CN113766929A - 癌症治疗 - Google Patents

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Abstract

本公开提供了用于治疗和/或预防癌症和转移性肿瘤的技术。例如，在一些实施方案中，在肿瘤去除(例如，通过手术切除)后，在不存在免疫调节有效负载的情况下将可以刺激先天免疫的生物材料(例如，聚合物生物材料)或支架施用于受试者的靶部位。此类技术可以降低或抑制肿瘤再生长和/或转移的发生率。

Description

癌症治疗
相关申请的交叉引用
本申请要求2019年5月2日提交的美国临时申请号62/842,068的权益，其内容特此整体并入文中。
背景技术
将药物、营养物或其他物质全身施用到循环系统中会影响整个身体。全身施用途径包括肠内(例如，使药物通过胃肠道吸收的口服剂量)和肠胃外(例如，静脉内、肌内和皮下注射)施用。免疫治疗剂的施用通常依赖于这些全身施用途径，这可导致不希望的副作用。在一些情况下，由于相关的毒性和当前施用方法与系统的限制，某些有前景的治疗剂极难开发。
手术通常是实体瘤癌症的一线治疗，并且通常与抗癌疗法的全身施用组合使用。然而，由于多种代谢和内分泌反应的变化，手术诱导的免疫抑制已引起术后脓毒性并发症和肿瘤转移的发展，最终导致许多患者死亡(Hiller,J.G.等人Nature Reviews ClinicalOncology,2018,15,205–218)。
发明内容
免疫疗法的全身施用可导致不良副作用，例如诱导对非癌细胞和/或组织(诸如非肿瘤特异性免疫细胞)不期望的毒性，和/或需要高剂量才能在靶部位达到足够的浓度来诱导治疗反应。肿瘤的手术切除可导致免疫抑制。在肿瘤切除后可能发生在手术部位的免疫反应的这类变化可能促进或促成休眠微转移的激活和/或残留癌细胞的增殖，从而增加癌症复发的风险。
本发明人先前已描述了包含生物材料和有效负载的系统，所述有效负载可以是或包含先天免疫调节剂(参见，例如，WO2018/045058)，当施用给已经历或正经历肿瘤切除的受试者时，所述系统尤其可以是非常有用的。此系统的属性解决了与某些现有技术(包括例如癌症治疗的某些常规方法)相关的一个或多个问题的根源。例如，此系统可减少和/或避免可与免疫治疗剂的全身施用相关的某些不良事件(例如皮疹、肝炎、腹泻、结肠炎、垂体炎、甲状腺炎和肾上腺功能不全)。尤其，此系统可以减少或消除非肿瘤特异性免疫细胞暴露于全身施用的免疫治疗药物和/或高剂量的这类药物，所述高剂量的这类药物通常是全身施用所需的，以在肿瘤中达到足够的浓度来诱导期望的反应；尤其，该系统可以在肿瘤切除后提供对先天免疫的局部激动作用，这尤其可以通过将药物的作用集中在需要的地方来提高功效。附加地或替代地，在切除后提供对先天免疫的局部激动作用的系统尤其可以破坏对癌症的局部免疫耐受性并允许全身性抗肿瘤免疫的发展，这可以例如在一些实施方案中导致播散性疾病的根除。
本公开提供了另一个令人惊讶的见解，即某些生物材料(包括聚合物生物材料)能够提供足够的免疫调节活性，例如先天免疫调节活性，以实现有益效果，例如如本文所述，即使在不存在单独的免疫调节有效负载(诸如先天免疫调节有效负载)的情况下。
生物材料通常用作辅助载体和/或佐剂以递送治疗剂，并且先前不被认为驱动治疗性治疗的功效。例如，壳聚糖通常被称为递送基因疗法和/或化疗的媒介物，或称为增强被递送抗原的免疫刺激活性的佐剂，而不是作为治疗剂中的活性成分。本公开提供了某些类型的生物材料即使在不存在已知治疗剂的情况下施用时也可用于癌症治疗的见解。因此，本公开教导了先前不被认为是治疗的主要驱动因素的生物材料的癌症疗法的有用性，并且还教导了对于这些和其他生物材料(包括聚合物生物材料)特别有效和/或期望的治疗策略。
本公开尤其认识到，某些生物材料(例如，聚合物生物材料)本身可将免疫反应调节到足以在肿瘤切除后被置于靶部位时可促进和/或促成抗肿瘤免疫的程度和/或性质。例如，本公开尤其认识到，某些生物材料(例如，聚合物生物材料)本身可将先天免疫刺激到足以在肿瘤切除后被置于靶部位时可诱导抗肿瘤免疫的程度和/或性质。在一些实施方案中，此种抗肿瘤免疫可以导致癌症复发和/或转移和/或与其相关的死亡率的风险和/或发生率的降低。因此，本公开提供了可以将免疫刺激作用集中到有需要的靶部位(例如，肿瘤已经手术去除的部位)的系统和/或组合物。在一些实施方案中，此类系统和/或组合物可以特别用于治疗癌症，例如，通过减少或抑制(例如，延迟发作，减少程度)肿瘤复发和/或转移，同时最小化不良副作用和/或全身性暴露于先天免疫激动剂。
在一些方面，提供了方法，其包括在肿瘤去除后向受试者中的靶部位施用包含先天免疫调节性组分的组合物，其中所述先天免疫调节性组分基本上由先天免疫的生物材料(例如，聚合物生物材料)激动剂组成或由其组成。
在一些实施方案中，本文提供和/或使用的先天免疫的生物材料(例如，聚合物生物材料)激动剂可间接或直接激活模式识别受体，从而诱导先天免疫。此种模式识别受体的实例是或包括C型凝集素受体(CLR)、NOD样受体(NLR)、RIG-I样受体(RLR)和/或Toll样受体(TLR)。在一些实施方案中，本文提供和/或使用的先天免疫的生物材料(例如，聚合物生物材料)激动剂可间接或直接激活炎性体(例如，但不限于AIM2炎性体、NLRP1(NALP1b)炎性体、NLRP3(NALP3)炎性体和/或NLRC4(IPAF)炎性体)，从而诱导先天免疫。在一些实施方案中，本文提供和/或使用的先天免疫的生物材料(例如，聚合物生物材料)激动剂可间接或直接激活cGAS-STING途径，从而诱导先天免疫。在一些实施方案中，本文提供和/或使用的先天免疫的生物材料(例如，聚合物生物材料)激动剂可间接或直接诱导NFκB的活性和/或水平。在一些实施方案中，本文提供和/或使用的先天免疫的生物材料(例如，聚合物生物材料)激动剂可间接或直接导致活性氧物质的产生。
例如，在一些实施方案中，本文提供和/或使用的先天免疫的生物材料(例如，聚合物生物材料)激动剂的特征在于，当向有需要的受试者中的靶部位施用后24小时评估时，与未向靶部位施用先天免疫的生物材料(例如，聚合物生物材料)激动剂时观察到的相比，在受试者的靶部位和/或体循环中存在更多的促炎细胞因子。此类促炎细胞因子的非限制性实例包括CXCL10、IFN-α、IFN-β、IL-1β、IL-6、IL-18、TNF-α及其组合。
在一些实施方案中，本文提供和/或使用的先天免疫的生物材料(例如，聚合物生物材料)激动剂是或包含碳水化合物聚合物。根据本公开有用的示例性碳水化合物聚合物是或包含壳聚糖或其变体，或其组合。在一些实施方案中，用于本文提供和/或使用的先天免疫的生物材料激动剂的聚合物的另外实例包括但不限于透明质酸、藻酸盐、聚丙烯酸、聚磷腈、硅胶、及其变体、及其组合。
在一些实施方案中，本文提供和/或使用的先天免疫的生物材料(例如，聚合物生物材料)激动剂的特征在于，当通过向测试受试者中的靶部位施用而在体内评估时，至少10％的此种先天免疫的生物材料(例如，聚合物生物材料)激动剂在施用后2天在体内保留在靶部位处。
在一些实施方案中，本文提供和/或使用的先天免疫的生物材料(例如，聚合物生物材料)激动剂的特征在于约10Pa至约50,000Pa的储能模量。例如，在一些实施方案中，此种先天免疫的生物材料(例如，聚合物生物材料)激动剂是粘性聚合物溶液。在一些实施方案中，此种先天免疫的生物材料(例如，聚合物生物材料)激动剂是或包含聚合物网络生物材料(例如，水凝胶)，其在一些实施方案中可以是或包含交联的和/或非交联的聚合物网络生物材料。
在一些实施方案中，本文提供和/或使用的先天免疫的生物材料(例如，聚合物生物材料)激动剂是体内可生物降解的。
本文提供的技术可用于在受试者的肿瘤已被去除(例如，通过手术切除)后治疗受试者。因此，在一些实施方案中，将本文所述和/或使用的组合物施用给已经历肿瘤去除(例如，通过手术切除)的受试者。在一些实施方案中，将本文所述和/或使用的组合物施用给已经历(例如，最近经历)肿瘤切除的受试者。
在一些实施方案中，将本文所述和/或使用的组合物在受试者的肿瘤被去除后(例如，如本文所述)施用到受试者的靶部位。例如，在一些实施方案中，此种施用靶部位是或包括肿瘤切除部位。在一些实施方案中，此种肿瘤切除部位的特征可在于不存在明显的残留肿瘤抗原。在一些实施方案中，此种施用靶部位是或包括与肿瘤切除部位紧密接近(例如，在4英寸内)的部位。在一些实施方案中，此种施用靶部位是或包括前哨淋巴结。
如本领域普通技术人员将理解的，根据本公开有用的组合物可以使用本领域已知的适当递送方法施用到有需要的受试者的靶部位。例如，在一些实施方案中，所提供的技术可适用于通过注射施用。例如，在一些实施方案中，用于此种注射的组合物是液体，并且组合物中提供的先天免疫的生物材料(例如，聚合物生物材料)激动剂是或包含粘性溶液(例如，粘性聚合物溶液)。在其他实施方案中，用于此种注射的组合物是液体，并且组合物中提供的先天免疫的生物材料(例如，聚合物生物材料)激动剂在其注射的靶部位原位形成聚合物网络生物材料(例如，如本文所述和/或使用的)。
在一些实施方案中，本文提供的技术可适用于通过植入施用。例如，在一些实施方案中，在根据本公开的组合物中提供的先天免疫的生物材料激动剂是预形成的生物材料(例如，预形成的聚合物网络生物材料，其在一些实施方案中可以是或包含交联的聚合物网络生物材料和/或非交联的聚合物网络生物材料)。示例性聚合物网络生物材料是或包含水凝胶。
在一些实施方案中，本文提供的技术可用于治疗患有转移性癌症的受试者。例如，在一些实施方案中，本文提供的方法可以包括向患有一种或多种转移的受试者中的靶部位(例如，如本文所述)施用，所述受试者已经历肿瘤切除(例如，原发性肿瘤的手术切除)，并且任选地在施用后监测所述受试者中的至少一个转移部位。
在一些实施方案中，本公开提供技术，使得施用先天免疫的生物材料(例如，聚合物生物材料)激动剂(例如，如本文所述和/或利用的)本身足以提供抗肿瘤免疫，并且因此不一定需要向有需要的受试者(例如，如本文所述)施用例如肿瘤抗原和/或微粒，和/或过继转移免疫细胞(例如，T细胞)。因此，在一些实施方案中，本文提供的技术不包括向已接受本文所述和/或使用的组合物的受试者施用肿瘤抗原和/或微粒。在某些实施方案中，本文提供的技术不包括将免疫细胞(例如T细胞)过继转移到已接受本文所述和/或使用的组合物的受试者。
下文和权利要求书中更详细地描述本公开所涵盖的这些和其他方面。
附图说明
图1示出了接受先天免疫的生物材料激动剂的液体制剂(例如，不同浓度的羧甲基壳聚糖(CMCH)和热响应性聚合物的组合的液体制剂)的动物的存活数据，与在不存在先天免疫的生物材料激动剂的情况下接受热响应性聚合物的液体制剂的动物进行比较。
某些定义
适应性免疫反应的激活剂：术语“适应性免疫反应的激活剂”是指一种剂，其在受试者中(例如，在施用其的受试者中和/或另外需要其的受试者中)激活适应性免疫系统(和/或适应性免疫系统的一个或多个特征)。此种激活可以恢复抗肿瘤功能，例如，通过中和抑制性免疫检查点或通过触发共刺激受体，最终产生针对由癌细胞表达的免疫原性抗原的辅助和/或效应T细胞反应并产生记忆B细胞、浆细胞和/或T细胞群。在某些实施方案中，适应性免疫反应的激活剂涉及适应性免疫反应和/或白细胞运输的调节。适应性免疫反应的激活剂的实例包括例如WO 2018/045058中描述的那些，其内容出于本文所述的目的通过引用整体并入本文。在一些实施方案中，本领域技术人员阅读本公开后将理解，在一些实施方案中，从本文所述的组合物或药物组合物排除的适应性免疫反应的激活剂是或包含小分子、多肽(例如细胞因子)和/或核酸。
先天免疫反应的激活剂：术语“先天免疫反应的激活剂”是指一种剂，其在受试者中(例如，在施用其的受试者中和/或另外需要其的受试者中)激活先天免疫系统(和/或先天免疫系统的一个或多个特征)。此种激活可以刺激(例如，可以增加其水平和/或活性)一种或多种引发炎症反应和/或帮助诱导适应性免疫反应的剂，导致抗原特异性获得性免疫的发展。在一些实施方案中，先天免疫系统的激活可导致相关免疫细胞(包括例如但不限于嗜中性粒细胞、嗜碱性粒细胞、嗜酸性粒细胞、天然杀伤细胞、树突细胞、单核细胞和巨噬细胞)的募集、细胞因子产生、增强的白细胞增殖和/或存活、以及通过增加抗原呈递细胞的抗原呈递和/或共刺激分子的水平和/或活性而改善的T细胞致敏。先天免疫反应的激活剂的实例包括例如WO 2018/045058中描述的那些，其内容出于本文所述的目的通过引用整体并入本文。在一些实施方案中，本领域技术人员阅读本公开后将理解，在一些实施方案中，从本文所述的组合物或药物组合物排除的先天免疫反应的激活剂是或包含小分子、多肽(例如细胞因子)和/或核酸。
施用：如本文所用，术语“施用(administering)”或“施用(administration)”通常是指将组合物施用给受试者以实现将剂递送至靶部位或待治疗的部位，所述剂为组合物或包含在组合物中。本领域普通技术人员将意识到在适当情况下可用于向受试者(例如人)施用不同剂的多种途径。例如，虽然术语“施用(“administer”、“administering”或“administration”)”通常是指植入、吸收、摄取、注射、吸入、肠胃外施用或以其他方式引入本文所述的组合物，但在施用包含本文提供的先天免疫的生物材料(例如，聚合物生物材料)激动剂的组合物的上下文中，施用在一些实施方案中可以是指植入或在一些实施方案中是指注射。
激动剂：本领域技术人员将理解，术语“激动剂”可用于指其存在、水平、程度、类型或形式与另一种剂(即，受激动的剂)的水平和/或活性增加相关的剂、状况或事件。一般而言，激动剂可以是或包括任何化学类别的剂，包括例如小分子、多肽、核酸、碳水化合物、脂质、金属、无机晶体和/或显示相关活化活性的任何其他实体。在一些实施方案中，激动剂可以是直接的(在这种情况下，其直接对其靶标施加影响)；在一些实施方案中，激动剂可以是间接的(在这种情况下，其通过与其靶标结合以外的方式施加影响；例如，通过与靶标的调节剂相互作用，从而改变靶标的水平或活性)。
拮抗剂：本领域技术人员将理解，术语“拮抗剂”可指其存在、水平、程度、类型或形式与另一种剂(即，受拮抗的剂)的水平和/或活性降低相关的剂、状况或事件。一般而言，拮抗剂可包括任何化学类别的剂，包括例如小分子、多肽、核酸、碳水化合物、脂质、金属和/或显示相关抑制活性的任何其他实体。在一些实施方案中，拮抗剂可以是“直接拮抗剂”，因为它直接与其靶标结合；在一些实施方案中，拮抗剂可以是“间接拮抗剂”，因为它通过与其靶标直接结合以外的方式施加其影响；例如，通过与靶标的调节剂相互作用，从而改变靶标的水平或活性)。
抗体：术语“抗体”是指血清的功能组分，并且通常被称为分子集合(抗体或免疫球蛋白)或一个分子(抗体分子或免疫球蛋白分子)。抗体是一种多肽，其能够与特异性抗原决定簇(抗原或抗原表位)结合或反应，这又可导致免疫效应机制的诱导。单个抗体通常被认为是单特异性的，并且抗体的组合物可以是单克隆的(即，由相同的抗体分子组成)或多克隆的(即，由与同一抗原上或甚至相异的不同抗原上的相同或不同表位反应的两种或更多种不同抗体组成)。每种抗体都具有独特的结构，使其能够与其对应的抗原特异性结合，并且所有天然抗体都具有相同的整体基本结构，即两个相同轻链和两个相同重链。抗体也统称为免疫球蛋白。抗体可以是人或非人(例如，啮齿动物，诸如鼠、狗、骆驼等)来源(例如，可以具有最初在人或非人细胞或生物体中开发的序列)，或者可以是或包含基于例如此种人或非人抗体(或在一些实施方案中，基于其抗原结合部分)的嵌合的、人源化的、重构的或重新格式化的抗体。在一些实施方案中，从上下文中将清楚，如本文所用的术语“抗体”涵盖包括抗体的表位结合序列的形式，所述形式包括例如嵌合和/或单链抗体(例如，纳米抗体或Fcab)，以及抗体的结合片段，诸如Fab、Fv片段或单链Fv(scFv)片段，以及多聚体形式，诸如二聚IgA分子或五价IgM分子。还包括双特异性抗体、双特异性T细胞衔接器(BiTE)、针对癌症的免疫动员单克隆T细胞受体(ImmTAC)、双亲和力再靶向(DART)；替代性支架或抗体模拟物(例如，anticalin、FN3单体、DARPin、Affibody、Affilin、Affimer、Affitin、Alphabody、Avimer、Fynomer、Im7、VLR、VNAR、Trimab、CrossMab、Trident)；纳米抗体、双纳米抗体、F(ab’)2、Fab’、di-sdFv、单结构域抗体、三官能抗体、双抗体和微抗体。
生物粘附剂：术语“生物粘附剂”是指可粘附到靶表面(例如组织表面)的生物相容剂。在一些实施方案中，生物粘附剂可粘附至靶表面，例如组织表面，并保留在靶表面上，例如持续一段时间。在一些实施方案中，生物粘附剂可以是可生物降解的。在一些实施方案中，生物粘附剂可以是天然的剂，其可以例如通过分离或通过合成制备或获得；在一些实施方案中，生物粘附剂可以是非天然的剂，例如，如本领域技术人员将理解的，可以由人工设计和/或制造(例如，取决于剂，通过加工、合成和/或重组产生)。在一些特定实施方案中，生物粘附剂可以是或包含聚合物材料，例如可以由多种单体如糖组成或含有多种单体如糖。某些示例性生物粘附剂包括多种FDA批准的剂，诸如例如氰基丙烯酸酯(Dermabond，2-辛基氰基丙烯酸酯；Indermil，正丁基-2-氰基丙烯酸酯；Histoacryl和Histoacryl Blue，正丁基-2-氰基丙烯酸酯)、白蛋白和戊二醛(BioGlueTM，牛血清白蛋白和10％戊二醛)、纤维蛋白胶(TisseelTM，人混合血浆纤维蛋白原和凝血酶；EvicelTM，人混合血浆纤维蛋白原和凝血酶；VitagelTM，自体血浆纤维蛋白原和凝血酶；CryosealTM系统，自体血浆纤维蛋白原和凝血酶)、通过甲醛和/或戊二醛交联的明胶和/或间苯二酚、基于多糖的粘合剂(例如藻酸盐、壳聚糖、胶原、葡聚糖和/或明胶)、PEG、丙烯酸酯、聚胺或氨基甲酸酯变体(异氰酸酯封端的预聚物和/或其组合。出于文中所述的方法的目的，可使用本领域已知的生物粘附剂的其他实例，例如，如Mehdizadeh和Yang“Design Strategies and Applications of TissueBioadhesives”Macromol Biosci 13:271-288(2013)中所述。在一些实施方案中，生物粘附剂可以是可降解的生物粘附剂。此种可降解的生物粘附剂的实例包括但不限于纤维蛋白胶、明胶-间苯二酚-甲醛/戊二醛胶、基于聚(乙二醇)(PEG)的水凝胶粘附剂、多糖粘附剂、多肽粘附剂、聚合物粘附剂、仿生生物粘附剂、以及Bhagat和Becker“DegradableAdhesives for Surgery and Tissue Engineering”Biomacromolecules 18:3009-3039(2017)中所述的那些。
生物相容的：本文所用的术语“生物相容的”是指当与活组织接触放置时，例如在体内，不会对此组织造成显著损害的材料。在某些实施方案中，如果材料本身对细胞无毒，则它们是“生物相容的”。在某些实施方案中，如果材料在体外添加到细胞中导致小于或等于20％的细胞死亡和/或它们的体内施用不诱导对于本文所述的目的临床上不期望的显著严重的炎症或其他此类不良作用，则材料是“生物相容的”。本领域技术人员应当理解，此种显著严重的炎症可与轻度、短暂的炎症区分开，后者通常伴随手术或将外来物体引入活生物体。此外，本领域技术人员阅读本公开后将认识到，如果先天免疫激动作用在限定的时间段内的程度在临床上是有益的和/或期望的，例如提供抗肿瘤免疫，则先天免疫的聚合物和/或生物材料(例如聚合物生物材料)激动剂是生物相容的。
可生物降解的：如本文所用，术语“可生物降解的”是指当引入细胞中时分解成(例如，通过细胞机制，诸如通过酶促降解、通过水解和/或通过其组合)细胞可再使用或处置而对细胞无显著毒性作用的组分的材料。在某些实施方案中，通过可生物降解材料的分解产生的组分是生物相容的，并且因此不在体内诱导对于本文所述的目的在临床上不期望的显著严重的炎症和/或其他不利作用。在一些实施方案中，可生物降解的聚合物材料分解成它们的组分单体。在一些实施方案中，可生物降解的聚合物材料可以被生物降解，例如，通过酶活性或细胞机制，在一些情况下，例如，通过暴露于溶菌酶(例如，具有相对低pH)，或通过简单的水解。在一些实施方案中，可生物降解材料(包括例如可生物降解聚合物材料)的分解涉及酯键的水解。替代地或另外，在一些实施方案中，可生物降解材料(包括例如可生物降解聚合物材料)的分解涉及氨基甲酸酯键的裂解。示例性可生物降解聚合物包括例如羟基酸诸如乳酸和乙醇酸的聚合物，包括但不限于聚(羟基酸)、聚(乳酸)(PLA)、聚(乙醇酸)(PGA)、聚(乳酸-乙醇酸共聚物)(PLGA)、以及与PEG、聚酐、聚(原)酯、聚酯、聚氨酯、聚(丁酸)、聚(戊酸)、聚(己内酯)、聚(羟基烷酸酯)、聚(丙交酯-己内酯共聚物)的共聚物、其共混物和共聚物。许多天然存在的聚合物也是可生物降解的，包括例如蛋白质诸如白蛋白、胶原、明胶和醇溶蛋白例如玉米蛋白，和多糖诸如藻酸盐、纤维素变体和聚羟基烷酸酯，例如聚羟基丁酸酯共混物及其共聚物。本领域普通技术人员将理解或能够确定此类聚合物何时是其生物相容的和/或可生物降解的变体(例如，通过基本上相同的结构与母体聚合物相关，所述结构仅在本领域已知的特定化学基团的取代或加成方面不同)。
生物制剂：术语“生物制剂”，“生物药”和“生物制品”是指各种产品，诸如疫苗、血液和血液组分、过敏原、体细胞、基因疗法、组织、核酸和蛋白质。生物制剂可以包括蛋白质、或核酸、或这些物质的复杂组合，或可以是活的实体诸如细胞和组织。生物制剂可以分离自多种天然来源(例如，人、动物、微生物)和/或可以通过生物技术方法和/或其他技术产生。
生物材料：术语“生物材料”是指生物相容性物质，其特征在于其可出于医学目的(例如，治疗、诊断)施用于受试者而不引起不可接受的(根据合理的医学判断)反应。生物材料可以获自或来源于自然界或加以合成。在一些实施方案中，生物材料可以是或包含聚合物生物材料。在一些实施方案中，生物材料可以是聚合物网络的形式。在一些实施方案中，生物材料可以是可注射形式，例如粘性溶液。例如，生物材料可包含其原位(例如，在施用给受试者后)形成的前体组分。在一些实施方案中，生物材料可以是液体。在一些实施方案中，生物材料是粘性溶液。在一些实施方案中，生物材料可以是固体。在一些实施方案中，生物材料可以是晶体(例如无机晶体)。在一些实施方案中，生物材料不是核酸。在一些实施方案中，生物材料不是多肽。
癌症：术语“癌症”是指恶性赘生物(Stedman’s Medical Dictionary,第25版；Hensyl编著；Williams&Wilkins:Philadelphia,1990)。在本公开的一些实施方案的上下文中特别感兴趣的是通过细胞杀伤和/或去除疗法(例如，手术切除和/或某些化疗疗法诸如细胞毒性疗法等)治疗的癌症。在一些实施方案中，根据本公开治疗的癌症是已经手术切除的癌症(即，至少一个肿瘤已经手术切除)。在一些实施方案中，根据本公开治疗的癌症是切除为护理标准的癌症。在一些实施方案中，根据本公开治疗的癌症是已转移的癌症。在某些实施方案中，示例性癌症可包括以下一种或多种：听神经瘤；腺癌；肾上腺癌；肛门癌；血管肉瘤(例如淋巴管肉瘤、淋巴管内皮肉瘤、血管肉瘤)；阑尾癌；良性单克隆丙种球蛋白病；胆道癌(例如胆管癌)；胆管癌；膀胱癌；骨癌；乳腺癌(例如，乳腺腺癌、乳腺乳头状癌、乳腺癌、乳腺髓样癌)；脑癌(例如，脑膜瘤、胶质母细胞瘤、神经胶质瘤(例如，星形细胞瘤、少突神经胶质瘤)、成神经管细胞瘤)；支气管癌；类癌瘤；心脏肿瘤；宫颈癌(例如，宫颈腺癌)；绒毛膜癌；脊索瘤；颅咽管瘤；结肠直肠癌(例如，结肠癌、直肠癌、结肠直肠腺癌)；结缔组织癌；上皮癌；原位导管癌；室管膜瘤；内皮肉瘤(例如，卡波西肉瘤、多发性特发性出血性肉瘤)；子宫内膜癌(例如子宫癌、子宫肉瘤)；食管癌(例如食管腺癌、Barrett腺癌)；尤文氏肉瘤；眼癌(例如眼内黑素瘤、视网膜母细胞瘤)；家族性嗜酸性粒细胞增多；胆囊癌；胃癌(例如，胃腺癌)；胃肠道间质瘤(GIST)；生殖细胞癌；头颈癌(例如，头颈鳞状细胞癌、口腔癌(例如，口腔鳞状细胞癌)、咽喉癌(例如，喉癌、咽癌、鼻咽癌、口咽癌))；造血系统癌症(例如，白血病诸如急性淋巴细胞性白血病(ALL)(例如B细胞ALL、T细胞ALL)、急性髓细胞性白血病(AML)(例如B细胞AML、T细胞AML)、慢性髓细胞性白血病(CML)(例如B细胞CML、T细胞CML)和慢性淋巴细胞性白血病(CLL)(例如B细胞CLL、T细胞CLL))；淋巴瘤，诸如霍奇金淋巴瘤(HL)(例如，B细胞HL、T细胞HL)和非霍奇金淋巴瘤(NHL)(例如，B细胞NHL，诸如弥漫性大细胞淋巴瘤(DLCL)(例如，弥漫性大B细胞淋巴瘤)、滤泡性淋巴瘤、慢性淋巴细胞性白血病/小淋巴细胞性淋巴瘤(CLL/SLL)、套细胞淋巴瘤(MCL)、边缘区B细胞淋巴瘤(例如，粘膜相关淋巴组织(MALT)淋巴瘤、淋巴结边缘区B细胞淋巴瘤、脾边缘区B细胞淋巴瘤)、原发性纵隔B细胞淋巴瘤、伯基特淋巴瘤、淋巴浆细胞性淋巴瘤(即，华氏巨球蛋白血症)、毛细胞白血病(HCL)、免疫母细胞性大细胞淋巴瘤、前体B淋巴细胞性淋巴瘤和原发性中枢神经系统(CNS)淋巴瘤；和T细胞NHL，诸如前体T淋巴母细胞淋巴瘤/白血病、外周T细胞淋巴瘤(PTCL)(例如皮肤T细胞淋巴瘤(CTCL)(例如蕈样霉菌病、Sezary综合征)、血管免疫母细胞T细胞淋巴瘤、结外自然杀伤T细胞淋巴瘤、肠病型T细胞淋巴瘤、皮下脂膜炎样T细胞淋巴瘤和间变性大细胞淋巴瘤)；一种或多种如上所述的白血病/淋巴瘤的混合物；多发性骨髓瘤；重链疾病(例如，α链疾病、γ链疾病、μ链疾病)；成血管细胞瘤；组织细胞增多症；下咽癌；炎性肌纤维母细胞瘤；免疫细胞性淀粉样变性；肾癌(例如，肾母细胞瘤又名威尔姆斯瘤、肾细胞癌)；肝癌(例如，肝细胞癌(HCC)、恶性肝细胞瘤)；肺癌(例如，支气管癌、小细胞肺癌(SCLC)、非小细胞肺癌(NSCLC)、肺腺癌)；平滑肌肉瘤(LMS)；肥大细胞增多症(例如，全身性肥大细胞增多症)；黑素瘤；中线道癌；多发性内分泌腺瘤综合征；肌肉癌；骨髓增生异常综合征(MDS)；间皮瘤；骨髓增生性疾病(MPD)(例如真性红细胞增多症(PV)、原发性血小板增多症(ET)、原因不明的骨髓化生(AMM)又名骨髓纤维化(MF)、慢性特发性骨髓纤维化、慢性粒细胞白血病(CML)、慢性中性粒细胞性白血病(CNL)、嗜酸性粒细胞增多综合征(HES))；鼻咽癌；神经母细胞瘤；神经纤维瘤(例如，1型或2型神经纤维瘤病(NF)、神经鞘瘤病)；神经内分泌癌(例如胃肠胰神经内分泌肿瘤(GEP-NET)、类癌瘤)；骨肉瘤(例如骨癌)；卵巢癌(例如，囊腺癌、卵巢胚胎癌、卵巢腺癌)；乳头状腺癌；胰腺癌(例如，胰腺腺癌、导管内乳头状粘液性瘤(IPMN)、胰岛细胞瘤)；甲状旁腺癌；乳头状腺癌；阴茎癌(例如阴茎和阴囊佩吉特氏病)；咽癌；松果体瘤；垂体癌；胸膜肺母细胞瘤；原始神经外胚层肿瘤(PNT)；浆细胞瘤形成；副肿瘤综合征；上皮内瘤；前列腺癌(例如，前列腺腺癌)；直肠癌；横纹肌肉瘤；视网膜母细胞瘤；唾液腺癌；皮肤癌(例如，鳞状细胞癌(SCC)、角化棘皮瘤(KA)、黑素瘤、基底细胞癌(BCC))；小肠癌(例如阑尾癌)；软组织肉瘤(例如，恶性纤维组织细胞瘤(MFH)、脂肪肉瘤、恶性外周神经鞘瘤(MPNST)、软骨肉瘤、纤维肉瘤、粘液肉瘤)；皮脂腺癌；胃癌；小肠癌；汗腺癌；滑膜瘤；睾丸癌(例如精原细胞瘤、睾丸胚胎癌)；胸腺癌；甲状腺癌(例如，甲状腺乳头状癌、甲状腺乳头状癌(PTC)、甲状腺髓样癌)；尿道癌；子宫癌；阴道癌；和外阴癌(例如外阴佩吉特氏病)。
