CN113875991A - 一步自组装法制备琥珀酰化酪蛋白-磷脂-花色苷纳米粒及用途 - Google Patents
一步自组装法制备琥珀酰化酪蛋白-磷脂-花色苷纳米粒及用途 Download PDFInfo
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Abstract
本发明属于食品营养领域，具体涉及一种琥珀酰化酪蛋白‑磷脂‑花色苷纳米粒的一步自组装制备方法以及该纳米粒在胃肠道持续缓释的应用。通过调节处方工艺，采用“一步自组装法”简单、高效的将琥珀酰化酪蛋白、磷脂与花色苷混合制得纳米粒，具体方法如下：取定量的花色苷用HCl溶解，加入磷脂溶液，水浴搅拌后，加入琥珀酰化酪蛋白(超纯水)溶液，再次水浴搅拌，使两者充分混合，即得目标花色苷纳米粒。花色苷纳米粒粒径为70～100nm(PDI＝0.10～0.15)，包封率为40～70％，载药量为5～20％。本发明的“一步自组装法”制备花色苷纳米粒简单、快速、易于后期产业化，可显著提高花色苷缓释吸收，极大提高花色苷的生物利用度。
Description
技术领域
本发明属于食品营养领域，具体涉及一种琥珀酰化酪蛋白-磷脂-花色苷纳米粒的一步自组装制备方法以及该纳米粒在胃肠道持续缓释的应用。
背景技术
花色苷是一类具有多种生物活性的水溶性天然色素，其结构母核是2-苯基苯并吡喃阳离子，属于黄酮类化合物，在自然界中广泛分布于植物的叶片、花、果实和种子中。花色苷对人体具有许多生理保健功能，例如：清除体内自由基、抗肿瘤、保护肝脏、预防糖尿病、保护视力和改善老年痴呆等，因此花色苷对膳食营养和慢性疾病的预防具有重要意义，受到国内外膳食营养领域的广泛重视。目前关于花色苷的摄入量一直存在争议，原因在于推荐的含量不能有效的被吸收利用，不能发挥花色苷应有的生物活性。胃肠道是花色苷的主要吸收部位，但其在胃肠道吸收率低，吸收入血的浓度仅为食用量的1％左右，且花色苷入血吸收后达峰浓度和半衰期快，2h后基本检测不到血液花色苷的存在，严重制约了富含花色苷果蔬制品营养成分的吸收与利用，无法实现花色苷的生物活性价值。因此如何实现花色苷胃肠的长效吸收是花色苷领域待解决的难题。
近年来纳米载体已成为递送活性分子的有效方法，广泛应用于生物医药和食品健康等学科交叉领域。纳米技术可以降低活性分子载体粒子大小至纳米级，显著增加粒子的比表面积，从而增加活性分子的溶出速率；活性分子粒度的下降和比表面积的增高还会促进纳米粒子与生物膜的接触，使得已溶解的活性分子与特殊大小的纳米粒子在胃肠道被高效吸收。
纳米缓释制剂可使活性分子按一定规律缓慢或恒速地释放，即可按需要在预定的期间内向人体提供适宜的血药浓度。具有降低活性分子摄取频率；吸收完全，提高活性分子作用；减小血药浓度波动；降低毒副作用等特点。
纳米技术的以上优势，使得其广泛应用于花色苷的多种递送模式，但目前关于花色苷纳米载体制备的方法主要集中于“层-层自组装”的多步骤复杂制备工艺，需要将目标材料一层一层的分步制备，最终获得理想的花色苷纳米系统。这种分步式“层- 层自组装”模式不免存在制备方法繁琐、技术要求高同时难以实现快速食品产业化等问题。“一步自组装”法是基于多维分子间作相互作用，快速高效的将多种载体一次性完成装载活性分子的方法。具备制备方法简单、快速、易于后期产业化等特点，但是由于不同分子间相互作用极其复杂且不容易掌控，导致成品效果难以保证。
