一个实施例”、“一些实施例”、“示例”、“具体示例”、或“一些示例”等的描述意指结合该实施例或示例描述的具体特征、结构、材料或者特点包含于本发明的至少一个实施例或示例中。而且，描述的具体特征、结构、材料或者特点可以在任一个或多个实施例或示例中以合适的方式结合。此外，在不相互矛盾的情况下，本领域的技术人员可以将本说明书中描述的不同实施例或示例以及不同实施例或示例的特征进行结合和组合。
为便于理解本发明，下面结合附图以具体实施例对本发明作进一步解释说明，且具体实施例并不构成对本发明实施例的限定。
本领域技术人员应该理解，附图只是实施例的示意图，附图中的部件并不一定是实施本发明所必须的。
在本说明书中描述的生物技术、分子肿瘤学、分子和细胞生物学结合使用的命名法以及技术是本领域公知和常用的技术。本发明公开的内容在肿瘤学领域中用于在癌症治疗之前和/或手术后将早期甲状腺乳头状癌患者分级为甲状腺乳头状癌复发的高风险或低风险方面具有实用性。
在一个实施方案中，在手术后或化学治疗前，对患者样品进行本发明中的预后和/或预测测试，因为给予化学治疗的决定基于测试结果。因此，本发明中涉及用于在早期甲状腺乳头状癌中检测癌症复发的预后测试以及具体地基于患者患者的预后结果将能够做出化学治疗决定并且还设计新药物或个体化治疗的预测性测试。
因此，本发明公开的内容通过帮助将早期甲状腺乳头状癌患者分级为甲状腺乳头状癌复发的低风险或高风险，因而将能够根据最佳化学治疗需求智能地勾画出治疗低风险和高风险患者的模块，从而克服患者的治疗不足/过渡治疗，并且还有助于设计用于癌症治疗的有效药物或个体化治疗。
本说明书的描述中，使用的“肿瘤”或“癌症”是本领域公知的术语，并且在整个公开内容中可互换使用。同样，术语“临床预后因素”、“临床预后参数”或“临床病理参数/临床参数/临床变量”；“算法”或“模块”或“等式”；“IHC评分/评分”或“IHC评级/评级”在本发明公开内容中均可互换使用。
“标志物”或“生物标志物”意指整个基因/蛋白质，或源自该基因的EST，其表达或水平在某些病症之间变化。当基因的表达与某种疾病相关时，该基因是该疾病的标志物。
术语“预后”或“预后标志物”涉及预测疾病进展而不考虑对疗法/治疗/药物的任何提及。用于例如年龄、肿瘤分期、肿瘤等级的非常定性的预测方法是预后标志物。这种预后涉及了解疾病的长期结果。
本说明书内容描述中，术语“IHC分级”涉及病理学家基于染色％(0至100％)和染色强度(0至3)为每个染色的IHC载玻片指定的原始分级值。
术语IHC/免疫组织化学(没有对现有技术的参考)涉及形态测量的免疫组织化学。该术语还旨在包括与进行IHC的过程相关的常规组织病理学技术。本发明中进行的免疫组织化学分析包括常规的IHC方法，其中通过观察在该方法完成时获得的显色反应或荧光来进行生物标志物的鉴定，因为所期望的生物标志物的染色存在于来自样品的细胞上。
本说明书中的术语“预测性”或“预测性标志物”涉及这样的标志物，其不仅提供对疾病进展的参考，而且更重要的是将基于标志物如环状RNA circ_0082002的存在来指导治疗。使用是预后的并指导可能进行何种治疗。
本发明的的一些实施例中，对甲状腺乳头状癌评估的临床参数包括结状态、肿瘤等级和肿瘤大小。其中结状态包括肿瘤结阳性和肿瘤结阴性，肿瘤等级包括1级、2级和3级，肿瘤大小包括T1、T2或T3。
在本发明的一些实施例中，应用全转录组高通量测序，筛选出了高表达的环状RNA(hsa_circ_0082002)。血清作为检测样本，相比于组织检测，样本获取方式以及操作方便，成本低，准确性高。因此，本发明实施例中采用血清作为样本，通过大量实验寻找和验证血清中与肿瘤诊断相关的分子，以及它们与肿瘤之间存在的关系，发现血清中存在的环状RNAcirc_0082002与多种类型的肿瘤存在正相关的关系，其能够作为辅助或初步诊断恶性肿瘤的血清分子标志物。
