CN113969314B - 用于诊断乳腺癌的标记物及其应用 - Google Patents

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Abstract

本发明属于生物医药技术领域，具体为用于诊断乳腺癌的标记物及其应用。LncRNA030在乳腺癌干细胞中高表达，与乳腺癌病人的不良预后相关；LncRNA030位于人类第8号染色体，和其邻近基因SQLE都主要定位于细胞质；LncRNA030促进BCSC的干性维持和富集；LncRNA030通过调控SQLE促进BCSC的干性维持和富集；LncRNA030通过RNA结合蛋白PCBP2增强SQLE的mRNA稳定性；LncRNA030通过调控SQLE，增加干细胞内胆固醇的含量，促进BCSC的干性维持和富集；LncRNA030通过活化PI3K/AKT信号通路维持BCSC的干性；lncRNA030/SQLE信号轴促进BCSC体内成瘤。本发明提供了LncRNA030作为乳腺癌标记物及其在相关药物和诊断中的应用。

Description

用于诊断乳腺癌的标记物及其应用
技术领域
本发明属于生物医药技术领域，具体为用于诊断乳腺癌的标记物及其应用。
背景技术
乳腺癌是女性发病率最高的肿瘤之一，尽管治疗手段增多，技术增强，包括外科手术，放疗，化疗。但是乳腺癌的复发和转移仍然是造成乳腺癌病人死亡的主要原因。因此，有效的手段来阻止复发和控制其转移实亟待解决的。然而，造成其复发转移的原因还不是很清楚。
尽管先前研究表明，乳腺癌中存在许多异常表达的蛋白编码基因，但是新的分子标志物任然急需用于有早期诊断和风险的评估。LncRNA是一类长度大于200nt的长链非编码RNA,没有编码蛋白的能力。LncRNA通过多种机制参与调控生物学过程，包括转录前，转录中和转录后水平。越来越多研究提示，LncRNA在不同肿瘤中都异常表达，包括乳腺癌。然而，LncRNA如何参与调控乳腺癌的机制还不明确。
近来，研究揭示，乳腺癌的异质性主要是因为乳腺癌细胞中的一小团高度异质性细胞引起，这一团细胞被称作肿瘤样干细胞。BCSC自我更新，药物耐受，CD44+CD24-/low等等特性有助于肿瘤细胞向远处转移和肿瘤复发。然而，BCSC如何维持干性特征的机制还未被阐明。肿瘤代谢产物参与肿瘤细胞的能量代谢重塑被认为是肿瘤的关键特征。越来越多的研究表明，不仅是肿瘤细胞，肿瘤干细胞也有复杂的代谢通路来满足其能量需求。胶质瘤干细胞与其肿瘤细胞相比，更加依赖脂代谢。肝细胞瘤中的肿瘤干细胞的能量代谢重塑将氧化磷酸化向β-oxidation转变是维持其干性特征的关键。胰腺癌干细胞与非干细胞相比，脂肪酸合成增加，甲酸代谢通路活化。但是，乳腺癌干细胞通过何种代谢通路维持其干性特征还需被进一步研究。
发明内容
研究发现LncRNA030在乳腺癌干细胞(BCSC)中高表达，与乳腺癌病人的不良预后相关；LncRNA030位于人类第8号染色体，和其邻近基因SQLE都主要定位于细胞质；LncRNA030促进BCSC的干性维持和富集；LncRNA030通过调控SQLE促进BCSC的干性维持和富集；LncRNA030通过RNA结合蛋白PCBP2增强SQLE的mRNA稳定性；LncRNA030通过调控SQLE，增加干细胞内胆固醇的含量，促进BCSC的干性维持和富集；LncRNA030通过活化PI3K/AKT信号通路维持BCSC的干性；lncRNA030/SQLE信号轴促进BCSC体内成瘤。
有鉴于此，本发明的目的在于提供用于诊断乳腺癌的标记物及其应用，以及相关治疗药物和诊断试剂盒。
为了实现上述目的，本发明的技术方案为：
乳腺癌组织、细胞中存在的过量表达基因，所述过量表达基因为LncRNA030，其核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示或其同一性大于90％的序列。
进一步，所述过量表达基因存在于乳腺癌干细胞中。
乳腺癌组织、细胞中存在的过量表达物，所述过量表达物为SQLE基因或SQLE mRNA或SQLE蛋白；所述SQLE基因核苷酸序列如SEQ ID NO:2所示或其同一性大于90％的序列。
SQLE基因或SQLE mRNA或SQLE蛋白用于制备诊断乳腺癌的标志物中的应用。
用于抑制SQLE基因或SQLE mRNA表达或SQLE蛋白活性的药物在制备治疗乳腺癌的药物中的应用。
用于定位SQLE基因的方法，在细胞质中定位检测SQLE基因。
抑制乳腺癌细胞或乳腺癌干细胞增殖、分化的方法，通过抑制SQLE基因或SQLEmRNA表达或SQLE蛋白活性。
用于抑制LncRNA030基因表达的药物在制备治疗乳腺癌的药物中的应用。
LncRNA030基因用于制备诊断乳腺癌的标志物中的应用。
进一步，LncRNA030基因用于制备诊断乳腺癌干细胞的标志物中的应用。
用于检测乳腺癌的诊断试剂盒，所述诊断试剂盒包括LncRNA030为标志物的试剂盒；所述诊断试剂盒还包括LncRNA030和/或SQLE和/或c-Myc和/或PCBP2为标志物的试剂盒。
进一步，所述诊断试剂盒的作用对象为乳腺癌细胞或乳腺癌干细胞。
用于定位LncRNA030基因的方法，在细胞质中定位检测LncRNA030基因。
抑制乳腺癌细胞或乳腺癌干细胞增殖、分化的方法，通过抑制LncRNA030基因的表达。
本发明的有益效果在于：
