CN113943193B - 一种海洋生物肥料及其制备方法和应用 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种海洋生物肥料及其制备方法和应用,所述海洋生物肥料的制备方法包括以下步骤,S1:制备海洋有机基质;S2:制备碱化牡蛎壳粉;S3:制备海洋生防菌菌体Trichoderma sp.SU2;S4:将海洋有机基质与碱化牡蛎壳粉按质量比为1~2:1混合后,加入海洋生防菌菌体,使有效的海洋生防菌活菌数≥1亿/克,搅拌均匀,翻晒,加水至含水量为20‑25%,室温下进一步扩大发酵培养2~5天,即得海洋生物肥料。利用本发明中的制备方法制备出来的海洋生物肥料能够有效改良南方酸性土壤,不仅破解了海洋生产废弃物的环境污染大、附加值不高、废料资源化利用技术欠缺等问题,还能够对地方生态环保和产业增收做出重要贡献。
Description
技术领域
本发明涉及生物肥料技术领域,尤其涉及一种海洋生物肥料的制备方法及其应用。
背景技术
海洋生物肥料市场潜力巨大,是实现低值海洋废料的资源化利用,构建海洋与陆地的生态循环模式的潜在途径。目前大多数海洋生物肥料领域普遍使用海藻为原材料。然而,基于海洋生产废料,如海水养殖底泥基质、盐沼土、牡蛎壳废弃物、海藻泥以及水产加工废弃的鱼渣等为原材料的海洋肥料技术和应用尚处于初级阶段。进一步结合海洋微生物资源的开发利用,如采用微生物发酵或酶解技术能够促进海洋生物肥料产业的进一步升级换代,开发出种类丰富、功能多样的生物肥料,是当前发展新型,绿色、高值化海洋生物肥料的一大趋势。
在我国热带、亚热带地区,广泛分布着各种红色或黄色的酸性土壤。由于南方地区高温多雨、湿热同季的特点,使酸性土壤的容易风化和成土,盐基高度不饱和,pH一般在4.5-6;同时铁铝氧化物有明显积聚,导致土壤酸瘦。酸性土壤中H+和Na+较多,缺少Ca2+,难以形成良好的土壤结构,不利于作物生长;而且土壤微生物一般较适宜的pH值是6.5-7.5之间的中性范围,酸性土壤会抑制微生物的活动,影响氮素及其他养分的转化和供应,加剧植物病害发生,这些都是目前在南方酸性土壤耕作普遍存在的问题,现有技术中尚无专用于改良南方酸性土壤的海洋生物肥料。
发明内容
针对上述存在的问题,本发明旨在提供一种海洋生物肥料的制备方法及其应用,所述海洋生物肥料利用海洋废弃物和海洋生防菌制备而成,不仅破解了海洋生产废弃物的环境污染大、附加值不高、废料资源化利用技术欠缺等问题,制备出来的海洋生物肥料还能够有效改良南方酸性土壤,对地方生态环保和产业增收做出重要贡献。
为了实现上述目的,本发明所采用的技术方案如下:
一种海洋生物肥料的制备方法,其特征在于,包括以下步骤,
S1:制备海洋有机基质;利用富含有机物质的海洋废弃物作为原料,制备海洋有机基质备用;
S2:制备碱化牡蛎壳粉;
S3:制备海洋生防菌菌体;
S4:将海洋有机基质与碱化牡蛎壳粉按质量比为1~2:1混合后,加入海洋生防菌菌体,使有效的海洋生防菌活菌数达到≥1亿/克,搅拌均匀,翻晒,加水至含水量为20-25%,室温下进一步扩大发酵培养2~5天,即得海洋生物肥料。
进一步的,步骤S2的具体操作包括以下步骤,
S201:收集废弃的牡蛎壳晾干后粉碎,过100目筛进行筛分,得到牡蛎壳粉;
S202:将牡蛎壳粉放入质量分数为20%的氢氧化钠溶液中浸泡,调整PH值为7.0-8.0;
S203:浸泡8-12小时后,活化5-10小时,得到碱化牡蛎壳粉备用。
进一步的,步骤S3中所述的海洋生防菌为海洋木霉菌。
进一步的,所述海洋木霉菌为Trichoderma sp.SU2,已保藏于广东省微生物菌种保藏中心GDMCC,保藏编号为GDMCC No:61646。