因此，如何提供一种工艺简单、快速、易于产业化的花色苷纳米粒制备方法，且在增加胃肠道吸收透过性的同时，实现花色苷胃肠的高效缓慢释放，具有巨大社会和经济价值。
发明内容
本发明提供一种一步自组装制备琥珀酰化酪蛋白-磷脂-花色苷纳米粒的方法。一方面，提供了一种工艺简单、快速、易于产业化的花色苷纳米粒制备方法。另一个方面，通过对花色苷的稳态化递送以及对装载花色苷分子释放速率的精准调控，来促进花色苷吸收。从而，解决花色苷生物利用度低、血液消除速率快的难题。
现有的常规酪蛋白、磷脂与花色苷进行层层自组装形成纳米体系，无法实现肠道负电粘液层高效透过性，从而导致吸收和缓释效果不理想。因此，本发明先将常见乳品中的酪蛋白进行琥珀酰化，目的是增加酪蛋白的负电性，优化分子间的相互作用，使其与带正电的花色苷更好的结合；同时琥珀酰化酪蛋白具有与肠道粘液层相近的电负性更易于透过吸收实现缓释效果，磷脂起到增加体系脂溶性的作用，使体系具有更好的两亲性。基于以上制备理论基础，本发明通过探索不同制备条件和制备工艺(主要考虑：配比、制备溶剂、制备时间进行考察与优化)，最终实现琥珀酰化酪蛋白、磷脂、花色苷的一步法制备。制备得到的纳米粒均小于100nm且粒径均匀，极大缩减了花色苷纳米体系的制备难度，同时具有更好的花色苷缓释吸收效果。在制备方法和吸收缓释效果上均优于两步法花色苷制品的生物性能。具体发明内容如下：
一种琥珀酰化酪蛋白-磷脂-花色苷纳米粒，其特征在于，由琥珀酰化酪蛋白、磷脂和花色苷制备的一种粒径在纳米级别的粒子。
进一步地，所述纳米粒粒径为70～100nm(PDI＝0.10～0.15)，包封率为40～70％，载药量为5～20％。
优选地，所述纳米粒粒径为80～90nm(PDI＝0.10～0.15)
进一步地，所述纳米粒可使花色苷在胃肠环境中持续缓释，具有提高花色苷口服吸收律的作用。
进一步地，利用一步自组装的制备方法制成，包括如下步骤：
1琥珀酰化酪蛋溶液的制备：将琥珀酰化酪蛋白与超纯水混合后超声得琥珀酰化酪蛋白溶液；
2磷脂与乙醇溶液的制备：将磷脂与乙醇溶液混合后超声得磷脂溶液；
3琥珀酰化酪蛋白-磷脂-花色苷纳米粒的制备：将花色苷与HCl溶液混合，加入所述磷脂溶液，水浴环境下搅拌，再加入所述琥珀酰化酪蛋白溶液，在水浴环境下继续搅拌，得目标纳米粒；
所述琥珀酰化酪蛋白按照如下方法制备：
1将酪蛋白与浓度为0.04-0.05mol/L的NaOH溶液按照0.3～0.7g：30～60mL的比例混合，待所述酪蛋白全部溶解后，加入80mL的pH＝7～8的PBS溶液，于65℃条件下搅拌90～120min，得酪蛋白分散液；
2将丁二酸酐与pH＝7～8的PBS溶液按照350～450mg：10mL的比例混合，待所述丁二酸酐全部溶解后，采用边搅拌边缓慢滴加的方式，将其溶解于酪蛋白分散液中，搅拌40～60min后，再加入NaOH调节pH值至8～8.5，继续搅拌20～40min；
3将反应液在4℃下透析，其间换水2～3次，经冷冻干燥后，在4℃，保存备用。琥珀酰化以后酪蛋白的PI从接近5变为SCN的3左右，证明了SCN的成功制备。
优选地，所述纳米粒的制备方法，包括如下步骤：