本发明提供了LncRNA030、SQLE基因、PCBP2结合蛋白作为诊断乳腺癌的标记物，并验证了LncRNA030在乳腺癌干细胞(BCSC)中高表达，与乳腺癌病人的不良预后相关；LncRNA030位于人类第8号染色体，和其邻近基因SQLE都主要定位于细胞质；LncRNA030促进BCSC的干性维持和富集；LncRNA030通过调控SQLE促进BCSC的干性维持和富集；LncRNA030通过RNA结合蛋白PCBP2增强SQLE的mRNA稳定性；LncRNA030通过调控SQLE，增加干细胞内胆固醇的含量，促进BCSC的干性维持和富集；LncRNA030通过活化PI3K/AKT信号通路维持BCSC的干性；lncRNA030/SQLE信号轴促进BCSC体内成瘤。并通过所述LncRNA030设计相关治疗药物以及诊断试剂盒。
附图说明
图1：亲代的MCF7和MCF7发生EMT化后的MCF7/BCSC中与干性相关的lncRNA的差异表达情况图。
图2：qRT-PCR验证Hs578T,MCF7和BT549的亲代细胞和干细胞球中lnc030的差异表达情况图(**p<0.01)。
图3：利用TCGA数据库分析，与相邻正常乳腺组织(n＝112)相比，乳腺肿瘤组织(n＝1096)中lnc030表达情况图(**p<0.01)。
图4：lnc030的高表达与与乳腺癌病人较低的存活率相关情况图。
图5：qRT-PCR在随机选择的乳腺肿瘤的球体和贴壁细胞中评估lnc030的水平图(n＝16)(*p<0.05，**p<0.01)。
图6：在高或低lnc030表达的乳腺肿瘤组织中进行IHC染色检测CD44和CD24的表达情况图。
图7：Lnc030在人类染色体上定位图。
图8：Lnc030编码蛋白能力测试图。
图9：RNA-FISH分析lnc030在亚细胞中的定位图。
图10：在不同的乳腺癌细胞中进行Lnc030分级分离，然后进行qRT-PCR，U6 RNA作为核基因表达的阳性对照，GAPDH充当细胞质基因表达的阳性对照图(*p<0.05)。
图11：Lnc030的邻近基因示意图。
图12：利用慢病毒shRNA干扰序列敲低lnc030的表达，qRT-PCR验证干扰效率图。
图13：qRT-PCR验证敲低lnc030后，c-Myc,KLF4,SOX2在mRNA和蛋白水平的表达情况图。
图14：WB验证敲低lnc030后，c-Myc,KLF4,SOX2在mRNA和蛋白水平的表达情况图。
图15：敲低lnc030后，干细胞形态(D)的改变图。
图16：敲低lnc030后，成球效率(E)的改变图。
图17：敲低lnc030后，成球大小(F)的改变图。
图18：敲低lnc030后，克隆形成数量的变化图。
图19：敲低lnc030后，克隆形成数量的变化柱状图。
图20：免疫荧光(IF)检测对照组的敲低lnc030后的干细胞球中c-Myc和CD44的表达情况图。
图21：流式细胞术检测对照组的敲低lnc030后的干细胞球中CD44+CD24-的细胞比例图。
图22：qRT-PCR验证Lnc030的过表达效率图。
图23：过表达Lnc030后，qRT-PCR验证干性标志物c-Myc,KLF4,SOX2的表达改变图。
图24：过表达Lnc030后，qRT-PCR验证干性标志物c-Myc,KLF4,SOX2的表达改变图。
图25：过表达lnc030后，干细胞形态的改变图。
图26：过表达lnc030后，成球效率的改变图。
图27：过表达lnc030后，成球大小的改变图。
图28：过表达lnc030后，验证克隆形成能力的改变图。
图29：过表达lnc030后，验证克隆形成能力的改变柱状图。
图30：敲低lnc030后，靶基因SQLE的mRNA的改变图。
图31：敲低lnc030后，靶基因SQLE的蛋白的改变图。
图32：qRT-PCR检测过表达lnc030后SQLE的mRNA和蛋白的表达图。
图33：WB实验检测过表达lnc030后SQLE的mRNA和蛋白的表达图。
图34：利用慢病毒shRNA干扰序列敲低SQLE的表达，qRT-PCR验证敲低效率图。
图35：利用慢病毒shRNA干扰序列敲低SQLE的表达，WB验证敲低效率图。
图36：敲低SQLE后，qRT-PCR验证干性标志物c-Myc,KLF4,SOX2的改变图。
图37：敲低SQLE后，WB检测干性标志物c-Myc,KLF4,SOX2的蛋白的变化图。
图38：敲低SQLE后，干细胞形态的改变图。
图39：敲低SQLE后，成球效率的改变图。
图40：敲低SQLE后，成球大小的改变图。
图41：敲低SQLE后，克隆形成数量的变化图。
图42：敲低SQLE后，克隆形成数量的变化柱状图。
图43：在敲低lnc030的细胞中过表达SQLE，WB检测干性标志物c-Myc,KLF4的表达差异图。
图44：在敲低lnc030的细胞中过表达SQLE，检测干细胞成球能力的改变图。
图45：在敲低lnc030的细胞中过表达SQLE，检测干细胞成球能力的改变柱状图。
图46：在临床乳腺癌病人组织样本中检测lnc030和SQLE的相关性图。
图47：在临床乳腺癌病人组织样本中检测SQLE和c-Myc的相关性图。
图48：在敲低lnc030的Hs578T细胞中添加放线菌素D(2.5μg/ml),qRT-PCR检测不同时间点SQLE的mRNA含量图。
图49：RNA pull-down实验和SDS-PAGE检测BT549-CSC中，lnc030的互作蛋白图。
图50：RNA immunoprecipitation(RIP)实验验证lnc030与RNA结合蛋白PCBP2的互作图。
图51：RNA immunoprecipitation(RIP)实验验证SQLE的mRNA与RNA结合蛋白PCBP2的互作图。
图52：在敲低lnc030的细胞中过表达PCBP2，在过表达lnc030的细胞中敲低PCBP2，添加放线菌素D，检测不同时间点SQLE mRNA的改变图。
图53：在敲低lnc030的细胞中过表达PCBP2，在过表达lnc030的细胞中敲低PCBP2，添加放线菌素D，检测不同时间点SQLE mRNA的改变图。
图54：qRT-PCR和WB实验验证敲低lnc030后PCBP2的mRNA和蛋白的表达改变图。