碳水化合物聚合物：术语“碳水化合物聚合物”是指是或包含一种或多种碳水化合物的聚合物，例如具有碳水化合物主链的聚合物。例如，在一些实施方案中，碳水化合物聚合物是指多糖或寡糖，或含有通过共价键连接的多个单糖单元的聚合物。单糖单元可以全部相同，或者在一些情况下，在碳水化合物聚合物内可以存在多于一种类型的单糖单元。在某些实施方案中，聚合物是天然存在的。在某些实施方案中，聚合物是合成的(即，不是天然存在的)。在一些实施方案中，碳水化合物聚合物是线性聚合物。在一些实施方案中，碳水化合物聚合物是支化聚合物。
化疗剂：术语“化疗剂”是指针对癌细胞用于抑制快速生长的癌细胞的增殖和/或杀死癌细胞的治疗剂。此类化疗剂的实例包括但不限于烷化剂、抗代谢物、拓扑异构酶抑制剂和/或有丝分裂抑制剂。
联合疗法：如本文所用，术语“联合疗法”是指其中受试者同时暴露于两种或更多种治疗方案(例如，两种或更多种治疗剂)的那些情况。在一些实施方案中，两种或更多种方案可以同时施用；在一些实施方案中，此类方案可以依序施用(例如，第一方案的所有“剂量”在第二方案的任何剂量施用之前施用)；在一些实施方案中，此类剂以重叠的给药方案施用。在一些实施方案中，联合疗法的“施用”可涉及向接受组合中的其他剂或方式的受试者施用一种或多种剂或方式。为清楚起见，联合疗法不要求单独的剂在单一组合物中一起施用(或甚至必须同时施用)，但在一些实施方案中，两种或更多种剂或其活性部分可在组合组合物中或甚至在组合化合物中一起施用(例如，作为单一化学复合物或共价实体的一部分)。
可比较的：如本文所用，术语“可比较的”是指两个或更多个剂、实体、情形、条件组等，它们可能彼此不相同但足够相似以允许它们之间进行比较，使得本领域技术人员将理解，可基于观察到的差异或相似性合理地得出结论。在一些实施方案中，可比较的条件组、环境、个体或群体的特征在于多个基本上相同的特征和一个或少量的不同特征。本领域的普通技术人员将理解，在上下文中，在任何给定情况下，对于两种或更多种此类剂、实体、情况、条件组等需要怎样的一致性程度才被认为是可比较的。例如，本领域的普通技术人员将理解，当环境、个体或群体的组在特征为以下时彼此是可比较的：足够数目和类型的基本上相同的特征，以保证得出以下合理结论：在不同的环境、个体或群体的组下获得的结果或观察到的现象的差异是由那些不同特征的变化引起或指示那些不同特征的变化。
交联剂：如本文可互换使用的，术语“交联剂(crosslinker)”或“交联剂(crosslinking agent)”是指将一个实体(例如，一个聚合物链)连接到另一个实体(例如，另一个聚合物链)的剂。在一些实施方案中，两个实体之间的连接(即，“交联”)是或包含共价键。在一些实施方案中，两个实体之间的连接是或包含离子键或相互作用。在一些实施方案中，交联剂是用于诱导醛和氨基之间形成共价键的小分子(例如，二醛或京尼平)。在一些实施方案中，交联剂包含光敏官能团。在一些实施方案中，交联剂包含pH敏感性官能团。在一些实施方案中，交联剂包含热敏性官能团。
有效量：“有效量”是足以引起所需生物反应的量，例如治疗受试者可能遭受的病症。如本领域普通技术人员将理解的，组合物或包含在组合物中的剂的有效量可以根据诸如以下的因素而变化：期望的生物终点、组合物中剂的物理、化学和/或生物特征(例如，药代动力学和/或降解)、所治疗的病症、以及受试者的年龄和健康状况。有效量包括治疗性和预防性治疗。例如，在治疗癌症中，有效量可以防止肿瘤再生长、降低肿瘤负荷或阻止肿瘤的生长或扩散。本领域技术人员将理解有效量不必包含在单一剂型中。相反，有效量的施用可涉及可能随时间(例如，根据给药方案)施用多个剂量。
水凝胶：术语“水凝胶”是指由亲水性聚合物链的网络形成的材料，有时发现为其中水相是分散介质的胶体凝胶。在一些实施方案中，水凝胶是高度吸收性的(例如，它们可以吸收和/或保留超过90％的水)天然或合成的聚合物网络。在一些实施方案中，水凝胶具有类似于天然组织的柔性程度，例如由于其显著的含水量。
免疫疗法：术语“免疫疗法”是指通过诱导、增强或抑制免疫反应来促进疾病治疗的治疗剂。设计用于引发或扩大免疫反应的免疫疗法被分类为激活免疫疗法，而减少或抑制免疫反应的免疫疗法被分类为抑制免疫疗法。免疫疗法通常但不总是为生物治疗剂。许多免疫疗法被用于治疗癌症。这些包括但不限于单克隆抗体、过继性细胞转移、细胞因子、趋化因子、疫苗、小分子抑制剂和小分子激动剂。例如，有用的免疫疗法可包括但不限于I型干扰素诱导剂、干扰素、干扰素基因刺激因子(STING)激动剂、TLR7/8激动剂、IL-15超激动剂、抗PD-1抗体、抗CD137抗体和抗CTLA-4抗体。在一些实施方案中，本文提供的技术不包括施用如本文所述的此类免疫疗法。
免疫调节有效负载：如本文所用，术语“免疫调节有效负载”是指可由生物材料(例如，聚合物生物材料，如本文提供和/或使用的生物材料)携带或分布在其中的单独的免疫调节剂(例如，小分子、多肽(包括例如细胞因子)、核酸等)，其中所述免疫调节剂提供调节或改变(例如，诱导、增强或抑制等)受试者中免疫反应的一个或多个方面的治疗效果。免疫调节有效负载的实例包括但不限于适应性免疫激活剂、先天免疫激活剂、促炎途径抑制剂、免疫调节细胞因子或免疫调节治疗剂以及WO 2018/045058和PCT/US19/23157中所述的那些，及其任何组合。出于本文所述的目的，上述专利申请的内容通过引用并入本文。在一些实施方案中，免疫调节有效负载是或包含先天免疫调节有效负载(例如，诱导或刺激先天免疫和/或先天免疫的一个或多个特征的免疫调节有效负载)。在一些实施方案中，先天免疫调节有效负载是或包含先天免疫反应激活剂。在一些实施方案中，免疫调节有效负载是或包含适应性免疫调节有效负载，例如适应性免疫反应激活剂。在一些实施方案中，免疫调节有效负载是或包含促炎途径抑制剂，例如由p38丝裂原激活蛋白激酶(MAPK)途径介导的促炎免疫反应的抑制剂。在一些实施方案中，免疫调节有效负载是或包含免疫调节细胞因子。在一些实施方案中，免疫调节有效负载是或包含免疫调节治疗剂。在一些实施方案中，本领域技术人员阅读本公开后将理解，在一些实施方案中，从本文所述的组合物或药物组合物排除的免疫调节有效负载是或包含小分子、多肽(例如细胞因子)和/或核酸。如本领域技术人员将理解的，免疫调节有效负载不包括例如通过化学、酶促和/或生物反应(例如降解)产生的先天免疫的生物材料(例如聚合物生物材料)激动剂(例如本文所述和/或使用的)的组分(例如前体组分)和/或副产物。
植入：术语“可植入的”、“植入(implantation)”、“植入(implanting)”和“植入(implant)”是指将感兴趣的组合物定位在受试者中的特定位置，诸如在肿瘤切除部位内或在前哨淋巴结中，并且通常通过一般手术方法。
增加、诱导或减少：如本文所用，这些术语或语法上可比较的比较术语表示相对于可比较的参考测量的值。例如，在一些实施方案中，用先天免疫的生物材料(例如，聚合物生物材料)激动剂获得的评估值可以相对于用可比较的参考生物材料(例如，诸如不知道诱导先天免疫的聚合物生物材料的生物材料)获得的评估值有所“增加”。替代地或另外，在一些实施方案中，在受试者中实现的评估值可以相对于在不同条件下(例如，在事件之前或之后；或事件的存在或不存在，诸如施用先天免疫的生物材料激动剂，例如先天免疫的聚合物生物材料激动剂)在同一受试者中，或在不同的、可比较的受试者中(例如在先前暴露于一种状况中与感兴趣的受试者不同的可比较的受试者中，所述状况例如不施用先天免疫的生物材料激动剂，诸如先天免疫的聚合物生物材料激动剂等)获得的评估值有所“增加”。在一些实施方案中，比较术语是指统计上相关的差异(例如，其流行率和/或量级足以达到统计上的相关性)。在给定的上下文中，本领域技术人员将意识到或将能够容易地确定对于实现此种统计显著性所需或足够的差异的程度和/或流行率。
抑制：术语“抑制(inhibit/inhibition)”不仅限于完全抑制。因此，在一些实施方案中，部分抑制或相对减少包括在术语“抑制”的范围内。例如，在肿瘤复发和/或转移的风险和/或发生率的上下文中，在一些实施方案中，该术语是指将肿瘤复发和/或转移的风险或发生率降低至可再现地和/或统计学上显著低于初始或其他适当参考水平的水平，该初始或其他适当参考水平可以例如是在不存在或施用文中所述的组合物之前的肿瘤复发和/或转移的风险或发生率的基线水平。在一些实施方案中，该术语是指将肿瘤复发和/或转移的风险或发生率降低至初始水平的小于75％、小于50％、小于40％、小于30％、小于25％、小于20％、小于10％、小于9％、小于8％、小于7％、小于6％、小于5％、小于4％、小于3％、小于2％、小于1％、小于0.5％、小于0.1％、小于0.01％、小于0.001％或小于0.0001％的水平，所述初始水平可以例如是在不存在或施用本文所述的组合物之前肿瘤复发和/或转移的风险或发生率的基线水平。
抑制剂：如本文所用，术语“抑制剂”是指其存在或水平与待调节的靶标的水平或活性降低相关的剂。在一些实施方案中，抑制剂可直接起作用(在这种情况下，其直接对其靶标施加影响，例如通过结合至靶标)；在一些实施方案中，抑制剂可间接起作用(在这种情况下，其通过与靶标的调节剂相互作用和/或以其他方式改变靶标的调节剂来施加其影响，使得靶标的水平和/或活性降低)。在一些实施方案中，抑制剂是其存在或水平与相对于特定参考水平或活性(例如，在适当参考条件下观察到的，诸如存在已知抑制剂或不存在如本文所公开的抑制剂等的适当参考条件)降低的靶标水平或活性相关的抑制剂。
促炎途径抑制剂：在一些实施方案中，如本文所用的术语“促炎途径抑制剂”是指抑制或减少与免疫抑制相关的炎症的剂。在一些实施方案中，此种促炎途径抑制剂是指防止免疫抑制细胞募集或防止急性炎症的剂。此种急性炎症和/或免疫抑制细胞的募集会在局部创伤后发生，包括由手术引起的创伤。在一些实施方案中，促炎途径抑制剂可以例如抑制诱导炎症的免疫反应，包括例如炎性细胞因子(包括例如但不限于TGF-β和IL-10)的产生、M2样巨噬细胞的活性和/或增殖增加、相关免疫细胞(包括例如但不限于髓系细胞、嗜中性粒细胞和肥大细胞等)的募集。促炎途径抑制剂的实例包括例如国际申请号PCT/US19/23157中所述的那些，其内容出于本文所述的目的通过引用整体并入本文。在一些实施方案中，本领域技术人员阅读本公开后将理解，在一些实施方案中，从本文所述的组合物或药物组合物排除的促炎途径抑制剂是或包含小分子、多肽(例如细胞因子)和/或核酸。
先天免疫调节组分：如本文所用，术语“先天免疫调节组分”是指调节或改变(例如，激动、拮抗、激活、降低等)受试者(例如，施用其的受试者和/或另外需要其的受试者)的先天免疫(和/或先天免疫反应的一个或多个特征)的组合物的成分或部分(在一些实施方案中，其可以是整个组合物)。在一些实施方案中，先天免疫调节组分是组合物的成分或部分(在一些实施方案中，其可以是整个组合物)，其可以间接地或直接地激动或激活受试者(例如，施用其的受试者和/或另外需要其的受试者)的先天免疫系统(和/或先天免疫系统的一个或多个特征)。在一些实施方案中，如本文所述的先天免疫调节组分可刺激(例如，可增加水平和/或活性)一种或多种在靶部位引发炎性反应、将免疫细胞募集到靶部位和/或帮助诱导一种或多种适应性免疫反应(和/或适应性免疫反应的一个或多个特征)(例如，导致抗原特异性获得性免疫的发展)的剂。在一些实施方案中，如本文所述的先天免疫调节组分可导致相关免疫细胞(包括例如但不限于嗜中性粒细胞、嗜碱性粒细胞、嗜酸性粒细胞、天然杀伤细胞、树突细胞、单核细胞和巨噬细胞等)的募集、细胞因子产生、增强的白细胞增殖和/或存活、以及例如通过增加抗原呈递细胞的抗原呈递和/或共刺激分子的水平和/或活性而改善的T细胞致敏。
转移：术语“转移(metastasis、metastatic或metastasize)”是指癌细胞从原发性或原始肿瘤向另一器官或组织的扩散或迁移，并且通常可通过原发性或原始肿瘤的组织类型的“继发性肿瘤”或“继发性细胞团”的存在来识别，而非继发性(转移性)肿瘤所位于的器官或组织。例如，已迁移到骨的前列腺癌被称为转移性前列腺癌，并且包括在骨组织中生长的癌性前列腺癌细胞。
微粒：如本文所用，术语“微粒”是指直径在1微米与1000微米(μm)之间的颗粒。在一些实施方案中，微粒具有1μm至500μm的直径。在一些实施方案中，微粒具有1μm至100μm的直径。
单糖：本文所用的术语“单糖”具有本领域所用的普通含义，并且是指由单个糖单元组成的简单形式的糖，所述糖单元不能进一步分解为更小的糖构建块或部分。单糖的常见实例包括例如葡萄糖(右旋糖)、果糖、半乳糖、甘露糖、核糖等。单糖可根据碳水化合物的碳原子数来分类，例如具有3个碳原子的丙糖，诸如甘油醛和/或二羟基丙酮；具有4个碳原子的丁糖，诸如赤藓糖、苏糖和/或赤藓酮糖；具有5个碳原子的戊糖，诸如阿拉伯糖、来苏糖、核糖、木糖、核酮糖和/或木酮糖；具有6个碳原子的己糖，诸如阿洛糖、阿卓糖、半乳糖、葡萄糖、古洛糖、艾杜糖、甘露糖、塔罗糖、果糖、阿洛酮糖、山梨糖和/或塔格糖；具有7个碳原子的庚糖，诸如甘露庚酮糖和/或景天庚酮糖；具有8个碳原子的辛糖，诸如2-酮基-3-脱氧-甘露-辛酸酯；具有9个碳原子的壬糖，诸如唾液糖(sialose)；和具有10个碳原子的癸糖。上述单糖包括D-和L-单糖。或者，单糖可以是单糖变体，其中糖单元包含一个或多个除羟基外的取代基。此类变体可以是但不限于醚、酯、酰胺、酸、磷酸酯和胺。胺变体(即氨基糖)包括例如葡糖胺、半乳糖胺、果糖胺和/或甘露糖胺。酰胺变体包括例如糖的N-乙酰化胺变体(例如N-乙酰葡糖胺和/或N-乙酰半乳糖胺)。
纳米颗粒：如本文所用，术语“纳米颗粒”是指直径小于1000纳米(nm)的颗粒。在一些实施方案中，纳米颗粒具有小于300nm的直径。在一些实施方案中，纳米颗粒具有小于100nm的直径。
药学上可接受的盐：术语“药学上可接受的盐”是指在合理医学判断的范围内，适合用于与例如人和/或动物的组织接触而无不适当的毒性、刺激、过敏反应等并且与合理的益处/风险比相称的那些盐。药学上可接受的盐是本领域熟知的。例如，Berge等人在J.Pharmaceutical Sciences,1977,66,1-19(通过引用并入文中)中详细描述了药学上可接受的盐。可根据本公开的某些实施方案使用的药学上可接受的盐可包括例如衍生自合适的无机和有机酸和碱的那些。药学上可接受的无毒酸加成盐的实例是氨基与无机酸(诸如盐酸、氢溴酸、磷酸、硫酸以及高氯酸)或与有机酸(诸如乙酸、草酸、马来酸、酒石酸、柠檬酸、琥珀酸或丙二酸)形成的盐，或通过使用本领域中已知的其他方法(诸如离子交换法)形成的盐。其他药学上可接受的盐包括己二酸盐、藻酸盐、抗坏血酸盐、天冬氨酸盐、苯磺酸盐、苯甲酸盐、硫酸氢盐、硼酸盐、丁酸盐、樟脑酸盐、樟脑磺酸盐、柠檬酸盐、环戊烷丙酸盐、二葡糖酸盐、十二烷基硫酸盐、乙烷磺酸盐、甲酸盐、富马酸盐、葡庚糖酸盐、甘油磷酸盐、葡糖酸盐、半硫酸盐、庚酸盐、己酸盐、氢碘化物、2-羟基-乙磺酸盐、乳糖醛酸盐、乳酸盐、月桂酸盐、月桂基硫酸盐、苹果酸盐、马来酸盐、丙二酸盐、甲磺酸盐、2-萘磺酸盐、烟酸盐、硝酸盐、油酸盐、草酸盐、棕榈酸盐、双羟萘酸盐、果胶酸盐、过硫酸盐、3-苯基丙酸盐、磷酸盐、苦味酸盐、新戊酸盐、丙酸盐、硬脂酸盐、琥珀酸盐、硫酸盐、酒石酸盐、硫氰酸盐、对甲苯磺酸盐、十一烷酸盐、戊酸盐等。衍生自适当的碱的盐包括碱金属盐、碱土金属盐、铵盐以及N+(C1-C4烷基)4 -盐。代表性碱金属或碱土金属盐包括钠、锂、钾、钙、镁等。其他药学上可接受的盐包括，在适当时，使用抗衡离子诸如卤离子、氢氧根、羧酸根、硫酸根、磷酸根、硝酸根、低级烷基磺酸根以及芳基磺酸根形成的无毒的铵、季铵和胺阳离子。
聚合物：术语“聚合物”具有本领域中使用的普通含义，即包含一个或多个通过共价键连接的重复单元(单体)的分子结构。重复单元可全部相同，或在一些情况下，聚合物内可存在多于一种类型的重复单元(例如，在共聚物中)。在某些实施方案中，聚合物是天然存在的。在某些实施方案中，聚合物是合成的(即，不是天然存在的)。在一些实施方案中，聚合物是线性聚合物。在一些实施方案中，聚合物是支化聚合物。在一些实施方案中，根据本公开使用的聚合物不是多肽。在一些实施方案中，根据本公开使用的聚合物不是核酸。
聚合物生物材料：如本文所述，“聚合物生物材料”是一种材料，其是或包含聚合物或聚合物部分并且是生物相容性的。在许多实施方案中，聚合物生物材料是或包括至少一种聚合物；在一些实施方案中，聚合物可以是或包含共聚物。在一些实施方案中，聚合物生物材料是或包含特定聚合物(例如壳聚糖)的制剂。本领域技术人员将意识到某些聚合物可以多种形式存在和/或可用(例如，长度、分子量、电荷、形貌、表面化学、改性程度和/或类型，诸如烷基化、酰化、季铵化、羟烷基化、羧烷基化、巯基化(thiolation)、磷酸化、糖基化等)；在一些实施方案中，此种聚合物的制剂可以包括此种形式或此类形式的特定水平和/或分布。另外或替代地，本领域技术人员将理解，在一些实施方案中，聚合物生物材料的一种或多种免疫调节性质可通过其生物材料性质来调节，所述生物材料性质包括例如聚合物生物材料的表面化学(例如通过聚合物生物材料的疏水性和/或亲水性部分、化学部分和/或电荷特征来调节)和/或聚合物生物材料的形貌(例如通过尺寸、形状和/或表面纹理来调节)，例如Mariani等人“Biomaterials:Foreign Bodies or Tuners for the ImmuneResponse？”International Journal of Molecular Sciences,2019,20,636中所述。
聚合物网络：术语“聚合物网络”在本文中用于描述彼此相互作用的聚合物链的组装。在一些实施方案中，聚合物网络形成三维结构材料。在一些实施方案中，聚合物网络可通过使用交联剂(例如，如本文所述)连接聚合物链(“交联聚合物网络”)来形成，例如，以产生共价聚合物网络。在一些实施方案中，聚合物网络可以简单地通过在混合物中混杂或共混聚合物链来形成(“非交联聚合物网络”)。在一些实施方案中，此种非交联聚合物网络可以通过聚合物链的非共价或非离子分子间缔合，例如通过氢键来形成。在一些实施方案中，聚合物网络可以通过交联聚合物链和聚合物链的非共价或非离子分子间缔合的组合来形成。
促炎细胞因子：如本文所用，术语“促炎细胞因子”是指由诱导炎性反应的细胞(例如免疫系统的细胞)分泌的蛋白质或糖蛋白分子。本领域技术人员可以理解，炎症可以是免疫刺激性的或免疫抑制性的，这取决于生物学背景。
促炎免疫反应：如本文所用的术语“促炎免疫反应”是指诱导炎症的免疫反应，包括例如促炎细胞因子(包括例如但不限于CXCL10、IFN-α、IFN-β、IL-1β、IL-6、IL-18和/或TNF-α)的产生、Th1细胞的活性和/或增殖增加、髓系细胞的募集等。在一些实施方案中，促炎免疫反应可以是或包括急性炎症和慢性炎症中的一种或两种。
预防有效量：“预防有效量”是足以预防(例如，显著延迟一种或多种症状或特征的发作或复发，例如，使得在预期它们不施用该量的时间点检测不到它/它们)病症的量。组合物的预防有效量是指在病症的预防中提供预防益处的单独或与其他剂组合的治疗剂的量。术语“预防有效量”可涵盖改善总体预防或增强另一种预防剂的预防功效的量。本领域技术人员将理解预防有效量不必包含在单一剂型中。相反，有效量的施用可涉及可能随时间(例如，根据给药方案)施用多个剂量。
小分子：术语“小分子”或“小分子治疗剂”是指具有相对低分子量的分子，无论是天然存在的还是人工产生的(例如，通过化学合成)。通常，小分子是有机化合物(即，其含有碳)。小分子可含有多个碳-碳键、立体中心和其他官能团(例如，胺、羟基、羰基和杂环等)。在某些实施方案中，小分子的分子量不超过约1,000g/mol、不超过约900g/mol、不超过约800g/mol、不超过约700g/mol、不超过约600g/mol、不超过约500g/mol、不超过约400g/mol、不超过约300g/mol、不超过约200g/mol、或不超过约100g/mol。在某些实施方案中，小分子的分子量为至少约100g/mol、至少约200g/mol、至少约300g/mol、至少约400g/mol、至少约500g/mol、至少约600g/mol、至少约700g/mol、至少约800g/mol、或至少约900g/mol、或至少约1,000g/mol。上述范围的组合(例如，至少约200g/mol且不超过约500g/mol)也是可能的。在某些实施方案中，小分子是治疗活性剂，诸如药物(例如，美国食品和药物管理局批准的分子，如联邦法规(C.F.R.)中提供的)。小分子也可以与一种或多种金属原子和/或金属离子络合。在这种情况下，小分子也称为“小有机金属分子”。优选的小分子具有生物活性，因为它们在动物，优选哺乳动物，更优选人中产生生物效应。小分子包括但不限于放射性核素和成像剂。在某些实施方案中，小分子是药物。优选地，尽管不是必须地，但药物是已被适当的政府机构或管理机构认为安全和有效用于人或动物的药物。例如，FDA在21C.F.R.§§330.5、331至361和440至460(通过引用并入本文)下列出了批准用于人用的药物；FDA在21C.F.R.§§500至589(通过引用并入本文)下列出了兽医用的药物。所有列出的药物都被认为可用于本发明。
受试者：预期被施用的“受试者”包括但不限于人(即任何年龄组的男性或女性，例如儿科受试者(例如婴儿、儿童、青少年)或成年受试者(例如青年、中年或老年))和/或非人动物，例如哺乳动物(例如灵长类动物(例如食蟹猴、恒河猴)；家畜，诸如牛、猪、马、绵羊、山羊、猫和/或狗；和/或鸟(例如，鸡、鸭、鹅和/或火鸡)。在某些实施方案中，动物是哺乳动物(例如处于任何发育阶段)。在一些实施方案中，动物(例如非人动物)可以是转基因或基因工程动物。在一些实施方案中，受试者是肿瘤切除受试者，例如最近经历过肿瘤切除的受试者。在一些实施方案中，肿瘤切除受试者是在接受本文所述的组合物之前的少于72小时(包括例如少于48小时、少于24小时、少于12小时、少于6小时或更短)内经历肿瘤切除的受试者。在一些实施方案中，肿瘤切除受试者是在接受本文所述的组合物之前的少于48小时内经历肿瘤切除的受试者。在一些实施方案中，肿瘤切除受试者是在接受本文所述的组合物之前的少于24小时内经历肿瘤切除的受试者。在一些实施方案中，肿瘤切除受试者是在接受本文所述的组合物之前的少于12小时内经历肿瘤切除的受试者。
基本上：如本文所用，术语“基本上”是指展现总体或接近总体范围或程度的目标特征或特性的定性情况。本领域技术人员将理解，感兴趣的剂(如果有的话)实现或避免绝对结果，例如，对免疫反应(例如炎症)确实具有零效应的感兴趣的剂。因此，术语“基本上”在本文中用于表示在许多生物效应和化学效应中固有的潜在绝对性缺乏。
持续的：如本文可互换使用的，术语“持续的”或“延长的”通常是指在期望的时间段内延长作用和/或过程。例如，在持续刺激先天免疫的情况下(例如，在存在先天免疫的生物材料激动剂的情况下)，与不使用此种感兴趣的生物材料时所观察到的相比，可以观察到由感兴趣的生物材料诱导的此种效果更长的时间段。在一段时间内一种或多种感兴趣的剂(例如，如本文所述的治疗剂和/或先天免疫的生物材料激动剂的降解或溶解产物和/或可溶性组分)从先天免疫的生物材料激动剂中持续释放的情况下，此种释放可以在30分钟至数周的时间范围内发生。在一些实施方案中，持续释放或延长释放的程度可在体外或体内表征。例如，在一些实施方案中，可以通过将本文所述的组合物置于水性缓冲溶液(例如，pH7.4 PBS)中来体外测试释放动力学。在一些实施方案中，当将本文所述的组合物置于水性缓冲溶液(例如，pH7.4 PBS)中时，在3小时内从生物材料释放小于100％或更低(包括例如，小于或等于90％、小于或等于80％、小于或等于70％、小于或等于50％或更低)的一种或多种感兴趣的剂(例如，治疗剂，诸如本文提供的那些和/或介导或激活先天免疫的生物材料的降解或溶解产物和/或可溶性组分)。在一些实施方案中，可以通过将组合物植入动物受试者(例如小鼠受试者)的靶部位(例如乳腺脂肪垫)来体内测试释放动力学。在一些实施方案中，当将组合物植入动物受试者(例如小鼠受试者)的靶部位(例如乳腺脂肪垫)时，在植入后8小时，体内释放小于或等于70％或更低(包括例如小于或等于60％、小于或等于50％、小于40％、小于30％或更低)的一种或多种感兴趣的剂(例如，治疗剂，诸如本文提供的那些和/或介导或激活先天免疫的生物材料的降解或溶解产物和/或可溶性组分)。
