CN113693961A - 一种用于评价化妆品原料的抗衰老功效的人体外动物替代评价方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种用于评价化妆品原料的抗衰老功效的人体外动物替代评价方法。即以秀丽隐杆线虫为模型生物,考查功效化妆品原料对表皮胶原蛋白中羟脯氨酸指标的影响变化,从而评价化妆品肌肤抗老化效果(包括光老化)的方法。将同期化成年秀丽隐杆线虫分别给予功效化妆品原料培养,再将其置于紫外线下进行照射,通过检测线虫表皮的羟脯氨酸水平相对含量,并与对照组对比,以评价抗衰老功效化妆品原料对线虫表皮胶原蛋白的改善效果。本发明采用的生物学方法更能准确反应出功效化妆品原料对表皮胶原蛋白的改善效果,功效化妆品原料评价范围广,可以快速筛选功效性化妆品原料最佳有效浓度。本发明的评价方法操作简单,所需周期短。
Description
技术领域
本发明涉及一种用于评价化妆品原料的抗衰老功效的人体外动物替代评价方法,属于化妆品技术领域。
背景技术
胶原蛋白广泛存在于微生物、人体中,在多个方面起着重要的作用,包括组织构架、细胞粘附、细胞迁移、肿瘤、血管生成、组织形态形成和组织修复。而胶原蛋白最为人所知的是在细胞外基质中以一种长形纤维作为脊椎动物组织如肌腱、软骨骨骼和皮肤中主要的抗张力成分。胶原蛋白是真皮的主要成分,也是人体中含量最丰富的蛋白质,为皮肤提供强度和支撑。随着衰老的加剧,人体皮肤中的胶原蛋白流失较多,表皮失去支撑皱纹程度也加剧。人体皮肤中的胶原蛋白含量与皮肤衰老直接相关。因此,很多抗衰老化妆品原料相继推出,但是还没有明确的功效评价方法来评价化妆品原料对皮肤中的相关胶原蛋白含量大小的改善状况。
秀丽线虫拥有175种胶原蛋白,大多集中在与表皮细胞顶膜相邻的外皮细胞外基质中,与哺乳动物具有很高的同源性。
发明内容
本发明所要解决的技术问题是:开发一种以秀丽线虫代替动物模型评价抗衰老化妆品功效的方法。
为了解决上述技术问题,本发明提供了一种用于评价化妆品原料的抗衰老功效的人体外动物替代评价方法,包括以下步骤:
将同期化培养的秀丽隐杆线虫置于线虫生长培养基中,加入功效化妆品原料,培养72小时,对培养基中的线虫分别给予UVA波段照射记为UVA测试组,以及蓝光波段照射记为蓝光测试组,两个测试组各自设置三组对照组:1)培养基中加入功效化妆品原料的无照射组,2)培养基空白照射组,3)培养基空白无照射组;8小时以后检测各测试组和相应的对照组中的线虫表皮中的羟脯氨酸含量,并进行比较,以评价功效化妆品原料抗UVA光和蓝光老化效果。
优选地,所述的同期化培养的秀丽隐杆线虫为L4时期的秀丽隐杆线虫。
优选地,所述的线虫生长培养基涂布有OP50尿嘧啶缺陷型大肠杆菌。
优选地,所述的线虫生长培养基的配方为:975mL去离子水,17g琼脂,2.5g蛋白胨,3g NaCl,1M浓度的磷酸钾缓冲液25mL,1M浓度的MgSO4 1mL,1M浓度的CaCl2 1mL,5μg/mL浓度的胆固醇1mL,pH 6.0。
优选地,所述的UVA波段照射具体为:模拟日光氙灯下照射,UVA波段范围320-400nm,辐射量10-20j/cm2。
优选地,所述的蓝光波段照射具体为:模拟日光氙灯下照射,蓝光波段范围400-500nm,辐射量10-20j/cm2。
与现有技术相比,本发明的有益效果在于:
本发明的用于评价化妆品原料的抗衰老功效的人体外动物替代评价方法,与常用的胶原蛋白仪器法相比较,本发明的生物学方法更能准确反应出功效化妆品原料对表皮胶原蛋白的改善效果,功效化妆品原料评价范围广,可以快速筛选功效性化妆品原料最佳有效浓度;所选模型生物秀丽隐杆线虫生长周期短,个体小,表皮中胶原蛋白含量差异性易于检测,实验周期短,操作简便成本低,且属于动物替代实验范畴,具有更广的评价应用领域。
附图说明
图1是实施例1的线虫表皮中的羟脯氨酸含量的测定结果;
图2是实施例2的线虫表皮中的羟脯氨酸含量的测定结果。
具体实施方式
为使本发明更明显易懂,兹以优选实施例,并配合附图作详细说明如下。
实施例1
GHK-铜三肽对UVA波段辐射秀丽隐杆线虫表皮中胶原蛋白的影响:
收集同期化L4期秀丽隐杆线虫,配制涂布OP50尿嘧啶缺陷型大肠杆菌的NGM培养基,NGM培养基的配方为:975mL去离子水,17g琼脂,2.5g蛋白胨,3g NaCl,1M浓度的磷酸钾缓冲液25mL,1M浓度的MgSO4 1mL,1M浓度的CaCl2 1mL,5μg/mL浓度的胆固醇1mL,pH 6.0。)。挑取秀丽隐杆线虫至NGM培养基上,分成四组,每组三板培养基,每板500条线虫。第一组和第二组为给药组,GHK-铜三肽浓度为10μM,第一组培养基GHK-铜三肽自然生长组、第二组培养基GHK-铜三肽UVA照射组、第三组培养基空白照射组,第四组培养基空白无照射组。培养72小时。然后第二组、第三组线虫置于模拟日光氙灯下照射,紫外线波段为UVA(320-400nm),辐射量为15j/cm2。UVA照射结束后将线虫转移到新的NGM培养基中培养,照射后8小时将线虫进行脱离表皮处理,然后测量表皮中的羟脯氨酸含量。所有数据都进行3次重复,采用GraphPad Prism 7分析数据和绘制图表,结果如图1所示。