图55：利用慢病毒shRNA干扰序列敲低PCBP2，qRT-PCR实验验证敲低效率图。
图56：利用慢病毒shRNA干扰序列敲低PCBP2，WB实验验证敲低效率图。
图57：qRT-PCR(G)实验验证对照组，敲低PCBP2组，同时过表达lnc030和敲低PCBP2组SQLE的mRNA和蛋白改变图。
图58：和WB实验验证对照组，敲低PCBP2组，同时过表达lnc030和敲低PCBP2组SQLE的mRNA和蛋白改变图。
图59：qRT-PCR和WB实验分别验证对照组，过表达PCBP2组，同时敲低lnc030和过表达PCBP2组SQLE的mRNA和蛋白改变图。
图60：在过表达lnc030的细胞中同时敲低PCBP2，检测干性标志物c-Myc,KLF4的表达图。
图61：在过表达lnc030的细胞中同时敲低PCBP2，检测干细胞成球能力的改变图。
图62：在过表达lnc030的细胞中同时敲低PCBP2，检测干细胞成球能力的改变柱状图。
图63：检测敲低lnc030后，干细胞球中胆固醇的相对含量图。
图64：检测敲低SQLE后，干细胞球中胆固醇的相对含量图。
图65：检测乳腺癌组织和邻近的正常癌旁组织中的胆固醇相对含量图。
图66：在敲低lnc030的细胞中添加外源性的胆固醇(5μM,10μM,15μM)，WB检测c-Myc和KLF4的蛋白水平的改变图。
图67：在敲低lnc030对照组细胞中添加外源性的胆固醇(5μM,10μM,15μM)，WB检测c-Myc和KLF4的蛋白水平的改变图。
图68：在敲低lnc030的细胞中添加外源性的胆固醇,检测干细胞成球能力的改变图。
图69：在敲低lnc030的细胞中添加外源性的胆固醇,检测干细胞成球能力的改变柱状图。
图70：在敲低lnc030的对照组细胞中添加外源性的胆固醇,检测干细胞成球能力的改变图。
图71：在敲低lnc030的对照组细胞中添加外源性的胆固醇,检测干细胞成球能力的改变柱状图。
图72：在胆固醇含量低或高的组织中检测ALDH的酶活性图。
图73：在敲低SQLE的细胞中添加外源性的胆固醇(5μM,10μM,15μM)，WB检测c-Myc和KLF4的蛋白水平的改变图。
图74：在敲低SQLE的对照组细胞中添加外源性的胆固醇(5μM,10μM,15μM)，WB检测c-Myc和KLF4的蛋白水平的改变图。
图75：在敲低SQLE的细胞中添加外源性的胆固醇,检测干细胞成球能力的改变图。
图76：在敲低SQLE的对照组细胞中添加外源性的胆固醇,检测干细胞成球能力的改变柱状图。
图77：在敲低SQLE的细胞中添加外源性的胆固醇,检测干细胞成球能力的改变图。
图78：在敲低SQLE的对照组细胞中添加外源性的胆固醇,检测干细胞成球能力的改变柱状图。
图79：WB检测敲低lnc030后，干细胞球中β-Catenin,p65,and YAP的蛋白水平的改变图。
图80：WB检测敲低lnc030的干细胞球中总PI3K,AKT和磷酸化的PI3K,AKT(p-PI3K,p-AKT)的蛋白含量图。
图81：WB检测敲低SQLE的干细胞球中总PI3K,AKT和磷酸化的PI3K,AKT(p-PI3K,p-AKT)的蛋白含量图。
图82：在敲低lnc030的细胞中过表达SQLE或添加外源性的胆固醇(10μM)，WB验证总PI3K,AKT和磷酸化的PI3K,AKT(p-PI3K,p-AKT)的蛋白变化图。图83：在过表达lnc030的细胞中敲低SQLE或添加外源性的胆固醇(10μM)，WB验证总PI3K,AKT和磷酸化的PI3K,AKT(p-PI3K,p-AKT)的蛋白变化图。图84：BCSC体内无限稀释实验的模式图。
图85：采用无限稀释的方式将MCF7 BCSCs(1×103,1×104,1×105)种植于裸鼠体内，研究lnc030的成瘤能力图。
图86：将各组的BT549或对照细胞(2×106/小鼠)注射到乳腺脂肪垫中，各组小鼠肿瘤大小图。
图87：将各组的BT549或对照细胞(2×106/小鼠)注射到乳腺脂肪垫中，肿瘤生长曲线图。
图88：将各组的BT549或对照细胞(2×106/小鼠)注射到乳腺脂肪垫中，肿瘤重量图。
图89：测量各组小鼠肿瘤组织的胆固醇含量图。
图90：测量各组小鼠肿瘤中SQLE,PI3K,p-PI3K,c-Myc，KLF4含量图。
图91：测量各组小鼠肿瘤中SQLE,PI3K,p-PI3K,c-Myc，KLF4含量图。图92：免疫组化(IHC)检测各组小鼠肿瘤组织中SQLE，c-Myc和KLF4的表达情况图。
图93：全文模式图。
具体实施方式
所举实施例是为了更好地对本发明进行说明，但并不是本发明的内容仅局限于所举实施例。所以熟悉本领域的技术人员根据上述发明内容对实施方案进行非本质的改进和调整，仍属于本发明的保护范围。
实施例1
利用LncRNA/mRNA芯片和生物信息学分析MCF7和EMT转变后的MCF7(MCF7/CSC)中干性相关的LncRNA的表达情况，qRT-PCR验证芯片结果，并寻找感兴趣的与干性相关的LncRNA；qRT-PCR法检测lnc030在Hs578T,BT549和MCF7的亲代细胞和其来源的肿瘤干细胞中的表达水平；利用TCGA数据库分析lnc030在乳腺癌与癌旁中的表达；利用TCGA数据库分析lnc030在乳腺癌病人中的预后；qRT-PCR法评估乳腺癌病人组织来源的亲代细胞和干细胞球中lnc030的表达差异。
根据实验结果，参见附图1-6，LncRNA030在EMT化的乳腺癌细胞中高表达，且与亲代肿瘤细胞相比，LncRNA030在乳腺癌肿瘤干细胞(BCSC)表达更高；LncRNA030在高表达CD44，低表达CD24的组织中表达更高；LncRNA030在临床乳腺癌组织的表达高于癌旁组织，且高表达的LncRNA030与病人的低预后相关。
