CN113855858A - 一种蛋白填充材料及其制备方法 - Google Patents

Abstract

本发明属于蛋白填充材料技术领域，具体涉及一种蛋白填充材料及其制备方法，以毛发角蛋白颗粒作为填充材料与自体真皮成纤维细胞混合成为软组织蛋白填充材料，其中自体真皮成纤维细胞与毛发角蛋白颗粒质量比为1.5～3:1，毛发是皮肤附属物，与自身组织具有相同的免疫原性，与组织相容性更好，难于被组织吸收降解，且毛发取材方便，还可反复利用，以毛发角蛋白颗粒作为自体真皮成纤维细胞支架材料，将细胞接种于此，为细胞提供外环境支持，扩大细胞的生存空间，使细胞存活时间更加持久，存活率更高，有利于细胞快速稳定的分裂增殖，最终促进细胞分泌胶原蛋白，且排除了免疫和过敏反应的缺点，实现持久的美容除皱和修复凹陷。

Description

一种蛋白填充材料及其制备方法

技术领域

本发明涉及石蛋白填充材料技术领域，具体领域为一种蛋白填充材料及其制备方法。

背景技术

注射美容的历史可追溯自1899年石蜡注射首次应用于临床。纵观这百多年的历史，注射材料和方法发生了极大地变化。现有的注射填充材料分为人工合成材料和生物材料两类,其中人工合成材料，典型代表为硅胶，硅胶为二甲基聚硅烷聚合物，根据聚合链接长度的不同,可制成不同形态的硅胶，自1966年首次应用硅胶注射填充麻风病患者的虎口肌肉萎缩开始,逐渐应用于临床,可产生持久的外形支撑,多用于矫正凹陷畸形肉。但是，液体硅胶材料在部分患者中出现了注射区域组织的肉芽肿病变和炎症反应，并偶伴有注射部位组织硬化、皮肤变薄破溃及注射材料移位等并发症，故液体硅胶注射已被禁用。目前固态的硅胶以假体形式,广泛应用于隆鼻、隆乳等美容手术,具有安全稳定、排异反应低、塑形良好等优点。生物材料典型代表为胶原蛋白，胶原蛋白为三螺旋结构高分子蛋白质，根据分布特点可分为间质胶原、基底膜胶原和细胞外周胶原。在人体皮肤中,真皮层基质主要由Ⅰ型(85％)与Ⅲ型(15％)胶原蛋白组成，而胶原蛋白是由真皮成纤维细胞合成分泌。随着年龄增长,胶原蛋白的合成逐渐减少，再加上环境污染、吸烟、光辐射等外在因素，使体内胶原酶水平上升，从而导致皮肤萎缩、变薄,而形成皱纹,表现出衰老的外貌啊。由此可见,胶原蛋白对于皮肤形态的保持具有重要作用,将其用作皮肤填充注射材料也成为了一种新的可能。基于此，提出一种蛋白填充材料及其制备方法。

发明内容

本发明的目的在于提供一种蛋白填充材料及其制备方法以解决上述背景技术中提到的技术问题。

为实现上述目的，本发明提供如下技术方案：一种蛋白填充材料，以毛发角蛋白颗粒作为填充材料与自体真皮成纤维细胞混合成为软组织蛋白填充材料，其中自体真皮成纤维细胞与毛发角蛋白颗粒质量比为1.5～3:1。

优选的，以毛发角蛋白颗粒作为填充材料与自体真皮成纤维细胞混合成为软组织蛋白填充材料，其中自体真皮成纤维细胞与毛发角蛋白颗粒质量比为1.8～2.5:1。

优选的，以毛发角蛋白颗粒作为填充材料与自体真皮成纤维细胞混合成为软组织蛋白填充材料，其中自体真皮成纤维细胞与毛发角蛋白颗粒质量比为2:1。

一种蛋白填充材料及其制备方法，其制备方法包括如下步骤：

步骤1：首先取与人体呈分离状态的毛发，对毛发进行清洗，将清洗后的毛发放入碱液中溶解得毛发蛋白质溶液，使用浓度为15％～20％的稀盐酸，边搅拌边慢慢加入到毛发蛋白质溶液中，中和至pH＝8～10，后经离心分离除去固体杂质，得到纯净的毛发蛋白质溶液，边搅拌边缓慢加入浓度为7％～10％稀盐酸，调整溶液pH为4～5，至毛发蛋白质全部沉淀上部出现淡黄色清液为止，再次对溶液进行离心分离操作，干燥后造粒得到毛发角蛋白颗粒；