1将琥珀酰化酪蛋白与超纯水按照10～30mg：5～10mL的比例混合，超声至少5min，得琥珀酰化酪蛋白溶液。本发明选用琥珀酰化酪蛋白作为转载材料，赋予纳米粒一定的负电性，与肠道吸收粘液层负电性相当，具有更好的吸收透过性；
2将磷脂与乙醇(95％)溶液按照150～250mg：15～25mL的比例混合，超声至少5min，得磷脂溶液。本发明选用磷脂作为转载材料，赋予纳米粒一定脂溶性可以很好地增加花色苷的两亲性，增加吸收效率，提高花色苷的生物利用度；
3将花色苷与pH＝1.2～1.5的HCl溶液按照3～6mg：1mL的比例混合，加入所述磷脂溶液，在40℃水浴环境下搅拌15～20min，再加入所述琥珀酰化酪蛋白溶液，在40℃水浴环境下继续搅拌90～120min，得目标纳米粒。本发明选用琥珀酰化酪蛋白和磷脂作为原料，采用“一步自组装”方法制备得到花色苷纳米粒，简单、快速。
进一步地，所述HCl溶液与所述磷脂溶液和所述琥珀酰化酪蛋白溶液的添加量的比值为1:1.4～1.6:2.3～2.7。
优选地，所述琥珀酰化酪蛋白与所述超纯水按照15～20mg：7～10mL的比例混合。
优选地，所述磷脂与所述乙醇(95％)溶液按照180～200mg：18～20mL的比例混合。
优选地，所述花色苷与所述pH＝1.2～1.5的HCl溶液按照4～5mg：1mL的比例混合。
优选地，所述酪蛋白与所述浓度为0.04-0.05mol/L的NaOH溶液按照0.4～0.6g：40～50mL的比例混合。
优选地，所述丁二酸酐与所述pH＝7～8的PBS溶液按照360～400mg：10mL的比例混合。
本发明具有以下有益效果：
(1)本发明采用的“一步自组装”法制备花色苷琥珀酰化酪蛋白-磷脂-花色苷纳米粒，具有方法简单、高效及重复率高的特点，且具有巨大的应用价值。
(2)本发明制备得到的花色苷纳米粒具有显著的胃肠缓释释放效果，相比花色苷2h左右的释放效果，纳米粒显示出24h长效释放的作用。
(3)本发明制备得到的琥珀酰化酪蛋白-磷脂-花色苷纳米粒相比花色苷原型具有更好的抗氧化和细胞保护作用。
附图说明
附图1为琥珀酰化酪蛋白的制备：(A)Zeta电位及溶解度，(B)酪蛋白与琥珀酰化后的1H-NMR对比；
附图2为制备得到纳米粒的形态学性质：(A)磷脂-花色苷纳米粒透射电镜图，(B)磷脂-花色苷纳米粒原子力显微镜图，(C)琥珀酰化酪蛋白-磷脂-花色苷纳米粒透射电镜图，(D)琥珀酰化酪蛋白-磷脂-花色苷纳米粒原子力显微镜图，(E)纳米粒子的干燥粒径，(F)纳米粒子的水合粒径，(G)纳米粒子的Zeta电位；
附图3为制备得到纳米粒的光谱学性质和溶解性：(A)纳米粒的紫外光谱，(B) 纳米粒的红外光谱，(C)纳米粒的荧光光谱，(D)纳米粒的圆二色谱，(E)纳米粒的载药量，(F)纳米粒的包封率，(G)纳米粒的油水分布系数；
附图4为纳米粒的pH稳态化实验：(A)不同pH的NaOH溶液对纳米粒稳定性的影响，(B)不同pH的NaOH溶液对纳米粒颜色的影响，(C)纳米粒耐酸碱缓冲稳定性曲线；
附图5为纳米粒在模拟胃肠条件下的释放能力：(A)纳米粒在模拟胃液中的释放情况，(B)纳米粒在模拟肠液中的释放情况，(C)纳米粒在同时模拟胃肠环境中的释放情况；
附图6为纳米粒在Caco细胞中的摄取情况；
附图7为纳米粒抗氧化实验和细胞保护实验结果：(A)PSC抗氧化实验(B-C) CAA抗氧化实验，(D-F)纳米粒抵抗丙烯酰胺诱导HepG2细胞损伤情况。