进一步的,所述Trichoderma sp.SU2的生长表型特征为:在PDA培养基上经28℃培养48h后,形成白色或淡黄色菌落,菌落颜色向外逐渐变浅,边缘呈白色或透明;在延长培养5~7天,菌落呈现墨绿色;
所述Trichoderma sp.SU2的生化表型特征为:能够适合酸性的培养环境,其中在不同pH条件培养下,菌落的生长速度为pH4>pH5>pH6,当培养条件pH>6,菌体生长速度变慢。
进一步的,步骤S3中所述Trichoderma sp.SU2的制备方法包括以下步骤:
S301:从海洋植物中分离纯化出Trichoderma sp.SU2;
S302:配制Trichoderma sp.SU2扩培培养基;
所述Trichoderma sp.SU2扩培培养基的配方包括:蛋白胨1~5g/L,淀粉5~10g/L,蔗糖1~25g/L,氯化钾0.1~0.5g/L,硝酸钠0.5~2g/L,磷酸二氢钾0.5~1g/L,微量元素,维生素及氨基酸添加液,20~30‰人工海水或者陈海水,pH 7.0~8.5;
S303:制备Trichoderma sp.SU2;将步骤S301中分离纯化出来的Trichodermasp.SU2纯菌种在试管斜面转接培养,逐级扩培,直至菌液中菌数标准≥107cfu/mL;
S304:培养好后,离心收集菌体、晾干,于阴凉干燥处存放备用;或者也可以将步骤S303中培养好的菌液直接使用。
进一步的,一种海洋生物肥料的制备方法制得的海洋生物肥料。
进一步的,一种海洋生物肥料在改良南方酸性土壤中的应用。
进一步的,所述海洋生物肥料可作为基肥、堆肥、水溶肥或滴灌肥使用,且所述海洋生物肥料的使用量为5kg/亩~20kg/亩。
进一步的,所述海洋生物肥料可搭配尿素、磷酸氢二钾、硝酸钾、生腐酸、硫酸亚铁、硼酸、硫酸铜、硫酸锌、钼酸铵、硫酸锰及微量营养元素中的一种或多种肥料,按照日常田间耕作制度和需要,正常使用;
或者搭配地衣芽孢杆菌、枯草芽孢杆菌、植物乳杆菌、嗜酸乳杆菌、酿酒酵母菌、热带假丝酵母、米曲霉、黑曲霉、白地霉、绿色木霉、嗜热侧孢霉和泾阳链霉菌中的一种或多种菌剂,按照日常田间耕作制度和需要,正常使用。
本发明的有益效果是:
1、本发明中的海洋生物肥料利用海洋废弃物和海洋生防菌制备而成,将海洋生产废料进行循环利用,构建了“海洋—陆地”的地球生物化学循环,同时也降低海洋肥料成本;同时能够提高农产品品质与作物经济效益,可加强“海洋渔业”和“陆地农业”有机紧密的融合,真正实现海洋经济和农业经济的绿色、环保可持续发展;不仅破解了海洋生产废弃物的环境污染大、附加值不高、废料资源化利用技术欠缺等问题,制备出来的海洋生物肥料还能够有效改良南方酸性土壤,对地方生态环保和产业增收做出重要贡献。
2、本发明中的海洋生物肥料中海水养殖底泥基质、盐沼土等富含大量的有机物,是天然绿色的有机肥,能提供作物充足的养分,还有多种微量元素氮、磷、钾、钙、镁、硼、锌等,具有改良土壤、补充微量元素、提高肥效、提升作物抗旱抗寒抗逆性能等多重作用;牡蛎壳的主要成分是生物钙,还含有大量的钠,锶,镁,钾等碱土金属元素,可用于改善南方的酸性土壤,降低作物的连作障碍。
3、本发明中的海洋生物肥料中海洋生防菌对土壤微生物区系有良好的识别作用,具有抗病菌和抗逆功能,而且生物化学功能活性强大,能够帮助土壤生物化学的循环。
附图说明
图1为本发明中不同牡蛎壳粉和有机基质比例的海洋生物肥料中海洋生防菌的生长菌落直径对比结果。
图2为本发明实施例一中不同处理组番茄长势效果对比图。
图3为本发明实施例一中不同处理组番茄株高统计对比图。
图4为本发明实施例一中不同处理组百香果现场效果对比图。
具体实施方式
为了使本领域的普通技术人员能更好的理解本发明的技术方案,下面结合附图和实施例对本发明的技术方案做进一步的描述。
一种海洋生物肥料的制备方法,包括以下步骤,