测试受试者：如本文所用，术语“测试受试者”是指应用本文提供的技术进行实验研究(例如，评估生物材料降解和/或生物材料在先天免疫激动和/或抗肿瘤免疫中的功效)的受试者。在一些实施方案中，测试受试者可以是人类受试者或跨越人类受试者群体。例如，在一些实施方案中，此种人类测试受试者可以是正常健康受试者。在一些实施方案中，此种人类测试受试者可以是肿瘤切除受试者。在一些实施方案中，测试受试者可以是哺乳动物非人动物或跨越哺乳动物非人动物群体。此类哺乳动物非人动物的非限制性实例包括小鼠、大鼠、狗、猪、兔等，其在一些实施方案中可以是正常健康受试者，而在一些实施方案中可以是肿瘤切除受试者。在一些实施方案中，此类哺乳动物非人动物可以是转基因或基因工程动物。
治疗剂：术语“治疗剂”是指具有一种或多种产生所需的、通常有益的生理作用的性质的剂。例如，治疗剂可以治疗、改善和/或预防疾病。本领域技术人员阅读本公开后将理解，如本文所用的术语“治疗剂”不需要特定水平或类型的治疗活性，诸如监管机构出于监管目的而认为剂具有“治疗活性”可能需要的水平或类型。如本领域技术人员阅读本公开后将理解，在一些实施方案中，先天免疫的生物材料(例如，聚合物生物材料)激动剂可具有一种或多种有助于和/或实现期望的生理效应的性质，并且因此可被认为是如本文使用的术语的“治疗剂”(无论此种生物材料是否将被或不被任何特定监管机构认为具有药学活性)。在一些实施方案中，可用于本文所述的组合物和/或方法中的治疗剂(例如，涉及先天免疫的生物材料(例如，聚合物生物材料)激动剂)可以是非免疫调节性治疗剂，例如，包含生物制剂、小分子或其组合。在一些实施方案中，可用于本文所述的组合物和/或方法中的治疗剂(例如，涉及先天免疫的生物材料(例如，聚合物生物材料)激动剂)可以是或包含化疗剂，其在一些实施方案中可以是或包含细胞毒性剂。在一些实施方案中，可用于本文所述的组合物和/或方法中的治疗剂(例如，涉及先天免疫的生物材料(例如，聚合物生物材料)激动剂)不包含免疫调节有效负载(例如，如本文所述)。
治疗有效量：“治疗有效量”是足以在病症的治疗中提供治疗益处的量，所述治疗益处可以是或包括例如与病症相关的一种或多种特征或症状的频率和/或严重性的降低、和/或发作的延迟。治疗有效量意指在病症的治疗中提供治疗益处的单独或与其他疗法组合的治疗剂的量。术语“治疗有效量”可涵盖改善整体疗法、减少或避免病症的症状或病因、或增强另一治疗剂的治疗功效的量。本领域技术人员将理解，治疗有效量不必包含在单一剂型中。相反，有效量的施用可涉及可能随时间(例如，根据给药方案)施用多个剂量。
治疗：术语“治疗(treatment、treat和treating)”是指逆转、减轻、延迟本文所述的“病理学病症”(例如，疾病、障碍或病症，包括其一种或多种体征或症状)(例如，癌症或肿瘤)的发作或抑制其进展。在一些实施方案中，治疗可以在已发展或已观察到一种或多种体征或症状之后施用。也可以在症状已消退后继续治疗，例如以延迟或防止复发和/或扩散。
肿瘤：术语“肿瘤”和“赘生物”在本文中可互换使用，并且是指异常组织块，其中所述块的生长超过正常组织的生长并且与正常组织的生长不协调。赘生物或肿瘤可以是“良性”或“恶性”，这取决于以下特征：细胞分化程度(包括形态和功能)、生长速率、局部侵袭和转移。“良性赘生物”通常分化良好，具有比恶性赘生物更慢的特征性生长，并且保持定位于起源部位。此外，良性赘生物不具有浸润、侵袭或转移到远处部位的能力。示例性良性赘生物包括但不限于脂肪瘤、软骨瘤、腺瘤、软垂疣、老年性血管瘤、脂溢性角化病、雀斑和皮脂腺增生。在一些情况下，某些“良性”肿瘤后来可能引起恶性赘生物，其可能是由肿瘤的赘生性细胞的亚群中的额外遗传改变造成，且这些肿瘤被称为“恶变前赘生物”。恶变前赘生物的实例是畸胎瘤。相反，“恶性赘生物”通常低分化(间变)并具有特征性的快速生长，伴随着周围组织的进行性浸润、侵袭和破坏。此外，恶性赘生物通常具有转移到远处部位的能力。
肿瘤去除：如本文所用，术语“肿瘤去除”涵盖肿瘤的部分或完全去除，其可由癌症疗法(例如手术切除)产生。在一些实施方案中，肿瘤去除是指通过手术(即“肿瘤切除”)物理去除部分或全部肿瘤。在一些实施方案中，肿瘤去除可由手术肿瘤切除和辅助疗法(例如化学疗法、免疫疗法和/或放射疗法)引起。在一些实施方案中，辅助疗法可以在手术肿瘤切除后施用，例如在手术肿瘤切除后至少24小时或更长。
肿瘤切除受试者：如本文所用，术语“肿瘤切除受试者”是指正经历或最近已经历肿瘤切除手术的受试者。在一些实施方案中，肿瘤切除受试者是总肿瘤块的至少70％或更多(包括至少80％、至少90％、至少95％、至少98％、至少99％或更高(包括100％)通过手术切除去除的受试者。本领域技术人员将理解，在一些情况下，在显微镜下在可见的切除边缘处可能存在一些残留的癌细胞，即使肉眼的大体检查显示所有的总肿瘤块已被明显去除。在一些实施方案中，可以确定肿瘤切除受试者具有阴性切除边缘(即，在切除边缘处在显微镜下看不到癌细胞，例如，基于肿瘤切除部位周围组织的组织学评估)。在一些实施方案中，可以确定肿瘤切除受试者具有阳性切除边缘(即，在切除边缘处在显微镜下看到癌细胞，例如基于肿瘤切除部位周围组织的组织学评估)。在一些实施方案中，肿瘤切除受试者可具有微转移和/或休眠的播散性癌细胞，其可通过对手术的生理反应而被驱使发生进展/增殖。在一些实施方案中，肿瘤切除受试者在进行肿瘤切除手术(例如，术中施用)后立即接受组合物(例如，如本文所述和/或使用的)。在一些实施方案中，肿瘤切除受试者在术后24小时内或更短的时间内接受组合物(例如，如本文所述和/或使用的)，包括例如18小时内、12小时内、6小时内、3小时内、2小时内、1小时内、30分钟内或更短的时间内。
变体：如文中所用，术语“变体”是指显示出与参考实体的显著结构同一性但与参考实体相比在一个或多个化学部分的存在或水平上与参考实体在结构上不同的实体。在许多实施方案中，变体在功能上也与其参考实体不同。通常，是否将特定实体适当地认为是参考实体的“变体”是基于其与参考实体的结构同一性的程度。如本领域技术人员将理解的，任何生物学或化学参考实体都具有某些特征性结构元件。根据定义，变体是共享一个或多个此类特征性结构元件的独特化学实体。仅举几个例子，小分子可以具有特征性核心结构元件(例如，大环核心)和/或一个或多个特征性侧基部分，使得所述小分子的变体是共享核心结构元件和特征性侧基部分但在其他侧基部分和/或核心内存在的键类型(单键对双键，E对Z等)方面的小分子，多肽可以具有由多个具有在线性或三维空间中相对于彼此指定的位置和/或贡献于特定生物学功能的氨基酸构成的特征性序列元件，核酸可以具有由多个具有在线性或三维空间中相对于彼此指定的位置的核苷酸残基构成的特征性序列元件。例如，变体生物材料(例如，变体聚合物生物材料)可由于一个或多个结构修饰(例如，但不限于，化学部分的添加、缺失和/或修饰，和/或接枝)而不同于参考生物材料(例如，参考聚合物生物材料)，条件是变体生物材料(例如，变体聚合物生物材料)可作用于免疫系统(例如，通过刺激先天免疫)，例如，当用于本文所述的方法中时。在一些实施方案中，变体生物材料(例如，变体聚合物生物材料)的特征在于，当在向受试者的靶部位施用此种变体生物材料(例如，变体聚合物生物材料)后24小时评估时，在受试者的靶部位和/或体循环中观察到的一种或多种促炎细胞因子(例如，但不限于CXCL10、IFN-α、IFN-β、IL-1β、IL-6、IL-18、和/或TNF-α)的量是在靶部位施用参考生物材料(例如，参考聚合物生物材料)时观察到的至少60％或更多(例如，包括例如至少70％、至少80％、至少90％、至少95％、至少98％或至多达100％)。在一些实施方案中，变体生物材料(例如，变体聚合物生物材料)的特征在于，当在向受试者的靶部位施用此种变体生物材料(例如，变体聚合物生物材料)后24小时评估时，在受试者的靶部位和/或体循环中观察到的一种或多种促炎细胞因子(例如，但不限于CXCL10、IFN-α、IFN-β、IL-1β、IL-6、IL-18、和/或TNF-α)的量是在靶部位施用参考生物材料(例如，参考聚合物生物材料)时观察到的至少1.1倍或更多(例如，包括例如，至少1.5倍、至少2倍、至少3倍、至少4倍、至少5倍或更多)。在一些实施方案中，变体生物材料(例如，变体聚合物生物材料)表现出不同于参考生物材料(例如，参考聚合物生物材料)的至少一种物理特性。例如，在一些实施方案中，与参考生物材料(例如，参考聚合物生物材料)相比，变体生物材料(例如，变体聚合物生物材料)可表现出增加的水溶性(例如，在生理pH下)。在一些实施方案中，变体与参考相比具有10、9、8、7、6、5、4、3、2或1个结构修饰。在一些实施方案中，变体具有少量(例如，少于5、4、3、2或1个)的结构修饰(例如，烷基化、酰化、季铵化、羟烷基化、羧基烷基化、巯基化、磷酸化、糖基化等)。在一些实施方案中，与参考相比，变体具有不超过5、4、3、2或1个化学部分的添加或缺失，并且在一些实施方案中没有添加或缺失。在一些实施方案中，变体是可以通过化学操作从参考生成的实体。在一些实施方案中，变体是可以通过执行与生成参考的合成过程基本相似(例如，与其共享多个步骤)的合成过程来生成的实体。
具体实施方案
本公开尤其提供了涉及癌症治疗和/或实现体内免疫事件或过程的原位局部调节的技术。
在一些实施方案中，所提供的技术尤其可用于治疗最近已经历和/或正经历例如通过手术切除的肿瘤去除(部分或完全)的癌症患者。在特定实施方案中，所提供的技术可用于在术中环境中治疗肿瘤切除受试者，例如治疗诸如实体瘤的肿瘤。肿瘤的手术切除可以导致免疫抑制，例如，在切除部位处或附近的局部免疫抑制(例如，应答于伤口愈合)和/或在一个或多个远处部位处，诸如例如一个或多个远处肿瘤部位，例如转移部位的免疫抑制(例如，由免疫抑制因子的全身性扩散引起)。参见，例如，Krall等人“The systemicresponse to surgery triggers the outgrowth of distant immune-controlledtumors in mouse models of dormancy”Sci Transl Med.,10:eaan3464(2018)。在肿瘤切除后可能发生在手术部位的免疫反应的这类变化可能具有局部和/或全身性后果，并且可能促进或促成休眠微转移的激活和/或残留癌细胞的增殖，从而增加癌症复发的风险。参见，例如，Tohme等人“Surgery for cancer:a trigger for metastases”Cancer Res.,77:1548-1552(2017)。
在一些实施方案中，本公开提供了这样的见解，即先前不被认为驱动癌症治疗功效，而是作为辅助材料(例如，药物载体或疫苗佐剂)的某些类型的生物材料(例如，聚合物生物材料)可用于自身诱导抗肿瘤免疫，并且因此不一定需要单独的免疫调节有效负载，尤其是在肿瘤切除后的情况下，例如在存在非常少或没有可检测的剩余癌细胞的情况下。因此，本公开教导了对于包括聚合物生物材料的此类和其他生物材料特别有效和/或期望的治疗策略。
在特定实施方案中，本公开提供了这样的见解，即某些生物材料(例如，聚合物生物材料)自身当被放置在靶部位(例如，已通过例如手术切除去除肿瘤的部位)时，可足以刺激先天抗肿瘤免疫。在一些实施方案中，此种先天抗肿瘤免疫可以导致癌症复发和/或转移和/或与其相关的死亡率的风险和/或发生率的降低。因此，本公开提供了可以将免疫刺激作用集中到有需要的靶部位的技术。在一些实施方案中，本文提供的此类技术可以特别用于治疗癌症，例如，通过减少或抑制(例如，延迟发作，减少程度)肿瘤复发和/或转移，同时使可能与全身施用免疫疗法相关的不良副作用最小化。
I.组合物
本公开提供如本文所述的免疫调节组合物(例如，其包含基本上由生物材料组成(或由生物材料组成)的免疫调节剂，所述生物材料包括例如聚合物生物材料，特征在于，其是如本文所述的先天免疫的激动剂(例如，当在如本文所述的一种或多种测定中测试时))。
在一些实施方案中，本公开提供可用于癌症治疗的组合物(例如，如本文所述的免疫调节组合物)。在特定实施方案中，所提供的组合物可用于施用给正经历或已经历肿瘤去除的受试者。例如，在一些实施方案中，提供的组合物可用于施用给肿瘤切除受试者。
在一些实施方案中，根据本公开的组合物包含先天免疫调节组分。例如，在一些实施方案中，此种先天免疫调节组分激活或刺激受试者(例如，施用其的受试者和/或另外有需要的受试者)中的一种或多种先天免疫反应(和/或先天免疫反应的一个或多个特征)。在一些实施方案中，组合物中提供的先天免疫调节组分直接或间接地在靶部位(例如，肿瘤切除部位)诱导炎性反应和/或将免疫细胞募集到靶部位(例如，肿瘤切除部位)。本领域技术人员将认识到，在一些情况下，如本文所述的组合物中提供的先天免疫调节组分可刺激(例如，可增加其水平和/或活性)一种或多种在靶部位引发炎性反应和/或将免疫细胞募集到靶部位的剂。
在一些实施方案中，提供的组合物包含先天免疫调节组分和任选地一种或多种其他组分(即一种或多种不是先天免疫调节剂的材料/剂)。
在一些实施方案中，先天免疫调节组分基本上由或由生物材料组成。在一些实施方案中，先天免疫调节组分基本上由或由聚合物生物材料组成。因此，在一些实施方案中，本文提供的组合物的先天免疫调节组分基本上由或由此种生物材料(例如，聚合物生物材料)组成；就此种组合物可包括除生物材料(例如，聚合物生物材料)之外的一种或多种材料/剂而言，此类其他材料/剂不单独或一起实质性地改变生物材料(例如，聚合物生物材料)的相关先天免疫调节特征。
本发明人先前已描述了包含生物材料和有效负载的系统，所述有效负载可以是或包含先天免疫调节剂(参见，例如，如WO2018/045058中所述的先天免疫反应激活剂，其内容出于本文所述目的通过引用并入本文)，当施用给已经历或正经历肿瘤切除的受试者时，所述系统尤其可以是非常有用的。本公开尤其提供了令人惊讶的见解，即某些生物材料(例如，聚合物生物材料)可能能够提供足够的先天免疫调节活性以实现有益效果，即使在不存在单独的先天免疫调节有效负载的情况下。
在一些实施方案中，不仅本文所述和/或使用的组合物的先天免疫调节组分基本上不含先天免疫调节有效负载，而且本公开的此种组合物可能不一定需要包含至少一种或多种(例如至少两种或更多种、至少三种或更多种)其他类型的免疫调节有效负载，包括例如适应性免疫调节有效负载、免疫调节细胞因子、免疫调节化疗剂、免疫调节治疗剂和/或其组合。仅举例来说，在一些实施方案中，本公开的组合物基本上不含先天免疫调节有效负载和适应性免疫调节有效负载。在一些实施方案中，本公开的组合物基本上不含先天免疫调节有效负载、适应性免疫调节有效负载和免疫调节细胞因子。在一些实施方案中，本公开的组合物在不存在免疫调节有效负载的情况下包含免疫的生物材料(例如，聚合物生物材料)激动剂。
先天免疫的生物材料(例如聚合物生物材料)激动剂
根据本公开使用的先天免疫的生物材料激动剂是在施用后起先天免疫的激动剂或激活剂作用的生物材料。在一些实施方案中，此种先天免疫的生物材料激动剂是或包含先天免疫的聚合物生物材料激动剂。如本领域技术人员阅读本公开后将理解，根据本公开使用的聚合物生物材料是基质生物材料(例如，在具有本文所述的一种或多种生物材料性质的一些实施方案中，包括例如储能模量、粘度和/或相角)，而不是单个核酸或多肽分子。在一些实施方案中，用于此种聚合物生物材料的上下文中的聚合物不是多肽。在一些实施方案中，用于聚合物生物材料的上下文中的聚合物不是核酸。在一些实施方案中，聚合物生物材料可以是或包含核酸和/或多肽。
在一些实施方案中，本文提供和/或使用的先天免疫的生物材料(例如，聚合物生物材料)激动剂可间接或直接地激活先天免疫系统的一种或多种类型的细胞(诸如例如，树突细胞、巨噬细胞、单核细胞、嗜中性粒细胞和/或天然杀伤(NK)细胞)的一种或多种模式识别受体，从而诱导至少一种或多种先天免疫反应(例如，如本文所述)。此种模式识别受体的实例是或包括C型凝集素受体(CLR)、核苷酸结合寡聚化结构域样受体(NOD样受体或NLR)、视黄酸诱导型基因I样受体(RLR)和/或Toll样受体(TLR)。在一些实施方案中，本文所用的先天免疫的生物材料(例如，聚合物生物材料)激动剂可直接或间接地激活先天免疫系统的许多不同细胞(例如，树突细胞、巨噬细胞等)的至少一种或多种C型凝集素受体(CLR)，其包括例如甘露糖受体，和/或去唾液酸糖蛋白受体家族(例如，Dectin-1、Dectin-2、巨噬细胞诱导型C型凝集素(Mincle)、树突细胞特异性ICAM3捕获非整合素(DC-SIGN)和DC NK凝集素组受体1(DNGR-1))。在一些实施方案中，本文所用的先天免疫的生物材料(例如聚合物生物材料)激动剂可直接或间接激活不同类型的白细胞(例如淋巴细胞、巨噬细胞、树突细胞)的至少一种或多种NOD样受体(NLR)，其包括例如NLRA(例如CIITA)、NLRB(例如NAIP)、NLRC(例如NOD1、NOD2、NLRC3、NLRC4、NLRC5、NLRX1)和/或NLRP(例如NLRP1、NLRP2、NLRP3、NLRP4、NLRP5、NLRP6、NLRP7、NLRP8、NLRP9、NLRP10、NLRP11、NLRP12、NLRP13、NLRP14)。在一些实施方案中，本文所用的先天免疫的生物材料(例如，聚合物生物材料)激动剂可直接或间接激活例如髓系细胞的至少一种或多种RIG-I样受体(RLR)，其包括例如RIG-I、MDA5和/或LGP2。在一些实施方案中，根据本公开使用的先天免疫的生物材料(例如，聚合物生物材料)激动剂可以直接或间接地激活不同类型的白细胞(例如，树突细胞、髓系树突细胞、单核细胞、巨噬细胞和/或嗜中性粒细胞)的至少一种或多种Toll样受体(TLR)，其包括例如TLR1、TLR2、TLR3、TLR4、TLR5、TLR6、TLR7、TLR8、TLR9和/或TLR10。
在一些实施方案中，本文提供和/或使用的先天免疫的生物材料(例如，聚合物生物材料)激动剂可间接或直接地激活或诱导(例如，增加其水平和/或活性)例如髓系细胞中的炎性体，从而诱导(例如，如本文所述)至少一种或多种先天免疫反应(和/或先天免疫反应的一个或多个特征)。在一些实施方案中，炎性体通常是激活一种或多种炎症反应的多蛋白复合物，诸如例如促进一种或多种促炎细胞因子诸如例如白细胞介素1β和/或白细胞介素18的成熟和/或分泌。在一些实施方案中，本文提供和/或使用的先天免疫的生物材料(例如，聚合物生物材料)激动剂可以间接或直接地激活或诱导(例如，增加其水平和/或活性)包含黑色素瘤缺乏因子2(AIM2)样受体的炎性体(“AIM2炎性体”)。在一些实施方案中，本文提供和/或使用的先天免疫的生物材料(例如，聚合物生物材料)激动剂可间接或直接地激活或诱导(例如，增加其水平和/或活性)包含一种或多种NLR的炎性体，包括例如NLRP1(例如，NALP1b)、NLRP3(例如，NALP3)和/或NLRC4(例如，IPAF)。
在一些实施方案中，根据本公开使用的先天免疫的生物材料(例如，聚合物生物材料)激动剂可以直接或间接地激活cGAS-STING途径中涉及的一种或多种组分(例如，如Chen等人,“Regulation and function of the cGAS-STING pathway of cytosolic DNAsensing”Nature Immunology(2016)17:1142-1149中所述的cGAS-STING途径和/或其组分)，从而诱导先天免疫。在一些实施方案中，根据本公开使用的先天免疫的生物材料(例如，聚合物生物材料)激动剂可以直接或间接地诱导NFκB和/或与NFκB途径相关的其他组分的活性和/或水平(例如，先天免疫反应期间的NFκB激活，例如，如Dev等人,“NF-κB andinnate immunity”Curr Top Microbiol Immunol.(2011)349:115-43中所述)。在一些实施方案中，根据本公开使用的先天免疫的生物材料(例如，聚合物生物材料)激动剂可以直接或间接地导致活性氧物质的产生，例如，在先天免疫反应期间。
如本领域技术人员阅读本公开后将清楚，在一些实施方案中，本文提供和/或使用的先天免疫的生物材料(例如，聚合物生物材料)激动剂可以直接或间接地激活与先天免疫的激活相关的一种或多种组分和/或途径(例如，如本文所述的那些)。例如，在一些实施方案中，本文提供和/或使用的先天免疫的生物材料(例如，聚合物生物材料)激动剂可以直接或间接地激活先天免疫系统的一种或多种类型的细胞的一种或多种模式识别受体(例如，如本文所述的那些)，并且还激活或诱导(例如，增加其水平和/或活性)例如髓系细胞中的炎性体。
例如，在一些实施方案中，本文提供和/或使用的先天免疫的生物材料(例如，聚合物生物材料)激动剂的特征在于，当在向有需要的受试者(例如，如本文所述)的靶部位施用后的指定时间(例如，24小时、48小时或72小时)评估时，与未向靶部位施用先天免疫的生物材料(例如，聚合物生物材料)激动剂时观察到的相比，在受试者的靶部位和/或体循环中存在更多的促炎细胞因子。此类促炎细胞因子的非限制性实例包括CXCL10、IFN-α、IFN-β、IL-1β、IL-6、IL-18、TNF-α及其组合。在一些实施方案中，与当不施用先天免疫的生物材料(例如聚合物生物材料)激动剂或包含其的组合物时观察到的相比，靶部位(例如肿瘤切除部位)和/或体循环(例如外周血)中的一种或多种(例如1、2、3、4、5、6或更多种)促炎细胞因子的此种增加为至少10％或更高(包括例如至少20％、至少30％、至少40％、至少50％、至少60％、至少70％、至少80％、至少90％、至少95％或更高)。
在一些实施方案中，本文提供和/或使用的先天免疫的生物材料(例如，聚合物生物材料)激动剂的特征在于，当在向有需要的受试者(例如，如本文所述)的靶部位施用后的指定时间(例如，24小时、48小时或72小时)评估时，与未向靶部位施用先天免疫的生物材料(例如，聚合物生物材料)激动剂时观察到的相比，在受试者的靶部位(例如，肿瘤切除部位)和/或次级淋巴器官(例如，淋巴结或脾)和/或体循环(例如，外周血)中存在更多的激活树突细胞。本领域技术人员将理解，用于树突细胞激活的各种标记物是已知的，并且可用于评估树突细胞的激活状态。例如，在一些实施方案中，树突细胞的激活可通过检测树突细胞表面上抗原呈递机制(例如MHC I和/或MHC II)和/或共刺激分子(例如CD40、CD80和/或CD86)的水平来评估。在一些实施方案中，与当不施用先天免疫的生物材料(例如聚合物生物材料)激动剂或包含其的组合物时观察到的相比，靶部位(例如肿瘤切除部位)和/或次级淋巴器官(例如，淋巴结或脾)和/或体循环(例如，外周血)中的激活树突细胞(例如就激活树突细胞的数目和/或树突细胞上的一种或多种此类激活标记物的水平而言)的此种增加为至少10％或更高(包括例如至少20％、至少30％、至少40％、至少50％、至少60％、至少70％、至少80％、至少90％、至少95％或更高)。
用于评估抗原呈递机制、共刺激分子和/或促炎细胞因子的激活的各种方法是本领域已知的。本领域技术人员将理解，在一些情况下，抗原呈递机制、共刺激分子和/或促炎细胞因子的水平可基于靶免疫细胞中的基因表达(例如mRNA水平)，例如使用定量聚合酶链式反应来评估。本领域技术人员还将理解，免疫测定(例如ELISA、免疫染色和/或流式细胞术)也可用于评估此种激活。例如，可以例如通过免疫染色和/或流式细胞术来评估树突细胞表面上抗原呈递机制和/或共刺激分子的蛋白质表达。可以例如使用ELISA和/或多路复用激光珠技术测量条件培养基或外周血中促炎可溶性因子诸如促炎细胞因子的浓度。
在一些实施方案中，本文提供和/或使用的先天免疫的生物材料(例如，聚合物生物材料)激动剂的特征在于，当在向有需要的受试者(例如，如本文所述)的靶部位施用后的指定时间(例如，24小时、48小时或72小时)评估时，与未向靶部位施用先天免疫的生物材料(例如，聚合物生物材料)激动剂时观察到的相比，在受试者的靶部位(例如，肿瘤切除部位)和/或次级淋巴器官(例如，淋巴结或脾)和/或体循环中存在更多的浆细胞样树突细胞。如本领域技术人员所理解的，在一些情况下，浆细胞样树突细胞可通过检测相关激活标记物(例如，B220和/或PDCA1)来评估。在一些实施方案中，与当不施用先天免疫的生物材料(例如聚合物生物材料)激动剂或包含其的组合物时观察到的相比，靶部位(例如肿瘤切除部位)和/或次级淋巴器官(例如，淋巴结或脾)和/或体循环(例如，外周血)中的浆细胞样树突细胞(例如就浆细胞样树突细胞的数目和/或浆细胞样树突细胞中的一种或多种激活标记物的水平而言)的此种增加为至少10％或更高(包括例如至少20％、至少30％、至少40％、至少50％、至少60％、至少70％、至少80％、至少90％、至少95％或更高)。