实施例2
利用生物信息学分析lnc030在人类染色体上的定位，并通过数据库：http://cpc.cbi.pku.edu.cn/预测其编码蛋白的能力,确定其邻近的靶基因SQLE；荧光原位杂交检测lnc030的亚细胞定位以及免疫荧光检测SQLE的亚细胞定位。
根据实验结果，参见附图7-11，LncRNA030位于人类第8号染色体，生物信息学预测其没有编码蛋白的能力，且邻近基因是SQLE；荧光原位杂交实验表明LncRNA030主要定位于细胞质；免疫荧光结果提示LncRNA030也主要定位于细胞质。
实施例3
利用两条不同的慢病毒shRNA在Hs578T、BT549和MCF7的CSC细胞中敲低lncRNA030，qRT-PCR验证敲低效率，在敲低lncRNA030的Hs578T、BT549和MCF7中验证干细胞成球率和成球大小的改变，qRT-PCR和免疫印迹法验证c-Myc、KLF4、SOX2在敲低lncRNA030前后的CSC中表达差异；同时免疫荧光检测c-Myc和CD44在敲低前后的CSC中表达差异；在敲低lncRNA030前后的CSC中的表达差异；验证敲低前后克隆形成能力的变化；流式细胞术检测敲低lncRNA030后CSC中CD44+CD24-细胞比例的变化；利用慢病毒包装的过表达质粒在Hs578T、BT549和MCF7中过表达lncRNA030，qRT-PCR验证过表达效率，qRT-PCR和免疫印迹法分别验证过表达lncRNA030前后的CSC中c-Myc、KLF4、SOX2在表达差异；检测过表达lncRNA030后CSC中干细胞成球率和成球大小的变化，验证过表达lncRNA030前后克隆形成能力的改变。
克隆形成试验
转染后，将工程化乳腺癌细胞和对照细胞(1×103/孔)接种到6孔板中，并培养14天以获得细胞集落。用甲醇固定10分钟后，将细胞用结晶紫染色10分钟。用数码相机拍摄细胞集落并计数集落数。
根据实验结果，参见附图12-29，敲低LncRNA030后，BCSC的干性标志物c-Myc、KLF4、SOX2的表达明显减弱，干细胞标志物c-Myc和CD44的免疫荧光明显减弱，CD44+CD24-的细胞比例明显减少，乳腺癌肿瘤干细胞成球效率和成球大小明显降低，克隆形成明显减少。临床乳腺癌组织样本中，LncRNA030的表达与ALDH的酶活性成正相关，LncRNA030的高表达增强BCSC的成球能力。
实施例4
qRT-PCR和免疫印迹法检测分别在敲低和过表达LncRNA030的细胞模型中SQLE的表达情况；利用两条不同的慢病毒shRNA分别在Hs578T、BT549和MCF7的CSC细胞中敲低SQLE的表达，qRT-PCR和免疫印迹法验证敲低效；qRT-PCR和免疫印迹法验证c-Myc、KLF4、SOX2在敲低SQLE前后的CSC中表达差异；检测敲低SQLE前后CSC中干细胞成球率和成球大小的改变；验证敲低SQLE前后克隆形成能力的改变；在lncRNA030敲低的细胞模型中同时过表达SQLE表达，免疫印迹法验证c-Myc、KLF4在对照组(shNC)，lncRNA030敲低组(shlncRNA030)和同时敲低lncRNA030，过表达SQLE组(shlncRNA030+oeSQLE)的表达差异；同时检测这三组CSC中干细胞成球率的改变；在45例临床乳腺癌病人组织中，qRT-PCR检测SQLE,LncRNA030和c-Myc的相对表达量，探讨SQLE与LncRNA030，SQLE与c-Myc的相关性。
根据实验结果，参见附图30-47，LncRNA030的敲低或过表达减弱或增强SQLE的表达，敲低SQLE后，干性标志物c-Myc、KLF4、SOX2的表达降低，干细胞成球能力和成球大小减弱，克隆形成减少。在敲低LncRNA030的同时过表达SQLE，干细胞的成球效率有所回复。在临床乳腺癌组织样本中，SQLE的表达与LncRNA030或c-Myc成正相关。
实施例5
生物信息学分析lncRNA030和SQLE是否存在直接结合位点；在shNC和shlncRNA030，oeVec和oelncRNA030的Hs578T中分别用放线菌素D以时间依赖的方式处理细胞，qRT-PCR检测不同时间点SQLE mRNA的表达变化；利用RNA pull-down和RIP验证lncRNA030与蛋白的互作情况；利用免疫共沉淀检测SQLE和RNA结合蛋白PCBP2的互作情况；利用免疫共沉淀分别在shNC和shlncRNA030的细胞中检测SQLE和PCBP2的互作情况；qRT-PCR和免疫印迹法验证lncRNA030的敲低对PCBP2的影响；在ctrl组，sh lncRNA030组和shLnc030/PCBP2组的BT549和MCF7中分别用放线菌素D以时间依赖的方式处理细胞，qRT-PCR检测不同时间点SQLE mRNA的表达变化；在ctrl组，oe lncRNA030组和oeLncRNA030/shPCBP2组的BT549和MCF7中分别用放线菌素D以时间依赖的方式处理细胞，qRT-PCR检测不同时间点SQLE mRNA的表达变化；qRT-PCR和免疫印迹法检测在BT549和Hs578T的ctrl组，shPCBP2组和oeLnc030/shPCBP2组中SQLE mRNA和蛋白水平的变化；qRT-PCR和免疫印迹法检测在MCF7的ctrl组，PCBP2组和shLnc030/PCBP2组中的SQLE mRNA和蛋白水平的变化；在BT549，Hs578T和MCF7来源的干细胞球中，免疫印迹法检测oeVec组，oeLnc030组和oeLnc030/shPCBP2组的干性标志物c-Myc和KLF4的表达差异；同时在BT549，Hs578T和MCF7中，检测oeVec组，oeLnc030组和oeLnc030/shPCBP2组的干细胞成球效率的差异。
