CN113939540A - 抗IgE抗体 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及结合到IgE的抗体，以及其在治疗自身免疫疾病、特别是大疱性类天疱疮(BP)和慢性自发性荨麻疹(CSU)中的用途。所述抗IgE抗体包含以相比野生型Fc结构域增加的亲和力结合到Fc受体FcRn的变体Fc结构域。所述抗IgE抗体可包含变体Fc结构域，所述变体Fc结构域包含分别在EU位置252、254、256、433、434和436处的氨基酸Y、T、E、K、F和Y，其中所述变体Fc结构域以相比野生型人IgG Fc结构域增加的亲和力结合到人FcRn。

Description

抗IgE抗体
技术领域
本发明涉及结合到IgE的抗体，以及其在治疗自身免疫疾病、特别是大疱性类天疱疮(BP)和慢性自发性荨麻疹(CSU)中的用途。所述抗IgE抗体包含以相对于野生型Fc结构域增加的亲和力结合到Fc受体FcRn的变体Fc结构域。所述抗IgE抗体可包含纳入ABDEGTM技术的变体Fc结构域，其中所述变体ABDEGTM Fc结构域以相对于野生型Fc结构域增加的亲和力结合到FcRn。FcRn对IgG抗体(包括IgG自身抗体)的血浆再循环很重要。因此，本发明的抗IgE抗体在自身免疫疾病的治疗中提供IgE和IgG自身抗体的双重靶向。
背景技术
免疫球蛋白E(IgE)最早发现于1966年，且是免疫球蛋白类别或同种型中最不丰富的一种。IgE分子在人变应性中起着核心作用，主要是因为它们与肥大细胞和嗜碱性粒细胞上的受体、尤其是FcεRI受体高亲和力缔合。变应原结合到IgE分子引起FcεRI受体交联，此触发效应细胞在称为“脱粒”的过程中释放组胺和其他炎性介质。IgE介导的刺激还导致产生炎性应答的大量细胞因子和其他因子的合成。IgE还与位于包括B细胞、巨噬细胞和血小板在内的细胞类型上的低亲和力受体(FcεRII或CD23)缔合。
鉴于IgE分子在诸如哮喘、变应性鼻炎和其他变应性病症的疾病中所起的核心作用，IgE长期以来一直是这些疾病有吸引力的治疗靶标。开发靶向IgE的药剂(例如抗体)的挑战是产生本身不交联IgE-受体复合物的药剂，即该药剂必须无过敏原性。在诸如哮喘和变应性病症的疾病中，肥大细胞和嗜碱性粒细胞脱粒的触发因素是特异性IgE抗体的外源性配体。最近，已变得很明显，识别自身抗原的IgE抗体还可响应于它们的同族配体而触发脱粒。因此，IgE可能在诸如一些形式的慢性荨麻疹(包括CSU和CIndU)和大疱性类天疱疮的自身免疫疾病中发挥作用。许多其他自身免疫疾病也可能涉及识别自身抗原的IgE抗体(参见Maurer等，免疫学前沿(Frontiers in Immunology)(2018)9：1-17；和Sanjuan等，JACI137(6)：1651-1661)。
奥马珠单抗(Omalizumab)是对IgE具有高结合亲和力的人源化单克隆抗IgE抗体(关于综述，参见Kawaki等，J.Immunol.(2016)197(11)：4187-9192；和Schulman E.S.Am JRespir Crit Care Med.(2001)164：S6-S11)。奥马佐单抗通过结合到血清IgE分子，从而阻止IgE与IgE受体相互作用，抑制变应应答。与其他可交联FcεRI结合的IgE的抗IgE抗体不同，奥马佐单抗不会引起过敏性效应。奥马佐单抗结合到游离IgE的Cε3(或CH3)结构域，阻止其结合到FcεRI。通过耗竭血清IgE，奥马佐单抗还下调肥大细胞和嗜碱性粒细胞以及抗原呈递细胞上的FcεRI表达。这进而使它们对脱粒不太敏感，从而限制肥大细胞和嗜碱性粒细胞的活化。除了游离IgE的耗竭以及肥大细胞和嗜碱性粒细胞上FcεRI的下调之外，已表明，奥马佐单抗还可通过多种其他机制发挥其治疗作用。
奥马佐单抗最初在美国和欧盟被批准用于治疗变应性哮喘。2014年，其被批准用于慢性自发性荨麻疹(CSU)患者。
CSU是造成高度虚弱的皮肤病。其特征为瘙痒性风团和潮红(wheal-and-flare)皮肤反应、血管性水肿或两者存在大于6周时期。在CSU中观察到的风团和血管性水肿似乎涉及皮肤肥大细胞脱粒，皮肤肥大细胞释放组胺、蛋白酶和细胞因子，同时生成血小板活化因子和其他花生四烯酸代谢物。这些介质诱导血管舒张，增加血管通透性，并刺激感觉神经末梢，导致肿胀、发红和瘙痒。病变部位或风团的特征在于水肿、肥大细胞脱粒和细胞(CD4+淋巴细胞、单核细胞、嗜中性粒细胞、嗜酸性粒细胞和嗜碱性粒细胞)的血管周围浸润。约有一半的CSU患者可用抗组胺剂成功治疗。然而，在抗组胺剂治疗失败的患者中，奥马佐单抗被批准作为二线疗法(关于综述，参见Ferrer M.Clin Transl Allergy(2015)5：30；Kolkhir等，J Allergy Clin Immunol.(2017)139：1772-81；Kaplan A.P.Allergy Asthma ImmunolRes.(2017)9(6)：477-482)。
已进行大量工作来阐明奥马佐单抗在患有CSU的患者中发挥治疗作用的机制(参见Chang等，J Allergy Clin Immunol.(2015)135：337-42；和Kaplan等，Allergy(2017)72(4)：519-533)。IgE在CSU的发病机理中显然起到重要作用，并且积累的证据表明，IgE通过结合到肥大细胞上的FcεRI，可促进这些细胞的增殖和存活，从而扩大肥大细胞库。IgE与FcεRI的接合还可降低肥大细胞的释放阈值，并增加它们对各种刺激的敏感性。奥马佐单抗逆转这些效应可能至少部分地解释了其在治疗CSU方面的功效。
除上述之外，还已观察到CSU有重要的自身免疫组分。实际上已表明，自身免疫过程可能是大多数CSU病例的主要原因。CSU患者常常展现为总IgE水平升高，并患有相关的自身免疫病状，尤其是甲状腺自身免疫病症，诸如桥本甲状腺炎(Hashimoto thyroiditis)。研究报道，在CSU患者血清中存在针对甲状腺过氧化物酶(TPO)和针对dsDNA的自身反应性IgE分子。因此，奥马佐单抗很可能至少部分通过抑制自身反应性IgE抗体来发挥其治疗作用。
除CSU之外，还在其他几种自身免疫疾病(包括系统性病状(诸如SLE)以及组织特异性疾病(诸如格雷夫斯病(Grave’s disease)))中观察到自身反应性IgE的病理生理作用。IgE自身抗体被认为在其中起关键作用的一种疾病是大疱性类天疱疮(BP)。BP是最常见的抗体介导的自身免疫性皮肤起水疱病。该疾病主要发生于老年人(在英国有表现的中值年龄为80岁)，且特征在于紧张性大疱和荨麻疹型斑块。对BP患者的研究已揭示，约50％的患者有血液嗜酸性粒细胞增多症，且约70％的患者有血清IgE升高。另外，超过70％的患者具有针对抗原BP180(或BPAg2)的血清IgE，该抗原是XVII型胶原(COL17)蛋白质，其充当表皮与真皮基膜之间的粘附分子。第二自身抗原也被鉴别为BP患者的自身反应性IgE的靶标。该自身抗原是BP230(或BP抗原1或BPAG1/BPAle)，其为定位于半桥粒的细胞粘附连接斑块蛋白质(参见Hammers等，Annu.Rev.Pathol.Mech.Dis.(2016)11：175-197；Saniklidou等，Arch Dermatol Res.(2018)310(1)：11-28)。尽管尚未被批准用于治疗BP，但已证明奥马佐单抗可有效治疗某些人受试者的BP症状(Fairley等，J.Allergy Clin Immunol.(2009)123：704-705；Dufour等，Br J.Dermatol.(2012)166：1140-1142；Yu等，J.Am.Acad.Dermatol.(2014)71(3)：468-474)。
发明内容
鉴于IgE免疫球蛋白在变应性疾病和自身免疫疾病中的重要性，需要开发靶向IgE的改善药剂，例如抗体。本发明通过提供新型抗IgE抗体解决了该问题。
此外，本发明寻求提供特别适于治疗由自身反应性IgE抗体和自身反应性IgG抗体引起的自身免疫疾病的抗IgE抗体。如上文所述，CSU和BP是自身反应性IgE抗体在病理生理学中起关键作用的自身免疫疾病的两个示例。在这两种疾病中，也已在一些患者中鉴别出针对自身抗原的自身反应性IgG抗体。
在CSU中，已在35％-40％的患者中观察到结合到高亲和力IgE受体FcεRI的IgG自身抗体。也已在5％-10％的患者中观察到结合到IgE自身的IgG自身抗体。肥大细胞和嗜碱性粒细胞上的FcεRI受体通过抗FcεRI IgG自身抗体的直接结合或经由抗IgE IgG自身抗体的间接结合而交联，可能在该疾病的发病机理中起重要作用。
BP的特征还在于存在IgG自身抗体，例如结合到上述BP180抗原的IgG自身抗体。在77％的测试血清中发现针对BP180的NC16A结构域的IgE自身抗体，且等同于抗BP180 NC16AIgG自身抗体的频率。与自身反应性抗BP180 IgE自身抗体一起，认为在患有BP的患者中鉴别的抗BP180 IgG自身抗体在疾病进展中起病因性作用。IgG自身抗体在基膜区结合到BP180，并且诱导补体活化和嗜中性粒细胞募集。嗜中性粒细胞诱导BP180裂解，并且裂解的BP180被IgE自身抗体连接，导致嗜酸性粒细胞和肥大细胞活化的疾病恶化。
考虑到上述情况，本发明人考虑了IgE和IgG自身抗体双重靶向作为治疗同时具有自身反应性IgE和IgG致病组分的疾病的有效策略的可能性。如本文所报告的，本发明的抗体展现出对IgE的结合特异性，并且具有通过以比天然IgG分子更高的亲和力结合到Fc受体FcRn而耗竭IgG水平的能力。这些抗体为治疗诸如BP和CSU的自身免疫疾病提供了双管齐下的方法(two-pronged approach)。
在第一方面，本发明提供结合到IgE的抗体，其中所述抗体包含以相对于野生型Fc结构域增加的亲和力结合到FcRn的变体Fc结构域或其FcRn结合片段。
在某些实施方案中，变体Fc结构域或其FcRn结合片段以相对于野生型IgG Fc结构域增加的亲和力结合到FcRn。在某些实施方案中，变体Fc结构域或其FcRn结合片段以相对于野生型人IgG Fc结构域增加的亲和力结合到人FcRn。在优选实施方案中，变体Fc结构域或其FcRn结合片段以相对于野生型人IgG1 Fc结构域增加的亲和力结合到人FcRn。
在某些实施方案中，变体Fc结构域或其FcRn结合片段在pH 6.0下，以增加的亲和力结合到人FcRn。在某些实施方案中，变体Fc结构域或其FcRn结合片段在pH 7.4下，以增加的亲和力结合到人FcRn。在优选实施方案中，变体Fc结构域或其FcRn结合片段在pH 6.0和pH 7.4下，以增加的亲和力结合到人FcRn。
在某些实施方案中，变体Fc结构域或其FcRn结合片段在pH 6.0下，以与野生型人IgG1 Fc结构域相比增加至少20x的结合亲和力结合到人FcRn。在优选实施方案中，变体Fc结构域或其FcRn结合片段在pH 6.0下，以与野生型人IgG1 Fc结构域相比增加至少30x的结合亲和力结合到人FcRn。
在某些实施方案中，变体Fc结构域或其FcRn结合片段在pH 6.0下对人FcRn的结合亲和力比KD 15nM更强。在某些实施方案中，变体Fc结构域或其FcRn结合片段在pH 7.4下对人FcRn的结合亲和力比KD320 nM更强。
在某些实施方案中，与对应的野生型Fc结构域相比，变体Fc结构域或其FcRn结合片段包含至少一个氨基酸取代、至少两个氨基酸取代、至少三个氨基酸取代。变体Fc结构域或其FcRn结合片段可包含选自以下的至少一种氨基酸、至少两种氨基酸或至少三种氨基酸：237M；238A；239K；248I；250A；250F；250I；250M；250Q；250S；250V；250W；250Y；252F；252W；252Y；254T；255E；256D；256E；256Q；257A；257G；257I；257L；257M；257N；257S；257T；257V；258H；265A；270F；286A；286E；289H；297A；298G；303A；305A；307A；307D；307F；307G；307H；307I；307K；307L；307M；307N；307P；307Q；307R；307S；307V；307W；307Y；308A；308F；308I；308L；308M；308P；308Q；308T；309A；309D；309E；309P；309R；311A；311H；311I；312A；312H；314K；314R；315A；315H；317A；325G；332V；334L；360H；376A；378V；380A；382A；384A；385D；385H；386P；387E；389A；389S；424A；428A；428D；428F；428G；428H；428I；428K；428L；428N；428P；428Q；428S；428T；428V；428W；428Y；433K；434A；434F；434H；434S；434W；434Y；436H；436I和436F，其中所述位置是根据EU编号来定义。
在优选实施方案中，变体Fc结构域或其FcRn结合片段包含分别在EU位置252、254、256、433、434和436处的氨基酸Y、T、E、K、F和Y。
变体Fc结构域或其FcRn结合片段可包含选自以下的至少一个、至少两个或至少三个氨基酸取代：G237M；P238A；S239K；K248I；T250A；T250F；T250I；T250M；T250Q；T250S；T250V；T250W；T250Y；M252F；M252W；M252Y；S254T；R255E；T256D；T256E；T256Q；P257A；P257G；P257I；P257L；P257M；P257N；P257S；P257T；P257V；E258H；D265A；D270F；N286A；N286E；T289H；N297A；S298G；V303A；V305A；T307A；T307D；T307F；T307G；T307H；T307I；T307K；T307L；T307M；T307N；T307P；T307Q；T307R；T307S；T307V；T307W；T307Y；V308A；V308F；V308I；V308L；V308M；V308P；V308Q；V308T；V309A；V309D；V309E；V309P；V309R；Q311A；Q311H；Q311I；D312A；D312H；L314K；L314R；N315A；N315H；K317A；N325G；I332V；K334L；K360H；D376A；A378V；E380A；E382A；N384A；G385D；G385H；Q386P；P387E；N389A；N389S；S424A；M428A；M428D；M428F；M428G；M428H；M428I；M428K；M428L；M428N；M428P；M428Q；M428S；M428T；M428V；M428W；M428Y；H433K；N434A；N434F；N434H；N434S；N434W；N434Y；Y436H；Y436I和Y436F，其中所述位置是根据EU编号来定义。
在优选实施方案中，变体Fc结构域或其FcRn结合片段包含以下氨基酸取代：M252Y、S254T、T256E、H433K和N434F。
在某些实施方案中，变体Fc结构域或其FcRn结合片段不包含分别在EU位置252、308和434处的氨基酸Y、P和Y的组合。在某些实施方案中，变体Fc结构域或FcRn结合片段不包含以下氨基酸取代的组合：M252Y、V308P和N434Y。
本文还提供了结合到IgE的抗体，其中所述抗体包含变体Fc结构域或其FcRn结合片段，所述变体Fc结构域或FcRn结合片段包含分别在EU位置252、254、256、433、434和436处的氨基酸Y、T、E、K、F和Y。
在涉及本文所述的所有抗IgE抗体的某些实施方案中，变体Fc结构域或其FcRn结合片段是变体人Fc结构域或其FcRn结合片段。变体Fc结构域或其FcRn结合片段可以是变体IgG Fc结构域或其FcRn结合片段。变体Fc结构域或其FcRn结合片段可以是变体IgG1 Fc结构域或其FcRn结合片段，优选变体人IgG1 Fc结构域或其FcRn结合片段。
在涉及本文所述的所有抗IgE抗体的某些实施方案中，与对应的野生型Fc结构域相比，变体Fc结构域或其FcRn结合片段由不超过20个、不超过10个或不超过5个氨基酸取代组成。
在某些优选的实施方案中，变体Fc结构域包含SEQ ID NO：1、SEQ ID NO：2或SEQID NO：3中所示的氨基酸序列，或由SEQ ID NO：1、SEQ ID NO：2或SEQ ID NO：3中所示的氨基酸序列组成。在其他优选的实施方案中，变体Fc结构域包含SEQ ID NO：5、SEQ ID NO：6或SEQ ID NO：7中所示的氨基酸序列，或由SEQ ID NO：5、SEQ ID NO：6或SEQ ID NO：7中所示的氨基酸序列组成。
在某些实施方案中，变体Fc结构域或其FcRn结合片段包含在变体Fc区内，所述变体Fc区由两个Fc结构域或其FcRn结合片段组成。变体Fc区的两个Fc结构域或FcRn结合片段可同一。在此类实施方案中，变体Fc区的两个Fc结构域各自可包含SEQ ID NO：1、SEQ IDNO：2或SEQ ID NO：3中所示的氨基酸序列，或由SEQ ID NO：1、SEQ ID NO：2或SEQ ID NO：3中所示的氨基酸序列组成。备选地，变体Fc区的两个Fc结构域各自可包含SEQ ID NO：5、SEQID NO：6或SEQ ID NO：7中所示的氨基酸序列，或由SEQ ID NO：5、SEQ ID NO：6或SEQ IDNO：7中所示的氨基酸序列组成。
对于抗IgE抗体包含变体Fc区的实施方案，变体Fc区可具有增加的对CD16a的亲和力。在某些实施方案中，变体Fc区的Fc结构域不包含在EU位置297处的N-连接聚糖。备选地，变体Fc区的Fc结构域包含在EU位置297处的非岩藻糖基化的N-连接聚糖。备选地，变体Fc区的Fc结构域包含在Fc结构域的EU位置297处具有等分GlcNac的N-连接聚糖。
本文所提供的抗IgE抗体可结合到IgE的CH3结构域。与IgE的结合可抑制IgE与FcεRI的结合和/或抑制肥大细胞或嗜碱性粒细胞脱粒。在优选实施方案中，抗IgE抗体不是过敏性的。
在某些优选的实施方案中，抗IgE抗体展现出pH依赖性靶标结合，使得抗体在酸性pH下展现出比在中性pH下更低的抗原结合活性。在酸性pH下的抗原结合活性和在中性pH下的抗原结合活性的比率可以是至少2、至少3、至少5、至少10，如通过KD(在酸性pH下)/KD(在中性pH下)所测量。
在某些实施方案中，pH依赖性抗IgE抗体包含一个或多个CDR，所述CDR包含一个或多个His取代。
本文所提供的抗IgE抗体可以是IgG抗体，优选IgG1抗体。在某些实施方案中，抗IgE抗体是非人抗体的人源化或种系化变体，例如骆驼科动物来源的抗体。在某些实施方案中，抗IgE抗体包含本文所述的示例性抗IgE抗体的CDR、VH和/或VL序列。
本文进一步提供编码抗IgE抗体的多核苷酸，以及包含所述多核苷酸的表达载体，所述多核苷酸可操作地连接到允许所述抗体表达的调节序列。还提供了含有表达载体的宿主细胞或无细胞表达系统。进一步提供产生重组抗体的方法，所述方法包括在允许表达抗体的条件下培养宿主细胞或无细胞表达系统，以及回收所表达的抗体。
在又一方面，本发明提供包含本发明的抗IgE抗体和至少一种药学上可接受的载体或赋形剂的药物组合物。抗IgE抗体和包含所述抗IgE抗体的药物组合物可用作药物。
在另外的方面，本发明提供治疗受试者、优选人受试者的抗体介导的病症的方法。所述方法包括向有需要的患者施用治疗有效量的根据本发明上述方面的抗IgE抗体或药物组合物。
抗体介导的病症可以是IgE介导的病症。备选地或另外，抗体介导的病症可以是自身免疫疾病。自身免疫疾病可选自由以下组成的组：同种异体胰岛移植排斥、斑秃、强直性脊柱炎、抗磷脂综合征、自身免疫性爱迪生氏病(Addison′s disease)、阿尔茨海默氏病(Alzheimer’s disease)、抗中性粒细胞胞浆自身抗体(ANCA)、肾上腺自身免疫疾病、自身免疫性溶血性贫血、自身免疫性肝炎、自身免疫性心肌炎、自身免疫性中性粒细胞减少、自身免疫性卵巢炎和睾丸炎、自身免疫性血小板减少、自身免疫性荨麻疹、贝切特氏病(Behcet′s disease)、大疱性类天疱疮、心肌病变、卡斯特氏综合征(Castleman′ssyndrome)、乳糜泻性皮炎(celiac spruce-dermatitis)、慢性疲劳免疫功能障碍综合征、慢性炎性脱髓鞘性多发性神经病变(CIDP)、慢性诱导性荨麻疹、慢性自发性荨麻疹、变应性肉芽肿性血管炎(Churg-Strauss syndrome)、疤痕性类天疱疮、CREST综合征、冷凝集素病、克罗恩氏病(Crohn′s disease)、皮肌炎、扩张型心肌病变、盘状狼疮、获得性大疱性表皮松解、特发性混合型冷球蛋白血症、VIII因子缺乏、纤维肌痛-纤维肌炎、肾小球肾炎、格雷夫斯病、格-巴二氏综合征(Guillain-Barre syndrome)、古德帕斯彻氏综合征(Goodpasture′s syndrome)、移植物抗宿主病(GVHD)、桥本氏甲状腺炎(Hashimoto′s thyroiditis)、血友病A、特发性膜性神经病变、特发性肺纤维化、特发性血小板减少性紫癜(ITP)、IgA神经病变、IgM多发性神经病变、免疫介导的血小板减少、幼年型关节炎、川崎氏病(Kawasaki′sdisease)、扁平苔癣(lichen plantus)、硬化性苔藓、系统性红斑狼疮、狼疮肾炎、梅尼埃氏病(Meniere′s disease)、混合性结缔组织病、粘膜类天疱疮、多发性硬化、1型糖尿病、多灶性运动神经病变(MMN)、重症肌无力、副肿瘤性大疱性类天疱疮、妊娠性类天疱疮、寻常天疱疮、落叶型天疱疮、恶性贫血、结节性多动脉炎、多软骨炎(polychrondritis)、多腺性综合征、风湿性多肌痛、多肌炎和皮肌炎、原发性丙种球蛋白缺乏血症(primaryagammaglobinulinemia)、原发性胆汁性肝硬化、银屑病、银屑病性关节炎、复发性多软骨炎、雷诺现象(Reynauld′s phenomenon)、莱特尔氏综合征(Reiter′s syndrome)、类风湿性关节炎、结节病、硬皮病、干燥综合征(Sjorgen′s syndrome)、实体器官移植排斥、僵体综合征(stiff-man syndrome)、系统性红斑狼疮、高安动脉炎(takayasu arteritis)、中毒性表皮坏死松解症、斯-约二氏综合征(Stevens Johnson syndrome)(SJS)、颞动脉炎/巨细胞性动脉炎、血栓性血小减少性紫癜、溃疡性结肠炎、葡萄膜炎、疱疹样皮炎、抗中性粒细胞胞质抗体相关血管炎病、白斑和韦格纳氏肉芽肿病(Wegener′s granulomatosis)。
在优选实施方案中，自身免疫疾病是慢性自发性荨麻疹或大疱性类天疱疮。因此，本文提供用于治疗慢性自发性荨麻疹或大疱性类天疱疮的本发明的抗IgE抗体或药物组合物。
在某些实施方案中，可向受试者同时或依序施用抗IgE抗体或药物组合物与另外的治疗剂。
附图说明
图1显示测试经免疫美洲驼的免疫前(PRE)和免疫后(POST)血清结合到人IgE的结果。
图2显示如通过ELISA所测量的抗IgE mAb与人IgE的结合。在pH 5.5和pH 7.4下测量结合。(A)克隆3D6；(B)克隆16E4；(C)克隆3A1；(D)克隆3D1；(E)克隆13E4；(F)克隆18B9；(G)克隆20D5；(H)克隆18E2。
图3显示如通过ELISA所测量的抗IgE mAb抑制hIgE与hFcεRIα结合的能力。在pH 6和pH 7.4下测量结合。(A)克隆3D6；(B)克隆16E4；(C)克隆3A1；(D)克隆3D1；(E)克隆13E4；(F)克隆18B9；(G)克隆20D5；(H)克隆18E2。
图4显示如通过SPR分析所确定的抗IgE mAb抑制hIgE与hFcεRIα结合的能力。在pH6和pH 7.4下测量结合。(A)克隆3D6；(B)克隆16E4；(C)克隆3A1；(D)克隆3D1；(E)克隆13E4；(F)克隆18B9；(G)克隆20D5。
图5显示如通过ELISA所测量的抗IgE mAb与食蟹猴IgE的结合。在pH 5.5和pH 7.4下测量结合。(A)克隆3D6；(B)克隆16E4；(C)克隆3A1；(D)克隆3D1；(E)克隆13E4；(F)克隆18B9；(G)克隆20D5；(H)克隆18E2。
图6显示如通过ELISA所测量的抗IgE ABDEGTM mAb与人IgE的结合。在pH 5.5和pH7.4下测量结合。(A)克隆18B9His；(B)克隆18E2His2；(C)克隆13E4。
图7显示抗IgE ABDEGTM mAb与缺乏ABDEGTM技术的对应抗IgE mAb相比以更高亲和力结合到FcRn的能力。包括依加替莫德(Efgartigimod)(含有ABDEGTM技术的分离变体Fc分子)以供比较。(A)克隆18B9His在pH 6.0下的结合；(B)克隆18B9His在pH 7.0下的结合；(C)克隆18E2His2在pH 6.0下的结合；(D)克隆18E2His2在pH 7.0下的结合；(E)克隆13E4在pH6.0下的结合；(F)克隆13E4在pH 7.0下的结合。
图8显示如通过竞争ELISA测量的抗IgE ABDEGTM mAb与天然IgG3竞争结合到FcRn的能力。(A)克隆18B9His；(B)克隆18E2His2；(C)克隆13E4。
图9显示抗IgE mAb(有和无ABDEGTM两者)抑制IgE结合到表达hFcεRIα的肥大细胞的能力。(A)克隆18B9His；(B)克隆18E2His2；(C)克隆13E4。
图10显示如通过ELISA测量的抗IgE mAb(有和无ABDEGTM两者)结合到预结合到肥大细胞上的hFcεRIα的hIgE的能力。(A)克隆13E4；(B)克隆18B9His；(C)克隆18E2His2。
图11显示抗IgE ABDEGTM mAb在体内耗竭IgG(A)和IgE(B)水平两者的能力。所用对照为：奥马佐单抗(在Fc结构域中无ABDEGTM取代的抗IgE抗体)和HEL-hIgG1-ABDEG(含有ABDEGTM取代但对IgE无结合特异性的IgG1抗体)。
图12显示用于工程改造抗IgE抗体克隆CL-2C(利格珠单抗(ligelizumab))的pH依赖性变体的方法的示意图。
图13显示针对展现出与IgE的pH依赖性结合的CL-2C变体克隆筛选后的Vκ(A)和VH(B)结构域的各种CDR位置处的组氨酸残基分布。
图14显示抗ABDEGTM mAb抑制IgE结合到表达hFcεRIα的肥大细胞的能力。
图15显示在肥大细胞活化测定中测试各种抗IgE抗体的结果。用IgE使骨髓来源的肥大细胞致敏，以使其负载FcεRIα受体。随后将肥大细胞与各种抗IgE抗体孵育，以测试这些抗体与结合FcεRIα的IgE交联并触发肥大细胞活化的能力。(A)显示用20μg/ml抗体的肥大细胞激发；(B)显示用200μg/ml抗体的肥大细胞激发；(C)显示用增加浓度的克隆(13E4-hIgG1-ABDEGTM；18B9-hIgG1-ABDEGTM；和18E2His2-MG-ABDEGTM)的肥大细胞激发。
图16显示测试各种抗IgE抗体在体内诱导过敏反应的结果。用各种抗IgE抗体激发用重组人IgE致敏的小鼠，并在2小时时段内以15分钟间隔记录激发后小鼠的温度。(A)和(B)显示以15mg/kg剂量施用的抗体在实验时程中的温度变化；(C)显示以50mg/kg剂量施用的抗体在实验时程中的温度变化。
图17显示在大疱性类天疱疮体内模型中测试ABDEGTM抗体的结果。在抗IgE-ABDEGTM抗体存在或不存在下，向敲入式人NC16A小鼠注射抗hNC16A IgG或抗hNC16A IgE。(A)显示对注射了抗hNC16A IgG的小鼠的皮肤病评分的作用，且(B)显示对用或未用HEL-ABDEGTM抗体治疗的小鼠的抗hNC16A IgG水平的作用。(C)显示对注射了抗hNC16A IgE的小鼠的皮肤病评分的作用，且(D)显示对用或未用抗IgE-ABDEGTM抗体治疗的小鼠的嗜酸性粒细胞过氧化物酶(EPO)活性的作用。*p＜0.001。
具体实施方式
A.定义
除非另有定义，否则本文所用的所有技术和科学术语与本发明技术领域内的本领域技术人员通常所理解的含义相同。
“抗体”-如本文所用，术语“抗体”意在涵盖全长抗体和其变体，包括但不限于修饰的抗体、人源化抗体、种系化抗体(参见下文定义)。术语“抗体”在本文中通常用于指具有两条重链和两条轻链的组合的免疫球蛋白多肽，其中所述多肽对目的抗原(本文为IgE)具有显著的特异性免疫反应性活性。对于IgG类别的抗体，抗体包含分子量大约为23,000道尔顿的两条同一的多肽轻链和分子量为53,000-70,000的两条同一的重链。四条链由二硫键以“Y”构型接合，其中轻链从“Y”的口开始并持续通过可变区而括含(bracket)重链。将抗体的轻链分类为卡帕(κ)或拉姆达(λ)(κ、λ)。每个重链类别都可以与κ轻链或λ轻链结合。通常，当由杂交瘤、B细胞或遗传工程改造的宿主细胞生成免疫球蛋白时，轻链和重链彼此共价键合，并且两条重链的“尾部”部分通过共价二硫键连或非共价键连彼此键合。在重链中，氨基酸序列从Y构型分叉端处的N末端延伸到每条链底部处的C末端。
本领域技术人员将了解，将重链分类为伽马、谬、阿尔法、德尔塔或厄普西隆(γ、μ、α、δ、ε)，其中有一些亚类(例如γ1-γ4)。该链的性质将抗体的“类别”分别确定为IgG、IgM、IgA、IgD或IgE。免疫球蛋白亚类(同种型)(例如IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgA1等)被充分表征并且已知赋予功能特化。如本文所用的术语“抗体”涵盖来自任何类别或亚类抗体的抗体。
“可变区”或“可变结构域”-术语“可变区”和“可变结构域”在本文中可互换使用，并且意在具有等同的含义。术语“可变”是指以下事实：可变结构域VH和VL的某些部分在抗体之间序列上有很大不同，并且用于每个特定抗体对其靶抗原的结合和特异性。然而，变异性并非均匀地分布于抗体的整个可变结构域中。它集中在VL结构域和VH结构域中的每一个中的称为“超变环”的三个区段中，所述区段形成抗原结合位点的一部分。Vλ轻链结构域的第一超变环、第二超变环和第三超变环在本文中被称为L1(λ)、L2(λ)和L3(λ)，并且可被定义为包含VL结构域中的残基24-33(L1(λ)，由9个、10个或11个氨基酸残基组成)、49-53(L2(λ)，由3个残基组成)和90-96(L3(λ)，由5个残基组成)(Morea等，Methods 20：267-279(2000))。Vκ轻链结构域的第一超变环、第二超变环和第三超变环在本文中被称为LI(κ)、L2(κ)和L3(κ)，并且可被定义为包含VL结构域中的残基25-33(L1(κ)，由6个、7个、8个、11个、12个或13个残基组成)、49-53(L2(κ)，由3个残基组成)和90-97(L3(κ)，由6个残基组成)(Morea等，Methods 20：267-279(2000))。VH结构域的第一超变环、第二超变环和第三超变环在本文中称为H1、H2和H3，并且可被定义为包含VH结构域中的残基25-33(H1，由7个、8个或9个残基组成)、52-56(H2，由3个或4个残基组成)和91-105(H3，长度高度可变)(Morea等，Methods 20：267-279(2000)。
除非另有说明，否则术语L1、L2和L3分别是指VL结构域的第一超变环、第二超变环和第三超变环，并且涵盖从Vκ和Vλ同种型两者获得的超变环。术语H1、H2和H3分别是指VH结构域的第一超变环、第二超变环和第三超变环，并且涵盖从任何已知重链同种型(包括γ、ε、δ、α或μ)获得的超变环。
超变环L1、L2、L3、H1、H2和H3可各自包含“互补决定区”或“CDR”的一部分，如下文所定义的。术语“超变环”和“互补决定区”不是严格同义的，因为超变环(HV)是基于结构定义的，而互补决定区(CDR)是基于序列变异性定义的(Kabat等，具有免疫学重要性的蛋白质序列(Sequences of Proteins of Immunological Interest)，第5版，Public HealthService，National Institutes of Health，Bethesda，MD.，1983)，并且在一些VH和VL结构域中，HV和CDR的限制可能不同。
VL和VH结构域的CDR通常可被定义为包含以下氨基酸：轻链可变结构域中的残基24-34(LCDR1)、50-56(LCDR2)和89-97(LCDR3)，以及重链可变结构域中的残基31-35或31-35b(HCDR1)、50-65(HCDR2)和95-102(HCDR3)；(Kabat等，具有免疫学重要性的蛋白质序列，第5版，Public Health Service，National Institutes of Health，Bethesda，MD.(1991))。因此，除非另有说明，否则HV可包含在相应的CDR内，本文中提到VH和VL结构域的“超变环”时，应被解释为还涵盖相应的CDR，且反之亦然。
可变结构域中较高度保守的部分被称为框架区(FR)，如下文所定义。天然重链和轻链的可变结构域各自包含四个由三个超变环连接的FR(分别为FR1、FR2、FR3和FR4)，主要采用β-折叠构型。各链中的超变环通过FR邻近保持在一起，并且与来自另一链的超变环一起促成抗体的抗原结合位点的形成。抗体的结构分析揭示了互补决定区形成的结合位点的序列和形状之间的关系(Chothia等，J.Mol.Biol.227：799-817(1992)；Tramontano等，J.Mol.Biol.215：175-182(1990))。尽管它们具有高度的序列变异性，但六个环中的五个环仅采用主链构象的小库，称为“规范结构”。这些构象首先由环的长度确定，其次由环中和框架区中某些位置处关键残基的存在确定，这些残基通过它们的堆积、氢键合或呈现不寻常的主链构象的能力确定构象。
“CDR”-如本文所用，术语“CDR”或“互补决定区”意指在重链多肽和轻链多肽两者的可变区内均发现的非邻接抗原结合位点。这些特定区域已被描述在Kabat等，J.Biol.Chem.252，6609-6616(1977)；和Kabat等，具有免疫学重要性的蛋白质序列(1991)；和Chothia等，J.Mol.Biol.196：901-917(1987)；以及MacCallum等，J.Mol.Biol.262：732-745(1996)，其中当相互比较时，这些定义包括氨基酸残基的重叠或子集。列出了涵盖如每篇上述参考文献所定义的CDR的氨基酸残基用于比较。优选地，术语“CDR”是Kabat基于序列比较定义的CDR。
表1：CDR定义
Figure BDA0003368808670000161
1残基编号遵循Kabat等(见上文)的命名法
