CN113854576A - 一种酪蛋白酸钠-果胶-植物甾醇纳米颗粒的制备方法 - Google Patents
一种酪蛋白酸钠-果胶-植物甾醇纳米颗粒的制备方法 Download PDFInfo
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Abstract
本发明公开了一种酪蛋白酸钠‑果胶‑植物甾醇纳米颗粒的制备方法，包括，将酪蛋白酸钠和果胶溶解在去离子水中，将植物甾醇加入乙醇溶液中。用高速分散器在4000～8000rpm的条件下，将植物甾醇乙醇溶液加入酪蛋白酸钠水溶液中，然后在同样的条件下，将果胶溶液加入负载植物甾醇的酪蛋白酸钠溶液中，均质3～6min。将得到的纳米颗粒溶液蒸发除去乙醇。将pH值调节至4.0，复合凝聚0.5～2h后即可得到酪蛋白酸钠‑果胶‑植物甾醇纳米颗粒。本发明制得的纳米颗粒中，植物甾醇的生物利用度从29％提高至82％，拓宽了植物甾醇在食品中的应用，克服了现有技术中植物甾醇生物利用度低的缺陷。
Description
技术领域
本发明涉及一种酪蛋白酸钠-果胶-植物甾醇纳米颗粒的制备方法技术，属于食品加工技术领域。
背景技术
植物甾醇是一种类固醇，与胆固醇有相似的结构。人类饮食中常见植物甾醇包括豆甾醇、β-谷甾醇、菜籽甾醇和菜油甾醇，他们广泛存在于自然界中，并以降低胆固醇而闻名。此外，他们还具有抗炎、抗癌、有效预防结肠炎和非酒精性脂肪肝等生理功能。由于植物甾醇不溶于水和油，并且容易结晶，生物利用度低。因此，植物甾醇在食品、药品和化妆品中的应用受到限制。
为了拓宽植物甾醇在食品中的应用，许多研究通过化学改性来提高其溶解度。但是化学改性存在生物利用度低和环境不友好等问题。目前植物甾醇的乳化和包封技术成为研究热点，有研究用吐温20为乳化剂，通过乳化和蒸发制备植物甾醇纳米分散体，或者有研究用玉米醇溶蛋白和果胶为壁材，制备玉米醇溶蛋白/果胶基植物甾醇纳米分散体。在一定程度上提高了溶解性，但是存在粒径偏大和生物利用度低等问题。
发明内容
本发明的目的是制备一种酪蛋白酸钠-果胶-植物甾醇纳米颗粒，解决了现有技术中植物甾醇纳米颗粒生物利用度低和环境不友好等问题。
本发明第一个目的提供了一种酪蛋白酸钠-果胶-植物甾醇纳米颗粒的制备方法，其特征是按照以下步骤进行：
(1)将酪蛋白酸钠溶解在水中，配置成酪蛋白酸钠水溶液；
(2)将果胶溶解在水中，配置成果胶水溶液；
(3)将植物甾醇溶解在乙醇中，配置成植物甾醇醇溶液；
(4)将步骤(1)和(2)配置的溶液加水稀释，配置成酪蛋白酸钠稀释水溶液和果胶稀释水溶液；
(5)将植物甾醇醇溶液加入进酪蛋白酸钠稀释水溶液中，然后将果胶稀释水溶液加入酪蛋白酸钠-植物甾醇溶液中，均质后得到酪蛋白酸钠-果胶-植物甾醇混合溶液；
(6)调节酪蛋白酸钠-果胶-植物甾醇混合溶液的pH，然后搅拌，得到纳米颗粒溶液；
(7)将得到的纳米颗粒溶液干燥，即得酪蛋白酸钠-果胶-植物甾醇纳米颗粒粉末。
在本发明的一种实施方式中，所述的酪蛋白酸钠水溶液是将酪蛋白酸钠加入去离子水中，其中，酪蛋白酸钠与去离子水质量体积比以mg：mL计为1：0.5～1.5。