RIP：按照Magna RIP RNA结合蛋白免疫沉淀试剂盒进行RIP分析。简而言之，将2×107个细胞在冰上的RIP裂解缓冲液中裂解。然后加入5μg目标抗体(PCBP2)，与重悬的磁珠在室温下孵育30分钟。将RIP裂解液与磁珠-抗体复合物在RIP免疫沉淀缓冲液中于4℃孵育过夜。磁珠结合的免疫沉淀物在55℃下用洗脱缓冲液洗脱30分钟。用苯酚/氯仿/异戊醇分离RNA。对纯化的RNA进行qRT-PCR或逆转录PCR。
RNA pull-down:根据RNApull-down试剂盒的说明，使用生物素RNA标记混合物和T7 RNA聚合酶在体外转录Lnc030的全长有义和反义序列。将生物素标记的Lnc030与BT549的总细胞裂解液一起孵育。使用生物素洗脱缓冲液从磁珠中分离RNA-蛋白质复合物。然后纯化回收的蛋白质，并通过银染，然后进行蛋白质印迹或质谱分析。
根据实验结果，参见附图48-62，敲低或过表达LncRNA030，SQLE mRNA的稳定性减弱或增强。RNA pull-down和RIP实验结果表明LncRNA030与PCBP2交联，PCBP2和SQLE mRNA相互作用。LncRNA030的敲低减弱PCBP2和SQLE mRNA之间交联。过表达PCBP2能有效回复LncRNA030敲低引起的SQLE mRNA稳定性的减弱，敲低PCBP2能回复LncRNA030过表达引起的SQLE mRNA稳定性的增强。同样地，过表达PCBP2能有效回复LncRNA030敲低引起的SQLEmRNA和蛋白水平的减弱，敲低PCBP2能回复LncRNA030过表达引起的SQLE mRNA和蛋白水平的增强。PCBP2的敲低减弱了LncRNA030过表达引起的干性标志物c-Myc和KLF4表达的增加和干细胞成球效率的增强。
实施例6
利用胆固醇检测试剂盒检测敲低了lncRNA030的BT549-CSC，Hs578T-CSC和MCF7-CSC中的胆固醇相对含量；利用胆固醇检测试剂盒检测敲低了SQLE的BT549-CSC，Hs578T-CSC和MCF7-CSC中的胆固醇相对含量；在10对随机挑选的临床乳腺癌病人的癌与癌旁组织中检测胆固醇的含量；在高表达或低表达lncRNA030的乳腺癌组织中检测胆固醇的含量；在敲低lncRNA030或SQLE的BT549-CSC，Hs578T-CSC和MCF7-CSC中外源性添加不同浓度的胆固醇，免疫印迹法检测外源性胆固醇对干性标志物表达的影响；在对照组的BT549-CSC，Hs578T-CSC和MCF7-CSC中外源性添加不同浓度的胆固醇，免疫印迹法检测外源性胆固醇对干性标志物表达的影响；在敲低lncRNA030或SQLE的BT549-CSC，Hs578T-CSC和MCF7-CSC中外源性添加不同浓度(510μM,10μM,1510μM)的胆固醇，检测外源性胆固醇对干细胞成球能力的影响；在对照组的BT549-CSC，Hs578T-CSC和MCF7-CSC中外源性添加10μM的胆固醇，检测外源性胆固醇对干细胞成球能力的影响；在胆固醇含量高或者低的乳腺癌组织中，检测ALDH的酶活性。
总胆固醇浓度测定
1.收获BCSC(1×106)或乳腺癌组织(2mg)。
2.预冷PBS清洗细胞或组织。
3.提取脂质：重悬样本在200μL的Chloroform:Isopropanol:NP-40(7:11:0.1)。
4.15000g/5-10min离心提起物。
5.移去所有上清液(有机相)，避免沉淀，到新的离心管。
6.50℃下空气中干燥，去除氯仿。
7.真空干燥30分钟，去除微量有机溶剂(真空干燥机)。
8.200ulAssay Buffer溶解干燥的脂质(通过超声或者涡旋)。
9.在有样本和标准品的孔里加入反应混合物，37℃孵育60min,避光。OD570nm检测吸光度。
根据实验结果，参见附图63-78，敲低LncRNA030或SQLE后，BT549-CSC，Hs578T-CSC和MCF7-CSC中的胆固醇含量降低。临床乳腺癌组织样本中，癌组织的胆固醇含量高于癌旁组织，胆固醇含量高的组织其ALDH的酶活性更高。在敲低LncRNA030或SQLE的细胞中添加外源性的胆固醇，能回复细胞中干性标志物c-Myc和KLF4的表达，且干细胞成球效率也有所回复。在对照组的细胞中添加外源性的胆固醇，干性标志物和干细胞成球效率无明显改变。
实施例7
免疫印迹法分别检测β-catenin，P65和YAP在敲低lncRNA030的BT549-CSC，Hs578T-CSC和MCF7-CSC中的表达；免疫印迹法检测PI3K,p-PI3K,Akt,p-Akt分别在敲低lncRNA030或SQLE的BT549-CSC，Hs578T-CSC和MCF7-CSC中的表达；在敲低lncRNA030的BCSC中过表达SQLE或外源性的添加10μM的胆固醇，免疫印迹法检测其对PI3K,p-PI3K,Akt,p-Akt表达的影响；在过表达lncRNA030的BCSC中敲低SQLE的表达，免疫印迹法检测其对PI3K,p-PI3K,Akt,p-Akt表达的影响。
根据实验结果，参见附图79-83，敲低LncRNA030后，β-catenin，P65和YAP无明显改变。敲低LncRNA030或SQLE后，p-PI3K和p-Akt的表达明显降低。敲低LncRNA030后过表达SQLE或添加外源性的胆固醇，p-PI3K和p-Akt的表达明显增加。过表达LncRNA030后敲低SQLE，能够降低过表达LncRNA030引起的p-PI3K和p-Akt的表达增加。
实施例8
体内无限稀释实验检测lncRNA030对BCSC成瘤效率的影响；裸鼠皮下成瘤实验确定LncRNA030/SQLE/choleaterol轴对肿瘤增值的影响，测量各组肿瘤的体积，重量和胆固醇的含量，免疫印迹检测c-Myc，KLF4，SQLE，PI3K,p-PI3K在各组中的表达；免疫组化检测c-Myc，KLF4，SQLE在各组中的表达。
