CN113756111B - 三孢布拉霉菌发酵提取物染色制得的黄色莱赛尔面料及其制备方法 - Google Patents

三孢布拉霉菌发酵提取物染色制得的黄色莱赛尔面料及其制备方法 Download PDF

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Abstract

本发明涉及三孢布拉霉菌发酵提取物染色制得的黄色莱赛尔面料及其制备方法。本发明将三孢布拉霉菌进行发酵，培养并提纯制得β‑类胡萝卜素；配制酚氧化酶溶液和纤维素酶溶液，将β‑类胡萝卜素、酚氧化酶溶液、纤维素酶溶液和H2O2溶液等配制染色液，将二氧化锰、莱赛尔面料和染色液放入染色机进行染色，将染色后的莱赛尔面料灭酶，然后自来水冲洗、烘干得到黄色莱赛尔面料。本发明通过选取纤维素酶和多酚氧化酶分别激活纤维素和β‑类胡萝卜素，实现纤维素和β‑类胡萝卜素的接枝聚合反应。本发明的染色条件温和，对环境污染小；染色后的黄色莱赛尔面料具有较高的K/S值，皂洗牢度和干摩擦牢度等级均较高。

Description

三孢布拉霉菌发酵提取物染色制得的黄色莱赛尔面料及其制 备方法
技术领域
本发明属于面料的制备技术领域，具体涉及三孢布拉霉菌发酵提取物染色制得的黄色莱赛尔面料及其制备方法。
背景技术
早在几千年前，人们就已懂得从植物中获得颜色来装饰自己的服装。他们从植物中挤出汁液，用于染色或绘制图案。我们熟知的指甲花、兰草都是常见的染料植物。许多古籍中也有关于植物染料的记载，如东汉《说文解字》记载了39种关于植物色彩的名称。到了唐朝，染色工艺飞速发展，颜色甚至一度成为阶级等级的象征。随着丝绸之路等对外开放的发展，中国的印染技术广泛传播到西亚各国，对世界印染产生深远的影响。在几百年后的工业革命中，合成染料由于它色彩缤纷、价格便宜、经久耐用，逐步取代天然植物染料染色，植物染料慢慢退出历史舞台。21世纪以来，人们对健康、环保和生态意识的追求日益增加，并且合成染料在一定条件下会释放有毒有害气体、危害人体健康，这使得人们将注意力重新转移到天然染料上来。天然染料包括植物染料、动物染料、微生物染料等，其中，微生物染料的优势越来越凸显出来。
β-胡萝卜素是多种胡萝卜素中的一种，是维生素的前体，也称维生素原，它的稀溶液呈黄色。β-胡萝卜素广泛存在于植物、藻类和真菌中，但动物和人体内不能合成胡萝卜素，必须从外界摄取。β-胡萝卜素是重要的食品添加剂和食品强化剂，主要用作色素和营养强化剂。广泛用作黄色着色剂以代替油溶性焦油系着色剂。β-类胡萝卜素用于维生素A缺乏症和光敏感患者的治疗。天然β-类胡萝卜素在防癌抗癌方面和预防心血管疾病方面有明显作用。是极好的抗氧化剂，在人体内起到清除自由基的作用，提高人的免疫功能，并起到预防癌变、防止肿瘤转移和预防心血管疾病的作用。