2残基编号遵循Chothia等(见上文)的命名法
3残基编号遵循MacCallum等(见上文)的命名法
“框架区”-如本文所用的术语“框架区”或“FR区”包含作为可变区的一部分但不是CDR的一部分的氨基酸残基(例如，使用CDR的Kabat定义)。因此，可变区框架的长度为约100-120个氨基酸，但仅包含那些在CDR以外的氨基酸。对于重链可变结构域的具体示例和对于如由Kabat等所定义的CDR，框架区1对应于可变区的涵盖氨基酸1-30的结构域；框架区2对应于可变区的涵盖氨基酸36-49的结构域；框架区3对应于可变区的涵盖氨基酸66-94的结构域；框架区4对应于可变区的从氨基酸103到可变区末端的结构域。轻链的框架区类似地被每个轻链可变区CDR分开。类似地，使用由Chothia等或McCallum等对CDR的定义，框架区边界被如上文所述的各自CDR末端分开。在优选实施方案中，CDR如由Kabat所定义。
在天然存在的抗体中，存在于每个单体抗体上的六个CDR是短的、非邻接的氨基酸序列，当抗体在水性环境中呈现其三维构型时，所述氨基酸序列特异性定位以形成抗原结合位点。重链可变结构域和轻链可变结构域的其余部分在氨基酸序列中显示较少的分子间变异性，并且被称为框架区。框架区主要采用β-折叠构象，CDR形成环，该环连接β-折叠结构，并且在一些情况下形成β-折叠结构的一部分。因此，这些框架区用于形成支架，该支架通过链间非共价相互作用将六个CDR在正确取向上定位。由定位的CDR形成的抗原结合位点限定了与免疫反应性抗原上的表位互补的表面。该互补表面促进抗体与免疫反应性抗原表位的非共价结合。CDR的位置可由本领域普通技术人员容易地鉴别。
“恒定区”-如本文所用，术语“恒定区”是指抗体分子在可变结构域或可变区之外的部分。免疫球蛋白轻链具有单一结构域“恒定区”，通常被称为“CL”或“CL1结构域”。该结构域位于VL结构域的C末端。免疫球蛋白重链的恒定区取决于免疫球蛋白类别(γ、μ、α、δ、ε)而不同。重链γ、α和δ具有由三个免疫球蛋白结构域(称为CH1、CH2和CH3)组成的恒定区，其中柔性铰链区分隔CH1和CH2结构域。重链μ和ε具有由四个结构域(CH1-CH4)组成的恒定区。重链的恒定结构域定位于VH结构域的C末端。
免疫球蛋白重链和轻链中氨基酸的编号从Y构型分叉端处的N末端延伸到每条链底部处的C末端。使用不同的编号方案来定义免疫球蛋白重链和轻链的恒定结构域。根据EU编号方案，将IgG分子的重链恒定结构域鉴别如下：CH1-氨基酸残基118-215；CH2-氨基酸残基231-340；CH3-氨基酸残基341-446。根据Kabat编号方案，将IgG分子的重链恒定结构域鉴别如下：CH1-氨基酸残基114-223；CH2-氨基酸残基244-360；CH3-氨基酸残基361-477。
“Fc结构域”-如本文所用，“Fc结构域”定义免疫球蛋白重链的恒定区的一部分，其包含CH2和CH3结构域。其通常定义单个免疫球蛋白重链的部分，该部分开始于铰链区(正好位于木瓜蛋白酶切割位点的上游)并且结束于抗体C-末端。Fc结构域通常包含来自铰链区的一些残基。因此，完整Fc结构域通常包含铰链(例如，上铰链区、中铰链区和/或下铰链区)结构域、CH2结构域和CH3结构域的至少一部分。
“铰链区”包含重链分子的将CH1结构域接合到CH2结构域的部分。该铰链区包含大约25个残基并且是柔性的，因此允许两个N-末端抗原结合区独立地移动。铰链区可细分为三个不同的结构域：上铰链结构域、中铰链结构域和下铰链结构域(Roux K.H.等，J.Immunol.161：4083-901998)。包含“完全人”铰链区的本发明抗体可含有下表2所示的铰链区序列之一。
表2：人铰链序列
Figure BDA0003368808670000181
“变体Fc结构域”-如本文所用，术语“变体Fc结构域”是指相对于野生型Fc结构域(例如天然存在的或“野生型”人IgG的Fc结构域)具有一个或多个改变的Fc结构域。改变可包括氨基酸的取代、添加和/或缺失、另外部分的连接和/或天然聚糖的改变。
“Fc区”-如本文所用，术语“Fc区”是指天然免疫球蛋白的由两条重链的Fc结构域形成的部分。天然或野生型Fc区通常是同型二聚体的。
“变体Fc区”-如本文所用，术语“变体Fc区”指至少一个Fc结构域相对于野生型Fc区(例如天然存在的人IgG的Fc区)的野生型结构域具有一个或多个改变的Fc区。在某些实施方案中，该术语涵盖同型二聚体Fc区，其中每个组成性Fc结构域均相同。在某些实施方案中，该术语涵盖异型二聚体Fc区，其中每个组成性Fc结构域均不同。对于异型二聚体实施方案，Fc结构域中的一个或两个可以是变体Fc结构域。
“FcRn结合片段”-如本文所用，术语“FcRn结合片段”指Fc结构域或Fc区中足以赋予FcRn结合的部分。
“特异性”和“多特异性抗体”-本文所述的抗体结合至特定靶抗原IgE。优选地，抗体“特异性结合”至其靶抗原，其中术语“特异性结合”是指任何抗体优先与给定靶标(例如IgE)发生免疫反应的能力。本发明的抗体可以是单特异性的，并且含有一个或多个特异性结合特定靶标的结合位点。可将抗体并入“多特异性抗体”形式(例如双特异性抗体)中，其中多特异性抗体结合到两种或更多种靶抗原。为了实现多重特异性，通常对“多特异性抗体”进行工程改造以包含具有不同VH-VL对的重链和轻链多肽的不同组合或配对。可对多特异性的、尤其是双特异性的抗体进行工程改造以采用天然抗体的整体构象，例如具有与Fc区缀合的不同特异性的Fab臂的Y形抗体。备选地，可对多特异性抗体(例如双特异性抗体)进行工程改造以采用非天然构象，例如其中具有不同特异性的可变结构域或可变结构域对位于Fc区的相对端。
“修饰的抗体”-如本文所用，术语“修饰的抗体”包括被改变使得它们不是天然存在的抗体的合成形式。示例包括但不限于包含至少两个重链部分但不包含两条完整重链的抗体(诸如结构域缺失抗体或微型抗体(minibody))；多特异性形式的抗体(例如，双特异性、三特异性等)，其经改变以结合两种或更多种不同抗原或单一抗原上的不同表位；接合至scFv分子的重链分子等。scFv分子是本领域已知的，并且描述于例如美国专利5，892，019中。另外，术语“修饰的抗体”包括多价形式的抗体(例如，结合到相同抗原的三个或更多拷贝的三价、四价等抗体)。
术语“修饰的抗体”还可在本文中用于指如本文在结构上定义的本发明抗体的氨基酸序列变体。本领域普通技术人员应当理解，抗体可经修饰以产生变体抗体，所述变体抗体与其所来源的抗体相比在氨基酸序列上变化。例如，可(例如，在CDR和/或框架残基中)进行导致“非必需的”氨基酸残基的保守取代或改变的核苷酸或氨基酸取代。氨基酸取代可包括用天然或非天然氨基酸替换一个或多个氨基酸。
根据本发明的修饰抗体可包含如本文所定义的任何适合的抗原结合片段，所述抗原结合片段连接到根据本发明所定义的变体Fc结构域或其FcRn结合片段。
“抗原结合片段”-如本文所用的术语“抗原结合片段”是指为全长抗体或抗体链的部件或部分的片段，其包含比完整或完全抗体更少的氨基酸残基，同时保留抗原结合活性。
抗体的抗原结合片段包括对与抗体相同的抗原(例如IgE)展现出特异性免疫反应性活性的肽片段。如本文所用的术语“抗原结合片段”意在涵盖选自以下的抗体片段：抗体轻链可变结构域(VL)；抗体重链可变结构域(VH)；VH-VL结构域配对；单链抗体(scFv)；F(ab’)2片段；Fab片段；Fd片段；Fv片段；单臂(单价)抗体；双链抗体(diabody)、三链抗体(triabody)、四链抗体(tetrabody)或通过此类抗原结合片段的组合、组装或缀合形成的任何抗原结合分子。如本文所用的术语“抗原结合片段”还可涵盖选自由以下组成的组的抗体片段：单抗体(unibody)；结构域抗体；和纳米抗体。片段可例如经由化学或酶处理完整或完全抗体或抗体链，或通过重组手段获得。
“人源化取代”-如本文所用，术语“人源化取代”是指如下氨基酸取代，其中存在于抗体的VH或VL结构域中特定位置的氨基酸残基被出现在参考人VH或VL结构域中等同位置的氨基酸残基取代。参考人VH或VL结构域可以是由人种系编码的VH或VL结构域。可在本文所定义的抗体的框架区和/或CDR中进行人源化取代。
“人源化变体”-如本文所用，术语“人源化变体”或“人源化抗体”是指与参考抗体相比含有一个或多个“人源化取代”的变体抗体，其中参考抗体的一部分(例如VH结构域和/或VL结构域或其含有至少一个CDR的部分)具有来源于非人物种的氨基酸，并且“人源化取代”发生在来源于非人物种的氨基酸序列内。
“种系化变体”-术语“种系化变体”或“种系化抗体”在本文中用于特指“人源化变体”，其中“人源化取代”导致抗体的VH或VL结构域的一个或多个特定位置处存在的一个或多个氨基酸残基被出现在由人种系编码的参考人VH或VL结构域的等同位置上的氨基酸残基替代。典型的是，对于任何给定的“种系化变体”，被取代到种系化变体中的替代氨基酸残基排他性地或主要取自单一人种系编码的VH或VL结构域。术语“人源化变体”和“种系化变体”经常可互换使用。将一个或多个“人源化取代”引入骆驼科动物来源的(例如，美洲驼来源的)VH或VL结构域导致产生骆驼科动物(美洲驼)来源的VH或VL结构域的“人源化变体”。如果被取代的氨基酸残基主要或排他性地来源于单一人种系编码的VH或VL结构域序列，则结果可能是骆驼科动物(美洲驼)来源的VH或VL结构域的“人种系化变体”。
“亲和力变体”-如本文所用，术语“亲和力变体”是指与参考抗体相比在氨基酸序列上展现出一种或多种变化的变体抗体，其中与参考抗体相比，亲和力变体对靶抗原展现出改变的亲和力。例如，与参考IgE抗体相比，亲和力变体将对靶标(例如IgE)展现出改变的亲和力。优选地，与参考抗体相比，亲和力变体将对靶抗原展现出改善的亲和力。与参考抗体相比，亲和力变体通常在CDR中展现出氨基酸序列的一种或多种变化。此类替换可能导致CDR中给定位置处的原始氨基酸被不同的氨基酸残基替代，该不同的氨基酸残基可以是天然存在的氨基酸残基或非天然存在的氨基酸残基。氨基酸取代可以是保守或非保守的。
“工程改造”-如本文所用，术语“工程改造”包括通过合成手段(例如通过重组技术、体外肽合成、通过肽的酶或化学偶合或这些技术的一些组合)操纵核酸或多肽分子。优选地，本发明的抗体是工程改造的，包括例如已经工程改造以改善一种或多种性质(诸如抗原结合、稳定性/半衰期或效应子功能)的人源化抗体。
“FcRn”-如本文所用，术语“FcRn”是指新生Fc受体。示例性FcRn分子包括由如RefSeq NM_004107中所示的FCGRT基因编码的人FcRn。
“CD16”-如本文所用，术语“CD16”是指抗体依赖性细胞介导的细胞毒性(ADCC)所需的FcγRIII Fc受体。示例性CD16分子包括如RefSeq NM_000569中所述的人CD16a。
“N-连接聚糖”-如本文所用，术语“N-连接聚糖”是指与存在于Fc区的CH2结构域中的序列(即，Asn-X-Ser或Asn-X-Thr序列，其中X是除脯氨酸之外的任何氨基酸)中的天冬酰胺侧链中的氮(N)连接的N-连接聚糖。此类N-聚糖充分描述于例如Drickamer K和TaylorME(2006)糖生物学导论(Introduction to Glycobiology)，第2版中，该文献以引用方式整体并入本文。
“非岩藻糖基化”-如本文所用，术语“非岩藻糖基化”是指缺乏核心岩藻糖分子的N-连接聚糖，如美国专利号8067232中所述，该专利以引用方式整体并入本文。
“等分GlcNAc”-如本文所用，术语“等分GlcNAc”是指具有连接到核心甘露糖分子的N-乙酰葡糖胺(GlcNAc)分子的N-连接聚糖，如美国专利号8021856中所述，该专利以引用方式整体并入本文。
“IgE”-如本文所用，术语“IgE”是指“免疫球蛋白E”分子或“E类免疫球蛋白”。IgE是人血清中富集最少的免疫球蛋白同种型。IgE免疫球蛋白采用其他类别或同种型免疫球蛋白共有的四聚体结构。然而，IgE以其ε重链为特征，该重链包含四个恒定区：Cε1、Cε2、Cg3和Cε4(在本文中还被称为CH1、CH2、CH3和CH4)。如本文别处所解释的，IgE通过结合到肥大细胞和嗜碱性粒细胞上的高亲和力Fc受体，在变应性和超敏反应中发挥重要作用。该高亲和力受体FcεRI具有多亚单位结构，包括一个IgE结合α亚单位、一个β亚单位和二硫键连接的γ亚单位的二聚体。低亲和力IgE受体FcαRII(也被称为CD23)在B细胞上组成型表达，并且可在巨噬细胞、嗜酸性粒细胞、血小板和一些T细胞上以响应IL-4而表达。
奥马佐单抗-奥马佐单抗是结合到IgE的重组人源化单克隆抗体。其含有5％鼠序列和95％人序列。其由Novartis公司以
Figure BDA0003368808670000221
销售，并且已被批准用于治疗变应性哮喘和慢性自发性荨麻疹(CSU)。奥马佐单抗的CDR、VH和VL序列示于下表3中。
表3奥马佐单抗的CDR、VH和VL序列
Figure BDA0003368808670000231
奥马佐单抗结合到IgE的受体结合部分，即CH3或Cε3结构域内的区域。由于奥马佐单抗识别的表位涵盖用于高亲和力和低亲和力IgE受体的结合区域，因此奥马佐单抗消除了IgE结合到两种类型受体的能力。重要的是，奥马佐单抗不能交联已经结合在细胞表面上的IgE分子，即它无过原敏性。FcεRI与一条IgE重链的一个CH3结构域的结合抑制或阻止奥马佐单抗与另一条IgE重链的CH3区域的结合。因此，奥马佐单抗只可结合到循环中的IgE。在循环中，每一个IgE分子均可同时被两个奥马佐单抗分子结合。
利格珠单抗-利格珠单抗是结合到IgE的第二人源化单克隆抗体。它与奥马佐单抗结合到IgE的同一区域，但以更高的亲和力结合到IgE。利格珠单抗的CDR、VH和VL序列示于下表4中。
表4利格珠单抗的CDR、VH和VL序列
Figure BDA0003368808670000232
Figure BDA0003368808670000241
“抗体介导的病症”-如本文所用，术语“抗体介导的病症”是指由受试者中抗体的存在引起或加重的任何疾病或病症。
“治疗(treat/treating/treatment)”-如本文所用，术语“治疗”是指本文所述的治疗性或预防性措施。“治疗”方法采用向受试者，例如具有抗体介导的疾病或病症(例如自身免疫疾病)或易患此类种疾病或病症的受试者施用根据本发明的抗体，以便预防、治愈、延迟疾病或病症或复发性疾病或病症，降低其严重性，或改善其一种或多种症状，或以便将受试者的存活延长超过在不存在此类治疗的情况下所预期的存活。
“受试者”-如本文所用，术语“受试者”是指任何人或非人动物。在某些实施方案中，术语“受试者”是指任何人或非人哺乳动物。在优选实施方案中，受试者是人。在某些实施方案中，受试者是成年人。如本文所用，“成年人”是年龄至少18岁的人。
B.具有变体Fc结构域的抗IgE抗体
(i)变体Fc结构域和其FcRn结合片段
在第一方面，本发明提供结合到IgE的抗体(即抗IgE抗体)，其中所述抗体包含至少一个变体Fc结构域或其FcRn结合片段。该变体Fc结构域或其FcRn结合片段的特征在于以相对于野生型Fc结构域增加的亲和力结合到新生儿Fc受体FcRn的能力。换句话说，本文所述抗IgE抗体的变体Fc结构域或FcRn结合片段与FcRn之间的结合亲和力与野生型Fc结构域与FcRn之间的结合亲和力相比更高。
FcRn受体借助于补救受体途径在调节血浆中IgG浓度方面发挥重要作用。用于FcRn功能的模型如下。循环中的IgG最可能通过流体相胞饮作用被吸收到细胞中，因为细胞外环境的近中性pH通常对于FcRn-IgG相互作用来说是不允许的。摄取后在早期酸性胞内体中结合到FcRn的IgG被再循环(或胞吞转运)，并通过胞吐作用在细胞表面处释放。相比之下，不结合FcRn的IgG进入溶酶体途径并被降解。
借助于以较高亲和力结合到FcRn，本发明的抗IgE抗体干扰内源性IgG分子的再循环，因此可降低内源性IgG抗体(例如IgG自身抗体)的水平。由此可见，本发明的抗IgE抗体靶向内源性IgE(借助于经由可变区的抗原结合)和内源性IgG(通过经由变体Fc结构域竞争与FcRn的结合)两者。
变体Fc结构域或其FcRn结合片段以相对于野生型Fc结构域增加的亲和力结合到FcRn。在某些实施方案中，与变体Fc结构域的结合亲和力相比较的野生型Fc结构域可以是变体Fc结构域所来源的野生型Fc结构域。如上文所述，变体Fc结构域在本发明的上下文中是指相对于野生型Fc结构域(例如天然存在的或“野生型”人IgG的Fc结构域)具有一个或多个改变的Fc结构域。改变可包括氨基酸的取代、添加和/或缺失、另外部分的连接和/或天然聚糖的改变。如果变体Fc结构域所来源的天然存在或野生型Fc结构域是人IgG1 Fc结构域，则变体Fc结构域以比野生型人IgG1 Fc结构域更高的亲和力结合到FcRn。
变体Fc结构域或FcRn结合片段所展现出的对FcRn的增加亲和力可能是相对于野生型Fc结构域来说，该野生型Fc结构域不一定是变体Fc片段或FcRn结合片段所来源的Fc结构域。例如，变体Fc结构域或其FcRn结合片段可以相对于野生型IgG Fc结构域增加的亲和力结合到FcRn。野生型人IgG可以是IgG1、IgG2、IgG3或IgG4。在优选实施方案中，本文所述抗IgE抗体的变体Fc结构域或其FcRn结合片段以相对于野生型人IgG1 Fc结构域或野生型人IgG3 Fc结构域增加的亲和力结合到FcRn。在优选实施方案中，本文所述抗IgE抗体的变体Fc结构域或其FcRn结合片段以相对于野生型人IgG1 Fc结构域增加的亲和力结合到FcRn。
由于本发明的抗IgE抗体意在用于治疗人疾病，特别是用于耗竭患有自身免疫疾病的患者的IgG自身抗体，因此变体Fc区或其FcRn结合片段通常将以更高的亲和力结合到人FcRn。换句话说，本文所述抗IgE抗体的变体Fc区或FcRn结合片段将与天然或内源性患者IgG抗体竞争与人FcRn的结合。
IgG Fc结构域与FcRn之间的相互作用是pH依赖性的。结合亲和力通常在酸性pH(即在早期胞内体隔室中发现的pH)下较强，而在中性pH(即血浆pH)下较弱。本文所述的变体Fc结构域或FcRn结合片段可在酸性pH(例如pH 6.0)下以增加的亲和力结合到FcRn。备选地或另外，本文所述的变体Fc结构域或FcRn结合片段可在中性pH(例如pH 7.4)下以增加的亲和力结合到FcRn。在优选实施方案中，本文所述抗IgE抗体的变体Fc结构域或FcRn结合片段在pH 6.0和pH 7.4两者下均以增加的亲和力结合到FcRn。在某些实施方案中，变体Fc结构域和/或FcRn结合片段以与野生型Fc结构域、特别是野生型人IgG1 Fc结构域相比降低的pH依赖性结合到FcRn。对于变体Fc结构域或FcRn结合片段以降低的pH依赖性结合到FcRn的实施方案，仍优选在pH 6.0和pH7.4下增加结合亲和力。
如本文所解释的，使本文所述的变体Fc结构域或FcRn结合片段与FcRn之间的结合亲和力增加，使得本发明的抗体与内源性IgG、特别是IgG自身抗体竞争与FcRn的结合。
如Vaccaro等(工程改造免疫球蛋白G的Fc区以调节体内抗体水平(Engineeringthe Fc region of immunoglobulin G to modulate in vivo antibody levels).NatureBiotechnology(2005)23(10)：1283-1288)、Ulrichts等(新生儿Fc受体拮抗剂依加替莫德安全且持续地降低人中的IgG(Neonatal Fc receptor antagonist efgartigimod safelyand sustainably reduces IgGs in humans).J.Clinical Investigation.(2018)128(10)：4372-4386)中所报道的，以及本文中所报告的，包含具有ABDEGTM突变(M252Y/S254T/T256E/H433K/N434F)的变体Fc结构域的变体Fc区可以增加的亲和力结合到人FcRn，并由此降低内源性IgG水平。Vaccaro等(其以引用方式并入本文)报道了变体ABDEGTM Fc区在pH6.0下对人FcRn的结合亲和力为KD 15.5nM，相比之下，野生型人IgG1的结合亲和力为KD370nM(通过表面等离子激元共振分析所测量)。因此，在某些实施方案中，本文所述的变体Fc结构域或FcRn结合片段在pH 6.0下，以与野生型人IgG1 Fc结构域相比增加至少20x的亲和力结合到人FcRn。在某些实施方案中，本文所述的变体Fc结构域或FcRn结合片段在pH6.0下，以与野生型人IgG1 Fc结构域相比增加至少25x、优选至少30x的亲和力结合到人FcRn。当在全长IgG分子的背景下测试Fc结构域(或片段)的亲和力时，可将变体Fc结构域或FcRn结合片段的结合亲和力与野生型人IgG1 Fc结构域的结合亲和力进行比较。
如Ulrichts等中所报告的，FcRn拮抗剂依加替莫德在pH 6.0和pH 7.4下对人FcRn的平衡解离常数(KD)分别为14.2nM和320nM。因此，在某些实施方案中，本文所述的变体Fc结构域或FcRn结合片段在pH 6.0以比KD 15nM更强的结合亲和力结合到人FcRn。备选地或另外，本文所述的变体Fc结构域或FcRn结合片段可在pH 7.4以比KD 320nM更强的结合亲和力结合到人FcRn。当在变体Fc区(即包括两个Fc结构域)的背景下测试变体Fc结构域或其FcRn结合片段时可确定变体Fc结构域或其FcRn结合片段的结合亲和力。
变体Fc结构域或FcRn结合片段相对于野生型Fc结构域包含一个或多个改变。在某些实施方案中，变体Fc结构域或FcRn结合片段相对于野生型Fc结构域包含至少一个氨基酸取代。在某些实施方案中，变体Fc结构域或FcRn结合片段可相对于野生型Fc结构域包含至少两个、至少三个、至少四个或至少五个氨基酸取代。
变体Fc结构域或其FcRn结合片段的改变的数量可能相对于对应的野生型Fc结构域或FcRn结合片段受到限制。例如，变体Fc结构域或FcRn结合片段中氨基酸取代的总数可能相对于对应的野生型Fc结构域或FcRn结合片段受到限制。在某些实施方案中，与对应的野生型Fc结构域相比，变体Fc结构域或其FcRn结合片段由不超过5个、不超过6个、不超过7个、不超过8个、不超过9个、不超过10个、不超过11个、不超过12个、不超过15个、不超过20个改变组成。改变可选自氨基酸取代、添加和/或缺失、附加部分的连接和/或天然聚糖的改变。在某些实施方案中，与对应的野生型Fc结构域相比，变体Fc结构域或其FcRn结合片段由不超过5个、不超过6个、不超过7个、不超过8个、不超过9个、不超过10个、不超过11个、不超过12个、不超过15个、不超过20个氨基酸取代组成。
在某些实施方案中，变体Fc结构域或其FcRn结合片段包含至少一个氨基酸取代、但总共不超过20个氨基酸取代，或由至少一个氨基酸取代、但总共不超过20个氨基酸取代组成。在某些实施方案中，变体Fc结构域或其FcRn结合片段包含至少两个氨基酸取代、但总共不超过20个氨基酸取代，或由至少两个氨基酸取代、但总共不超过20个氨基酸取代组成。在某些实施方案中，变体Fc结构域或其FcRn结合片段包含至少一个氨基酸取代、但总共不超过10个氨基酸取代，或由至少一个氨基酸取代、但总共不超过10个氨基酸取代组成。在某些实施方案中，变体Fc结构域或其FcRn结合片段包含至少两个氨基酸取代、但总共不超过10个氨基酸取代，或由至少两个氨基酸取代、但总共不超过10个氨基酸取代组成。在某些实施方案中，变体Fc结构域或其FcRn结合片段包含至少一个氨基酸取代、但总共不超过5个氨基酸取代，或由至少一个氨基酸取代、但总共不超过5个氨基酸取代组成。在某些实施方案中，变体Fc结构域或其FcRn结合片段包含至少两个氨基酸取代、但总共不超过5个氨基酸取代，或由至少两个氨基酸取代、但总共不超过5个氨基酸取代组成。
本文所述的抗IgE抗体的变体Fc结构域所来源的野生型Fc结构域可以是IgG Fc结构域。在此类实施方案中，变体Fc结构域是变体IgG Fc结构域。在优选实施方案中，变体Fc结构域是变体IgG1 Fc结构域，即变体Fc结构域相对于野生型IgG1结构域具有一个或多个改变。
由于本发明的抗IgE抗体可用于人患者中，因此变体Fc结构域或其FcRn结合片段将优选为人Fc结构域的变体形式，即变体Fc结构域或其FcRn结合片段将为变体人Fc结构域或其FcRn结合片段。由于变体Fc结构域的目的是与天然IgG抗体竞争与FcRn的结合，因此优选变体Fc结构域是人变体IgG结构域，例如选自IgG1、IgG2、IgG3或IgG4的人变体IgG结构域。在特别优选的实施方案中，变体Fc结构域是变体IgG1 Fc结构域或其FcRn结合片段。
本发明的抗IgE抗体的变体Fc结构域或FcRn结合片段可包含任何非天然氨基酸残基，条件是变体Fc结构域或FcRn结合片段对FcRn(优选人FcRn)展现出必需的增加的结合亲和力。如本文所用，术语“非天然氨基酸”意指在其位于变体Fc结构域或其FcRn结合片段的位置处不天然存在的氨基酸。
文献中已报道具有变体Fc结构域且展现对FcRn的增加结合亲和力的抗体。已报道，这些变体Fc结构域在Fc结构域内的特定位置处具有各种非天然氨基酸。本文所述的抗IgE抗体的变体Fc结构域和FcRn结合片段可包含文献中描述为能够增加Fc结构域对FcRn的结合亲和力的任何非天然氨基酸和/或氨基酸取代。本文所述的抗IgE抗体的变体Fc结构域和FcRn结合片段还可包含文献中描述为能够增加Fc结构域对FcRn的结合亲和力的非天然氨基酸和/或氨基酸取代的任何组合。可包含在本文所述变体Fc结构域或FcRn结合片段中的氨基酸取代的非限制性示例报道于Yeung等(工程改造的人IgG1对人新生儿Fc受体的亲和力：亲和力改善对灵长类动物药物代谢动力学的影响(Engineering Human IgG1Affinity to Human Neonatal Fc Receptor：Impact of Affinity Improvement onPharmacokinetics in Primates)).J.Immunol.(2009)182：7663-7671)以及国际专利申请WO2011/122011中，所述文献的全部内容以引用方式并入本文。
在某些实施方案中，本文所述的变体Fc结构域或FcRn结合片段包含选自以下的至少一种氨基酸：237M；238A；239K；248I；250A；250F；250I；250M；250Q；250S；250V；250W；250Y；252F；252W；252Y；254T；255E；256D；256E；256Q；257A；257G；257I；257L；257M；257N；257S；257T；257V；258H；265A；270F；286A；286E；289H；297A；298G；303A；305A；307A；307D；307F；307G；307H；307I；307K；307L；307M；307N；307P；307Q；307R；307S；307V；307W；307Y；308A；308F；308I；308L；308M；308P；308Q；308T；309A；309D；309E；309P；309R；311A；311H；311I；312A；312H；314K；314R；315A；315H；317A；325G；332V；334L；360H；376A；378V；380A；382A；384A；385D；385H；386P；387E；389A；389S；424A；428A；428D；428F；428G；428H；428I；428K；428L；428N；428P；428Q；428S；428T；428V；428W；428Y；433K；434A；434F；434H；434S；434W；434Y；436H；436I和436F，其中所述位置是根据EU编号来定义。EU编号是指在Edelman，G.M.等，Proc.Natl.Acad.Sci.USA，63：78-85(1969)和Kabat等，“具有免疫学重要性的蛋白质序列”，U.S.Dept.Health and Human Services，第5版，1991中所述的用于Fc区的惯例。本文所述的变体Fc结构域或FcRn结合片段可包含选自以下的2种、3种、4种或5种氨基酸：237M；238A；239K；248I；250A；250F；250I；250M；250Q；250S；250V；250W；250Y；252F；252W；252Y；254T；255E；256D；256E；256Q；257A；257G；257I；257L；257M；257N；257S；257T；257V；258H；265A；270F；286A；286E；289H；297A；298G；303A；305A；307A；307D；307F；307G；307H；307I；307K；307L；307M；307N；307P；307Q；307R；307S；307V；307W；307Y；308A；308F；308I；308L；308M；308P；308Q；308T；309A；309D；309E；309P；309R；311A；311H；311I；312A；312H；314K；314R；315A；315H；317A；325G；332V；334L；360H；376A；378V；380A；382A；384A；385D；385H；386P；387E；389A；389S；424A；428A；428D；428F；428G；428H；428I；428K；428L；428N；428P；428Q；428S；428T；428V；428W；428Y；433K；434A；434F；434H；434S；434W；434Y；436H；436I和436F，其中所述位置是根据EU编号来定义并且其中涵盖任何组合。
在某些实施方案中，本文所述的变体Fc结构域或FcRn结合片段包含选自以下的氨基酸的组合：
(i)分别在EU位置252、254、256、433、434和436处的Y、T、E、K、F和Y；
(ii)分别在EU位置250和428处的Q和L；
(iii)分别在EU位置308和434处的P和A；
(iv)分别在EU位置308和434处的P和Y；或
(v)分别在EU位置252、286和434处的Y、E和Y。
在某些实施方案中，本文所述的变体Fc结构域或FcRn结合片段包含选自以下的至少一个氨基酸取代：G237M；P238A；S239K；K248I；T250A；T250F；T250I；T250M；T250Q；T250S；T250V；T250W；T250Y；M252F；M252W；M252Y；S254T；R255E；T256D；T256E；T256Q；P257A；P257G；P257I；P257L；P257M；P257N；P257S；P257T；P257V；E258H；D265A；D270F；N286A；N286E；T289H；N297A；S298G；V303A；V305A；T307A；T307D；T307F；T307G；T307H；T307I；T307K；T307L；T307M；T307N；T307P；T307Q；T307R；T307S；T307V；T307W；T307Y；V308A；V308F；V308I；V308L；V308M；V308P；V308Q；V308T；V309A；V309D；V309E；V309P；V309R；Q311A；Q311H；Q311I；D312A；D312H；L314K；L314R；N315A；N315H；K317A；N325G；I332V；K334L；K360H；D376A；A378V；E380A；E382A；N384A；G385D；G385H；Q386P；P387E；N389A；N389S；S424A；M428A；M428D；M428F；M428G；M428H；M428I；M428K；M428L；M428N；M428P；M428Q；M428S；M428T；M428V；M428W；M428Y；H433K；N434A；N434F；N434H；N434S；N434W；N434Y；Y436H；Y436I和Y436F，其中所述位置是根据EU编号来定义。本文所述的变体Fc结构域或FcRn结合片段可包含选自以下的2个、3个、4个或5个氨基酸取代：G237M；P238A；S239K；K248I；T250A；T250F；T250I；T250M；T250Q；T250S；T250V；T250W；T250Y；M252F；M252W；M252Y；S254T；R255E；T256D；T256E；T256Q；P257A；P257G；P257I；P257L；P257M；P257N；P257S；P257T；P257V；E258H；D265A；D270F；N286A；N286E；T289H；N297A；S298G；V303A；V3U5A；T307A；T307D；T307F；T307G；T307H；T307I；T307K；T307L；T307M；T307N；T307P；T307Q；T307R；T307S；T307V；T307W；T307Y；V308A；V308F；V308I；V308L；V308M；V308P；V308Q；V308T；V309A；V309D；V309E；V309P；V309R；Q311A；Q311H；Q311I；D312A；D312H；L314K；L314R；N315A；N315H；K317A；N325G；I332V；K334L；K360H；D376A；A378V；E380A；E382A；N384A；G385D；G385H；Q386P；P387E；N389A；N389S；S424A；M428A；M428D；M428F；M428G；M428H；M428I；M428K；M428L；M428N；M428P；M428Q；M428S；M428T；M428V；M428W；M428Y；H433K；N434A；N434F；N434H；N434S；N434W；N434Y；Y436H；Y436I和Y436F，其中所述位置是根据EU编号来定义，并且其中涵盖取代的任何组合。
在某些实施方案中，本文所述的变体Fc结构域或FcRn结合片段包含选自以下的氨基酸取代的组合：
(i)M252Y、S254T、T256E、H433K和N434F；
(ii)T250Q及M428L；
(iii)V308P及N434A；
(iv)V308P和N434Y；或
(v)M252Y、N286E和N434Y。
在某些实施方案中，变体Fc结构域或FcRn结合片段不包含分别在EU位置252、308和434处的氨基酸Y、P和Y的组合。
在某些实施方案中，变体Fc结构域或FcRn结合片段不包含以下氨基酸取代的组合：M252Y、V308P和N434Y。
在某些实施方案中，本发明的抗IgE抗体包含由两个Fc结构域或其FcRn结合片段组成的变体Fc区，其中Fc结构域或FcRn结合片段中的至少一个是如本文所述的变体Fc结构域或FcRn结合片段。在某些实施方案中，变体Fc区的两个变体Fc结构域不同并且形成异型二聚体。对于异型二聚体实施方案，Fc结构域或其FcRn结合片段中的一个或两个可以是变体Fc结构域或其FcRn结合片段。在某些实施方案中，变体Fc区的两个变体Fc结构域同一并且形成同型二聚体。
