CN113667572B - 一种肿瘤细胞的细胞核分选装置、分选方法及检测方法 - Google Patents
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Abstract
本发明属于肿瘤细胞检测领域，公开了一种肿瘤细胞的细胞核分选装置、分选方法及检测方法，分选装置包括分选装置本体；分选装置本体的一端设有进液口，另一端设有出液口，分选装置本体内沿纵向设有多个腔室，多个腔室的一端与进液口连通，另一端与出液口连通；每个腔室内设有多个微单元，微单元包括流路和捕获通道，相邻两个微单元通过流路连通，捕获通道设置在流路的进口端，捕获通道的前端朝向流路的进口端，捕获通道的后端朝向流路的出口端，捕获通道的前端宽度大于后端宽度。本发明基于肿瘤细胞细胞核和正常细胞细胞核的大小以及细胞核的变形能力较差的特点来进行筛选，更有利于提高目标细胞核的富集回收率，实现通过液体活检来检测肿瘤。
Description
技术领域
本发明属于肿瘤细胞检测技术领域，特别涉及一种肿瘤细胞的细胞核分选装置、分选方法及检测方法。
背景技术
癌症在全球范围内发病率和致死率高，已经严重威胁人类健康。液体活检是近年来出现的肿瘤无创检测新技术。由于肿瘤转移导致其细胞从原位脱落进入循环系统，进而向包括血液、胸腔积液、脑脊液甚至尿液中播散。从这些液体样本检测游离的稀有肿瘤细胞及其分子特征可代替对肿瘤原位病灶的活检，是一种常见的液体活检的方式。
恶性肿瘤细胞之间是存在异质性的，并表现出不同的生物学特性，这些特性通常是由遗传不稳定性引起的。这种异质性包括功能(多型性)和结构(多型性)的变化。在结构改变中，肿瘤细胞最常见的是核大小和形状、染色质组织、核仁大小和数量以及核仁周围空间的改变。其中细胞核大小的变化一直被细胞病理学家作为一个重要的参数，在多种肿瘤中得到应用，例如：前列腺癌，乳腺癌，肺癌，皮肤癌，卵巢癌，胰腺癌，膀胱癌，肝脏癌，甲状腺癌等。
恶性肿瘤细胞具有与正常细胞不同的若干特征，包括维持增殖信号(Self-Sufficiency in Growth Signals)，逃避生长抑制(Insensitivity to AntigrowthSignals)，抑制细胞死亡(Resisting Cell Death)，无限自我复制(LimitlessReplicative Potential)，诱导血管生成(Sustained Angiogenesis)，激活浸润转移(Tissue Invasion and Metastasis)，避免免疫损伤(Avoiding Immune Destruction)，促进肿瘤炎症(Tumor Promotion Inflammation)，能量代谢异常(Deregulating CellularEnergetics)以及基因组不稳定(Genome Instability and Mutation)等。
其中无限自我复制能力受到越来越多的关注，在正常人体细胞中，端粒酶的活性受到相当严密的调控，只有在造血细胞、干细胞和生殖细胞，才可以侦测到具有活性的端粒酶。而在绝大数肿瘤细胞中，端粒酶是高表达的，且端粒酶的表达都定位于细胞核。
目前，虽然对肿瘤细胞的富集方法众多，其中比较常见的有依据肿瘤细胞大小进行分离的方法，但是细胞的形变能力与许多因素有关，如压力差、细胞大小、有效细胞表面张力、锥角等，导致在肿瘤患者样本中，目标细胞的富集回收率不高，且不能很好的区分健康细胞和肿瘤细胞。
发明内容
本发明的目的是提供一种肿瘤细胞的细胞核分选装置、分选方法及检测方法，通过细胞核来区分肿瘤细胞与健康细胞，提高液体活检效果。
本发明提供的技术方案如下：
一方面，提供了一种肿瘤细胞的细胞核分选装置，包括分选装置本体；所述分选装置本体沿长度方向的一端设有进液口，另一端设有出液口，所述分选装置本体内沿宽度方向设有多个腔室，多个所述腔室靠近所述进液口的一端分别与所述进液口连通，多个所述腔室靠近所述出液口的一端分别与所述出液口连通；
每个所述腔室内沿所述分选装置本体的长度方向依次设有多个微单元，所述微单元包括流路和捕获通道，相邻两个所述微单元通过所述流路连通，所述捕获通道设置在所述流路的进口端，所述捕获通道的前端朝向所述流路的进口端设置，所述捕获通道的后端朝向所述流路的出口端设置，且所述捕获通道的前端宽度大于后端宽度。