具体实施方式
下述非限制性实施例可以使本领域的普通技术人员更全面地理解本发明，但不以任何方式限制本发明。
下述实施例中所述试验方法，如无特殊说明，均为常规方法；所述试剂和材料，如无特殊说明，均可从商业途径获得。
实施例1
取0.6g酪蛋白分散于50mL浓度为0.05mol/L的NaOH溶液中，加入80mL磷酸缓冲盐溶液(pH＝7.4)，于65℃条件下搅拌2h。随后取400mg丁二酸酐(丁二酸酐溶于10mL的磷酸缓冲盐溶液中)，边搅拌边缓慢滴加，1h后，加入NaOH调节pH 值至8.5，继续搅拌40min反应结束。反应液在4℃下透析24h，其间换水3次，经冷冻干燥后，4℃保存备用(图1)。称取磷脂180mg，加入20mL乙醇，超声5min，配制得到10mg/mL的磷脂溶液；称取制备得到的琥珀酰化酪蛋白20mg，加入10mL 超纯水，超声5min，配制得到琥珀酰化酪蛋白溶液。然后取4mg花色苷称于西林瓶中，用1mL的HCl(pH＝1.2)溶解。10mg/mL的磷脂溶液取1.6mL加入西林瓶中，溶液40℃水浴搅拌20min后，加入2.7mL琥珀酰化酪蛋白溶液，再水浴2h，使两者充分混合。
实施例2
取0.5g酪蛋白分散于40mL浓度为0.04mol/L的NaOH溶液中，加入80mL磷酸缓冲盐溶液(pH＝7.4)，于65℃条件下搅拌2h，375mg丁二酸酐(溶于10mL，pH＝7.4 磷酸缓冲盐溶液)，边搅拌边缓慢滴加，1h后，加入2M的NaOH溶液调节pH值至 8.5，继续搅拌30min，反应结束。反应液在4℃下透析24h，其间换水3次，经冷冻干燥后，4℃，保存备用(图1)。称取磷脂200mg，加入20mL乙醇，超声5min，配制得到10mg/mL的磷脂溶液；称取琥珀酰化酪蛋白15mg，加入7.5mL超纯水，超声5min，配制得到SCN溶液。然后取5mg花色苷称于西林瓶中，用1mL的HCl (pH＝1.2)溶解。10mg/mL的磷脂溶液取1.5mL加入西林瓶中，溶液40℃水浴搅拌 15min后，加入2.5mL琥珀酰化酪蛋白溶液，再水浴2h，使两者充分混合。
实施例3
取0.4g酪蛋白分散于40mL浓度为0.04mol/L的NaOH溶液中，加入80mLpH＝7.4 磷酸缓冲盐溶液，于65℃条件下搅拌1.5h。取360mg丁二酸酐(溶于10mL的pH＝7.4 磷酸缓冲盐溶液)，边搅拌边缓慢滴加，40min后，加入2M的NaOH溶液，调节pH 值至8.5，继续搅拌20min，反应结束。反应液在4℃下透析24h，其间换水3次，经冷冻干燥后，4℃，保存备用(图1)。称取磷脂180mg，加入18mL乙醇，超声5min，配制得到10mg/mL的磷脂溶液；称取琥珀酰化酪蛋白15mg，加入7mL超纯水，超声5min，配制得到琥珀酰化酪蛋白溶液。然后取5mg花色苷称于西林瓶中，用1mL 的HCl(pH＝1.2)溶解。10mg/mL的磷脂溶液取1.4mL加入西林瓶中，溶液40℃水浴搅拌15min后，加入2.3mL琥珀酰化酪蛋白溶液，再水浴90min，使两者充分混合。
实施例4