(ii)含有ABDEGTM的变体Fc结构域和其FcRn结合片段
在优选实施方案中，本发明提供结合到IgE的抗体(即抗IgE抗体)，其中所述抗体包含至少一个含有ABDEGTM技术的变体Fc结构域。如Vaccaro等(Nat.Biotechnology(2005)23(10)：1283-8)中所报道的，ABDEGTM抗体(意指“增强IgG降解的抗体”)包含工程改造或变体Fc区。与野生型抗体的Fc区相比，该工程改造或变体Fc区可以更高的亲和力和降低的pH依赖性结合到新生儿Fc受体FcRn。
如上文所解释的，FcRn受体借助于补救受体途径在调节血浆中IgG浓度方面发挥重要作用。借助于以较高亲和力结合到FcRn，ABDEGTM抗体干扰内源性免疫球蛋白的再循环，因此可降低内源性免疫球蛋白(例如IgG自身抗体)的水平。ABDEGTM抗体和含有ABDEGTM技术的FcRn拮抗剂已被描述用于治疗抗体介导的疾病，诸如自身免疫疾病(参见WO2006/130834和WO2015/100299，其以引用方式并入本文)。
ABDEGTM抗体的Fc结构域氨基酸“标记(signature)”已得到充分表征。因此，在优选实施方案中，本发明提供结合到IgE的抗体，其中所述抗体包含变体Fc结构域或其FcRn结合片段，所述变体Fc结构域或其FcRn结合片段包含分别在EU位置252、254、256、433、434和436处的氨基酸Y、T、E、K、F和Y。该变体Fc结构域在本文中被称为变体ABDEGTM Fc结构域。
如上文所述，对ABDEGTM抗体的变体Fc结构域进行工程改造，以增加对Fc受体FcRn、特别是人FcRn的结合亲和力。变体ABDEGTM Fc结构域或其FcRn结合片段以相对于野生型Fc结构域增加的亲和力结合到FcRn。在此类实施方案中，野生型Fc结构域可以是变体Fc结构域所来源的野生型Fc结构域。例如，若变体ABDEGTM Fc结构域来源于人IgG1 Fc结构域，则变体Fc结构域以比人IgG1 Fc结构域更高的亲和力结合到FcRn。
在某些实施方案中，变体ABDEGTM Fc结构域或其FcRn结合片段以相对于野生型IgGFc结构域、优选野生型人IgG Fc结构域增加的亲和力结合到FcRn，优选人FcRn。在一个优选的实施方案中，变体ABDEGTM Fc结构域或其FcRn结合片段以相对于野生型人IgG1 Fc结构域或野生型人IgG3 Fc结构域增加的亲和力结合到FcRn，优选人FcRn。对于意在用于耗竭人IgG自身抗体的本发明抗IgE抗体，优选变体ABDEGTM Fc结构域或其FcRn结合片段(无论其来源如何)以相对于野生型人IgG1 Fc结构域增加的亲和力结合到人FcRn。
本文所述抗IgE抗体的变体ABDEGTM Fc结构域或其FcRn结合片段可以是来源于任何适合的野生型免疫球蛋白Fc结构域的变体Fc结构域或FcRn结合片段。在某些实施方案中，变体ABDEGTM Fc结构域或其FcRn结合片段是变体IgG Fc结构域或其FcRn结合片段。野生型IgG结构域可以是任何亚类的IgG，包括IgG1、IgG2、IgG3和IgG4。野生型IgG结构域优选人。
在优选实施方案中，变体ABDEGTM Fc结构域或其FcRn结合片段是变体IgG1 Fc结构域或其FcRn结合片段。在此类实施方案中，变体ABDEGTM Fc结构域具有野生型IgG1结构域的氨基酸序列，所述氨基酸序列包含本文所述的ABDEGTM氨基酸标记、特别是分别在EU位置252、254、256、433、434和436处的氨基酸Y、T、E、K、F和Y，或由本文所述的ABDEGTM氨基酸标记、特别是分别在EU位置252、254、256、433、434和436处的氨基酸Y、T、E、K、F和Y组成。野生型IgG1结构域优选人。
在某些实施方案中，与对应的野生型Fc结构域相比，变体ABDEGTM Fc结构域或其FcRn结合片段由不超过5个、不超过6个、不超过7个、不超过8个、不超过9个、不超过10个、不超过11个、不超过12个、不超过15个、不超过20个改变组成。改变可选自氨基酸取代、添加和/或缺失、附加部分的连接和/或天然聚糖的改变。在某些实施方案中，与对应的野生型Fc结构域相比，变体ABDEGTM Fc结构域或其FcRn结合片段由不超过5个、不超过6个、不超过7个、不超过8个、不超过9个、不超过10个、不超过11个、不超过12个、不超过15个、不超过20个氨基酸取代组成。
在某些实施方案中，变体ABDEGTM Fc结构域或其FcRn结合片段包含至少五个氨基酸取代、但总共不超过20个氨基酸取代，或由至少五个氨基酸取代、但总共不超过20个氨基酸取代组成。在某些实施方案中，变体ABDEGTM Fc结构域或其FcRn结合片段包含至少五个氨基酸取代、但总共不超过10个氨基酸取代，或由至少五个氨基酸取代、但总共不超过10个氨基酸取代组成。
在某些实施方案中，变体Fc结构域或FcRn结合片段与对应的野生型Fc结构域或FcRn结合片段同一，但分别在EU位置252、254、256、433、434和436处的氨基酸为Y、T、E、K、F和Y。
用于包含在本文所述抗IgE抗体中的变体Fc结构域的非限制性示例示于下表5中。在某些实施方案中，变体Fc结构域包含SEQ ID NO：1中所示的氨基酸序列，或由SEQ ID NO：1中所示的氨基酸序列组成。在某些实施方案中，变体Fc结构域包含SEQ ID NO：2中所示的氨基酸序列，或由SEQ ID NO：2中所示的氨基酸序列组成。在某些实施方案中，变体Fc结构域包含SEQ ID NO：3中所示的氨基酸序列，或由SEQ ID NO：3中所示的氨基酸序列组成。在某些实施方案中，变体Fc结构域连接到重链CH1结构域，并且重链恒定区包含SEQ ID NO：4中所示的氨基酸序列，或由SEQ ID NO：4中所示的氨基酸序列组成。
表5.变体Fc结构域和含有变体Fc结构域的重链恒定区的非限制性示例的氨基酸序列
Figure BDA0003368808670000351
Figure BDA0003368808670000361
Figure BDA0003368808670000371
对于变体Fc结构域除包含ABDEGTM突变外还包含一个或多个非天然存在的氨基酸残基的实施方案，变体Fc结构域或其FcRn结合片段可包含分别在EU位置234和235处的氨基酸A、A。
在某些实施方案中，变体Fc结构域包含SEQ ID NO：5中所示的氨基酸序列，或由SEQ ID NO：5中所示的氨基酸序列组成。在某些实施方案中，变体Fc结构域包含SEQ ID NO：6中所示的氨基酸序列，或由SEQ ID NO：6中所示的氨基酸序列组成。在某些实施方案中，变体Fc结构域包含SEQ ID NO：7中所示的氨基酸序列，或由SEQ ID NO：7中所示的氨基酸序列组成。在某些实施方案中，变体Fc结构域连接到重链CH1结构域，并且重链恒定区包含SEQID NO：8中所示的氨基酸序列，或由SEQ ID NO：8中所示的氨基酸序列组成。
如上文所述，在某些实施方案中，本发明的抗IgE抗体包含由两个Fc结构域或其FcRn结合片段组成的变体Fc区，其中Fc结构域或FcRn结合片段中的至少一个是如本文所述的变体Fc结构域或FcRn结合片段。在某些实施方案中，变体Fc区的两个变体Fc结构域或FcRn结合片段中的每一个均包含分别在EU位置252、254、256、433、434和436处的氨基酸Y、T、E、K、F和Y。在某些实施方案中，变体Fc区的两个变体Fc结构域不同并且形成异型二聚体。对于异型二聚体实施方案，Fc结构域或FcRn结合片段中的一个或两个可以是变体Fc结构域或FcRn结合片段。在备选实施方案中，变体Fc区的两个变体Fc结构域同一并且形成同型二聚体。在某些实施方案中，变体Fc区中的每个变体Fc结构域的氨基酸序列包含SEQID NO：1、2或3中所示的氨基酸序列，或由SEQ ID NO：1、2或3中所示的氨基酸序列组成。在某些实施方案中，变体Fc区中的每个变体Fc结构域的氨基酸序列包含SEQ ID NO：5、6或7中所示的氨基酸序列，或由SEQ ID NO：5、6或7中所示的氨基酸序列组成。
对于变体Fc结构域除包含ABDEGTM突变外还包含一个或多个非天然存在的氨基酸残基的实施方案，变体Fc结构域或其FcRn结合片段可包含一个或多个已报道增加FcRn结合并由此改善抗体药物代谢动力学的另外Fc取代。此类取代报道于例如以下文献中：ZalevskV等(2010)Nat.Biotechnol.28(2)：157-9；Hinton等(2006)J Immunol.176：346-356；Yeung等(2009)J Immunol.182：7663-7671；Presta LG.(2008)Curr.Op.Immunol.20：460-470；和Vaccaro等(2005)Nat.Biotechnol.23(10)：1283-88，这些文献的内容以引用方式整体并入本文。
对于变体Fc结构域除了包含ABDEGTM突变之外还包含一个或多个非天然存在的氨基酸残基的实施方案，变体Fc结构域或其FcRn结合片段可包含在一个或多个选自由234、235、236、239、240、241、243、244、245、247、262、263、264、265、266、267、269、296、297、298、299、313、325、326、327、328、329、330、332、333和334组成的组的位置处的非天然存在的氨基酸残基，所述位置如通过如Kabat中所述的EU索引所编号。任选地，变体Fc结构域可包含本领域技术人员已知的在另外和/或备选位置处的非天然存在的氨基酸残基(参见，例如，美国专利号5,624,821、6,277,375、6,737,056；PCT专利公开WO 01/58957、WO 02/06919、WO04/016750、WO 04/029207、WO 04/035752和WO 05/040217，其内容以引用方式整体并入本文)。
在某些实施方案中，变体Fc结构域或FcRn结合片段包含至少一个选自由以下组成的组的另外的非天然存在的氨基酸残基：234D、234E、234N、234Q、234T、234H、234Y、234I、234V、234F、235A、235D、235R、235W、235P、235S、235N、235Q、235T、235H、235Y、235I、235V、235F、236E、239D、239E、239N、239Q、239F、239T、239H、239Y、2401、240A、240T、240M、241W、241L、241Y、241E、241R、243W、243L 243Y、243R、243Q、244H、245A、247V、247G、262I、262A、262T、262E、263I、263A、263T、263M、264L、264I、264W、264T、264R、264F、264M、264Y、264E、265G、265N、265Q、265Y、265F、265V、265I、265L、265H、265T、266I、266A、266T、266M、267Q、267L、269H、269Y、269F、269R、296E、296Q、296D、296N、296S、296T、296L、296I、296H、269G、297S、297D、297E、298H、298I、298T、298F、299I、299L、299A、299S、299V、299H、299F、299E、313F、325Q、325L、325I、325D、325E、325A、325T、325V、325H、327G、327W、327N、327L、328S、328M、328D、328E、328N、328Q、328F、328I、328V、328T、328H、328A、329F、329H、329Q、330K、330G、330T、330C、330L、330Y、330V、330I、330F、330R、330H、332D、332S、332W、332F、332E、332N、332Q、332T、332H、332Y和332A，如通过如Kabat中所述的EU索引所编号。任选地，Fc结构域或其FcRn结合片段可包含本领域技术人员已知的另外和/或备选的非天然存在的氨基酸残基(参见，例如，美国专利号5,624,821、6,277,375、6,737,056；PCT专利公开WO 01/58957、WO 02/06919、WO 04/016750、WO 04/029207、WO 04/035752和WO 05/040217，其内容以引用方式整体并入本文)。
可并入变体Fc结构域或FcRn结合片段中的另外的Fc结构域改变还包括但不限于以下文献中所公开的那些：Ghetie等，1997，Nat.Biotech.15：637-40；Duncan等，1988，Nature 332：563-564；Lund等，1991，J.Immunol.，147：2657-2662；Lund等，1992，Mol.Immunol.，29：53-59；Alegre等，1994，Transplantation 57：1537-1543；Hutchins等，1995，Proc Natl.Acad Sci USA，92：11980-11984；Jefferis等，1995，ImmunolLett.，44：111-117；Lund等，1995，FasebJ.，9：115-119；Jefferis等，1996，Immunol Lett.，54：101-104；Lund等，1996，J.Immunol.，157：4963-4969；Armour等，1999，Eur J Immunol.29：2613-2624；Idusogie等，2000，J.Immunol.，164：4178-4184；Reddy等，2000，J.Immunol.，164：1925-1933；Xu等，2000，Cell Immunol.，200：16-26；Idusogie等，2001，J.Immunol.，166：2571-2575；Shields等，2001，J Biol.Chem.，276：6591-6604；Jefferis等，2002，ImmunolLett.，82：57-65；Presta等，2002，Biochem Soc Trans.，30：487-490)；美国专利号5,624,821、5,885,573、5,677,425、6,165,745、6,277,375；5,869,046、6,121,022、5,624,821；5,648,260、6,528,624、6,194,551、6,737,056；6,821,505、6,277,375；美国专利公开号2004/0002587；以及PCT公开WO 94/29351、WO 99/58572、WO 00/42072、WO 02/060919、WO 04/029207、WO 04/099249、WO 04/063351.这些文献的内容以引用方式整体并入本文。
如本文所述，并入本发明的抗IgE抗体中的变体Fc结构域或其FcRn结合片段可有助于从体内清除致病性IgG自身抗体。该作用是通过如由变体Fc结构域或其FcRn结合片段所实现的抗IgE抗体与FcRn受体的高亲和力结合来介导的。相信，在自身免疫疾病中观察到的致病性IgG抗体是这些疾病的致病诱因，或促成疾病进展并通过细胞Fc受体的不适当活化介导疾病。聚集的自身抗体和/或与自身抗原复合的自身抗体(免疫复合物)结合到活化的Fc受体，引起多种自身免疫疾病(其发生的部分原因是针对自身组织的免疫介导的炎症)(参见例如Clarkson等，NEJM 314(9)，1236-1239(2013))；US20040010124A1；US20040047862A1；和US2004/0265321A1，其以引用方式整体并入本文)。
因此，为了治疗抗体介导的病症(例如自身免疫疾病)，将有利的是，同时去除有害的自身抗体，并阻断这些抗体的免疫复合物与活化的Fc受体(例如，Fcγ受体，诸如CD16a)的相互作用。因此，在某些实施方案中，抗IgE抗体的变体Fc结构域或变体Fc区展现出与CD16a(例如，人CD16a)的增加结合。这是特别有利的，因为它允许抗IgE抗体另外拮抗被FcRn抑制靶向去除的自身抗体的免疫复合物诱导的炎性应答。可采用任何本领域公认的增加对CD16a(例如，人CD16a)的亲和力的手段。在某些实施方案中，抗IgE抗体包含含有N-连接聚糖(例如，在EU位置297处)的变体Fc结构域或变体Fc区。在这种情况下，通过改变聚糖结构，有可能增加抗IgE抗体对CD16a的结合亲和力。Fc区的N-连接聚糖的改变是本领域众所周知的。例如，已证明非岩藻糖基化的N-连接聚糖或具有等分GlcNac结构的N-聚糖展现出增加的对CD16a的亲和力。因此，在某些实施方案中，N-连接聚糖是非岩藻糖基化的。可使用任何本领域公认的手段来实现非岩藻糖基化。例如，抗IgE抗体可在缺乏岩藻糖基转移酶的细胞中表达，使得岩藻糖不被添加到变体Fc结构域或变体Fc区在EU位置297处的N-连接聚糖上(参见例如US 8,067,232，其内容以引用方式整体并入本文)。在某些实施方案中，N-连接聚糖具有等分GlcNac结构。可用任何本领域公认的手段来实现等分GlcNac结构。例如，抗IgE抗体可在表达β1-4-N-乙酰葡糖胺基转移酶III(GnTIII)的细胞中表达，使得将等分GlcNac添加到变体Fc结构域或变体Fc区在EU位置297处的N-连接聚糖上(参见例如US8021856，其内容以引用方式整体并入本文)。另外或备选地，还可通过体外酶促手段实现N-连接聚糖结构的改变。
为了增强本文所公开的本发明IgE抗体的可制造性，优选变体Fc结构域或变体Fc区不包含任何非二硫键结的半胱氨酸残基。因此，在某些实施方案中，变体Fc结构域或变体Fc区不包含游离半胱氨酸残基。
在某些实施方案中，变体Fc结构域或变体Fc区对另外的Fc受体具有改变(例如，增加或降低)的结合亲和力。变体Fc结构域或变体Fc区可具有改变的(例如，增加或降低的)对一种或多种Fcγ受体的结合亲和力，所述Fcγ受体例如FcγRI(CD64)、FcγRIIA(CD32)、FcγRIIB(CD32)、FcγRIIIA(CD16a)和FcγRIIIB(CD16b)。可采用任何本领域公认的改变对另外的Fc受体的亲和力的手段。
(iii)结合IgE的抗体
本发明的抗IgE抗体可采用对IgE展示免疫反应性的任何适合抗体的形式，条件是该抗体包含至少一个如上文所述的变体Fc结构域或FcRn结合片段。在这方面，术语“抗体”应被广义地解释，以涵盖二价四聚体抗体，包括其人源化和种系化变体，以及具有非天然免疫球蛋白结构的修饰抗体。
除了上述变体Fc结构域或其FcRn结合片段之外，本发明的抗IgE抗体还可包含任何抗原结合片段或区域。在某些实施方案中，所述抗原结合片段或区域包含VH-VL结构域配对、scFv片段、Fab、Fab’、F(ab′)2，或由VH-VL结构域配对、scFv片段、Fab、Fab’、F(ab′)2组成。在某些实施方案中，抗IgE抗体是具有如本文所定义的变体Fc区或FcRn结合片段的二价IgG。在某些实施方案中，抗IgE抗体是具有如本文所定义的变体Fc结构域或FcRn结合片段的单价IgG。单价抗IgE抗体可能是有利的，因为它们可能不具有交联FcεRI受体的能力。
本文所述抗体意在用于人治疗用途，因此通常将为IgA型、IgD型、IgE型、IgG型、IgM型，经常为IgG型，在这种情况下，它们可属于四个亚类(IgG1、IgG2a和IgG2b、IgG3或IgG4)中的任何一个。在优选实施方案中，本发明的抗IgE抗体是IgG抗体，任选地是IgG1抗体。抗体可以是单克隆的、多克隆的、多特异性的(例如双特异性抗体)抗体，条件是它们对其靶标展现出适当的免疫特异性。单克隆抗体是优选的，因为它们是高度特异性的，针对单个抗原位点。
本文所述的抗IgE抗体可展现出高的人同源性。具有高的人同源性的此类抗体分子可包括包含天然非人抗体的VH和VL结构域的抗体，所述天然非人抗体对人种系序列展现出足够高的序列同一性％。在某些实施方案中，抗体分子是非人抗体的人源化或种系化变体。
本文所述的抗IgE抗体优选抑制IgE与其受体(FcεRI)的结合。在某些实施方案中，抗IgE抗体抑制IgE与FcεRI和FcεRII两者的结合。抗IgE抗体可结合到定位于IgE重链的CH3结构域内的表位。本文所述的抗IgE抗体优选不结合到已与FcεRI缔合的IgE，即膜定位的IgE。在优选实施方案中，本发明的抗IgE抗体不是过敏性的。
(iv)pH依赖性抗体
本文所述的任何抗IgE抗体均可展现出pH依赖性抗原结合，即与IgE的pH依赖性结合。
具有结合的抗原的抗体被吸收到细胞中，并被转运到胞内体-溶酶体降解途径。能够在早期胞内体中从其抗原解离的抗体可再循环回到细胞表面。在胞内体隔室中以高亲和力结合到其抗原的抗体通常被转运到溶酶体进行降解。先前已经表明，如果抗体具有pH依赖性抗原结合活性，使得与血浆pH相比，其在早期胞内体pH下对其抗原具有更低的结合亲和力，则抗体将更有效地再循环到细胞表面。这可以延长抗体的血浆半衰期，并允许同一抗体结合到多个抗原。为此，本文所述的抗IgE抗体展现出pH依赖性抗原结合是有利的。根据本发明的pH依赖性抗IgE抗体具有通过结合到循环中的血清IgE自身抗体并内化IgE自身抗体而消除这些IgE自身抗体的潜力。IgE自身抗体可在酸性胞内体隔室中释放，并转运到溶酶体进行降解。本发明的游离抗IgE抗体可再循环到细胞表面，使得它们可结合和内化另外的IgE自身抗体。
本发明的抗IgE抗体可具有固有的pH依赖性抗原结合活性，即它们可能已被选择用于该性质。备选地或另外，本文所述的抗IgE抗体可经工程改造以展现pH依赖性靶标结合。在抗体分子中工程改造pH依赖性抗原结合活性的方法描述于例如EP2275443(其以引用方式并入本文)中。在抗体分子中工程改造pH依赖性抗原结合的方法还描述于WO2018/206748(其以引用方式并入本文)中。本文所述的抗体可通过任何技术进行修饰，以实现pH依赖性结合。例如，可根据EP2275443或WO2018/206748中所述的方法修饰抗体，使其展现出pH依赖性抗原结合。
对于本文所述抗IgE抗体的pH依赖性实施方案，在胞内体pH下的抗原结合活性与在血浆pH下的抗原结合活性相比更低。胞内体pH通常为酸性pH，而血浆pH通常为中性pH。因此，本文所述的抗体可展现出pH依赖性抗原结合，使得它们在酸性pH下的抗原结合活性与在中性pH下的抗原结合活性相比更低。胞内体pH或“酸性pH”可以是约pH 4.0到约pH 6.5、优选约pH 5.5到约pH 6.5、优选约pH 5.5到约pH 6.0、优选pH 5.5、pH 5.6、pH 5.7或pH5.8的pH。血浆pH或“中性pH”可以是约pH 6.9到约pH 8.0、优选约pH 7.0到约pH 8.0、优选约pH 7.0到约pH 7.4、优选pH 7.0或pH 7.4的pH。
在某些实施方案中，抗IgE抗体展现出pH依赖性结合，使得pH 5.8下的抗原结合活性与pH 7.4下的抗原结合活性相比更低。pH依赖性抗IgE抗体的特征可在于，抗体-抗原相互作用在酸性pH或pH 5.8下的解离常数(KD)高于抗体-抗原相互作用在中性pH或pH 7.4下的解离常数(KD)。在某些实施方案中，抗IgE抗体展现出pH依赖性结合，使得抗原在pH 5.8下的KD与抗原在pH 7.4下的KD之比(KD(pH 5.8)/KD(pH 7.4))为2或更大、4或更大、6或更大、8或更大、10或更大、12或更大。
抗体分子的pH依赖性抗原结合活性可通过修饰抗体分子进行工程改造，以削弱在酸性pH下的抗原结合能力和/或增加在中性pH下的抗原结合能力。例如，可通过用组氨酸取代抗体分子的至少一个氨基酸，或者通过将至少一个组氨酸插入到抗体分子中来修饰抗体分子。此类组氨酸突变(取代或插入)位点没有特别限制，并且任何位点都是可接受的，只要与突变或插入之前相比，在胞内体pH(例如pH 5.8)下的抗原结合活性低于在血浆pH(例如pH 7.4)下的抗原结合活性即可。
在某些实施方案中，抗IgE抗体可通过将一个或多个取代引入可变结构域中而进行工程改造，以展现出pH依赖性抗原结合。在优选实施方案中，抗IgE抗体通过将一个或多个取代引入抗体的一个或多个CDR中而进行工程改造，以展现出pH依赖性抗原结合。取代可将一个或多个His残基引入可变结构域、优选重链和/或轻链CDR的一个或多个位点中，以赋予pH依赖性抗原结合。
对于抗体包含三个重链CDR序列和三个轻链CDR序列的本发明的实施方案，组合的六个CDR可由总共1-10个His取代、任选地1-5个His取代、任选地1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个His取代组成。抗IgE抗体可根据WO2018/206748(其以引用方式并入本文)中所述的方法进行工程改造。还可将非组氨酸取代并入本文所述pH依赖性抗体的可变结构域、特别是CDR中。
在优选实施方案中，对具有本文所述特定CDR、VH和/或VL结构域序列的示例性抗IgE抗体进行工程改造，使得它们展现出pH依赖性抗原结合。例如，本文所述的示例性抗IgE抗体的CDR序列可通过引入一个或多个组氨酸取代进行修饰，以产生展现出pH依赖性抗原结合的抗体。
(v)骆驼科动物来源的抗IgE抗体
本发明的抗IgE抗体可以是骆驼科动物来源的。骆驼科动物来源的抗体可以是仅重链抗体，即VHH抗体，或者可以是常规的异四聚体抗体。在优选实施方案中，本发明的抗IgE抗体来源于骆驼科动物异四聚体抗体。
例如，抗体分子可选自通过包括用IgE、优选人IgE对骆驼科动物进行免疫的步骤的方法获得的免疫文库。可用IgE蛋白质或其多肽片段、或者用表达所述蛋白质或其多肽片段的mRNA分子或cDNA分子对骆驼科动物进行免疫。用于在骆驼科动物物种中产生抗体以及从骆驼科动物免疫文库中选择针对优选靶标的抗体的方法描述于例如国际专利申请WO2010/001251中，该国际专利申请以引用方式并入本文。
在某些实施方案中，抗体分子可以是骆驼科动物来源的，因为它们包含至少一个从骆驼科(Camelidae)中的物种的VH结构域或VL结构域获得的超变环或互补决定区。特别是，抗体分子可包含通过用IgE对远交系骆驼科动物(例如美洲驼)进行主动免疫而获得的VH和/或VL结构域或其CDR。
术语“从......获得”在本上下文中在以下意义上暗指结构关系：抗体分子的HV或CDR体现最初由骆驼科免疫球蛋白基因编码的氨基酸序列(或其微小变体)。然而，就用于制备抗体分子的生产方法来说，这并不一定暗指特定的关系。
骆驼科动物来源的抗体分子可来源于任何骆驼科动物物种，尤其包括美洲驼、单峰驼、羊驼、骆马、原驼可或骆驼。
包含骆驼科动物来源的VH和VL结构域或其CDR的抗体分子通常是重组表达的多肽，并且可以是嵌合多肽。术语“嵌合多肽”是指通过两个或更多个原本并不连续存在的肽片段并置而产生的人工(非天然存在的)多肽。该定义内包括通过由两个或更多个物种(例如骆驼科动物和人)编码的肽片段并置而产生的“物种”嵌合多肽。
在某些实施方案中，可从骆驼科中的物种获得整个VH结构域和/或整个VL结构域。然后可对骆驼科动物来源的VH结构域和/或骆驼科动物来源的VL结构域进行蛋白质工程改造，其中将一个或多个氨基酸取代、插入或缺失引入骆驼科动物氨基酸序列中。这些工程改造的变化优选包括相对于骆驼科动物序列的氨基酸取代。此类改变包括“人源化”或“种系化”，其中骆驼科动物编码的VH或VL结构域中的一个或多个氨基酸残基被来自同源的人编码的VH或VL结构域的等同残基替代。
通过骆驼科动物(例如美洲驼)的主动免疫获得的分离的骆驼科动物VH和VL结构域可用作用于根据本发明对抗体分子进行工程改造的基础。从完整的骆驼科动物VH和VL结构域开始，有可能设计一个或多个脱离起始骆驼科动物序列的氨基酸取代、插入或缺失。在某些实施方案中，此类取代、插入或缺失可存在于VH结构域和/或VL结构域的框架区中。
在其他实施方案中，提供了“嵌合”抗体分子，其包含骆驼科动物来源的VH和VL结构域(或其工程改造变体)和来自非骆驼科动物抗体的一个或多个恒定结构域，例如人编码的恒定结构域(或其工程改造变体)。在此类实施方案中，优选VH结构域和VL结构域两者均从骆驼科动物的相同物种获得，例如VH和VL两者均可来自大羊驼(Lama glama)，或VH和VL两者均可来自羊驼(Lama pacos)(在引入工程改造的氨基酸序列变异之前)。在此类实施方案中，VH和VL结构域两者均可来源于单个动物，特别是已用目的抗原进行主动免疫的单个动物。
作为对骆驼科VH和/或VL结构域的一级氨基酸序列的变化进行工程改造的备选方案，可从骆驼科动物VH/VL结构域中分离出单个骆驼科动物来源的超变环或CDR或其组合，并通过CDR移植将其转移到备选(即非骆驼科)框架，例如人VH/VL框架。
在非限制性实施方案中，本发明的抗IgE抗体分子可包含氨基酸序列完全或基本上是人的CH1结构域和/或CL结构域(分别来自重链和轻链)。对于意在用于人治疗用途的抗体分子，抗体的整个恒定区或其至少一部分通常具有完全或基本上为人的氨基酸序列。如本文所述，本发明的抗IgE抗体的变体Fc结构域和/或变体Fc区可以是变体人Fc结构域和/或变体人Fc区。骆驼科动物来源的IgE抗体的CDR或抗原结合结构域(包括其人源化和种系化变体)可与如上文部分(i)和(ii)中所述的任何变体人Fc结构域或变体人Fc区组合。
CH1结构域、铰链区、CH2结构域、CH3结构域和CL结构域(以及CH4结构域，如果存在的话)中的一个或多个或任一组合就其氨基酸序列来说，可完全或基本上是人的。CH1结构域、铰链区、CH2结构域、CH3结构域和/或CL结构域(和/或CH4结构域，如果存在的话)可来源于人抗体，优选人IgG抗体，更优选亚型IgG1、IgG2、IgG3或IgG4的人IgG1抗体。如本文所述，本发明的抗IgE抗体的变体Fc结构域和变体Fc区可以是变体人IgG Fc结构域或变体人IgGFc区，例如变体人IgG1、IgG2、IgG3或IgG4 Fc结构域或Fc区。骆驼科动物来源的IgE抗体的CDR或抗原结合结构域(包括其人源化和种系化变体)可与如上文部分(i)和(ii)中所述的任何变体人Fc IgG结构域或变体人IgG Fc区组合。
有利地，CH1结构域、铰链区、CH2结构域、CH3结构域和CL结构域(以及CH4结构域，如果存在的话)均可具有基本上为人的氨基酸序列。在人源化或嵌合抗体或抗体片段的恒定区的背景下，术语“基本上为人”是指与人恒定区具有至少90％、或至少92％、或至少95％、或至少97％、或至少99％的氨基酸序列同一性。术语“人氨基酸序列”在本上下文中是指由人免疫球蛋白基因(其包括种系基因、重排基因和体细胞突变的基因)编码的氨基酸序列。
(vi)示例性骆驼科动物来源的抗IgE抗体
在某些实施方案中，本发明的抗IgE抗体选自包含选自以下的可变重链CDR3(HCDR3)、可变重链CDR2(HCDR2)和可变重链CDR1(HCDR1)、可变轻链CDR3(LCDR3)、可变轻链CDR2(LCDR2)和可变轻链CDR1(LCDR1)的组合的抗体：
(i)HCDR3，其包含SEQ ID NO：11；HCDR2，其包含SEQ ID NO：10；HCDR1，其包含SEQID NO：9；LCDR3，其包含SEQ ID NO：56；LCDR2，其包含SEQ ID NO：55；和LCDR1，其包含SEQID NO：54；
(ii)HCDR3，其包含SEQ ID NO：14；HCDR2，其包含SEQ ID NO：13；HCDR1，其包含SEQID NO：12；LCDR3，其包含SEQ ID NO：58；LCDR2，其包含SEQ ID NO：55；和LCDRl，其包含SEQID NO：57；
(iii)HCDR3，其包含SEQ ID NO：17；HCDR2，其包含SEQ ID NO：16；HCDR1，其包含SEQ ID NO：15；LCDR3，其包含SEQ ID NO：61；LCDR2，其包含SEQ ID NO：60；和LCDR1，其包含SEQ ID NO：59；
(iv)HCDR3，其包含SEQ ID NO：19；HCDR2，其包含SEQ ID NO：18；HCDR1，其包含SEQID NO：12；LCDR3，其包含SEQ ID NO：61；LCDR2，其包含SEQ ID NO：60；和LCDR1，其包含SEQID NO：59；
(v)HCDR3，其包含SEQ ID NO：22；HCDR2，其包含SEQ ID NO：21；HCDR1，其包含SEQID NO：20；LCDR3，其包含SEQ ID NO：63；LCDR2，其包含SEQ ID NO：55；和LCDR1，其包含SEQID NO：62；
(vi)HCDR3，其包含SEQ ID NO：24；HCDR2，其包含SEQ ID NO：23；HCDR1，其包含SEQID NO：20；LCDR3，其包含SEQ ID NO：66；LCDR2，其包含SEQ ID NO：65；和LCDR1，其包含SEQID NO：64；
(vii)HCDR3，其包含SEQ ID NO：27；HCDR2，其包含SEQ ID NO：26；HCDR1，其包含SEQ ID NO：25；LCDR3，其包含SEQ ID NO：66；LCDR2，其包含SEQ ID NO：67；和LCDR1，其包含SEQ ID NO：54；
(viii)HCDR3，其包含SEQ ID NO：22；HCDR2，其包含SEQ ID NO：21；HCDR1，其包含SEQ ID NO：20；LCDR3，其包含SEQ ID NO：56；LCDR2，其包含SEQ ID NO：69；和LCDRl，其包含SEQ ID NO：68；
(ix)HCDR3，其包含SEQ ID NO：30；HCDR2，其包含SEQ ID NO：29；HCDR1，其包含SEQID NO：28；LCDR3，其包含SEQ ID NO：72；LCDR2，其包含SEQ ID NO：71；和LCDR1，其包含SEQID NO：70；
(x)HCDR3，其包含SEQ ID NO：33；HCDR2，其包含SEQ ID NO：32；HCDR1，其包含SEQID NO：31；LCDR3，其包含SEQ ID NO：56；LCDR2，其包含SEQ ID NO：55；和LCDR1，其包含SEQID NO：54；
(xi)HCDR3，其包含SEQ ID NO：22；HCDR2，其包含SEQ ID NO：23；HCDR1，其包含SEQID NO：34；LCDR3，其包含SEQ ID NO：63；LCDR2，其包含SEQ ID NO：55；和LCDR1，其包含SEQID NO：62；
(xii)HCDR3，其包含SEQ ID NO：37；HCDR2，其包含SEQ ID NO：36；HCDR1，其包含SEQ ID NO：35；LCDR3，其包含SEQ ID NO：75；LCDR2，其包含SEQ ID NO：74；和LCDR1，其包含SEQ ID NO：73；
(xiii)HCDR3，其包含SEQ ID NO：38；HCDR2，其包含SEQ ID NO：21；HCDR1，其包含SEQ ID NO：20；LCDR3，其包含SEQ ID NO：63；LCDR2，其包含SEQ ID NO：55；和LCDR1，其包含SEQ ID NO：62；