在本发明的一种实施方式中，所述的果胶水溶液是将果胶加入去离子水中，其中，果胶与去离子水质量体积比以mg：mL计为1：0.5～1.5。
在本发明的一种实施方式中，所述的植物甾醇醇溶液是将植物甾醇加入乙醇中，其中，植物甾醇与乙醇质量体积比以mg：mL计为6～11：1。
在本发明的一种实施方式中，所述步骤(4)中稀释是将步骤(1)和(2)配置的溶液加水稀释至原溶液浓度的十分之一。
在本发明的一种实施方式中，所述步骤(5)中酪蛋白酸钠和果胶的质量比为2:1。
在本发明的一种实施方式中，所述步骤(5)在高分散器下进行，高分散器转速为4000～8000rpm。
在本发明的一种实施方式中，所述步骤(5)中均质的时间为3～6min。
在本发明的一种实施方式中，所述步骤(6)中调节pH至4.0
在本发明的一种实施方式中，所述步骤(6)中搅拌的时间为0.5～2h。
本发明利用上述的方法还提供了一种酪蛋白酸钠-果胶-植物甾醇纳米颗粒。
本发明的第二个目的是提供上述的酪蛋白酸钠-果胶-植物甾醇纳米颗粒在食品、生物制药等领域中的应用。
有益效果：本发明提供一种酪蛋白酸钠-果胶-植物甾醇纳米颗粒，选用酪蛋白酸钠和果胶作为壁材，酪蛋白酸钠具有良好的乳化性，果胶是天然的阴离子多糖。通过复合凝聚法和乳化蒸发法相结合制备酪蛋白酸钠-果胶-植物甾醇纳米颗粒。在形成纳米颗粒时，酪蛋白酸钠和果胶之间存在静电相互作用，植物甾醇和酪蛋白酸钠之间通过氢键和疏水相互作用相结合，植物甾醇由晶体转变为无定型；并测定游离植物甾醇、酪蛋白酸钠-植物甾醇纳米颗粒和酪蛋白酸钠-果胶-植物甾醇纳米颗粒中植物甾醇的生物利用度，其生物利用度分别为29％，57％和82％，拓宽了植物甾醇在食品中的应用，克服了现有技术中植物甾醇溶解度低、生物利用度低的缺陷。
本发明提供的一种酪蛋白酸钠-果胶-植物甾醇纳米颗粒，纳米颗粒的稳定性良好，在4℃和25℃下储存15天后，植物甾醇的保留率分别为81％和57％。
本发明提供一种酪蛋白酸钠-果胶-植物甾醇纳米颗粒的制备方法，使用复合凝聚和乳化蒸发法结合的方法制备酪蛋白酸钠-果胶-植物甾醇纳米颗粒，制备方法简单、使用溶剂(水、乙醇)绿色，工艺简单，实施方便，易于推广。
附图说明
为了更清楚地说明本发明实施例的技术方案，下面将对实施例描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本发明的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动性的前提下，还可以根据这些附图获得其它的附图。
其中：
图1为本发明实施中不同芯壁比下酪蛋白酸钠-果胶-植物甾醇纳米颗粒的包埋率和负载率对比图。
图2为本发明实施中原料植物甾醇、果胶、空白纳米颗粒、酪蛋白酸钠、酪蛋白酸钠-果胶-植物甾醇纳米颗粒的傅里叶红外光谱图。(图中NaCas表示原料酪蛋白酸钠，NCP-PSs nanoparticles表示酪蛋白酸钠-果胶-植物甾醇纳米颗粒)
图3为本发明实施中原料植物甾醇、物理混合、空白纳米颗粒和酪蛋白酸钠-果胶-植物甾醇纳米颗粒的X射线衍射图谱。(图中物理混合表示酪蛋白酸钠、果胶和植物甾醇的混合物，NCP-PSs nanoparticles表示酪蛋白酸钠-果胶-植物甾醇纳米颗粒)