本发明实施例中，采用的正常对照组与肿瘤组血清样本，均来自于某医院体检中心，收集的正常对照组中，排除了肿瘤性疾病无传染病、严重免疫性疾病及其他重大疾病；肿瘤组血清样本包括：鼻咽癌患者血清样本、口腔癌患者血清样本、甲状腺乳头状癌患者血清样本、卵巢癌患者血清样本。所有数据的获取都在符合法律法规、患者同意的基础之上，所有的血清样本均征得了被采集者或患者的的同意。
本发明实施例采用qRT-PCR方法分别在甲状腺乳头状癌、鼻咽癌、口腔癌、卵巢癌中验证环状RNA circ_0082002的表达情况。本发明实施例中采用的样本数量充足，具有统计学意义，且样本来源合理，筛选标准严格，实验过程严谨，结果真实可靠。
本发明实施例的实验结果显示，环状RNA circ_0082002状腺乳头状癌、鼻咽癌、口腔癌、卵巢癌患者血清中表达均明显上调，并呈现出表达趋势的一致性，环状RNA circ_0082002可以作为肿瘤诊断的分子标志物。
本发明实施例所述的环状RNA circ_0082002，其碱基序列如SEQ No.1所示。检测环状RNA circ_0082002的试剂为检测血清中环状RNA circ_0082002的试剂。
本发明实施例中所述的环状RNA circ_0082002的检测试剂可用于制备一种检测试剂盒，为肿瘤辅助诊断提供一种准确可靠的检测产品。其中，所述试剂包括实时荧光定量检测试剂。所述实时荧光定量检测试剂中包含用于实时荧光定量检测环状RNA circ_0082002表达的引物。环状RNA circ_0082002的序列如SEQ No.1所示。
其中，用于实时荧光定量检测环状RNA circ_0082002表达的引物：
上游引物：5’-ACAATGTGAGATGTCTCCAGCAT-3’
下游引物：5’-GGTAAACAGGAGCACGAGGAT-3’。
本发明实施例所述的检测环状RNA circ_0082002的试剂可用于制备癌症辅助诊断制剂。该环状RNA circ_0082002还可用于制备治疗癌症的药物，所述癌症的类型包括甲状腺乳头状癌、鼻咽癌、口腔癌、卵巢癌中的一种。
本发明实施例中，制备了一种用于实时荧光定量检测环状RNA circ_0082002表达的引物配套的探针组合物，所述探针组合物用于检测环状RNA circ_0082002，探针序列为：
上游引物：5’-ACAATGTGAGATGTCTCCAGCAT-3’
下游引物：5’-GGTAAACAGGAGCACGAGGAT-3’。
本发明实施例中所用的引物和探针均通过专用的引物设计网站Primer 3.0设计，引物合成委托北京擎科生物科技有限公司青岛分公司合成。为了确保引物的特异性和qPCR的精确性，严格遵循以下引物设计原则：
1、引物设计原则是：
引物长度：18～23bp，保证眼神温度不会太高；
PCR扩增产物长度：100～200bp；
引物GC含量：50-60％，上下游引物GC含量尽量接近；
引物TM值：57℃～62℃范围之内，并尽量接近60℃；
引物自身互补：不超过连续4个碱基互补；
两引物之间互补：不超过连续4个碱基互补；
避开T/C/A/G连续结构：3’UTR端尽量避免出现3个以上连续碱基；
避免引物形成二级结构：自由能小于58.61KJ/mol；
避免基因组非特异性扩增：跨外显子设计引物；
Blast检验引物特异性：同源性小于70％。
2、遵循以下探针设计原则：
探针长度：18～32bp之间，太长淬灭效果不好；
探针GC含量：30-80％，避免探针中多个重复的碱基出现，避免≥4个的G碱基出现；
探针TM值：66-72℃之间，最好为70℃，确保探针TM值比引物TM值高5-10℃，保证探针在退火时先于引物与目的片段结合；
探针与引物位置：探针应靠近上游引物，即探针应靠近与其在同一条链上的上游引物，要保证探针的5’端离上游引物的5’端至少有4bp；
探针5’端：探针的5’端不能为G，因为即使单个G碱基与FAM荧光报告基团相连时，G可以淬灭FAM基团所发出的荧光信号，从而导致假阴性的出现。
本实施例中，应用全转录组高通量测序，筛选出高表达的环状RNA(hsa_circ_0082002)，根据环状RNA权威数据库CircBase(http://circbase.org/)分析出该环状RNA的高表达可能通过hsa-miR-6796-5p/ALDH1A3信号通路调控甲状腺乳头状癌的生物学功能。