(xiv)HCDR3，其包含SEQ ID NO：40；HCDR2，其包含SEQ ID NO：39；HCDR1，其包含SEQ ID NO：12；LCDR3，其包含SEQ ID NO：78；LCDR2，其包含SEQ ID NO：77；和LCDR1，其包含SEQ ID NO：76；
(xv)HCDR3，其包含SEQ ID NO：43；HCDR2，其包含SEQ ID NO：42；HCDR1，其包含SEQID NO：41；LCDR3，其包含SEQ ID NO：81；LCDR2，其包含SEQ ID NO：80；和LCDR1，其包含SEQID NO：79；
(xvi)HCDR3，其包含SEQ ID NO：14；HCDR2，其包含SEQ ID NO：13；HCDR1，其包含SEQ ID NO：12；LCDR3，其包含SEQ ID NO：56；LCDR2，其包含SEQ ID NO：55；和LCDR1，其包含SEQ ID NO：82；
(xvii)HCDR3，其包含SEQ ID NO：45；HCDR2，其包含SEQ ID NO：44；HCDR1，其包含SEQ ID NO：12；LCDR3，其包含SEQ ID NO：66；LCDR2，其包含SEQ ID NO：55；和LCDR1，其包含SEQ ID NO：54；
(xviii)HCDR3，其包含SEQ ID NO：48；HCDR2，其包含SEQ ID NO：47；HCDR1，其包含SEQ ID NO：46；LCDR3，其包含SEQ ID NO：85；LCDR2，其包含SEQ ID NO：84；和LCDRl，其包含SEQ ID NO：83；
(xix)HCDR3，其包含SEQ ID NO：50；HCDR2，其包含SEQ ID NO：49；HCDR1，其包含SEQ ID NO：12；LCDR3，其包含SEQ ID NO：88；LCDR2，其包含SEQ ID NO：87；和LCDR1，其包含SEQ ID NO：86；以及
(xx)HCDR3，其包含SEQ ID NO：53；HCDR2，其包含SEQ ID NO：52；HCDR1，其包含SEQID NO：51；LCDR3，其包含SEQ ID NO：91；LCDR2，其包含SEQ ID NO：90；和LCDR1，其包含SEQID NO：89。
在某些实施方案中，本发明的抗IgE抗体选自包含选自以下的可变重链CDR3(HCDR3)、可变重链CDR2(HCDR2)和可变重链CDR1(HCDR1)、可变轻链CDR3(LCDR3)、可变轻链CDR2(LCDR2)和可变轻链CDR1(LCDR1)的组合的抗体：
(i)HCDR3，其包含SEQ ID NO：22；HCDR2，其包含SEQ ID NO：21；HCDR1，其包含SEQID NO：132；LCDR3，其包含SEQ ID NO：56；LCDR2，其包含SEQ ID NO：69；和LCDR1，其包含SEQID NO：68；
(ii)HCDR3，其包含SEQ ID NO：22；HCDR2，其包含SEQ ID NO：21；HCDR1，其包含SEQID NO：20；LCDR3，其包含SEQ ID NO：56；LCDR2，其包含SEQ ID NO：69；和LCDR1，其包含SEQID NO：135；
(iii)HCDR3，其包含SEQ ID NO：22；HCDR2，其包含SEQ ID NO：21；HCDR1，其包含SEQ ID NO：132；LCDR3，其包含SEQ ID NO：56；LCDR2，其包含SEQ ID NO：69；和LCDR1，其包含SEQ ID NO：135；
(iv)HCDR3，其包含SEQ ID NO：24；HCDR2，其包含SEQ ID NO：23；HCDR1，其包含SEQID NO：133；LCDR3，其包含SEQ ID NO：66；LCDR2，其包含SEQ ID NO：65；和LCDR1，其包含SEQID NO：64；
(v)HCDR3，其包含SEQ ID NO：24；HCDR2，其包含SEQ ID NO：23；HCDR1，其包含SEQID NO：20；LCDR3，其包含SEQ ID NO：66；LCDR2，其包含SEQ ID NO：65；和LCDR1，其包含SEQID NO：64；
(vi)HCDR3，其包含SEQ ID NO：19；HCDR2，其包含SEQ ID NO：18；HCDR1，其包含SEQID NO：134；LCDR3，其包含SEQ ID NO：61；LCDR2，其包含SEQ ID NO：60；和LCDR1，其包含SEQID NO：59；以及
(vii)HCDR3，其包含SEQ ID NO：19；HCDR2，其包含SEQ ID NO：18；HCDR1，其包含SEQ ID NO：12；LCDR3，其包含SEQ ID NO：136；LCDR2，其包含SEQ ID NO：60；和LCDR1，其包含SEQ ID NO：59。
在优选实施方案中，本发明的抗IgE抗体包含：
-可变重链CDR3，其包含SEQ ID NO：22[[GTSYSGSYYYTDPFFGS]，或由SEQ ID NO：22[[GTSYSGSYYYTDPFFGS]组成；
-可变重链CDR2，其包含SEQ ID NO：21[SIYHDGSHTYYADFVKG]，或由SEQ ID NO：21[SIYHDGSHTYYADFVKG]组成；
-可变重链CDR1，其包含SEQ ID NO：132[SYVMH]，或由SEQ ID NO：132[SYVMH]组成；
-可变轻链CDR3，其包含SEQ ID NO：56[QSADSSGNPV]，或由SEQ ID NO：56[QSADSSGNPV]组成；
-可变轻链CDR2，其包含SEQ ID NO：69[DDDRRPS]，或由SEQ ID NO：69[DDDRRPS]组成；以及
-可变轻链CDR1，其包含SEQ ID NO：135[QGDRLGSRYIH]，或由SEQ ID NO：135[QGDRLGSRYIH]组成。
在优选实施方案中，本发明的抗IgE抗体包含：
可变重链CDR3，其包含SEQ ID NO：22[GTSYSGSYYYTDPFFGS]；
可变重链CDR2，其包含SEQ ID NO：21[SIYHDGSHTYYADFVKG]；
可变重链CDR1，其包含SEQ ID NO：20[SYVMS]；
可变轻链CDR3，其包含SEQ ID NO：56[QSADSSGNPV]；
可变轻链CDR2，其包含SEQ ID NO：69[DDDRRPS]；以及
可变轻链CDR1，其包含SEQ ID NO：135[QGDRLGSRYIH]。
在某些实施方案中，抗IgE抗体选自包含选自以下的可变重链结构域(VH)和可变轻链结构域(VL)的抗体：
(i)VH结构域，其包含SEQ ID NO：92的氨基酸序列或与该氨基酸序列具有至少80％、90％、95％、98％、99％同一性的氨基酸序列，或由SEQ ID NO：92的氨基酸序列或与该氨基酸序列具有至少80％、90％、95％、98％、99％同一性的氨基酸序列组成，和VL结构域，其包含SEQ ID NO：93的氨基酸序列或与该氨基酸序列具有至少80％、90％、95％、98％、99％同一性的氨基酸序列，或由SEQ ID NO：93的氨基酸序列或与该氨基酸序列具有至少80％、90％、95％、98％、99％同一性的氨基酸序列组成；
(ii)VH结构域，其包含SEQ ID NO：94的氨基酸序列或与该氨基酸序列具有至少80％、90％、95％、98％、99％同一性的氨基酸序列，或由SEQ ID NO：94的氨基酸序列或与该氨基酸序列具有至少80％、90％、95％、98％、99％同一性的氨基酸序列组成，和VL结构域，其包含SEQ ID NO：95的氨基酸序列或与该氨基酸序列具有至少80％、90％、95％、98％、99％同一性的氨基酸序列，或由SEQ ID NO：95的氨基酸序列或与该氨基酸序列具有至少80％、90％、95％、98％、99％同一性的氨基酸序列组成；
(iii)VH结构域，其包含SEQ ID NO：96的氨基酸序列或与该氨基酸序列具有至少80％、90％、95％、98％、99％同一性的氨基酸序列，或由SEQ ID NO：96的氨基酸序列或与该氨基酸序列具有至少80％、90％、95％、98％、99％同一性的氨基酸序列组成，和VL结构域，其包含SEQ ID NO：97的氨基酸序列或与该氨基酸序列具有至少80％、90％、95％、98％、99％同一性的氨基酸序列，或由SEQ ID NO：97的氨基酸序列或与该氨基酸序列具有至少80％、90％、95％、98％、99％同一性的氨基酸序列组成；
(iv)VH结构域，其包含SEQ ID NO：98的氨基酸序列或与该氨基酸序列具有至少80％、90％、95％、98％、99％同一性的氨基酸序列，或由SEQ ID NO：98的氨基酸序列或与该氨基酸序列具有至少80％、90％、95％、98％、99％同一性的氨基酸序列组成，和VL结构域，其包含SEQ ID NO：99的氨基酸序列或与该氨基酸序列具有至少80％、90％、95％、98％、99％同一性的氨基酸序列，或由SEQ ID NO：99的氨基酸序列或与该氨基酸序列具有至少80％、90％、95％、98％、99％同一性的氨基酸序列组成；
(v)VH结构域，其包含SEQ ID NO：100的氨基酸序列或与该氨基酸序列具有至少80％、90％、95％、98％、99％同一性的氨基酸序列，或由SEQID NO：100的氨基酸序列或与该氨基酸序列具有至少80％、90％、95％、98％、99％同一性的氨基酸序列组成，和VL结构域，其包含SEQ ID NO：101的氨基酸序列或与该氨基酸序列具有至少80％、90％、95％、98％、99％同一性的氨基酸序列，或由SEQ ID NO：101的氨基酸序列或与该氨基酸序列具有至少80％、90％、95％、98％、99％同一性的氨基酸序列组成；
(vi)VH结构域，其包含SEQ ID NO：102的氨基酸序列或与该氨基酸序列具有至少80％、90％、95％、98％、99％同一性的氨基酸序列，或由SEQ ID NO：102的氨基酸序列或与该氨基酸序列具有至少80％、90％、95％、98％、99％同一性的氨基酸序列组成，和VL结构域，其包含SEQ ID NO：103的氨基酸序列或与该氨基酸序列具有至少80％、90％、95％、98％、99％同一性的氨基酸序列，或由SEQ ID NO：103的氨基酸序列或与该氨基酸序列具有至少80％、90％、95％、98％、99％同一性的氨基酸序列组成；
(vii)VH结构域，其包含SEQ ID NO：104的氨基酸序列或与该氨基酸序列具有至少80％、90％、95％、98％、99％同一性的氨基酸序列，或由SEQ ID NO：104的氨基酸序列或与该氨基酸序列具有至少80％、90％、95％、98％、99％同一性的氨基酸序列组成，和VL结构域，其包含SEQ ID NO：105的氨基酸序列或与该氨基酸序列具有至少80％、90％、95％、98％、99％同一性的氨基酸序列，或由SEQ ID NO：105的氨基酸序列或与该氨基酸序列具有至少80％、90％、95％、98％、99％同一性的氨基酸序列组成；
(viii)VH结构域，其包含SEQ ID NO：106的氨基酸序列或与该氨基酸序列具有至少80％、90％、95％、98％、99％同一性的氨基酸序列，或由SEQID NO：106的氨基酸序列或与该氨基酸序列具有至少80％、90％、95％、98％、99％同一性的氨基酸序列组成，和VL结构域，其包含SEQ ID NO：107的氨基酸序列或与该氨基酸序列具有至少80％、90％、95％、98％、99％同一性的氨基酸序列，或由SEQ ID NO：107的氨基酸序列或与该氨基酸序列具有至少80％、90％、95％、98％、99％同一性的氨基酸序列组成；
(ix)VH结构域，其包含SEQ ID NO：108的氨基酸序列或与该氨基酸序列具有至少80％、90％、95％、98％、99％同一性的氨基酸序列，或由SEQID NO：108的氨基酸序列或与该氨基酸序列具有至少80％、90％、95％、98％、99％同一性的氨基酸序列组成，和VL结构域，其包含SEQ ID NO：109的氨基酸序列或与该氨基酸序列具有至少80％、90％、95％、98％、99％同一性的氨基酸序列，或由SEQ ID NO：109的氨基酸序列或与该氨基酸序列具有至少80％、90％、95％、98％、99％同一性的氨基酸序列组成；
(x)VH结构域，其包含SEQ ID NO：110的氨基酸序列或与该氨基酸序列具有至少80％、90％、95％、98％、99％同一性的氨基酸序列，或由SEQ ID NO：110的氨基酸序列或与该氨基酸序列具有至少80％、90％、95％、98％、99％同一性的氨基酸序列组成，和VL结构域，其包含SEQ ID NO：111的氨基酸序列或与该氨基酸序列具有至少80％、90％、95％、98％、99％同一性的氨基酸序列，或由SEQ ID NO：111的氨基酸序列或与该氨基酸序列具有至少80％、90％、95％、98％、99％同一性的氨基酸序列组成；
(xi)VH结构域，其包含SEQ ID NO：112的氨基酸序列或与该氨基酸序列具有至少80％、90％、95％、98％、99％同一性的氨基酸序列，或由SEQ ID NO：112的氨基酸序列或与该氨基酸序列具有至少80％、90％、95％、98％、99％同一性的氨基酸序列组成，和VL结构域，其包含SEQ ID NO：113的氨基酸序列或与该氨基酸序列具有至少80％、90％、95％、98％、99％同一性的氨基酸序列，或由SEQ ID NO：113的氨基酸序列或与该氨基酸序列具有至少80％、90％、95％、98％、99％同一性的氨基酸序列组成；
(xii)VH结构域，其包含SEQ ID NO：114的氨基酸序列或与该氨基酸序列具有至少80％、90％、95％、98％、99％同一性的氨基酸序列，或由SEQ ID NO：114的氨基酸序列或与该氨基酸序列具有至少80％、90％、95％、98％、99％同一性的氨基酸序列组成，和VL结构域，其包含SEQ ID NO：115的氨基酸序列或与该氨基酸序列具有至少80％、90％、95％、98％、99％同一性的氨基酸序列，或由SEQ ID NO：115的氨基酸序列或与该氨基酸序列具有至少80％、90％、95％、98％、99％同一性的氨基酸序列组成；
(xiii)VH结构域，其包含SEQ ID NO：116的氨基酸序列或与该氨基酸序列具有至少80％、90％、95％、98％、99％同一性的氨基酸序列，或由SEQ ID NO：116的氨基酸序列或与该氨基酸序列具有至少80％、90％、95％、98％、99％同一性的氨基酸序列组成，和VL结构域，其包含SEQ ID NO：117的氨基酸序列或与该氨基酸序列具有至少80％、90％、95％、98％、99％同一性的氨基酸序列，或由SEQ ID NO：117的氨基酸序列或与该氨基酸序列具有至少80％、90％、95％、98％、99％同一性的氨基酸序列组成；
(xiv)VH结构域，其包含SEQ ID NO：118的氨基酸序列或与该氨基酸序列具有至少80％、90％、95％、98％、99％同一性的氨基酸序列，或由SEQ ID NO：118的氨基酸序列或与该氨基酸序列具有至少80％、90％、95％、98％、99％同一性的氨基酸序列组成，和VL结构域，其包含SEQ ID NO：119的氨基酸序列或与该氨基酸序列具有至少80％、90％、95％、98％、99％同一性的氨基酸序列，或由SEQ ID NO：119的氨基酸序列或与该氨基酸序列具有至少80％、90％、95％、98％、99％同一性的氨基酸序列组成；
(xv)VH结构域，其包含SEQ ID NO：120的氨基酸序列或与该氨基酸序列具有至少80％、90％、95％、98％、99％同一性的氨基酸序列，或由SEQ ID NO：120的氨基酸序列或与该氨基酸序列具有至少80％、90％、95％、98％、99％同一性的氨基酸序列组成，和VL结构域，其包含SEQ ID NO：121的氨基酸序列或与该氨基酸序列具有至少80％、90％、95％、98％、99％同一性的氨基酸序列，或由SEQ ID NO：121的氨基酸序列或与该氨基酸序列具有至少80％、90％、95％、98％、99％同一性的氨基酸序列组成；
(xvi)VH结构域，其包含SEQ ID NO：122的氨基酸序列或与该氨基酸序列具有至少80％、90％、95％、98％、99％同一性的氨基酸序列，或由SEQ ID NO：122的氨基酸序列或与该氨基酸序列具有至少80％、90％、95％、98％、99％同一性的氨基酸序列组成，和VL结构域，其包含SEQ ID NO：123的氨基酸序列或与该氨基酸序列具有至少80％、90％、95％、98％、99％同一性的氨基酸序列，或由SEQ ID NO：123的氨基酸序列或与该氨基酸序列具有至少80％、90％、95％、98％、99％同一性的氨基酸序列组成；
(xvii)VH结构域，其包含SEQ ID NO：124的氨基酸序列或与该氨基酸序列具有至少80％、90％、95％、98％、99％同一性的氨基酸序列，或由SEQ ID NO：124的氨基酸序列或与该氨基酸序列具有至少80％、90％、95％、98％、99％同一性的氨基酸序列组成，和VL结构域，其包含SEQ ID NO：125的氨基酸序列或与该氨基酸序列具有至少80％、90％、95％、98％、99％同一性的氨基酸序列，或由SEQ ID NO：125的氨基酸序列或与该氨基酸序列具有至少80％、90％、95％、98％、99％同一性的氨基酸序列组成；
(xviii)VH结构域，其包含SEQ ID NO：126的氨基酸序列或与该氨基酸序列具有至少80％、90％、95％、98％、99％同一性的氨基酸序列，或由SEQID NO：126的氨基酸序列或与该氨基酸序列具有至少80％、90％、95％、98％、99％同一性的氨基酸序列组成，和VL结构域，其包含SEQ ID NO：127的氨基酸序列或与该氨基酸序列具有至少80％、90％、95％、98％、99％同一性的氨基酸序列，或由SEQ ID NO：127的氨基酸序列或与该氨基酸序列具有至少80％、90％、95％、98％、99％同一性的氨基酸序列组成；
(xix)VH结构域，其包含SEQ ID NO：128的氨基酸序列或与该氨基酸序列具有至少80％、90％、95％、98％、99％同一性的氨基酸序列，或由SEQID NO：128的氨基酸序列或与该氨基酸序列具有至少80％、90％、95％、98％、99％同一性的氨基酸序列组成，和VL结构域，其包含SEQ ID NO：129的氨基酸序列或与该氨基酸序列具有至少80％、90％、95％、98％、99％同一性的氨基酸序列，或由SEQ ID NO：129的氨基酸序列或与该氨基酸序列具有至少80％、90％、95％、98％、99％同一性的氨基酸序列组成；以及
(xx)VH结构域，其包含SEQ ID NO：130的氨基酸序列或与该氨基酸序列具有至少80％、90％、95％、98％、99％同一性的氨基酸序列，或由SEQ ID NO：130的氨基酸序列或与该氨基酸序列具有至少80％、90％、95％、98％、99％同一性的氨基酸序列组成，和VL结构域，其包含SEQ ID NO：131的氨基酸序列或与该氨基酸序列具有至少80％、90％、95％、98％、99％同一性的氨基酸序列，或由SEQ ID NO：131的氨基酸序列或与该氨基酸序列具有至少80％、90％、95％、98％、99％同一性的氨基酸序列组成。
在某些实施方案中，抗IgE抗体选自包含选自以下的可变重链结构域(VH)和可变轻链结构域(VL)的抗体：
(i)VH结构域，其包含SEQ ID NO：137的氨基酸序列或与该氨基酸序列具有至少80％、90％、95％、98％、99％同一性的氨基酸序列，或由SEQID NO：137的氨基酸序列或与该氨基酸序列具有至少80％、90％、95％、98％、99％同一性的氨基酸序列组成，和VL结构域，其包含SEQ ID NO：107的氨基酸序列或与该氨基酸序列具有至少80％、90％、95％、98％、99％同一性的氨基酸序列，或由SEQ ID NO：107的氨基酸序列或与该氨基酸序列具有至少80％、90％、95％、98％、99％同一性的氨基酸序列组成；
(ii)VH结构域，其包含SEQ ID NO：106的氨基酸序列或与该氨基酸序列具有至少80％、90％、95％、98％、99％同一性的氨基酸序列，或由SEQ ID NO：106的氨基酸序列或与该氨基酸序列具有至少80％、90％、95％、98％、99％同一性的氨基酸序列组成，和VL结构域，其包含SEQ ID NO：138的氨基酸序列或与该氨基酸序列具有至少80％、90％、95％、98％、99％同一性的氨基酸序列，或由SEQ ID NO：138的氨基酸序列或与该氨基酸序列具有至少80％、90％、95％、98％、99％同一性的氨基酸序列组成；
(iii)VH结构域，其包含SEQ ID NO：137的氨基酸序列或与该氨基酸序列具有至少80％、90％、95％、98％、99％同一性的氨基酸序列，或由SEQ ID NO：137的氨基酸序列或与该氨基酸序列具有至少80％、90％、95％、98％、99％同一性的氨基酸序列组成，和VL结构域，其包含SEQ ID NO：138的氨基酸序列或与该氨基酸序列具有至少80％、90％、95％、98％、99％同一性的氨基酸序列，或由SEQ ID NO：138的氨基酸序列或与该氨基酸序列具有至少80％、90％、95％、98％、99％同一性的氨基酸序列组成；
(iv)VH结构域，其包含SEQ ID NO：139的氨基酸序列或与该氨基酸序列具有至少80％、90％、95％、98％、99％同一性的氨基酸序列，或由SEQ ID NO：139的氨基酸序列或与该氨基酸序列具有至少80％、90％、95％、98％、99％同一性的氨基酸序列组成，和VL结构域，其包含SEQ ID NO：103的氨基酸序列或与该氨基酸序列具有至少80％、90％、95％、98％、99％同一性的氨基酸序列，或由SEQ ID NO：103的氨基酸序列或与该氨基酸序列具有至少80％、90％、95％、98％、99％同一性的氨基酸序列组成；
(v)VH结构域，其包含SEQ ID NO：102的氨基酸序列或与该氨基酸序列具有至少80％、90％、95％、98％、99％同一性的氨基酸序列，或由SEQ ID NO：102的氨基酸序列或与该氨基酸序列具有至少80％、90％、95％、98％、99％同一性的氨基酸序列组成，和VL结构域，其包含SEQ ID NO：140的氨基酸序列或与该氨基酸序列具有至少80％、90％、95％、98％、99％同一性的氨基酸序列，或由SEQ ID NO：140的氨基酸序列或与该氨基酸序列具有至少80％、90％、95％、98％、99％同一性的氨基酸序列组成；
(vi)VH结构域，其包含SEQ ID NO：139的氨基酸序列或与该氨基酸序列具有至少80％、90％、95％、98％、99％同一性的氨基酸序列，或由SEQ ID NO：139的氨基酸序列或与该氨基酸序列具有至少80％、90％、95％、98％、99％同一性的氨基酸序列组成，和VL结构域，其包含SEQ ID NO：140的氨基酸序列或与该氨基酸序列具有至少80％、90％、95％、98％、99％同一性的氨基酸序列，或由SEQ ID NO：140的氨基酸序列或与该氨基酸序列具有至少80％、90％、95％、98％、99％同一性的氨基酸序列组成；
(vii)VH结构域，其包含SEQ ID NO：141的氨基酸序列或与该氨基酸序列具有至少80％、90％、95％、98％、99％同一性的氨基酸序列，或由SEQ ID NO：141的氨基酸序列或与该氨基酸序列具有至少80％、90％、95％、98％、99％同一性的氨基酸序列组成，和VL结构域，其包含SEQ ID NO：99的氨基酸序列或与该氨基酸序列具有至少80％、90％、95％、98％、99％同一性的氨基酸序列，或由SEQ ID NO：99的氨基酸序列或与该氨基酸序列具有至少80％、90％、95％、98％、99％同一性的氨基酸序列组成；以及
(viii)VH结构域，其包含SEQ ID NO：98的氨基酸序列或与该氨基酸序列具有至少80％、90％、95％、98％、99％同一性的氨基酸序列，或由SEQ ID NO：98的氨基酸序列或与该氨基酸序列具有至少80％、90％、95％、98％、99％同一性的氨基酸序列组成，和VL结构域，其包含SEQ ID NO：142的氨基酸序列或与该氨基酸序列具有至少80％、90％、95％、98％、99％同一性的氨基酸序列，或由SEQ ID NO：142的氨基酸序列或与该氨基酸序列具有至少80％、90％、95％、98％、99％同一性的氨基酸序列组成。
在优选实施方案中，抗IgE抗体包含以下或由以下组成：可变重链结构域(VH)，其包含SEQ ID NO：137的氨基酸序列或与该氨基酸序列具有至少80％、90％、95％、98％、99％同一性的氨基酸序列，或由SEQ ID NO：137的氨基酸序列或与该氨基酸序列具有至少80％、90％、95％、98％、99％同一性的氨基酸序列组成，和可变轻链结构域(VL)，其包含SEQ IDNO：138的氨基酸序列或与该氨基酸序列具有至少80％、90％、95％、98％、99％同一性的氨基酸序列，或由SEQ ID NO：138的氨基酸序列或与该氨基酸序列具有至少80％、90％、95％、98％、99％同一性的氨基酸序列组成。
在优选实施方案中，抗IgE抗体包含以下或由以下组成：可变重链结构域(VH)，其包含SEQ ID NO：173的氨基酸序列或与该氨基酸序列具有至少80％、90％、95％、98％、99％同一性的氨基酸序列，或由SEQ ID NO：173的氨基酸序列或与该氨基酸序列具有至少80％、90％、95％、98％、99％同一性的氨基酸序列组成，和可变轻链结构域(VL)，其包含SEQ IDNO：174的氨基酸序列或与该氨基酸序列具有至少80％、90％、95％、98％、99％同一性的氨基酸序列，或由SEQ ID NO：174的氨基酸序列或与该氨基酸序列具有至少80％、90％、95％、98％、99％同一性的氨基酸序列组成。
在优选实施方案中，抗IgE抗体包含以下或由以下组成：可变重链结构域(VH)，其包含SEQ ID NO：173的氨基酸序列，或由SEQ ID NO：173的氨基酸序列组成；和可变轻链结构域(VL)，其包含SEQ ID NO：174的氨基酸序列，或由SEQ ID NO：174的氨基酸序列组成。
在优选实施方案中，抗IgE抗体包含以下或由以下组成：可变重链结构域(VH)，其包含SEQ ID NO：106的氨基酸序列或与该氨基酸序列具有至少80％、90％、95％、98％、99％同一性的氨基酸序列，或由SEQ ID NO：106的氨基酸序列或与该氨基酸序列具有至少80％、90％、95％、98％、99％同一性的氨基酸序列组成，和可变轻链结构域(VL)，其包含SEQ IDNO：138的氨基酸序列或与该氨基酸序列具有至少80％、90％、95％、98％、99％同一性的氨基酸序列，或由SEQ ID NO：138的氨基酸序列或与该氨基酸序列具有至少80％、90％、95％、98％、99％同一性的氨基酸序列组成。
在优选实施方案中，抗IgE抗体包含以下或由以下组成：可变重链结构域(VH)，其包含SEQ ID NO：215的氨基酸序列或与该氨基酸序列具有至少80％、90％、95％、98％、99％同一性的氨基酸序列，或由SEQ ID NO：215的氨基酸序列或与该氨基酸序列具有至少80％、90％、95％、98％、99％同一性的氨基酸序列组成，和可变轻链结构域(VL)，其包含SEQ IDNO：174的氨基酸序列或与该氨基酸序列具有至少80％、90％、95％、98％、99％同一性的氨基酸序列，或由SEQ ID NO：174的氨基酸序列或与该氨基酸序列具有至少80％、90％、95％、98％、99％同一性的氨基酸序列组成。
在优选实施方案中，抗IgE抗体包含以下或由以下组成：可变重链结构域(VH)，其包含SEQ ID NO：215的氨基酸序列或与该氨基酸序列具有至少80％、90％、95％、98％、99％同一性的氨基酸序列，或由SEQ ID NO：215的氨基酸序列或与该氨基酸序列具有至少80％、90％、95％、98％、99％同一性的氨基酸序列组成，和可变轻链结构域(VL)，其包含SEQ IDNO：174的氨基酸序列，或由SEQ ID NO：174的氨基酸序列组成。
对于抗体或抗原结合片段的结构域由与参考序列的特定百分比序列同一性定义的实施方案，VH和/或VL结构域可保留与参考序列中存在的那些CDR序列同一的CDR序列，使得所述变异仅存在于框架区域内。
具有上文所述任何特异性CDR、VH和/或VL结构域的示例性骆驼科动物来源的抗IgE抗体可包含根据上文部分(i)和(ii)中所述的实施方案的任何变体Fc结构域或其FcRn结合片段。具有上文所述任何特异性CDR、VH和/或VL结构域的示例性骆驼科动物来源的抗IgE抗体可包含根据上文部分(i)和(ii)中所述的实施方案的任何变体Fc区或其FcRn结合片段。
在某些实施方案中，本文所述的示例性骆驼科动物来源的抗IgE抗体包含变体IgGFc结构域或其FcRn结合片段，优选变体IgG1结构域或其FcRn结合片段。在某些实施方案中，本文所述的示例性骆驼科动物来源的抗IgE抗体包含变体人IgG Fc结构域或其FcRn结合片段，优选变体人IgG1Fc结构域或其FcRn结合片段。
在某些实施方案中，本文所述的示例性骆驼科动物来源的抗IgE抗体包含变体人IgG Fc结构域或其FcRn结合片段，所述变体Fc结构域或其FcRn结合片段包含分别在EU位置252、254、256、433、434和436处的氨基酸Y、T、E、K、F和Y。在某些实施方案中，本文所述的示例性骆驼科动物来源的抗IgE抗体包含变体人IgG1 Fc结构域或其FcRn结合片段，所述变体人IgG1 Fc结构域或其FcRn结合片段包含分别在EU位置252、254、256、433、434和436处的氨基酸Y、T、E、K、F和Y。在某些实施方案中，本文所述的示例性骆驼来源的抗IgE抗体包含变体人IgG Fc区，所述变体人IgG Fc区包含两个同一的变体人IgG Fc结构域，或由两个同一的变体人IgG Fc结构域组成，其中每个变体Fc结构域包含分别在EU位置252、254、256、433、434和436处的氨基酸Y、T、E、K、F和Y。在某些实施方案中，本文所述的示例性骆驼来源的抗IgE抗体包含变体人IgG1Fc区，所述变体人IgG1 Fc区包含两个同一的变体人IgG1 Fc结构域，或由两个同一的变体人IgG1 Fc结构域组成，其中每个变体Fc结构域包含分别在EU位置252、254、256、433、434和436处的氨基酸Y、T、E、K、F和Y。
在某些实施方案中，本文所述的示例性骆驼科动物来源的抗IgE抗体包含变体Fc结构域，所述变体Fc结构域包含SEQ ID NO：1、2或3中任一个中所示的氨基酸序列，或由SEQID NO：1、2或3中任一个中所示的氨基酸序列组成。在某些实施方案中，本文所述的示例性骆驼科动物来源的抗IgE抗体包含由两个变体Fc结构域组成的变体Fc区，其中每个变体Fc结构域包含SEQ ID NO：1、2或3中任一个中所示的氨基酸序列，或由SEQ ID NO：1、2或3中任一个中所示的氨基酸序列组成。在某些实施方案中，本文所述的示例性骆驼科动物来源的抗IgE抗体包含变体Fc结构域，所述变体Fc结构域包含SEQ ID NO：5、6或7中任一个中所示的氨基酸序列，或由SEQ ID NO：5、6或7中任一个中所示的氨基酸序列组成。在某些实施方案中，本文所述的示例性骆驼科动物来源的抗IgE抗体包含由两个变体Fc结构域组成的变体Fc区，其中每个变体Fc结构域包含SEQ ID NO：5、6或7中任一个中所示的氨基酸序列，或由SEQ ID NO：5、6或7中任一个中所示的氨基酸序列组成。在某些实施方案中，本文所述的示例性骆驼科动物来源的抗IgE抗体包含重链恒定区，所述重链恒定区包含SEQ ID NO：4中所示的氨基酸序列，或由SEQ ID NO：4中所示的氨基酸序列组成。在某些实施方案中，本文所述的示例性骆驼科动物来源的抗IgE抗体包含重链恒定区，所述重链恒定区包含SEQ IDNO：8中所示的氨基酸序列，或由SEQ ID NO：8中所示的氨基酸序列组成。
本文所述的示例性骆驼来源的抗IgE抗体可展现出pH依赖性抗原结合。在某些实施方案中，抗IgE抗体可通过将一个或多个取代引入可变结构域中而进行工程改造，以展现出pH依赖性抗原结合。在优选实施方案中，抗IgE抗体通过将一个或多个取代引入抗体的一个或多个CDR中而进行工程改造，以展现出pH依赖性抗原结合。取代可将一个或多个His残基引入可变结构域、优选重链和/或轻链CDR的一个或多个位点中，以赋予pH依赖性抗原结合。组合的六个重链和轻链CDR可由总共1-10个His取代、任选地1-5个His取代、任选地1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个His取代组成。抗IgE抗体可根据WO2018/206748中所述的方法进行工程改造。还可将非组氨酸取代并入本文所述pH依赖性抗体的可变结构域、特别是CDR中。
(vii)示例性抗IgE抗体
如本文别处所述，结合到IgE的抗体是本领域已知的。本发明的抗IgE抗体可包含已知对IgE、优选人IgE展现出结合特异性的任何抗IgE抗体的CDR、VH和/或VL结构域氨基酸序列。
已知结合IgE的示例性抗体包括但不限于奥马佐单抗和利格珠单抗。本发明的抗IgE抗体可包含来源于奥马佐单抗或利格珠单抗的CDR、VH和/或VL氨基酸序列。
因此，在某些实施方案中，抗IgE抗体选自包含选自以下的可变重链CDR3(HCDR3)、可变重链CDR2(HCDR2)和可变重链CDR1(HCDR1)、可变轻链CDR3(LCDR3)、可变轻链CDR2(LCDR2)和可变轻链CDR1(LCDR1)的组合的抗体：
(i)HCDR3，其包含SEQ ID NO：145；HCDR2，其包含SEQ ID NO：144；HCDR1，其包含SEQ ID NO：143；LCDR3，其包含SEQ ID NO：149；LCDR2，其包含SEQ ID NO：148；和LCDR1，其包含SEQ ID NO：147；以及
(ii)HCDR3，其包含SEQ ID NO：153；HCDR2，其包含SEQ ID NO：152；HCDR1，其包含SEQ ID NO：151；LCDR3，其包含SEQ ID NO：157；LCDR2，其包含SEQ ID NO：156；和LCDR1，其包含SEQ ID NO：155；
在某些实施方案中，抗IgE抗体选自包含选自以下的可变重链结构域(VH)和可变轻链结构域(VL)的抗体：
(i)VH结构域，其包含SEQ ID NO：146的氨基酸序列或与该氨基酸序列具有至少80％、90％、95％、98％、99％同一性的氨基酸序列，或由SEQ ID NO：146的氨基酸序列或与该氨基酸序列具有至少80％、90％、95％、98％、99％同一性的氨基酸序列组成，和VL结构域，其包含SEQ ID NO：150的氨基酸序列或与该氨基酸序列具有至少80％、90％、95％、98％、99％同一性的氨基酸序列，或由SEQ ID NO：150的氨基酸序列或与该氨基酸序列具有至少80％、90％、95％、98％、99％同一性的氨基酸序列组成；以及