β-类胡萝卜素的制备方法主要有从植物中提取法、化学合成法和微生物发酵法等。从植物中提取法：受原料含量、气候、产地和运输等条件限制，且工艺复杂，难以大量生产，产品着色力差。化学合成法：技术复杂，而且由于人们对化学合成品的警惕性的提高，其产品售价远不如天然品的高。鉴于从植物中提取法和化学合成法的局限性，微生物发酵法受到广泛研究，其中，克拉克须霉菌、三孢布拉霉、红酵母等均可产生β-类胡萝卜素，在这些菌种发酵产生β-类胡萝卜素的方法中，三孢布拉霉具有独特的优势。三孢布拉霉属于毛霉目，其生长十分迅速，生物量高，培养48h每L发酵液可获50g以上的干菌体。三孢布拉霉产色素的能力强，培养5～6d，总胡萝卜素产量在1g/L以上，其中80～90％为β-类胡萝卜素；该菌是实现工业生产的好菌种，国际上实验室水平已达到了3～3.5g/L。
文献调研表明，β-胡萝卜素在很多领域受到广泛应用，但是，β-胡萝卜素应用于纺织品的染色鲜有报道。β-胡萝卜素化学性能比较稳定，其与纺织物不易发生化学反应，这就导致其在纺织物染色应用存在一定局限性，有待进一步突破。
发明内容
化学合成染料具有很强的反应活性，其与莱赛尔面料以化学键结合，而β-类胡萝卜素比较稳定，反应活性差，其不易与莱赛尔面料结合；在印染助剂的辅助作用下，β-类胡萝卜素可用于莱赛尔面料的染色。在印染助剂辅助下β-类胡萝卜素对莱赛尔面料的染色工艺会造成环境污染和资源的大量消耗；另外，该染色工艺制得的莱赛尔面料的染色牢度较低，耐水洗、耐气候色牢度低。针对现有技术中存在的上述弊端，本发明的目的在于提供三孢布拉霉菌发酵提取物染色制得的黄色莱赛尔面料及其制备方法。
本发明的目的在于提供三孢布拉霉菌发酵提取物染色制得的黄色莱赛尔面料，该面料具有较高的K/S值，其耐皂洗变色牢度和耐干摩擦色牢度均较优。
本发明的目的在于提供三孢布拉霉菌发酵提取物染色制得的黄色莱赛尔面料，该面料可由如下制备方法制得：将三孢布拉霉菌进行发酵，培养并提纯制得β-类胡萝卜素；配制酚氧化酶溶液和纤维素酶溶液，将β-类胡萝卜素、酚氧化酶溶液、纤维素酶溶液和H2O2溶液等配制染色液，将二氧化锰、莱赛尔面料和染色液放入染色机进行染色，将染色后的莱赛尔面料灭酶，然后自来水冲洗、烘干得到黄色莱赛尔面料。
本发明的另一目的在于提供三孢布拉霉菌发酵提取物染色制得的黄色莱赛尔面料的制备方法，具体方法包括如下步骤：
(1)三孢布拉霉菌发酵提取物的提纯：所述提纯方法包括如下步骤：
S1：斜面培养基的配制：土豆汁18～22g/L，葡萄糖18～22g/L，磷酸二氢钾2～4g/L，硫酸镁1～2g/L琼脂14～16g/L，维生素B10.1～0.3mg/L；
S2：三孢布拉氏霉菌的预处理：将三孢布拉氏霉菌活化，按0.6％～0.8％接种量将三孢布拉氏霉菌转接到斜面培养基上；在28～30℃的条件下培养6～8d，其中，正菌菌丝呈现淡黄色，负菌菌丝呈现乳黄色；
S3：种子培养基的配制：葡萄糖8～12g/L，玉米淀粉20～30g/L，磷酸二氢钾0.5～0.7g/L，硫酸镁0.2～0.4g/L，维生素B10.5～0.7mg/L；
S4：发酵培养基的配制：玉米淀粉30～40g/L，葡萄糖10～12g/L，黄豆饼粉10～12g/L，大豆蛋白20～30g/L，棉籽油40～60mL/L，磷酸二氢钾1～2g/L，硫酸镁0.2～0.3g/L，维生素B10.5～0.7mg/L；
S5：种子培养：在无菌条件下，从培养结束后的斜面培养基上分别挑取正菌和负菌菌丝接入种子培养基中，在温度28～30℃、转速150～200r/min的条件下，培养48h；