步骤2：取与人体呈分离状态的皮肤组织放置培养皿中，反复漂洗，用无菌剪刀将皮肤剪成小块，使用浓度为0.25％胰蛋白酶消化，放置于温度为4℃条件下的冰箱过夜；次日，取出皮肤组织，漂洗洗数次；刮去表皮和皮下组织，保留真皮，将皮肤组织剪碎，用浓度为0.25％IV型胶原酶37℃消化4h,取上清液体加入离心管，1000r/min,离心15min,去除上清加入培养液，吹打成细胞悬液，将混合均匀的细胞悬液培养瓶中，置于37℃、5％CO₂及饱和湿度条件的C0₂孵箱培养，静止培养3d后，继续进行细胞传代培养，培养出自体真皮成纤维细胞；

步骤3：将步骤2培养出自体真皮成纤维细胞接种于步骤1制备的毛发角蛋白颗粒中制备出蛋白填充材料。

本发明的有益效果是：本发明一种蛋白填充材料及其制备方法，毛发是皮肤附属物，是皮肤细胞定向分化的一种终末形式，是在机体自身生长代谢中所产生的，与自身组织具有相同的免疫原性，与组织相容性更好，在结构和性质方面，人类毛发主要成分为含硫较多的角质蛋白，其肽链间存在着广泛而紧密的交联，星现高度的空间稳定性，对理、化因素的影响有着高度的抵抗力，性质稳定，难于被组织吸收降解，且毛发取材方便，还可反复利用，自体真皮成纤维细胞为人类凹陷性修复和美容除皱提供了可靠的细胞来源，自体真皮成纤维细胞在所处生存空间长满，细胞之间会产生抑制作用，影响细胞形态和功能，继而死亡，以毛发角蛋白颗粒作为填充材料，其实质作用是作为自体真皮成纤维细胞支架材料，将细胞接种于此，为细胞提供外环境支持，扩大细胞的生存空间，使细胞存活时间更加持久，存活率更高，有利于细胞快速稳定的分裂增殖，最终促进细胞分泌胶原蛋白，本发明提出的蛋白填充材料，排除了免疫和过敏反应的缺点，提供了一种简单、安全、微创和持久的美容除皱和修复凹陷的填充材料。

具体实施方式

下面将结合本发明实施例，对本发明的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。

实施例1：

步骤1：首先取与人体呈分离状态的毛发，对毛发进行清洗，将清洗后的毛发放入碱液中溶解得毛发蛋白质溶液，使用浓度为15％的稀盐酸，边搅拌边慢慢加入到毛发蛋白质溶液中，中和至pH＝8，后经离心分离除去固体杂质，得到纯净的毛发蛋白质溶液，边搅拌边缓慢加入浓度为7％稀盐酸，调整溶液pH为4，至毛发蛋白质全部沉淀上部出现淡黄色清液为止，再次对溶液进行离心分离操作，干燥后造粒得到毛发角蛋白颗粒；

步骤2：取与人体呈分离状态的皮肤组织放置培养皿中，反复漂洗，用无菌剪刀将皮肤剪成小块，使用浓度为0.25％胰蛋白酶消化，放置于温度为4℃条件下的冰箱过夜；次日，取出皮肤组织，漂洗洗数次；刮去表皮和皮下组织，保留真皮，将皮肤组织剪碎，用浓度为0.25％IV型胶原酶37℃消化4h,取上清液体加入离心管，1000r/min,离心15min,去除上清加入培养液，吹打成细胞悬液，将混合均匀的细胞悬液培养瓶中，置于37℃、5％CO₂及饱和湿度条件的C0₂孵箱培养，静止培养3d后，继续进行细胞传代培养，培养出自体真皮成纤维细胞；

步骤3：将步骤2培养出自体真皮成纤维细胞接种于步骤1制备的毛发角蛋白颗粒中制备出蛋白填充材料，自体真皮成纤维细胞与毛发角蛋白颗粒质量比为1.5:1。

实施例2：

步骤1：首先取与人体呈分离状态的毛发，对毛发进行清洗，将清洗后的毛发放入碱液中溶解得毛发蛋白质溶液，使用浓度为17％的稀盐酸，边搅拌边慢慢加入到毛发蛋白质溶液中，中和至pH＝8，后经离心分离除去固体杂质，得到纯净的毛发蛋白质溶液，边搅拌边缓慢加入浓度为7％稀盐酸，调整溶液pH为4，至毛发蛋白质全部沉淀上部出现淡黄色清液为止，再次对溶液进行离心分离操作，干燥后造粒得到毛发角蛋白颗粒；