进一步地，所述捕获通道的前端宽度为5～200um；
所述捕获通道的后端宽度为1～30um；
所述捕获通道前端至后端的距离为10～200um；
所述捕获通道的厚度为10～200um。
进一步地，所述捕获通道的前端宽度为20～70um；
所述捕获通道的后端宽度为1～10um；
所述捕获通道前端至后端的距离为20～70um；
所述捕获通道的厚度为20～70um。
进一步地，所述流路的宽度为5～200um；
所述流路的厚度为5～200um。
进一步地，所述流路的宽度为50～100um；
所述流路的厚度为50～100um。
进一步地，还包括进样机构，所述进样机构包括加样腔和压力往复泵，所述加样腔的进样口设有第一阀门，所述加样腔的出样口设有第二阀门，所述出样口与所述分选装置本体的进液口连通，所述加样腔与所述压力往复泵通过通道连通，所述通道上设有第三阀门。
进一步地，所述通道的内径为5～200um。
另一方面，还提供一种肿瘤细胞的细胞核分选方法，包括：
使细胞核重悬液从分选装置本体的进液口进入不同的微单元；
通过微单元对细胞核重悬液中的肿瘤细胞进行分选，使正常细胞的细胞核顺利流过捕获通道，肿瘤细胞的细胞核滞留在捕获通道内，未经过分选的液体通过流路进入下一个微单元继续进行分选，分选完成后的液体从分选装置本体的出液口排出。
进一步地，所述使细胞核重悬液从分选装置本体的进液口进入不同的微单元具体包括：
对细胞膜进行裂解和离心后，收集细胞核，并使用缓冲液重悬细胞核；
打开进样机构的第一阀门，将细胞核重悬液注入加样腔；
关闭进样机构的第一阀门，打开第二阀门、第三阀门和压力往复泵，对加样腔增压，通过压力使细胞核重悬液从加样腔的出样口排出并从分选装置本体的进液口进入不同的微单元。
又一方面，还提供一种肿瘤细胞的细胞核检测方法，包括：
使细胞核重悬液从分选装置本体的进液口进入不同的微单元；
通过微单元对细胞核重悬液中的肿瘤细胞进行分选，使正常细胞的细胞核顺利流过捕获通道，肿瘤细胞的细胞核滞留在捕获通道内，未经过分选的液体通过流路进入下一个微单元继续进行分选，分选完成后的液体从所述分选装置本体的出液口排出；
关闭进样机构的第二阀门和第三阀门，打开进样机构的第一阀门，将PBS注入进样机构的加样腔；
关闭所述第一阀门，打开所述第二阀门、所述第三阀门和进样机构的压力往复泵，对所述加样腔增压，将PBS通过压力排出所述加样腔的出样口并进入所述分选装置本体内，以对所述分选装置本体进行清洗；
关闭所述第二阀门和所述第三阀门，打开所述第一阀门，将细胞核裂解液注入所述加样腔；
关闭所述第一阀门，打开所述第二阀门、所述第三阀门和所述压力往复泵，对所述加样腔增压，将细胞核裂解液通过压力排出所述加样腔的出样口并进入所述分选装置本体，静置孵育；
孵育结束后，通过所述压力往复泵对所述分选装置本体内液体进行反复抽吸，以对细胞核进行充分裂解；
对所述加样腔增压，在所述分选装置本体的出液口收集细胞核裂解液；
在细胞核裂解液内加入端粒酶逆转录酶抗体包被的磁珠，室温孵育；
孵育结束后，进行磁吸附，去除上清液，使用缓冲液反复清洗磁珠；
磁珠重悬，加入化学发光试剂标记的端粒酶逆转录酶抗体，室温孵育；
孵育结束后，进行磁吸附，去除上清液，使用缓冲液反复清洗磁珠；
磁珠使用预激发液重悬，之后加入激发液震荡混匀后，放在化学发光仪上检测并读取数据。
通过本发明提供的一种肿瘤细胞的细胞核分选装置、分选方法及检测方法，能够带来以下有益效果：通过在分选装置内设置多个微单元，且每个微单元内设置捕获通道，因细胞核的形变能力较差，且肿瘤细胞的细胞核一般大于正常细胞的细胞核，捕获通道基于细胞核大小来分选肿瘤细胞核和正常细胞核，更有利于提高目标细胞核的富集回收率，实现通过液体活检来检测肿瘤。
附图说明
下面结合附图和具体实施方式对本发明作进一步详细说明。
图1是本发明一种肿瘤细胞的细胞核分选装置的结构示意图；
图2是图1中微单元的结构示意图；
图3是进样机构的结构示意图。
附图标号说明
10、分选装置本体；11、进液口；12、出液口；13、腔室；14、微单元；141、流路；1411、进口端；1412、出口端；142、捕获通道；15、隔层；16、分液通道；17、出液通道；20、进样机构；21、加样腔；211、进样口；212、出样口；22、压力往复泵；23、第一阀门；24、第二阀门；25、通道；26、第三阀门。