(ii)VH结构域，其包含SEQ ID NO：154的氨基酸序列或与该氨基酸序列具有至少80％、90％、95％、98％、99％同一性的氨基酸序列，或由SEQ ID NO：154的氨基酸序列或与该氨基酸序列具有至少80％、90％、95％、98％、99％同一性的氨基酸序列组成，和VL结构域，其包含SEQ ID NO：158的氨基酸序列或与该氨基酸序列具有至少80％、90％、95％、98％、99％同一性的氨基酸序列，或由SEQ ID NO：158的氨基酸序列或与该氨基酸序列具有至少80％、90％、95％、98％、99％同一性的氨基酸序列组成。
对于抗体或抗原结合片段的结构域由与参考序列的特定百分比序列同一性定义的实施方案，VH和/或VL结构域可保留与参考序列中存在的那些CDR序列同一的CDR序列，使得所述变异仅存在于框架区域内。
在某些实施方案中，抗IgE抗体包含可变重链结构域(VH)，所述VH包含SEQ ID NO：146的氨基酸序列，或由SEQ ID NO：146的氨基酸序列组成；和VL结构域，其包含SEQ ID NO：150的氨基酸序列，或由SEQ ID NO：150的氨基酸序列组成。
在某些实施方案中，抗IgE抗体包含可变重链结构域(VH)，所述VH包含SEQ ID NO：154的氨基酸序列，或由SEQ ID NO：154的氨基酸序列组成；和VL结构域，其包含SEQ ID NO：158的氨基酸序列，或由SEQ ID NO：158的氨基酸序列组成。
具有上述CDR、VH和/或VL氨基酸序列的抗IgE抗体可进行工程改造，以具有pH依赖性，如上文部分(iii)中所述。本文所述的示例性抗IgE抗体可通过将一个或多个取代引入可变结构域中而进行工程改造，以展现出pH依赖性抗原结合。在优选实施方案中，抗IgE抗体通过将一个或多个取代引入抗体的一个或多个CDR中而进行工程改造，以展现出pH依赖性抗原结合。取代可将一个或多个His残基引入可变结构域、优选重链和/或轻链CDR的一个或多个位点中，以赋予pH依赖性抗原结合。组合的六个重链和轻链CDR可由总共1-10个His取代、任选地1-5个His取代、任选地1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个His取代组成。抗IgE抗体可根据WO2018/206748中所述的方法进行工程改造。还可将非组氨酸取代并入本文所述pH依赖性抗体的可变结构域、特别是CDR中。
下面参考具体的CDR、VH和/或VL序列描述根据本发明的示例性pH依赖性抗IgE抗体。
在某些实施方案中，本发明的pH依赖性抗IgE抗体包含：
可变重链CDR3，其包含SEQ ID NO：197[ATHYFGHWHFAV]，或由SEQ ID NO：197[ATHYFGHWHFAV]组成；
可变重链CDR2，其包含SEQ ID NO：198[SIHYDHSTNYNPSVKG]，或由SEQ ID NO：198[SIHYDHSTNYNPSVKG]组成；
可变重链CDR1，其包含SEQ ID NO：195[SGHRWE]，或由SEQ ID NO：195[SGHRWE]组成；
可变轻链CDR3，其包含SEQ ID NO：201[QQNAEDPYT]，或由SEQ ID NO：201[QQNAEDPYT]组成；
可变轻链CDR2，其包含SEQ ID NO：200[WGSYLRS]，或由SEQ ID NO：200[WGSYLRS]组成；以及
可变轻链CDR1，其包含SEQ ID NO：203[RASQSVDYDGDHYMN]，或由SEQ ID NO：203[RASQSVDYDGDHYMN]组成。
在某些实施方案中，本发明的pH依赖性抗IgE抗体包含：
可变重链CDR3，其包含SEQ ID NO：199[ATHYFGHHHFAV]，或由SEQ ID NO：199[ATHYFGHHHFAV]组成；
可变重链CDR2，其包含SEQ ID NO：196[SIHYDGSTNYNPSVKG]，或由SEQ ID NO：196[SIHYDGSTNYNPSVKG]组成；
可变重链CDR1，其包含SEQ ID NO：195[SGHRWE]，或由SEQ ID NO：195[SGHRWE]组成；
可变轻链CDR3，其包含SEQ ID NO：201[QQNAEDPYT]，或由SEQ ID NO：201[QQNAEDPYT]组成；
可变轻链CDR2，其包含SEQ ID NO：200[WGSYLRS]，或由SEQ ID NO：200[WGSYLRS]组成；以及
可变轻链CDR1，其包含SEQ ID NO：147[RASQSVDYDGDSYMN]，或由SEQ ID NO：147[RASQSVDYDGDSYMN]组成。
在某些实施方案中，本发明的pH依赖性抗IgE抗体包含：
可变重链CDR3，其包含SEQ ID NO：180[FSHFSGSNHDYFDY]，或由SEQ ID NO：180[FSHFSGSNHDYFDY]组成；
可变重链CDR2，其包含SEQ ID NO：152[EIDPGTFTTNYNEKFKA]，或由SEQ ID NO：152[EIDPGTFTTNYNEKfKA]组成；
可变重链CDR1，其包含SEQ ID NO：179[WYHLE]，或由SEQ ID NO：179[WYHLE]组成；
可变轻链CDR3，其包含SEQ ID NO：157[QQSWSWPTT]，或由SEQID NO：157[QQSWSWPTT]组成；
可变轻链CDR2，其包含SEQ ID NO：156[YASESIS]，或由SEQ ID NO：156[YASESIS]组成；以及
可变轻链CDR1，其包含SEQ ID NO：155[RASQSIGTNIH]，或由SEQID NO：155[RASQSIGTNIH]组成。
在某些实施方案中，抗IgE抗体包含以下或由以下组成：可变重链结构域(VH)，其包含SEQ ID NO：206的氨基酸序列或与该氨基酸序列具有至少80％、90％、95％、98％、99％同一性的氨基酸序列，或由SEQ ID NO：206的氨基酸序列或与该氨基酸序列具有至少80％、90％、95％、98％、99％同一性的氨基酸序列组成，和可变轻链结构域(VL)，其包含SEQ IDNO：211的氨基酸序列或与该氨基酸序列具有至少80％、90％、95％、98％、99％同一性的氨基酸序列，或由SEQ ID NO：211的氨基酸序列或与该氨基酸序列具有至少80％、90％、95％、98％、99％同一性的氨基酸序列组成。
在优选实施方案中，抗IgE抗体包含以下或由以下组成：可变重链结构域(VH)，其包含SEQ ID NO：206的氨基酸序列，或由SEQ ID NO：206的氨基酸序列组成；和可变轻链结构域(VL)，其包含SEQ ID NO：211的氨基酸序列，或由SEQ ID NO：211的氨基酸序列组成。
在某些实施方案中，抗IgE抗体包含以下或由以下组成：可变重链结构域(VH)，其包含SEQ ID NO：207的氨基酸序列或与该氨基酸序列具有至少80％、90％、95％、98％、99％同一性的氨基酸序列，或由SEQ ID NO：207的氨基酸序列或与该氨基酸序列具有至少80％、90％、95％、98％、99％同一性的氨基酸序列组成，和可变轻链结构域(VL)，其包含SEQ IDNO：209的氨基酸序列或与该氨基酸序列具有至少80％、90％、95％、98％、99％同一性的氨基酸序列，或由SEQ ID NO：209的氨基酸序列或与该氨基酸序列具有至少80％、90％、95％、98％、99％同一性的氨基酸序列组成。
在优选实施方案中，抗IgE抗体包含以下或由以下组成：可变重链结构域(VH)，其包含SEQ ID NO：207的氨基酸序列，或由SEQ ID NO：207的氨基酸序列组成；和可变轻链结构域(VL)，其包含SEQ ID NO：209的氨基酸序列，或由SEQ ID NO：209的氨基酸序列组成。
在某些实施方案中，抗IgE抗体包含以下或由以下组成：可变重链结构域(VH)，其包含SEQ ID NO：186的氨基酸序列或与该氨基酸序列具有至少80％、90％、95％、98％、99％同一性的氨基酸序列，或由SEQ ID NO：186的氨基酸序列或与该氨基酸序列具有至少80％、90％、95％、98％、99％同一性的氨基酸序列组成，和可变轻链结构域(VL)，其包含SEQ IDNO：158的氨基酸序列或与该氨基酸序列具有至少80％、90％、95％、98％、99％同一性的氨基酸序列，或由SEQ ID NO：158的氨基酸序列或与该氨基酸序列具有至少80％、90％、95％、98％、99％同一性的氨基酸序列组成。
在优选实施方案中，抗IgE抗体包含以下或由以下组成：可变重链结构域(VH)，其包含SEQ ID NO：186的氨基酸序列，或由SEQ ID NO：186的氨基酸序列组成；和可变轻链结构域(VL)，其包含SEQ ID NO：158的氨基酸序列，或由SEQ ID NO：158的氨基酸序列组成。
具有上文所述任何具体CDR、VH和/或VL结构域的示例性抗IgE抗体可包含根据上文部分(i)和(ii)中所述的实施方案的任何变体Fc结构域或其FcRn结合片段。具有上文所述任何具体CDR、VH和/或VL结构域的示例性抗IgE抗体可包含根据上文部分(i)和(ii)中所述的实施方案的任何变体Fc区或其FcRn结合片段。
在某些实施方案中，本文所述的示例性抗IgE抗体包含变体IgG Fc结构域或其FcRn结合片段，优选变体IgG1结构域或其FcRn结合片段。在某些实施方案中，本文所述的示例性抗IgE抗体包含变体人IgG Fc结构域或其FcRn结合片段，优选变体人IgG1结构域或其FcRn结合片段。
在某些实施方案中，本文所述的示例性抗IgE抗体包含变体人IgG Fc结构域或其FcRn结合片段，所述变体Fc结构域或其FcRn结合片段包含分别在EU位置252、254、256、433、434和436处的氨基酸Y、T、E、K、F和Y。在某些实施方案中，本文所述的示例性抗IgE抗体包含变体人IgG1 Fc结构域或其FcRn结合片段，所述变体人IgG1 Fc结构域或其FcRn结合片段包含分别在EU位置252、254、256、433、434和436处的氨基酸Y、T、E、K、F和Y。在某些实施方案中，本文所述的示例性抗IgE抗体包含变体人IgG Fc区，所述变体人IgG Fc区包含两个同一的变体人IgG Fc结构域，或由两个同一的变体人IgG Fc结构域组成，其中每个变体Fc结构域包含分别在EU位置252、254、256、433、434和436处的氨基酸Y、T、E、K、F和Y。在某些实施方案中，本文所述的示例性抗IgE抗体包含变体人IgG1 Fc区，所述变体人IgG1 Fc区包含两个同一的变体人IgG1 Fc结构域，或由两个同一的变体人IgG1 Fc结构域组成，其中每个变体Fc结构域包含分别在EU位置252、254、256、433、434和436处的氨基酸Y、T、E、K、F和Y。
在某些实施方案中，本文所述的示例性抗IgE抗体包含变体Fc结构域，所述变体Fc结构域包含SEQ ID NO：1、2或3中任一个中所示的氨基酸序列，或由SEQ ID NO：1、2或3中任一个中所示的氨基酸序列组成。在某些实施方案中，本文所述的示例性抗IgE抗体包含由两个变体Fc结构域组成的变体Fc区，其中每个变体Fc结构域包含SEQ ID NO：1、2或3中任一个中所示的氨基酸序列，或由SEQ ID NO：1、2或3中任一个中所示的氨基酸序列组成。在某些实施方案中，本文所述的示例性抗IgE抗体包含变体Fc结构域，所述变体Fc结构域包含SEQID NO：5、6或7中任一个中所示的氨基酸序列，或由SEQ ID NO：5、6或7中任一个中所示的氨基酸序列组成。在某些实施方案中，本文所述的示例性抗IgE抗体包含由两个变体Fc结构域组成的变体Fc区，其中每个变体Fc结构域包含SEQ ID NO：5、6或7中任一个中所示的氨基酸序列，或由SEQ ID NO：5、6或7中任一个中所示的氨基酸序列组成。在某些实施方案中，本文所述的示例性抗IgE抗体包含重链恒定区，所述重链恒定区包含SEQ ID NO：4中所示的氨基酸序列，或由SEQ ID NO：4中所示的氨基酸序列组成。在某些实施方案中，本文所述的示例性抗IgE抗体包含重链恒定区，所述重链恒定区包含SEQ ID NO：8中所示的氨基酸序列，或由SEQ ID NO：8中所示的氨基酸序列组成。
B.编码抗IgE抗体的多核苷酸
本发明还提供编码本发明的抗IgE抗体或其片段的多核苷酸分子，还有含有可操作地连接到调节序列的本发明所述核苷酸序列的表达载体，所述调节序列允许所述抗体或其片段在宿主细胞或无细胞表达系统中表达，以及包含该表达载体的宿主细胞或无细胞表达系统。
编码本发明抗体的多核苷酸分子包括例如重组DNA分子。如本文可互换使用的术语“核酸”、“多核苷酸”或“多核苷酸分子”是指任何单链或双链的DNA或RNA分子，并且如果是单链的，则指其互补序列的分子。在讨论核酸分子时，特定核酸分子的序列或结构可在本文中根据在5’到3’方向上提供序列的正常惯例来描述。在本发明的一些实施方案中，核酸或多核苷酸是“分离的”。当应用于核酸分子时，该术语是指与在其所来源的生物体的天然存在的基因组中的紧邻序列分离的核酸分子。例如，“分离的核酸”可包括插入诸如质粒或病毒载体的载体中或整合到原核或真核细胞或非人宿主生物体的基因组DNA中的DNA分子。当应用于RNA时，术语“分离的多核苷酸”主要是指由如上文所定义的分离的DNA分子编码的RNA分子。备选地，该术语可指已从天然状态下(即，在细胞或组织中)与其缔合的其他核酸中纯化/分离的RNA分子。分离的多核苷酸(DNA或RNA)可进一步表示通过生物或合成手段直接产生且与其产生期间存在的其他组分分离的分子。
为了重组产生根据本发明的抗体，可制备编码它的重组多核苷酸(使用标准分子生物学技术)并将其插入可复制载体中以在所选宿主细胞或无细胞表达系统中表达。适合的宿主细胞可以是原核细胞、酵母细胞或高等真核细胞，尤其是哺乳动物细胞。有用的哺乳动物宿主细胞系的示例是由SV40转化的猴肾CV1细胞系(COS-7，ATCC CRL 1651)；人胚肾细胞系(293细胞或经亚克隆以在悬浮培养中生长的293细胞，Graham等，J.Gen.Virol.36：59(1977))；幼仓鼠肾细胞(BHK，ATCC CCL 10)；中国仓鼠卵巢细胞/-DHFR(CHO，Urlaub等，Proc.Natl.Acad.Sci.USA 77：4216(1980))；小鼠塞尔托利氏细胞(sertoli cell)(TM4，Mather，Biol.Reprod.23：243-251(1980))；小鼠骨髓瘤细胞SP2/0-AG14(ATCC CRL 1581；ATCC CRL 8287)或NS0(HPA培养物保藏号85110503)；猴肾细胞(CV1 ATCC CCL 70)；非洲绿猴肾细胞(VERO-76，ATCC CRL-1587)；人宫颈癌细胞(HELA，ATCC CCL 2)；犬肾细胞(MDCK，ATCC CCL 34)；水牛大鼠肝细胞(BRL 3A，ATCC CRL 1442)；人肺细胞(W138，ATCC CCL 75)；人肝细胞(Hep G2，HB 8065)；小鼠乳腺肿瘤(MMT 060562，ATCC CCL51)；TRI细胞(Mather等，Annals N.YAcad.Sci.383：44-68(1982))；MRC 5细胞；FS4细胞；和人肝细胞瘤细胞系(Hep G2)以及DSM的PERC-6细胞系。适用于这些宿主细胞中的每一种的表达载体也是本领域中众所周知的。
应当注意，术语“宿主细胞”通常是指培养的细胞系。已在其中引入编码根据本发明的抗体的表达载体的全人被明确排除在“宿主细胞”的定义之外。
C.抗体产生
在又一方面，本发明还提供产生本发明的抗IgE抗体的方法，所述方法包括在允许表达抗体的条件下培养含有编码抗体的多核苷酸(例如表达载体)的宿主细胞(或无细胞表达系统)，以及回收所表达的抗体。该重组表达方法可用于大规模生产根据本发明的抗IgE抗体，包括意在用于人治疗用途的单克隆抗体。用于大规模制造适于体内治疗用途的重组抗体的适合载体、细胞系和生产方法通常可在本领域中获得，并且将是本领域技术人员所熟知的。
D.药物组合物
本发明的范围包括药物组合物，其含有用一种或多种药学上可接受的载体或赋形剂配制的本发明的抗IgE抗体中的一种或其组合。此类组合物可包含(例如，两种或更多种不同的)抗IgE抗体中的一种或其组合。用于配制用于人治疗用途的单克隆抗体的技术在本领域中是众所周知的，并且例如在Wang等的Journal of Pharmaceutical Sciences，第96卷，第1-26页，2007中进行了综述，该文献的内容以引用方式整体并入本文。
可用于配制所述组合物的药学上可接受的赋形剂可包括但不限于离子交换剂、氧化铝、硬脂酸铝、卵磷脂、血清蛋白质(例如人血清白蛋白)、缓冲物质(例如磷酸盐)、甘氨酸、山梨酸、山梨酸钾、饱和植物脂肪酸的偏甘油酯混合物、水、盐或电解质(例如硫酸鱼精蛋白、磷酸氢二钠、磷酸氢钾、氯化钠、锌盐)、胶态二氧化硅、三硅酸镁、聚乙烯基吡咯烷酮、基于纤维素的物质(例如羧甲基纤维素钠)、聚乙二醇、聚丙烯酸酯、蜡、聚乙烯-聚氧丙烯嵌段聚合物、聚乙二醇和羊毛脂。
在某些实施方案中，将药物组合物配制成经由任何适合的施用途径施用于受试者，所述施用途径包括但不限于肌内、静脉内、真皮内、腹膜内注射、皮下、硬膜外、鼻、经口、直肠、局部、吸入、颊(例如，舌下)和透皮施用。在优选实施方案中，将组合物配制用于静脉内或皮下施用。
E.治疗方法
如本文所述的抗IgE抗体和药物组合物意在用于治疗方法中。因此，本发明提供根据本发明第一方面的抗IgE抗体或包含所述IgE抗体的药物组合物，其用作药物。
进一步提供治疗受试者的抗体介导的病症的方法，所述方法包括向有需要的患者施用治疗有效量的根据本发明第一方面的抗IgE抗体或包含所述抗IgE抗体的药物组合物。本发明还提供根据本发明第一方面的抗IgE抗体或包含所述抗IgE抗体的药物组合物，其用于治疗有需要的受试者的抗体介导的病症。受试者优选人。上文关于本发明的抗IgE抗体和药物组合物所述的所有实施方案同样适用于本文所述的方法。
在某些实施方案中，根据本文所述方法治疗的抗体介导的病症是IgE介导的病症。在某些实施方案中，抗体介导的病症是自身免疫病症。可根据本文所述方法治疗的自身免疫病症或疾病包括但不限于：同种异体胰岛移植排斥、斑秃、淀粉样变性、强直性脊柱炎、抗磷脂综合征、自身免疫性爱迪生氏病、阿尔茨海默氏病、抗中性粒细胞胞浆自身抗体(ANCA)、自身免疫性血细胞减少、肾上腺自身免疫疾病、自身免疫性溶血性贫血、自身免疫性肝炎、自身免疫性心肌炎、自身免疫性中性粒细胞减少、自身免疫性卵巢炎和睾丸炎、自身免疫性血小板减少、自身免疫性荨麻疹、贝切特氏病、大疱性类天疱疮、心肌病变、卡斯特氏综合征、乳糜泻性皮炎、慢性疲劳免疫功能障碍综合征、慢性炎性脱髓鞘性多发性神经病变(CIDP)、慢性诱导性荨麻疹、慢性自发性荨麻疹、变应性肉芽肿性血管炎、疤痕性类天疱疮、CREST综合征、冷凝集素病、克罗恩氏病、皮肌炎、盘状狼疮、特发性混合型冷球蛋白血症、VIII因子缺乏、纤维肌痛-纤维肌炎、肾小球肾炎、格雷夫斯病、格-巴二氏综合征、古德帕斯彻氏综合征、移植物抗宿主病(GVHD)、桥本氏甲状腺炎、血友病A、特发性肺纤维化、特发性血小板减少性紫癜(ITP)、IgA神经病变、IgM多发性神经病变、免疫介导的血小板减少、幼年型关节炎、川崎氏病、扁平苔癣、系统性红斑狼疮、狼疮肾炎、梅尼埃氏病、混合性结缔组织病、蕈样肉芽肿、多发性硬化、1型糖尿病、多灶性运动神经病变(MMN)、重症肌无力、大疱性类天疱疮、寻常天疱疮、落叶型天疱疮、恶性贫血、结节性多动脉炎、多软骨炎、多腺性综合征、风湿性多肌痛、多肌炎和皮肌炎、多神经炎、原发性丙种球蛋白缺乏血症、原发性胆汁性肝硬化、银屑病、银屑病性关节炎、雷诺现象、莱特尔氏综合征、类风湿性关节炎、结节病、硬皮病、夏普综合征(Sharp syndrome)、干燥综合征、实体器官移植排斥、僵体综合征、系统性红斑狼疮、高安动脉炎、中毒性表皮坏死松解症、斯-约二氏综合征(SJS)、颞动脉炎/巨细胞性动脉炎、血栓性血小减少性紫癜、血小板减少性紫癜、溃疡性结肠炎、葡萄膜炎、疱疹样皮炎、抗中性粒细胞胞质抗体相关血管炎病、白斑和韦格纳氏肉芽肿病。
在优选实施方案中，本文所述的方法用于治疗慢性自发性荨麻疹或大疱性类天疱疮。如本文别处所解释的，这些病症的特征在于存在自身反应性IgE抗体和/或自身反应性IgG抗体两者。因此，本文所述的抗IgE抗体特别适于治疗这两种自身免疫病症，因为本发明的抗IgE抗体可靶向两种形式的自身反应性抗体，由此耗竭CSU或BP患者中的IgE和IgG自身抗体水平。涉及IgE和/或IgG自身抗体两者的其他适应症包括系统性红斑狼疮、狼疮肾炎、自身免疫性葡萄膜炎、变应性支气管肺曲霉病、丘斯综合征、韦氏肉芽肿病和甲状腺自身免疫疾病，诸如格雷夫斯病和桥本甲状腺炎。
本文所述的方法可包括施用其他治疗剂。
对于将所述方法用于治疗慢性自发性荨麻疹的实施方案，所述方法可包括施用一种或多种选自以下的其他治疗剂：抗组胺、环孢素、氨苯砜、羟氯喹、柳氮磺胺吡啶、秋水仙碱、甲氨蝶呤、IVIG、皮质类固醇、H2受体拮抗剂或白三烯拮抗剂。对于将所述方法用于治疗大疱性类天疱疮的实施方案，所述方法可包括施用一种或多种其他选自以下的治疗剂：皮质类固醇、利妥昔单抗(rituximab)或免疫抑制剂，诸如硫唑嘌呤、麦考酚酸酯(mycophenolate)、氨苯砜、甲氨蝶呤、苯丁酸氮芥和环磷酰胺。
根据本文所述方法治疗的患者或受试者可能已经在接受治疗，或可能在先前的治疗中失败。例如，根据本文所述方法治疗的患者或受试者可能正在接受或已经接受诸如皮质类固醇、免疫抑制剂、IViG、抗组胺和/或奥马佐单抗的治疗。
以引用方式并入
在前面的描述中以及下面的整体实施例中引用了各种出版物，这些出版物中的每一个均以引用方式整体并入本文。
实施例
将参考以下非限制性实施例来进一步理解本发明。
实施例1.在美洲驼中产生抗IgE抗体
A.美洲驼的免疫
通过在与不完全弗氏佐剂(Incomplete Freund’s Adjuvant)混合后，在颈部进行肌内注射重组人免疫球蛋白E(hIgE)(来自Abcam的经蛋白质L纯化的IgE；目录编号ab65866)对四只美洲驼进行免疫。免疫方案汇总于表6中。
表6：免疫计划和组织收集的汇总
Figure BDA0003368808670000741
(*)用2次注射的hIgE对美洲驼(Adelio和Shanio)进行强化。
在最后一次免疫后4到5天，从免疫的美洲驼采集400mL血液，以分离PBMC并提取RNA。为了确定免疫的美洲驼的免疫应答，使用酶联免疫吸附测定(ELISA)设置。
为了实施ELISA，在4℃下用1μg/ml的hIgE O/N包被Maxisorp板。用PBS-Tween洗涤板，并且用PBS+1％酪蛋白封闭2小时。将免疫前和免疫后的美洲驼血清系列稀释物添加到板孔中并孵育1h。用小鼠抗美洲驼VH特异性抗体(27E10)检测结合到包被的hIgE的美洲驼免疫球蛋白(Ig)。用抗小鼠IgG-HRP(DAMPO)实现检测。最后，在添加TMB后，用0.5M H2SO4终止反应，并在450nm处测量吸光度(Tecan Sunrise，Magellan软件)。所有免疫的美洲驼都显示出针对hIgE的特异性免疫应答(参见图1)。
B.文库构建(Fab)
Fab文库构建如下：使用来自Qiagen的Rneasy Midi试剂盒从经免疫美洲驼血液中分离的PBMC中纯化mRNA。经由Experion StdSens分析试剂盒验证RNA完整性。用随机六聚体引物对mRNA进行逆转录，以获得cDNA。为了构建重链和轻链文库，使用两步PCR。首先，在cDNA上直接使用非标记引物以扩增VH-CH1、VL-CL和Vk-Ck。然后纯化PCR产物，并且将其与标记引物一起用于进行第二次PCR，以扩增VH-CH、VL和Vk。将轻链(Vλ-Cλ或Vκ-Cκ)重新克隆于来源于同一种美洲驼的重链(VH-CH)文库中，以形成Fab文库。
表7：所生成的文库的大小(CFU)
Figure BDA0003368808670000751
通过在固定化hIgE上进行三轮选择，进行表达特异性hIgE Fab片段的噬菌体的富集。使用两种不同其仅在噬菌体选择后的洗脱类型上有所不同的选择方法。
通过生物淘选方法实施对hIgE具有特异性的适当Fab克隆的初步选择。简单地说，将hIgE固定在Maxisorp ELISA板上，然后添加于TBS pH 7.4中的Fab噬菌体文库(输入)。经由多次洗涤步骤去除未结合的噬菌体。最后，用胰蛋白酶或TBS pH 5.5洗脱结合的噬菌体。用洗脱的材料感染大肠杆菌(E.coli)，以扩增所选噬菌体。这一过程导致表达对hIgE具有高亲和力的Fab的噬菌体群体的富集。在该轮选择结束时，通过滴定感染的大肠杆菌来估计洗脱的噬菌体数量，所述大肠杆菌被点样(10-1到10-6)于含有具有氨苄西林和葡萄糖的固体LB培养基的培养皿上。从两种美洲驼中进行的第一轮λ和κ文库筛选导致对hIgE特异的噬菌体的轻微富集。第二轮和第三轮选择导致表达可能对hIgE具有更高亲和力的Fab的噬菌体的富集。进行两次不同的选择活动：
·活动1：用在Abcam购买的hIgE(目录编号ab65866)完成所有三轮选择。在该活动中获得了从1-9开始的克隆。
·活动2：用Abcam hIgE完成第一轮选择。用在Kerafast购买的hIgE(目录编号EX0011)完成第二轮和第三轮选择。在该活动中获得了从10-20开始的克隆。
表3-5显示用于不同轮次选择的包被量。单个克隆生成导致母板的产生。从这些母板产生周质母板(PMP)。Fab形式的抗体片段可通过用IPTG诱导而分泌到大肠杆菌的周质空间。为此目的，首先以96孔形式(深孔)扩增来自母板的单个克隆，并通过与IPTG孵育过夜来诱导Fab的产生。第二天，通过两个循环的冷冻/解冻(-80℃和-20℃)裂解细菌。在离心后，收集上清液(周质提取物)，并且将其转移到单独的96孔板中，以测试其结合能力(ELISA和Biacore)。
表8：第一轮选择(R1)
Figure BDA0003368808670000761
Figure BDA0003368808670000771
表9：第二轮选择(R2)
Figure BDA0003368808670000772
表10：第三轮选择(R3)
Figure BDA0003368808670000773
C.通过ELISA筛选Fab周质提取物
为了测试Fab对hIgE的结合能力，建立了ELISA结合测定。简单地说，将Maxisorp板用hIgE(1μg/mL)包被，然后用PBS 1％酪蛋白封闭，接着与含有Fab-Myc的周质提取物(于PBS中的1/4稀释物)孵育。使用抗Myc-HRP抗体实施结合物的检测。利用Tecan仪器在450nm(参考值为620nm)处测量吸光度。
D.通过竞争ELISA筛选Fab周质提取物
为了鉴别阻断IgE-FcεRIα相互作用的Fab，建立竞争ELISA结合测定。简单地说，将Maxisorp板用1μg/ml可溶性FcεRIα(R&D系统，目录编号6678-FC)包被，然后用PBS 1％酪蛋白封闭。将生物素化的hIgE与周质提取物(于PBS中1/4稀释物)预孵育，然后添加到FcεRIα包被的孔中。使用链霉抗生物素蛋白-HRP试剂检测hIgE结合。利用Tecan仪器在450nm(参考值为620nm)处测量吸光度。
E.通过SPR筛选pH依赖性结合Fab周质提取物
在Biacore T3000上pH 7.4和pH 5.5下分析对hIgE结合能力。为此目的，用2000RU的hIgE包被CM5芯片。将周质提取物(于HBSEP pH 7.4缓冲液或HBSEP pH 5.5中的1/10稀释物)注射到经hIgE包被的芯片中。经由BIA评价软件，用空白减法分析原始数据。
pH依赖性IgE结合克隆的CDR、VH和VL序列示下表11-13中。
Figure BDA0003368808670000791
Figure BDA0003368808670000801
Figure BDA0003368808670000811
Figure BDA0003368808670000821
Figure BDA0003368808670000831
Figure BDA0003368808670000841
实施例2.抗IgE Fab克隆的进一步表征
A.Fab克隆的测序和重新格式化
将以下8个Fab克隆重新克隆到人hIgG1 Fc中以进行进一步表征：3D6、16E4、3A1、3D1、13E4、18B9、20D5和18E2。
为此目的，使用特异性引物对每个克隆的VH和VL进行PCR扩增，通过电泳加以分离，纯化并用限制性酶(BsmBi)消化。在消化和净化后，将DNA(VH或VL)连接到BsmBi预消化载体中，所述载体含有人λ或κ轻链(Vκ为pUPEX116.08，Vλ为pUPEX116.09)或人IgG1重链(CH1-CH2-CH3，pUPEX116.07)的恒定结构域。通过热休克将每一连接的产物转化到Top10种细菌中，并转移于含有氨苄西林(载体的抗性基因)的琼脂糖板上。对于每个克隆(HC和LC)，挑取4到8个菌落并送去测序。选择显示适当插入的克隆并扩增，以纯化DNA序列(MidiPrep)。
通过转染HEK293E细胞(使用聚乙烯亚胺(PEI)与含有1/1比率的重链和轻链DNA表达载体的混合物)来实施8种人IgG1抗体的产生。在使细胞表达6天后，使用蛋白质-Asepharose珠粒从细胞上清液中纯化人单克隆抗体。最后，进行SDS-PAGE分析以评估抗体的纯度和完整性。
B.抗hIgE单克隆抗体的表征
使用ELISA和带有T3000 Biacore的SPR来评估抗hIgE mAb小组的结合性质。
i.结合ELISA
从WGS数据库中检索hIgE的序列。合成编码莫塔维珠单抗(Motavizumab)抗体的VH和hIgE的恒定重链(Cε1-Cε4)的DNA，并将其重新克隆到表达载体中。将IgE载体与莫塔维珠单抗轻链、可变和恒定人κ一起转染到CHO K1细胞中，并产生重组莫塔维珠单抗人IgE(rMota-hIgE)。使用MabSelectTM SuReTM纯化hIgE。使用rMota-hIgE通过ELISA评估8种抗hIgE mAb的相对结合性质。简单地说，将Maxisorp板用重组人呼吸道合胞病毒蛋白F(RSV-F)(0.5μg/mL)包被，然后用含3％BSA和0.05％Tween的PBS封闭。1μg/ml rMota-hIgE在与抗hIgE mAb的系列稀释物孵育之前被捕获。在pH 7.4或pH 5.5下进行几个洗涤步骤后，用抗人Fc-HRP抗体实施对结合的mAb的检测。利用Tecan仪器在450nM(参考值为620nm)处测量吸光度。所有重新克隆的抗体都能够结合人IgE(参见图2)。
ii.竞争ELISA
在与初始筛选期间使用的设置完全相同的设置中，通过ELISA在pH 7.4和pH 6下分析了8种不同抗hIgE抗体对hIgE与hFcεRIα结合的抑制。将原始数据(OD值)绘制于GraphPad Prism 7.01上。利用非线性回归(log(激动剂)相对于响应变量斜率(四个参数))计算每一化合物的IC50值。结果示于图3及表14中。克隆13E4在pH 7.4下显示出对hIgE的最高亲和力。三个克隆对hIgE显示出对hIgE的最高pH依赖性差异亲和力：3D6、16E4和18B9。
表14：通过ELISA测得的抑制hIgE与FcεRI结合的IC50(nM)
Figure BDA0003368808670000861
iii.SPR分析：对IgE与FcεRI的结合的竞争
在Biacore T3000上分析人抗hIgE IgG1 mAb的结合能力。为此目的，制定竞争方法。用1500RU的hFcεRIα包被CM5芯片。将固定浓度的hIgE(1μg/mL)与系列浓度的人IgG1抗体小组预孵育，然后注射到经h hFcεRIα包被的芯片中。在HBS EP pH 7.4或HBS EP pH 5.5中进行测定。经由BIA评价软件，用空白减法(2-1)分析原始数据。将RU值绘制于GraphPadPrism 7.01上。利用非线性回归(log(激动剂)相对于响应变量斜率(四个参数))计算每一化合物的IC50值。结果示于图4及下表15中。如在竞争ELISA中所观察到的，具有最高效价的抗体是克隆13E4。在该方法中，克隆3D6表现出最高的pH依赖性。
表15：通过Biacore测得的抑制hIgE与FcεRI结合的IC50(nM)
Figure BDA0003368808670000871
C.与食蟹猴IgE(cIgE)交叉反应的克隆的鉴别.
从WGS数据库中检索cIgE的序列。该序列在完整Fc(Cε1-Cε4)上显示出85％的同一性。合成编码莫塔维珠单抗抗体的VH和cIgE的恒定重链(Cε1-Cε4)的DNA，并将其重新克隆到表达载体中。将编码莫塔维珠单抗的VL的DNA克隆到含有Vκ恒定区的表达载体中。将质粒转染到CHO K1细胞中。使用MabSelectTM SuReTM纯化cIgE。使用ELISA和带有T3000 Biacore的SPR来评估抗hIgE mAb小组的交叉反应性。
i.结合ELISA
在与用于hIgE的设置类似的设置中，通过ELISA分析了8种抗hIgE mAb的相对结合性质。简单地说，将Maxisorp板用RSV-F(0.5μg/mL)包被，然后用含3％BSA和0.05％Tween的PBS封闭。1μg/ml rMota-cIgE在与抗hIgE mAb的系列稀释物孵育之前被捕获。在pH 7.4或pH 5.5下进行几个洗涤步骤后，用抗人Fc-HRP抗体完成对结合的mAb的检测。利用Tecan仪器在450nM(参考值为620nm)处测量吸光度。最后，将原始数据(OD值)绘制于GraphPadPrism 7.01上。这8个克隆能够以不同的亲和力结合到cIgE(参见图5)。克隆3D6和13E4对cIgE具有pH依赖性结合亲和力。
实施例3.通过组氨酸工程改造对阻断IgE/FcεRIα相互作用的pH依赖性抗IgE抗体的鉴别
A.工程改造pH依赖性IgE结合
选择三种抗体以增加pH依赖性。如WO2018/206748(其以引用方式并入本文)中所述，通过合理选择突变位置将组氨酸突变引入CDR序列中。
突变克隆的CDR、VH和VL序列示于下表16、17和18中。
Figure BDA0003368808670000891
Figure BDA0003368808670000901
Figure BDA0003368808670000911
使用带有T3000 Biacore的SPR来评估突变克隆的结合能力。使用了前述竞争方法。经由BIA评价软件，用空白减法(2-1)分析原始数据。将RU值绘制于GraphPad Prism7.01上。利用非线性回归(log(激动剂)相对于响应变量斜率(四个参数))计算每一化合物的IC50值。结果示于下表19中。
表19：pH依赖性工程改造的抗hIgE克隆的IC50.