在一些实施方案中，本文提供和/或使用的先天免疫的生物材料(例如，聚合物生物材料)激动剂的特征在于，当在向有需要的受试者(例如，如本文所述)的靶部位施用后的指定时间(例如，24小时、48小时或72小时)评估时，与未向靶部位施用先天免疫的生物材料(例如，聚合物生物材料)激动剂时观察到的相比，在受试者的靶部位(例如，肿瘤切除部位)和/或次级淋巴器官(例如，淋巴结或脾)和/或体循环中存在更多的NK细胞。如本领域技术人员所理解的，在一些情况下，NK细胞可以通过评估相关的激活标记物(例如，CD69和/或KLRG1)和/或高效应标记物(例如，CD11b和/或CD27)来检测。在一些实施方案中，与当不施用先天免疫的生物材料(例如聚合物生物材料)激动剂或包含其的组合物时观察到的相比，靶部位(例如肿瘤切除部位)和/或次级淋巴器官(例如，淋巴结或脾)和/或体循环(例如，外周血)中的NK细胞(例如就NK细胞的数目和/或NK细胞中的一种或多种此类激活和/或高效应标记物的水平而言)的此种增加为至少10％或更高(包括例如至少20％、至少30％、至少40％、至少50％、至少60％、至少70％、至少80％、至少90％、至少95％或更高)。
在一些实施方案中，本文提供和/或使用的先天免疫的生物材料(例如，聚合物生物材料)激动剂的特征在于，当在向有需要的受试者(例如，如本文所述)的靶部位施用后的指定时间(例如，2周、3周、1个月或更长时间)评估时，与未向靶部位施用先天免疫的生物材料(例如，聚合物生物材料)激动剂时观察到的相比，受试者表现出至少一种或多种适应性抗肿瘤反应。例如，如本领域技术人员将理解的，在一些情况下，适应性抗肿瘤反应可以通过评估表达一种或多种激活标记物(例如，CD69和/或GITR)的T细胞的数目和/或T细胞的比例来评估。例如，在一些实施方案中，此种先天免疫的生物材料(例如，聚合物生物材料)激动剂的特征在于，当在向有需要的受试者(例如，如本文所述)的靶部位施用后的指定时间(例如，2周、3周、1个月或更长时间)评估时，与当不施用先天免疫的生物材料(例如聚合物生物材料)激动剂或包含其的组合物时观察到的相比，靶部位(例如肿瘤切除部位)和/或次级淋巴器官(例如，淋巴结或脾)和/或体循环(例如，外周血)中的T细胞(例如，表达CD4但不表达FoxP3，或表达CD8)的数目为至少10％或更高(包括例如至少20％、至少30％、至少40％、至少50％、至少60％、至少70％、至少80％、至少90％、至少95％或更高)。另外或替代地，此种先天免疫的生物材料(例如，聚合物生物材料)激动剂的特征在于，当在向有需要的受试者(例如，如本文所述)的靶部位施用后的指定时间(例如，2周、3周、1个月或更长时间)评估时，与当不施用先天免疫的生物材料(例如聚合物生物材料)激动剂或包含其的组合物时观察到的相比，靶部位(例如肿瘤切除部位)和/或次级淋巴器官(例如，淋巴结或脾)和/或体循环(例如，外周血)中的激活T细胞(例如，表达CD69和/或GITR)的数目为至少10％或更高(包括例如至少20％、至少30％、至少40％、至少50％、至少60％、至少70％、至少80％、至少90％、至少95％或更高)。
在一些实施方案中，先天免疫的生物材料激动剂包含一种或多种聚合物。在一些实施方案中，先天免疫的生物材料激动剂包含至少两种或更多种聚合物，其中至少一种用作先天免疫的激动剂或激活剂。在一些这样的实施方案中，先天免疫的生物材料激动剂可以包含至少一种用作先天免疫的激动剂或激活剂的聚合物和至少一种非免疫调节性的聚合物。在先天免疫的生物材料激动剂包含一种或多种聚合物的一些实施方案中，用于此种生物材料的聚合物可具有至少2kDa、2.5kDa、至少5kDa、至少10kDa或更高的平均分子量，包括例如至少20kDa、至少30kDa、至少40kDa、至少50kDa、至少60kDa、至少70kDa、至少80kDa、至少90kDa、至少100kDa、至少110kDa、至少120kDa、至少130kDa、至少140kDa、至少150kDa、至少160kDa、至少170kDa、至少180kDa、至少190kDa、至少200kDa、至少210kDa、至少220kDa、至少230kDa、至少240kDa、至少250kDa、至少260kDa、至少270kDa、至少280kDa、至少290kDa、至少300kDa、至少350kDa、至少400kDa、至少500kDa、至少600kDa、至少700kDa或更高。在一些实施方案中，此类聚合物可具有不超过1000kDa或更低的平均分子量，包括例如不超过900kDa、不超过800kDa、不超过700kDa、不超过600kDa、不超过500kDa、不超过400kDa、不超过300kDa、不超过200kDa、不超过100kDa、不超过50kDa或更低。上述范围的组合也是可能的。例如，在一些实施方案中，此类聚合物的特征在于2kDa至1000kDa、或5kDa至600kDa、或10kDa至400kDa的平均分子量。本领域技术人员将理解，聚合物的特征通常在于分子量分布，其在一些情况下可用于确定平均分子量。本领域技术人员还将理解，平均分子量可由不同方式表示，包括例如数均分子量、重均分子量和峰均分子量，并且可例如通过凝胶电泳(例如十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)、尺寸排阻凝胶色谱法、质谱法(例如MALDI或ESI)或高效液相色谱法(HPLC)、折射率检测(RID)、光散射或其任何组合(例如HPLC-RID)来测定。
在一些实施方案中，可用于本文提供的组合物的先天免疫的生物材料(例如，聚合物生物材料)激动剂(例如，表现出本文描述的一种或多种特征，诸如例如，一种或多种促炎细胞因子的增加的水平和/或树突细胞和/或NK细胞的增加的数目和/或激活)可以是或包含碳水化合物聚合物。在一些实施方案中，此种碳水化合物聚合物可包含一个或多个通过共价键连接的氨基糖。可用于此种碳水化合物聚合物的示例性氨基糖是或包含葡糖胺、半乳糖胺、果糖胺和/或甘露糖胺。在一些实施方案中，此种碳水化合物聚合物的特征在于，当施用给受试者时，碳水化合物聚合物诱导IFN(例如I型IFN)的产生，例如通过cGAS-STING途径或其一种或多种组分的激活，和/或诱导IL-1β的产生，例如通过炎性体(例如NLRP3)的激活。在一些实施方案中，此种碳水化合物聚合物的特征在于，当施用给受试者时，碳水化合物聚合物诱导一种或多种促炎细胞因子(例如，如本文所述)的产生和/或抗原呈递机制和/或共刺激分子(例如，如本文所述)的上调。在某些实施方案中，根据本公开有用的碳水化合物聚合物是或包含葡聚糖(例如，右旋糖酐诸如α-葡聚糖、酵母聚糖诸如β-葡聚糖)、果聚糖(例如，菊粉)、甘露聚糖、几丁质和/或壳聚糖、分枝杆菌碳水化合物(例如，脂阿拉伯甘露聚糖(LAM)、胞壁酰二肽(MDP)、D-murapalmitine、海藻糖-6-6-二霉菌酸酯)、脂多糖(LPS)、皂苷化合物(例如，QS-21)和/或含碳水化合物的化合物，如Petrovsky和Cooper,“Carbohydrate-based immune adjuvants”Expert Rev Vaccines,10:523-537(2011)中所述。
本领域技术人员将理解壳聚糖和/或几丁质可以诱导先天免疫。参见，例如，Bueter等人,“Innate Sensing of Chitin and Chitosan”PLOS Pathogens,9(1):e1003080(2013)；Carroll等人“The Vaccine Adjuvant Chitosan Promotes CellularImmunity via DNA Sensor cG AS-STING-Dependent Induction of Type Iinterferons”Immunity,44(3):597-608(2016)；以及Riteau和Sher“Chitosan:AnAdjuvant wi th an Unanticipated STING”Immunity,44(5)522-524。因此，在特定实施方案中，根据本公开有用的碳水化合物聚合物是或包含壳聚糖或其变体，或其组合。在特定实施方案中，根据本公开有用的碳水化合物聚合物是或包含几丁质。本领域技术人员将理解，几丁质颗粒的大小可以确定免疫反应的类型，例如，如Bueter等人,“Innate Sensi ng ofChitin and Chitosan,”PLOS Pathogens 9(1):e1003080中所述。因此，在一些实施方案中，用于本文所述的组合物中的几丁质可以是约40-70μm的颗粒，其显示诱导促炎反应。
用于本文所用的先天免疫的生物材料(例如聚合物生物材料)激动剂中的聚合物的其他实例包括但不限于藻酸盐(其可通过NF-κ B途径诱导先天免疫激活；参见，例如，Yang和Jones“Effect of alginate on innate immune activation of macrophages”JBiomed Mater Res A,90:411-418(2009))、聚丙烯酸(其可以通过活性氧物质(ROS)产生诱导先天免疫激活；参见例如Gartlan等人,“Sterile inflammation induced by Carbopolelicits robust adaptive immune responses in the absence of pathogen-associated molecular patterns”Vaccine 34:2188-2196(2016))、聚磷腈、硅胶(其可通过NLRP3炎性体诱导先天免疫激活)、及其变体、及其组合。示例性聚磷腈可以是或包含聚[(有机)磷腈]，包括，例如，聚[二(羧基乙基苯氧基)磷腈](PCEP)、聚[二(羧基苯氧基)磷腈](PCPP)、及其盐(例如，其钠盐)。在一些实施方案中，PCEP可以是或包含聚[二(羧基乙基苯氧基钠)磷腈]。本领域技术人员将理解，聚磷腈可以激活TLR和NLRP3炎性体，例如，如Magiri等人,“Recent advances in experimental polyphosphazene adjuvants andtheir mechanisms of action.”Cell Tissue Res.,374:465-471(2018)中所述。
先天免疫的生物材料(例如聚合物生物材料)激动剂中使用的聚合物和/或本身通常是生物相容的。在一些实施方案中，先天免疫的生物材料(例如聚合物生物材料)激动剂中使用的聚合物和/或本身在体内是可生物降解的。本领域技术人员阅读本公开后将理解，可以例如基于癌症类型、患者的身体状况和/或病史、所用材料的特征(例如免疫原性)和/或实施方法所需的治疗持续时间来选择不同聚合物和/或先天免疫的聚合物生物材料激动剂的降解速率。如本领域技术人员将理解，如果生物材料(例如，聚合物生物材料)具有较慢的体内降解速率，则生物材料(例如，聚合物生物材料)在施用后在靶部位处具有较长的停留时间。
在一些实施方案中，本文提供和/或使用的先天免疫的生物材料(例如，聚合物生物材料)激动剂的特征在于，当通过向测试受试者(例如，如本文所述)中的靶部位(例如，肿瘤切除部位)施用进行体内评估时，至少10％或更多，包括例如至少20％、至少30％、至少40％、至少50％、至少60％、至少70％、至少80％、至少90％或更多的此种先天免疫的生物材料(例如，聚合物生物材料)激动剂在施用后2天或更长时间在体内保留在靶部位处。在一些实施方案中，小于或等于90％、小于或等于80％、小于或等于70％、小于或等于60％、小于或等于50％、小于或等于40％、小于或等于30％、小于或等于20％或更低的此种先天免疫的生物材料(例如，聚合物生物材料)激动剂在施用后2天或更长时间在体内保留在靶部位处。上述的组合也是可能的。例如，在一些实施方案中，本文提供和/或使用的先天免疫的生物材料(例如，聚合物生物材料)激动剂的特征在于，当通过向测试受试者(例如，如本文所述)中的靶部位(例如，肿瘤切除部位)施用进行体内评估时，30％-80％或40％-70％的此种先天免疫的生物材料(例如，聚合物生物材料)激动剂在施用后2天或更长时间在体内保留在靶部位处。
在一些实施方案中，本文提供和/或使用的先天免疫的生物材料(例如，聚合物生物材料)激动剂的特征在于，当通过向测试受试者(例如，如本文所述)中的靶部位(例如，肿瘤切除部位)施用进行体内评估时，至少10％或更多，包括例如至少20％、至少30％、至少40％、至少50％、至少60％、至少70％、至少80％、至少90％或更多的此种先天免疫的生物材料(例如，聚合物生物材料)激动剂在施用后3天或更长时间在体内保留在靶部位处。在一些实施方案中，小于或等于90％、小于或等于80％、小于或等于70％、小于或等于60％、小于或等于50％、小于或等于40％、小于或等于30％、小于或等于20％或更低的此种先天免疫的生物材料(例如，聚合物生物材料)激动剂在施用后3天或更长时间在体内保留在靶部位处。上述的组合也是可能的。例如，在一些实施方案中，本文提供和/或使用的先天免疫的生物材料(例如，聚合物生物材料)激动剂的特征在于，当通过向测试受试者(例如，如本文所述)中的靶部位(例如，肿瘤切除部位)施用进行体内评估时，30％-80％或40％-70％的此种先天免疫的生物材料(例如，聚合物生物材料)激动剂在施用后3天或更长时间在体内保留在靶部位处。
在一些实施方案中，本文提供和/或使用的先天免疫的生物材料(例如，聚合物生物材料)激动剂的特征在于，当通过向测试受试者(例如，如本文所述)中的靶部位(例如，肿瘤切除部位)施用进行体内评估时，至少10％或更多，包括例如至少20％、至少30％、至少40％、至少50％、至少60％、至少70％、至少80％、至少90％或更多的此种先天免疫的生物材料(例如，聚合物生物材料)激动剂在施用后5天或更长时间在体内保留在靶部位处。在一些实施方案中，小于或等于90％、小于或等于80％、小于或等于70％、小于或等于60％、小于或等于50％、小于或等于40％、小于或等于30％、小于或等于20％或更低的此种先天免疫的生物材料(例如，聚合物生物材料)激动剂在施用后5天或更长时间在体内保留在靶部位处。上述的组合也是可能的。例如，在一些实施方案中，本文提供和/或使用的先天免疫的生物材料(例如，聚合物生物材料)激动剂的特征在于，当通过向测试受试者(例如，如本文所述)中的靶部位(例如，肿瘤切除部位)施用进行体内评估时，30％-80％或40％-70％的此种先天免疫的生物材料(例如，聚合物生物材料)激动剂在施用后5天或更长时间在体内保留在靶部位处。
在一些实施方案中，本文提供和/或使用的先天免疫的生物材料(例如，聚合物生物材料)激动剂的特征在于，当通过向测试受试者(例如，如本文所述)中的靶部位(例如，肿瘤切除部位)施用进行体内评估时，至少10％或更多，包括例如至少20％、至少30％、至少40％、至少50％、至少60％、至少70％、至少80％、至少90％或更多的此种先天免疫的生物材料(例如，聚合物生物材料)激动剂在施用后7天或更长时间在体内保留在靶部位处。在一些实施方案中，小于或等于90％、小于或等于80％、小于或等于70％、小于或等于60％、小于或等于50％、小于或等于40％、小于或等于30％、小于或等于20％或更低的此种先天免疫的生物材料(例如，聚合物生物材料)激动剂在施用后7天或更长时间在体内保留在靶部位处。上述的组合也是可能的。例如，在一些实施方案中，本文提供和/或使用的先天免疫的生物材料(例如，聚合物生物材料)激动剂的特征在于，当通过向测试受试者(例如，如本文所述)中的靶部位(例如，肿瘤切除部位)施用进行体内评估时，30％-80％或40％-70％的此种先天免疫的生物材料(例如，聚合物生物材料)激动剂在施用后7天或更长时间在体内保留在靶部位处。
在一些实施方案中，本文提供和/或使用的先天免疫的生物材料(例如，聚合物生物材料)激动剂的特征在于，当通过向测试受试者(例如，如本文所述)中的靶部位(例如，肿瘤切除部位)施用进行体内评估时，至少10％或更多，包括例如至少20％、至少30％、至少40％、至少50％、至少60％、至少70％、至少80％、至少90％或更多的此种先天免疫的生物材料(例如，聚合物生物材料)激动剂在施用后14天或更长时间在体内保留在靶部位处。在一些实施方案中，小于或等于90％、小于或等于80％、小于或等于70％、小于或等于60％、小于或等于50％、小于或等于40％、小于或等于30％、小于或等于20％或更低的此种先天免疫的生物材料(例如，聚合物生物材料)激动剂在施用后14天或更长时间在体内保留在靶部位处。上述的组合也是可能的。例如，在一些实施方案中，本文提供和/或使用的先天免疫的生物材料(例如，聚合物生物材料)激动剂的特征在于，当通过向测试受试者(例如，如本文所述)中的靶部位(例如，肿瘤切除部位)施用进行体内评估时，30％-80％或40％-70％的此种先天免疫的生物材料(例如，聚合物生物材料)激动剂在施用后14天或更长时间在体内保留在靶部位处。
在一些实施方案中，本文提供和/或使用的先天免疫的生物材料(例如，聚合物生物材料)激动剂的特征在于，当通过向测试受试者(例如，如本文所述)中的靶部位(例如，肿瘤切除部位)施用进行体内评估时，不超过10％或更少，包括例如不超过9％、不超过8％、不超过7％、不超过6％、不超过5％、不超过4％、不超过3％、不超过2％、不超过1％或更少的此种先天免疫的生物材料(例如，聚合物生物材料)激动剂在施用后10天或更长时间在体内保留在靶部位处。
在一些实施方案中，本文提供和/或使用的先天免疫的生物材料(例如，聚合物生物材料)激动剂的特征在于，当通过向测试受试者(例如，如本文所述)中的靶部位(例如，肿瘤切除部位)施用进行体内评估时，此种先天免疫的生物材料(例如，聚合物生物材料)激动剂以一定速率溶解或降解，使得先天免疫在一个或多个方面(例如，如本文所述的那些，包括例如，但不限于模式识别受体、炎性体和/或cGAS-STING途径的激活；和/或促炎细胞因子的产生和/或抗原呈递机制和/或共刺激分子的上调)被刺激至少2天或更长时间，包括例如至少3天、至少4天、至少5天、至少6天、至少7天、至少9天、至少10天或更长时间。在一些实施方案中，本文提供和/或使用的先天免疫的生物材料(例如，聚合物生物材料)激动剂的特征在于，当通过向测试受试者(例如，如本文所述)中的靶部位(例如，肿瘤切除部位)施用进行体内评估时，此种先天免疫的生物材料(例如，聚合物生物材料)激动剂以一定速率溶解或降解，使得先天免疫在一个或多个方面(例如，如本文所述的那些，包括例如，但不限于模式识别受体、炎性体和/或cGAS-STING途径的激活；和/或促炎细胞因子的产生和/或抗原呈递机制和/或共刺激分子的上调)被刺激不超过15天或更短时间，包括例如不超过10天、不超过9天、不超过8天、不超过7天、不超过6天、不超过5天、不超过4天、不超过3天或更短时间。
先天免疫的生物材料(例如，聚合物生物材料)激动剂可以以根据本公开使用的合适形式提供。在一些实施方案中，先天免疫的生物材料(例如，聚合物生物材料)激动剂可以作为液体，例如粘性聚合物溶液提供。在一些实施方案中，此种液体形式(例如粘性聚合物溶液)可用于优选先天免疫刺激的有限影响持续时间和/或更期望注射的情况。在一些实施方案中，先天免疫的生物材料(例如，聚合物生物材料)激动剂可以作为预形成的生物材料(例如，预形成的聚合物网络生物材料)提供，其在一些实施方案中可以是或包含交联或非交联的聚合物网络生物材料。在一些实施方案中，先天免疫的生物材料(例如，聚合物生物材料)激动剂可以作为颗粒群体(例如，纳米颗粒或微粒)提供，其在一些实施方案中可以悬浮或分布在载体(例如，溶液或生物材料，诸如聚合物网络生物材料，其可以是相同或不同的材料)中。
可选择用于所提供的组合物中的先天免疫的生物材料(例如，聚合物生物材料)激动剂以具有适当的弹性和/或硬度以适应特定应用的需要。例如，本领域技术人员阅读本公开后将理解，所提供的先天免疫的生物材料(例如，聚合物生物材料)激动剂的适当的弹性和/或硬度可以基于例如肿瘤周围组织的特征、施用途径、施用部位和/或在其中实施方法的先天免疫刺激的期望持续时间来选择。因此，在一些实施方案中，先天免疫的生物材料(例如，聚合物生物材料)激动剂的特征在于至少10Pa、至少20Pa、至少30Pa、至少40Pa、至少50Pa、至少75Pa、至少100Pa、至少250Pa、至少500Pa、至少1000Pa、至少1500Pa、至少2000Pa、至少2500Pa、至少3000Pa、至少4000Pa、至少5000Pa、至少10kPa、至少15kPa、至少20kPa、至少25kPa、至少30kPa、至少35kPa、至少40kPa或更高的储能模量。在一些实施方案中，先天免疫的生物材料(例如，聚合物生物材料)激动剂的特征在于不超过50kPa、不超过40kPa、不超过30kPa、不超过20kPa、不超过10kPa、不超过5000Pa、不超过4000Pa、不超过3000Pa、不超过2000Pa、不超过1000Pa、不超过500Pa、不超过250Pa、不超过100Pa、不超过75Pa、不超过50Pa、不超过25Pa或更低的储能模量。上述范围的组合也是可能的。例如，在一些实施方案中，先天免疫的生物材料(例如，聚合物生物材料)激动剂的特征在于10Pa至50kPa、500Pa至50kPa、1000Pa至20kPa、或1000Pa至10kPa、或1000Pa至5000Pa、或1000Pa至3000Pa的储能模量。本领域技术人员将理解，各种流变学表征方法(例如，如Weng等人,“RheologicalCharacterization of in situ Crosslinkable Hydrogels Formulated from OxidizedDextran andN-Carboxyethyl Chitosan”Biomacromolecules,8:1109-1115(2007)中所述)可用于测量材料的储能模量，并且在一些情况下，材料的储能模量可用流变仪和/或动态力学分析(DMA)测量。本领域技术人员还将理解流变表征可随周围条件(例如温度)而变化。因此，在一些实施方案中，先天免疫的生物材料(例如，聚合物生物材料)激动剂的特征在于在室温(例如，22℃-27℃)下测量的储能模量(例如，如本文所述)。在一些实施方案中，先天免疫的生物材料(例如，聚合物生物材料)激动剂的特征在于在受试者的体温(例如，人类受试者的37℃)下测量的储能模量(例如，如本文所述)。如本领域技术人员阅读本文提供的公开内容后将清楚，所提供的先天免疫的生物材料(例如，聚合物生物材料)激动剂(例如，以颗粒形式)的储能模量是指群体中颗粒的体积储能模量。
在一些实施方案中，其中先天免疫的生物材料(例如，聚合物生物材料)激动剂可以作为液体(例如，粘性溶液，诸如粘性聚合物溶液)提供，此种先天免疫的生物材料(聚合物生物材料)激动剂的特征在于低储能模量(例如，相对于聚合物网络生物材料形式的先天免疫的生物材料激动剂的储能模量)。在特定实施方案中，此种先天免疫的生物材料(例如，聚合物生物材料)激动剂的特征可在于低到足以注射到有需要的受试者的靶部位的储能模量。技术人员将理解，用于注射的生物材料(例如，聚合物生物材料)的适当储能模量可基于例如靶注射部位的大小、注射体积和/或注射针规格大小来选择。例如，在一些实施方案中，可注射的先天免疫的生物材料(例如，聚合物生物材料)激动剂的特征在于至少10Pa、至少20Pa、至少30Pa、至少40Pa、至少50Pa或更高的储能模量。在一些实施方案中，可注射的先天免疫的生物材料(例如，聚合物生物材料)激动剂的特征在于不超过500Pa、不超过250Pa、不超过100Pa、不超过75Pa、不超过50Pa、不超过25Pa或更低的储能模量。上述范围的组合也是可能的。例如，在一些实施方案中，可注射的先天免疫的生物材料(例如，聚合物生物材料)激动剂的特征在于10Pa至500Pa、10Pa至250Pa、10Pa至100Pa、25Pa至500Pa、25Pa至250Pa或25Pa至100Pa的储能模量。在一些实施方案中，此种可注射的先天免疫的生物材料(例如，聚合物生物材料)激动剂在施用至靶部位(例如，如本文所述)后，可在靶部位处保持先天免疫刺激的影响持续时间(例如，约2-15天或约2-10天)。在一些实施方案中，可注射的先天免疫的生物材料(例如，聚合物生物材料)激动剂在施用期间可以是粘性较小的液体并且在施用至靶部位(例如，如本文所述)之后变成粘性较大的液体。在一些实施方案中，此种可注射的先天免疫的生物材料(例如，聚合物生物材料)激动剂在施用至靶部位(例如，如本文所述)后可以在靶部位原位形成聚合物网络生物材料，例如，在一些实施方案中，通过将可注射的先天免疫的生物材料(例如，聚合物生物材料)激动剂在施用至靶部位(例如，如本文所述)后暴露于交联剂(例如，本文所述的交联剂)。例如，在一些实施方案中，在施用后，在靶部位原位形成的聚合物网络生物材料的储能模量可以比可注射形式的初始储能模量高例如至少10％或更高，包括例如至少20％、至少30％、至少40％、至少50％、至少60％、至少70％、至少80％、至少90％、至少95％、至少1倍、至少2倍、至少3倍、至少5倍、至少10倍或更高。