图4为本发明实施中酪蛋白酸钠-植物甾醇纳米颗粒和酪蛋白酸钠-果胶-植物甾醇纳米颗粒的pH稳定性对比图。(图中NC-PSs nanoparticles表示酪蛋白酸钠-植物甾醇纳米颗粒，NCP-PSs nanoparticles表示酪蛋白酸钠-果胶-植物甾醇纳米颗粒)
图5为本发明实施中酪蛋白酸钠-植物甾醇纳米颗粒和酪蛋白酸钠-果胶-植物甾醇纳米颗粒的热稳定性对比图。(图中NC-PSs nanoparticles表示酪蛋白酸钠-植物甾醇纳米颗粒，NCP-PSs nanoparticles表示酪蛋白酸钠-果胶-植物甾醇纳米颗粒)
图6为本发明实施中酪蛋白酸钠-果胶-植物甾醇纳米颗粒在不同温度和时间下的储存稳定性对比图。
图7为本发明实施中原料植物甾醇、酪蛋白酸钠-植物甾醇纳米颗粒和酪蛋白酸钠-果胶-植物甾醇纳米颗粒中植物甾醇的生物利用度对比图。(图中PSs表示植物甾醇，NC-PSs nanoparticles表示酪蛋白酸钠-植物甾醇纳米颗粒，NCP-PSs nanoparticles表示酪蛋白酸钠-果胶-植物甾醇纳米颗粒)。
图8为本发明实施中酪蛋白酸钠和果胶在不同比例下的纳米颗粒粒径、PDI和电位对比图。
具体实施方式
为使本发明的上述目的、特征和优点能够更加明显易懂，下面结合说明书实施例对本发明的具体实施方式做详细的说明。
在下面的描述中阐述了很多具体细节以便于充分理解本发明，但是本发明还可以采用其他不同于在此描述的其它方式来实施，本领域技术人员可以在不违背本发明内涵的情况下做类似推广，因此本发明不受下面公开的具体实施例的限制。
其次，此处所称的“一个实施例”或“实施例”是指可包含于本发明至少一个实现方式中的特定特征、结构或特性。在本说明书中不同地方出现的“在一个实施例中”并非均指同一个实施例，也不是单独的或选择性的与其他实施例互相排斥的实施例。
本发明中酪蛋白酸钠(纯度约90％)，上海麦克林生化科技有限公司；果胶(低甲氧基，水分含量6.9±0.3％)，山东安德利有限公司；植物甾醇(纯度约为95％)，江苏科鼐有限公司。
包埋率和负载率的测定方法：取10mL酪蛋白酸钠-果胶-植物甾醇纳米颗粒溶液，加入40mL乙醇溶液，超声40min，3000rpm条件下离心10min，取上清液备用，为植物甾醇总含量；另取2mL纳米颗粒溶液，加入5mL己烷萃取植物甾醇，旋涡震荡3min，蒸发去除己烷，用乙醇重新溶解植物甾醇，为游离植物甾醇含量。
纳米颗粒的包埋率(EC)和负载率(LC)按下式计算：
吸光值：将5mL的磷硫铁显色剂分别加入到上清液和重新溶解植物甾醇的乙醇溶液中，静置反应半个小时，通过紫外分光光度计在486nm下测吸光值。
粒径、PDI和zeta-电位值：使用多角度粒度与高灵敏度zeta电位分析仪测定。
植物甾醇的生物利用度按下式计算：
C——胶束层中植物甾醇含量；
C0——消化前植物甾醇含量。
实施例1
酪蛋白酸钠-果胶-植物甾醇纳米颗粒(NCP-PSs nanoparticles)的制备：