甲状腺细针穿刺样品(FANB)高通量测序分析的工作流程，如图1所示。样本采集流程如下：
1.从上述鉴定的患者收集细针穿刺样本，考虑到可操作性，所取细胞数量大于104。
2.去除非研究的组织类型(如结缔组织，脂肪组织等)，判断病变以及正常组织，应将病变组织周围的正常组织去掉。
3.迅速用预冷的RNase-free水配制的1XPBS或生理盐水清洗组织表面的污渍，吸干表面的液体。
4.处理好的组织迅速放入预冷好的已写好编号的RNase-free的螺纹冻存管中，液氮中迅速冷却1小时后，于-80℃，长期保存，在RNA提取前避免反复冻融。
样本血清总RNA提取流程如下：
RNA的抽提与纯化本项目采用RNeasy Micro Kit(50)Qiagen#74004试剂盒进行样本的RNA抽提，抽提时严格遵循试剂盒生产厂商提供的标准操作流程手册进行，抽提得到的为样本的总RNA。
1.向上述裂解液中加入RNAex体积量1/5氯仿，充分混合。室温静置5分钟。
2.12,000g 4℃离心15分钟。小心取出离心管，此时匀浆液分为三层，即：上清液(含RNA)、中间蛋白层及下层有机相。
3.吸取上清液转移至另一新的离心管中(切勿吸出中间蛋白层)。
4.向上清中加入1/2倍RNAex体积的异丙醇，充分混匀，室温下静置10分钟。
5.12,000g 4℃离心10分钟。离心后弃上清液，注意不要触碰到RNA沉淀。
6.向离心管中加入与RNAex等体积的80％乙醇(-20℃预冷)，清洗RNA沉淀及离心管管壁，7,500g 4℃离心5分钟，小心弃去上清，切勿触及沉淀。
(注：弃上清的时候，尽可能的去掉上清，可用移液枪吸干残留在管壁及管口的液滴。)
7.打开离心管盖，抽真空或室温干燥沉淀约5分钟。
(注：如果乙醇残留较多，可延长干燥时间，切记不要使用离心干燥或者加热干燥，否则RNA将很难溶解)
8.向离心管中加入适量的RNA-free水溶解RNA。将溶解后的RNA放入-80℃中保存。
实时荧光定量检测(Real time PCR)采用的反应体系为：
Figure BDA0003337510710000101
以A&G公司
Figure BDA0003337510710000102
Green Premix Pro Taq HS qPCR Kit(Code.AG11701)为例，具体操作如下(以ABI 7500Real-Time PCR System为例)：定量PCR反应体系中，cDNA原液使用体积不要超过定量PCR反应总体积的10％。引物通常使用终浓度为0.2μM，当反应结果差时可以在0.1–1.0μM范围内调整。按照不同仪器推荐的反应体系配制反应液。如果需要使用ROX进行荧光信号校准，按照仪器推荐量添加。若不需要使用ROX的PCR仪，ROX ReferenceDye可使用RNase free water代替。
实时荧光定量检测的方法流程步骤如下：
Figure BDA0003337510710000111
建议首先采用两步法PCR反应程序，如果得不到良好的实验结果时再优化反应条件；如果引物Tm值较低，导致两步法扩增效率较差，可采用三步法进行PCR扩增。预变性温度通常设定为30sec，如果模板变性困难，可以延长预变性时间至1～2min。
反应结束后，确认实时荧光定量PCR的扩增曲线和溶解曲线，各基因的表达强度根据CT值(threshold cycle values)、内参基因(pGL3)标化后，采用unpaired t-test检验计算P值。
实验：环状RNA circ_0082002在甲状腺乳头状癌患者血清中高表达
实验采集了50例甲状腺乳头状癌患者血清与50例正常对照者血清，并分为多个实验组进行了实验验证，结果如图2所示。