S6：发酵培养：选取培养48h的正负菌的培养液，在无菌的条件下，按正负菌1∶10比例混合摇匀，混合均匀的种子液以10～12％的接种量接入灭菌后的发酵培养基；在pH＝6.6～6.8，温度28～30℃、转速220～240r/min的条件下，发酵培养120～140h；
S7：三孢布拉氏霉菌发酵提取物的提纯：培养液用纱布过滤，湿菌体在45～55℃条件下真空干燥，恒重后称干重；将干燥恒重后的菌体用粉碎机粉碎至80～120目，加入无水乙醇，在研钵中研磨萃取，萃取2～3次，将萃取液过滤，收集萃取液，减压蒸馏萃取液，制得β-类胡萝卜素粉末。
(2)酶溶液的配制：多酚氧化酶溶液的配制：将多酚氧化酶溶于pH为6.3～6.7的磷酸盐缓冲溶液，制得20～30mg/mL多酚氧化酶溶液；纤维素酶溶液的配制：将纤维素酶溶于pH值为4.6～5.0的乙酸-乙酸钠缓冲液，制得20～30mg/mL纤维素酶溶液；
优选地，所述磷酸盐缓冲溶液的配制方法为：取磷酸二氢钾0.6～0.7g，加0.08～0.12mol/L氢氧化钠溶液15～16mL，用水稀释至80～120mL，即得；
优选地，所述乙酸-乙酸钠缓冲液的配制方法为：取醋酸钠5.0～6.0g，加水40～60mL溶解，用冰醋酸调节pH值至4.6～5.0，再加水稀释至80～120mL，即得。
(3)染色液的配制：将β-类胡萝卜素粉末、多酚氧化酶溶液、纤维素酶溶液、8～12wt％H2O2水溶液加入蒸馏水，搅拌混合制得染色液，用30wt％的NaOH碱液调控染色液的pH值为6～8；
优选地，所述β-类胡萝卜素粉末(g)、多酚氧化酶溶液(mL)、纤维素酶溶液(mL)、8～12wt％H2O2水溶液(mL)和蒸馏水(mL)的用量比为：1∶(0.1～0.3)∶(0.3～0.9)∶(0.5～0.7)∶(50～70)。
(4)染色：将MnO2、莱赛尔面料和染色液放入染色机进行染色，浴比为1∶(20～30)，染色时间为60～80分钟，染色温度为40～50℃，染色完成后取出莱赛尔面料，即可；
优选地，所述MnO2的用量(g)为染色液的用量(mL)比为：0.03％～0.09％。
(5)后处理：染色后的莱赛尔面料于沸水灭酶10～20min，将灭酶后的莱赛尔面料用自来水冲洗2～4次、烘干得到黄色莱赛尔面料。
本发明的染色机理分析：
在染色过程中，H2O2在MnO2作催化剂的条件下，不断缓慢产生氧气，其反应方程式如下所示。
多酚氧化酶(PPO)是一种对蒽醌类化合物有特异性的酶，三孢布拉氏霉菌产生的β-类胡萝卜素是一种含多个双键的黄色色素。在氧气的存在下PPO会将β-类胡萝卜素催化氧化成具有活性自由基的β-类胡萝卜素，其反应示意图如下：
纤维素酶是一个多组分酶系，包括多种水解酶成员，一般分为以下3类：(a)内切葡聚糖酶，此类酶在纤维素分子内部的非结晶区水解β-1，4糖苷键，将长链纤维素分子截成短链，生成大量小分子纤维素；(b)外切葡聚糖酶，这类酶作用于多糖链末端，水解β-1，4糖苷键，每次由非还原末端切下一个纤维二糖分子，故亦称纤维二糖水解酶；(c)β-葡萄糖苷酶，这类酶可使纤维二糖水解为葡萄糖分子。由此可见，在纤维素酶的作用下，莱赛尔的主要成分纤维素的相关化学键(如：β-1，4糖苷键)缓慢断裂。