步骤2：取与人体呈分离状态的皮肤组织放置培养皿中，反复漂洗，用无菌剪刀将皮肤剪成小块，使用浓度为0.25％胰蛋白酶消化，放置于温度为4℃条件下的冰箱过夜；次日，取出皮肤组织，漂洗洗数次；刮去表皮和皮下组织，保留真皮，将皮肤组织剪碎，用浓度为0.25％IV型胶原酶37℃消化4h,取上清液体加入离心管，1000r/min,离心15min,去除上清加入培养液，吹打成细胞悬液，将混合均匀的细胞悬液培养瓶中，置于37℃、5％CO₂及饱和湿度条件的C0₂孵箱培养，静止培养3d后，继续进行细胞传代培养，培养出自体真皮成纤维细胞；

步骤3：将步骤2培养出自体真皮成纤维细胞接种于步骤1制备的毛发角蛋白颗粒中制备出蛋白填充材料，自体真皮成纤维细胞与毛发角蛋白颗粒质量比为1.8:1。

实施例3：

步骤1：首先取与人体呈分离状态的毛发，对毛发进行清洗，将清洗后的毛发放入碱液中溶解得毛发蛋白质溶液，使用浓度为20％的稀盐酸，边搅拌边慢慢加入到毛发蛋白质溶液中，中和至pH＝9，后经离心分离除去固体杂质，得到纯净的毛发蛋白质溶液，边搅拌边缓慢加入浓度为9％稀盐酸，调整溶液pH为4，至毛发蛋白质全部沉淀上部出现淡黄色清液为止，再次对溶液进行离心分离操作，干燥后造粒得到毛发角蛋白颗粒；

步骤2：取与人体呈分离状态的皮肤组织放置培养皿中，反复漂洗，用无菌剪刀将皮肤剪成小块，使用浓度为0.25％胰蛋白酶消化，放置于温度为4℃条件下的冰箱过夜；次日，取出皮肤组织，漂洗洗数次；刮去表皮和皮下组织，保留真皮，将皮肤组织剪碎，用浓度为0.25％IV型胶原酶37℃消化4h,取上清液体加入离心管，1000r/min,离心15min,去除上清加入培养液，吹打成细胞悬液，将混合均匀的细胞悬液培养瓶中，置于37℃、5％CO₂及饱和湿度条件的C0₂孵箱培养，静止培养3d后，继续进行细胞传代培养，培养出自体真皮成纤维细胞；

步骤3：将步骤2培养出自体真皮成纤维细胞接种于步骤1制备的毛发角蛋白颗粒中制备出蛋白填充材料，自体真皮成纤维细胞与毛发角蛋白颗粒质量比为2:1。

实施例4：

步骤1：首先取与人体呈分离状态的毛发，对毛发进行清洗，将清洗后的毛发放入碱液中溶解得毛发蛋白质溶液，使用浓度为20％的稀盐酸，边搅拌边慢慢加入到毛发蛋白质溶液中，中和至pH＝10，后经离心分离除去固体杂质，得到纯净的毛发蛋白质溶液，边搅拌边缓慢加入浓度为9％稀盐酸，调整溶液pH为5，至毛发蛋白质全部沉淀上部出现淡黄色清液为止，再次对溶液进行离心分离操作，干燥后造粒得到毛发角蛋白颗粒；

步骤2：取与人体呈分离状态的皮肤组织放置培养皿中，反复漂洗，用无菌剪刀将皮肤剪成小块，使用浓度为0.25％胰蛋白酶消化，放置于温度为4℃条件下的冰箱过夜；次日，取出皮肤组织，漂洗洗数次；刮去表皮和皮下组织，保留真皮，将皮肤组织剪碎，用浓度为0.25％IV型胶原酶37℃消化4h,取上清液体加入离心管，1000r/min,离心15min,去除上清加入培养液，吹打成细胞悬液，将混合均匀的细胞悬液培养瓶中，置于37℃、5％CO₂及饱和湿度条件的C0₂孵箱培养，静止培养3d后，继续进行细胞传代培养，培养出自体真皮成纤维细胞；