S1:制备海洋有机基质;将富含有机物质的海洋废弃物充分混合搅拌均匀,可以无需处理直接作为海洋有机基质备用,也可经过高温(120-500℃)煅烧10-30分钟或者日晒烘干除去多余水分,得到海洋有机基质备用;
具体的,所述海洋废弃物包括海水养殖底泥基质、蓝色碳汇盐沼土,海藻泥以及水产加工废弃的鱼渣。
S2:制备碱化牡蛎壳粉;
具体的,S201:收集废弃的牡蛎壳晾干后粉碎,过100目筛进行筛分,得到牡蛎壳粉;
S202:将牡蛎壳粉放入质量分数为20%的氢氧化钠溶液中浸泡,调整PH值为7.0-8.0;
S203:浸泡8-12小时后,在高温100-120℃条件下或者烘干55-60℃条件下活化5-10小时(具体为高温100-120℃条件下活化5-6小时,烘干55-60℃条件下活化9-10小时),得到碱化牡蛎壳粉备用。
S3:制备海洋生防菌菌体;
具体的,所述海洋生防菌为海洋木霉菌,所述海洋木霉菌具体为Trichodermasp.SU2,现保藏于广东省微生物菌种保藏中心GDMCC,保藏标号为GDMCC No:61646,保藏时间为2021年5月8日,保藏单位地址为:广州市先烈中路100号大院59号楼5楼。
所述Trichoderma sp.SU2的生长表型特征为:在PDA培养基上经28℃培养48h后,形成白色或淡黄色菌落,菌落颜色向外逐渐变浅,边缘呈白色或透明;在延长培养5~7天,菌落呈现墨绿色;
所述Trichoderma sp.SU2的生化表型特征为:能够适合酸性的培养环境,其中在不同pH条件培养下,菌落的生长速度为pH4>pH5>pH6,当培养条件pH>6,菌体生长速度变慢。
进一步的,所述Trichoderma sp.SU2的制备方法包括以下步骤:
S301:从海洋植物中分离纯化出Trichoderma sp.SU2;
具体的,S3011:采集海洋植物组织样品,剪成边长为0.5cm大小的方块,在70%的酒精溶液中浸泡10秒钟,而后0.1%升汞中灭菌40秒,最后无菌水冲洗三次,置于灭菌滤纸上自然晾干;
S3012:将灭菌后的海洋植物组织样品接于含氨苄青霉素100ug/ml的PDA培养基上,28摄氏度倒置培养3-4天;
S3013:将PDA培养基中生长的单菌落挑出并标记,用接种针蘸取菌落边缘,在PDA培养皿中划线纯化培养,得到单菌株。
将分离纯化后的单菌株接种到海水葡萄糖液体培养基中,进行振荡扩大培养,通过菌液离心收集菌丝及孢子,提取海洋生防菌的DNA,进行ITS-PCR扩增,测序,得到该海洋生防菌的ITS核酸序列,所得序列结果由美国国立生物信息中心(NCBI)进行DNA比对,并根据菌株的形态学研究进一步鉴定海洋生防菌菌种信息,经过鉴定从海洋植物中分离筛选到的具有耐盐碱抗逆功能的海洋生防菌即为Trichoderma sp.SU2。所述Trichoderma sp.SU2的ITS序列为:
CTTCGGGGGTAACTCCCAACCCAATGTGAACGTTACCAAACTGTTGCCTCGGCGGGATCTCTGCCCCGGGTGCGTCGCAGCCCCGGACCAAGGCGCCCGCCGGAGGACCAACCAAAACTCTCTTTGTATACCCCCTCGCGGGTTTTTTTATAATCTGAGCCTTCTCGGCGCCTCTCGTAGGCGTTTCGAAAATGAATCAAAACTTTCAACAACGGATCTCTTGGTTCTGGCATCGATGAAGAACGCAGCGAAATGCGATAAGTAATGTGAATTGCAGAATTCAGTGAATCATCGAATCTTTGAACGCACATTGCGCCCGCCAGTATTCTGGCGGGCATGCCTGTCCGAGCGTCATTTCAACCCTCGAACCCCTCCGGGGGGTCGGCGTTGGGGATCGGCCCTGCCTCTTGGCGGTGGCCGTCTCCGAAATACAGTGGCGGTCTCGCCGCAGCCTCTCCTGCGCAGTAGTTTGCACACTCGCATCGGGAGCGCGGCGCGTCCACAGCCGTTAAACACCCAACTTCTGAAATGTTGACCTCGGATCAGGTAGGAATACCCGCTGAACTTAAGCATATCAAAAGCCGGGAGGAAA。