纤维素酶在分解纤维素的过程中，纤维素的化学键在断裂时，遇到具有活性自由基的β-类胡萝卜素，此时，具有活性自由基的β-类胡萝卜素进攻刚刚断裂的纤维素化学键基团，两者发生化学反应，从而实现β-类胡萝卜素接枝在纤维素上。
本发明具有如下显著优点：
(1)针对莱赛尔纤维反应活性低的特点，本发明选取纤维素酶来激活莱赛尔纤维的反应活性，在此过程中，本发明适当地选用低剂量的纤维素酶，这样，既实现了激活莱赛尔纤维的反应活性，又不损伤纤维素本身的分子结构。
(2)微生物三孢布拉霉菌培养的菌株为β-类胡萝卜素，β-类胡萝卜素表现为黄色色素，该黄色色素的分子结构中含有多个双键，在光、热、氧气及活泼性较强的自由基离子的存在下，易被氧化，从而具有较强的反应活性；本发明选取多酚氧化酶来激活黄色色素的反应活性，使其生成具有强反应活性自由基的黄色色素。
(3)本申请的发明人意外地发现，通过选取纤维素酶和多酚氧化酶分别激活纤维素和β-类胡萝卜素的黄色色素，生成具有反应活性的纤维素和黄色色素，从而实现了纤维素和黄色色素的接枝聚合反应。
(4)本发明制备的三孢布拉霉菌发酵提取物染色制得的黄色莱赛尔面料比市场采购的黄色莱赛尔面料的K/S值略大，其耐皂洗变色牢度和耐干摩擦色牢度的等级略高于市场采购的黄色莱赛尔面料。
(5)针对化学染料染色对环境污染大，资源消耗大的弊端，本发明采用纤维素酶和多酚氧化酶染色，染色条件温和，对环境污染小。
具体实施方式
以下所述实施例和对比例详细说明了本发明。
主要原料来源：多酚氧化酶(870U/mg)购于Worthington生物科技发展有限公司，纤维素酶(40U/mg)购于上海源叶生物科技有限公司，三孢布拉霉菌购于上海研生生化试剂有限公司。
实施例1
三孢布拉霉菌发酵提取物染色制得的黄色莱赛尔面料的制备方法，具体方法包括如下步骤：
(1)三孢布拉霉菌发酵提取物的提纯：所述提纯方法包括如下步骤：
S1：斜面培养基的配制：土豆汁20g/L，葡萄糖20g/L，磷酸二氢钾3g/L，硫酸镁1.5g/L琼脂15g/L，维生素B1 0.2mg/L；
S2：三孢布拉氏霉菌的预处理：将三孢布拉氏霉菌活化，按0.7％接种量将三孢布拉氏霉菌转接到斜面培养基上；在29℃的条件下培养7d，其中，正菌菌丝呈现淡黄色，负菌菌丝呈现乳黄色；
S3：种子培养基的配制：葡萄糖10g/L，玉米淀粉25g/L，磷酸二氢钾0.6g/L，硫酸镁0.3g/L，维生素B1 0.6mg/L；
S4：发酵培养基的配制：玉米淀粉35g/L，葡萄糖11g/L，黄豆饼粉11g/L，大豆蛋白25g/L，棉籽油50mL/L，磷酸二氢钾1.5g/L，硫酸镁0.25g/L，维生素B1 0.6mg/L；
S5：种子培养：在无菌条件下，从培养结束后的斜面培养基上分别挑取正菌和负菌菌丝接入种子培养基中，在温度29℃、转速180r/min的条件下，培养48h；
S6：发酵培养：选取培养48h的正负菌的培养液，在无菌的条件下，按正负菌1∶10比例混合摇匀，混合均匀的种子液以11％的接种量接入灭菌后的发酵培养基；在pH＝6.7，温度29℃、转速230r/min的条件下，发酵培养130h；