(1)称取酪蛋白酸钠0.5g于50mL去离子水中，磁力搅拌，-4℃过夜水合；
(2)称取果胶0.5g于50mL去离子水中，70℃水浴，冷却至室温后，-4℃过夜水合；
(3)称取植物甾醇0.5g于50mL乙醇中，45℃水浴，充分溶解待用；
(4)将步骤1和步骤2得到的溶液分别稀释十倍，待用；
(5)在高速分散器8000rpm的条件下，将5mL的植物甾醇加入进100mL酪蛋白酸钠溶液中，得到酪蛋白酸钠-植物甾醇纳米颗粒溶液；继续加入50mL果胶溶液，均质6min，用真空旋转蒸发器出去乙醇，然后添加去离子水保持体积不变，得到酪蛋白酸钠-果胶-植物甾醇混合溶液；
(6)用葡萄糖酸内酯将步骤5中的酪蛋白酸钠-果胶-植物甾醇混合溶液的pH调至4.0，然后磁力搅拌1h，促进复合凝聚，得到酪蛋白酸钠-果胶-植物甾醇纳米颗粒溶液；
(7)将得到的纳米颗粒溶液用真空冷冻干燥机冻干(冻干温度为-80℃，冻干时间为48h)，即得到酪蛋白酸钠-果胶-植物甾醇纳米颗粒冻干粉末。
从图1A可以看出，当芯壁比为1:3时，包埋率和负载量分别达到91.3％和21.2％。
图2和图3分别为酪蛋白酸钠-果胶-植物甾醇纳米颗粒的傅里叶变换红外光谱图和X射线衍射图谱。从图2中我们可以看出代表果胶的亲水性碳水化合物的宽峰出现在2941cm-1和3389cm-1处，分别由C-H和O-H伸缩振动引起。羰基(C＝O)和羧酸根离子带(COO-)分别出现在1747cm-1和1627cm-1。酪蛋白酸钠是两亲性蛋白质分子，代表亲水性的O-H峰和代表疏水性的C-H峰分别出现在3390cm-1和2926cm-1处。酰胺Ⅰ、酰胺Ⅱ和酰胺Ⅲ(-NH3 +基团)的吸收峰分别出现在1668cm-1、1538cm-1和1453cm-1处。
在空白纳米颗粒和酪蛋白酸钠-果胶-植物甾醇纳米颗粒中，1747cm-1、1627cm-1(果胶)和1453cm-1(酪蛋白酸钠)处的峰消失，这表明酪蛋白酸钠(-NH3 +)与果胶(-COO-)之间发生静电相互作用。与空白纳米粒子相比，酪蛋白酸钠-果胶-植物甾醇纳米颗粒在酰胺Ⅱ(1536cm-1)处的特征峰红移了8cm-1，表明植物甾醇和酪蛋白酸钠之间形成了氢键。结果表明，植物甾醇被成功地包裹在壁材(NaCas和果胶)中。
从图3中我们可以看出，纯植物甾醇显示出许多较高强度的晶体衍射峰。而物理混合物的X射线衍射图谱和纯植物甾醇的图谱类似，但强度较低，这是由于物理混合物中植物甾醇的含量低。因此，物理混合不会改变植物甾醇的结晶特性。酪蛋白酸钠-果胶-植物甾醇纳米颗粒和空白纳米颗粒的衍射图样都在13°附近均显示出一个宽峰，这表明包埋后的植物甾醇从有序的结晶状态变为无序的无定形状态。进一步表明植物甾醇成功地掺入纳米颗粒中。
实施例2
调节植物甾醇的用量，芯壁比为1:2、1:4、1:5、1:6，其余条件参照实施例1。
表1各芯壁比的酪蛋白酸钠-果胶-植物甾醇纳米颗粒包埋率和负载量对照表
| 芯壁比 | 1:2 | 1:3 | 1:4 | 1:5 | 1:6 |
| 包埋率(％) | 43.8 | 91.3 | 88.0 | 79.3 | 76.9 |
