CN113820304A - 一种快速鉴别原料乳、巴氏杀菌乳和超高温灭菌乳的方法 - Google Patents
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Abstract
本发明提供一种快速鉴别原料乳、巴氏杀菌乳和超高温灭菌乳的方法,包括以下步骤:S1、向待测乳样中加入酚酞二磷酸四钠水溶液,调节混合液的pH为8.2~10,然后于35~43℃水浴加热,观察混合液颜色变化;S2、向待测乳样中加入过氧化氢水溶液,采用淀粉碘化钾试纸检测,观察试纸颜色变化;S3、如果S1混合液颜色为红色,S2试纸颜色为蓝色,则待测乳样为原料乳;如果S1混合液颜色为无色,S2试纸颜色为蓝色,则待测乳样为巴氏杀菌乳;如果S1混合液颜色为无色,S2试纸颜色为无色,则待测乳样为超高温灭菌乳。该方法不需要专业的测定仪器,仅通过乳样和试纸的颜色变化情况即可快速判定待测样品的热处理程度。
Description
技术领域
本发明属于乳品鉴别技术领域,具体涉及一种快速鉴别原料乳、巴氏杀菌乳和超高温灭菌乳的方法。
背景技术
乳品可以为人体提供大量营养物质,但其中也存在很多致病微生物,合适的杀菌工艺可以杀灭牛奶中的致病微生物。目前液体原料乳的杀菌工艺主要采用巴氏杀菌和超高温灭菌(UHT)2种热处理方法。巴氏杀菌通常采用72℃、15s的高温短时杀菌,经巴氏灭菌法消毒的牛奶被称为“巴氏乳”,可以保留原料乳中的大部分活性营养物质。而超高温灭菌法则采用137℃、4s瞬时消灭了细菌和酶,有些营养物质也被严重破坏,经超高温消毒的牛奶在无菌状态下包装,保质期大大延长,所以被称为常温奶。
如何简单、快速地识别原料乳、巴氏杀菌乳和UHT乳,是一个亟待解决的技术问题。
发明内容
碱性磷酸酶是牛乳中的一个热敏感酶,其热稳定性略高于乳品中的大部分致病微生物,比如结核杆菌、李斯特菌等。发明人在研究中发现,在巴氏杀菌(72℃,15s)的条件下,碱性磷酸酶的活性会大幅降低至350mU/L以下。因此,碱性磷酸酶的活性可以标志着乳制品巴氏杀菌的成功与否。
乳过氧化物酶也是牛乳中具有代表性的一个热敏感酶,其热稳定性要高于乳品中的其他内源性酶。发明人在研究中发现,在巴氏杀菌(72℃,15s)的条件下,乳过氧化物酶只会损失20-30%的活性,并不会完全失活,而在超高温灭菌(UHT)的条件下,则会完全失活。因此,乳过氧化物酶的活性可以标志着超高温灭菌的成功与否,或者标志巴氏杀菌过程中是否存在过度热加工。
基于碱性磷酸酶和乳过氧化物酶特殊的热敏感性,本发明提供一种快速鉴别原料乳、巴氏杀菌乳和超高温灭菌乳的方法,其不需要负载专业的测定仪器,仅通过乳样和试纸的颜色变化情况即可快速判定待测样品的热处理程度。
具体来说,本发明提供了如下技术方案:
一种快速鉴别原料乳、巴氏杀菌乳和超高温灭菌乳的方法,包括以下步骤:
S1、向待测乳样中加入酚酞二磷酸四钠水溶液,调节混合液的pH为8.2~10,然后于35~43℃水浴加热,观察混合液颜色变化;
S2、向待测乳样中加入过氧化氢水溶液,采用淀粉碘化钾试纸检测,观察试纸颜色变化;
S3、如果S1所述混合液颜色为红色,S2所述试纸颜色为蓝色,则待测乳样为原料乳;
如果S1所述混合液颜色为无色,S2所述试纸颜色为蓝色,则待测乳样为巴氏杀菌乳;
如果S1所述混合液颜色为无色,S2所述试纸颜色为无色,则待测乳样为超高温灭菌乳。