取0.7g酪蛋白分散于60mL浓度为0.05mol/L的NaOH溶液中，加入80mL磷酸缓冲盐溶液(pH＝7.4)，于65℃条件下搅拌2h。随后取450mg丁二酸酐(丁二酸酐溶于10mL的磷酸缓冲盐溶液中)，边搅拌边缓慢滴加，1h后，加入NaOH调节pH 值至8.5，继续搅拌40min反应结束。反应液在4℃下透析24h，其间换水3次，经冷冻干燥后，4℃保存备用(图1)。称取磷脂250mg，加入25mL乙醇，超声5min，配制得到10mg/mL的磷脂溶液；称取制备得到的琥珀酰化酪蛋白30mg，加入10mL 超纯水，超声5min，配制得到琥珀酰化酪蛋白溶液。然后取6mg花色苷称于西林瓶中，用1mL的HCl(pH＝1.2)溶解。10mg/mL的磷脂溶液取1.6mL加入西林瓶中，溶液40℃水浴搅拌20min后，加入2.7mL琥珀酰化酪蛋白溶液，再水浴2h，使两者充分混合。
实施例5
取0.3g酪蛋白分散于30mL浓度为0.04mol/L的NaOH溶液中，加入80mLpH＝7.4 磷酸缓冲盐溶液，于65℃条件下搅拌1.5h。取350mg丁二酸酐(溶于10mL的pH＝7.4 磷酸缓冲盐溶液)，边搅拌边缓慢滴加，40min后，加入2M的NaOH溶液，调节pH 值至8.5，继续搅拌20min，反应结束。反应液在4℃下透析24h，其间换水3次，经冷冻干燥后，4℃，保存备用(图1)。称取磷脂150mg，加入15mL乙醇，超声5min，配制得到10mg/mL的磷脂溶液；称取琥珀酰化酪蛋白10mg，加入5mL超纯水，超声5min，配制得到琥珀酰化酪蛋白溶液。然后取3mg花色苷称于西林瓶中，用1mL 的HCl(pH＝1.2)溶解。10mg/mL的磷脂溶液取1.4mL加入西林瓶中，溶液40℃水浴搅拌15min后，加入2.3mL琥珀酰化酪蛋白溶液，再水浴90min，使两者充分混合。
为了方面更好的说明本专利产品的结构、性质及效果，对实施例1最终得到的花色苷纳米粒进行了如下分析实验。值得注意的是，其它实施例以及按照本发明涉及的含量和体积比例等比放大，均可取得同样的制备效果。
花色苷纳米粒的形态学表征
将制备得到的C3G磷脂复合物(CLS)，用超声分散后，制备浓度约为200μg/mL 的分散液，将样品滴加到铜网干燥后，进行TEM表征，得到的TEM图(图2)。图2 可以看出制备的C3G磷脂复合物的粒径大小约为30-40nm左右。由图1的AFM三维图片和对应的高度分布图可以看出，CLS的粒径相对较均匀，在水中的分散性良好，其平均高度约为30nm，该粒径与TEM观察的数据基本一致。将测定样品分散到超纯水中，配成浓度约为100μg/mL的样品溶液，将1mL样品加到粒径杯中，测定样品的粒径。研究将制备得到的CL和CLS纳米粒分散到水溶液中，采用马尔文测定纳米粒的粒径分布和多分散系数(PDI)，测定结果见下图，从图可以看出CL的粒径为98 nm，PDI为0.133，CLS的粒径为88nm，PDI为0.122，说明制备的CL和CLS纳米粒的粒径分布比较均匀，且在分散性良好。功能化CLS和CL纳米粒在不同pH缓冲溶液中的Zeta电位实验结果如下，从图2可以看出，功能化CLS纳米粒的等电点PI 在pH＝4左右，与SCN的等电点接近，而未包覆SCN的CL纳米粒的等电点PI在pH＝5.5 左右，上述实验结果说明CLS纳米粒表面包覆了SCN。
花色苷纳米粒的光谱学性质表征