在一些实施方案中，先天免疫的生物材料(例如，聚合物生物材料)激动剂的特征在于不超过10,000mPa·s或更低的粘度，包括例如不超过9000mPa·s、不超过8000mPa·s、不超过7000mPa·s、不超过6000mPa·s、不超过5000mPa·s、不超过4000mPa·s、不超过3500mPa·s、不超过3000mPa·s、不超过2500mPa·s、不超过2000mPa·s、不超过1500mPa·s、不超过1000mPa·s、不超过500mPa·s、不超过250mPa·s、不超过200mPa·s、不超过150mPa·s、不超过100mPa·s、不超过75mPa·s、不超过50mPa·s、不超过25mPa·s、不超过20mPa·s、不超过15mPa·s、不超过10mPa·s或更低。在一些实施方案中，先天免疫的生物材料(例如，聚合物生物材料)激动剂的特征可在于至少5mPa·s或更高的粘度，包括例如至少10mPa·s、至少20mPa·s、至少30mPa·s、至少40mPa·s、至少50mPa·s、至少60mPa·s、至少70mPa·s、至少80mPa·s、至少90mPa·s、至少100mPa·s、至少125mPa·s、至少150mPa·s、至少175mPa·s、至少250mPa·s、至少500mPa·s、至少1000mPa·s、至少1500mPa·s、至少2000mPa·s、至少2500mPa·s、至少3000mPa·s、至少4000mPa·s、至少5000mPa·s、至少6000mPa·s、至少7000mPa·s、至少8000mPa·s、至少9000mPa·s或更高。上述范围的组合也是可能的。例如，在一些实施方案中，先天免疫的生物材料(例如，聚合物生物材料)激动剂的特征在于5mPa·s至10,000mPa·s、或10mPa·s至5000mPa·s、或5mPa·s至200mPa·s、或20mPa·s至200mPa·s、或5mPa·s至20mPa·s的粘度。本领域技术人员阅读本公开后将理解，在一些情况下，先天免疫的生物材料(例如，聚合物生物材料)激动剂的粘度可基于例如施用途径(例如，注射对植入)、注射体积和/或时间、和/或先天免疫刺激的影响持续时间来选择或调节。如本领域技术人员还将理解，聚合物的粘度取决于例如温度和测试样品中聚合物的浓度。在一些实施方案中，如本文所述的先天免疫的生物材料(例如，聚合物生物材料)激动剂的粘度可以在20℃下，例如以1000s-1的剪切速率测量。
在一些实施方案中，先天免疫的生物材料(例如，聚合物生物材料)激动剂的特征在于指示粘弹性材料的相角。例如，在一些实施方案中，先天免疫的生物材料(例如，聚合物生物材料)激动剂的特征在于1°至50°、或2°至45°、或3°至40°、或3°至35°、3°至30°、或3°至25°、或5°至30°、或10°至30°、15°至25°的相角。在一些实施方案中，先天免疫的生物材料(例如，聚合物生物材料)激动剂的特征在于10°至30°或15°至25°的相角。如本领域技术人员将理解，聚合物生物材料的相角可以通过动态力学分析、例如扫频分析来确定，其包括例如样品的剪切储能模量和剪切损耗模量的确定。本领域技术人员将理解，材料的储能模量或弹性模量可基于其储存的能量来确定，并且其代表材料的弹性性质，而损耗模量或粘性模量可基于作为热量耗散的能量来确定，并且其代表材料的粘性性质。相角(δ)是储能模量与损耗模量之比的反正切，其值表示该材料是更具弹性还是更具粘性。典型地，>45°的相角表明粘性性质占优势并且材料表现得更像溶液。当相角接近0°时，弹性(固体或凝胶状)性质占优势。例如，具有高储能模量和低相角的材料表示比具有较低储能模量和相角的材料更强的凝胶(更具弹性)。在一些实施方案中，如本文所述的先天免疫的生物材料(例如，聚合物生物材料)激动剂的相角可以通过在对应于待治疗的受试者的体温的温度下进行的扫频分析来确定。在一些实施方案中，可以在施加恒定0.4％应变下在0.1至10Hz的频率范围内执行扫频分析。
在一些实施方案中，施用至有需要的受试者的靶部位的先天免疫的生物材料(例如，聚合物生物材料)激动剂(例如，如本文所述)是聚合物网络生物材料或在靶部位原位形成聚合物网络生物材料。在一些实施方案中，此种聚合物网络生物材料可以是或包含非交联聚合物网络生物材料。在一些实施方案中，此种聚合物网络生物材料可以是或包含交联的聚合物网络生物材料。示例性交联聚合物网络生物材料是或包含水凝胶。用于交联聚合物链的各种交联剂和方法是本领域技术人员已知的，例如，如Parhi,Adv Pharm Bull.,Review 7(4):515-530(2017)；Ahmadi等人Res Pharm Sci.,10(1):1-16(2015)；以及Khunmanee等人.“Crosslinking method of hyaluronic-based hydrogel forbiomedical applications”J Tissue Eng.8:1-16(2017)中所述，其各自的内容出于本文所述的目的通过引用并入本文。此外，本领域技术人员将理解，可以基于例如所使用的聚合物的类型、在靶部位原位交联的容易度、交联强度和/或类型、和/或实施方法的应用来选择适当的交联方法。
在一些实施方案中，交联的聚合物网络生物材料可包含共价交联。本领域技术人员将理解，在一些实施方案中，此种共价交联可以通过使用化学交联剂诸如例如小分子交联剂来形成，所述化学交联剂可以衍生自天然来源或加以合成。此类化学交联剂的非限制性实例包括京尼平、二醛、戊二醛、乙二醛、二异氰酸酯、戊二酸、琥珀酸、己二酸、丙烯酸、二丙烯酸酯等)。另外或替代地，本领域技术人员将理解，在一些实施方案中，此种共价交联可以通过热诱导交联(例如，与热诱导交联剂诸如例如热响应性聚合物诸如例如泊洛沙姆407或泊洛沙姆188混合)、光诱导交联(例如，与光诱导交联剂诸如乙烯基砜、甲基丙烯酸酯、丙烯酸、叠氮基苯甲酸混合)、pH诱导交联、酶催化交联及其组合来形成。在一些实施方案中，聚合物网络生物材料可通过连接巯基(例如
Figure BDA0003328085060000521
)、甲基丙烯酸酯、十六烷基酰胺(例如
Figure BDA0003328085060000522
)和/或酪胺(例如
Figure BDA0003328085060000523
)来交联。在一些实施方案中，聚合物网络生物材料可以直接用甲醛(例如
Figure BDA0003328085060000524
)、二乙烯基砜(DVS)(例如
Figure BDA0003328085060000525
)、1,4-丁二醇二缩水甘油醚(BDDE)(例如
Figure BDA0003328085060000526
)、戊二醛和/或京尼平交联(参见，例如，Khunmanee等人“Crosslinking method of hyaluronic-basedhydrogel for biomedical applications”J Tissue Eng.8:1-16(2017))。在一些实施方案中，聚合物网络生物材料用二乙烯基砜(DVS)(例如
Figure BDA0003328085060000527
)交联。
在一些实施方案中，交联的聚合物网络生物材料可包含离子交联。本领域技术人员将理解，在一些实施方案中，此种离子交联可通过与带相反电荷的多价抗衡离子(例如三聚磷酸盐、三羧酸、二羧酸等)混合和/或与带相反电荷的聚合物混合来形成。仅举例来说，带正电荷的聚合物链可以通过与添加的带负电荷的聚合物链的离子相互作用而彼此交联，反之亦然。因此，如本领域技术人员将理解，适当的带正电荷的聚合物或带负电荷的聚合物(包括例如藻酸盐、角叉菜胶、壳聚糖、硫酸软骨素、硫酸葡聚糖、明胶、透明质酸、聚乳酸、果胶、聚丙烯酸、聚β氨基酯、聚磷酸和/或黄原胶)可用于此种离子交联。
在一些实施方案中，与非交联的聚合物网络对应物相比，聚合物网络生物材料可以交联以增加其在所施用的靶部位处的停留时间，例如当更期望延长先天免疫的刺激时。在一些实施方案中，交联聚合物网络生物材料相对于其非交联聚合物网络对应物可具有降低的降解速率。在一些实施方案中，交联聚合物网络生物材料相对于其非交联聚合物网络对应物可具有降低的溶解度(例如，在生理条件或缓冲溶液中)。
在一些实施方案中，本文提供的先天免疫的生物材料(例如，聚合物生物材料)激动剂可以被修饰以增加其溶解度(例如，如通过诸如在水性环境中的溶解速率测量的)和/或可降解性(例如，如通过降解速率测量的)。在一些实施方案中，与未修饰的对应物相比，此类修饰可减少其在所施用的靶部位处的停留时间。例如，在一些实施方案中，此类修饰可用于更需要短期先天免疫刺激的应用。本领域技术人员将认识到本领域已知的适当修饰方法(例如，如Ahmadi等人Res Pharm Sci.,10(1):1-16(2015)中所述，其各自的内容出于本文所述的目的通过引用并入本文)可以基于例如聚合物的化学结构和/或实施方法的应用来选择。例如，在一些实施方案中，用于先天免疫的生物材料(例如，聚合物生物材料)激动剂的聚合物可通过添加亲水性化学部分(例如，羧基或糖，诸如单糖、二糖或寡糖)或亲水性聚合物(例如，聚乙二醇、聚羧基甜菜碱或聚磺基甜菜碱)来修饰。在一些实施方案中，用于先天免疫的生物材料(例如，聚合物生物材料)激动剂的聚合物可通过巯基化(例如，通过将至少一个或多个-SH基团引入聚合物链中)来修饰。
在一些实施方案中，本文提供的先天免疫的生物材料(例如，聚合物生物材料)激动剂可被修饰，例如以改变其粘膜粘附性。例如，在一些实施方案中，先天免疫的生物材料(例如，聚合物生物材料)激动剂的粘膜粘附性可以通过巯基化(即，将至少一个或多个-SH基团引入聚合物链，使得其可以容易地与存在于上皮组织中的糖蛋白的富含半胱氨酸的部分形成二硫键)来增加。
在一些实施方案中，本文提供的先天免疫的生物材料(例如，聚合物生物材料)激动剂可针对其免疫调节性质进行调节。例如，本领域技术人员将理解，在一些实施方案中，聚合物生物材料的一种或多种免疫调节性质可通过其生物材料性质来调节，所述生物材料性质包括例如聚合物生物材料的表面化学(例如通过聚合物生物材料的疏水性和/或亲水性部分、化学部分和/或电荷特征来调节)和/或聚合物生物材料的形貌(例如通过尺寸、形状和/或表面纹理来调节)，例如，如Mariani等人“Biomaterials:Foreign Bodies orTuners for the Immune Response？”International Journal of Molecular Sciences,2019,20,636中所述。
在一些实施方案中，先天免疫的生物材料(例如，聚合物生物材料)激动剂是GMP级的。如本领域技术人员将理解，GMP级产品通常按照当前的GMP指南制造，例如将内毒素水平维持处于或低于可接受的水平。
在一些实施方案中，根据本公开使用的先天免疫的生物材料(例如，聚合物生物材料)激动剂可包含一种或多种(例如，至少两种或更多种，包括诸如例如，2、3、4、5或更多种)聚合物(例如，如本文所述)。在一些实施方案中，先天免疫的生物材料激动剂可以是单一聚合物生物材料或可以包含各自赋予先天免疫激动作用的多种(例如，至少两种、至少三种或更多种)聚合物生物材料(例如，如本文所述，诸如例如碳水化合物聚合物[例如，是或包含碳水化合物的聚合物，例如碳水化合物主链，包括例如但不限于壳聚糖、藻酸盐、透明质酸和/或其变体]、聚丙烯酸、聚乙烯亚胺(PEI)、聚磷腈、硅胶和/或其变体和/或其组合)。在一些实施方案中，先天免疫的生物材料激动剂可包含各自赋予先天免疫激动作用的至少一种或多种(例如，1、2、3、4或更多种)聚合物(例如，如本文所述，诸如例如碳水化合物聚合物[例如，是或包含碳水化合物的聚合物，例如，碳水化合物主链，包括例如但不限于壳聚糖、藻酸盐、透明质酸和/或其变体]、聚丙烯酸、聚乙烯亚胺(PEI)、聚磷腈和/或其变体)和不一定赋予此种先天免疫激动作用的至少一种或多种(例如，1、2、3、4或更多种)生物材料(例如，聚合物)。在一些实施方案中，可能不一定赋予此种先天免疫激动作用的此种生物材料可以是本领域已知的生物相容的和/或可生物降解的生物材料(例如，聚合物)。此种生物相容的和/或可生物降解的生物材料(例如，聚合物)可以是惰性的并且不一定诱导免疫反应。例如，在一些实施方案中，可共存于包含赋予先天免疫激动作用的聚合物(例如，如本文所述，诸如例如碳水化合物聚合物[例如，是或包含碳水化合物的聚合物，例如，碳水化合物主链，包括例如但不限于壳聚糖、藻酸盐、透明质酸和/或其变体]、聚丙烯酸、硅胶、聚乙烯亚胺(PEI)、聚磷腈和/或其变体)的先天免疫的生物材料激动剂中的此种生物相容的和/或可生物降解的生物材料可以是或包含纤维素、几丁质、硫酸软骨素、胶原、葡聚糖、明胶、乙烯-乙酸乙烯酯(EVA)、纤维蛋白、乳酸-乙醇酸共聚物(PLGA)、聚乳酸(PLA)、聚乙醇酸(PGA)、聚乙二醇(PEG)、PEG二丙烯酸酯(PEGDA)、含二硫化物的PEGDA(PEGSSDA)、PEG二甲基丙烯酸酯(PEGDMA)、聚二恶烷酮(PDO)、聚羟基丁酸酯(PHB)、聚(2-羟乙基甲基丙烯酸酯)(pHEMA)、聚羧基甜菜碱(PCB)、聚磺基甜菜碱(PSB)、聚己内酯(PCL)、聚(β-氨基酯)(PBAE)、聚(酯酰胺)、聚(丙二醇)(PPG)、聚(天冬氨酸)、聚(谷氨酸)、聚(富马酸丙二醇酯)(PPF)、聚(癸二酸酐)(PSA)、聚(三亚甲基碳酸酯)(PTMC)、聚(脱氨基酪氨酰酪氨酸烷基酯碳酸酯)(PDTE)、聚[双(三氟乙氧基)磷腈]、聚甲醛、单壁碳纳米管、聚酐、聚(N-乙烯基-2-吡咯烷酮)(PVP)、聚(乙烯醇)(PVA)、聚(丙烯酸)(PAA)、聚(甲基丙烯酸)(PMA)、聚缩醛、聚(α酯)、聚(原酸酯)、聚磷酸酯、聚氨酯、聚碳酸酯、聚酰胺、聚羟基烷酸酯、聚甘油、聚葡糖醛酸、淀粉、其变体和/或其组合。
在一些实施方案中，根据本公开使用的先天免疫的生物材料(例如，聚合物生物材料)激动剂是或包含一种或多种碳水化合物聚合物。在一些实施方案中，先天免疫的生物材料激动剂可以是单一碳水化合物聚合物的生物材料。在一些实施方案中，先天免疫的生物材料激动剂可以是至少两种碳水化合物聚合物(包括例如至少三种碳水化合物聚合物或更多种)的生物材料。在一些实施方案中，先天免疫的生物材料激动剂可以是或包含至少一种碳水化合物聚合物和至少一种另外的聚合物的组合。在一些实施方案中，此种另外的聚合物可以是或包含不同的免疫调节性聚合物生物材料(例如，本文所述的那些)。在一些实施方案中，此种另外的聚合物可以是惰性的并且不一定诱导免疫反应。
在一些实施方案中，碳水化合物聚合物可以以0.5％(w/w)至10％(w/w)、或0.5％(w/w)至8％(w/w)、或1％(w/w)至7％(w/w)、或2％(w/w)至6％(w/w)的浓度存在于先天免疫的生物材料激动剂中。在一些实施方案中，碳水化合物聚合物可以以更高的浓度存在于先天免疫的生物材料激动剂中，例如以10％(w/w)或更高的浓度，包括例如但不限于11％(w/w)、12％(w/w)、13％(w/w)、14％(w/w)、15％(w/w)、16％(w/w)、17％(w/w)、18％(w/w)、19％(w/w)、20％(w/w)或更高。可以基于先天免疫的生物材料激动剂的组成和/或性质来调节先天免疫的生物材料激动剂中碳水化合物聚合物的浓度。仅举例来说，在一些实施方案中，其中先天免疫的生物材料激动剂是碳水化合物聚合物的制剂而不存在任何其他聚合物，可以使用更高浓度的碳水化合物聚合物。在一些实施方案中，其中另外的聚合物被包括在先天免疫的生物材料激动剂中，可以使用较低浓度的碳水化合物聚合物，例如以实现如本文描述的一种或多种所希望的材料性质(包括例如但不限于储能模量、粘度和/或相角)。为了清楚起见，符号“w/w”是指特定聚合物在包括聚合物和溶剂的混合物中的比例。
在一些实施方案中，根据本公开使用的先天免疫的生物材料(例如，聚合物生物材料)激动剂是或包含一种或多种碳水化合物聚合物(例如，本文所述的那些)和至少一种热响应性聚合物(例如，当暴露于某一温度例如约35-39℃或待施用的受试者的体温时形成交联聚合物网络的聚合物)。可根据本公开使用的热响应性聚合物的实例包括但不限于泊洛沙姆(例如泊洛沙姆407)、聚(N-异丙基丙烯酰胺)、壳聚糖、明胶、透明质酸、聚(乙二醇)、聚(ε-己内酯)、聚(有机磷腈)、聚[甲基丙烯酸2-(二甲基氨基)乙酯]、羟丙基纤维素、聚(乙烯基己内酰胺)、聚乙烯基甲基醚、聚丙烯酸、羟乙基琥珀酰胺、甲基丙烯酸2-羟甲酯及其组合。如Huang等人“Thermo-sensitive hydorgels for delivering biotherapeuticmolecules:A review”Saudi Pharmaceutical Journal(2019)27(7):990-999；以及Zarrintaj等人.“Thermo-sensitive polymers in medicine:A review”EuropeanPolymer Journal(2019)117:402-423(其各自的内容出于本文所述的目的通过引用整体并入本文)所述的热响应性聚合物的其他实例可根据本公开使用。在一些实施方案中，碳水化合物聚合物可以以0.5％(w/w)至10％(w/w)、或0.5％(w/w)至8％(w/w)、或1％(w/w)至7％(w/w)、或2％(w/w)至6％(w/w)的浓度存在于此种先天免疫的生物材料激动剂中。在一些实施方案中，热响应性聚合物可以以这样的浓度存在，使得当热响应性聚合物和碳水化合物聚合物的组合暴露于约35-39℃或待施用的受试者的体温(例如37℃)时，该组合形成交联的先天免疫的生物材料激动剂。在一些这样的实施方案中，交联的先天免疫的生物材料激动剂的特征在于如本文所述的一种或多种生物材料特征，包括例如储能模量、粘度、相角和/或降解速率。
A.壳聚糖及其变体
在一些实施方案中，根据本公开提供或使用的先天免疫的生物材料(例如，聚合物生物材料)激动剂是或包含壳聚糖或其变体。可用于本文所述方法中的壳聚糖和/或其变体的实例包括但不限于壳聚糖、壳聚糖盐(例如，壳聚糖HCl、壳聚糖氯化物、壳聚糖乳酸盐、壳聚糖乙酸盐、壳聚糖谷氨酸盐)、烷基壳聚糖、芳族壳聚糖、羧烷基壳聚糖(例如，羧甲基壳聚糖)、羟烷基壳聚糖(例如，羟丙基壳聚糖、羟乙基壳聚糖)、氨基烷基壳聚糖、酰化壳聚糖、磷酸化壳聚糖、巯基化壳聚糖、季铵壳聚糖(例如，N-(2-羟基)丙基-3-三甲基铵壳聚糖氯化物)、胍基壳聚糖、壳聚糖寡糖、糖化壳聚糖(例如，N-二氢半乳糖壳聚糖)、及其变体或组合。在一些实施方案中，根据本公开提供或使用的先天免疫的生物材料(例如，聚合物生物材料)激动剂是或包含羰烷基壳聚糖(例如，羧甲基壳聚糖)。
本领域技术人员将理解，在一些情况下，壳聚糖和/或其变体可通过几丁质的脱乙酰作用产生。在一些实施方案中，用于先天免疫的生物材料(例如，聚合物生物材料)激动剂中的壳聚糖或其变体的特征在于至少70％或以上的脱乙酰度(即，乙酰基去除的百分比)，包括例如至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％或更高(包括至多达100％)。在一些实施方案中，壳聚糖或其变体的特征在于不超过99％、不超过95％、不超过90％、不超过85％、不超过80％、不超过75％或更低的脱乙酰度。上述范围的组合也是可能的。例如，壳聚糖或其变体的特征可在于80％-95％、70％-95％或75％-90％的脱乙酰度。如本领域技术人员将认识到，脱乙酰度(％DA)可以通过本领域已知的各种方法测定，例如，在一些情况下，通过NMR光谱法。
在一些实施方案中，用于先天免疫的生物材料(例如聚合物生物材料)激动剂中的壳聚糖或其变体的平均分子量可为至少5kDa或更高，包括例如至少10kDa或更高，包括例如至少20kDa、至少30kDa、至少40kDa、至少50kDa、至少60kDa、至少70kDa、至少80kDa、至少90kDa、至少100kDa、至少110kDa、至少120kDa、至少130kDa、至少140kDa、至少150kDa、至少160kDa、至少170kDa、至少180kDa、至少190kDa、至少200kDa、至少210kDa、至少220kDa、至少230kDa、至少240kDa、至少250kDa、至少260kDa、至少270kDa、至少280kDa、至少290kDa、至少300kDa、至少350kDa、至少400kDa、至少500kDa、至少600kDa、至少700kDa或更高。在一些实施方案中，用于先天免疫的生物材料(例如聚合物生物材料)激动剂中的壳聚糖或其变体的平均分子量可不超过750kDa或更低，包括例如不超过700kDa、不超过600kDa、不超过500kDa、不超过400kDa、不超过300kDa、不超过200kDa、不超过100kDa、不超过50kDa或更低。上述范围的组合也是可能的。例如，在一些实施方案中，用于先天免疫的生物材料(例如聚合物生物材料)激动剂中的壳聚糖或其变体的特征在于10kDa至700kDa、或20kDa至700kDa、或30kDa至500kDa、或150kDa至600kDa、或150kDa至400kDa、或50kDa至150kDa、或10kDa至50kDa的平均分子量。在一些实施方案中，用于先天免疫的生物材料(例如聚合物生物材料)激动剂中的壳聚糖或其变体的特征在于20kDa至700kDa、或30kDa至500kDa的平均分子量。如本文所述，壳聚糖或其变体的平均分子量可以是数均分子量、重均分子量或峰均分子量。
在一些实施方案中，用于先天免疫的生物材料(例如，聚合物生物材料)激动剂中的壳聚糖或其变体的特征在于在10kDa至700kDa、或20kDa或700kDa、或30kDa至500kDa、或150kDa至600kDa、或150kDa至400kDa、或50kDa至150kDa、或10kDa至50kDa的范围内的分子量分布。在一些实施方案中，用于先天免疫的生物材料(例如，聚合物生物材料)激动剂中的壳聚糖或其变体的特征在于在20kDa至700kDa、或30kDa至500kDa的范围内的分子量分布。
在一些实施方案中，用于先天免疫的生物材料(例如，聚合物生物材料)激动剂中的壳聚糖或其变体的特征在于不超过3500mPa·s或更低的粘度，包括例如不超过3000mPa·s、不超过2500mPa·s、不超过2000mPa·s、不超过1500mPa·s、不超过1000mPa·s、不超过500mPa·s、不超过250mPa·s、不超过200mPa·s、不超过150mPa·s、不超过100mPa·s、不超过75mPa·s、不超过50mPa·s、不超过25mPa·s、不超过20mPa·s、不超过15mPa·s、不超过10mPa·s或更低。在一些实施方案中，壳聚糖或其变体的特征可在于至少5mPa·s或更高的粘度，包括例如至少10mPa·s、至少20mPa·s、至少30mPa·s、至少40mPa·s、至少50mPa·s、至少60mPa·s、至少70mPa·s、至少80mPa·s、至少90mPa·s、至少100mPa·s、至少125mPa·s、至少150mPa·s、至少175mPa·s、至少250mPa·s、至少500mPa·s、至少1000mPa·s、至少1500mPa·s、至少2000mPa·s、至少2500mPa·s或更高。上述范围的组合也是可能的。例如，在一些实施方案中，此种壳聚糖或其变体的粘性聚合物溶液或包含壳聚糖或其变体的粘性聚合物溶液的特征可在于5mPa·s至3000mPa·s、或5mPa·s至300mPa·s、5mPa·s至200mPa·s、或20mPa·s至200mPa·s、或5mPa·s至20mPa·s的粘度。在一些实施方案中，本文描述的壳聚糖或其变体的粘度在20℃下在1％醋酸中以1％测量。
在一些实施方案中，先天免疫的生物材料(例如，聚合物生物材料)激动剂是或包含至少一种或多种(例如，1、2、3或更多种)壳聚糖和/或其变体(包括，例如，改性的壳聚糖和/或壳聚糖或改性的壳聚糖的盐，诸如氯化物盐或谷氨酸盐)。例如，在一些实施方案中，壳聚糖和/或其变体(包括，例如，改性的壳聚糖和/或壳聚糖或改性的壳聚糖的盐，诸如氯化物盐或谷氨酸盐)的特征在于70％-95％、或75％-90％、或80％-95％、或大于90％的脱乙酰度。在一些实施方式中，壳聚糖和/或其变体(包括，例如，改性的壳聚糖和/或壳聚糖或改性的壳聚糖的盐，诸如氯化物盐或谷氨酸盐)的特征可在于10kDa至700kDa、20kDa至600kDa、30kDa至500kDa、150kDa至400kDa或200kDa至600kDa的平均分子量(例如，以壳聚糖或壳聚糖盐，例如，壳聚糖乙酸盐测量)。在一些实施方案中，壳聚糖和/或其变体(包括，例如，改性的壳聚糖和/或壳聚糖或改性的壳聚糖的盐，诸如氯化物盐或谷氨酸盐)的特征可在于在10kDa至700kDa、20kDa至600kDa、30kDa至500kDa、150kDa至400kDa或200kDa至600kDa的范围内的分子量分布(例如，以壳聚糖或壳聚糖盐，例如，壳聚糖乙酸盐测量)。在一些实施方案中，壳聚糖和/或其变体(包括例如其盐，诸如氯化物盐或谷氨酸盐)的特征可在于在5至3000mPa·s、或5至300mPa·s、或20至200mPa·s范围内的粘度。在一些实施方案中，此类壳聚糖和/或其变体(包括，例如，其盐，诸如氯化物盐或谷氨酸盐)可以是或包含PROTASANTM UltraPure壳聚糖氯化物和/或壳聚糖谷氨酸盐(例如，获自
Figure BDA0003328085060000611
其是FMC Health and Nutrition的业务部门(现在是Du Pont的一部分；产品编号CL 113、CL114、CL 213、CL 214、G 113、G 213、G 214)。在一些实施方案中，此类壳聚糖和/或其变体(包括，例如，其盐，诸如氯化物盐或谷氨酸盐)可以是或包含壳聚糖、壳聚糖低聚物和/或其变体(包括，例如，壳聚糖HCl、羧甲基壳聚糖、壳聚糖乳酸盐、壳聚糖乙酸盐)，例如，获自Heppe Medical Chitosan GMBH(例如，
Figure BDA0003328085060000612
或
Figure BDA0003328085060000613
)。
在一些实施方案中，先天免疫的生物材料(例如，聚合物生物材料)激动剂是或包含羧烷基壳聚糖(例如，羧甲基壳聚糖)，其特征在于以下特征中的至少一个或全部：(1)80％-95％的脱乙酰度；(ii)30kDa至500kDa的平均分子量；或30kDa至500kDa的分子量分布；和(iii)5至300mPa·s范围内的粘度。