本发明采用酚酞二磷酸四钠检测碱性磷酸酶,乳样中的碱性磷酸酶可催化酚酞二磷酸四钠生成酚酞,酚酞在碱性条件下呈红色,肉眼即可判断,不必用分光光度计,通过优化检测条件,最快20min即可出结果;采用过氧化氢配合淀粉碘化钾试纸检测过氧化物酶,乳样中的过氧化物酶可催化过氧化氢分解并氧化碘化钾释放出单质碘,单质碘与淀粉反应立即变成蓝色,检测快速(1min内),可以立即判断出乳样中是否含有过氧化物酶,然后结合碱性磷酸酶实验结果鉴别乳样是原料乳、巴氏杀菌乳还是UHT乳。
优选的,上述的快速鉴别原料乳、巴氏杀菌乳和超高温灭菌乳的方法,S1中,相对于100体积份的待测乳样来说,加入酚酞二磷酸四钠水溶液80~120体积份。
优选的,上述的快速鉴别原料乳、巴氏杀菌乳和超高温灭菌乳的方法,S1中,所述酚酞二磷酸四钠水溶液中酚酞二磷酸四钠的质量分数为0.3~0.7%。
优选的,上述的快速鉴别原料乳、巴氏杀菌乳和超高温灭菌乳的方法,S1中,向待测乳样中加入酚酞二磷酸四钠水溶液后,采用加入碱性缓冲液的方式调节混合液的pH,所述碱性缓冲液选自硼砂-氢氧化钠、碳酸钠-碳酸氢钠、碳酸钠-氢氧化钠或氨-氯化铵碱性缓冲液中的一种或几种。
优选的,上述的快速鉴别原料乳、巴氏杀菌乳和超高温灭菌乳的方法,S2中,相对于100体积份的待测乳样来说,加入过氧化氢水溶液2~6体积份。
优选的,上述的快速鉴别原料乳、巴氏杀菌乳和超高温灭菌乳的方法,S2中,所述过氧化氢水溶液中过氧化氢的质量分数为0.1~0.5%。
优选的,上述的快速鉴别原料乳、巴氏杀菌乳和超高温灭菌乳的方法,所述待测乳样为牛乳。
本发明所取得的有益效果:
本发明提供一种快速鉴别原料乳、巴氏杀菌乳和超高温灭菌乳的方法,其不需要负载专业的测定仪器,仅通过乳样和试纸的颜色变化情况即可快速判定待测样品的热处理程度,时间为20min左右,远小于现有其他方法例如浊度法的用时,适合不具备设备条件且需要现场快速判定产品热处理情况的场所。
具体实施方式
以下实施例用于说明本发明,但不用来限制本发明的范围。实施例中未注明具体技术或条件者,按照本领域内的文献所描述的技术或条件,或者按照产品说明书进行。
以下实施例中,所用仪器等未注明生产厂商者,均为可通过正规渠道商购买得到的常规产品。所述方法如无特别说明均为常规方法,所用原材料如无特别说明均能从公开商业途径而得。
实施例1
实施例1提供一种快速鉴别原料乳、巴氏杀菌乳和超高温灭菌乳的方法,具体步骤如下:
1.1、配制碱性缓冲液,碱性缓冲液中碳酸钠和碳酸氢钠浓度均为0.1mol/L,pH为9.7-9.9;配制质量分数为0.5%的酚酞二磷酸四钠水溶液。
1.2、碱性磷酸酶测定:取100微升生牛乳、100微升巴氏杀菌乳、100微升UHT乳,分别加到三个2mL离心管中,向每个离心管中加入800微升碱性缓冲液和100微升酚酞二磷酸四钠水溶液,置于40℃水浴锅中水浴20min,含有生牛乳的混合液颜色变为红色,含有巴氏杀菌乳和UHT乳的混合液颜色为无色;
2.1、淀粉碘化钾试纸制作:取碘化钾1g、淀粉1g溶于200mL水中,加热煮沸3min,加定量滤纸充分浸泡5min,取出置于55℃烘箱中烘干,剪成3-5mm宽4-5cm长纸条,置于密闭容器中待用。
2.2、乳过氧化物酶测定:取500微升生牛乳、500微升巴氏杀菌乳、500微升UHT乳,分别加到三个2mL的离心管中,向每个离心管中加入20微升质量分数为0.3%的过氧化氢水溶液并振摇混匀,立即将淀粉碘化钾试纸条插入乳样中,含有生牛乳和巴氏杀菌乳的试纸颜色变为蓝色,含有UHT乳的试纸颜色为无色;
3、对于产品热处理情况未知的待测乳样,即可根据观察到的混合液颜色和试纸颜色,通过下表1鉴别生牛乳、巴氏杀菌乳和超高温灭菌乳。
表1
混合液颜色 | 试纸颜色 | 判定结果 |
红色 | 蓝色 | 生牛乳 |
无色 | 蓝色 | 巴氏杀菌乳 |