对花色苷(C3G)、磷脂(phospholipids)、琥珀酰胺化酪蛋白(SCN)以及功能化C3G磷脂复合物进行紫外可见吸收光谱扫描(图3)。如图所示，C3G在514nm处具有最大吸收峰，CL(未修饰SCN)和CLS(修饰了SCN)在536nm处有最大吸收峰，这表明花色苷的成功包载。取SCN，C3G，CLS和CL样品分别于280nm下进行荧光光谱分析，样品溶液的浓度为200μg/mL，激发波长为280nm，发射波长为300-400nm， 1nm每分钟，测定样品的荧光光谱。结果分析：由于SCN上含有色氨酸、酪氨酸、苯丙氨酸等氨基酸残基而具有内源性荧光特性。由图3可知，酪蛋白的最大荧光发射波长(λmax)在345nm附近，C3G在此处无荧光吸收，然而制备的CLS纳米粒在330nm 处有很小的荧光发射峰，这说明C3G与酪蛋白发生了内源性荧光淬灭现象，也表明酪蛋白和C3G产生了相互作用。取SCN，CLS和CL样品溶液的浓度约为200μg/mL，在190-300nm处对样品进行圆二色光谱扫描。结果分析显示如图3所示，SCN在202 nm处有明显的吸收峰，CL纳米粒没有明显的吸收峰，经过合成的CLS在202nm左右也有明显的吸收峰，表明成功合成出CLS纳米粒。研究测定了C3G、CL和CLS的油水分配系数，C3G原药在水中的分布较多，是正辛醇溶液中的2.5倍，而制备成CL 和CLS以后，C3G在正辛醇中的分布明显增加，且CL在正辛醇中的分布明显增加，说明制备成功能化磷脂复合物以后，C3G的脂溶性明显增加。
花色苷纳米粒的耐缓冲能力
将SCN溶解于超纯水中，配成不同浓度的样品溶液，用pH＝1.2的盐酸调节至pH 为4，向不同的溶液中加入不同量0.1M NaOH溶液，然后用pH计测定溶液的pH值。从图4可以看出对于Control组超纯水组而言，当NaOH加入的量逐渐增加，溶液的 pH值明显增加，而含有SCN组溶液的pH值变化不那么明显，随之SCN溶度的增加，溶液的缓冲能力越强，说明SCN对NaOH的加入有一定的缓冲作用。C3G、CL和CLS 分散到pH4.0的盐酸溶液中(100μg/mL)，向溶液中加入不同量0.1M NaOH溶液，调节pH值，然后进行拍照观察。从图可以看出，当加入不同量NaOH时，不同C3G 的样品均有一定程度的变化，溶液的颜色逐渐变浅，当加入量进一步增加时，C3G原药的溶液变深。而CLS和CL组对加入的NaOH具有一定缓冲作用，溶液的变化与C3G组相比没有那么明显，且CLS的变化更小。这与CLS表面存在一定的SCN对 NaOH有一定的缓冲能力有关。
花色苷纳米粒的体外释放结果
胃：取相当于0.5mg C3G含量的C3G单体、CL和CLS样品分散于5ml的模拟胃液中(37℃)，转速为125rpm，分别于0.25h，0.5h，1h，2h，3h，4h，6h时刻，将释放介质全部取出，同时补加等体积的37℃释放介质，于536nm波长下测得紫外吸收。图5结果显示C3G原药的释放速度较快，1小时内几乎全部释放，而CL和CLS 在模拟胃液中的释放呈现明显的缓释效果，且CLS的缓释效果更明显，CLS中C3G 的释放在6h时不到40％。说明CLS中修饰的SCN具有较好的防止C3G在模拟胃液中速释的能力。
肠：取相当于0.5mg C3G含量的C3G单体、CL和CLS样品分散于5ml的模拟肠液中(37℃)，转速为125rpm，分别于0.25h，0.5h，1h，2h，4h，6h，9h，12h， 24h时刻，将释放介质全部取出，同时补加等体积的37℃模拟肠液释放介质，将取出的液体加入盐酸反调pH值至1.2，于536nm波长下测得紫外吸收。图5结果显示C3G 原药在模拟肠液中的释放速度较快，1小时内几乎全部释放。而样品CL和CLS在模拟肠液中的释放呈现明显的缓释效果，且CLS和CL在24小时的累积释放量超过80％，说明CLS和CL中的C3G释放较为完全。