S7：三孢布拉氏霉菌发酵提取物的提纯：培养液用纱布过滤，湿菌体在50℃条件下真空干燥，恒重后称干重；将干燥恒重后的菌体用粉碎机粉碎至100目，加入无水乙醇，在研钵中研磨萃取，萃取2次，将萃取液过滤，收集萃取液，减压蒸馏萃取液，制得β-类胡萝卜素粉末。
(2)酶溶液的配制：多酚氧化酶溶液的配制：将多酚氧化酶溶于pH为6.5的磷酸盐缓冲溶液，制得25mg/mL多酚氧化酶溶液；纤维素酶溶液的配制：将纤维素酶溶于pH值为4.8的乙酸-乙酸钠缓冲液，制得25mg/mL纤维素酶溶液；所述磷酸盐缓冲溶液的配制方法为：取磷酸二氢钾0.68g，加0.1mol/L氢氧化钠溶液15.2mL，用水稀释至100mL，即得；所述乙酸-乙酸钠缓冲液的配制方法为：取醋酸钠5.4g，加水50mL使溶解，用冰醋酸调节pH值至4.8，再加水稀释至100mL，即得。
(3)染色液的配制：将1gβ-类胡萝卜素粉末、0.2mL多酚氧化酶溶液、0.6mL纤维素酶溶液、0.6mL10wt％H2O2水溶液加入60mL蒸馏水，搅拌混合制得染色液，用30wt％的NaOH碱液调控染色液的pH值为7。
(4)染色：将0.06g MnO2、莱赛尔面料和100mL染色液放入染色机进行染色，浴比为1∶25，染色时间为70分钟，染色温度为45℃，染色完成后取出莱赛尔面料，即可。
(5)后处理：染色后的莱赛尔面料于沸水灭酶15min，将灭酶后的莱赛尔面料用自来水冲洗3次、烘干得到黄色莱赛尔面料。
实施例2
三孢布拉霉菌发酵提取物染色制得的黄色莱赛尔面料的制备方法，具体方法包括如下步骤：
(1)三孢布拉霉菌发酵提取物的提纯：所述提纯方法包括如下步骤：
S1：斜面培养基的配制：土豆汁18g/L，葡萄糖18g/L，磷酸二氢钾2g/L，硫酸镁1g/L琼脂14g/L，维生素B1 0.1mg/L；
S2：三孢布拉氏霉菌的预处理：将三孢布拉氏霉菌活化，按0.6％接种量将三孢布拉氏霉菌转接到斜面培养基上；在28℃的条件下培养6d，其中，正菌菌丝呈现淡黄色，负菌菌丝呈现乳黄色；
S3：种子培养基的配制：葡萄糖8g/L，玉米淀粉20g/L，磷酸二氢钾0.5g/L，硫酸镁0.2g/L，维生素B1 0.5mg/L；
S4：发酵培养基的配制：玉米淀粉30g/L，葡萄糖10g/L，黄豆饼粉10g/L，大豆蛋白20g/L，棉籽油40mL/L，磷酸二氢钾1g/L，硫酸镁0.2g/L，维生素B1 0.5mg/L；
S5：种子培养：在无菌条件下，从培养结束后的斜面培养基上分别挑取正菌和负菌菌丝接入种子培养基中，在温度28℃、转速150r/min的条件下，培养48h；
S6：发酵培养：选取培养48h的正负菌的培养液，在无菌的条件下，按正负菌1∶10比例混合摇匀，混合均匀的种子液以10％的接种量接入灭菌后的发酵培养基；在pH＝6.6，温度28℃、转速220r/min的条件下，发酵培养120h；
S7：三孢布拉氏霉菌发酵提取物的提纯：培养液用纱布过滤，湿菌体在45℃条件下真空干燥，恒重后称干重；将干燥恒重后的菌体用粉碎机粉碎至80目，加入无水乙醇，在研钵中研磨萃取，萃取2次，将萃取液过滤，收集萃取液，减压蒸馏萃取液，制得β-类胡萝卜素粉末。