| 负载量(％) | 14.2 | 21.2 | 13.1 | 12.1 | 10.7 |
从图1A可以看出，随着植物甾醇含量的增加，包埋率和负载量逐渐增加，当达到实施例1中1:3的芯壁比时，包埋率和负载量达到最大，继续增加植物甾醇含量时，包埋率和负载量就开始下降。
图1B表明，随着植物甾醇含量的增加，酪蛋白酸钠-果胶-植物甾醇纳米颗粒的粒径从182.9±3.1nm增加到298.3±1.8nm。如图1C和图1D所示，PDI小于0.3，zeta-电位绝对值大于30mV，这表明所有芯壁比下的酪蛋白酸钠-果胶-植物甾醇纳米颗粒都很均一和稳定。
实施例3
将实施例1中制得的酪蛋白酸钠-果胶-植物甾醇纳米颗粒溶液用葡萄糖酸内酯溶液分别调至不同的pH值(3-7)。然后用多角度粒度与高灵敏度zeta电位分析仪测定其粒径和PDI，结果如图4所示。
从图4A中可以看出，在pH值为3时，由于果胶和酪蛋白酸钠之间的强静电相互作用，形成了不溶性复合物。因此，酪蛋白酸钠-果胶-植物甾醇纳米颗粒的粒径无法测量。除了pH值为3外，酪蛋白酸钠-果胶-植物甾醇纳米颗粒的粒径均保持在260nm左右。至于酪蛋白酸钠-植物甾醇纳米颗粒，在没有果胶且接近等电点(pH＝4.8)的情况下，其产生了大量沉淀，导致粒径增大。当pH值远离等电点时，酪蛋白酸钠-植物甾醇纳米颗粒的粒径约为250nm。当pH值接近酪蛋白酸钠的等电点时，酪蛋白酸钠-果胶-植物甾醇纳米颗粒的形成阻止了酪蛋白酸钠的聚集。从图4B可以看出，酪蛋白酸钠-果胶-植物甾醇纳米颗粒的PDI值在pH 3时也无法测量。另外，在pH 4和5时，酪蛋白酸钠-植物甾醇的PDI大于0.3，表明溶液不均一。对于酪蛋白酸钠-果胶-植物甾醇纳米颗粒，其PDI值小于0.3，溶液相对均一。
综上所述，果胶的存在提高了酪蛋白酸钠-果胶-植物甾醇纳米颗粒的pH稳定性。
实施例4
(1)称取酪蛋白酸钠0.5g于50mL去离子水中，磁力搅拌，-4℃过夜水合；
(2)称取果胶0.5g于50mL去离子水中，70℃水浴，冷却至室温后，-4℃过夜水合；
(3)将步骤1和步骤2得到的溶液分别稀释十倍，待用；
(4)在高速分散器8000rpm的条件下，将酪蛋白酸钠溶液与果胶溶液以1：3、1：2、1：1、2：1、3：1混合；
(5)用多角度粒度与高灵敏度zeta电位分析仪测定其粒径和PDI，结果如图8所示。如图8A所示，随着果胶含量的增加，酪蛋白酸钠-果胶纳米颗粒的粒径从182.9±2.4nm增加到376.2±4.5nm。这可能是由于附着在酪蛋白酸钠-果胶纳米颗粒表面的果胶含量增加了。PDI值也从0.216±0.02增加到0.493±0.03，表明纳米颗粒的均匀性降低。原因是高浓度的果胶导致纳米颗粒聚集。当酪蛋白酸钠与果胶的比例为3:1和2:1时，PDI值分别为0.216±0.02和0.285±0.01。如图8B所示，随着果胶含量的增加，酪蛋白酸钠-果胶纳米颗粒的zeta电位从-26.2±0.35mV降低到-44.7±1.17mV。在胶体的静电稳定中，zeta电位对于评估悬浮液中纳米粒子的稳定性非常重要。低于-30mV或高于30mV的zeta电位值通常被认为是稳定的。小尺寸的纳米颗粒有利于提高生物可及性。当酪蛋白酸钠与果胶的比例为2:1时，zeta电位为-32.0±0.65mV，这意味着纳米颗粒是稳定的。此外，在这个比例下，纳米颗粒的粒径和PDI相对较小，分别为203±5nm和0.285±0.01。以上所有结果表明酪蛋白酸钠与果胶的质量比为2:1是制备纳米颗粒的最佳选择。