S302:配制Trichoderma sp.SU2扩培培养基;
所述Trichoderma sp.SU2扩培培养基的配方包括:蛋白胨1~5g/L,淀粉5~10g/L,蔗糖1~25g/L,氯化钾0.1~0.5g/L,硝酸钠0.5~2g/L,磷酸二氢钾0.5~1g/L,微量元素,维生素及氨基酸添加液,20~30‰人工海水或者陈海水,pH 7.0~8.5;
S303:制备Trichoderma sp.SU2菌液;将步骤S301中分离纯化出来的Trichodermasp.SU2纯菌种在试管斜面转接培养,逐级扩培,直至菌液中菌数标准≥107cfu/mL;
S304:培养好后,离心收集菌体、晾干,于阴凉干燥处存放备用;或者也可以将步骤S303中培养好的菌液直接使用。
S4:将海洋有机基质与碱化牡蛎壳粉按质量比为1~2:1混合后,加入步骤S3中培养得到的Trichoderma sp.SU2菌体,使有效的Trichoderma sp.SU2活菌数达到≥1亿/克,搅拌均匀,翻晒,加水至含水量为20-25%,室温下进一步扩大发酵培养2~5天,即得海洋生物肥料。
进一步的,为了使海洋生物肥料中Trichoderma sp.SU2能快速生长及产孢,对最适宜的牡蛎壳粉和有机基质比例进行研究。配制不同比例的牡蛎壳粉和有机基质固体培养基,琼脂添加量为12-15g/L,高温灭菌后倒板,用于Trichoderma sp.SU2的生长对比实验,对比比较Trichoderma sp.SU2生长的速度,即Trichoderma sp.SU2菌落直径大小,其中菌落生长周期为12天,培养条件为28摄氏度,避光培养,结果如附图1所示。
从附图1中可以看出,最适合Trichoderma sp.SU2生长的牡蛎壳粉和有机基质(主要成分以海藻沙为例)的比例为15%牡蛎壳粉+15%有机基质,剩余70%为水;而10%牡蛎壳粉+20%有机基质和20%牡蛎壳粉+10%有机基质的固体培养基中Trichoderma sp.SU2的菌落直径相对较小,从而可以确定海洋生物肥料中牡蛎壳粉和有机基质的最优的比例为15%牡蛎壳粉+15%有机基质,此是Trichoderma sp.SU2的最佳生长配方。
进一步的,一种海洋生物肥料的制备方法制得的海洋生物肥料。
进一步的,一种海洋生物肥料在改良南方酸性土壤中的应用,所述海洋生物肥料可作为基肥、堆肥、水溶肥或滴灌肥使用,且所述海洋生物肥料的使用量为5kg/亩~20kg/亩。
进一步的,所述海洋生物肥料可搭配其它化肥如尿素、磷酸氢二钾、硝酸钾、生腐酸、硫酸亚铁、硼酸、硫酸铜、硫酸锌、钼酸铵、硫酸锰及微量营养元素中的一种或多种,按照日常田间耕作制度和需要,正常使用。
进一步的,所述海洋生物肥料中可搭配其它菌剂,如地衣芽孢杆菌、枯草芽孢杆菌、植物乳杆菌、嗜酸乳杆菌、酿酒酵母菌、热带假丝酵母、米曲霉、黑曲霉、白地霉、绿色木霉、嗜热侧孢霉和泾阳链霉菌中的一种或多种,按照日常田间耕作制度和需要,正常使用。
实施例一:
通过在植物种植中使用海洋生物肥料,验证本发明中海洋生物肥料在改良南方酸性土壤中的有效性。具体的,在番茄盆栽种植中使用海洋生物肥料。