步骤3：将步骤2培养出自体真皮成纤维细胞接种于步骤1制备的毛发角蛋白颗粒中制备出蛋白填充材料，自体真皮成纤维细胞与毛发角蛋白颗粒质量比为2.5:1。

实施例5：

步骤1：首先取与人体呈分离状态的毛发，对毛发进行清洗，将清洗后的毛发放入碱液中溶解得毛发蛋白质溶液，使用浓度为15％的稀盐酸，边搅拌边慢慢加入到毛发蛋白质溶液中，中和至pH＝8，后经离心分离除去固体杂质，得到纯净的毛发蛋白质溶液，边搅拌边缓慢加入浓度为10％稀盐酸，调整溶液pH为5，至毛发蛋白质全部沉淀上部出现淡黄色清液为止，再次对溶液进行离心分离操作，干燥后造粒得到毛发角蛋白颗粒；

步骤2：取与人体呈分离状态的皮肤组织放置培养皿中，反复漂洗，用无菌剪刀将皮肤剪成小块，使用浓度为0.25％胰蛋白酶消化，放置于温度为4℃条件下的冰箱过夜；次日，取出皮肤组织，漂洗洗数次；刮去表皮和皮下组织，保留真皮，将皮肤组织剪碎，用浓度为0.25％IV型胶原酶37℃消化4h,取上清液体加入离心管，1000r/min,离心15min,去除上清加入培养液，吹打成细胞悬液，将混合均匀的细胞悬液培养瓶中，置于37℃、5％CO₂及饱和湿度条件的C0₂孵箱培养，静止培养3d后，继续进行细胞传代培养，培养出自体真皮成纤维细胞；

步骤3：将步骤2培养出自体真皮成纤维细胞接种于步骤1制备的毛发角蛋白颗粒中制备出蛋白填充材料，自体真皮成纤维细胞与毛发角蛋白颗粒质量比为3:1。

实施例1-5所制备的蛋白填充材料与现有的注射填充材料(生物材料)相比：在临床使用上，本蛋白填充材料有效维持填充效果的时间平均多于现有注射填充材料12-15个月。

尽管已经示出和描述了本发明的实施例，对于本领域的普通技术人员而言，可以理解在不脱离本发明的原理和精神的情况下可以对这些实施例进行多种变化、修改、替换和变型，本发明的范围由所附权利要求及其等同物限定。

Claims (4)

1.一种蛋白填充材料，其特征在于：以毛发角蛋白颗粒作为填充材料与自体真皮成纤维细胞混合成为软组织蛋白填充材料，其中自体真皮成纤维细胞与毛发角蛋白颗粒质量比为1.5～3:1。

2.根据权利要求1所述的一种蛋白填充材料，其特征在于：以毛发角蛋白颗粒作为填充材料与自体真皮成纤维细胞混合成为软组织蛋白填充材料，其中自体真皮成纤维细胞与毛发角蛋白颗粒质量比为1.8～2.5:1。

3.根据权利要求2所述的一种蛋白填充材料及其制备方法，其特征在于：以毛发角蛋白颗粒作为填充材料与自体真皮成纤维细胞混合成为软组织蛋白填充材料，其中自体真皮成纤维细胞与毛发角蛋白颗粒质量比为2:1。

4.一种蛋白填充材料及其制备方法，其特征在于：其制备方法包括如下步骤：

步骤1：首先取与人体呈分离状态的毛发，对毛发进行清洗，将清洗后的毛发放入碱液中溶解得毛发蛋白质溶液，使用浓度为15％～20％的稀盐酸，边搅拌边慢慢加入到毛发蛋白质溶液中，中和至pH＝8～10，后经离心分离除去固体杂质，得到纯净的毛发蛋白质溶液，边搅拌边缓慢加入浓度为7％～10％稀盐酸，调整溶液pH为4～5，至毛发蛋白质全部沉淀上部出现淡黄色清液为止，再次对溶液进行离心分离操作，干燥后造粒得到毛发角蛋白颗粒；

步骤2：取与人体呈分离状态的皮肤组织放置培养皿中，反复漂洗，用无菌剪刀将皮肤剪成小块，使用浓度为0.25％胰蛋白酶消化，放置于温度为4℃条件下的冰箱过夜；次日，取出皮肤组织，漂洗洗数次；刮去表皮和皮下组织，保留真皮，将皮肤组织剪碎，用浓度为0.25％IV型胶原酶37℃消化4h,取上清液体加入离心管，1000r/min,离心15min,去除上清加入培养液，吹打成细胞悬液，将混合均匀的细胞悬液培养瓶中，置于37℃、5％CO₂及饱和湿度条件的C0₂孵箱培养，静止培养3d后，继续进行细胞传代培养，培养出自体真皮成纤维细胞；

步骤3：将步骤2培养出自体真皮成纤维细胞接种于步骤1制备的毛发角蛋白颗粒中制备出蛋白填充材料。