胃肠：取相当于0.5mg C3G含量的CL和CLS样品，分散于5ml的模拟胃液中 (37℃)，转速为125rpm，分别于0.25h，0.5h，1h，2h时刻，将释放介质全部取出，同时补加等体积的37℃释放介质，于536nm波长下测得紫外吸收。在2h以后，补加等体积的37℃模拟肠液释放介质进行释放实验。为了进一步模拟体内的释放行为，研究采用模拟胃液中释放2h，然后在模拟肠液中释放22h的释放介质考察CL和CLS 的释放行为。从图5可以看出，在模拟胃液的释放介质中，CLS的释放速率比CL的释放速度稍慢，表现出更明显的缓释效果。而在模拟肠液的释放介质中，CLS的释放速率有所提升，在最终24小时的累积释放速率达到80％表现出明显的缓释效果。
花色苷纳米粒的细胞摄取实验
将制备得到的CLS样品分散到PBS缓冲溶液中，按照CLS和FITC以质量比为 25：1的比例，向溶液中加入FITC荧光染料，在黑暗条件下反应12h后，离心收集样品，并用透析的方法除去未接上的游离FITC荧光染料即得。将Caco-2细胞接种在 24孔板中并孵育24h，用不含血清的培养基将FITC标记的CLS配制成浓度为25 μg/mL的样品加到相应孔中。继续培养不同时间，弃去培养基用PBS洗涤3次。将150 μL的4％甲醛加入到每个孔板内固定15min，PBS洗涤3次。随后加入100μL的DAPI 工作液染色15min，再次冲洗干净。将细胞爬片倒扣在滴有封片液的载玻片上，置于激光共聚焦显微镜(CLSM)下观察。图6的实验结果说明，control组中没有CLS载体的绿色荧光，而当Caco-2细胞与载体孵育0.5h开始，HepG2细胞内出现微弱的绿色荧光，而随着孵育时间的延长，细胞内的绿色荧光逐步增强，说明Caco-2细胞对 CLS载体的摄取具有时间依赖性。
花色苷纳米粒的抗氧化和细胞保护实验
抗氧化：将C3G、CL和CLS样品与模拟胃液和模拟肠液分别孵育后2h和4h，测定孵育前后的SPC抗氧化，测定的抗氧化性Vc当量。从图7可以看出，C3G用肠液消化后，抗氧化性明显降低，而CL和CLS制剂的抗氧化性的降低程度与C3G相比，明显较少，说明制剂在一定程度能提高C3G的抗氧化性。将C3G、CL和CLS样品与模拟胃液和模拟肠液分别孵育后2h和4h，采用CAA抗氧化的方法测定孵育前后的 CAA抗氧化值见图，从图7可以看出，C3G用肠液消化后，抗氧化性明显降低，而 CL和CLS制剂的抗氧化性的降低程度与C3G相比，明显较少，说明制剂在一定程度能提高C3G的抗氧化性。此外，用PBS冲洗HepG2细胞后，测定的CAA抗氧化值减少约为不冲洗的50％。
细胞保护：研究考察了25μg/mL和50μg/mL的C3G、CLS和CL对抗不同浓度 AA氧化损伤的作用。研究先将C3G、CLS和CL分别与Caco-2细胞共孵育6小时，然后在加入不同浓度的AA，继续孵育24小时后，测定细胞的存活率。实验结果如图 7所示，从图可以看出，当细胞预先与C3G、CLS和CL孵育后，在加入AA细胞的存活率明显高于未加入C3G的Control组，且50μg/mL的C3G组的细胞存活率明显高于25μg/mL的样品组。此外，25μg/mL的C3G各样品组基本能够抵御10mM AA 的氧化损伤，此时细胞的存活率高于80％，说明细胞的存活率没有明显降低。