(2)酶溶液的配制：多酚氧化酶溶液的配制：将多酚氧化酶溶于pH为6.5的磷酸盐缓冲溶液，制得25mg/mL多酚氧化酶溶液；纤维素酶溶液的配制：将纤维素酶溶于pH值为4.8的乙酸-乙酸钠缓冲液，制得25mg/mL纤维素酶溶液；所述磷酸盐缓冲溶液的配制方法为：取磷酸二氢钾0.68g，加0.1mol/L氢氧化钠溶液15.2mL，用水稀释至100mL，即得；所述乙酸-乙酸钠缓冲液的配制方法为：取醋酸钠5.4g，加水50mL使溶解，用冰醋酸调节pH值至4.8，再加水稀释至100mL，即得。
(3)染色液的配制：将1gβ-类胡萝卜素粉末、0.1mL多酚氧化酶溶液、0.3mL纤维素酶溶液、0.5mL8wt％H2O2水溶液加入50mL蒸馏水，搅拌混合制得染色液，用30wt％的NaOH碱液调控染色液的pH值为6。
(4)染色：将0.03g MnO2、莱赛尔面料和100mL染色液放入染色机进行染色，浴比为1∶20，染色时间为60分钟，染色温度为40℃，染色完成后取出莱赛尔面料，即可。
(5)后处理：染色后的莱赛尔面料于沸水灭酶10min，将灭酶后的莱赛尔面料用自来水冲洗2次、烘干得到黄色莱赛尔面料。
实施例3
三孢布拉霉菌发酵提取物染色制得的黄色莱赛尔面料的制备方法，具体方法包括如下步骤：
(1)三孢布拉霉菌发酵提取物的提纯：所述提纯方法包括如下步骤：
S1：斜面培养基的配制：土豆汁22g/L，葡萄糖22g/L，磷酸二氢钾4g/L，硫酸镁2g/L琼脂16g/L，维生素B1 0.3mg/L；
S2：三孢布拉氏霉菌的预处理：将三孢布拉氏霉菌活化，按0.8％接种量将三孢布拉氏霉菌转接到斜面培养基上；在30℃的条件下培养8d，其中，正菌菌丝呈现淡黄色，负菌菌丝呈现乳黄色；
S3：种子培养基的配制：葡萄糖12g/L，玉米淀粉30g/L，磷酸二氢钾0.7g/L，硫酸镁0.4g/L，维生素B1 0.7mg/L；
S4：发酵培养基的配制：玉米淀粉40g/L，葡萄糖12g/L，黄豆饼粉12g/L，大豆蛋白30g/L，棉籽油60mL/L，磷酸二氢钾2g/L，硫酸镁0.3g/L，维生素B1 0.7mg/L；
S5：种子培养：在无菌条件下，从培养结束后的斜面培养基上分别挑取正菌和负菌菌丝接入种子培养基中，在温度30℃、转速200r/min的条件下，培养48h；
S6：发酵培养：选取培养48h的正负菌的培养液，在无菌的条件下，按正负菌1∶10比例混合摇匀，混合均匀的种子液以12％的接种量接入灭菌后的发酵培养基；在pH＝6.8，温度30℃、转速240r/min的条件下，发酵培养140h；
S7：三孢布拉氏霉菌发酵提取物的提纯：培养液用纱布过滤，湿菌体在55℃条件下真空干燥，恒重后称干重；将干燥恒重后的菌体用粉碎机粉碎至120目，加入无水乙醇，在研钵中研磨萃取，萃取3次，将萃取液过滤，收集萃取液，减压蒸馏萃取液，制得β-类胡萝卜素粉末。
(2)酶溶液的配制：多酚氧化酶溶液的配制：将多酚氧化酶溶于pH为6.5的磷酸盐缓冲溶液，制得25mg/mL多酚氧化酶溶液；纤维素酶溶液的配制：将纤维素酶溶于pH值为4.8的乙酸-乙酸钠缓冲液，制得25mg/mL纤维素酶溶液；所述磷酸盐缓冲溶液的配制方法为：取磷酸二氢钾0.68g，加0.1mol/L氢氧化钠溶液15.2mL，用水稀释至100mL，即得；所述乙酸-乙酸钠缓冲液的配制方法为：取醋酸钠5.4g，加水50mL使溶解，用冰醋酸调节pH值至4.8，再加水稀释至100mL，即得。