Figure BDA0003368808670000921
结果可汇总如下：
·突变S35H在pH 7.4下不影响IgE结合，但增加克隆18E2中的pH依赖性。相反，该突变消除克隆18B9和3D1的IgE结合。
·对于克隆18E2，最佳的pH依赖性结合物是18E2_VH_S35H_VL_Y34H，其在pH 5.5下的IC50与pH 7.4下的IC50之间的比率为6.3。然而，与WT克隆相比，在pH 7.4下的亲和力降低了2.5倍。
·对于克隆18B9，最佳的pH依赖性结合物是VL18B9_Y49H，其在pH 5.5下的IC50与pH 7.4下的IC50之间的比率为5.4。pH 7.4下的亲和力不受影响。
·克隆WT 3D1显示出最佳的pH依赖性亲和力，其在pH 5.5下的IC50与pH 7.4下的IC50之间的比率为8.6。His突变影响pH 7.4下的IgE结合，且与WT抗体相比，不增加pH 5.5下的IC50与pH 7.4下的IC50的比率。
实施例4.抗hIgE-ABDEG抗体的产生和表征
A.将抗IgE Fab重新格式化为人IgG1 Fc-ABDEGTM人IgG1 Fc-LALA-ABDEGTM
将三个Fab克隆(13E4；18E2_VH_S35H_VL_Y34H(18E2His2)和VL18B9_Y49H(18B9His))重新克隆到含有ABDEGTM突变的人hIgG1 Fc中。为此目的，定购含有BsmBI限制位点的每个克隆的VH的DNA串。在消化和净化后，将DNA连接到BsmBI预消化载体中，所述载体含有具有ABDEGTM突变的人IgG1重链的恒定结构域(CH1-CH2-CH3，pUPEX32a)或具有LALA和ABDEGTM突变的人IgG1重链的恒定结构域(CH1-CH2-CH3，pUPEX94)。通过热休克将每一连接的产物转化到Top10细菌中，并将转化的细菌转移于含有氨苄西林(载体的抗性基因)的琼脂糖板上。对于每个克隆(HC和LC)，挑取4到8个菌落并送去测序。选择显示适当插入的克隆并扩增，以纯化DNA序列(MidiPrep)。
通过经由聚乙烯亚胺(PEI)，以并入HEK293E细胞中的1条重链比1条轻链的比率转染，完成3种人IgG1-ABDEGTM抗体的产生。在6天后，使用蛋白质-A sepharose珠粒从细胞上清液中纯化人单克隆抗体。最后，完成SDS-PAGE分析以评估抗体的纯度和完整性(150kDa)。
B.抗IgE-ABDEGTM抗体的表征
使用ELISA和带有T3000 Biacore的SPR来评估抗hIgE-ABDEGTM mAb的结合性质。
i.IgE结合ELISA
在与上文所用的设置完全相同的设置中，通过ELISA分析了3种抗hIgE-ABDEGTM抗体的相对结合性质。将原始数据(OD值)绘制于GraphPad Prism 7.01上(参见图6)。
·所有3个克隆都能够结合hIgE，并且与FcεRIA竞争与hIgE结合
·克隆13E4对hIgE具有最高的亲和力。
·克隆18E2His2显示最高pH依赖性。
ii.IgE竞争ELISA
在与上文所用的设置完全相同的设置中，通过ELISA在pH 7.4和pH 6下分析了抗hIgE-ABDEGTM抗体对hIgE与hFcεRIα结合的抑制。将原始数据(OD值)绘制于GraphPad Prism7.01上。利用非线性回归(log(激动剂)相对于抑制变量斜率(四个参数))计算每一化合物的IC50值。结果示于下表20中。
表20：IgE竞争ELISA的IC50.ABDEGTM功能不影响IgE结合
Figure BDA0003368808670000941
·3个克隆能够抑制IgE：FcεRIα相互作用
·克隆13E4是抑制IgE：FcεRIα相互作用最有效的克隆。
iii.对IgE：FcεRIα相互作用的竞争的SPR分析
如上文所述，使用竞争方法在Biacore T3000上分析人IgG1 mAb抗hIgE的结合能力。在HBS EP pH 7.4或HBS EP pH 5.5中进行测定。经由BIA评价软件，用空白减法(2-1)分析原始数据。将RU值绘制于GraphPad Prism 7.01上。利用非线性回归(log(激动剂)相对于响应变量斜率(四个参数))计算每一化合物的IC50值。结果示于下表21中。所获得的结果确认了用竞争ELISA获得的数据。
表21：IgE竞争SPR分析的IC50
Figure BDA0003368808670000951
3个克隆能够抑制IgE：FcεRIα相互作用。最有效的克隆是克隆13E4，而具有最高结合pH依赖性的克隆是18E2His2。
iv.FcRn结合ELISA
为了测试装配有ABDEGTM的完整抗体结合到FcRn的结合能力，建立ELISA结合测定。简单地说，将Maxisorp板用中性抗生物素蛋白(1μg/mL，ThermoFisher目录编号31000)包被，然后用PBS 1％酪蛋白封闭。添加生物素化的人FcRn(0.5μg/ml，ImmuniTrack，目录编号ITF01)，然后将其与预先与或不与hIgE孵育的抗hIgG1-ABDEG抗体的系列稀释物孵育。用山羊F(ab′)2抗人IgG-Fc-HRP(1/20,000，Abcam目录编号为ab98595)完成结合物的检测。在pH6和pH 7下进行测定。利用Tecan仪器在450nm(参考值为620nm)处测量吸光度。结果示于图7中。在pH 6和pH 7下，以装配有ABDEGTM突变的人IgG1 Fc重新格式化的抗体对FcRn的亲和力高于人IgG1 Fc WT。
v.IgG3竞争ELISA
为了在体外测定中测试装配有ABDEGTM的完整抗体中ABDEGTM的功能，建立竞争ELISA结合测定。简单地说，将Maxisorp板用中性抗生物素蛋白(1μg/mL，ThermoFisher目录编号31000)包被，然后用PBS 1％酪蛋白封闭。向板中添加生物素化的人FcRn(0.5μg/ml，ImmuniTrack，目录编号ITF01)、重组hIgG3(内部生产)和抗hIgG1-ABDEG抗体的系列稀释物(预先与或不与hIgE孵育)的混合物。用小鼠抗人IgG3(ThermoFisher目录编号MH1732)山羊F(ab′)2抗人IgG-Fc-HRP(1/20,000，Abcam目录编号为ab98595)完成结合的IgG3的检测。在pH 6下进行测定。利用Tecan仪器在450nm(参考值为620nm)处测量吸光度。结果示于图8中。
实施例5.对IgE与FcεRI+细胞的结合的抑制
分析抗hIgE-ABDEGTM抗体抑制IgE与hFcεRIα+细胞结合的能力。从Tg hIgE/hFcεRIα小鼠中分离骨髓细胞。在鼠IL-3存在下，使这些细胞在体外分化为肥大细胞，持续30天。将骨髓源性肥大细胞与人IgE在抗IgE-ABDEGTM mAb的系列稀释物存在下孵育。通过流式细胞术测量残余的hIgE结合。将使用FlowJo软件计算的中值荧光强度绘制于GraphPad Prism7.01上。利用非线性回归(log(激动剂)相对于抑制变量斜率(四个参数))计算每一化合物的IC50值。结果示于图9中。
·3个克隆能够抑制hIgE与hFcεRIα+细胞的结合。
·克隆13E4展示最高效力。
·Fc片段中的ABDEGTM突变不影响不同克隆的抗IgE功能。
实施例6.结合到预先结合于FcεRI+细胞上的IgE的抗IgE抗体
A.IgE交联ELISA
通过ELISA分析抗体同与FcεRIα缔合的人IgE的结合。简单地说，将Maxisorp板用hFcεRIα(0.5μg/mL)包被，然后用含1％BSA和0.05％Tween的PBS封闭。3μg/ml rMota-hIgE在与抗hIgE mAb的系列稀释物孵育之前被捕获。在几个洗涤步骤后，用抗人Fc-HRP抗体完成对结合的mAb的检测。利用Tecan仪器在450nM(参考值为620nm)处测量吸光度。最后，将原始数据(OD值)绘制于GraphPad Prism 7.01上(参见图10)。
·克隆13E4和18B9His能够结合与hFcεRIα+缔合的IgE
·克隆18E2His2不结合与hFcεRIα+缔合的IgE
B.嗜碱性粒细胞活化测试
通过流式细胞术分析抗体与人嗜碱性粒细胞上预结合的人IgE的结合。从屋尘螨变应供体获得血液。在存在抗hIgE-ABDEGTM抗体的情况下，根据FLOW
Figure BDA0003368808670000971
试剂盒(BUHLMANN)测量嗜碱性粒细胞活化。通过流式细胞术分析结果并使用FlowJo软件处理原始数据。将嗜碱性粒细胞鉴别为CCR3+细胞。活化的嗜碱性粒细胞定义为CCR3+CD63+细胞。活化的嗜碱性粒细胞的百分比(％)展示于下表22中。
·克隆13E4和18B9His诱导嗜碱性粒细胞活化
·克隆18E2His2不诱导嗜碱性粒细胞活化
表22：嗜碱性粒细胞活化测试
活化的嗜碱性粒细胞％
无关抗体 3
18B9His-hIgG1-WT 32
18B9His-hIgG1-ABDEG 29
18E2His2-hIgG1-WT 5
18E2His2-hIgG1-ABDEG 4
13E4-hIgG1-WT 18
13E4-hIgG1-ABDEG 17
实施例7.通过抗IgE-ABDEGTM抗体清除非疾病模型中的IgE和IgG
在小鼠体内分析抗hIgE-ABDEGTM抗体增加IgE和IgG清除的能力。在注射抗-hIgE-ABDEG mAb之前2h，在C75BL6小鼠中注射rMota-hIgE。从小鼠中收集血液，并通过ELISA测量hIgE和鼠IgG水平(参见图11)。
·装配有ABDEGTM突变的非IgE结合克隆(HEL-hIgG1-ABDEG)诱导IgG，但不诱导IgE耗竭
·奥马佐单抗不能诱导IgE或IgG耗尽
·克隆18E2His2-hIgG1-ABDEG诱导IgG耗竭和IgE耗竭。
实施例8美洲驼抗IgE Fab克隆的种系化
通过将美洲驼CDR序列移植到人框架序列中，对来自实施例2和3的所选抗IgE Fab克隆进行种系化。种系化的Fab克隆是：13E4；18E2_VH_35H_VL_Y34H(18E2His2)；VL18E2_Y34H；VH18E2_S35H和VL18B9_Y49H(18B9His)。种系化克隆的VH和VL序列示于下表23中。
表23种系化抗IgE Fab克隆的VH和VL序列
Figure BDA0003368808670000981
Figure BDA0003368808670000991
MG表示种系化变体
竞争ELISA
在与初始筛选期间使用的设置完全相同的设置中，通过ELISA在pH 7.4和pH 6下分析了5种不同抗hIgE种系化克隆对hIgE与hFcαRIα结合的抑制。将原始数据(OD值)绘制于GraphPad Prism 7.01上。利用非线性回归(log(激动剂)相对于响应变量斜率(四个参数))计算每一抗体的IC50值。结果示于下表24中。所有克隆仍能够结合到IgE。如先前所观察到的，克隆13E4在pH 7.4下显示出对hIgE的最高亲和力。克隆18E2VHS35HVLY34HMG(种系化18E2His2)显示出对hIgE的最高pH依赖性差异亲和力。
表24通过ELISA测得的抑制hIgE与FcεRI结合的IC50(ng/ml)
Figure BDA0003368808670001001
MG表示种系化变体
实施例9工程改造抗IgE抗体CL-2C的pH依赖性变体
根据图12中示意性描绘的方法，对克隆CL-2C的抗IgE Fab的pH依赖性变体进行工程改造。下文更详细地描述该方法的不同阶段。
A.基因片段的设计
克隆CL-2C的VH和VL(Vκ)结构域的蛋白质序列描述于美国专利US7531169中，所述美国专利以引用方式并入本文。根据图12中所示示意图的第一步骤中所描绘的方法，从这些VH和VL结构域开始，在CDR区(VH和VL)的每个位置处引入组氨酸突变。使用Kabat编号方案对可变结构域的氨基酸残基进行编号。用Vκ和VH可变区的CDR中的期望突变连同适合的克隆位点设计基因片段。用其间的克隆位点将框架区3(FR3)划分成FR3a和FR3b(如图12中所示)。
B.文库构建
作为文库构建的第一步，通过将BsmBI消化的Vκ基因片段克隆到ApaLI/XhoIpCB13-CK噬菌粒载体中来构建Vκ突变体(Vm)子文库。从该Vκ子文库开始，使用两种方法(下文所解释的A和B)生成最终Fab文库。
根据方法A，通过将两个SfiI/BsmBI(NheI相容)消化的突变体VH(VHm)基因片段克隆到SfiI/NheI消化的Vκm子文库(包含hCH1)中来实施三重连接。根据方法B，通过借助4点连接将SfiI/BsmBI消化的VHm基因片段与从pCB13-CK提取的hCH1 NheI/NotI组合克隆到SfiI/NotI消化的Vm子文库中来实现连接。连接后，转化到TG1大肠杆菌电感受态细胞中。最终的Fab文库在CDR中含有最多4个His突变(HCDR1或HCDR2的0-1个和HCDR3中的0-1个、LCDR1或LCDR2中的0-1个、LCDR3中的0-1个)。对来自方法A和B两者的最终Vκ(使用M13R)和VH文库(使用PelB3)中的32个随机克隆进行序列分析。连接后，转化到TG1大肠杆菌电感受态细胞中。VHm或Vκm子文库含有最多2个His突变(CDR1或CDR2中0-1个His以及CDR3中0-1个His)。通过单独克隆1Vκlig01A(WT Vκ)和1VHlig01A(WT VH)生成对照fab。从方法A来看，32个Vκ测序克隆中的25个(78％)显示正确的V区序列。从方法B来看，32个克隆中有24个(75％)是这种情况。从方法A看，32个VH测序克隆中的17个(53％)显示正确的V区序列。从方法B来看，32个克隆中有16个(50％)是这种情况。
C.选择
使用来自两种方法的Fab文库进行Fab噬菌体展示，并在增加严格性、将解离速率洗涤(off-rate washing)(在可溶性靶标存在下洗涤)与pH洗脱组合的情况下进行选择。使用洗脱的噬菌体感染大肠杆菌TG1细胞。对来自几轮选择的洗脱噬菌体的输出物进行铺板，以获得单个菌落。随机挑取单个克隆，并生成6个母板。
D.通过IgE结合ELISA进行筛选
从1ml来源于所有生成的母板的大肠杆菌培养物(用IPTG诱导)产生周质提取物(称为PERI的含有分泌的单体Fab的粗级分)。根据上文实施例2中所述的方案精确实施hIgE结合ELISA。对展现出与hIgE的pH依赖性结合的克隆的测序揭示在Vκ和VH中富含His突变的位置。这些结果示意性地描绘于图13中。
E.重新格式化
将下表25中所示的8个Vκ串和5个VH串重新克隆到含有人恒定结构域(人hIgG1)的哺乳动物表达载体中，以用于进一步表征。
表25.
Figure BDA0003368808670001021
从Geneart为每一VH和VL设计并订购DNA String片段，随后将其用限制性酶(BsmBi)消化。在消化和净化后，将DNA(VH或VL)连接到BsmBi预消化载体中，所述载体含有人κ轻链的恒定结构域(Vκ为pUPEX116.08)或人IgG1-ABDEGTM重链(CH1-CH2-CH3，pUPEX32a)的恒定结构域。通过热休克将连接的产物转化到Top10细菌中，并转移到含有氨苄西林(载体的抗性基因)的琼脂糖板上。对于每个克隆(HC和LC)，挑取4到8个菌落并送去测序。选择显示适当插入的克隆并扩增，以纯化DNA序列(通过MidiPrep)。
通过用含有1/1比率的重链DNA表达载体和轻链DNA表达载体的混合物转染HEK293E细胞(使用聚乙烯亚胺(PEI)来实施由所有Vκ与所有VH的组合得到的35种人IgG1抗体的产生。在使细胞表达蛋白质6天后，使用蛋白质-A sepharose珠粒从细胞上清液中纯化人单克隆抗体。最后，进行SDS-PAGE分析以评估抗体的纯度和完整性。
F.pH-工程改造的抗hIgE抗体的表征
根据实施例2中所述的方案，通过SPR分析(使用Biacore 3000)和IgE结合ELISA评估工程改造的CL-2C抗体小组的hIgE结合性质。
i.SPR分析
SPR分析的结果示于表26中。计算每种CL-2C抗体在pH 5.5下测量的KD与在pH 7.4下测量的KD的比率。
表26如通过Biacore测量的pH工程改造的CL-2C抗体与hIgE的结合
Figure BDA0003368808670001031
Figure BDA0003368808670001041
发现并非所有克隆都具有pH依赖性。通过SPR分析，CL-2C mAb13显示出最高的pH依赖性。
ii.IgE结合ELISA
hIgE结合ELISA的结果示于下表27中。计算每种CL-2C抗体在pH 7.4下测量的OD450与在pH 6下测量的OD450的比率。
表27如通过ELISA测量的pH工程改造的CL-2C抗体与hIgE的结合
Figure BDA0003368808670001042
Figure BDA0003368808670001051
与Biacore结果类似，发现并非所有克隆都具有pH依赖性。通过ELISA分析，CL-2CmAb26显示最高pH依赖性。
pH工程改造的CL-2C抗体变体的CDR、VH结构域和VL结构域序列示于下表28、29和30中。
Figure BDA0003368808670001061
Figure BDA0003368808670001071
Figure BDA0003368808670001081
实施例10工程改造抗IgE抗体奥马佐单抗的pH依赖性变体
使奥马佐单抗抗体在生成pH依赖性变体之前经受亲和成熟过程。下面详细描述这些方法。
奥马佐单抗亲和力成熟
A.文库生成
对奥马佐单抗VH和VL结构域的CDR区域中的关键残基进行诱变。根据Kabat编号方案进行CDR氨基酸残基的编号。每个CDR子文库最多突变6个残基(产生6.40×107的理论多样性)。文库设计基于暴露于溶剂的残基和/或基于天然抗体序列的高可变性。
B.亲代Fab的生成
用NcoI/NheI消化2μg奥马佐单抗VHWT cDNA，并用ApalI/BswiI消化2μg奥马佐单抗VkWT。在1％琼脂糖凝胶中分离样品，并纯化以进一步与pCB13.ck4连接。将43ng的奥马佐单抗VHWT和奥马佐单抗VkWT DNA片段与200ng分别用NcoI/NheI和ApalI/BsiWI消化的pCB13Ck4载体连接。用25μl ECC TG1细胞(Lucigen目录编号605022)进行纯化的10μl连接物的转化。
C.变体Fab文库生成
使用八种重叠寡核苷酸，经由PCR和基因组装方案生成Vk和VH基因变体。通过将NcoI/NheI消化的VH连接到NcoI/NheI消化的VLWT pCB13中且将ApalI/BsiWI消化的VL连接到ApalI BsiWI消化的VHWTpCB13中来生成文库。将文库转化到ECC TG1细胞(Lucigen目录编号60502 2)中。
D.选择
使用如上文所述生成的Fab文库进行Fab噬菌体展示。在增加严格性和解离速率洗涤(在可溶性靶标存在下洗涤)的情况下实施选择。使用洗脱的噬菌体感染大肠杆菌TG1细胞。对来自几轮选择的洗脱噬菌体的输出物进行铺板，以获得个体菌落。将单个克隆随机挑入母板(MP)中。
E.针对hIgE结合的筛选
从1ml来源于所有生成的母板的大肠杆菌培养物(用IPTG诱导)产生周质提取物(称为PERI的含有分泌的单体Fab的粗级分)。
如实施例2中所述，通过SPR分析评估Fab周质提取物与hIgE的结合。结果示于下表31中。
表31如通过Biacore测量的亲和成熟的奥马佐单抗抗体与hIgE的结合
Figure BDA0003368808670001101
一个特定的克隆VH15VL3表现出最高的亲和力增加，并且被选择用于进一步的pH工程改造。
奥马佐单抗pH工程改造
A.pH依赖性奥马佐单抗抗体变体的产生
以与实施例9中针对CL-2C所述类似的方法，在奥马佐单抗亲代抗体的VH和VL结构域的CDR区域的每个位置处引入组氨酸突变。
使用该方法，VH结构域中的2个突变和VL结构域中的2个突变是基于它们在pH依赖性克隆中的富集来选择：
VH：CDR2中的G55H和CDR3中的W100bH
Vκ：CDR1中的D28H和CDR1中的S31H
将上述鉴别的组氨酸“热点”插入到奥马佐单抗-VH15VL3的亲和成熟变体中。如先前所述，实施由所有Vκ与所有VH的组合得到的16种人IgG1抗体的产生。
B.pH-工程改造的奥马佐单抗抗体变体的表征
根据实施例2中所述的方案，通过SPR分析(使用Biacore 3000)、IgE结合ELISA和IgE竞争ELISA评估工程改造的奥马佐单抗抗体小组的hIgE结合性质。
i.SPR分析
SPR分析的结果示于表32中。
表32如通过Biacore测量的pH工程改造的奥马佐单抗抗体与hIgE的结合
Figure BDA0003368808670001111
Figure BDA0003368808670001121
Figure BDA0003368808670001131
结果揭示，并非所有克隆都依赖于pH。如通过Biacore所测量的，OmaVH15W100b-VL3S31H显示出最高的pH依赖性。
ii.IgE结合ELISA
hIgE结合ELISA的结果示于下表33中。
表33如通过ELISA测量的pH工程改造的奥马佐单抗抗体与hIgE的结合
Figure BDA0003368808670001132
Figure BDA0003368808670001141
与利用SPR分析的结果类似，并非所有克隆都是pH依赖性的。
OmaVH15W100b-VL3D28H，OmaVH15W100b-VL3S31H，OmaVH15W100b-VL3D28HS31H，OmaVH15G55hW100b-VL3S31H和OmaVH15G55hW100b-VL3D28HS31H显示最高的pH依赖性，如通过hIgE结合ELISA所测量。
iii.IgE竞争ELISA
hIgE竞争ELISA的结果示于下表34中。
表34如通过竞争ELISA测量的pH工程改造的奥马佐单抗抗体对hIgE的活性
Figure BDA0003368808670001142
Figure BDA0003368808670001151
在该实验中，OMAVH15VL3显示最佳亲和力。发现组氨酸工程改造影响OMAVH15VL3抑制IgE与FcεRIα的结合的能力。
克隆VH15VL3和其pH工程改造变体的CDR、VH和VL序列示于下表35、36和37中。
Figure BDA0003368808670001161
Figure BDA0003368808670001171
实施例11对IgE与FcεRIα+细胞的结合的抑制
从具有SCF、IL-6和IL-3的CD34+血液祖细胞(健康供体)培养人肥大细胞12周，直到它们共表达KIT和FcεRI，并能够在FcεRI交联后脱粒。使用JW8/5/13细胞(Sigma)产生嵌合NP特异性IgE(人恒定区；小鼠可变区)，并使用奥马佐单抗偶合的sepharose将其纯化。使NP特异性IgE与APC偶合。在添加APC-hIgE之前，将人肥大细胞与各种不同浓度的抗IgE mAb预孵育。在1h后分析APC荧光，以确定IgE+肥大细胞的百分比(％)。结果示于图14中。18E2His2-MG-hIgG1-ABDEG显示出对人肥大细胞的最佳竞争能力。OMAVH15G55H-VL3S31H显示出对人肥大细胞的最低竞争能力。
实施例12抗IgE-ABDEGTM抗体的安全性测试
如本文别处所述，抗IgE抗体可展现出不期望的性质，诸如与已经结合到细胞表面处的FcεRIα的IgE的交联。该交联可导致下游效应，诸如肥大细胞和嗜碱性粒细胞活化，并引发不想要的过敏反应。如下文所述，评估本文所述的各种抗IgE抗体结合到受体结合的IgE并因此触发下游事件的能力。
A.肥大细胞活化测定
从hIgE/hFcεRIα小鼠中分离骨髓细胞。使细胞在RPMI+10％FBS+Glut+Pen/Strep+30ng/mL IL-3中分化16天。将96孔中的3E+06/mL(100μL)骨髓肥大细胞用3μg/mL IgE致敏2.5小时，以负载受体FcεRIα。在去除过量IgE后，将不同浓度的抗IgE抗体添加到致敏细胞中，持续30分钟。将100μL细胞悬浮液转移到200μL冰冷的FACS缓冲液中，以终止脱粒反应和CD63再循环。通过观察cKit+CD49b-(肥大细胞)CD63+细胞(活化标志物)来鉴别活化的肥大细胞。结果示于图15中。部分A显示用20μg/mL抗体的激发，并且部分B显示用200μg/ml抗体的激发。除了抗体13E4-hIgG1-ABDEGTM和18B9-hIgG1-ABDEG之外，所测试的各种抗IgE抗体均显示，即使在所测试的较高浓度下，肥大细胞也基本上没有活化。
B.嗜碱性粒细胞活化测试
通过流式细胞术分析抗体与人嗜碱性粒细胞上预结合的人IgE的结合。从屋尘螨变应供体获得血液。在存在各种抗hIgE-ABDEGTM抗体的情况下，根据FLOW
Figure BDA0003368808670001191
试剂盒(BUHLMANN)测量嗜碱性粒细胞活化。通过流式细胞术分析结果并使用FlowJo软件处理原始数据。将嗜碱性粒细胞鉴别为CCR3+细胞。活化的嗜碱性粒细胞定义为CCR3+CD63+细胞。活化的嗜碱性粒细胞的百分比(％)和刺激指数(SI)展示于下表38中。将SI高于2(激发后活化％相对于基础条件下的活化％)和嗜碱性粒细胞活化高于5％视为阳性。
表38通过抗IgE抗体进行嗜碱性粒细胞活化
Figure BDA0003368808670001192
与肥大细胞活化实验所见的结果类似，基于克隆18B9和13E4的抗体表现一定程度的嗜碱性粒细胞活化。所测试的各种其他抗IgE ABDEGTM抗体不活化嗜碱性粒细胞。
C.体内过敏反应
为了评估体内发生过敏反应的潜力，用各种抗IgE抗体激发小鼠。第-1天，通过腹膜内注射15mg/kg的重组人IgE对hFcεRIα/hIgE小鼠进行致敏。在一天后，用50mg/kg或15mg/kg的抗IgE克隆经静脉内激发小鼠。每15分钟测量温度，持续2小时。结果示于图16中。部分A和B显示以15mg/kg剂量施用的抗体在实验时程中的温度变化。部分C显示以50mg/kg剂量施用的抗体在实验时程中的温度变化。
实施例13由IgG和IgE自身抗体诱导的大疱性类天疱疮疾病模型的抑制
使用鼠大疱性类天疱疮BP疾病模型评估ABDEGTM抗体在体内调节疾病的能力。
A.IgG介导的BP疾病
在不存在或存在HEL-ABDEGTM(50μg/g体重)的情况下，对8周龄的人NC16A敲入小鼠腹膜内注射抗hNC16A IgG(250μg/g体重)，并且在注射后48h进行检查。结果示于图17的部分(A)和部分(B)中。HEL-ABDEGTM显著降低了皮肤病的严重程度(参见图17A)，并且这与循环中抗NC16A IgG的显著降低的水平相关(见图17B)。*p＜0.001，每组n＝6。
B.IgE介导的BP疾病
对8周龄的hFcεRI/hNC16A小鼠耳廓处注射抗hNC16A IgE或对照IgE(100ng/g体重)，然后腹膜内注射18E2VLHis-ABDEGTM(50μg/g体重)。在IgE注射后48h检查小鼠。结果示于图17的部分(C)和部分(D)中。用18E2VLHis-ABDEGTM治疗的小鼠展现出临床疾病活性的显著降低(参见图17C)，并且这与皮肤蛋白质提取物中嗜酸性粒细胞过氧化物酶(EPO)活性的显著降低的水平(指示IgE的降低)相关(参见图17D)。*p＜0.01，每组n＝3-5。
序列表
<110> 阿根思公司
<120> IGE-ABDEG抗体
<130> P205317WO00
<150> GB1905150.7
<151> 2019-04-11
<160> 216
<170> PatentIn version 3.5
<210> 1
<211> 221
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成肽
<400> 1
Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe
1 5 10 15
Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Tyr Ile Thr Arg Glu Pro
20 25 30
Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val
35 40 45
Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr
50 55 60
Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val
65 70 75 80
Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys
85 90 95
Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser
100 105 110
Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro
115 120 125
Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val
130 135 140
Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly
145 150 155 160
Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp
165 170 175
Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp
180 185 190
Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu Lys
195 200 205
Phe His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly
210 215 220
<210> 2
<211> 227
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成肽
<400> 2
Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly
1 5 10 15
Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Tyr
20 25 30
Ile Thr Arg Glu Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His
35 40 45
Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val
50 55 60
His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr
65 70 75 80
Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly
85 90 95
Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile
100 105 110
Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val
115 120 125
Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser
130 135 140
Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu
145 150 155 160
Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro
165 170 175
Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val
180 185 190
Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met
195 200 205
His Glu Ala Leu Lys Phe His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser
210 215 220
Pro Gly Lys
225
<210> 3
<211> 226
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成肽
<400> 3
Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly
1 5 10 15
Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Tyr
20 25 30
Ile Thr Arg Glu Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His
35 40 45
Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val
50 55 60
His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr
65 70 75 80
Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly
85 90 95
Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile
100 105 110
Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val
115 120 125
Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser
130 135 140
Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu
145 150 155 160
Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro
165 170 175
Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val
180 185 190
Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met
195 200 205
His Glu Ala Leu Lys Phe His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser
210 215 220
Pro Gly
225
<210> 4
<211> 330
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成肽
<400> 4
Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys
1 5 10 15
Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr
20 25 30
Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser
35 40 45
Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser
50 55 60
Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr
65 70 75 80
Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys
85 90 95
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100 105 110
Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro
115 120 125
Lys Pro Lys Asp Thr Leu Tyr Ile Thr Arg Glu Pro Glu Val Thr Cys
130 135 140
Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp
145 150 155 160
Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu
165 170 175
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180 185 190
His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn
195 200 205
Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly
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Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu
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Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr
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Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn
260 265 270
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275 280 285
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Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
325 330
<210> 5
<211> 221
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成肽
<400> 5
Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly Gly Pro Ser Val Phe
1 5 10 15
Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Tyr Ile Thr Arg Glu Pro
20 25 30
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35 40 45
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50 55 60
Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val
65 70 75 80
Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys
85 90 95
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100 105 110
Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro
115 120 125
Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val
130 135 140
Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly
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Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp
165 170 175
Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp
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210 215 220
<210> 6
<211> 227
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成肽
<400> 6
Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly
1 5 10 15
Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Tyr
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Ile Thr Arg Glu Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His
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195 200 205
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210 215 220
Pro Gly Lys
225
<210> 7
<211> 226
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成肽
<400> 7
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1 5 10 15
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180 185 190
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195 200 205
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210 215 220
Pro Gly
225
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<213> 人工序列
<220>
<223> 合成肽
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180 185 190
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Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr
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Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn
260 265 270
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<211> 5
<212> PRT
<213> 大羊驼
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1 5
<210> 10
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Gly
<210> 11
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Asp Leu Lys Ala Arg Tyr Ser Gly Ser Tyr His Asp Glu Gly Tyr Asp
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Tyr
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<211> 5
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<400> 12
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<213> 大羊驼
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Gly
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<211> 17
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<213> 大羊驼
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Asp Leu Lys Ala Arg Tyr Ser Gly Thr Tyr His Asp Glu Gly Tyr Asp
1 5 10 15
Tyr
<210> 15
<211> 5
<212> PRT
<213> 大羊驼
<400> 15
Asn Tyr Ala Met Ser
1 5
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<211> 17
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<213> 大羊驼
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Ala Ile Ser Trp Asn Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Glu Ser Met Lys
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Gly
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<213> 大羊驼
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Ser Ile Tyr Ser Asp Gly Arg Gly Ser Lys Thr Phe Tyr Ala Asp Ser
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Val Lys Gly
<210> 19
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<212> PRT
<213> 大羊驼
<400> 19
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<211> 5
<212> PRT
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<212> PRT
<213> 大羊驼
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Ser Ile Tyr His Asp Gly Ser His Thr Tyr Tyr Ala Asp Phe Val Lys
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Gly
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<211> 17
<212> PRT
<213> 大羊驼
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Ser
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<211> 17
<212> PRT
<213> 大羊驼
<400> 23
Ser Ile Tyr Ser Asp Gly Ser His Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys
1 5 10 15
Gly
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<212> PRT
<213> 大羊驼
<400> 24
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<212> PRT
<213> 大羊驼
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<211> 17
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<400> 26
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Asp
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<213> 大羊驼
<400> 27
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<212> PRT
<213> 大羊驼
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Gly
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<213> 大羊驼
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<211> 5
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Gly
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<212> PRT
<213> 大羊驼
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Asp Leu Lys Pro Arg Asn Ser Gly Thr Tyr His Asp Glu Gly Tyr Asp
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Asp
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<212> PRT
<213> 大羊驼
<400> 34
Thr Tyr Val Met Ser
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<212> PRT
<213> 大羊驼
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<213> 大羊驼
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<212> PRT
<213> 大羊驼
<400> 37
Asp Tyr Arg Ile Asn Ser Asp Tyr Ala Gly Gly Tyr Asp Tyr
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<212> PRT
<213> 大羊驼
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Gly Thr Ser Tyr Ser Ala Ser Tyr Tyr Tyr Thr Asp Pro Phe Phe Gly
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Ser
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<213> 大羊驼
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Gly
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<213> 大羊驼
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Asp Thr Leu Thr Gly Ala Ser Tyr Ser Asp Ser Leu Tyr Asp Tyr
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Gly
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Ser Ile Tyr Ser Asp Asp Ser Asn Thr Asp Tyr Ala Asp Ser Val Lys
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Gly
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<212> PRT
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Asp Tyr Ala Met Ser
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<212> PRT
<213> 大羊驼
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Gly Ile Ser Trp Lys Gly Gly Ile Ile Tyr Tyr Ala Glu Ser Met Glu
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Gly
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<212> PRT
<213> 大羊驼
<400> 48
Ala Leu Gly Thr Val Ala Ser Gly Gln Tyr Asp Tyr
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<211> 17
<212> PRT
<213> 大羊驼
<400> 49
Ser Ile Ser Ser Asp Gly Ser Asn Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys
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Gly
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<211> 14
<212> PRT
<213> 大羊驼
<400> 50
Asp Asp Asn Ser Gly Ser Asp Tyr Glu Phe Gly Tyr Asp Tyr
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<210> 51
<211> 7
<212> PRT
<213> 大羊驼
<400> 51
Ser Ser Tyr Tyr Asp Trp Thr
1 5
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<212> PRT
<213> 大羊驼
<400> 52
Val Ile His Tyr Asp Gly Ser Thr Tyr Tyr Ser Pro Ser Leu Lys Ser
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<212> PRT
<213> 大羊驼
<400> 53
Ser Tyr Ser Ser Ser Pro Trp Asp Tyr Asp Tyr
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<210> 54
<211> 11
<212> PRT
<213> 大羊驼
<400> 54
Gln Gly Gly Ser Leu Gly Ser Ser Tyr Ala His
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<212> PRT
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Asp Asp Asp Ser Arg Pro Ser
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<211> 10
<212> PRT
<213> 大羊驼
<400> 56
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<212> PRT
<213> 大羊驼
<400> 57
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<210> 58
<211> 10
<212> PRT
<213> 大羊驼
<400> 58
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<212> PRT
<213> 大羊驼
<400> 59
Gln Gly Gly Thr Leu Gly Ser Tyr Gly Ala His
1 5 10
<210> 60
<211> 7
<212> PRT
<213> 大羊驼
<400> 60
Gly Asp Asn Ser Arg Pro Ser
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<400> 63
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<213> 大羊驼
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Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
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Tyr Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Gln Val Thr Val Ser Ser
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Gln Leu Gln Val Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
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Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
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Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr
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Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr
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<213> 大羊驼
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Thr Ala Arg Ile Thr Cys Gln Gly Gly Thr Leu Gly Ser Tyr Gly Ala