实施例5
将实施例1中制得的酪蛋白酸钠-果胶-植物甾醇纳米颗粒溶液分别加热到70、80、90和100℃，并保持30min，待冷却至室温后，同样用多角度粒度与高灵敏度zeta电位分析仪测定其粒径和PDI，结果如图5所示。从图5A和5B中可以看出，随着温度的升高，纳米颗粒的粒径和PDI都逐渐减小。酪蛋白酸钠-果胶-植物甾醇纳米颗粒的PDI小于酪蛋白酸钠-植物甾醇纳米颗粒，表明酪蛋白酸钠-果胶-植物甾醇纳米颗粒具有更好的热稳定性。PDI值和粒径的降低可能是因为加热导致果胶在酪蛋白酸钠表面重新排列而形成更致密的网络结构。以上结果表明，果胶的存在提高了酪蛋白酸钠-果胶-植物甾醇纳米颗粒的热稳定性。
实施例6
酪蛋白酸钠-果胶-植物甾醇纳米颗粒储藏稳定性实验：
(1)向实施例1所制备的酪蛋白酸钠-果胶-植物甾醇纳米颗粒溶液中加入少量叠氮化钠，防止细菌生长。
(2)将步骤1中的溶液分装在样品瓶中，分别至于4℃和25℃下培养15天，期间每隔3天取样测量粒径、电位、PDI和植物甾醇保留率，结果见图6。
从图6A中我们可以看出，在4℃和25℃下储存15天后，植物甾醇的保留率分别为81％和57％，这表明纳米颗粒不容易解离，其复合结构可以保存良好。随着储存温度的升高，纳米颗粒中植物甾醇的保留率减小，这说明温度升高会促进植物甾醇的释放。这可能是因为随着储存温度的升高和储存时间的延长，蛋白质和多糖逐渐解离，纳米颗粒中的植物甾醇得到释放。除了植物甾醇的保留率外，还可以用粒径、PDI和zeta-电位来评估其稳定性。从图6B-6D可以看出，粒径、PDI和zeta-电位没有显著变化。此外，zeta-电位的绝对值始终保持在30mV以上。结果表明，纳米颗粒具有良好的储存稳定性，且对植物甾醇有良好的包封和保护作用。
实施例7
酪蛋白酸钠-果胶-植物甾醇纳米颗粒的生物利用度的测定方法：
胃模拟消化：模拟胃液中含有2mg/mL氯化钠、3.2mg/mL胃蛋白酶。然后用盐酸将pH值调节至1.3。将样品与10mL模拟胃液混合，然后在37℃的水浴振动器中连续振荡2h(100rpm)。
小肠模拟消化：模拟肠液含有6.8mg/mL磷酸二氢钾、0.2mol/L氢氧化钠、10mg/mL胰蛋白酶和5mg/mL脱氧胆酸钠。然后用氢氧化钠将pH值调节至7.0。将胃模拟消化完成的混合液用氢氧化钠调节pH至7.0。然后将5mL模拟肠液添加到上述混合液中。混合液在37℃水浴振动器中连续振荡4h(100rpm)。消化完成后，所有混合物在10℃下8000rpm离心30min。收集中间胶束层并测定样品中植物甾醇的含量。
实验结果见图7