如图2所示，其中，(a)为聚类分析显示mRNA的差异表达。对疾病组(Tum1、Tum2、Tum3、Tum4)和对照组(Con1、Con2、Con3、Con4)的8个样本进行聚类分析。PTC和邻近正常组织分层聚类，差异筛选标准为P值<0.05和倍数变化>2。(b)为PTC组织中明显异常circRNA的火山图。在上调circRNA和下调circRNA分布上有显着差异(P值<0.005，log2FC≥2)。(c)为层次聚类反映PTC和邻近正常组织中表达的circRNA存在差异。(d)为PTC组织和正常对照组织中circRNA表达差异的散点图。虚线上方和下方分别代表PTC组织和邻近正常组织中circRNA倍数变化>2。虚线上方是上调，下方是下调。x轴和y轴是每个样本的SRPBM归一化信号值。
如图3所示，根据高通量测序结果，筛选出7个circRNA，并使用15对甲状腺乳头状癌(PTC)和正常对照组织进行qRT-PCR验证。甲状腺乳头状癌(PTC)中circRNA的表达水平与正常组织相比实时定量逆转录PCR结果采用2-ΔΔCT法进行评估，结果表示为平均值±标准差，**P值<0.01。
进行患者样品中生物标志物鉴定的流程步骤包括：如：
1.从上述鉴定的患者收集细针穿刺样本，考虑到可操作性，所取细胞数量大于104。
2.去除非研究的组织类型(如结缔组织，脂肪组织等)，判断病变以及正常组织，应将病变组织周围的正常组织去掉。
3.迅速用预冷的RNase-free水配制的1XPBS或生理盐水清洗组织表面的污渍，吸干表面的液体。
4.处理好的组织迅速放入预冷好的已写好编号的RNase-free的螺纹冻存管中，液氮中迅速冷却1小时后，于-80℃，长期保存，在RNA提取前避免反复冻融。
5.RNA的抽提与纯化本项目采用RNeasy Micro Kit(50)Qiagen#74004试剂盒进行样本的RNA抽提，抽提时严格遵循试剂盒生产厂商提供的标准操作流程手册进行，抽提得到的为样本的总RNA。
6.RNA质检，抽提的总RNA采用Agilent Bioanalyzer 2100(Agilenttechnologies,Santa Clara,CA,US)进行质量检验，并使用
Figure BDA0003337510710000121
3.0Fluorometer和NanoDrop One分光光度计来对总RNA进行定量。
7.下一步qPCR反应，可配合定量相关产品使用。操作如下：
首先去除基因组DNA。按照下表配制好反应液，进行基因组DNA去除反应。
组分名称 加入量
gDNA Clean Reagent 1μl
5X gDNA Clean Buffer 2μl
Total RNA*1 -
RNase free water up to 10μl
Figure BDA0003337510710000131
其次RNA量可根据需要添加。在20μl反转录体系中，使用SYBR法进行qPCR扩增时，最多使用1μg总RNA；使用探针法进行qPCR扩增时，最多使用2μg总RNA。反转录反应。配制RNA模板溶液，置于PCR仪进行变性、退火反应。
Figure BDA0003337510710000132
反应条件：37℃15min；85℃5sec；4℃-
如果使用SYBR Green qPCR法，RT Primer Mix用量为1μl；如果使用探针qPCR法，RT Primer Mix的用量为4μl。也可以不使用RT Primer Mix，而选择Gene Specific Primer引物，建议引物使用量如下：Gene Specific Primer—5pmol/20μl反应体系。
配制反转录反应时，这几种溶液可以预先配制成Master Mix，再分装10μl到上述10μl步骤；反应液中。如不配制Master Mix，向步骤1反应液中添加试剂顺序：RNase freewater、5X RTase Reaction Buffer Mix I，混合均匀，使得gDNA Clean Reagent活性受到充分抑制，之后再添加RT Primer MIix、Evo M-MLV RTase Enzyme Mix溶液，轻轻混匀后进行反转录反应。反转录反应体系可以根据需要相应调整。当使用Gene Specific Primer时，可以将反应条件设置为42℃，15min；如果为降低非特异性扩增，可将反应温度升高到50℃。