具体实施方式
为了更清楚地说明本发明实施例或现有技术中的技术方案，下面将对照附图说明本发明的具体实施方式。显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本发明的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图，并获得其他的实施方式。
为使图面简洁，各图中只示意性地表示出了与本发明相关的部分，它们并不代表其作为产品的实际结构。另外，以使图面简洁便于理解，在有些图中具有相同结构或功能的部件，仅示意性地绘示了其中的一个，或仅标出了其中的一个。在本文中，“一个”不仅表示“仅此一个”，也可以表示“多于一个”的情形。
还应当进一步理解，在本申请说明书和所附权利要求书中使用的术语“和/或”是指相关联列出的项中的一个或多个的任何组合以及所有可能组合，并且包括这些组合。
在本文中，需要说明的是，除非另有明确的规定和限定，术语“安装”、“相连”、“连接”应做广义理解，例如，可以是固定连接，也可以是可拆卸连接，或一体地连接；可以是机械连接，也可以是电连接；可以是直接相连，也可以通过中间媒介间接相连，可以是两个元件内部的连通。对于本领域的普通技术人员而言，可以具体情况理解上述术语在本发明中的具体含义。
另外，在本申请的描述中，术语“第一”、“第二”等仅用于区分描述，而不能理解为指示或暗示相对重要性。
一种肿瘤细胞的细胞核分选装置的具体实施例，该细胞核分选装置可适用于外周血、尿液、脑脊液、腹水、胸水、痰液、精液等体液样本。如图1所示，包括分选装置本体10，分选装置本体10沿长度方向的一端设有进液口11，另一端设有出液口12，分选装置本体10内沿宽度方向设有多个腔室13，多个腔室13靠近进液口11的一端分别与进液口11连通，多个腔室13靠近出液口12的一端分别与出液口12连通。
每个腔室13内沿分选装置本体10的长度方向依次设有多个微单元14，如图2所示，微单元14包括流路141和捕获通道142，相邻两个微单元14通过流路141连通，捕获通道142设置在流路141的进口端1411，捕获通道142的前端朝向流路141的进口端1411设置，捕获通道142的后端朝向流路141的出口端1412设置，且捕获通道142的前端宽度大于后端宽度。
具体地，分选装置本体10内设有多个隔层15，隔层15将分选装置本体10沿宽度方向分隔为多个腔室13，分选装置本体10的宽度方向为图1中上下方向，分选装置本体10的长度方向为图1中左右方向。隔层15沿分选装置本体10长度方向的两端与分选装置本体10的内壁之间分别具有间距，使分选装置本体10内部靠近进液口11的一端形成分液通道16，分选装置本体10内部靠近出液口12的一端形成出液通道17，分液通道16分别与进液口11和腔室13连通，出液通道17分别与腔室13和出液口12连通，从进液口11进入的液体先进入分液通道16，然后从分液通道16进入各腔室13，从腔室13内流出的液体进入出液通道17，然后从出液口12排出。
每个腔室13内沿分选装置本体10的长度方向设置多个微单元14，微单元14的结构如图2所示，捕获通道142设置在流路141的进口端1411，捕获通道142的前端靠近流路141的进口端1411，捕获通道142的后端靠近流路141的出口端1412，流路141为弧形，液体样本从分液通道16进入腔室13内第一个微单元14的流路141，液体样本从流路141的进口端1411流入后，部分液体样本进入捕获通道142，捕获通道142的前端宽度大于后端宽度，所有细胞核可以顺利进入捕获通道142内，直径大于捕获通道142后端宽度的细胞核被滞留在捕获通道142内，直径小于后端宽度的细胞核流出捕获通道142并从流路141的出口端1412流出，进入下一个微单元14，同时，未进入捕获通道142进行分选的液体样本沿流路141流动并从流路141的出口端1412流出进入下一个微单元14继续进行分选，分选完成后，小直径细胞流入出液通道17并从出液口12流出。
本实施例的用于捕获肿瘤细胞细胞核的分选装置，可以对肿瘤细胞及健康细胞进行明显的区分，并可以对捕获到的肿瘤细胞细胞核的内容物进行检测及鉴定，以此来实现对体液中肿瘤细胞的特征性信息的富集及检测，该体系具有更高的检测灵敏度与特异性。