从图7中可以看出，游离植物甾醇、酪蛋白酸钠-植物甾醇(NC-PSs)纳米颗粒和酪蛋白酸钠-果胶-植物甾醇(NCP-PSs)纳米颗粒中植物甾醇的生物利用度。根据之前的研究，小肠中的植物甾醇会抑制胆固醇的吸收。植物甾醇只有在混合胶束中才能被小肠吸收。消化后，测量胶束层中植物甾醇的含量。结果如图7所示，植物甾醇含量越高，生物利用度越高。当芯壁比为1：3时，游离植物甾醇和酪蛋白酸钠-植物甾醇纳米颗粒中植物甾醇的生物利用度分别为29％和57％。然而，酪蛋白酸钠-果胶-植物甾醇纳米颗粒中植物甾醇的生物利用度达到82％，与酪蛋白酸钠-植物甾醇纳米颗粒中的植物甾醇相比，其生物利用度提高了43.8％。由于游离植物甾醇暴露在胃肠道的恶劣环境中，导致其不稳定，容易被降解。而酪蛋白酸钠和果胶能保护植物甾醇，使其不在胃环境中降解。果胶的存在进一步提高了植物甾醇的生物利用度。果胶溶液呈酸性，其在酸性条件下能稳定存在，且在胃液中不会被胃蛋白酶消化。在胃液中，果胶附着在酪蛋白酸钠表面以延迟胃蛋白酶对酪蛋白的水解。另一方面，植物甾醇生物利用度的增加也可能是纳米颗粒中的植物甾醇是非结晶态的，以及纳米颗粒的粒径较小，容易被消化吸收。
对比例1
参照实施例1的用量条件，改变添加顺序，先将酪蛋白稀释水溶液和果胶稀释水溶液混合，再加植物甾醇醇溶液。
均质后发现，溶液浑浊，放置后会出现白色沉淀，无法制成纳米颗粒。
Claims (10)
1.一种酪蛋白酸钠-果胶-植物甾醇纳米颗粒的制备方法，是按照以下步骤进行：
(1)将酪蛋白酸钠溶解在水中，配置成酪蛋白酸钠水溶液；
(2)将果胶溶解在水中，配置成果胶水溶液；
(3)将植物甾醇溶解在乙醇中，配置成植物甾醇醇溶液；
(4)将步骤(1)和(2)配置的溶液加水稀释，配置成酪蛋白酸钠稀释水溶液和果胶稀释水溶液；
(5)将植物甾醇醇溶液加入进酪蛋白酸钠稀释水溶液中，然后将果胶稀释水溶液加入酪蛋白酸钠-植物甾醇溶液中，均质后得到酪蛋白酸钠-果胶-植物甾醇混合溶液；
(6)调节酪蛋白酸钠-果胶-植物甾醇混合溶液的pH，然后搅拌，得到纳米颗粒溶液；
(7)将得到的纳米颗粒溶液干燥，即得酪蛋白酸钠-果胶-植物甾醇纳米颗粒粉末。
2.根据权利要求1所述方法，步骤(1)是将酪蛋白酸钠加入去离子水中，其中，酪蛋白酸钠与去离子水质量体积比以mg:mL计为1:0.5～1.5。
3.根据权利要求1所述方法，步骤(2)是将果胶加入去离子水中，其中，果胶与去离子水质量体积比以mg:mL计为1:0.5～1.5。
4.根据权利要求1所述方法，步骤(3)是将植物甾醇加入乙醇中，其中，植物甾醇与乙醇质量体积比以mg:mL计为6～11:1。
5.根据权利要求1所述方法，步骤(5)中酪蛋白酸钠和果胶的质量比为2:1。
6.根据权利要求1所述方法，所述步骤(5)需要在高分散器下进行，高分散器转速为4000～8000rpm。
7.根据权利要求1所述方法，所述步骤(5)中均质需要3～6min。
8.根据权利要求1所述方法，所述步骤(6)中需要搅拌0.5～2h。
9.权利要求1～8任一项所述的方法制备得到的一种酪蛋白酸钠-果胶-植物甾醇纳米颗粒。
10.权利要求9所述的一种酪蛋白酸钠-果胶-植物甾醇纳米颗粒在食品、保健品、生物制药等领域中的应用。
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