在一些实施方案中，本文提供或使用的先天免疫的生物材料(例如，聚合物生物材料)激动剂是或包含壳聚糖的变体(例如，如本文所述)。在一些实施方案中，此种壳聚糖变体可包括壳聚糖链的一个或多个化学部分(例如羟基和/或氨基)的化学改性。在一些实施方案中，此种壳聚糖变体是或包含改性的壳聚糖，诸如例如但不限于糖化壳聚糖(例如，通过将一个或多个单糖或寡糖侧链添加到其一个或多个游离氨基而改性的壳聚糖)。可用于本文的示例性糖化壳聚糖包括例如但不限于US 5,747,475、US 6,756,363、WO 2013/109732、US 2018/0312611和US 2019/0002594中所述的那些，所述参考各自的内容出于本文所述的目的通过引用并入本文。
在一些实施方案中，本文提供或使用的先天免疫的生物材料(例如，聚合物生物材料)激动剂是或包含与增加其在水性环境中的溶解度的聚合物(例如，亲水性聚合物诸如聚乙二醇)缀合的壳聚糖。
在一些实施方案中，本文提供或使用的先天免疫的生物材料(例如，聚合物生物材料)激动剂是或包含巯基化壳聚糖。对壳聚糖的各种修饰，例如但不限于羧化、PEG化、半乳糖基化(或其他糖基化)和/或巯基化是本领域已知的，例如，如Ahmadi等人Res PharmSci.,10(1):1-16(2015)中所述，其各自的内容出于本文所述的目的通过引用并入本文。本领域技术人员阅读本公开后将理解，其他改性壳聚糖可用于实施方法的特定应用。
B.透明质酸(HA)
在一些实施方案中，根据本公开提供或使用的先天免疫的生物材料(例如，聚合物生物材料)激动剂是或包含透明质酸(HA)，也称为透明质酸(hyaluronan)或透明质酸盐(hyaluronate)。
不希望受特定理论束缚，本公开观察到HA的生物活性取决于其分子量而不同-例如，高分子量HA(高MW HA)可具有抗炎或免疫抑制活性，而低分子量HA(低MW HA)可表现出促炎或免疫刺激行为。参见，例如，Gao等人“A low molecular weight hyaluronic acidderivative accelerates excisional wound healing by modulating pro-inflammation,promoting epithelialization and neovascularization,andremodeling collagen”Int J.Mol Sci(2019)20:3722；Cyphert等人.“Size Matters:Molecular Weight Specificity of Hyaluronan Effects in Cell Biology.”Int.J.Cell Biol.(2015)2015:563818；Dicker等人“Hyaluronan:A simplepolysaccharide with diverse biological functions”Acta Biomater.(2014)10:1558–1570；Aya和Stern“Hyaluronan in wound healing:Rediscovering a major player.”Wound Repair Regen.(2014)22:579–593；以及Frenkel“The role of hyaluronan inwound healing”Int.Wound J.(2014)11:159–163，其各自的全部内容出于本文所述的目的通过引用整体并入本文。此外，不希望受特定理论的束缚，本公开观察到低MW HA(例如，多分散低MW HA)可激活先天免疫反应，例如经由TLR2和MyD88；诱导促炎细胞因子(包括例如IL-12)的产生，和/或减少抗炎信号传导(包括例如IL-10的产生)；影响巨噬细胞极性；和/或刺激类花生酸(包括例如诱导COX2和/或PGE2产生，例如经由ERK1/2p38和/或JNK信号传导)。参见，例如，Monslow等人“Hyaluronan–a functional and structural sweet spotin the tissue microenvironment”Front.Immunol.(2015)6:231(19页)；和Alaniz等人“Low molecular weight hyaluronan preconditioning of tumor-pulsed dendriticcells increases their migratory ability and induces immunity against murinecolorectal carcinoma”Cancer Immunol Immunother.(2011)60(10):1383-95，其各自的全部内容出于本文所述的目的通过引用整体并入本文。
本公开尤其提供了以下见解：当施用至肿瘤切除受试者中的靶部位时，低MW HA可以是有用的先天免疫的生物材料激动剂。在一些实施方案中，本公开教导某些低HA，例如分子量为500kDa或更小，包括例如350kDa或更小、或250kDa或更小、或200kDa或更小、或150kDa或更小的此种HA，可用作先天免疫的生物材料激动剂，用于施用至如本文所述的肿瘤切除受试者中的靶部位。
在一些实施方案中，可用于先天免疫的生物材料激动剂的HA及其用途(例如，如本文所述)可从天然来源(例如，动物来源)提取和/或经由微生物发酵产生。在一些实施方案中，HA可以是重组HA，例如使用革兰氏阳性和/或革兰氏阴性细菌作为宿主所产生的，包括例如但不限于芽孢杆菌属、乳酸乳球菌属、土壤杆菌属和/或大肠杆菌。
C.聚丙烯酸聚合物
在一些实施方案中，根据本公开提供或使用的先天免疫的生物材料(例如，聚合物生物材料)激动剂是或包含聚丙烯酸聚合物，也称为聚(1-羧基乙烯)或卡波姆。在一些实施方案中，聚(丙烯酸)聚合物可以是或包含丙烯酸的均聚物。在一些实施方案中，聚(丙烯酸)聚合物可以是或包含丙烯酸的共聚物，例如，在一些实施方案中，包含丙烯酸和丙烯酸烷基酯诸如例如丙烯酸C10-C30烷基酯的共聚物。在一些实施方案中，聚(丙烯酸)聚合物可以是互聚物，例如，在一些实施方案中，包含含有不同种类的嵌段聚合物(例如，嵌段均聚物或共聚物)的聚(丙烯酸)均聚物或共聚物(例如，如本文所述或使用的)的互聚物。在一些实施方案中，聚(丙烯酸)聚合物可以是包含含有聚乙二醇和长链烷基酸酯的嵌段共聚物的聚(丙烯酸)均聚物或共聚物(例如，如本文所述)的互聚物。
在一些实施方案中，本文所述的方法中提供或使用的聚(丙烯酸)聚合物可以是交联的。本领域技术人员将理解，在一些情况下，聚(丙烯酸)聚合物可以用烯丙基蔗糖、烯丙基季戊四醇和/或烯丙基丙烯交联。
本领域技术人员阅读本公开后将理解，用于化妆品、药物和个人护理产品中的各种聚丙烯酸聚合物可用于根据本公开的先天免疫的生物材料(例如，聚合物生物材料)激动剂中。例如，在一些实施方案中，聚丙烯酸聚合物可以是或包含来自Lubrizol的一种或多种
Figure BDA0003328085060000641
聚合物产品。在一些实施方案中，聚丙烯酸聚合物可以是或包含一种或多种聚(丙烯酸)均聚物(例如，丙烯酸用烯丙基蔗糖或烯丙基季戊四醇交联的聚合物)，其使用包含乙酸乙酯的聚合溶剂或包含乙酸乙酯和环己烷的聚合共溶剂。此类卡波姆均聚物的实例包括但不限于
Figure BDA0003328085060000642
聚合物71G NF、971P NF、974P NF、980NF、981NF、5984EP、934NF、934P NF、940NF和941NF。在一些实施方案中，聚丙烯酸聚合物可以是或包含一种或多种聚(丙烯酸)共聚物(例如，丙烯酸和丙烯酸C10－C30烷基酯用烯丙基季戊四醇交联的聚合物)，其使用包含苯的聚合溶剂或包含乙酸乙酯和环己烷的聚合共溶剂。示例性的此类聚(丙烯酸)共聚物包括但不限于
Figure BDA0003328085060000643
聚合物1342NF、Pemulen TR-1NF和/或PemulenTMTR-2NF。在一些实施方案中，聚(丙烯酸)聚合物可以是或包含一种或多种聚(丙烯酸)互聚物(例如，含有聚乙二醇和长链烷基酸酯的嵌段共聚物的聚(丙烯酸)均聚物或共聚物(例如，如本文所述或使用的))，其使用包含乙酸乙酯和环己烷的聚合共溶剂。此类聚(丙烯酸)互聚物的非限制性实例包括
Figure BDA0003328085060000651
聚合物ETD 2020NF和Ultrez 10NF。
II.药物组合物
在一些实施方案中，所提供的组合物可根据常规程序配制为用于向有需要的受试者(例如，如本文所述)施用的药物组合物。在一些实施方案中，此种药物组合物可包括药学上可接受的载体或赋形剂，如本文所用，其包括任何和所有溶剂、分散介质、稀释剂或其他液体媒介物、分散或悬浮助剂、表面活性剂、等渗剂、增稠剂或乳化剂、防腐剂、固体粘合剂、润滑剂等，如适合于所需的特定剂型。Remington的The Science and Practice ofPharmacy,第21版,A.R.Gennaro(Lippincott,Williams&Wilkins,Baltimore,MD,2006；通过引用并入本文)公开了用于配制药物组合物的各种赋形剂及其制备的已知技术。合适的药学上可接受的载体包括但不限于水、盐溶液(例如NaCl)、盐水、缓冲盐水、甘油、糖诸如甘露醇、乳糖、海藻糖、蔗糖或其他、右旋糖、脂肪酸酯等以及它们的组合。
如果需要，药物组合物可以混合有助剂(例如润滑剂、防腐剂、稳定剂、润湿剂、乳化剂、用于影响渗透压的盐、缓冲剂、着色剂、调味剂和/或芳香物质等)，所述助剂不与活性化合物有害地反应或干扰其活性。在一些实施方案中，药物组合物可以是无菌的。
如果需要，合适的药物组合物还可以含有少量的润湿剂或乳化剂、或pH缓冲剂。药物组合物可以是液体溶液、悬浮液或乳液。
药物组合物可以根据常规程序配制为适合施用于人类的药物组合物。药物组合物的配制应适合施用方式。例如，在一些实施方案中，用于注射的药物组合物通常可包含无菌等渗水性缓冲液。必要时，药物组合物还可以包括局部麻醉剂以减轻注射部位的疼痛。在一些实施方案中，药物组合物(例如，如本文所述)的组分以单次使用的形式单独提供或混合在一起，例如，作为在密封容器(诸如安瓿或小袋)中或在指示先天免疫的生物材料(例如，聚合物生物材料)激动剂的量的无菌注射器中的干燥冻干粉末或无水浓缩物。当药物组合物待通过注射施用时，在一些实施方案中，先天免疫的生物材料(例如，聚合物生物材料)激动剂的前体组分的例如干燥冻干粉末可以用缓冲水溶液复水，然后注射到有需要的受试者的靶部位。
尽管本文提供的药物组合物的描述主要涉及适于在伦理上对人类施用的药物组合物，但是本领域技术人员将理解，此类组合物通常适于对所有种类的动物或细胞进行体外或离体施用。为了使组合物适于在体外或离体施用给各种动物或细胞，对适于施用给人的药物组合物进行修饰是众所周知的，并且本领域普通技术人员，例如兽医药理学家，可以仅利用普通的实验(如果有的话)来设计和/或进行此种修饰。
本文描述的药物组合物的配制品可通过药理学领域中已知或此后开发的任何方法来制备。例如，此类制备方法包括以下步骤：使先天免疫的生物材料(例如，聚合物生物材料)激动剂的前体组分与稀释剂或另一种赋形剂和/或一种或多种其他辅助成分结合，并且然后，如果必要和/或希望的话，使产物成形和/或包装成所需的单次使用单位或多次使用单位。或者，此类制备方法还可包括在将产物成形和/或包装成所需的单次使用单位或多次使用单位之前，由其前体组分形成聚合物网络生物材料的步骤。
根据本公开的药物组合物可以作为单次使用单位和/或作为多个单次使用单位批量地制备、包装和/或销售。如本文所用，“单次使用单位”是本文所述的药物组合物的离散量。例如，药物组合物的单次使用单位包含预定量的先天免疫的生物材料(例如，聚合物生物材料)激动剂(例如，在不存在免疫调节有效负载的情况下)，其在一些实施方案中可为或包含预形成的聚合物网络生物材料，或在一些实施方案中可为或包含聚合物网络生物材料的前体组分和任选的交联剂(如果有的话)。
先天免疫的生物材料(例如，聚合物生物材料)激动剂(例如，作为预形成的聚合物网络生物材料或作为此种聚合物网络生物材料的前体组分)和任选地在本文描述的药物组合物中的任何另外的剂，例如，药学上可接受的赋形剂和/或任何另外的成分的相对量可以根据例如靶部位的大小、注射体积、待治疗的受试者的身体和医疗状况、癌症的类型而变化，并且还可以进一步取决于待施用此种药物组合物的途径。在一些实施方案中，在药物组合物中以有效量提供先天免疫的生物材料(例如，聚合物生物材料)激动剂以在如本文所述的至少一个或多个方面诱导先天免疫。在一些实施方案中，先天免疫的生物材料(例如，聚合物生物材料)激动剂在药物组合物中以有效量提供以诱导抗肿瘤免疫。在一些实施方案中，先天免疫的生物材料(例如，聚合物生物材料)激动剂在药物组合物中以有效量提供以抑制或降低肿瘤复发和/或转移的风险或发生率。在某些实施方案中，有效量是先天免疫的生物材料(例如，聚合物生物材料)激动剂的治疗有效量。在某些实施方案中，有效量是先天免疫的生物材料(例如，聚合物生物材料)激动剂的预防有效量。
在某些实施方案中，药物组合物基本上由或由先天免疫的生物材料(例如，聚合物生物材料)激动剂(例如，如本文所述的那些)组成；就此种组合物可以包括除所述生物材料之外的一种或多种材料/剂而言，此类其他材料/剂不单独地或一起实质上改变生物材料的相关先天免疫调节特征。在一些实施方案中，此种药物组合物可以基本上不含先天免疫调节有效负载。
在某些实施方案中，药物组合物不包括细胞。在某些实施方案中，药物组合物不包括过继转移细胞。在某些实施方案中，药物组合物不包括T细胞。在某些实施方案中，药物组合物不包括肿瘤抗原。在某些实施方案中，药物组合物不包括离体负载的肿瘤抗原。
在某些实施方案中，药物组合物为液体形式。在某些实施方案中，药物组合物是固体形式(例如，凝胶形式、晶体形式等)。在某些实施方案中，从液体形式到固体形式的转变可以在充分交联时发生，使得所得材料具有与固体形式一致的储能模量，这允许其在外科手术中进行物理操作和植入。因此，在一些实施方案中，固体形式可适于实施本公开的预期用途(例如，外科植入)。在某些实施方案中，从液体形式到固体形式的转变可以在原位热交联时发生，使得所得材料具有与固体形式一致的储能模量。在某些实施方案中，药物组合物是悬浮液。例如，固体颗粒(例如，晶体诸如无机晶体)可以作为悬浮液递送。
III.治疗用途
本文提供的技术可用于在有需要的受试者中诱导先天免疫反应。例如，在一些实施方案中，本文提供的技术可用于诱导抗肿瘤免疫。在一些实施方案中，本文提供的技术可用于治疗癌症。在一些实施方案中，本文提供的技术可用于延迟癌症的一种或多种症状的发作，减缓其进展或改善。在一些实施方案中，本文提供的技术可用于减少或抑制原发性肿瘤再生长。在一些实施方案中，本文提供的技术可用于降低或抑制肿瘤复发和/或转移的发生率。因此，本文提供的一些方面涉及向正经历或已经历肿瘤去除(例如，通过手术肿瘤切除)的受试者中的靶部位施用包含先天免疫调节组分和任选地一种或多种其他组分(即，一种或多种不是先天免疫调节剂的材料/剂)的组合物的方法。在一些实施方案中，先天免疫调节组分基本上由或由生物材料组成。在一些实施方案中，先天免疫调节组分基本上由或由聚合物生物材料组成。在一些实施方案中，本文提供的组合物的先天免疫调节组分基本上由或由此种生物材料(例如，聚合物生物材料)组成；就此种组合物可包括除生物材料(例如，聚合物生物材料)之外的一种或多种材料/剂而言，此类其他材料/剂不单独或一起实质性地改变生物材料(例如，聚合物生物材料)的相关先天免疫调节特征。
在一些实施方案中，此种所提供的组合物可包含基本上不含先天免疫调节有效负载的先天免疫调节组分，其中先天免疫调节组分包含先天免疫的生物材料(例如，聚合物生物材料)激动剂(例如，如本文所述和/或使用的)。在一些实施方案中，此种所提供的组合物可以基本上不含任何免疫调节有效负载。在一些实施方案中，用于本公开的方法中的此种所提供的组合物可配制为本文所述的药物组合物。
在某些实施方案中，本文提供的方法包括在去除肿瘤之后，例如在去除按重量计大于或等于50％或更高的受试者肿瘤(包括例如按重量计大于或等于55％、大于或等于60％、大于或等于65％、大于或等于70％、大于或等于75％、大于或等于80％、大于或等于85％、大于或等于90％、大于或等于95％、大于或等于96％、大于或等于97％、大于或等于98％或大于或等于99％的受试者肿瘤)之后，将所提供的组合物施用给有需要的受试者的靶部位。在某些实施方案中，本文提供的方法包括在去除按体积计大于或等于50％或更高的受试者肿瘤(包括例如按体积计大于或等于55％、大于或等于60％、大于或等于65％、大于或等于70％、大于或等于75％、大于或等于80％、大于或等于85％、大于或等于90％、大于或等于95％、大于或等于96％、大于或等于97％、大于或等于98％或大于或等于99％的受试者肿瘤)之后，将所提供的组合物施用给有需要的受试者的靶部位。在一些实施方案中，本文提供的方法包括在施用所提供的组合物之前进行肿瘤切除以去除受试者的肿瘤。
在一些实施方案中，本文描述和/或使用的组合物在受试者的肿瘤已通过手术肿瘤切除去除后立即施用至肿瘤切除受试者中的靶部位。在一些实施方案中，本文描述和/或使用的组合物在手术中施用至肿瘤切除受试者中的靶部位。在一些实施方案中，本文描述和/或使用的组合物在受试者的肿瘤已通过手术肿瘤切除去除后的24小时或更少内(包括例如18小时内、12小时内、6小时内、3小时内、2小时内、1小时内、30分钟内或更少内)手术后施用至肿瘤切除受试者中的靶部位。
在一些实施方案中，施用的靶部位是或包括肿瘤切除部位。在一些实施方案中，此种肿瘤切除部位的特征可在于不存在明显的残留肿瘤抗原。在一些实施方案中，此种肿瘤切除部位的特征可在于阴性切除边缘(即，例如基于肿瘤切除部位周围组织的组织学评估，在切除边缘处在显微镜下观察不到癌细胞)。在一些实施方案中，此种肿瘤切除部位的特征可在于阳性切除边缘(即，例如基于肿瘤切除部位周围组织的组织学评估，在切除边缘处在显微镜下观察到癌细胞)。在一些实施方案中，此种肿瘤切除部位的特征可在于存在明显的残留肿瘤抗原。在一些实施方案中，施用的靶部位是或包含与肿瘤切除部位紧密接近(例如，在4英寸内、在3.5英寸内、在3英寸内、在2.5英寸内、在2英寸内、在1.5英寸内、在1英寸内、在0.5英寸内、在0.4英寸内、在0.3英寸内、在0.2英寸内、在0.1英寸内或更小)的部位。在一些实施方案中，施用的靶部位是或包含前哨淋巴结。在一些实施方案中，施用的靶部位是或包含引流淋巴结。
如本领域普通技术人员将理解，根据本公开有用的组合物可以使用本领域已知的适当递送方法施用至有需要的受试者中的靶部位。例如，在一些实施方案中，所提供的技术可适用于通过注射施用。尤其，本公开认识到，微创操作(例如，小的和/或可触及或皮肤切除)可以产生比开放式手术或触及内部器官的手术更少的炎症(例如，与免疫抑制相关的炎症)。尤其，本公开认识到微创手术(MIS)，例如机器人辅助的MIS、机器人手术和/或腹腔镜手术，其例如通常涉及一个或多个小切口，以进行肿瘤切除和/或施用本文所述的组合物，可产生比开放式手术更少的炎症(例如与免疫抑制相关的炎症)。例如，在一些实施方案中，本公开尤其提供了以下见解：当通过微创手术(MIS)(例如机器人辅助的MIS、机器人手术和/或腹腔镜手术，其例如通常涉及一个或多个小切口)进行肿瘤切除和/或本文所述的组合物的施用时，本文所述的技术在不存在免疫调节有效负载的情况下可特别有用和/或有效。在一些实施方案中，本公开尤其提供了以下见解：当肿瘤切除和/或本文所述的组合物的施用在可触及和/或皮肤切除的情况下进行时，本文所述的技术在不存在免疫调节有效负载的情况下可特别有用和/或有效。在一些实施方案中，所提供的技术可适用于作为微创操作(例如，微创手术(MIS)，例如，机器人辅助的MIS、机器人手术和/或腹腔镜手术、和/或涉及一个或多个可触及和/或皮肤切除的操作)的一部分在术中施用(例如，通过注射)。在一些实施方案中，所提供的技术可适用于涉及机器人手术系统(例如，da Vinci系统)的施用(例如，通过注射)，例如，在一些实施例中用于微创施用。例如，在一些实施方案中，可用于注射和/或在微创操作(例如微创手术(MIS)，例如机器人辅助的MIS、机器人手术和/或腹腔镜手术和/或涉及一个或多个可触及和/或皮肤切除的操作)的情况下有用的组合物是液体，并且在此种组合物中提供的先天免疫的生物材料(例如聚合物生物材料)激动剂是或包含粘性聚合物溶液。在一些实施方案中，此种粘性聚合物溶液在向靶部位注射之前预制。
在其他实施方案中，可用于注射和/或在微创操作(例如，小的和/或可触及或皮肤切除)或微创手术(MIS)(例如，机器人辅助的MIS、机器人手术和/或腹腔镜手术)的情况下有用的组合物是液体，并且在此种组合物中提供的先天免疫的生物材料(例如，聚合物生物材料)激动剂在其被注射的靶部位处原位形成聚合物网络生物材料(例如，如本文所述和/或使用的)。例如，在某些实施方案中，将先天免疫的生物材料(例如，聚合物生物材料)激动剂的前体组分单独施用于受试者的靶部位(例如，肿瘤切除部位)。在一些实施方案中，非交联聚合物网络在靶部位(例如，肿瘤切除部位)原位形成。为了在体内形成交联聚合物网络，在一些实施方案中，还将交联剂(例如，如本文所述)施用至有需要的受试者中的靶部位。在某些实施方案中，先天免疫的生物材料(例如，聚合物生物材料)激动剂的前体组分和交联剂依次施用。在某些实施方案中，先天免疫的生物材料(例如，聚合物生物材料)激动剂的前体组分和交联剂同时施用。在某些实施方案中，先天免疫的生物材料(例如，聚合物生物材料)激动剂的前体组分和交联剂作为混合物施用。
在一些实施方案中，如本文所述的施用涉及施用先天免疫的生物材料(例如，聚合物生物材料)激动剂的一种或多种前体组分，所述前体组分原位相互作用或反应以形成如本文所述的聚合物网络生物材料；在一些此类实施方案中，此种相互作用或反应涉及交联，其在一些实施方案中可以自发发生，并且在一些实施方式中可以通过施加剂(例如，催化剂和/或反应物)和/或条件(例如，热、pH、压力、可处于特定波长下的电磁辐射等中的一种或多种)来触发。在一些实施方案中，将先天免疫的生物材料(例如，聚合物生物材料)激动剂的前体组分和交联剂单独施用(例如，通过注射)于受试者(例如，肿瘤切除部位)。在一些实施方案中，先天免疫的生物材料(例如，聚合物生物材料)激动剂的前体组分和交联剂依次施用(例如，通过注射)。在一些实施方案中，先天免疫的生物材料(例如聚合物生物材料)激动剂的前体组分和交联剂同时施用(例如通过注射)。在某些实施方案中，先天免疫的生物材料(例如，聚合物生物材料)激动剂的前体组分和交联剂作为单一混合物施用。仅举例来说，在一些实施方案中，壳聚糖和交联剂可以单独(例如，壳聚糖和离子交联剂，诸如例如三聚磷酸盐)或作为单一混合物(例如，壳聚糖和热响应性交联剂，诸如热响应性聚合物，其在一些实施方案中可以是或包含泊洛沙姆，诸如例如泊洛沙姆407)施用于受试者(例如，肿瘤切除部位)以在体内形成包含壳聚糖的聚合物网络生物材料。作为另一个实例，在一些实施方案中，藻酸盐和交联剂(例如，盐诸如钙盐)可以单独或作为单一混合物施用于受试者(例如，肿瘤切除部位)以在体内形成包含藻酸盐的聚合物网络生物材料。在一些实施方案中，HA(例如，低MW HA)和交联剂可以单独(例如，HA和化学交联剂，诸如例如，二乙烯基砜)或作为单一混合物(例如，HA和热响应性交联剂，诸如热响应性聚合物，其在一些实施方案中可以是或包含泊洛沙姆，诸如例如，泊洛沙姆407)施用于受试者(例如，肿瘤切除部位)以在体内形成包含HA的聚合物网络生物材料。
在一些实施方案中，本文提供的技术可适用于通过植入施用。例如，在一些实施方案中，根据本公开的组合物中提供的先天免疫的生物材料(例如，聚合物生物材料)激动剂是预形成的聚合物网络生物材料，其在一些实施方案中可以是或包含交联的聚合物网络生物材料和/或非交联的聚合物网络生物材料。示例性聚合物网络生物材料是或包含水凝胶。例如，在一些实施方案中，所提供的组合物可以通过手术植入到肿瘤切除部位(例如，由肿瘤切除产生的空隙体积)来施用。在一些实施方案中，所提供的组合物可以通过手术植入到肿瘤切除部位来施用并且用生物粘合剂固定。在一些实施方案中，施用可以在手术中进行(即，在肿瘤切除后立即进行)。
在一些实施方案中，实现期望的治疗效果(例如，抗肿瘤免疫)的先天免疫的聚合物生物材料激动剂的量可因受试者而异，取决于例如受试者的性别、年龄和一般状况、癌症的类型和/或严重程度、先天免疫的聚合物生物材料激动剂的功效等。
在一些实施方案中，本公开提供这样的技术，使得施用先天免疫的生物材料(例如，聚合物生物材料)激动剂(例如，如本文所述和/或使用的)本身足以提供抗肿瘤免疫，并且因此不一定需要向有需要的受试者(例如，如本文所述)施用例如肿瘤抗原和/或过继转移免疫细胞(例如，T细胞)。因此，在一些实施方案中，本文提供的技术不包括例如在受试者已接受如本文所述和/或使用的组合物后的1个月或更短时间内(包括例如在3周内、在2周内、在1周内、在5天内、在3天内、在1天内、在12小时内、在6小时内)向受试者施用肿瘤抗原。在某些实施方案中，本文提供的技术不包括例如在受试者已接受如本文所述和/或使用的组合物后的1个月或更短时间内(包括例如在3周内、在2周内、在1周内、在5天内、在3天内、在1天内、在12小时内、在6小时内)向受试者过继转移免疫细胞(例如T细胞)。
在一些实施方案中，本公开提供这样的技术，使得施用先天免疫的生物材料(例如，聚合物生物材料)激动剂(例如，如本文所述和/或使用的)本身足以引发或促进抗肿瘤免疫，并且因此不一定需要向有需要的受试者(例如，如本文所述)施用免疫调节有效负载。因此，在一些实施方案中，本文提供的技术不包括例如在受试者已接受如本文所述和/或使用的组合物后的1个月或更短时间内(包括例如在3周内、在2周内、在1周内、在5天内、在3天内、在1天内、在12小时内、在6小时内)向受试者施用免疫调节有效负载。