采用大小为70cm*30cm*20cm的花盆,在番茄开始种植前,检测番茄种植土壤的pH为4.5,设置3个处理组:(1)海洋生物肥料处理组(15%牡蛎壳粉+15%有机基质(主要成分以海藻沙为例)+海洋生防菌≥1亿/克),并与土壤相互混合。(2)海洋有机基质处理组(15%牡蛎壳粉+15%有机基质),并与土壤(70%)相互混合。(3)对照组,未经任何处理的土壤(100%)。然后在3个处理组花盆中均匀的播撒相等数量番茄种子50粒,置于室外培养一个月。期间正常浇水和养护,比较三个处理组番茄的出苗数及株高,结果为如附图2所示,从附图2中可以看出,无论是出苗数还是株高,海洋生物肥料处理组相比于其他两组都占有明显的优势。
出苗率结果:(1)海洋生物肥料处理组出苗率为54%;(2)海洋有机基质处理组出苗率为30%;(3)对照组出苗率为24%,说明本发明中的海洋生物肥料更适合番茄的生长,提高了番茄的出苗率,这是由于本发明中的海洋生物肥料改良了土壤的PH值,因此更适合番茄的生长。
不同处理组的株高统计结果如附图3所示,从附图3中可以看出,施用本发明中海洋生物肥料的番茄株高长势更为一致,平均株高和株高中位数均大于对照组和海洋有机基质处理组,说明海洋生防菌具有壮苗的效果,这是由于海洋生物肥料处理组在番茄生长过程中,增加了番茄的抗病性,因此番茄长势较好。
实施例二:
将本发明中的海洋生物肥料作为堆肥应用在漳州百香果园种植中,果园土壤经检测pH均值为5.6。百香果种植时期,取制备好的海洋生物肥料,海洋生物肥料的使用量为10kg/亩~50kg/亩,海洋生防菌≥1亿/克。搭配其它化肥如尿素、磷酸氢二钾、硝酸钾、生腐酸、硫酸亚铁、硼酸、硫酸铜、硫酸锌、钼酸铵、硫酸锰及微量营养元素等按照日常耕作制度和田间管理,正常使用;对照组采用等量的营养土有机肥替代,按正常耕作三个月后,百香果树的生长情况如附图4所示,其中,(a)为对照组,(b)为利用本发明中的海洋生物肥料处理组。从附图4中可以看出,利用本发明中的海洋生物肥料处理组的百香果树长势明显好于对照组,说明本发明中的海洋生物肥料可明显改良南方酸性土壤,提高化肥利用率。
以上显示和描述了本发明的基本原理、主要特征和本发明的优点。本行业的技术人员应该了解,本发明不受上述实施例的限制,上述实施例和说明书中描述的只是说明本发明的原理,在不脱离本发明精神和范围的前提下,本发明还会有各种变化和改进,这些变化和改进都落入要求保护的本发明范围内。本发明要求保护范围由所附的权利要求书及其等效物界定。
序列表
<110> 闽江学院
<120> 一种海洋生物肥料及其制备方法和应用CTTCGGGGGTAACTCCCAACCCAATGTGAACGTTACCAAACTGTTGCCTCGGCGGGATCTCTGCCCCGGGTGCGTCGCAGCCCCGGACCAAGGCGCCCGCCGGAGGACCAACCAAAACTCTCTTTGTATACCCCCTCGCGGGTTTTTTTATAATCTGAGCCTTCTCGGCGCCTCTCGTAGGCGTTTCGAAAATGAATCAAAACTTTCAACAACGGATCTCTTGGTTCTGGCATCGATGAAGAACGCAGCGAAATGCGATAAGTAATGTGAATTGCAGAATTCAGTGAATCATCGAATCTTTGAACGCACATTGCGCCCGCCAGTATTCTGGCGGGCATGCCTGTCCGAGCGTCATTTCAACCCTCGAACCCCTCCGGGGGGTCGGCGTTGGGGATCGGCCCTGCCTCTTGGCGGTGGCCGTCTCCGAAATACAGTGGCGGTCTCGCCGCAGCCTCTCCTGCGCAGTAGTTTGCACACTCGCATCGGGAGCGCGGCGCGTCCACAGCCGTTAAACACCCAACTTCTGAAATGTTGACCTCGGATCAGGTAGGAATACCCGCTGAACTTAAGCATATCAAAAGCCGGGAGGAAA。