小鼠体内成瘤实验
体内无限限制性稀释评估Lnc030的肿瘤形成能力。将4周龄的雌性裸鼠随机分为五组(每组n＝5)。对于肿瘤起始分析，一系列1×103、1×104、1×105的MCF-7BCSC(乳腺癌肿瘤干细胞)，Lnc030敲低CSC组喂食标准饮食，Lnc030敲低CSC组喂食高脂肪/胆固醇饮食(HFD)和过表达的Lnc030CSC组，及对照组分别接种到裸鼠的乳腺脂肪垫中，计算肿瘤起始频率。为了进行肿瘤生长实验，将100μlPBS中的2×106BT549细胞注入裸鼠脂肪垫，分为8组(shNC对照，Lnc030敲除，SQLE敲除+标准饮食，Lnc030敲除+HFD，SQLE敲低+HFD，Lnc030过表达，Lnc030过表达+shSQLE)。通过卡尺测量肿瘤体积(V＝长度×宽度2×0.5)。在第49天，处死所有小鼠，分离并测量肿瘤重量。对获得的肿瘤组织进行qRT-PCR，蛋白质印迹或免疫组织化学染色以检测相关的基因或蛋白质表达。
根据实验结果，参见附图84-93，LncRNA030促进BCSC体内成瘤，LncRNA030/SQLE/cholesterol轴促进裸鼠皮下成瘤，增强SQLE,c-Myc,KLF4,p-PI3K的表达。
LncRNA030在乳腺癌干细胞(BCSC)中高表达，与乳腺癌病人的不良预后相关。LncRNA030位于人类第8号染色体，和其邻近基因SQLE都主要定位于细胞质。LncRNA030促进BCSC的干性维持和富集。LncRNA030通过调控SQLE促进BCSC的干性维持和富集。LncRNA030通过RNA结合蛋白PCBP2增强SQLE的mRNA稳定性。LncRNA030通过调控SQLE，增加干细胞内胆固醇的含量，促进BCSC的干性维持和富集。LncRNA030通过活化PI3K/AKT信号通路维持BCSC的干性。lncRNA030/SQLE信号轴促进BCSC体内成瘤。
最后说明的是，以上实施例仅用以说明本发明的技术方案而非限制，尽管参照较佳实施例对本发明进行了详细说明，本领域的普通技术人员应当理解，可以对本发明的技术方案进行修改或者等同替换，而不脱离本发明技术方案的宗旨和范围，其均应涵盖在本发明的权利要求范围当中。
序列表
<110> 重庆医科大学
<120> 用于诊断乳腺癌的标记物及其应用
<160> 2
<170> SIPOSequenceListing 1.0
<210> 1
<211> 412
<212> DNA
<213> Artificial synthesis
<400> 1
ggcgctctgg ggccgggatc ggcgtcgggg tcggggttgg ggttggttca ccgcagcagc 60
cccagctcct gcgccctccc tggactgagg tgtgctcgct ttgaggagaa gcctggagtg 120
atccgctgcc tcgggtcgga acgtttccat tcattccgct agcatttatt gagcgcttat 180
gatatgtcag tccccggagt ccgaaagagg aatcagacac agcttccctg ccctgtatgt 240
tacaagtcac tctgcctctg tggggagaag gcaacttctt catgaactcg aacatccttt 300
gcaattctgt atcagatact tggcagggtt taaaaaaaca tggcacctct tataactttt 360
cacccccaat attatgtttt atctgctaat aaaataatta tttggtaaaa ca 412
<210> 2
<211> 574
<212> PRT
<213> Artificial synthesis
<400> 2
Met Trp Thr Phe Leu Gly Ile Ala Thr Phe Thr Tyr Phe Tyr Lys Lys
1               5                   10                  15
Phe Gly Asp Phe Ile Thr Leu Ala Asn Arg Glu Val Leu Leu Cys Val
            20                  25                  30
Leu Val Phe Leu Ser Leu Gly Leu Val Leu Ser Tyr Arg Cys Arg His
        35                  40                  45
Arg Asn Gly Gly Leu Leu Gly Arg Gln Gln Ser Gly Ser Gln Phe Ala
    50                  55                  60
Leu Phe Ser Asp Ile Leu Ser Gly Leu Pro Phe Ile Gly Phe Phe Trp
65                  70                  75                  80
Ala Lys Ser Pro Pro Glu Ser Glu Asn Lys Glu Gln Leu Glu Ala Arg
                85                  90                  95
Arg Arg Arg Lys Gly Thr Asn Ile Ser Glu Thr Ser Leu Ile Gly Thr