8.定量PCR分析
经上述反转录过程得到的cDNA可以直接进行定量PCR分析。以A&G公司
Figure BDA0003337510710000141
Green Premix Pro Taq HS qPCR Kit(Code.AG11701)为例，具体操作如下：
(以ABI 7500Real-Time PCR System为例)
Figure BDA0003337510710000142
定量PCR反应体系中，cDNA原液使用体积不要超过定量PCR反应总体积的10％。引物通常使用终浓度为0.2μM，当反应结果差时可以在0.1–1.0μM范围内调整。按照不同仪器推荐的反应体系配制反应液。如果需要使用ROX进行荧光信号校准，按照仪器推荐量添加。若不需要使用ROX的PCR仪，ROX Reference Dye可使用RNase free water代替。
Figure BDA0003337510710000143
首先采用两步法PCR反应程序，如果得不到良好的实验结果时再优化反应条件；如果引物Tm值较低，导致两步法扩增效率较差，可采用三步法进行PCR扩增。预变性温度通常设定为30sec，如果模板变性困难，可以延长预变性时间至1～2min。
综上所述，本发明实施例提供的环状RNA circ_0082002，其序列如SEQ No.1所示。该环状RNA circ_0082002可作为癌症生物标志物，癌症的类型包括甲状腺乳头状癌、鼻咽癌、口腔癌、卵巢癌中的一种。检测环状RNA circ_0082002的试剂为检测血清中环状RNAcirc_0082002的试剂。检测环状RNA circ_0082002的试剂可用于制备试剂盒。其中，实时荧光定量检测环状RNA circ_0082002表达的引物：
上游引物：5’-ACAATGTGAGATGTCTCCAGCAT-3’
下游引物：5’-GGTAAACAGGAGCACGAGGAT-3’。
上述的癌症生物分子标志物的试剂可应用于制备癌症辅助诊断制剂，用语癌症辅助诊断，还可用于制备治疗癌症的药物。还可制备一种用于检测癌症生物分子标志物。
上述虽然结合附图对本发明的具体实施方式进行了描述，但并非对本发明保护范围的限制，所属领域技术人员应该明白，在本发明公开的技术方案的基础上，本领域技术人员在不需要付出创造性劳动即可做出的各种修改或变形，都应涵盖在本发明的保护范围之内。
Figure BDA0003337510710000161
SEQUENCE LISTING
<110> 山东大学齐鲁医院
<120> 癌症生物分子标志物及应用
<160> 1
<170> PatentIn version 3.3
<210> 1
<211> 1214
<212> DNA
<213> 人工合成
<400> 1
ataaacctct cataatgaag gcccccgctg tgcttgcacc tggcatcctc gtgctcctgt 60
ttaccttggt gcagaggagc aatggggagt gtaaagaggc actagcaaag tccgagatga 120
atgtgaatat gaagtatcag cttcccaact tcaccgcgga aacacccatc cagaatgtca 180
ttctacatga gcatcacatt ttccttggtg ccactaacta catttatgtt ttaaatgagg 240
aagaccttca gaaggttgct gagtacaaga ctgggcctgt gctggaacac ccagattgtt 300
tcccatgtca ggactgcagc agcaaagcca atttatcagg aggtgtttgg aaagataaca 360
tcaacatggc tctagttgtc gacacctact atgatgatca actcattagc tgtggcagcg 420