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Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Gln Ser Phe Asp Tyr Ser Gly Asn Ala
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Glu Leu Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
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Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
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Thr Ala Lys Ile Thr Cys Gln Gly Gly Ser Leu Gly Ser Asn Tyr Ala
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Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
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Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
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Arg Tyr Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Gln Val Thr Val Ser Ser
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Ser Ser Ala Leu Thr Gln Pro Ser Ala Leu Ser Val Thr Leu Gly Gln
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Thr Ala Lys Ile Thr Cys Gln Gly Gly Ser Leu Gly Ser Ser Tyr Val
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Asp Glu Asp Asp Tyr Tyr Cys Gln Ser Ala Asp Ser Ser Gly Asn Ala
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<212> PRT
<213> 大羊驼
<400> 104
Gln Leu Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
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Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Ala Phe Ser Ser Tyr
20 25 30
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Lys Tyr Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Gln Val Thr Val Ser Ser
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<212> PRT
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Thr Ala Lys Ile Thr Cys Gln Gly Gly Ser Leu Gly Ser Ser Tyr Ala
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Gln Leu Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
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Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
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<212> PRT
<213> 大羊驼
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Asn Phe Met Leu Thr Gln Pro Ser Ala Leu Ser Val Thr Leu Gly Gln
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Thr Ala Arg Ile Thr Cys Gln Gly Asp Arg Leu Gly Ser Arg Tyr Ile
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<212> PRT
<213> 大羊驼
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Glu Val Gln Val Gln Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
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Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Asp Asp Tyr
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Ser Ile Ile Ser Trp Asn Gly Gly Ser Thr Asp Tyr Ala Glu Ser Met
50 55 60
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<212> PRT
<213> 大羊驼
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Asn Phe Met Leu Thr Gln Pro Ser Ala Leu Ser Val Thr Leu Gly Gln
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Thr Ala Lys Ile Thr Cys Gln Gly Gly Ser Leu Gly Thr Ser Tyr Ala
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Tyr Trp Tyr Gln Gln Lys Ala Gly Gln Ala Pro Val Val Val Ile Tyr
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Ser Ser Gly Gly Thr Ala Thr Leu Thr Ile Ser Gly Ala Gln Ala Glu
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Val Phe Gly Gly Gly Thr His Leu Thr Val Leu
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<212> PRT
<213> 大羊驼
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Glu Leu Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Arg Pro Gly Gly
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Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asn Tyr
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Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
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Tyr Asp Asp Trp Gly Gln Gly Thr Gln Val Thr Val Ser Ser
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<212> PRT
<213> 大羊驼
<400> 111
Ser Ser Glu Leu Thr Gln Ala Ser Ala Leu Ser Val Thr Leu Gly Gln
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Thr Ala Lys Ile Thr Cys Gln Gly Gly Ser Leu Gly Ser Ser Tyr Ala
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His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Val Leu Val Ile Tyr
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50 55 60
Ser Ser Gly Gly Arg Ala Thr Leu Thr Ile Ser Gly Ala Gln Ala Glu
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Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu
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<211> 126
<212> PRT
<213> 大羊驼
<400> 112
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Thr Tyr
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Val Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
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Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Ser Glu Asp Thr Ala Met Tyr Tyr Cys
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Thr Thr Gly Thr Ser Tyr Ser Gly Ser Tyr Tyr Tyr Thr Asp Pro Phe
100 105 110
Phe Gly Ser Trp Gly Gln Gly Thr Gln Val Ile Val Ser Ser
115 120 125
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<211> 107
<212> PRT
<213> 大羊驼
<400> 113
His Ser Ala Val Thr Gln Pro Ser Ala Leu Ser Val Thr Leu Gly Gln
1 5 10 15
Thr Ala Lys Ile Thr Cys Gln Gly Gly Ser Leu Gly Ser Asn Tyr Ala
20 25 30
Tyr Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Val Leu Val Ile Tyr
35 40 45
Asp Asp Asp Ser Arg Pro Ser Gly Ile Pro Glu Arg Phe Ser Gly Ser
50 55 60
Ser Ser Gly Gly Thr Ala Thr Leu Thr Ile Ser Gly Ala Gln Ala Glu
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Asp Glu Gly Asp Tyr Tyr Cys Gln Ser Ala Asp Ser Asn Gly Asn Ala
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Val Phe Gly Gly Gly Thr His Leu Thr Val Met
100 105
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<212> PRT
<213> 大羊驼
<400> 114
Gln Val Gln Val Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Gln
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Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Gly Ser Ile Thr Thr Ser
20 25 30
Tyr Tyr Ala Trp Asn Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu
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Trp Met Gly Val Ile Ala Tyr Asp Gly Ser Thr Asp Tyr Ser Pro Ser
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Cys Ala Arg Asp Tyr Arg Ile Asn Ser Asp Tyr Ala Gly Gly Tyr Asp
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Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Gln Val Thr Val Ser Ser
115 120
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<211> 111
<212> PRT
<213> 大羊驼
<400> 115
Gln Pro Val Leu Asn Gln Leu Ser Ser Met Ser Gly Ser Pro Gly Gln
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Thr Val Thr Ile Thr Cys Thr Gly Ser Ser Ser Asn Ile Gly Gly Gly
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<212> PRT
<213> 大羊驼
<400> 116
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Thr Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
20 25 30
Val Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Ser Ile Tyr His Asp Gly Ser His Thr Tyr Tyr Ala Asp Phe Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Ser Gly Thr Ser Tyr Ser Ala Ser Tyr Tyr Tyr Thr Asp Pro Phe
100 105 110
Phe Gly Ser Trp Gly Gln Gly Thr Gln Val Thr Val Ser Ser
115 120 125
<210> 117
<211> 107
<212> PRT
<213> 大羊驼
<400> 117
Ser Tyr Glu Leu Thr Gln Pro Ser Ala Leu Ser Val Thr Leu Gly Gln
1 5 10 15
Thr Ala Lys Ile Thr Cys Gln Gly Gly Ser Leu Gly Ser Asn Tyr Ala
20 25 30
Tyr Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Val Leu Val Ile Tyr
35 40 45
Asp Asp Asp Ser Arg Pro Ser Gly Ile Pro Glu Arg Phe Ser Gly Ser
50 55 60
Ser Ser Gly Gly Thr Ala Thr Leu Thr Ile Ser Gly Ala Gln Ala Glu
65 70 75 80
Asp Glu Gly Asp Tyr Tyr Cys Gln Ser Ala Asp Ser Asn Gly Asn Ala
85 90 95
Val Phe Gly Gly Gly Thr His Leu Thr Val Leu
100 105
<210> 118
<211> 124
<212> PRT
<213> 大羊驼
<400> 118
Gln Val Gln Val Glu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
20 25 30
Tyr Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Ser Ile Ser Ser Asp Gly Ser Asn Pro Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Lys Asp Thr Leu Thr Gly Ala Ser Tyr Ser Asp Ser Leu Tyr Asp
100 105 110
Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Gln Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 119
<211> 107
<212> PRT
<213> 大羊驼
<400> 119
Ser Ser Ala Leu Thr Gln Pro Ser Ala Leu Ser Val Thr Leu Gly Gln
1 5 10 15
Thr Ala Asp Ile Thr Cys Gln Gly Gly Ser Leu Gly Gly Ser Tyr Ala
20 25 30
His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Met Leu Val Ile Tyr
35 40 45
Asp Asp Thr Ser Arg Pro Ser Gly Ile Pro Glu Arg Phe Ser Gly Ser
50 55 60
Ser Ser Gly Asp Arg Val Thr Leu Thr Ile Ser Gly Ala Gln Ala Glu
65 70 75 80
Asp Gly Gly Asp Tyr Tyr Cys Gln Ser Ser Tyr Ser Ser Gly Asn Pro
85 90 95
Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu
100 105
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<211> 124
<212> PRT
<213> 大羊驼
<400> 120
Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
20 25 30
Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Met Val
35 40 45
Ser Ser Ile Tyr Ser Tyr Ser Ser Asn Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
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Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Gln Val Thr Val Ser Ser
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<212> PRT
<213> 大羊驼
<400> 121
Ser Tyr Glu Leu Thr Gln Pro Ser Ala Leu Ser Val Thr Leu Arg Gln
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Thr Ala Lys Ile Thr Cys Gln Gly Asp Asn Leu Gly Asn Asn Tyr Val
20 25 30
Gln Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Glu Leu Val Ile Tyr
35 40 45
Asp Asp Asn Arg Arg Pro Ser Gly Ile Pro Glu Arg Phe Ser Gly Ser
50 55 60
Ser Ser Gly Gly Thr Ala Thr Leu Thr Ile Ser Gly Ala Gln Ala Asp
65 70 75 80
Asp Glu Gly Asp Tyr Tyr Cys Gln Ala Ser Asp Ser Ser Gly Asn Ala
85 90 95
Val Val Gly Gly Gly Thr His Leu Ile Ile Leu
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<211> 126
<212> PRT
<213> 大羊驼
<400> 122
Gln Leu Gln Val Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
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Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
20 25 30
Tyr Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
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Ser Ser Ile Tyr Ser Asp Gly Ser Tyr Ala Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
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Tyr Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Gln Val Thr Val Ser Ser
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<212> PRT
<213> 大羊驼
<400> 123
Gln Ser Ala Leu Thr Gln Pro Ser Ala Leu Ser Val Thr Leu Gly Gln
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Thr Ala Lys Ile Thr Cys Gln Gly Gly Asn Leu Gly Ser Ser Tyr Ala
20 25 30
His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Val Leu Val Ile Tyr
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Asp Asp Asp Ser Arg Pro Ser Gly Ile Pro Glu Arg Phe Ser Gly Ser
50 55 60
Ser Ser Gly Gly Thr Ala Thr Leu Ile Ile Ser Gly Ala Gln Ala Glu
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Asp Glu Gly Asp Tyr Tyr Cys Gln Ser Ala Asp Ser Ser Gly Asn Pro
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Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu
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<212> PRT
<213> 大羊驼
<400> 124
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
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Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
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Tyr Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Arg Val
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Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Gln Val Thr Val Ser Ser
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<212> PRT
<213> 大羊驼
<400> 125
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Thr Ala Lys Ile Thr Cys Gln Gly Gly Ser Leu Gly Ser Ser Tyr Ala
20 25 30
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<211> 121
<212> PRT
<213> 大羊驼
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Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
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Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Asp Asp Tyr
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<212> PRT
<213> 大羊驼
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Ser Ser Ala Leu Thr Gln Pro Pro Ser Val Ser Gly Ser Pro Gly Lys
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Thr Val Thr Ile Ser Cys Ala Gly Thr Ser Asn Asp Val Gly Tyr Gly
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Gln Ser Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ala Ser Tyr Arg Thr Asn
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<212> PRT
<213> 大羊驼
<400> 128
Gln Leu Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
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Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
20 25 30
Tyr Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
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100 105 110
Trp Gly Gln Gly Thr Gln Val Thr Val Ser Ser
115 120
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<211> 107
<212> PRT
<213> 大羊驼
<400> 129
Ser Tyr Glu Leu Thr Gln Pro Ser Ala Val Ser Val Ser Leu Gly Gln
1 5 10 15
Thr Ala Arg Ile Thr Cys Gln Gly Asp Asn Phe Gly Ser Tyr Tyr Ala
20 25 30
Ser Trp Tyr Gln Gln Lys Ser Gly Gln Ala Pro Val Arg Val Ile Tyr
35 40 45
Lys Asp Ser Glu Arg Pro Ser Gly Ile Pro Glu Arg Phe Ser Gly Ser
50 55 60
Ser Ser Gly Asp Thr Ala Thr Leu Thr Ile Ser Gly Ala Gln Phe Glu
65 70 75 80
Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Leu Ser Tyr Asp Asn Asn Gly Ala Pro
85 90 95
Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu
100 105
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<211> 121
<212> PRT
<213> 大羊驼
<400> 130
Glu Leu Gln Leu Val Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Gln
1 5 10 15
Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Ala Ser Ile Thr Ser Ser
20 25 30
Tyr Tyr Asp Trp Thr Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu
35 40 45
Trp Met Gly Val Ile His Tyr Asp Gly Ser Thr Tyr Tyr Ser Pro Ser
50 55 60
Leu Lys Ser Arg Thr Ser Ile Ser Arg Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe
65 70 75 80
Ser Leu Gln Leu Ser Ser Val Thr Pro Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr
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Cys Thr Gln Ser Tyr Ser Ser Ser Pro Trp Asp Tyr Asp Tyr Trp Gly
100 105 110
Gln Gly Thr Gln Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 131
<211> 110
<212> PRT
<213> 大羊驼
<400> 131
Gln Ala Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Val Ser Gly Thr Leu Gly Lys
1 5 10 15
Thr Leu Thr Ile Ser Cys Ala Gly Thr Ser Ser Asp Ile Gly Gly Tyr
20 25 30
Asn Ser Val Ser Trp Tyr Gln Gln Leu Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu
35 40 45
Leu Ile Tyr Glu Val Asn Lys Arg Ala Ser Gly Ile Pro Asp Arg Phe
50 55 60
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65 70 75 80
Gln Ser Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ala Ser Tyr Arg Asn Ser
85 90 95
Asn Asn Val Val Phe Gly Gly Gly Thr His Leu Thr Val Leu
100 105 110
<210> 132
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成肽
<400> 132
Ser Tyr Val Met His
1 5
<210> 133
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成肽
<400> 133
Ser Tyr Val Met His
1 5
<210> 134
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成肽
<400> 134
Ser Tyr Tyr Met His
1 5
<210> 135
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成肽
<400> 135
Gln Gly Asp Arg Leu Gly Ser Arg Tyr Ile His
1 5 10
<210> 136
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成肽
<400> 136
His Ser Phe Asp Tyr Ser Gly Asn Ala Val
1 5 10
<210> 137
<211> 126
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成肽
<400> 137
Gln Leu Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
20 25 30
Val Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
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65 70 75 80
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100 105 110
Phe Gly Ser Trp Gly Gln Gly Thr Gln Val Thr Val Ser Ser
115 120 125
<210> 138
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成肽
<400> 138
Asn Phe Met Leu Thr Gln Pro Ser Ala Leu Ser Val Thr Leu Gly Gln
1 5 10 15
Thr Ala Arg Ile Thr Cys Gln Gly Asp Arg Leu Gly Ser Arg Tyr Ile
20 25 30
His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Pro Gln Ala Pro Val Leu Val Ile His
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100 105
<210> 139
<211> 127
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成肽
<400> 139
Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
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<210> 140
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成肽
<400> 140
Ser Ser Ala Leu Thr Gln Pro Ser Ala Leu Ser Val Thr Leu Gly Gln
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His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Val Leu Val Ile His
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Asp Glu Asp Asp Tyr Tyr Cys Gln Ser Ala Asp Ser Ser Gly Asn Ala
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100 105
<210> 141
<211> 123
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成肽
<400> 141
Gln Leu Gln Val Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
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<210> 142
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成肽
<400> 142
Asn Phe Met Leu Thr Gln Pro Ser Ala Val Ser Val Ser Leu Glu Gln
1 5 10 15
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<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成肽
<400> 143
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1 5
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<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成肽
<400> 144
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1 5 10 15
<210> 145
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<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成肽
<400> 145
Gly Ser His Tyr Phe Gly His Trp His Phe Ala Val
1 5 10
<210> 146
<211> 121
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成肽
<400> 146
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Val Ser Gly Tyr Ser Ile Thr Ser Gly
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<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成肽
<400> 147
Arg Ala Ser Gln Ser Val Asp Tyr Asp Gly Asp Ser Tyr Met Asn
1 5 10 15
<210> 148
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<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成肽
<400> 148
Ala Ala Ser Tyr Leu Glu Ser
1 5
<210> 149
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成肽
<400> 149
Gln Gln Ser His Glu Asp Pro Tyr Thr
1 5
<210> 150
<211> 111
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成肽
<400> 150
Asp Ile Gln Leu Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Asp Tyr Asp
20 25 30
Gly Asp Ser Tyr Met Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro
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Lys Leu Leu Ile Tyr Ala Ala Ser Tyr Leu Glu Ser Gly Val Pro Ser
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65 70 75 80
Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser His
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Glu Asp Pro Tyr Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105 110
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<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成肽
<400> 151
Trp Tyr Trp Leu Glu
1 5
<210> 152
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成肽
<400> 152
Glu Ile Asp Pro Gly Thr Phe Thr Thr Asn Tyr Asn Glu Lys Phe Lys
1 5 10 15
Ala
<210> 153
<211> 14
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成肽
<400> 153
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1 5 10
<210> 154
<211> 123
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成肽
<400> 154
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Met Lys Pro Gly Ser
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<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成肽
<400> 155
Arg Ala Ser Gln Ser Ile Gly Thr Asn Ile His
1 5 10
<210> 156
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成肽
<400> 156
Tyr Ala Ser Glu Ser Ile Ser
1 5
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<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成肽
<400> 157
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1 5
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<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成肽
<400> 158
Glu Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Val Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Gly Thr Asn
20 25 30
Ile His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile
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Tyr Tyr Ala Ser Glu Ser Ile Ser Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Ser
65 70 75 80
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<213> 智人
<400> 163
Cys Pro Arg Cys Pro Glu Pro Lys Ser Cys Asp Thr Pro Pro Pro Cys
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Pro Arg Cys Pro Glu Pro Lys Ser Cys Asp Thr Pro Pro Pro Cys Pro
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Arg Cys Pro Glu Pro Lys Ser Cys Asp Thr Pro Pro Pro Cys Pro Arg
35 40 45
Cys Pro
50
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1
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<213> 人工序列
<220>
<223> 合成肽
<400> 171
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Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
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<220>
<223> 合成肽
<400> 172
Ser Ser Glu Leu Thr Gln Asp Pro Ala Val Ser Val Ala Leu Gly Gln
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Thr Val Arg Ile Thr Cys Gln Gly Gly Ser Leu Gly Ser Asn Tyr Ala
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<213> 人工序列
<220>
<223> 合成肽
<400> 173
Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
20 25 30
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50 55 60
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<220>
<223> 合成肽
<400> 174
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Thr Val Arg Ile Thr Cys Gln Gly Asp Arg Leu Gly Ser Arg Tyr Ile
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<213> 人工序列
<220>
<223> 合成肽
<400> 175
Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
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Val Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
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<223> 合成肽
<400> 176
Ser Ser Glu Leu Thr Gln Asp Pro Ala Val Ser Val Ala Leu Gly Gln
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Thr Val Arg Ile Thr Cys Gln Gly Gly Ser Leu Gly Ser Ser Tyr Val
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Ala
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<223> 合成肽
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<223> 合成肽
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<223> 合成肽
<400> 183
Gln Gln Ser Trp Ser His Pro Thr Thr
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<223> 合成肽
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<211> 123
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成肽
<400> 185
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Met Lys Pro Gly Ser
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Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Ser Trp Tyr
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Trp Leu Glu Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly His Gly Leu Glu Trp Met
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<211> 123
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成肽
<400> 186
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Met Lys Pro Gly Ser
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Ser Trp Tyr
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Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 187
<211> 123
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成肽
<400> 187
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Met Lys Pro Gly Ser
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Ser Trp Tyr
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His Leu Glu Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly His Gly Leu Glu Trp Met
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<211> 123
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成肽
<400> 188
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Met Lys Pro Gly Ser
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Ser Trp Tyr
20 25 30
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65 70 75 80
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115 120
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<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成肽
<400> 189
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1 5 10 15
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<213> 人工序列
<220>
<223> 合成肽
<400> 190
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65 70 75 80
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Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
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<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成肽
<400> 191
Glu Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Val Ser Pro Gly
1 5 10 15
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<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成肽
<400> 192
Glu Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Val Ser Pro Gly
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<213> 人工序列
<220>
<223> 合成肽
<400> 193
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<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成肽
<400> 194
Glu Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Val Ser Pro Gly
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100 105
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<213> 人工序列
<220>
<223> 合成肽
<400> 195
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1 5
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<220>
<223> 合成肽
<400> 196
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<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成肽
<400> 197
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1 5 10
<210> 198
<211> 16