(3)染色液的配制：将1gβ-类胡萝卜素粉末、0.3mL多酚氧化酶溶液、0.9mL纤维素酶溶液、0.7mL12wt％H2O2水溶液加入70mL蒸馏水，搅拌混合制得染色液，用30wt％的NaOH碱液调控染色液的pH值为8。
(4)染色：将0.09g MnO2、莱赛尔面料和100mL染色液放入染色机进行染色，浴比为1∶30，染色时间为80分钟，染色温度为50℃，染色完成后取出莱赛尔面料，即可。
(5)后处理：染色后的莱赛尔面料于沸水灭酶20min，将灭酶后的莱赛尔面料用自来水冲洗4次、烘干得到黄色莱赛尔面料。
对比例1
以实施例1作为对比，在本对比例中，在步骤(2)中只掺加多酚氧化酶溶液，不加纤维素酶溶液，其它制备方法按实施例1实施。
对比例2
以实施例1作为对比，在本对比例中，在步骤(2)中只掺加纤维素酶溶液，不加多酚氧化酶溶液，其它制备方法按实施例1实施。
性能评价：
对上述实施例1～3、对比例1～2得到的黄色莱赛尔面料和市场采购的黄色莱赛尔面料进行性能评价，市场采购的黄色莱赛尔面料购于江苏华业纺织有限公司。K/S值采用电脑测色配色仪进行测得；耐皂洗变色牢度值测试参考GB/T3921-2008《纺织品色牢度试验耐皂洗色牢度》；耐干摩擦牢度值测试参考GB/T3920-2008《纺织品色牢度试验耐摩擦色牢度》，具体的数据见表1。
表1
样品 K/S值 耐皂洗变色牢度/级 耐干摩擦色牢度/级
实施例1 12.43 5 4-5
实施例2 12.19 5 5
实施例3 12.59 5 5
对比例1 6.15 3 3
对比例2 6.27 3 3
市场采购 11.21 4-5 4-5
从表1可以看出，与对比例1～2的K/S值、耐皂洗变色牢度、耐干摩擦色牢度相比，实施例1～3的K/S值、耐皂洗变色牢度、耐干摩擦色牢度均较好；此外，本发明制备的黄色莱赛尔面料的K/S值略高于市场采购的黄色莱赛尔面料。

Claims (5)

1.三孢布拉霉菌发酵提取物染色制得的黄色莱赛尔面料的制备方法，其特征在于，所述制备方法包括如下步骤：
(1)染色液的配制：将β-类胡萝卜素粉末、多酚氧化酶溶液、纤维素酶溶液、8～12wt％H2O2水溶液加入蒸馏水，搅拌混合制得染色液，用30wt％的NaOH碱液调控染色液的pH值为6～8；
(2)染色：将MnO2、莱赛尔面料和染色液放入染色机进行染色，浴比为1∶(20～30)，染色时间为60～80分钟，染色温度为40～50℃，染色完成后取出莱赛尔面料，即可；
(3)后处理：染色后的莱赛尔面料于沸水灭酶10～20min，将灭酶后的莱赛尔面料用自来水冲洗2～4次、烘干得到黄色莱赛尔面料；
所述步骤(1)中β-类胡萝卜素粉末的制备方法包括如下步骤：
S1：斜面培养基的配制：土豆汁18～22g/L，葡萄糖18～22g/L，磷酸二氢钾2～4g/L，硫酸镁1～2g/L琼脂14～16g/L，维生素B10.1～0.3mg/L；
S2：三孢布拉氏霉菌的预处理：将三孢布拉氏霉菌活化，按0.6％～0.8％接种量将三孢布拉氏霉菌转接到斜面培养基上；在28～30℃的条件下培养6～8d，其中，正菌菌丝呈现淡黄色，负菌菌丝呈现乳黄色；