无色 | 无色 | UHT乳 |
对比例1
与实施例1相比,其区别在于,步骤1.1、步骤1.2的具体步骤如下:
1.1、配制碱性缓冲液,碱性缓冲液中碳酸钠和碳酸氢钠浓度均为0.1mol/L,pH为9.7-9.9;配制质量分数为0.5%的酚酞二磷酸四钠水溶液。
1.2、碱性磷酸酶测定:取100微升生牛乳、100微升巴氏杀菌乳、100微升UHT乳,分别加到三个2mL离心管中,向每个离心管中加入800微升碱性缓冲液和100微升酚酞二磷酸四钠水溶液,置于30℃水浴锅中水浴29min,含有生牛乳的混合液颜色变为红色,含有巴氏杀菌乳和UHT乳的混合液颜色为无色。
对比例2
与实施例1相比,其区别在于,步骤1.1、步骤1.2的具体步骤如下:
1.1、配制碱性缓冲液,碱性缓冲液中碳酸钠和碳酸氢钠浓度均为0.1mol/L,pH为9.7-9.9;配制质量分数为0.5%的酚酞二磷酸四钠水溶液。
1.2、碱性磷酸酶测定:取100微升生牛乳、100微升巴氏杀菌乳、100微升UHT乳,分别加到三个2mL离心管中,向每个离心管中加入800微升碱性缓冲液和100微升酚酞二磷酸四钠水溶液,置于45℃水浴锅中水浴26min,含有生牛乳的混合液颜色变为红色,含有巴氏杀菌乳和UHT乳的混合液颜色为无色。
虽然,上文中已经用一般性说明、具体实施方式及试验,对本发明作了详尽的描述,但在本发明基础上,可以对其作一些修改或改进,这对本领域技术人员而言是显而易见的。因此,在不偏离本发明精神的基础上所做的这些修改或改进,均属于本发明要求保护的范围。
Claims (7)
1.一种快速鉴别原料乳、巴氏杀菌乳和超高温灭菌乳的方法,其特征在于,包括以下步骤:
S1、向待测乳样中加入酚酞二磷酸四钠水溶液,调节混合液的pH为8.2~10,然后于35~43℃水浴加热,观察混合液颜色变化;
S2、向待测乳样中加入过氧化氢水溶液,采用淀粉碘化钾试纸检测,观察试纸颜色变化;
S3、如果S1所述混合液颜色为红色,S2所述试纸颜色为蓝色,则待测乳样为原料乳;
如果S1所述混合液颜色为无色,S2所述试纸颜色为蓝色,则待测乳样为巴氏杀菌乳;
如果S1所述混合液颜色为无色,S2所述试纸颜色为无色,则待测乳样为超高温灭菌乳。
2.根据权利要求1所述的快速鉴别原料乳、巴氏杀菌乳和超高温灭菌乳的方法,其特征在于,S1中,相对于100体积份的待测乳样来说,加入酚酞二磷酸四钠水溶液80~120体积份。
3.根据权利要求1或2所述的快速鉴别原料乳、巴氏杀菌乳和超高温灭菌乳的方法,其特征在于,S1中,所述酚酞二磷酸四钠水溶液中酚酞二磷酸四钠的质量分数为0.3~0.7%。
4.根据权利要求1-3任一项所述的快速鉴别原料乳、巴氏杀菌乳和超高温灭菌乳的方法,其特征在于,S1中,向待测乳样中加入酚酞二磷酸四钠水溶液后,采用加入碱性缓冲液的方式调节混合液的pH,所述碱性缓冲液选自硼砂-氢氧化钠、碳酸钠-碳酸氢钠、碳酸钠-氢氧化钠或氨-氯化铵碱性缓冲液中的一种或几种。
5.根据权利要求1-4任一项所述的快速鉴别原料乳、巴氏杀菌乳和超高温灭菌乳的方法,其特征在于,S2中,相对于100体积份的待测乳样来说,加入过氧化氢水溶液2~6体积份。
6.根据权利要求1-5任一项所述的快速鉴别原料乳、巴氏杀菌乳和超高温灭菌乳的方法,其特征在于,S2中,所述过氧化氢水溶液中过氧化氢的质量分数为0.1~0.5%。
7.根据权利要求1-6任一项所述的快速鉴别原料乳、巴氏杀菌乳和超高温灭菌乳的方法,其特征在于,所述待测乳样为牛乳。
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