            100                 105                 110
Ala Ala Cys Thr Ser Thr Ser Ser Gln Asn Asp Pro Glu Val Ile Ile
        115                 120                 125
Val Gly Ala Gly Val Leu Gly Ser Ala Leu Ala Ala Val Leu Ser Arg
    130                 135                 140
Asp Gly Arg Lys Val Thr Val Ile Glu Arg Asp Leu Lys Glu Pro Asp
145                 150                 155                 160
Arg Ile Val Gly Glu Phe Leu Gln Pro Gly Gly Tyr His Val Leu Lys
                165                 170                 175
Asp Leu Gly Leu Gly Asp Thr Val Glu Gly Leu Asp Ala Gln Val Val
            180                 185                 190
Asn Gly Tyr Met Ile His Asp Gln Glu Ser Lys Ser Glu Val Gln Ile
        195                 200                 205
Pro Tyr Pro Leu Ser Glu Asn Asn Gln Val Gln Ser Gly Arg Ala Phe
    210                 215                 220
His His Gly Arg Phe Ile Met Ser Leu Arg Lys Ala Ala Met Ala Glu
225                 230                 235                 240
Pro Asn Ala Lys Phe Ile Glu Gly Val Val Leu Gln Leu Leu Glu Glu
                245                 250                 255
Asp Asp Val Val Met Gly Val Gln Tyr Lys Asp Lys Glu Thr Gly Asp
            260                 265                 270
Ile Lys Glu Leu His Ala Pro Leu Thr Val Val Ala Asp Gly Leu Phe
        275                 280                 285
Ser Lys Phe Arg Lys Ser Leu Val Ser Asn Lys Val Ser Val Ser Ser
    290                 295                 300
His Phe Val Gly Phe Leu Met Lys Asn Ala Pro Gln Phe Lys Ala Asn
305                 310                 315                 320
His Ala Glu Leu Ile Leu Ala Asn Pro Ser Pro Val Leu Ile Tyr Gln
                325                 330                 335
Ile Ser Ser Ser Glu Thr Arg Val Leu Val Asp Ile Arg Gly Glu Met
            340                 345                 350
Pro Arg Asn Leu Arg Glu Tyr Met Val Glu Lys Ile Tyr Pro Gln Ile
        355                 360                 365
Pro Asp His Leu Lys Glu Pro Phe Leu Glu Ala Thr Asp Asn Ser His
    370                 375                 380
Leu Arg Ser Met Pro Ala Ser Phe Leu Pro Pro Ser Ser Val Lys Lys
385                 390                 395                 400
Arg Gly Val Leu Leu Leu Gly Asp Ala Tyr Asn Met Arg His Pro Leu
                405                 410                 415
Thr Gly Gly Gly Met Thr Val Ala Phe Lys Asp Ile Lys Leu Trp Arg