S3：种子培养基的配制：葡萄糖8～12g/L，玉米淀粉20～30g/L，磷酸二氢钾0.5～0.7g/L，硫酸镁0.2～0.4g/L，维生素B10.5～0.7mg/L；
S4：发酵培养基的配制：玉米淀粉30～40g/L，葡萄糖10～12g/L，黄豆饼粉10～12g/L，大豆蛋白20～30g/L，棉籽油40～60mL/L，磷酸二氢钾1～2g/L，硫酸镁0.2～0.3g/L，维生素B10.5～0.7mg/L；
S5：种子培养：在无菌条件下，从培养结束后的斜面培养基上分别挑取正菌和负菌菌丝接入种子培养基中，在温度28～30℃、转速150～200r/min的条件下，培养48h；
S6：发酵培养：选取培养48h的正负菌的培养液，在无菌的条件下，按正负菌1∶10比例混合摇匀，混合均匀的种子液以10～12％的接种量接入灭菌后的发酵培养基；在pH＝6.6～6.8，温度28～30℃、转速220～240r/min的条件下，发酵培养120～140h；
S7：三孢布拉氏霉菌发酵提取物的提纯：培养液用纱布过滤，湿菌体在45～55℃条件下真空干燥，恒重后称干重；将干燥恒重后的菌体用粉碎机粉碎至80～120目，加入无水乙醇，在研钵中研磨萃取，萃取2～3次，将萃取液过滤，收集萃取液，减压蒸馏萃取液，制得β-类胡萝卜素粉末；
所述步骤(1)中多酚氧化酶溶液的配制方法为：将多酚氧化酶溶于pH为6.3～6.7的磷酸盐缓冲溶液，制得20～30mg/mL多酚氧化酶溶液；
所述步骤(1)中纤维素酶溶液的配制方法为：将纤维素酶溶于pH值为4.6～5.0的乙酸-乙酸钠缓冲液，制得20～30mg/mL纤维素酶溶液；
所述步骤(1)中β-类胡萝卜素粉末、多酚氧化酶溶液、纤维素酶溶液、8～12wt％H2O2水溶液和蒸馏水的用量比为：1g∶(0.1～0.3)mL∶(0.3～0.9)mL∶(0.5～0.7)mL∶(50～70)mL；
所述步骤(2)中所述MnO2的用量占染色液的用量比为：0.03％～0.09％(g/mL)。
2.根据权利要求1所述的三孢布拉霉菌发酵提取物染色制得的黄色莱赛尔面料的制备方法，其特征在于，所述磷酸盐缓冲溶液的配制方法为：取磷酸二氢钾0.6～0.7g，加0.08～0.12mol/L氢氧化钠溶液15～16mL，用水稀释至80～120mL，即得。
3.根据权利要求1所述的三孢布拉霉菌发酵提取物染色制得的黄色莱赛尔面料的制备方法，其特征在于，所述乙酸-乙酸钠缓冲液的配制方法为：取醋酸钠5.0～6.0g，加水40～60mL溶解，用冰醋酸调节pH值至4.6～5.0，再加水稀释至80～120mL，即得。
4.根据权利要求1所述的三孢布拉霉菌发酵提取物染色制得的黄色莱赛尔面料的制备方法，其特征在于，所述步骤(3)中灭酶的时间为10～20min。
5.三孢布拉霉菌发酵提取物染色制得的黄色莱赛尔面料，其特征在于，采用权利要求1～4任一项所述的三孢布拉霉菌发酵提取物染色制得的黄色莱赛尔面料的制备方法制备而成。
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