实施例2
GHK-铜三肽对蓝光波段辐射秀丽隐杆线虫表皮中胶原蛋白的影响:
收集同期化L4期秀丽隐杆线虫,配制涂布OP50尿嘧啶缺陷型大肠杆菌的NGM培养基,NGM培养基的配方为:975mL去离子水,17g琼脂,2.5g蛋白胨,3g NaCl,1M浓度的磷酸钾缓冲液25mL,1M浓度的MgSO4 1mL,1M浓度的CaCl2 1mL,5μg/mL浓度的胆固醇1mL,pH 6.0。),挑取秀丽隐杆线虫至NGM培养基上,分成四组,每组三板培养基,每板500条线虫。第一组和第二组为给药组,GHK-铜三肽浓度为10μM,第一组培养基GHK-铜三肽自然生长组、第二组培养基GHK-铜三肽蓝光照射组、第三组培养基空白照射组,第四组培养基空白无照射组。培养72小时。然后第二组、第三组线虫置于模拟日光氙灯下照射,紫外线波段为蓝光(400-500nm),辐射量为15j/cm2。UVA照射结束后将线虫转移到新的NGM培养基中培养,照射后8小时将线虫进行脱离表皮处理,然后测量表皮中的羟脯氨酸含量。所有数据都进行3次重复,采用GraphPad Prism 7分析数据和绘制图表,结果如图2所示。
上述实施例提供了一种检测线虫表皮中的羟脯氨酸含量来评价功效化妆品原料对秀丽隐杆线虫表皮胶原蛋白改善效果的方法,方法结果与胶原蛋白有明显相关性,为一种简便可行的动物替代的功效评价方法。
上述实施例仅为本发明的优选实施例,并非对本发明任何形式上和实质上的限制,应当指出,对于本技术领域的普通技术人员,在不脱离本发明的前提下,还将可以做出若干改进和补充,这些改进和补充也应视为本发明的保护范围。
Claims (6)
1.一种用于评价化妆品原料的抗衰老功效的人体外动物替代评价方法,其特征在于,包括以下步骤:
将同期化培养的秀丽隐杆线虫置于线虫生长培养基中,加入功效化妆品原料,培养72小时,对培养基中的线虫分别给予UVA波段照射记为UVA测试组,以及蓝光波段照射记为蓝光测试组,两个测试组各自设置三组对照组:1)培养基中加入功效化妆品原料的无照射组,2)培养基空白照射组,3)培养基空白无照射组;8小时以后检测各测试组和相应的对照组中的线虫表皮中的羟脯氨酸含量,并进行比较,以评价功效化妆品原料抗UVA光和蓝光老化效果。
2.根据权利要求1所述的用于评价化妆品原料的抗衰老功效的人体外动物替代评价方法,其特征在于,所述的同期化培养的秀丽隐杆线虫为L4时期的秀丽隐杆线虫。
3.根据权利要求1所述的用于评价化妆品原料的抗衰老功效的人体外动物替代评价方法,其特征在于,所述的线虫生长培养基涂布有OP50尿嘧啶缺陷型大肠杆菌。
4.根据权利要求3所述的用于评价化妆品原料的抗衰老功效的人体外动物替代评价方法,其特征在于,所述的线虫生长培养基的配方为:975mL去离子水,17g琼脂,2.5g蛋白胨,3g NaCl,1M浓度的磷酸钾缓冲液25mL,1M浓度的MgSO4 1mL,1M浓度的CaCl2 1mL,5μg/mL浓度的胆固醇1mL,pH 6.0。
5.根据权利要求1所述的用于评价化妆品原料的抗衰老功效的人体外动物替代评价方法,其特征在于,所述的UVA波段照射具体为:模拟日光氙灯下照射,UVA波段范围320-400nm,辐射量10-20j/cm2。
6.根据权利要求1所述的用于评价化妆品原料的抗衰老功效的人体外动物替代评价方法,其特征在于,所述的蓝光波段照射具体为:模拟日光氙灯下照射,蓝光波段范围400-500nm,辐射量10-20j/cm2。
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PB01 | Publication | ||
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SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
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RJ01 | Rejection of invention patent application after publication | ||
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Application publication date: 20211126 |