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成肽
<400> 198
Ser Ile His Tyr Asp His Ser Thr Asn Tyr Asn Pro Ser Val Lys Gly
1 5 10 15
<210> 199
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成肽
<400> 199
Ala Thr His Tyr Phe Gly His His His Phe Ala Val
1 5 10
<210> 200
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成肽
<400> 200
Trp Gly Ser Tyr Leu Arg Ser
1 5
<210> 201
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成肽
<400> 201
Gln Gln Asn Ala Glu Asp Pro Tyr Thr
1 5
<210> 202
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成肽
<400> 202
Arg Ala Ser Gln Ser Val Asp Tyr His Gly Asp Ser Tyr Met Asn
1 5 10 15
<210> 203
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成肽
<400> 203
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1 5 10 15
<210> 204
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成肽
<400> 204
Arg Ala Ser Gln Ser Val Asp Tyr His Gly Asp His Tyr Met Asn
1 5 10 15
<210> 205
<211> 121
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成肽
<400> 205
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
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<210> 206
<211> 121
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成肽
<400> 206
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
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<213> 人工序列
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<223> 合成肽
<400> 207
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Val Ser Gly Tyr Ser Ile Thr Ser Gly
20 25 30
His Arg Trp Glu Trp Ile Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp
35 40 45
Val Ala Ser Ile His Tyr Asp Gly Ser Thr Asn Tyr Asn Pro Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Ile Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser Lys Asn Thr Phe Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Ala Thr His Tyr Phe Gly His His His Phe Ala Val Trp Gly
100 105 110
Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 208
<211> 121
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成肽
<400> 208
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Val Ser Gly Tyr Ser Ile Thr Ser Gly
20 25 30
His Arg Trp Glu Trp Ile Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp
35 40 45
Val Ala Ser Ile His Tyr Asp His Ser Thr Asn Tyr Asn Pro Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Ile Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser Lys Asn Thr Phe Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Ala Thr His Tyr Phe Gly His His His Phe Ala Val Trp Gly
100 105 110
Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 209
<211> 111
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成肽
<400> 209
Asp Ile Gln Leu Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Asp Tyr Asp
20 25 30
Gly Asp Ser Tyr Met Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro
35 40 45
Lys Leu Leu Ile Glu Trp Gly Ser Tyr Leu Arg Ser Gly Val Pro Ser
50 55 60
Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser
65 70 75 80
Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Asn Ala
85 90 95
Glu Asp Pro Tyr Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105 110
<210> 210
<211> 111
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成肽
<400> 210
Asp Ile Gln Leu Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Asp Tyr His
20 25 30
Gly Asp Ser Tyr Met Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro
35 40 45
Lys Leu Leu Ile Glu Trp Gly Ser Tyr Leu Arg Ser Gly Val Pro Ser
50 55 60
Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser
65 70 75 80
Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Asn Ala
85 90 95
Glu Asp Pro Tyr Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105 110
<210> 211
<211> 111
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成肽
<400> 211
Asp Ile Gln Leu Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Asp Tyr Asp
20 25 30
Gly Asp His Tyr Met Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro
35 40 45
Lys Leu Leu Ile Glu Trp Gly Ser Tyr Leu Arg Ser Gly Val Pro Ser
50 55 60
Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser
65 70 75 80
Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Asn Ala
85 90 95
Glu Asp Pro Tyr Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105 110
<210> 212
<211> 111
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成肽
<400> 212
Asp Ile Gln Leu Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Asp Tyr His
20 25 30
Gly Asp His Tyr Met Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro
35 40 45
Lys Leu Leu Ile Glu Trp Gly Ser Tyr Leu Arg Ser Gly Val Pro Ser
50 55 60
Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser
65 70 75 80
Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Asn Ala
85 90 95
Glu Asp Pro Tyr Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105 110
<210> 213
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成肽
<400> 213
Gln Gln Ser Asp Ser His Pro Thr Thr
1 5
<210> 214
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成肽
<400> 214
His Gln Ser Asp Ser Trp Pro Thr Thr
1 5
<210> 215
<211> 124
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成肽
<400> 215
Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly Ser Leu
1 5 10 15
Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr Val Met
20 25 30
Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val Ser Ser
35 40 45
Ile Tyr His Asp Gly Ser His Thr Tyr Tyr Ala Asp Phe Val Lys Gly
50 55 60
Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr Leu Gln
65 70 75 80
Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Lys
85 90 95
Gly Thr Ser Tyr Ser Gly Ser Tyr Tyr Tyr Thr Asp Pro Phe Phe Gly
100 105 110
Ser Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 216
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成肽
<400> 216
Ser Ser Glu Leu Thr Gln Asp Pro Ala Val Ser Val Ala Leu Gly Gln
1 5 10 15
Thr Val Arg Ile Thr Cys Gln Gly Asp Arg Leu Gly Ser Arg Tyr Ile
20 25 30
Tyr Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Val Leu Val Ile Tyr
35 40 45
Asp Asp Asp Arg Arg Pro Ser Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser
50 55 60
Ser Ser Gly Asn Thr Ala Ser Leu Thr Ile Thr Gly Ala Gln Ala Glu
65 70 75 80
Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Gln Ser Ala Asp Ser Ser Gly Asn Pro
85 90 95
Val Phe Gly Gly Gly Thr Gln Leu Thr Val Leu
100 105

Claims (76)

1.一种结合到IgE的抗体，其中所述抗体包含以相对于野生型Fc结构域增加的亲和力结合到FcRn的变体Fc结构域或其FcRn结合片段。
2.根据权利要求1所述的抗体，其中所述变体Fc结构域或其FcRn结合片段以相对于野生型IgG Fc结构域增加的亲和力结合到FcRn。
3.根据权利要求1所述的抗体，其中所述变体Fc结构域或其FcRn结合片段以相对于野生型人IgG Fc结构域、优选野生型人IgG1 Fc结构域增加的亲和力结合到人FcRn。
4.根据权利要求1-3中任一项所述的抗体，其中所述变体Fc结构域或其FcRn结合片段在pH 6.0和pH 7.4下，以增加的亲和力结合到人FcRn。
5.根据权利要求1-4中任一项所述的抗体，其中所述变体Fc结构域或其FcRn结合片段在pH 6.0下对人FcRn的结合亲和力相对于野生型人IgG1 Fc结构域增加至少20×，优选至少30×。
6.根据权利要求1-5中任一项所述的抗体，其中所述变体Fc结构域或其FcRn结合片段在pH 6.0下对人FcRn的结合亲和力比KD 15nM更强。
7.根据权利要求1-6中任一项所述的抗体，其中所述变体Fc结构域或其FcRn结合片段在pH 7.4下对人FcRn的结合亲和力比KD 320nM更强。
8.根据权利要求1-7中任一项所述的抗体，其中与所述对应的野生型Fc结构域相比，所述变体Fc结构域或其FcRn结合片段包含至少一个氨基酸取代。
9.根据权利要求1-8中任一项所述的抗体，其中所述变体Fc结构域或其FcRn结合片段包含选自以下的至少一种氨基酸：237M；238A；239K；248I；250A；250F；250I；250M；250Q；250S；250V；250W；250Y；252F；252W；252Y；254T；255E；256D；256E；256Q；257A；257G；257I；257L；257M；257N；257S；257T；257V；258H；265A；270F；286A；286E；289H；297A；298G；303A；305A；307A；307D；307F；307G；307H；307I；307K；307L；307M；307N；307P；307Q；307R；307S；307V；307W；307Y；308A；308F；308I；308L；308M；308P；308Q；308T；309A；309D；309E；309P；309R；311A；311H；311I；312A；312H；314K；314R；315A；315H；317A；325G；332V；334L；360H；376A；378V；380A；382A；384A；385D；385H；386P；387E；389A；389S；424A；428A；428D；428F；428G；428H；428I；428K；428L；428N；428P；428Q；428S；428T；428V；428W；428Y；433K；434A；434F；434H；434S；434W；434Y；436H；436I和436F，其中所述位置是根据EU编号来定义。
10.根据权利要求1-9中任一项所述的抗体，其中所述变体Fc结构域或其FcRn结合片段包含以下氨基酸：
(i)分别在EU位置252、254、256、433、434和436处的Y、T、E、K、F和Y；
(ii)分别在EU位置250和428处的Q和L；
(iii)分别在EU位置308和434处的P和A；
(iv)分别在EU位置308和434处的P和Y；或
(v)分别在EU位置252、286和434处的Y、E和Y。
11.根据权利要求10所述的抗体，其中所述变体Fc结构域或其FcRn结合片段包含分别在EU位置252、254、256、433、434和436处的氨基酸Y、T、E、K、F和Y。
12.根据权利要求1-11中任一项所述的抗体，其中所述变体Fc结构域或其FcRn结合片段包含选自以下的至少一个氨基酸取代：G237M；P238A；S239K；K248I；T250A；T250F；T250I；T250M；T250Q；T250S；T250V；T250W；T250Y；M252F；M252W；M252Y；S254T；R255E；T256D；T256E；T256Q；P257A；P257G；P257I；P257L；P257M；P257N；P257S；P257T；P257V；E258H；D265A；D270F；N286A；N286E；T289H；N297A；S298G；V303A；V305A；T307A；T307D；T307F；T307G；T307H；T307I；T307K；T307L；T307M；T307N；T307P；T307Q；T307R；T307S；T307V；T307W；T307Y；V308A；V308F；V308I；V308L；V308M；V308P；V308Q；V308T；V309A；V309D；V309E；V309P；V309R；Q311A；Q311H；Q311I；D312A；D312H；L314K；L314R；N315A；N315H；K317A；N325G；I332V；K334L；K360H；D376A；A378V；E380A；E382A；N384A；G385D；G385H；Q386P；P387E；N389A；N389S；S424A；M428A；M428D；M428F；M428G；M428H；M428I；M428K；M428L；M428N；M428P；M428Q；M428S；M428T；M428V；M428W；M428Y；H433K；N434A；N434F；N434H；N434S；N434W；N434Y；Y436H；Y436I和Y436F，其中所述位置是根据EU编号来定义。
13.根据权利要求1-12中任一项所述的抗体，其中所述变体Fc结构域或其FcRn结合片段包含以下氨基酸取代：
(i)M252Y、S254T、T256E、H433K和N434F；
(ii)T250Q及M428L；
(iii)V308P及N434A；
(iv)V308P和N434Y；或
(v)M252Y、N286E和N434Y。
14.根据权利要求13所述的抗体，其中所述变体Fc结构域或其FcRn结合片段包含以下氨基酸取代：M252Y、S254T、T256E、H433K和N434F。
15.根据权利要求1-14中任一项所述的抗体，其中所述变体Fc结构域或其FcRn结合片段不包含分别在EU位置252、308和434处的氨基酸Y、P和Y的组合，或不包含以下氨基酸取代的组合：M252Y、V308P和N434Y。
16.一种结合到IgE的抗体，其中所述抗体包含变体Fc结构域或其FcRn结合片段，所述变体Fc结构域或FcRn结合片段包含分别在EU位置252、254、256、433、434和436处的氨基酸Y、T、E、K、F和Y。
17.根据权利要求1-16中任一项所述的抗体，其中所述变体Fc结构域或其FcRn结合片段是变体人Fc结构域或其FcRn结合片段。
18.根据权利要求1-17中任一项所述的抗体，其中所述变体Fc结构域或其FcRn结合片段是变体IgG Fc结构域或其FcRn结合片段。
19.根据权利要求1-18中任一项所述的抗体，其中所述变体Fc结构域或其FcRn结合片段是变体IgG1 Fc结构域或其FcRn结合片段。
20.根据权利要求1-19中任一项所述的抗体，其中与所述对应的野生型Fc结构域相比，所述变体Fc结构域或其FcRn结合片段由不超过20个氨基酸取代组成。
21.根据权利要求1-19中任一项所述的抗体，其中与所述对应的野生型Fc结构域相比，所述变体Fc结构域或其FcRn结合片段由不超过10个氨基酸取代组成。
22.根据权利要求1-19中任一项所述的抗体，其中与所述对应的野生型Fc结构域相比，所述变体Fc结构域或其FcRn结合片段由不超过5个氨基酸取代组成。
23.根据权利要求1-22中任一项所述的抗体，其中所述变体Fc结构域包含SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2或SEQ ID NO:3中所示的氨基酸序列，或由SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2或SEQID NO:3中所示的氨基酸序列组成。
24.根据权利要求1-22中任一项所述的抗体，其中所述变体Fc结构域包含SEQ ID NO:5、SEQ ID NO:6或SEQ ID NO:7中所示的氨基酸序列，或由SEQ ID NO:5、SEQ ID NO:6或SEQID NO:7中所示的氨基酸序列组成。
25.根据权利要求1-24中任一项所述的抗体，其中所述变体Fc结构域或其FcRn结合片段包含在变体Fc区内，所述变体Fc区由两个Fc结构域或其FcRn结合片段组成。
26.根据权利要求25所述的抗体，其中所述变体Fc区的所述两个Fc结构域或FcRn结合片段相同。
27.根据权利要求26所述的抗体，其中所述变体Fc区的所述两个Fc结构域各自包含SEQID NO:1、SEQ ID NO:2或SEQ ID NO:3中所示的氨基酸序列，或由SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2或SEQ ID NO:3中所示的氨基酸序列组成。
28.根据权利要求26所述的抗体，其中所述变体Fc区的所述两个Fc结构域各自包含SEQID NO:5、SEQ ID NO:6或SEQ ID NO:7中所示的氨基酸序列，或由SEQ ID NO:5、SEQ ID NO:6或SEQ ID NO:7中所示的氨基酸序列组成。
29.根据权利要求25-28中任一项所述的抗体，其中所述变体Fc区具有增加的对CD16a的亲和力。
30.根据权利要求25-28中任一项所述的抗体，其中所述变体Fc区的所述Fc结构域不包含在EU位置297处的N-连接聚糖。
31.根据权利要求25-28中任一项所述的抗体，其中所述变体Fc区的所述Fc结构域包含在EU位置297处的非岩藻糖基化的N-连接聚糖。
32.根据权利要求25-28中任一项所述的抗体，其中所述变体Fc区的所述Fc结构域包含在所述Fc结构域的EU位置297处具有等分GlcNac的N-连接聚糖。
33.根据权利要求1-32中任一项所述的抗体，其中所述抗体结合到IgE的CH3结构域。
34.根据权利要求1-33中任一项所述的抗体，其中所述抗体抑制IgE与FcεRI的结合。
35.根据权利要求1-34中任一项所述的抗体，其中所述抗体抑制肥大细胞或嗜碱性粒细胞脱粒。
36.根据权利要求1-35中任一项所述的抗体，其中所述抗体不是过敏性的。
37.根据权利要求1-36中任一项所述的抗体，其中所述抗体在酸性pH下比在中性pH下展现出更低的抗原结合活性。
38.根据权利要求37所述的抗体，其中在酸性pH下的抗原结合活性和在中性pH下的抗原结合活性的比率为至少2，如通过KD(在酸性pH下)/KD(在中性pH下)所测量。
39.根据权利要求37或38所述的抗体，其中一个或多个CDR包含一个或多个His取代。
40.根据权利要求1-39中任一项所述的抗体，其中所述抗体是IgG抗体，优选IgG1抗体。
41.根据权利要求1-40中任一项所述的抗体，其中所述抗体是非人抗体的人源化或种系化变体。
42.根据权利要求41所述的抗体，其中所述非人抗体是骆驼科动物来源的。
43.根据权利要求1-42中任一项所述的抗体，其中所述抗体包含可变重链结构域(VH)和可变轻链结构域(VL)，其中所述VH和VL结构域包含选自由以下组成的组的CDR序列：
(i)HCDR3，其包含SEQ ID NO:11；HCDR2，其包含SEQ ID NO:10；HCDR1，其包含SEQ IDNO:9；LCDR3，其包含SEQ ID NO:56；LCDR2，其包含SEQ ID NO:55；和LCDR1，其包含SEQ IDNO:54；
(ii)HCDR3，其包含SEQ ID NO:14；HCDR2，其包含SEQ ID NO:13；HCDR1，其包含SEQ IDNO:12；LCDR3，其包含SEQ ID NO:58；LCDR2，其包含SEQ ID NO:55；和LCDR1，其包含SEQ IDNO:57；
(iii)HCDR3，其包含SEQ ID NO:17；HCDR2，其包含SEQ ID NO:16；HCDR1，其包含SEQ IDNO:15；LCDR3，其包含SEQ ID NO:61；LCDR2，其包含SEQ ID NO:60；和LCDR1，其包含SEQ IDNO:59；
(iv)HCDR3，其包含SEQ ID NO:19；HCDR2，其包含SEQ ID NO:18；HCDR1，其包含SEQ IDNO:12；LCDR3，其包含SEQ ID NO:61；LCDR2，其包含SEQ ID NO:60；和LCDR1，其包含SEQ IDNO:59；
(v)HCDR3，其包含SEQ ID NO:27；HCDR2，其包含SEQ ID NO:26；HCDR1，其包含SEQ IDNO:25；LCDR3，其包含SEQ ID NO:66；LCDR2，其包含SEQ ID NO:67；和LCDR1，其包含SEQ IDNO:54；
(vi)HCDR3，其包含SEQ ID NO:22；HCDR2，其包含SEQ ID NO:21；HCDR1，其包含SEQ IDNO:20；LCDR3，其包含SEQ ID NO:56；LCDR2，其包含SEQ ID NO:69；和LCDR1，其包含SEQ IDNO:68；
(vii)HCDR3，其包含SEQ ID NO:30；HCDR2，其包含SEQ ID NO:29；HCDR1，其包含SEQ IDNO:28；LCDR3，其包含SEQ ID NO:72；LCDR2，其包含SEQ ID NO:71；和LCDR1，其包含SEQ IDNO:70；
(viii)HCDR3，其包含SEQ ID NO:33；HCDR2，其包含SEQ ID NO:32；HCDR1，其包含SEQID NO:31；LCDR3，其包含SEQ ID NO:56；LCDR2，其包含SEQ ID NO:55；和LCDR1，其包含SEQID NO:54；
(ix)HCDR3，其包含SEQ ID NO:22；HCDR2，其包含SEQ ID NO:23；HCDR1，其包含SEQ IDNO:34；LCDR3，其包含SEQ ID NO:63；LCDR2，其包含SEQ ID NO:55；和LCDR1，其包含SEQ IDNO:62；
(x)HCDR3，其包含SEQ ID NO:37；HCDR2，其包含SEQ ID NO:36；HCDR1，其包含SEQ IDNO:35；LCDR3，其包含SEQ ID NO:75；LCDR2，其包含SEQ ID NO:74；和LCDR1，其包含SEQ IDNO:73；
(xi)HCDR3，其包含SEQ ID NO:38；HCDR2，其包含SEQ ID NO:21；HCDR1，其包含SEQ IDNO:20；LCDR3，其包含SEQ ID NO:63；LCDR2，其包含SEQ ID NO:55；和LCDR1，其包含SEQ IDNO:62；
(xii)HCDR3，其包含SEQ ID NO:40；HCDR2，其包含SEQ ID NO:39；HCDR1，其包含SEQ IDNO:12；LCDR3，其包含SEQ ID NO:78；LCDR2，其包含SEQ ID NO:77；和LCDR1，其包含SEQ IDNO:76；
(xiii)HCDR3，其包含SEQ ID NO:43；HCDR2，其包含SEQ ID NO:42；HCDR1，其包含SEQID NO:41；LCDR3，其包含SEQ ID NO:81；LCDR2，其包含SEQ ID NO:80；和LCDR1，其包含SEQID NO:79；
(xiv)HCDR3，其包含SEQ ID NO:14；HCDR2，其包含SEQ ID NO:13；HCDR1，其包含SEQ IDNO:12；LCDR3，其包含SEQ ID NO:56；LCDR2，其包含SEQ ID NO:55；和LCDR1，其包含SEQ IDNO:82；
(xv)HCDR3，其包含SEQ ID NO:45；HCDR2，其包含SEQ ID NO:44；HCDR1，其包含SEQ IDNO:12；LCDR3，其包含SEQ ID NO:66；LCDR2，其包含SEQ ID NO:55；和LCDR1，其包含SEQ IDNO:54；
(xvi)HCDR3，其包含SEQ ID NO:48；HCDR2，其包含SEQ ID NO:47；HCDR1，其包含SEQ IDNO:46；LCDR3，其包含SEQ ID NO:85；LCDR2，其包含SEQ ID NO:84；和LCDR1，其包含SEQ IDNO:83；
(xvii)HCDR3，其包含SEQ ID NO:50；HCDR2，其包含SEQ ID NO:49；HCDR1，其包含SEQID NO:12；LCDR3，其包含SEQ ID NO:88；LCDR2，其包含SEQ ID NO:87；和LCDR1，其包含SEQID NO:86；以及
(xviii)HCDR3，其包含SEQ ID NO:53；HCDR2，其包含SEQ ID NO:52；HCDR1，其包含SEQID NO:51；LCDR3，其包含SEQ ID NO:91；LCDR2，其包含SEQ ID NO:90；和LCDR1，其包含SEQID NO:89。
44.根据权利要求1-43中任一项所述的抗体，其中所述抗体包含选自由以下组成的组的可变重链结构域(VH)和可变轻链结构域(VL)：
(i)VH结构域，其包含SEQ ID NO:92的氨基酸序列或与该氨基酸序列具有至少80％、90％、95％、98％、99％同一性的氨基酸序列，或由SEQ ID NO:92的氨基酸序列或与该氨基酸序列具有至少80％、90％、95％、98％、99％同一性的氨基酸序列组成，和VL结构域，其包含SEQ ID NO:93的氨基酸序列或与该氨基酸序列具有至少80％、90％、95％、98％、99％同一性的氨基酸序列，或由SEQ ID NO:93的氨基酸序列或与该氨基酸序列具有至少80％、90％、95％、98％、99％同一性的氨基酸序列组成；
(ii)VH结构域，其包含SEQ ID NO:94的氨基酸序列或与该氨基酸序列具有至少80％、90％、95％、98％、99％同一性的氨基酸序列，或由SEQ ID NO:94的氨基酸序列或与该氨基酸序列具有至少80％、90％、95％、98％、99％同一性的氨基酸序列组成，和VL结构域，其包含SEQ ID NO:95的氨基酸序列或与该氨基酸序列具有至少80％、90％、95％、98％、99％同一性的氨基酸序列，或由SEQ ID NO:95的氨基酸序列或与该氨基酸序列具有至少80％、90％、95％、98％、99％同一性的氨基酸序列组成；
(iii)VH结构域，其包含SEQ ID NO:96的氨基酸序列或与该氨基酸序列具有至少80％、90％、95％、98％、99％同一性的氨基酸序列，或由SEQ ID NO:96的氨基酸序列或与该氨基酸序列具有至少80％、90％、95％、98％、99％同一性的氨基酸序列组成，和VL结构域，其包含SEQ ID NO:97的氨基酸序列或与该氨基酸序列具有至少80％、90％、95％、98％、99％同一性的氨基酸序列，或由SEQ ID NO:97的氨基酸序列或与该氨基酸序列具有至少80％、90％、95％、98％、99％同一性的氨基酸序列组成；
(iv)VH结构域，其包含SEQ ID NO:98的氨基酸序列或与该氨基酸序列具有至少80％、90％、95％、98％、99％同一性的氨基酸序列，或由SEQ ID NO:98的氨基酸序列或与该氨基酸序列具有至少80％、90％、95％、98％、99％同一性的氨基酸序列组成，和VL结构域，其包含SEQ ID NO:99的氨基酸序列或与该氨基酸序列具有至少80％、90％、95％、98％、99％同一性的氨基酸序列，或由SEQ ID NO:99的氨基酸序列或与该氨基酸序列具有至少80％、90％、95％、98％、99％同一性的氨基酸序列组成；
(v)VH结构域，其包含SEQ ID NO:104的氨基酸序列或与该氨基酸序列具有至少80％、90％、95％、98％、99％同一性的氨基酸序列，或由SEQ ID NO:104的氨基酸序列或与该氨基酸序列具有至少80％、90％、95％、98％、99％同一性的氨基酸序列组成，和VL结构域，其包含SEQ ID NO:105的氨基酸序列或与该氨基酸序列具有至少80％、90％、95％、98％、99％同一性的氨基酸序列，或由SEQ ID NO:105的氨基酸序列或与该氨基酸序列具有至少80％、90％、95％、98％、99％同一性的氨基酸序列组成；
(vi)VH结构域，其包含SEQ ID NO:106的氨基酸序列或与该氨基酸序列具有至少80％、90％、95％、98％、99％同一性的氨基酸序列，或由SEQ ID NO:106的氨基酸序列或与该氨基酸序列具有至少80％、90％、95％、98％、99％同一性的氨基酸序列组成，和VL结构域，其包含SEQ ID NO:107的氨基酸序列或与该氨基酸序列具有至少80％、90％、95％、98％、99％同一性的氨基酸序列，或由SEQ ID NO:107的氨基酸序列或与该氨基酸序列具有至少80％、90％、95％、98％、99％同一性的氨基酸序列组成；
(vii)VH结构域，其包含SEQ ID NO:108的氨基酸序列或与该氨基酸序列具有至少80％、90％、95％、98％、99％同一性的氨基酸序列，或由SEQ ID NO:108的氨基酸序列或与该氨基酸序列具有至少80％、90％、95％、98％、99％同一性的氨基酸序列组成，和VL结构域，其包含SEQ ID NO:109的氨基酸序列或与该氨基酸序列具有至少80％、90％、95％、98％、99％同一性的氨基酸序列，或由SEQ ID NO:109的氨基酸序列或与该氨基酸序列具有至少80％、90％、95％、98％、99％同一性的氨基酸序列组成；
(viii)VH结构域，其包含SEQ ID NO:110的氨基酸序列或与该氨基酸序列具有至少80％、90％、95％、98％、99％同一性的氨基酸序列，或由SEQ ID NO:110的氨基酸序列或与该氨基酸序列具有至少80％、90％、95％、98％、99％同一性的氨基酸序列组成，和VL结构域，其包含SEQ ID NO:111的氨基酸序列或与该氨基酸序列具有至少80％、90％、95％、98％、99％同一性的氨基酸序列，或由SEQ ID NO:111的氨基酸序列或与该氨基酸序列具有至少80％、90％、95％、98％、99％同一性的氨基酸序列组成；
(ix)VH结构域，其包含SEQ ID NO:112的氨基酸序列或与该氨基酸序列具有至少80％、90％、95％、98％、99％同一性的氨基酸序列，或由SEQ ID NO:112的氨基酸序列或与该氨基酸序列具有至少80％、90％、95％、98％、99％同一性的氨基酸序列组成，和VL结构域，其包含SEQ ID NO:113的氨基酸序列或与该氨基酸序列具有至少80％、90％、95％、98％、99％同一性的氨基酸序列，或由SEQ ID NO:113的氨基酸序列或与该氨基酸序列具有至少80％、90％、95％、98％、99％同一性的氨基酸序列组成；
(x)VH结构域，其包含SEQ ID NO:114的氨基酸序列或与该氨基酸序列具有至少80％、90％、95％、98％、99％同一性的氨基酸序列，或由SEQ ID NO:114的氨基酸序列或与该氨基酸序列具有至少80％、90％、95％、98％、99％同一性的氨基酸序列组成，和VL结构域，其包含SEQ ID NO:115的氨基酸序列或与该氨基酸序列具有至少80％、90％、95％、98％、99％同一性的氨基酸序列，或由SEQ ID NO:115的氨基酸序列或与该氨基酸序列具有至少80％、90％、95％、98％、99％同一性的氨基酸序列组成；
(xi)VH结构域，其包含SEQ ID NO:116的氨基酸序列或与该氨基酸序列具有至少80％、90％、95％、98％、99％同一性的氨基酸序列，或由SEQ ID NO:116的氨基酸序列或与该氨基酸序列具有至少80％、90％、95％、98％、99％同一性的氨基酸序列组成，和VL结构域，其包含SEQ ID NO:117的氨基酸序列或与该氨基酸序列具有至少80％、90％、95％、98％、99％同一性的氨基酸序列，或由SEQ ID NO:117的氨基酸序列或与该氨基酸序列具有至少80％、90％、95％、98％、99％同一性的氨基酸序列组成；
(xii)VH结构域，其包含SEQ ID NO:118的氨基酸序列或与该氨基酸序列具有至少80％、90％、95％、98％、99％同一性的氨基酸序列，或由SEQ ID NO:118的氨基酸序列或与该氨基酸序列具有至少80％、90％、95％、98％、99％同一性的氨基酸序列组成，和VL结构域，其包含SEQ ID NO:119的氨基酸序列或与该氨基酸序列具有至少80％、90％、95％、98％、99％同一性的氨基酸序列，或由SEQ ID NO:119的氨基酸序列或与该氨基酸序列具有至少80％、90％、95％、98％、99％同一性的氨基酸序列组成；
(xiii)VH结构域，其包含SEQ ID NO:120的氨基酸序列或与该氨基酸序列具有至少80％、90％、95％、98％、99％同一性的氨基酸序列，或由SEQ ID NO:120的氨基酸序列或与该氨基酸序列具有至少80％、90％、95％、98％、99％同一性的氨基酸序列组成，和VL结构域，其包含SEQ ID NO:121的氨基酸序列或与该氨基酸序列具有至少80％、90％、95％、98％、99％同一性的氨基酸序列，或由SEQ ID NO:121的氨基酸序列或与该氨基酸序列具有至少80％、90％、95％、98％、99％同一性的氨基酸序列组成；
(xiv)VH结构域，其包含SEQ ID NO:122的氨基酸序列或与该氨基酸序列具有至少80％、90％、95％、98％、99％同一性的氨基酸序列，或由SEQ ID NO:122的氨基酸序列或与该氨基酸序列具有至少80％、90％、95％、98％、99％同一性的氨基酸序列组成，和VL结构域，其包含SEQ ID NO:123的氨基酸序列或与该氨基酸序列具有至少80％、90％、95％、98％、99％同一性的氨基酸序列，或由SEQ ID NO:123的氨基酸序列或与该氨基酸序列具有至少80％、90％、95％、98％、99％同一性的氨基酸序列组成；
(xv)VH结构域，其包含SEQ ID NO:124的氨基酸序列或与该氨基酸序列具有至少80％、90％、95％、98％、99％同一性的氨基酸序列，或由SEQ ID NO:124的氨基酸序列或与该氨基酸序列具有至少80％、90％、95％、98％、99％同一性的氨基酸序列组成，和VL结构域，其包含SEQ ID NO:125的氨基酸序列或与该氨基酸序列具有至少80％、90％、95％、98％、99％同一性的氨基酸序列，或由SEQ ID NO:125的氨基酸序列或与该氨基酸序列具有至少80％、90％、95％、98％、99％同一性的氨基酸序列组成；
(xvi)VH结构域，其包含SEQ ID NO:126的氨基酸序列或与该氨基酸序列具有至少80％、90％、95％、98％、99％同一性的氨基酸序列，或由SEQ ID NO:126的氨基酸序列或与该氨基酸序列具有至少80％、90％、95％、98％、99％同一性的氨基酸序列组成，和VL结构域，其包含SEQ ID NO:127的氨基酸序列或与该氨基酸序列具有至少80％、90％、95％、98％、99％同一性的氨基酸序列，或由SEQ ID NO:127的氨基酸序列或与该氨基酸序列具有至少80％、90％、95％、98％、99％同一性的氨基酸序列组成；
(xvii)VH结构域，其包含SEQ ID NO:128的氨基酸序列或与该氨基酸序列具有至少80％、90％、95％、98％、99％同一性的氨基酸序列，或由SEQ ID NO:128的氨基酸序列或与该氨基酸序列具有至少80％、90％、95％、98％、99％同一性的氨基酸序列组成，和VL结构域，其包含SEQ ID NO:129的氨基酸序列或与该氨基酸序列具有至少80％、90％、95％、98％、99％同一性的氨基酸序列，或由SEQ ID NO:129的氨基酸序列或与该氨基酸序列具有至少80％、90％、95％、98％、99％同一性的氨基酸序列组成；以及
(xviii)VH结构域，其包含SEQ ID NO:130的氨基酸序列或与该氨基酸序列具有至少80％、90％、95％、98％、99％同一性的氨基酸序列，或由SEQ ID NO:130的氨基酸序列或与该氨基酸序列具有至少80％、90％、95％、98％、99％同一性的氨基酸序列组成，和VL结构域，其包含SEQ ID NO:131的氨基酸序列或与该氨基酸序列具有至少80％、90％、95％、98％、99％同一性的氨基酸序列，或由SEQ ID NO:131的氨基酸序列或与该氨基酸序列具有至少80％、90％、95％、98％、99％同一性的氨基酸序列组成。
45.根据权利要求1-42中任一项所述的抗体，其中所述抗体包含可变重链结构域(VH)和可变轻链结构域(VL)，其中所述VH和VL结构域包含选自由以下组成的组的CDR序列：
(i)HCDR3，其包含SEQ ID NO:22；HCDR2，其包含SEQ ID NO:21；HCDR1，其包含SEQ IDNO:132；LCDR3，其包含SEQ ID NO:56；LCDR2，其包含SEQ ID NO:69；和LCDR1，其包含SEQ IDNO:68；
(ii)HCDR3，其包含SEQ ID NO:22；HCDR2，其包含SEQ ID NO:21；HCDR1，其包含SEQ IDNO:20；LCDR3，其包含SEQ ID NO:56；LCDR2，其包含SEQ ID NO:69；和LCDR1，其包含SEQ IDNO:135；以及
(iii)HCDR3，其包含SEQ ID NO:22；HCDR2，其包含SEQ ID NO:21；HCDR1，其包含SEQ IDNO:132；LCDR3，其包含SEQ ID NO:56；LCDR2，其包含SEQ ID NO:69；和LCDR1，其包含SEQ IDNO:135。
46.根据权利要求1-45中任一项所述的抗体，其中所述抗体包含选自由以下组成的组的可变重链结构域(VH)和可变轻链结构域(VL)：
(i)VH结构域，其包含SEQ ID NO:137的氨基酸序列或与该氨基酸序列具有至少80％、90％、95％、98％、99％同一性的氨基酸序列，或由SEQ ID NO:137的氨基酸序列或与该氨基酸序列具有至少80％、90％、95％、98％、99％同一性的氨基酸序列组成，和VL结构域，其包含SEQ ID NO:107的氨基酸序列或与该氨基酸序列具有至少80％、90％、95％、98％、99％同一性的氨基酸序列，或由SEQ ID NO:107的氨基酸序列或与该氨基酸序列具有至少80％、90％、95％、98％、99％同一性的氨基酸序列组成；
(ii)VH结构域，其包含SEQ ID NO:106的氨基酸序列或与该氨基酸序列具有至少80％、90％、95％、98％、99％同一性的氨基酸序列，或由SEQ ID NO:106的氨基酸序列或与该氨基酸序列具有至少80％、90％、95％、98％、99％同一性的氨基酸序列组成，和VL结构域，其包含SEQ ID NO:138的氨基酸序列或与该氨基酸序列具有至少80％、90％、95％、98％、99％同一性的氨基酸序列，或由SEQ ID NO:138的氨基酸序列或与该氨基酸序列具有至少80％、90％、95％、98％、99％同一性的氨基酸序列组成；以及
(iii)VH结构域，其包含SEQ ID NO:137的氨基酸序列或与该氨基酸序列具有至少80％、90％、95％、98％、99％同一性的氨基酸序列，或由SEQ ID NO:137的氨基酸序列或与该氨基酸序列具有至少80％、90％、95％、98％、99％同一性的氨基酸序列组成，和VL结构域，其包含SEQ ID NO:138的氨基酸序列或与该氨基酸序列具有至少80％、90％、95％、98％、99％同一性的氨基酸序列，或由SEQ ID NO:138的氨基酸序列或与该氨基酸序列具有至少80％、90％、95％、98％、99％同一性的氨基酸序列组成。
47.根据权利要求1-42中任一项所述的抗体，其中所述抗体包含：
可变重链CDR3，其包含SEQ ID NO:22[GTSYSGSYYYTDPFFGS]，或由SEQ ID NO:22[GTSYSGSYYYTDPFFGS]组成；
可变重链CDR2，其包含SEQ ID NO:21[SIYHDGSHTYYADFVKG]，或由SEQ ID NO:21[SIYHDGSHTYYADFVKG]组成；
可变重链CDR1，其包含SEQ ID NO:132[SYVMH]，或由SEQ ID NO:132[SYVMH]组成；
可变轻链CDR3，其包含SEQ ID NO:56[QSADSSGNPV]，或由SEQ ID NO:56[QSADSSGNPV]组成；
可变轻链CDR2，其包含SEQ ID NO:69[DDDRRPS]，或由SEQ ID NO:69[DDDRRPS]组成；以及
可变轻链CDR1，其包含SEQ ID NO:135[QGDRLGSRYIH]，或由SEQ ID NO:135[QGDRLGSRYIH]组成。
48.根据权利要求47所述的抗体，其中所述抗体包含：可变重链结构域(VH)，其包含SEQID NO:137的氨基酸序列或与该氨基酸序列具有至少80％、90％、95％、98％、99％同一性的氨基酸序列，和可变轻链结构域(VL)，其包含SEQ ID NO:138的氨基酸序列或与该氨基酸序列具有至少80％、90％、95％、98％、99％同一性的氨基酸序列。
49.根据权利要求47所述的抗体，其中所述抗体包含：可变重链结构域(VH)，其包含SEQID NO:173的氨基酸序列或与该氨基酸序列具有至少80％、90％、95％、98％、99％同一性的氨基酸序列，和可变轻链结构域(VL)，其包含SEQ ID NO:174的氨基酸序列或与该氨基酸序列具有至少80％、90％、95％、98％、99％同一性的氨基酸序列。
50.根据权利要求1-42中任一项所述的抗体，其中所述抗体包含：
可变重链CDR3，其包含SEQ ID NO:22[GTSYSGSYYYTDPFFGS]，或由SEQ ID NO:22[GTSYSGSYYYTDPFFGS]组成；
可变重链CDR2，其包含SEQ ID NO:21[SIYHDGSHTYYADFVKG]，或由SEQ ID NO:21[SIYHDGSHTYYADFVKG]组成；
可变重链CDR1，其包含SEQ ID NO:20[SYVMS]，或由SEQ ID NO:20[SYVMS]组成；
可变轻链CDR3，其包含SEQ ID NO:56[QSADSSGNPV]，或由SEQ ID NO:56[QSADSSGNPV]组成；
可变轻链CDR2，其包含SEQ ID NO:69[DDDRRPS]，或由SEQ ID NO:69[DDDRRPS]组成；以及
可变轻链CDR1，其包含SEQ ID NO:135[QGDRLGSRYIH]，或由SEQ ID NO:135[QGDRLGSRYIH]组成。
51.根据权利要求50所述的抗体，其中所述抗体包含：可变重链结构域(VH)，其包含SEQID NO:106的氨基酸序列或与该氨基酸序列具有至少80％、90％、95％、98％、99％同一性的氨基酸序列，和可变轻链结构域(VL)，其包含SEQ ID NO:138的氨基酸序列或与该氨基酸序列具有至少80％、90％、95％、98％、99％同一性的氨基酸序列。
52.根据权利要求50所述的抗体，其中所述抗体包含：可变重链结构域(VH)，其包含SEQID NO:215的氨基酸序列或与该氨基酸序列具有至少80％、90％、95％、98％、99％同一性的氨基酸序列，和可变轻链结构域(VL)，其包含SEQ ID NO:174的氨基酸序列或与该氨基酸序列具有至少80％、90％、95％、98％、99％同一性的氨基酸序列。
53.根据权利要求1-41中任一项所述的抗体，其中所述抗体包含：
可变重链CDR3，其包含SEQ ID NO:145[GSHYFGHWHFAV]，或由SEQ ID NO:145[GSHYFGHWHFAV]组成；
可变重链CDR2，其包含SEQ ID NO:144[SITYDGSTNYNPSVKG]，或由SEQ ID NO:144[SITYDGSTNYNPSVKG]组成；
可变重链CDR1，其包含SEQ ID NO:143[SGYSWN]，或由SEQ ID NO:143[SGYSWN]组成；
可变轻链CDR3，其包含SEQ ID NO:149[QQSHEDPYT]，或由SEQ ID NO:149[QQSHEDPYT]组成；
可变轻链CDR2，其包含SEQ ID NO:148[AASYLES]，或由SEQ ID NO:148[AASYLES]组成；以及
可变轻链CDR1，其包含SEQ ID NO:147[RASQSVDYDGDSYMN]，或由SEQ ID NO:147[RASQSVDYDGDSYMN]组成。
54.根据权利要求53所述的抗体，其中所述抗体包含：可变重链结构域(VH)，其包含SEQID NO:146的氨基酸序列或与该氨基酸序列具有至少80％、90％、95％、98％、99％同一性的氨基酸序列，和可变轻链结构域(VL)，其包含SEQ ID NO:150的氨基酸序列或与该氨基酸序列具有至少80％、90％、95％、98％、99％同一性的氨基酸序列。
55.根据权利要求1-41中任一项所述的抗体，其中所述抗体包含：
可变重链CDR3，其包含SEQ ID NO:197[ATHYFGHWHFAV]，或由SEQ ID NO:197[ATHYFGHWHFAV]组成；
可变重链CDR2，其包含SEQ ID NO:198[SIHYDHSTNYNPSVKG]，或由SEQ ID NO:198[SIHYDHSTNYNPSVKG]组成；
可变重链CDR1，其包含SEQ ID NO:195[SGHRWE]，或由SEQ ID NO:195[SGHRWE]组成；
可变轻链CDR3，其包含SEQ ID NO:201[QQNAEDPYT]，或由SEQ ID NO:201[QQNAEDPYT]组成；
可变轻链CDR2，其包含SEQ ID NO:200[WGSYLRS]，或由SEQ ID NO:200[WGSYLRS]组成；以及
可变轻链CDR1，其包含SEQ ID NO:203[RASQSVDYDGDHYMN]，或由SEQ ID NO:203[RASQSVDYDGDHYMN]组成。
56.根据权利要求55所述的抗体，其中所述抗体包含：可变重链结构域(VH)，其包含SEQID NO:206的氨基酸序列或与该氨基酸序列具有至少80％、90％、95％、98％、99％同一性的氨基酸序列，和可变轻链结构域(VL)，其包含SEQ ID NO:211的氨基酸序列或与该氨基酸序列具有至少80％、90％、95％、98％、99％同一性的氨基酸序列。
57.根据权利要求1-41中任一项所述的抗体，其中所述抗体包含：
可变重链CDR3，其包含SEQ ID NO:199[ATHYFGHHHFAV]，或由SEQ ID NO:199[ATHYFGHHHFAV]组成；
可变重链CDR2，其包含SEQ ID NO:196[SIHYDGSTNYNPSVKG]，或由SEQ ID NO:196[SIHYDGSTNYNPSVKG]组成；
可变重链CDR1，其包含SEQ ID NO:195[SGHRWE]，或由SEQ ID NO:195[SGHRWE]组成；
可变轻链CDR3，其包含SEQ ID NO:201[QQNAEDPYT]，或由SEQ ID NO:201[QQNAEDPYT]组成；
可变轻链CDR2，其包含SEQ ID NO:200[WGSYLRS]，或由SEQ ID NO:200[WGSYLRS]组成；以及
可变轻链CDR1，其包含SEQ ID NO:147[RASQSVDYDGDSYMN]，或由SEQ ID NO:147[RASQSVDYDGDSYMN]组成。
58.根据权利要求57所述的抗体，其中所述抗体包含：可变重链结构域(VH)，其包含SEQID NO:207的氨基酸序列或与该氨基酸序列具有至少80％、90％、95％、98％、99％同一性的氨基酸序列，和可变轻链结构域(VL)，其包含SEQ ID NO:209的氨基酸序列或与该氨基酸序列具有至少80％、90％、95％、98％、99％同一性的氨基酸序列。
59.根据权利要求1-41中任一项所述的抗体，其中所述抗体包含：
可变重链CDR3，其包含SEQ ID NO:153[FSHFSGSNYDYFDY]，或由SEQ ID NO:153[FSHFSGSNYDYFDY]组成；
可变重链CDR2，其包含SEQ ID NO:152[EIDPGTFTTNYNEKFKA]，或由SEQ ID NO:152[EIDPGTFTTNYNEKFKA]组成；
可变重链CDR1，其包含SEQ ID NO:151[WYWLE]，或由SEQ ID NO:151[WYWLE]组成；
可变轻链CDR3，其包含SEQ ID NO:157[QQSWSWPTT]，或由SEQ ID NO:157[QQSWSWPTT]组成；
可变轻链CDR2，其包含SEQ ID NO:156[YASESIS]，或由SEQ ID NO:156[YASESIS]组成；以及
可变轻链CDR1，其包含SEQ ID NO:155[RASQSIGTNIH]，或由SEQ ID NO:155[RASQSIGTNIH]组成。
60.根据权利要求59所述的抗体，其中所述抗体包含：可变重链结构域(VH)，其包含SEQID NO:154的氨基酸序列或与该氨基酸序列具有至少80％、90％、95％、98％、99％同一性的氨基酸序列，和可变轻链结构域(VL)，其包含SEQ ID NO:158的氨基酸序列或与该氨基酸序列具有至少80％、90％、95％、98％、99％同一性的氨基酸序列。
61.根据权利要求1-41中任一项所述的抗体，其中所述抗体包含：
可变重链CDR3，其包含SEQ ID NO:180[FSHFSGSNHDYFDY]，或由SEQ ID NO:180[FSHFSGSNHDYFDY]组成；
可变重链CDR2，其包含SEQ ID NO:152[EIDPGTFTTNYNEKFKA]，或由SEQ ID NO:152[EIDPGTFTTNYNEKFKA]组成；
可变重链CDR1，其包含SEQ ID NO:179[WYHLE]，或由SEQ ID NO:179[WYHLE]组成；
可变轻链CDR3，其包含SEQ ID NO:157[QQSWSWPTT]，或由SEQ ID NO:157[QQSWSWPTT]组成；
可变轻链CDR2，其包含SEQ ID NO:156[YASESIS]，或由SEQ ID NO:156[YASESIS]组成；以及
可变轻链CDR1，其包含SEQ ID NO:155[RASQSIGTNIH]，或由SEQ ID NO:155[RASQSIGTNIH]组成。
62.根据权利要求61所述的抗体，其中所述抗体包含：可变重链结构域(VH)，其包含SEQID NO:186的氨基酸序列或与该氨基酸序列具有至少80％、90％、95％、98％、99％同一性的氨基酸序列，和可变轻链结构域(VL)，其包含SEQ ID NO:158的氨基酸序列或与该氨基酸序列具有至少80％、90％、95％、98％、99％同一性的氨基酸序列。
63.一种或多种分离的多核苷酸，其编码根据权利要求1-62中任一项所述的抗体。
64.一种表达载体，其包含根据权利要求63所述的一种或多种多核苷酸，所述多核苷酸可操作地连接到允许所述抗体表达的调节序列。
65.一种宿主细胞或无细胞表达系统，其含有根据权利要求64所述的表达载体。
66.一种产生重组抗体或其抗原结合片段的方法，其包括在允许表达所述抗体或抗原结合片段的条件下培养根据权利要求65所述的宿主细胞或无细胞表达系统，以及回收所表达的抗体或抗原结合片段。
67.一种药物组合物，其包含根据权利要求1-62中任一项所述的抗体和至少一种药学上可接受的载体或赋形剂。
68.根据权利要求1-62中任一项所述的抗体、或根据权利要求67所述的药物组合物，其用作药剂。
69.一种治疗受试者的抗体介导的病症的方法，其中所述方法包括向有需要的患者施用治疗有效量的根据权利要求1-62中任一项所述的抗体或根据权利要求67所述的药物组合物。
70.根据权利要求69所述的方法，其中所述抗体介导的病症是IgE介导的病症。
71.根据权利要求69或70所述的方法，其中所述抗体介导的病症是自身免疫疾病。
72.根据权利要求71所述的方法，其中所述自身免疫疾病选自由以下组成的组：同种异体胰岛移植排斥、斑秃、淀粉样变性、强直性脊柱炎、抗磷脂综合征、自身免疫性爱迪生氏病、阿尔茨海默氏病、抗中性粒细胞胞浆自身抗体(ANCA)、自身免疫性血细胞减少、肾上腺自身免疫疾病、自身免疫性溶血性贫血、自身免疫性肝炎、自身免疫性心肌炎、自身免疫性中性粒细胞减少、自身免疫性卵巢炎和睾丸炎、自身免疫性血小板减少、自身免疫性荨麻疹、贝切特氏病、大疱性类天疱疮、心肌病变、卡斯特氏综合征、乳糜泻性皮炎、慢性疲劳免疫功能障碍综合征、慢性炎性脱髓鞘性多发性神经病变(CIDP)、慢性诱导性荨麻疹、慢性自发性荨麻疹、变应性肉芽肿性血管炎、疤痕性类天疱疮、CREST综合征、冷凝集素病、克罗恩氏病、皮肌炎、盘状狼疮、特发性混合型冷球蛋白血症、VIII因子缺乏、纤维肌痛-纤维肌炎、肾小球肾炎、格雷夫斯病、格-巴二氏综合征、古德帕斯彻氏综合征、移植物抗宿主病(GVHD)、桥本氏甲状腺炎、血友病A、特发性肺纤维化、特发性血小板减少性紫癜(ITP)、IgA神经病变、IgM多发性神经病变、免疫介导的血小板减少、幼年型关节炎、川崎氏病、扁平苔癣、系统性红斑狼疮、狼疮肾炎、梅尼埃氏病、混合性结缔组织病、蕈样肉芽肿、多发性硬化、1型糖尿病、多灶性运动神经病变(MMN)、重症肌无力、大疱性类天疱疮、寻常天疱疮、落叶型天疱疮、恶性贫血、结节性多动脉炎、多软骨炎、多腺性综合征、风湿性多肌痛、多肌炎和皮肌炎、多神经炎、原发性丙种球蛋白缺乏血症、原发性胆汁性肝硬化、银屑病、银屑病性关节炎、雷诺现象、莱特尔氏综合征、类风湿性关节炎、结节病、硬皮病、夏普综合征、干燥综合征、实体器官移植排斥、僵体综合征、系统性红斑狼疮、高安动脉炎、中毒性表皮坏死松解症(TEN)、斯-约二氏综合征(SJS)、颞动脉炎/巨细胞性动脉炎、血栓性血小减少性紫癜、血小板减少性紫癜、溃疡性结肠炎、葡萄膜炎、疱疹样皮炎、抗中性粒细胞胞质抗体相关血管炎病、白斑和韦格纳氏肉芽肿病。
73.根据权利要求72所述的方法，其中所述自身免疫疾病是慢性自发性荨麻疹。
74.根据权利要求72所述的方法，其中所述自身免疫疾病是大疱性类天疱疮。
75.根据权利要求69-74中任一项所述的方法，其中向所述受试者同时或依序施用所述抗体与另外的治疗剂。
76.根据权利要求1-62中任一项所述的抗体或根据权利要求67所述的药物组合物，其用于治疗慢性自发性荨麻疹或大疱性类天疱疮。
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