在一些实施方案中，本文提供的技术可用于治疗受试者的癌症。在一些实施方案中，本文提供的技术用于治疗可切除的肿瘤。在一些实施方案中，本文提供的技术用于治疗实体瘤(例如但不限于母细胞瘤、癌、生殖细胞肿瘤和/或肉瘤)。在一些实施方案中，本文提供的技术用于治疗存在于脾或淋巴系统外的组织(例如甲状腺或胃)中的淋巴瘤。
在一些实施方案中，本文提供的技术可用于治疗癌症，包括但不限于听神经瘤；腺癌；肾上腺癌；肛门癌；血管肉瘤(例如淋巴管肉瘤、淋巴管内皮肉瘤、血管肉瘤)；阑尾癌；良性单克隆丙种球蛋白病；胆道癌(例如胆管癌)；胆管癌；膀胱癌；骨癌；乳腺癌(例如，乳腺腺癌、乳腺乳头状癌、乳腺癌、乳腺髓样癌)；脑癌(例如脑膜瘤、胶质母细胞瘤、神经胶质瘤(例如星形细胞瘤、少突胶质细胞瘤、髓母细胞瘤)；支气管癌；类癌瘤；心脏肿瘤；宫颈癌(例如，宫颈腺癌)；绒毛膜癌；脊索瘤；颅咽管瘤；结肠直肠癌(例如，结肠癌、直肠癌、结肠直肠腺癌)；结缔组织癌；上皮癌；原位导管癌；室管膜瘤；内皮肉瘤(例如卡波西肉瘤、多发性特发性出血性肉瘤)；子宫内膜癌(例如子宫癌、子宫肉瘤)；食管癌(例如食管腺癌、Barrett腺癌)；尤文氏肉瘤；眼癌(例如眼内黑素瘤、视网膜母细胞瘤)；家族性嗜酸性粒细胞增多；胆囊癌；胃癌(例如，胃腺癌)；胃肠道间质瘤(GIST)；生殖细胞癌；头颈癌(例如头颈鳞状细胞癌、口腔癌(例如口腔鳞状细胞癌)、咽喉癌(例如喉癌、咽癌、鼻咽癌、口咽癌)；造血系统癌症(例如淋巴瘤、原发性肺淋巴瘤、支气管相关淋巴组织淋巴瘤、脾淋巴瘤、淋巴结边缘区淋巴瘤、儿科B细胞非霍奇金淋巴瘤)；成血管细胞瘤；组织细胞增多症；下咽癌；炎性肌纤维母细胞瘤；免疫细胞性淀粉样变性；肾癌(例如，肾母细胞瘤又名威尔姆斯瘤、肾细胞癌)；肝癌(例如，肝细胞癌(HCC)、恶性肝细胞瘤)；肺癌(例如，支气管癌、小细胞肺癌(SCLC)、非小细胞肺癌(NSCLC)、肺腺癌)；平滑肌肉瘤(LMS)；黑素瘤；中线道癌；多发性内分泌腺瘤综合征；肌肉癌；间皮瘤；鼻咽癌；神经母细胞瘤；神经纤维瘤(例如，1型或2型神经纤维瘤病(NF)、神经鞘瘤病)；神经内分泌癌(例如胃肠胰腺神经内分泌肿瘤(GEP-NET)、类癌瘤)；骨肉瘤(例如骨癌)；卵巢癌(例如，囊腺癌、卵巢胚胎癌、卵巢腺癌)；乳头状腺癌；胰腺癌(例如，胰腺腺癌、导管内乳头状粘液性瘤(IPMN)、胰岛细胞瘤)；甲状旁腺癌；乳头状腺癌；阴茎癌(例如阴茎和阴囊佩吉特氏病)；咽癌；松果体瘤；垂体癌；胸膜肺母细胞瘤；原始神经外胚层肿瘤(PNT)；浆细胞瘤；副肿瘤综合征；上皮内肿瘤；前列腺癌(例如，前列腺腺癌)；直肠癌；横纹肌肉瘤；视网膜母细胞瘤；唾液腺癌；皮肤癌(例如鳞状细胞癌(SCC)、角化棘皮瘤(KA)、黑素瘤、基底细胞癌(BCC))；小肠癌(例如阑尾癌)；软组织肉瘤(例如，恶性纤维组织细胞瘤(MFH)、脂肪肉瘤、恶性外周神经鞘瘤(MPNST)、软骨肉瘤、纤维肉瘤、粘液肉瘤)；皮脂腺癌；胃癌；小肠癌；汗腺癌；滑膜瘤；睾丸癌(例如精原细胞瘤、睾丸胚胎癌)；胸腺癌；甲状腺癌(例如，甲状腺乳头状癌、甲状腺乳头状癌(PTC)、甲状腺髓样癌)；尿道癌；子宫癌；阴道癌；外阴癌(例如外阴佩吉特氏病)或其任何组合。
在某些实施方案中，癌症是乳腺癌。在某些实施方案中，癌症是皮肤癌。在某些实施方案中，癌症是黑素瘤。在某些实施方案中，癌症是肺癌。在某些实施方案中，癌症是肾癌。在某些实施方案中，癌症是肝癌。在某些实施方案中，癌症是胰腺癌。在某些实施方案中，癌症是结肠直肠癌。在某些实施方案中，癌症是膀胱癌。在某些实施方案中，癌症是淋巴瘤。在某些实施方案中，癌症是前列腺癌。在某些实施方案中，癌症是甲状腺癌。在某些实施方案中，癌症是脑癌。在某些实施方案中，癌症是胃癌。在某些实施方案中，癌症是食道癌。
在一些实施方案中，本文提供的技术可用于治疗腺癌、肾上腺癌、肛门癌、血管肉瘤、阑尾癌、胆管癌、膀胱癌、骨癌、脑癌、乳腺癌、支气管癌、类癌瘤、心脏肿瘤、宫颈癌、绒毛膜癌、脊索瘤、结肠直肠癌、结缔组织癌、颅咽管瘤、导管原位癌、内皮肉瘤、子宫内膜癌、室管膜瘤、上皮癌、食道癌、尤文氏肉瘤、眼癌、家族性嗜酸性粒细胞增多、胆囊癌、胃癌、胃肠类癌瘤、胃肠道间质瘤(GIST)、生殖细胞癌、头颈癌、成血管细胞瘤、组织细胞增多症、霍奇金淋巴瘤、下咽癌、炎性肌纤维母细胞瘤、上皮内瘤、免疫细胞淀粉样变性、卡波西肉瘤、肾癌、肝癌、肺癌、平滑肌肉瘤(LMS)、黑素瘤、中线道癌、多发性内分泌腺瘤综合征、肌肉癌、间皮瘤、骨髓增生性疾病(MPD)、鼻咽癌、神经母细胞瘤、神经纤维瘤、神经内分泌癌、非霍奇金淋巴瘤、骨肉瘤、卵巢癌、胰腺癌、副肿瘤综合征、甲状旁腺癌、乳头状腺癌、阴茎癌、咽癌、嗜铬细胞瘤、松果体瘤、垂体癌、胸膜肺母细胞瘤、原始神经外胚层肿瘤(PNT)、浆细胞瘤、前列腺癌、直肠癌、视网膜母细胞瘤、横纹肌肉瘤、唾液腺癌、皮脂腺癌、皮肤癌、小肠癌(smallbowel cancer)、小肠癌(small intestine cancer)、软组织肉瘤、胃癌、汗腺癌、滑膜瘤、睾丸癌、胸腺癌、甲状腺癌、尿道癌、子宫癌、阴道癌、血管癌、外阴癌或其组合。
在一些实施方案中，本文提供的方法可包括向肿瘤切除受试者中的靶部位(例如，如本文所述)施用所提供的组合物，并且任选地，在施用后，例如在施用后每3个月或更长时间，包括例如每6个月、每9个月、每年或更长时间，监测受试者中肿瘤切除部位或远处部位的肿瘤再生长或肿瘤长出的风险或发生率。当基于监测报告确定受试者具有肿瘤复发的风险或发生率时，在一些实施方案中，可以向受试者施用第二组合物(例如，如本文所述)和/或不同的治疗方案(例如，化疗)。
在一些实施方案中，本文提供的技术可用于治疗患有转移性癌症的受试者。例如，在一些实施方案中，本文提供的方法可包括向患有一种或多种转移的受试者中的靶部位(例如，如本文所述)施用，所述受试者已经历肿瘤切除(例如，原发性肿瘤的手术切除)并且任选地，在施用后，例如在施用后每3个月或更长时间，包括例如每6个月、每9个月、每年或更长时间，监测受试者中的至少一个转移部位。基于监测报告的结果，在一些实施方案中，可以向受试者施用第二组合物(例如，如本文所述)和/或不同的治疗方案(例如，化疗)。
在某些实施方案中，本文所述的方法不包括在肿瘤切除之前施用所提供的组合物。
还应理解，本文所述的组合物可与一种或多种另外的药剂组合施用。例如，组合物可以与减少和/或改变它们的代谢、抑制它们的排泄和/或改变它们在体内的分布的另外的药剂组合施用。还应当理解的是，所使用的另外的疗法可以对相同的障碍实现期望的效果，和/或其可以实现不同的效果。在某些实施方案中，另外的药剂不是过继转移细胞。在某些实施方案中，另外的药剂不是T细胞。在某些实施方案中，在施用本文所述的组合物后数天或数周施用另外的药剂。
在某些实施方案中，所治疗的受试者是哺乳动物。在某些实施方案中，受试者是人。在某些实施方案中，受试者是已接受新辅助(术前)疗法的人类患者。在某些实施方案中，受试者是未接受新辅助疗法的人类患者。在某些实施方案中，受试者是已接受新辅助(术前)化疗的人类患者。在某些实施方案中，受试者是已接受新辅助放射疗法的人类患者。在某些实施方案中，受试者是已接受新辅助化疗和放射疗法的人类患者。在某些实施方案中，受试者是已接受新辅助分子靶向疗法的人类患者。在某些实施方案中，受试者是已接受新辅助免疫疗法，包括免疫检查点阻断(例如，抗CTLA-4、抗PD-1和/或抗PD-L1)的人类患者。在某些实施方案中，受试者是未接受新辅助免疫疗法，包括免疫检查点阻断(例如，抗CTLA-4、抗PD-1和/或抗PD-L1)的人类患者。在某些实施方案中，受试者是其肿瘤对新辅助疗法没有客观反应(如通过实体瘤反应评估标准(RECIST)或免疫相关反应标准(irRC)所定义)(例如，疾病稳定、疾病进展)的人类患者。在某些实施方案中，受试者是其靶病变对新辅助疗法有客观反应(例如部分反应、完全反应)的人类患者。非靶病变可能表现出不完全反应、疾病稳定或疾病进展。在某些实施方案中，受试者是有资格在辅助(术后)环境中接受免疫疗法的人类患者。在某些实施方案中，受试者是驯养动物，诸如狗、猫、牛、猪、马、绵羊或山羊。在某些实施方案中，受试者是伴侣动物，诸如狗或猫。在某些实施方案中，受试者是家畜动物，诸如牛、猪、马、绵羊或山羊。在某些实施方案中，受试者是动物园动物。在另一个实施方案中，受试者是研究动物，诸如啮齿动物、猪、狗或非人灵长类动物。在某些实施方案中，受试者是非人转基因动物，诸如转基因小鼠或转基因猪。
IV.药盒
本公开还提供了可用于实施本文提供的技术的药盒。在一些实施方案中，药盒包含本文所述的组合物或药物组合物和容器(例如小瓶、安瓿、瓶、注射器和/或分配器包或其他合适的容器)。在一些实施方案中，本文所述的组合物或药物组合物的一种或多种组分在一个或多个容器中单独提供。例如，在一些实施方案中，先天免疫的生物材料(例如，聚合物生物材料)激动剂(例如，本文所述的那些，例如，但不限于壳聚糖或其变体)的单个前体组分可以在单独的容器中提供。在一些实施方案中，先天免疫的生物材料(例如，聚合物生物材料)激动剂(例如，本文所述的那些，例如，但不限于壳聚糖或其变体)的单独前体组分可以作为冻干粉末提供。在一些实施方案中，先天免疫的生物材料(例如，聚合物生物材料)激动剂(例如，本文所述的那些，例如但不限于壳聚糖或其变体)的单独前体组分可以作为干燥颗粒提供。在一些实施方案中，先天免疫的聚合物生物材料激动剂(例如，本文所述的那些，例如但不限于壳聚糖或其变体)的单独前体组分可以作为液体提供。在一些实施方案中，预先形成的先天免疫的生物材料(例如，聚合物生物材料)激动剂(以聚合物网络生物材料的形式)可以在容器中提供。在一些实施方案中，此种预先形成的先天免疫的生物材料(例如，聚合物生物材料)激动剂可以干燥状态提供。在一些实施方案中，预先形成的先天免疫的生物材料(例如，聚合物生物材料)激动剂(以粘性聚合物溶液的形式)可以在容器中提供。
在一些实施方案中，所提供的药盒可任选地包括包含用于稀释或悬浮本文所述的组合物或药物组合物的药物赋形剂的容器。在一些实施方案中，所提供的药盒可包括包含水溶液的容器。在一些实施方案中，所提供的药盒可包括包含缓冲溶液的容器。
在一些实施方案中，所提供的药盒可任选地包括包含可用于形成交联聚合物网络的交联剂的容器。
在某些实施方案中，所提供的药盒可不包含免疫调节有效负载。例如，在一些实施方案中，所提供的药盒可不包含先天免疫反应的激活剂。在一些实施方案中，所提供的药盒可不包含适应性免疫反应的激活剂。在一些实施方案中，所提供的药盒可不包含促炎反应的抑制剂。在一些实施方案中，所提供的药盒可不包含免疫调节细胞因子。
在某些实施方案中，本文所述的药盒还包括用于实施本文所述的方法的说明书。本文所述的药盒还可包括监管机构诸如美国食品和药物管理局(FDA)所要求的信息。在某些实施方案中，包含在本文提供的药盒中的信息是例如用于治疗癌症的处方信息。说明书可以各种形式存在于药盒中，所述形式中的一种或多种可存在于所述药盒中。这些说明可存在的一种形式如在合适的介质或基底(例如，在其上打印信息的一张纸或多张纸)上打印的信息、在药盒的包装中、在包装插页中等。又一手段可以是计算机可读介质，例如在其上记录有说明信息的磁盘、CD、USB驱动器等。可存在的又一手段是网站地址，其可通过互联网用以存取说明信息。任何便利的手段均可存在于药盒中。
在一些实施方案中，本文所述的药盒可包括作为单独组合物的本文所述的一种或多种另外的治疗剂。
本发明的其他特征将在以下示例性实施方案的描述过程中变得明显，这些示例性实施方案是为了说明本发明而给出而不旨在限制本发明。
例证
实施例1.示例性组合物的鉴定和/或表征-存活评估
本实施例描述了先天免疫的生物材料(例如，聚合物生物材料)激动剂的针对抗肿瘤功效的鉴定和/或表征，特别是通过评估其延长一个或多个已经历肿瘤切除的受试者的存活的能力。因此，本实施例还描述了可用于癌症治疗的先天免疫的生物材料(例如，聚合物生物材料)激动剂(例如，如本文所述)的鉴定和/或表征。
在一些实施方案中，与当不施用先天免疫的生物材料(例如，聚合物生物材料)激动剂时观察到的相比，在肿瘤切除后向靶部位施用此种先天免疫的生物材料(例如，聚合物生物材料)激动剂增加了已经历肿瘤切除的受试者的存活。
在一些实施方案中，癌症动物模型可用于鉴定和/或表征先天免疫的生物材料(例如，聚合物生物材料)激动剂。例如，对荷瘤小鼠进行肿瘤切除，并将本文所述的组合物，例如包含先天免疫的生物材料(例如，聚合物生物材料)激动剂而不存在免疫调节有效负载的组合物施用于肿瘤切除部位。然后监测所治疗受试者的存活。在一些实施方案中，当先天免疫的生物材料(例如，聚合物生物材料)激动剂的特征在于当如本实施例中所述在体内测试时，与对照参考(例如，其中未施用先天免疫的生物材料(例如，聚合物生物材料)激动剂的对照)中观察到的相比，其延长所治疗受试者的存活，例如至少1周、至少2周、至少3周、至少4周、至少2个月、至少3个月、至少4个月、至少5个月、至少6个月或更长时间，则先天免疫的生物材料(例如，聚合物生物材料)激动剂被认为和/或确定为根据本公开是有用的。例如，在一些实施方案中，对照参考可以在不存在先天免疫免疫调节组分的情况下被施用非免疫调节聚合物生物材料。在一些实施方案中，对照参考可以不被施用聚合物生物材料。
在一些实施方案中，用100,000个乳腺癌细胞(例如4T1-Luc2细胞)原位接种雌性BALB/cJ小鼠。十天后，手术切除肿瘤，并且将(i)本文所述的组合物，例如包含先天免疫的生物材料(例如，聚合物生物材料)激动剂而不存在免疫调节有效负载(例如，使得组合物的免疫调节组分基本上由或由生物材料组成)，或(ii)阴性对照组合物(例如，不含此种先天免疫的生物材料激动剂的缓冲溶液或非免疫调节聚合物生物材料)施用到切除腔中。可以监测动物存活以检查抗肿瘤免疫的诱导。为了证实所施用的先天免疫的生物材料(例如，聚合物生物材料)激动剂在机制上通过诱导先天免疫信号传导而起作用，可在先天免疫信号传导中和(例如，通过施用抗IFNAR1)后监测动物存活。为了评估所施用的先天免疫的生物材料(例如，聚合物生物材料)激动剂是否诱导适应性抗肿瘤免疫反应，可在特定白细胞亚群(例如，NK细胞、CD4+T细胞或CD8+T细胞)耗尽后监测动物存活。
特别地，本实施例证明将包含(i)壳聚糖或其变体(例如，羧甲基壳聚糖)作为先天免疫调节组分和(ii)当暴露于肿瘤切除受试者的体温时(例如，当施用至有需要的受试者时)促进交联水凝胶形成的热响应性聚合物的先天免疫的生物材料激动剂施用于肿瘤切除受试者中的靶部位，与当未施用此种先天免疫的生物材料激动剂时观察到的相比，改善了肿瘤切除受试者的存活。
示例性液体制剂：在一些实施方案中，如下制备先天免疫的生物材料激动剂的液体制剂。例如，在一种情况下，在适于注射施用的缓冲系统中制备2.5重量百分比(wt％)的羧甲基壳聚糖(CMCH)(例如，从Heppe Medical Chitosan获得，部件号43002，批号312-210519-02)和适当浓度的热响应性非免疫调节聚合物。在另一种情况下，在适于注射施用的缓冲系统中制备5wt％CMCH(例如，从Heppe Medical Chitosan获得，部件号43002，批号312-210519-02)和适当浓度的热响应性非免疫调节聚合物。例如，在一些实施方案中，此种缓冲系统具有生理pH。将液体制剂装入1mL注射器中用于施用。
示例性小鼠肿瘤模型：在一些实施方案中，使用6-8周龄雌性BALB/c小鼠(Jackson实验室，#000651)进行动物实验。对于动物存活研究，将105个4T1-Luc2细胞原位接种到小鼠的第四个乳腺脂肪垫中。用卡尺测量肿瘤大小。在大小匹配后，将小鼠随机分配到治疗组，并在肿瘤接种后第10天进行手术。对于原发性肿瘤切除，用2％异氟烷麻醉小鼠，切除肿瘤，并且在手术时将在体温下胶凝的先天免疫的生物材料激动剂的液体制剂(例如，如本文所述)施用于肿瘤切除部位。
图1示出了接受先天免疫的生物材料激动剂的液体制剂(例如，不同浓度的羧甲基壳聚糖和热响应性聚合物的组合的液体制剂)的动物与接受单独的热响应性聚合物的液体制剂的动物相比的存活数据。在肿瘤切除部位原位形成羧甲基壳聚糖(CMCH)与热响应性聚合物的交联水凝胶组合的动物组与未接受此种先天免疫的生物材料激动剂的对照组相比，存活更长时间，例如至少50％或更多。此外，接受此种羧甲基壳聚糖与热响应性聚合物的组合的动物组表现出比没有此种先天免疫的生物材料激动剂的对照组高得多的存活率。
实施例2.示例性组合物的鉴定和/或表征-停留时间/降解评估
本实施例描述了先天免疫的生物材料(例如，聚合物生物材料)激动剂的针对抗肿瘤功效的鉴定和/或表征，特别是通过评估降解动力学和/或在其所施用的靶部位处的停留时间。因此，本实施例还描述了可用于癌症治疗的先天免疫的生物材料(例如，聚合物生物材料)激动剂(例如，如本文所述)的鉴定和/或表征。
在一些实施方案中，先天免疫的生物材料(例如，聚合物生物材料)激动剂的特征在于，当通过将生物材料(例如，聚合物生物材料)施用于测试受试者中的靶部位进行体内测试时，所述生物材料(例如，聚合物生物材料)在施用后在体内在靶部位处保留一段时间，例如，至少1小时、至少2小时、至少3小时、至少12小时、至少24小时、至少48小时、至少72小时、至少96小时、至少7天或更长时间。
在一些实施方案中，对荷瘤小鼠进行肿瘤切除，并且将本文所述的组合物(例如，包含荧光团标记的先天免疫的生物材料(例如，聚合物生物材料)激动剂(或候选物)而不存在免疫调节有效负载(例如，使得组合物的免疫调节组分基本上由或由生物材料组成)施用于肿瘤切除部位。监测停留时间和/或降解动力学，例如通过检测靶部位(例如肿瘤切除部位)处的荧光团标记的生物材料(例如聚合物生物材料)(和/或其降解产物)的荧光信号。在一些实施方案中，当先天免疫的生物材料(例如，聚合物生物材料)激动剂的特征在于当如本实施例所述在体内测试时，至少10％或更多(包括例如，至少20％、至少30％、至少40％、至少50％、至少60％、至少70％、至少80％、至少90％或更多)的先天免疫的生物材料(例如，聚合物生物材料)激动剂在施用后在体内在靶部位保留至少1小时、至少2小时、至少3小时、至少12小时、至少24小时、至少48小时、至少72小时、至少96小时、至少7天或更长时间，则先天免疫的生物材料(例如，聚合物生物材料)激动剂被认为和/或确定为根据本公开是有用的。
在一些实施方案中，用100,000个乳腺癌细胞(例如4T1-Luc2细胞)原位接种雌性BALB/cJ小鼠。十天后，手术切除肿瘤，并且将本文所述的各种组合物(例如，各自包含荧光团标记的先天免疫的生物材料(例如，聚合物生物材料)激动剂(或候选物)而不存在免疫调节有效负载)施用到切除腔中。可以例如通过IVIS成像来检测和/或监测荧光团的停留时间，以确定可用于赋予抗肿瘤功效的先天免疫的聚合物生物材料激动剂的优选停留时间概况。
实施例3.示例性组合物的鉴定和/或表征-对激活白细胞的体外检测
本实施例描述了先天免疫的生物材料(例如，聚合物生物材料)激动剂的针对抗肿瘤功效的鉴定和/或表征，特别是通过评估其体外激活白细胞的能力。因此，本实施例还描述了可用于癌症治疗的先天免疫的生物材料(例如，聚合物生物材料)激动剂(例如，如本文所述)的鉴定和/或表征。
在一些实施方案中，先天免疫的生物材料(例如，聚合物生物材料)激动剂的特征在于，当通过使树突细胞和/或NK细胞与此种生物材料(例如，聚合物生物材料)接触在体外测试时，(i)树突细胞被激活；(ii)NK细胞被激活；和/或(iii)一种或多种促炎细胞因子的水平增加。
为了确定本文所述的生物材料(例如，聚合物生物材料)或组合物(例如，包含生物材料(例如，聚合物生物材料)而不存在免疫调节有效负载(例如，使得组合物的免疫调节组分基本上由或由生物材料组成))是否刺激先天免疫，在一些实施方案中，在将此类生物材料(例如，聚合物生物材料)与感兴趣的细胞孵育后，评估感兴趣的细胞(例如，与先天免疫系统相关的细胞)上的激活标记物。在一些实施方案中，当先天免疫的生物材料(例如，聚合物生物材料)激动剂的特征在于，当通过使生物材料(例如，聚合物生物材料)与树突细胞接触在体外测试时，与当树突细胞不与此种生物材料(例如聚合物生物材料)接触时观察到的相比，此种生物材料(例如，聚合物生物材料)在16-24小时后增加树突细胞表面上的抗原呈递机制(例如，MHC I和/或MHC II)和/或共刺激分子(例如，CD40、CD80和/或CD86)的水平，例如增加至少10％或更多(包括，例如，至少20％、至少30％、至少40％、至少50％、至少60％、至少70％、至少80％、至少90％或更多)，则先天免疫的生物材料(例如，聚合物生物材料)激动剂被认为和/或确定为根据本公开是有用的。另外或替代地，当先天免疫的生物材料(例如，聚合物生物材料)激动剂的特征在于，当如本实施例中所述进行体外测试时，与当树突细胞不与此种生物材料(例如聚合物生物材料)接触时观察到的相比，此种生物材料(例如，聚合物生物材料)增加表达MHC I和/或MHC II的树突细胞和/或共刺激分子的数目，例如增加至少10％或更多(包括，例如，至少20％、至少30％、至少40％、至少50％、至少60％、至少70％、至少80％、至少90％或更多)，则先天免疫的生物材料(例如，聚合物生物材料)激动剂被认为和/或确定为根据本公开是有用的。
在一些实施方案中，当先天免疫的生物材料(例如，聚合物生物材料)激动剂的特征在于，当通过使生物材料(例如，聚合物生物材料)与NK细胞接触在体外测试时，与当NK细胞不与此种生物材料(例如聚合物生物材料)接触时观察到的相比，此种生物材料(例如，聚合物生物材料)在16-24小时后增加CD69和/或KLRG1的水平，例如增加至少10％或更多(包括，例如，至少20％、至少30％、至少40％、至少50％、至少60％、至少70％、至少80％、至少90％或更多)，则先天免疫的生物材料(例如，聚合物生物材料)激动剂被认为和/或确定为根据本公开是有用的。另外或替代地，当先天免疫的生物材料(例如，聚合物生物材料)激动剂的特征在于，当如本实施例中所述进行体外测试时，与当NK细胞不与此种生物材料(例如聚合物生物材料)接触时观察到的相比，此种生物材料(例如，聚合物生物材料)在16-24小时后增加表达CD69和/或KLRG1的NK细胞的数目，例如增加至少10％或更多(包括，例如，至少20％、至少30％、至少40％、至少50％、至少60％、至少70％、至少80％、至少90％或更多)，则先天免疫的生物材料(例如，聚合物生物材料)激动剂被认为和/或确定为根据本公开是有用的。
在一些实施方案中，当先天免疫的生物材料(例如，聚合物生物材料)激动剂的特征在于，当通过使生物材料(例如，聚合物生物材料)与树突细胞和/或NK细胞接触在体外测试时，与当树突细胞和/或NK细胞不与此种生物材料(例如聚合物生物材料)接触时观察到的相比，此种生物材料(例如，聚合物生物材料)在16-24小时后增加一种或多种促炎细胞因子(例如，CXCL10、IFN-α、IFN-β、IL-1β、IL-6、IL-18、和/或TNF-α)的水平和/或活性和/或产生，例如增加至少10％或更多(包括，例如，至少20％、至少30％、至少40％、至少50％、至少60％、至少70％、至少80％、至少90％或更多)，则先天免疫的生物材料(例如，聚合物生物材料)激动剂被认为和/或确定为根据本公开是有用的。
例如，在一些实施方案中，鼠或人来源的原代树突细胞(例如，鼠骨髓衍生的树突细胞或人单核细胞衍生的树突细胞)可以在感兴趣的生物材料(例如，聚合物生物材料)的存在下孵育，然后可以在16-24小时后例如通过流式细胞术分析细胞，以评估树突细胞的激活，例如，通过检测树突细胞表面上的抗原呈递机制(例如，MHC I和/或MHC II)和共刺激分子(例如，CD40、CD80和/或CD86)的水平和/或活性。另外或替代地，NK细胞可以在感兴趣的生物材料(例如，聚合物生物材料)的存在下孵育，并且然后可以在16-24小时后例如通过流式细胞术分析细胞的相关激活标记物(包括，例如，CD69和/或KLRG1)。另外地和/或替代地，还可以评估至少一种或多种(例如1、2、3、4或更多种)促炎细胞因子(包括例如CXCL10、IFN-α、IFN-β、IL-1β、IL-6、IL-18、和/或TNF-α)的水平和/或活性。
用于评估抗原呈递机制、共刺激分子和/或促炎细胞因子的激活的各种方法是本领域已知的。本领域技术人员将理解，在一些情况下，抗原呈递机制、共刺激分子和/或促炎细胞因子的水平可基于靶免疫细胞中的基因表达(例如mRNA水平)来评估，例如使用定量聚合酶链式反应。本领域技术人员还将理解，免疫测定(例如ELISA、免疫染色和/或流式细胞术)也可用于评估此种激活。例如，可以例如通过免疫染色和/或流式细胞术来评估树突细胞表面上抗原呈递机制和/或共刺激分子的蛋白质表达。可以例如使用ELISA和/或多路复用激光珠技术测量条件培养基中促炎可溶性因子诸如促炎细胞因子的浓度。
实施例4.示例性组合物的鉴定和/或表征-对体内激活的白细胞的检测
本实施例描述了先天免疫的生物材料(例如，聚合物生物材料)激动剂的针对抗肿瘤功效的鉴定和/或表征，特别是通过评估其体内激活白细胞的能力。因此，本实施例还描述了可用于癌症治疗的先天免疫的生物材料(例如，聚合物生物材料)激动剂(例如，如本文所述)的鉴定和/或表征。
在一些实施方案中，先天免疫的生物材料(例如，聚合物生物材料)激动剂的特征在于，当通过将生物材料(例如，聚合物生物材料)施用于测试受试者的肿瘤切除部位进行体内测试时，(i)树突细胞被激活；(ii)NK细胞被激活；(iii)例如外周血中一种或多种促炎细胞因子的水平增加；和/或(iv)诱导适应性抗肿瘤反应。