tcaacagagg gacctgccag cgacatgtct ttccccacaa tcatactgct gacatacagt 480
cggaggttca ctgcatattc tccccacaga tagaagagcc cagccagtgt cctgactgtg 540
tggtgagcgc cctgggagcc aaagtccttt catctgtaaa ggaccggttc atcaacttct 600
ttgtaggcaa taccataaat tcttcttatt tcccagatca tccattgcat tcgatatcag 660
tgagaaggct aaaggaaacg aaagatggtt ttatgttttt gacggaccag tcctacattg 720
atgttttacc tgagttcaga gattcttacc ccattaagta tgtccatgcc tttgaaagca 780
acaattttat ttacttcttg acggtccaaa gggaaactct agatgctcag acttttcaca 840
caagaataat caggttctgt tccataaact ctggattgca ttcctacatg gaaatgcctc 900
tggagtgtat tctcacagaa aagagaaaaa agagatccac aaagaaggaa gtgtttaata 960
tacttcaggc tgcgtatgtc agcaagcctg gggcccagct tgctagacaa ataggagcca 1020
gcctgaatga tgacattctt ttcggggtgt tcgcacaaag caagccagat tctgccgaac 1080
caatggatcg atctgccatg tgtgcattcc ctatcaaata tgtcaacgac ttcttcaaca 1140
agatcgtcaa caaaaacaat gtgagatgtc tccagcattt ttacggaccc aatcatgagc 1200
actgctttaa tagg 1214

Claims (10)

1.一种癌症生物分子标志物，其特征在于，所述生物分子标志物为环状RNA circ_0082002，所述环状RNA circ_0082002的序列如SEQ No.1所示。
2.根据权利要求1所述的癌症生物分子标志物，其特征在于，所述癌症的类型包括甲状腺乳头状癌、鼻咽癌、口腔癌、卵巢癌中的一种。
3.根据权利要求1或2所述的癌症生物分子标志物，其特征在于，检测环状RNA circ_0082002的试剂为检测血清中环状RNA circ_0082002的试剂。
4.一种试剂盒，其特征在于，包括检测如权利要求1所述的癌症生物分子标志物的试剂。
5.根据权利要求4所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂包括实时荧光定量检测试剂。
6.根据权利要求5所述的试剂盒，其特征在于，所述实时荧光定量检测试剂中包含用于实时荧光定量检测环状RNA circ_0082002表达的引物：
上游引物：5’-ACAATGTGAGATGTCTCCAGCAT-3’
下游引物：5’-GGTAAACAGGAGCACGAGGAT-3’。
7.一种检测如1或2所述的癌症生物分子标志物的试剂在制备癌症辅助诊断制剂上的应用。
8.一种如权利要求1或2所述的环状RNA circ_0082002在癌症诊断中的应用，所述癌症的类型包括甲状腺乳头状癌、鼻咽癌、口腔癌、卵巢癌中的一种。
9.一种如权利要求1或2所述的环状RNA circ_0082002在制备治疗癌症的药物中的应用，所述癌症的类型包括甲状腺乳头状癌、鼻咽癌、口腔癌、卵巢癌中的一种。
10.一种探针组合物，其特征在于，所述探针组合物用于检测癌症生物分子标志物，所述生物分子标志物为环状RNA circ_0082002。
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