<160> 0
<170> SIPOSequenceListing 1.0
Claims (6)
1.一种海洋生物肥料的制备方法,其特征在于,包括以下步骤,
S1:制备海洋有机基质;利用富含有机物质的海洋废弃物作为原料,制备海洋有机基质备用;
S2:制备碱化牡蛎壳粉;
S3:制备海洋生防菌菌体;
所述的海洋生防菌为海洋木霉菌;所述海洋木霉菌为Trichoderma sp.SU2,已保藏于广东省微生物菌种保藏中心GDMCC,保藏编号为GDMCC No:61646;
所述Trichoderma sp.SU2的生长表型特征为:在PDA培养基上经28℃培养48h后,形成白色或淡黄色菌落,菌落颜色向外逐渐变浅,边缘呈白色或透明;在延长培养5~7天,菌落呈现墨绿色;
所述Trichoderma sp.SU2的生化表型特征为:能够适合酸性的培养环境,其中在不同pH条件培养下,菌落的生长速度为pH4>pH5>pH6,当培养条件pH>6,菌体生长速度变慢;
所述Trichoderma sp.SU2的制备方法包括以下步骤:
S301:从海洋植物中分离纯化出Trichoderma sp.SU2;
S302:配制Trichoderma sp.SU2扩培培养基;
所述Trichoderma sp.SU2扩培培养基的配方包括:蛋白胨1~5g/L,淀粉5~10g/L,蔗糖1~25g/L,氯化钾0.1~0.5g/L,硝酸钠0.5~2g/L,磷酸二氢钾0.5~1g/L,微量元素,维生素及氨基酸添加液,20~30‰人工海水或者陈海水,pH 7.0~8.5;
S303:制备Trichoderma sp.SU2;将步骤S301中分离纯化出来的Trichoderma sp.SU2纯菌种在试管斜面转接培养,逐级扩培,直至菌液中菌数标准≥107cfu/mL;
S304:培养好后,离心收集菌体、晾干,于阴凉干燥处存放备用;或者也可以将步骤S303中培养好的菌液直接使用;
S4:将海洋有机基质与碱化牡蛎壳粉按质量比为1:1混合后,加入海洋生防菌菌体,使有效的海洋生防菌活菌数达到≥1亿/克,搅拌均匀,翻晒,加水至含水量为20-25%,室温下进一步扩大发酵培养2~5天,即得海洋生物肥料。
2.根据权利要求1所述的一种海洋生物肥料的制备方法,其特征在于:步骤S2的具体操作包括以下步骤,
S201:收集废弃的牡蛎壳晾干后粉碎,过100目筛进行筛分,得到牡蛎壳粉;
S202:将牡蛎壳粉放入质量分数为20%的氢氧化钠溶液中浸泡,调整PH值为7.0-8.0;
S203:浸泡8-12小时后,活化5-10小时,得到碱化牡蛎壳粉备用。
3.利用权利要求1或2中所述的一种海洋生物肥料的制备方法制得的海洋生物肥料。
4.如权利要求3所述的一种海洋生物肥料在改良南方酸性土壤中的应用。
5.根据权利要求4所述的一种海洋生物肥料在改良南方酸性土壤中的应用,其特征在于:所述海洋生物肥料可作为基肥、堆肥、水溶肥或滴灌肥使用,且所述海洋生物肥料的使用量为5kg/亩~20kg/亩。
6.根据权利要求4所述的一种海洋生物肥料在改良南方酸性土壤中的应用,其特征在于,所述海洋生物肥料可搭配尿素、磷酸氢二钾、硝酸钾、生腐酸、硫酸亚铁、硼酸、硫酸铜、硫酸锌、钼酸铵、硫酸锰及微量营养元素中的一种或多种肥料,按照日常田间耕作制度和需要,正常使用;
或者搭配地衣芽孢杆菌、枯草芽孢杆菌、植物乳杆菌、嗜酸乳杆菌、酿酒酵母菌、热带假丝酵母、米曲霉、黑曲霉、白地霉、绿色木霉、嗜热侧孢霉和泾阳链霉菌中的一种或多种菌剂,按照日常田间耕作制度和需要,正常使用。
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