Claims (10)
1.一种琥珀酰化酪蛋白-磷脂-花色苷纳米粒，其特征在于，由琥珀酰化酪蛋白、磷脂和花色苷利用一步自组装制备的一种粒径在纳米级别的粒子。
2.根据权利要求1所述的纳米粒，其特征在于，所述纳米粒粒径为70～100nm(PDI＝0.10～0.15)，包封率为40～70％，载药量为5～20％。
3.根据权利要求1所述的纳米粒，其特征在于，所述纳米粒可使花色苷在胃肠环境中持续缓释，具有提高花色苷口服吸收率的作用。
4.根据权利要求1所述的纳米粒，其特征在于，所述琥珀酰化酪蛋白是由酪蛋白与丁二酸酐反应制备而成，包括如下步骤：
①将酪蛋白溶解在NaOH与PBS溶液中，制备得到酪蛋白分散液；
②将丁二酸酐加入到酪蛋白分散液中，反应结束后，再加入NaOH调节pH值；
③将反应液透析，经冷冻干燥后，得到琥珀酰化酪蛋白。
5.根据权利要求4所述的纳米粒，其特征在于，所述酪蛋白与所述浓度为0.04～0.05mol/L的NaOH溶液按照0.4～0.6g：40～50mL的比例混合。
6.根据权利要求1所述的纳米粒，其特征在于，所述纳米粒利用一步自组装的制备方法制成，包括如下步骤：
①琥珀酰化酪蛋溶液的制备：将琥珀酰化酪蛋白与超纯水混合后超声得琥珀酰化酪蛋白溶液；
②磷脂与乙醇溶液的制备：将磷脂与乙醇溶液混合后超声得磷脂溶液；
③琥珀酰化酪蛋白-磷脂-花色苷纳米粒的制备：将花色苷与HCl溶液混合，加入所述磷脂溶液，水浴环境下搅拌，再加入所述琥珀酰化酪蛋白溶液，在水浴环境下继续搅拌，得目标纳米粒。
7.根据权利要求6所述的纳米粒，其特征在于，所述HCl溶液与所述磷脂溶液和所述琥珀酰化酪蛋白溶液的添加量的比值为1:1.4～1.6:2.3～2.7。
8.根据权利要求6所述的纳米粒，其特征在于，所述琥珀酰化酪蛋白与所述超纯水按照15～20mg：7～10mL的比例混合。
9.根据权利要求6所述的纳米粒，其特征在于，所述磷脂与所述乙醇(95％)溶液按照180～200mg：18～20mL的比例混合。
10.根据权利要求6所述的纳米粒，其特征在于，所述花色苷与所述pH＝1.2～1.5的HCl溶液按照3～5：1的比例混合。
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| CN101537187A (zh) * | 2008-03-18 | 2009-09-23 | 沈阳皓天万嘉医药科技有限公司 | 花色苷磷脂复合物及其制备方法 |
Non-Patent Citations (2)
| Title |
|---|
| 刘璐: "蛋白稳定的口服纳米结晶药物研究", 《中国优秀硕士学位论文全文数据库 医药卫生科技辑》, no. 01, pages 079 - 191 * |
| 韩丹;刘晨光;: "酪蛋白作为药物纳米递送载体的研究进展", 中国新药杂志, vol. 27, no. 21, pages 2544 - 2549 * |
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