为了确定本文所述的生物材料(例如，聚合物生物材料)或组合物(例如，包含生物材料(例如，聚合物生物材料)而不存在免疫调节有效负载(例如，使得组合物的免疫调节组分基本上由或由生物材料组成))是否刺激先天免疫，在一些实施方案中，在将此种生物材料(例如，聚合物生物材料)施用于靶肿瘤切除部位后3或14天，评估来自脾的感兴趣细胞(例如，与先天和/或适应性免疫系统相关的细胞)上的激活标记物。在一些实施方案中，当先天免疫的生物材料(例如，聚合物生物材料)激动剂的特征在于，当通过在肿瘤切除后向测试受试者的靶部位施用生物材料(例如，聚合物生物材料)进行体内测试时，与未施用此种生物材料(例如，聚合物生物材料)时观察到的相比，此种生物材料(例如，聚合物生物材料)使从手术后(例如，手术后3天)测试受试者的脾脏回收的树突细胞表面上的抗原呈递机制(例如，MHC I和/或MHC II)和/或共刺激分子(例如，CD40、CD80和/或CD86)的水平增加，例如增加至少10％或更多(包括，例如，至少20％、至少30％、至少40％、至少50％、至少60％、至少70％、至少80％、至少90％或更多)，则先天免疫的生物材料(例如，聚合物生物材料)激动剂被认为和/或确定为根据本公开是有用的。另外或替代地，当先天免疫的生物材料(例如，聚合物生物材料)激动剂的特征在于，当如本实施例中所述进行体内测试时，与未施用此种生物材料(例如，聚合物生物材料)时观察到的相比，此种生物材料(例如，聚合物生物材料)使从手术后(例如，手术后3天)测试受试者的脾脏回收的表达抗原呈递机制(例如MHC I和/或MHC II)和/或共刺激分子的树突细胞的数目增加，例如增加至少10％或更多(包括，例如，至少20％、至少30％、至少40％、至少50％、至少60％、至少70％、至少80％、至少90％或更多)，则先天免疫的生物材料(例如，聚合物生物材料)激动剂被认为和/或确定为根据本公开是有用的。另外或替代地，当先天免疫的生物材料(例如，聚合物生物材料)激动剂的特征在于，当如本实施例中所述进行体内测试时，与未施用此种生物材料例如，聚合物生物材料)时观察到的相比，此种生物材料(例如，聚合物生物材料)使从手术后(例如，手术后3天)测试受试者的脾脏回收的表达CD8和/或CD103的树突细胞的数目和/或表达B220和/或PDCA1的浆细胞样树突细胞的数目增加，例如增加至少10％或更多(包括，例如，至少20％、至少30％、至少40％、至少50％、至少60％、至少70％、至少80％、至少90％或更多)时，则先天免疫的生物材料(例如，聚合物生物材料)激动剂被认为和/或确定为根据本公开是有用的。
在一些实施方案中，当先天免疫的生物材料(例如，聚合物生物材料)激动剂的特征在于，当通过在肿瘤切除后向测试受试者的靶部位施用生物材料(例如，聚合物生物材料)进行体内测试时，与未施用此种生物材料(例如，聚合物生物材料)时观察到的相比，此种生物材料(例如，聚合物生物材料)使从手术后(例如，手术后3天)测试受试者的脾脏回收的NK细胞中的一种或多种激活标记物(例如CD69和/或KLRG1)和/或一种或多种效应标记物(例如CD11b和/或CD27)的水平增加，例如增加至少10％或更多(包括，例如，至少20％、至少30％、至少40％、至少50％、至少60％、至少70％、至少80％、至少90％或更多)，则先天免疫的生物材料(例如，聚合物生物材料)激动剂被认为和/或确定为根据本公开是有用的。另外或替代地，当先天免疫的生物材料(例如，聚合物生物材料)激动剂的特征在于，当如本实施例中所述进行体内测试时，与未施用此种生物材料(例如，聚合物生物材料)时观察到的相比，此种生物材料(例如，聚合物生物材料)使从手术后(例如，手术后3天)测试受试者的脾脏回收的表达一种或多种激活标记物(例如，CD69和/或KLRG1)和/或一种或多种效应标记物(例如，CD11b和/或CD27)的NK细胞的数目增加，例如增加至少10％或更多(包括，例如，至少20％、至少30％、至少40％、至少50％、至少60％、至少70％、至少80％、至少90％或更多)，则先天免疫的生物材料(例如，聚合物生物材料)激动剂被认为和/或确定为根据本公开是有用的。
在一些实施方案中，当先天免疫的生物材料(例如，聚合物生物材料)激动剂的特征在于，当通过在肿瘤切除后向测试受试者的靶部位施用生物材料(例如，聚合物生物材料)进行体内测试时，与未施用此种生物材料(例如，聚合物生物材料)时观察到的相比，此种生物材料(例如，聚合物生物材料)使例如外周血中的一种或多种促炎细胞因子(例如，CXCL10、IFN-α、IFN-β、IL-1β、IL-6、IL-18和/或TNF-α)的水平增加，例如增加至少10％或更多(包括，例如，至少20％、至少30％、至少40％、至少50％、至少60％、至少70％、至少80％、至少90％或更多)，则先天免疫的生物材料(例如，聚合物生物材料)激动剂被认为和/或确定为根据本公开是有用的。
例如，在一些实施方案中，为了在手术肿瘤切除的情况下局部施用先天免疫的生物材料(例如，聚合物生物材料)激动剂后剖析免疫细胞亚群中的细胞和/或分子变化，可评估脾中白细胞的组成、激活状态和/或功能。在一些实施方案中，脾可以在手术肿瘤切除后从小鼠回收，例如用于流式细胞术分析。在早期时间点(例如手术后3天)，可以表征小鼠免疫系统的先天组，包括例如NK细胞和树突细胞。在一些实施方案中，可以定量来自脾的激活(例如，CD69+和/或KLRG1+)和/或高效应(例如，CD11b+和/或CD27+)NK细胞的数目。另外或替代地，在一些实施方案中，可以测定来自脾的树突细胞(例如CD8+和/或CD103+)以及来自脾的浆细胞样树突细胞(例如B220+和/或PDCA1+)的数目。另外或替代地，在一些实施方案中，可以评估来自脾的树突细胞表面上的抗原呈递机制(例如MHC I和/或MHC II)和/或共刺激分子(例如CD40、CD80和/或CD86)的水平和/或活性用于激活。
在一些实施方案中，与先天和/或适应性免疫细胞的激活相关的一种或多种可溶性因子可以例如通过测量例如外周血中一种或多种相关细胞因子的浓度来评估。例如，在一些实施方案中，在向肿瘤切除部位施用先天免疫的生物材料(例如聚合物生物材料)激动剂后的多个时间点，例如在1.5小时、6小时、3天或14天后，可以收集血浆并分析一种或多种感兴趣的促炎细胞因子(例如CXCL10、IFN-α、IFN-β、IL-1β、IL-6、IL-18和/或TNF-α)。本领域技术人员将理解，多种方法可用于检测和/或分析促炎细胞因子，其中一种可以是例如多路复用激光珠技术。
用于评估抗原呈递机制、共刺激分子和/或促炎细胞因子的激活的各种方法是本领域已知的。本领域技术人员将理解，在一些情况下，抗原呈递机制、共刺激分子和/或促炎细胞因子的水平可基于靶免疫细胞中的基因表达(例如mRNA水平)来评估，例如使用定量聚合酶链式反应。本领域技术人员还将理解，免疫测定(例如ELISA、免疫染色和/或流式细胞术)也可用于评估此种激活。例如，可以例如通过免疫染色和/或流式细胞术来评估树突细胞表面上抗原呈递机制和/或共刺激分子的蛋白质表达。可以例如使用ELISA和/或多路复用激光珠技术测量来自受试者的样品(例如血液样品)中的促炎可溶性因子诸如促炎细胞因子的浓度。
实施例5.示例性组合物的鉴定和/或表征-体内记忆反应评估
本实施例描述了先天免疫的生物材料(例如，聚合物生物材料)激动剂的针对抗肿瘤功效的鉴定和/或表征，特别是通过评估其在体内诱导对癌细胞的记忆反应的能力。因此，本实施例还描述了可用于癌症治疗的先天免疫的生物材料(例如，聚合物生物材料)激动剂(例如，如本文所述)的鉴定和/或表征。
在一些实施方案中，先天免疫的生物材料(例如，聚合物生物材料)激动剂的特征在于，当通过将生物材料(例如，聚合物生物材料)施用于测试受试者的肿瘤切除部位进行体内测试时，观察到对癌细胞的记忆反应的诱导。例如，在一些实施方案中，当先天免疫的生物材料(例如，聚合物生物材料)激动剂的特征在于，当通过在肿瘤切除后向测试受试者的靶部位施用生物材料(例如，聚合物生物材料)进行体内测试时，此种生物材料(例如，聚合物生物材料)诱导对引入手术后(和施用生物材料后)存活至少90天的测试受试者的新鲜接种的癌细胞的记忆反应时，则先天免疫的生物材料(例如，聚合物生物材料)激动剂被认为和/或确定为根据本公开是有用的。对癌细胞的记忆反应的诱导可以例如通过与在引入癌细胞之前未施用此种生物材料(例如，聚合物生物材料)时观察到的相比，将所治疗的受试者的存活延长至少1周或更多(包括例如，至少2周、至少3周、至少4周、至少2个月、至少3个月、至少4个月、至少5个月、至少6个月或更长时间)来证明。替代地或另外，对癌细胞的记忆反应的诱导可以例如通过与在引入癌细胞之前未施用此种生物材料(例如，聚合物生物材料)时观察到的相比，在所治疗的受试者中观察到的肿瘤体积大小或肿瘤生长减少至少10％或更多(包括例如至少20％、至少30％、至少40％、至少50％、至少60％、至少70％、至少80％、至少90％或更多)来证明。
例如，在一些实施方案中，记忆反应的诱导可以通过用乳腺癌细胞(例如，4T1-Luc2细胞)再攻击切除肿瘤后已施用先天免疫的生物材料(例如，聚合物生物材料)激动剂的存活小鼠来评估。可以将此类乳腺癌细胞接种到先前未接种过癌细胞的存活小鼠的乳腺脂肪垫中，并且可以检测此类接种的乳腺癌细胞的排斥以评估记忆反应的程度，例如通过测量肿瘤体积和/或动物存活。作为对照，可将乳腺癌细胞(例如4T1-Luc2细胞)接种到幼稚小鼠的乳腺脂肪垫中。
在一些情况下，评估在施用先天免疫的生物材料(例如，聚合物生物材料)激动剂后记忆反应的诱导是否与肿瘤抗原特异性CD8+T细胞的全身性扩增相关可能是有用的。例如，可以从所治疗的小鼠和对照组中分离脾细胞(如本实施例中所述)，并用由接种的癌细胞表达的免疫优势肽体外再刺激例如6小时。例如，鼠白血病病毒包膜糖蛋白gp70(氨基酸423至431)的免疫优势肽SPSYVYHQF由4T1细胞表达。脾细胞内产生一种或多种促炎细胞因子(例如，IFN-γ、IL-2和/或TNF-α)和/或溶细胞分子(例如，粒酶B)的T细胞的比例可在再刺激后加以定量。在一些实施方案中，当先天免疫的生物材料(例如，聚合物生物材料)激动剂的特征在于，当体内测试时(如本实施例中所述)，与在引入癌细胞之前未施用此种生物材料(例如，聚合物生物材料)时观察到的相比，此种生物材料(例如，聚合物生物材料)使在用由癌细胞表达的免疫优势肽再刺激之后从所治疗的受试者回收的脾细胞内的T细胞(产生一种或多种促炎细胞因子，诸如例如，IFN-γ、IL-2和/或TNF-α)和/或溶细胞分子(例如，粒酶B)的比例增加，例如增加至少10％或更多(包括，例如，至少20％、至少30％、至少40％、至少50％、至少60％、至少70％、至少80％、至少90％或更多)，则先天免疫的生物材料(例如，聚合物生物材料)激动剂被认为和/或确定为根据本公开是有用的。
用于评估产生一种或多种促炎细胞因子(例如，如本文所述)和/或溶细胞分子(例如，如本文所述)的T细胞的比例的各种方法是本领域已知的。本领域技术人员将理解，在一些情况下，可以例如通过流式细胞术检测和/或定量此部分T细胞。例如，可以进行细胞内细胞因子染色，然后进行流式细胞术，以鉴定产生一种或多种促炎细胞因子和/或溶细胞分子的免疫细胞(例如T细胞)。此类标记物的实例包括但不限于CD3、CD4和/或CD8以定义特异性T细胞亚群；用于激活的T细胞的CD44、CD69和/或GITR；作为促炎细胞因子的IFN-γ、IL-2和/或TNF-α；和作为溶细胞分子的粒酶B。
实施例6.示例性组合物的鉴定和/或表征-体内适应性抗肿瘤反应
本实施例描述了先天免疫的生物材料(例如，聚合物生物材料)激动剂的针对抗肿瘤功效的鉴定和/或表征，特别是通过评估其通过先天免疫刺激在体内诱导适应性抗肿瘤反应的能力。因此，本实施例还描述了可用于癌症治疗的先天免疫的生物材料(例如，聚合物生物材料)激动剂(例如，如本文所述)的鉴定和/或表征。在一些实施方案中，先天免疫的生物材料(例如，聚合物生物材料)激动剂的特征在于，当通过将生物材料(例如，聚合物生物材料)施用于测试受试者的肿瘤切除部位进行体内测试时，观察到适应性抗肿瘤反应的诱导(在本文所述的至少一个或多个方面中与先天免疫的刺激组合)。在一些实施方案中，当先天免疫的生物材料(例如，聚合物生物材料)激动剂的特征在于，当通过在肿瘤切除后向测试受试者的靶部位施用生物材料(例如，聚合物生物材料)进行体内测试时，与未施用此种生物材料(例如，聚合物生物材料)时观察到的相比，此种生物材料(例如，聚合物生物材料)使从手术后(例如，手术后14天)测试受试者的脾脏回收的CD4+和/或CD8+T细胞中的一种或多种激活标记物(例如CD69和/或GITR)和/或一种或多种效应标记物(例如IFN-γ和/或IL-2)的水平增加，例如增加至少10％或更多(包括，例如，至少20％、至少30％、至少40％、至少50％、至少60％、至少70％、至少80％、至少90％或更多)，则先天免疫的生物材料(例如，聚合物生物材料)激动剂被认为和/或确定为根据本公开是有用的。另外或替代地，当先天免疫的生物材料(例如，聚合物生物材料)激动剂的特征在于，当如本实施例中所述进行体内测试时，与未施用此种生物材料(例如，聚合物生物材料)时观察到的相比，此种生物材料(例如，聚合物生物材料)使从手术后(例如，手术后14天)测试受试者的脾脏回收的表达一种或多种激活标记物(例如，CD69和/或GITR)和/或一种或多种效应标记物(例如，IFN-γ和/或IL-2)的CD4+和/或CD8+T细胞的数目增加，例如增加至少10％或更多(包括，例如，至少20％、至少30％、至少40％、至少50％、至少60％、至少70％、至少80％、至少90％或更多)，则先天免疫的生物材料(例如，聚合物生物材料)激动剂被认为和/或确定为根据本公开是有用的。
在一些实施方案中，在施用先天免疫的生物材料(例如，聚合物生物材料)激动剂后小鼠受试者中的适应性抗肿瘤反应可例如通过在施用先天免疫的生物材料(例如，聚合物生物材料)激动剂后例如14天评估脾的T细胞区室来评估。在一些实施方案中，可以评估T细胞(例如，表达CD4和/或CD8的T细胞)的数目和/或表达激活标记物(例如，CD69和/或GITR)的比例。
用于评估CD4+和/或CD8+T细胞中的激活和/或效应标记物(例如，如本文所述)的水平的各种方法是本领域已知的。本领域技术人员将理解，在一些情况下，CD4+和/或CD8+T细胞中的激活和/或效应标记物(例如，如本文所述)的水平可基于CD4+和/或CD8+T细胞中的基因表达(例如，mRNA水平)来评估，例如使用定量聚合酶链式反应。本领域技术人员还将理解，免疫测定(例如ELISA、免疫染色和/或流式细胞术)也可用于进行此种评估。例如，可以例如通过免疫染色和/或流式细胞术评估CD4+和/或CD8+T细胞中一种或多种激活标记物(例如CD69和/或GITR)和/或一种或多种效应标记物(例如IFN-γ和/或IL-2)的存在。
实施例7.示例性组合物的鉴定和/或表征-肿瘤复发和/或转移的体内抑制
本实施例描述了先天免疫的生物材料(例如，聚合物生物材料)激动剂的针对抗肿瘤功效的鉴定和/或表征，特别是通过评估其抑制或减少肿瘤复发和/或转移的能力。因此，本实施例还描述了可用于癌症治疗的先天免疫的生物材料(例如，聚合物生物材料)激动剂(例如，如本文所述)的鉴定和/或表征。
在一些实施方案中，先天免疫的生物材料(例如，聚合物生物材料)激动剂的特征在于，当通过向测试受试者的肿瘤切除部位施用生物材料(例如，聚合物生物材料)进行体内测试时，与未施用此种生物材料(例如，聚合物生物材料)时观察到的相比，肿瘤复发和/或转移的发生率降低。在一些实施方案中，当先天免疫的生物材料(例如，聚合物生物材料)激动剂的特征在于，当通过在肿瘤切除后向测试受试者的靶部位施用生物材料(例如，聚合物生物材料)进行体内测试时，与未施用此种生物材料(例如，聚合物生物材料)时观察到的相比，此种生物材料(例如，聚合物生物材料)降低肿瘤切除后肿瘤复发和/或转移的发生率(例如，当测试受试者是小鼠受试者时，肿瘤切除后至少1个月，或当测试受试者是人类受试者时，肿瘤切除后至少3个月)，例如降低至少10％或更多(包括，例如，至少20％、至少30％、至少40％、至少50％、至少60％、至少70％、至少80％、至少90％或更多)，则先天免疫的生物材料(例如，聚合物生物材料)激动剂被认为和/或确定为根据本公开是有用的。
为了评估体内肿瘤复发和/或转移的发生率，可将表达荧光素酶的乳腺癌细胞(例如4T1细胞)接种到小鼠受试者的乳腺脂肪垫。十天后，手术切除肿瘤，并且将(i)本文所述的组合物，例如包含先天免疫的生物材料(例如，聚合物生物材料)激动剂而不存在免疫调节有效负载(例如，使得组合物的免疫调节组分基本上由或由生物材料组成)，或(ii)阴性对照组合物(例如，不含此种先天免疫的生物材料激动剂的缓冲溶液)施用至小鼠受试者的肿瘤切除部位。随后可以在一段时间内检测和/或监测生物发光信号，例如在至少1个月或更长时间，例如至少2个月、至少3个月或更长时间内，其中在小鼠受试者中可检测的生物发光信号(例如高于背景信号水平至少10％或更多)的存在指示肿瘤复发和/或转移。还可以通过测量肿瘤体积和/或评估动物存活来监测体内肿瘤复发和/或转移的发生率。
等效物和范围
在权利要求中，除非指明相反情况或另外从上下文明显看出，否则冠词诸如“一个(a)”、“一种(an)”以及“所述(the)”可以意指一个/种或多于一个/种。除非指明相反情况或另外从上下文明显看出，否则如果一个、多于一个或所有组成员存在于、被用于给定产品或方法中或以其他方式与给定产品或方法相关，则认为在组的一个或多个成员之间包括“或”的权利要求或描述是满足的。本发明包括其中所述组中只有一个成员存在于、被用于给定产品或方法中或以其他方式与给定产品或方法相关的实施方案。本发明包括其中多于一个或所有的组成员存在于、被用于或以其他方式与给定的产品或方法相关的实施方案。
此外，本发明包括所有的变化、组合和排列，其中一个或多个限制、要素、条款以及描述性术语从所列出的权利要求中的一项或多项被引入到另一项权利要求。例如，任何从属于另一项权利要求的权利要求可被修改以包括在任一其他从属于同一基本权利要求的权利要求中所见的一个或多个限制。在要素被呈现为列表例如以Markush组格式时，所述要素的每个子组也被公开，并且任何一个或多个要素可从所述组移除。应理解，一般来说，在本发明或本发明的方面被称作包含特定要素和/或特征的情况下，本发明或本发明方面的某些实施方案由此类要素和/或特征组成或者基本上由此类要素和/或特征组成。为简单起见，那些实施方案在本文中并非都具体陈述。还应注意，术语“包含”和“含有”旨在为开放的并且容许包括另外的要素或步骤。在给出范围时，端点被包括在内。此外，除非另外指示或另外从上下文和本领域普通技术人员的理解显而易见，否则在本发明的不同实施方案中，表述为范围的值可假定为任何特定值或所述范围内的子范围，到所述范围的下限的单位的十分之一，除非在上下文中另有明确规定。
本领域技术人员将会认识到或利用常规实验即可确定本文所述的本发明的具体实施方案的许多等效方案。应当了解的是，除非另外指明或除非对于本领域的普通技术人员来说显然将会出现矛盾或不一致，否则本发明涵盖了所有变化、组合以及置换，其中来自所列权利要求中的一项或多项的一个或多个限制、要素、条款、描述性术语等被引入从属于同一基础权利要求(或相关的任何其他权利要求)的另一权利要求中。此外，还应当了解的是，本发明的任何实施方案或方面可以明确地被排除在权利要求之外，无论在说明书中是否叙述了特定的排除。本发明的范围并非旨在限于以上描述，而是如以下权利要求所阐述。

Claims (45)

1.一种方法，其包括向肿瘤切除受试者中的靶部位施用包含先天免疫调节组分的组合物的步骤，其中所述先天免疫调节组分基本上由先天免疫的聚合物生物材料激动剂组成。
2.如权利要求1所述的方法，其中所述先天免疫通过激活模式识别受体介导。
3.如权利要求2所述的方法，其中所述模式识别受体是或包含C型凝集素受体(CLR)、NOD样受体(NLR)、RIG-I样受体(RLR)和/或Toll样受体(TLR)。
4.如权利要求1-3中任一项所述的方法，其中所述先天免疫通过激活炎性体介导。
5.如权利要求4所述的方法，其中所述炎性体是或包含AIM2炎性体、NLRP1(NALP1b)炎性体、和/或NLRP3(NALP3)炎性体、和/或NLRC4(IPAF)炎性体。
6.如权利要求1-5中任一项所述的方法，其中所述先天免疫通过cGAS-STING途径介导。
7.如权利要求1-6中任一项所述的方法，其中所述先天免疫的聚合物生物材料激动剂的特征在于，当在施用后24小时评估时，与未将所述先天免疫的聚合物生物材料激动剂施用至所述靶部位时所观察到的相比，更多的促炎细胞因子存在于所述肿瘤切除受试者的所述靶部位处和/或体循环中。
8.如权利要求7所述的方法，其中所述促炎细胞因子是或包含CXCL10、IFN-α、IFN-β、IL-1β、IL-6、IL-18和/或TNF-α。
9.如权利要求1-8中任一项所述的方法，其中所述先天免疫的聚合物生物材料激动剂是或包含透明质酸、藻酸盐、壳聚糖、聚丙烯酸、聚乙烯亚胺(PEI)、聚磷腈、硅胶或其变体。
10.如权利要求1-8中任一项所述的方法，其中所述先天免疫的聚合物生物材料激动剂是或包含碳水化合物聚合物。
11.如权利要求10所述的方法，其中所述碳水化合物聚合物是或包含壳聚糖或其变体。
12.如权利要求11所述的方法，其中所述碳水化合物聚合物是或包含羧甲基壳聚糖。
13.如权利要求10所述的方法，其中所述碳水化合物聚合物是或包含透明质酸。
14.如权利要求1-13中任一项所述的方法，其中所述靶部位是肿瘤切除部位。
15.如权利要求1-13中任一项所述的方法，其中所述靶部位是所述肿瘤切除部位的4英寸内的部位。
16.如权利要求1-13中任一项所述的方法，其中所述靶部位是前哨淋巴结。
17.如权利要求1-16中任一项所述的方法，其中所述施用步骤是通过注射。
18.如权利要求17所述的方法，其中所述注射用机器人手术系统进行。
19.如权利要求1-18中任一项所述的方法，其在所述施用步骤之前，还包括对所述受试者进行肿瘤切除的步骤。
20.如权利要求19所述的方法，其中所述肿瘤切除通过非侵入性手术和/或微创手术(MIS)进行。
21.如权利要求20所述的方法，其中所述非侵入性手术和/或MIS是或包括机器人辅助的MIS、机器人手术和/或腹腔镜手术。
22.如权利要求20或21所述的方法，其中所述施用步骤在手术中进行。
23.如权利要求17-22中任一项所述的方法，其中所述组合物是液体，并且所述先天免疫的聚合物生物材料激动剂是粘性聚合物溶液。
24.如权利要求17-22中任一项所述的方法，其中所述组合物是液体，并且所述先天免疫的聚合物生物材料激动剂在所述施用后在所述靶部位原位形成聚合物网络生物材料。
25.如权利要求24所述的方法，其中所述先天免疫的聚合物生物材料激动剂是热响应性的。
26.如权利要求25所述的方法，其中所述先天免疫的聚合物生物材料激动剂在所述施用后暴露于所述受试者的体温时在所述靶部位处原位形成聚合物网络生物材料。
27.如权利要求25或26所述的方法，其中所述先天免疫的聚合物生物材料激动剂包含(i)至少一种先天免疫免疫调节聚合物和(ii)至少一种非免疫调节聚合物或交联剂。
28.如权利要求27所述的方法，其中所述先天免疫的聚合物生物材料激动剂包含碳水化合物聚合物和热响应性交联剂。
29.如权利要求28所述的方法，其中所述热响应性交联剂是或包含热响应性聚合物。
30.如权利要求24-29中任一项所述的方法，其中所述聚合物网络生物材料包含或是交联聚合物网络生物材料。
31.如权利要求24-27中任一项所述的方法，其中所述聚合物网络生物材料包含或是非交联聚合物网络生物材料。
32.如权利要求1-31中任一项所述的方法，其中所述先天免疫的聚合物生物材料激动剂的特征在于，当通过向测试受试者施用聚合物生物材料进行体内测试时，至少10％的所述先天免疫的聚合物生物材料激动剂在所述施用后3天在体内保留在所述靶部位处。
33.如权利要求1-32中任一项所述的方法，其中所述先天免疫的聚合物生物材料激动剂的特征在于约10Pa至约50,000Pa的储能模量。
34.如权利要求1-33中任一项所述的方法，其中所述聚合物生物材料包含或是水凝胶。
35.如权利要求1-34中任一项所述的方法，其中所述施用步骤不涉及向所述肿瘤切除受试者施用肿瘤抗原。
36.如权利要求1-35中任一项所述的方法，其中所述施用步骤不涉及向所述肿瘤切除受试者施用微粒。
37.如权利要求1-36中任一项所述的方法，其中所述施用步骤不涉及将免疫细胞过继转移至所述肿瘤切除受试者。
38.如权利要求1-37中任一项所述的方法，其中所述施用步骤不涉及免疫调节有效负载的施用。
39.如权利要求1-38中任一项所述的方法，其中所述聚合物生物材料在体内是可生物降解的。
40.如权利要求1-39中任一项所述的方法，其中所述肿瘤切除部位的特征在于不存在明显的残留肿瘤抗原。
41.如权利要求1-40中任一项所述的方法，其中所述肿瘤切除受试者患有转移性癌症。
42.如权利要求41所述的方法，其还包括在所述施用后监测所述肿瘤切除受试者中至少一个转移部位的步骤。
43.一种表征包含免疫调节组分的组合物的方法，其中所述免疫调节组分基本上由先天免疫的聚合物生物材料激动剂或其组分组成，所述方法包括以下步骤：
(a)向测试受试者的靶部位施用包含免疫调节组分的组合物，其中所述免疫调节组分基本上由候选先天免疫的聚合物生物材料激动剂组成；以及
(b)确定当在施用后24小时评估时，与未将所述候选先天免疫的聚合物生物材料激动剂施用至所述靶部位时所观察到的相比，更多的促炎细胞因子存在于所述测试受试者的所述靶部位处和/或体循环中。
44.如权利要求43所述的方法，其还包括确定在所述施用后3天是否有至少10％的所述候选先天免疫的聚合物生物材料激动剂保留在所述靶部位处。
45.如权利要求43或44所述的方法，其中所述靶部位是小鼠受试者的乳腺脂肪垫。
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