            420                 425                 430
Lys Leu Leu Lys Gly Ile Pro Asp Leu Tyr Asp Asp Ala Ala Ile Phe
        435                 440                 445
Glu Ala Lys Lys Ser Phe Tyr Trp Ala Arg Lys Thr Ser His Ser Phe
    450                 455                 460
Val Val Asn Ile Leu Ala Gln Ala Leu Tyr Glu Leu Phe Ser Ala Thr
465                 470                 475                 480
Asp Asp Ser Leu His Gln Leu Arg Lys Ala Cys Phe Leu Tyr Phe Lys
                485                 490                 495
Leu Gly Gly Glu Cys Val Ala Gly Pro Val Gly Leu Leu Ser Val Leu
            500                 505                 510
Ser Pro Asn Pro Leu Val Leu Ile Gly His Phe Phe Ala Val Ala Ile
        515                 520                 525
Tyr Ala Val Tyr Phe Cys Phe Lys Ser Glu Pro Trp Ile Thr Lys Pro
    530                 535                 540
Arg Ala Leu Leu Ser Ser Gly Ala Val Leu Tyr Lys Ala Cys Ser Val
545                 550                 555                 560
Ile Phe Pro Leu Ile Tyr Ser Glu Met Lys Tyr Met Val His
                565                 570

Claims (5)

1.用于抑制LncRNA030基因表达的药物在制备治疗乳腺癌的药物中的应用，其特征在于，所述LncRNA030基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。
2.LncRNA030基因在制备诊断乳腺癌的标志物中的应用，其特征在于，所述LncRNA030基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。
3.用于检测乳腺癌的诊断试剂盒，其特征在于，所述诊断试剂盒包括检测LncRNA030基因的试剂盒以及进一步检测SQLE和/或c-Myc和/或PCBP2的试剂盒，所述LncRNA030基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。
4.根据权利要求3所述的诊断试剂盒，其特征在于，所述诊断试剂盒的作用对象为乳腺癌细胞或乳腺癌干细胞。
5.抑制乳腺癌细胞或乳腺癌干细胞增殖、分化的方法，其特征在于，抑制LncRNA030基因的表达，所述方法为体外方法，所述LncRNA030基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。
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CN105316402A (zh) * 2015-04-02 2016-02-10 复旦大学附属肿瘤医院 一种预测三阴性乳腺癌预后及化疗敏感性的mRNA联合lncRNA模型及应用

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A Novel Long Non-Coding RNA lnc030 Maintains Breast Cancer Stem Cell Stemness by Stabilizing SQLE mRNA and Increasing Cholesterol Synthesis;Yilu Qin等;Adv. Sci;第8卷(第2期);2002232 *
Homo sapiens uncharacterized LOC105375744 (LOC105375744), long non-coding RNA;NCBI;GenBank;NR_134457.1 *
Lnc030通过调控胆固醇代谢参与乳腺癌干细胞（BCSC）干性维持的分子机制研究;秦旖璐;中国博士学位论文全文数据库医药卫生科技辑(月刊)(第01期);E072-322 *
Squalene epoxidase is a bona fideoncogene by amplification with clinical relevance in breast cancer;David N. Brown等;SCIENTIFIC RepoRts;第6卷;19435 *
squalene monooxygenase;Luck K等;GenBank;NP_003120.2 *

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