捕获通道142的前端宽度为5～200um，优选地，捕获通道142的前端宽度为20～70um，捕获通道142的前端宽度是指捕获通道142的前端沿分选装置本体10宽度方向的尺寸。捕获通道142的后端宽度为1～30um，优选地，捕获通道142的后端宽度为1～10um，捕获通道142的后端宽度是指捕获通道142的后端沿分选装置本体10宽度方向的尺寸。捕获通道142前端至后端的距离为10～200um，优选地，捕获通道142前端至后端的距离为20～70um。捕获通道142的厚度为10～200um，优选地，捕获通道142的厚度为20～70um，捕获通道142的厚度为捕获通道142沿图1中前后方向的尺寸。
流路141的宽度为5～200um；优选地，流路141的宽度为50～100um。流路141的厚度为5～200um，优选地，流路141的厚度为50～100um。
肿瘤细胞的细胞核分选装置还包括进样机构20，如图3所示，进样机构20包括加样腔21和压力往复泵22，加样腔21的进样口211设有第一阀门23，加样腔21的出样口212设有第二阀门24，出样口212与分选装置本体10的进液口11连通，加样腔21与压力往复泵22通过通道25连通，通道25上设有第三阀门26。
进样机构20的加样腔21的体积在10～5000ul之间，优选地，加样腔21的体积在50～500ul。通道25的内径在5～200um之间，优选地，通道25的内径在50～150um。
本实施例的肿瘤细胞的细胞核分选装置的分选方法为：
样本：使用triton-100或者Tween20对细胞膜进行裂解，裂解后，离心，收集细胞核，之后使用缓冲液重悬细胞核。
进样：打开第一阀门23，样本(细胞核重悬液)注入加样腔21，关闭第一阀门23，打开第二阀门24、第三阀门26和压力往复泵22，对加样腔21增压，将样本通过压力送入出样口212。
核分选：样本经过进样机构20的出样口212进入分选装置本体10的分液通道16，由分液通道16进入不同的微单元14中。样本流经微单元14时，小的细胞核可以顺利流过捕获通道142，而较大的细胞核则滞留在捕获通道142，未经过分选的液体则继续通过流路141进入下一个微单元14继续进行分选，分选完成后的液体从分选装置本体10的出液口12排出。
本实施例还提供一种肿瘤细胞的细胞核检测方法的具体实施例，包括：
样本：使用triton-100或者Tween20对细胞膜进行裂解，裂解后，离心，收集细胞核，之后使用缓冲液重悬细胞核。
进样：打开第一阀门23，样本(细胞核重悬液)注入加样腔21，关闭第一阀门23，打开第二阀门24、第三阀门26和压力往复泵22，对加样腔21增压，将样本通过压力送入出样口212。
核分选：样本经过进样机构20的出样口212进入分选装置本体10的分液通道16，由分液通道16进入不同的微单元14中。样本流经微单元14时，小的细胞核可以顺利流过捕获通道142，而较大的细胞核则滞留在捕获通道142，未经过分选的液体则继续通过流路141进入下一个微单元14继续进行分选，分选完成后的液体从分选装置本体10的出液口12排出。
PBS(磷酸盐缓冲盐溶液(phosphate buffered saline)洗涤：样本分选结束后，关闭进样机构20的第二阀门24和第三阀门26，打开第一阀门23，将PBS注入加样腔21，关闭第一阀门23，打开第二阀门24、第三阀门26和压力往复泵22，对加样腔21增压，将PBS通过压力送入加样腔21的出样口212，并进入分选装置本体10内，对分选装置本体10进行清洗，洗掉分选体系中残留的细胞核，之后再重复进样PBS洗涤一次。
核裂解：PBS洗涤后，关闭第二阀门24和第三阀门26，打开第一阀门23，将细胞核裂解液(150mM NaCl，1％NP-40，1％脱氧胆酸钠，0.1％SDS，25mM Tris-HCl(pH7.6))注入加样腔21，关闭第一阀门23，打开第二阀门24、第三阀门26和压力往复泵22，对加样腔21增压，将细胞核裂解液通过压力送入出样口212，并进入分选装置，静置孵育，孵育结束后通过压力往复泵22对分选装置本体10内液体进行反复抽吸以达到充分裂解的效果，之后增压，在分选装置本体10的出液口12收集细胞核裂解液。
化学发光检测：1)取细胞核裂解液适量，加端粒酶逆转录酶抗体包被的磁珠，孵育；2)孵育结束后，磁吸附，去除上清，使用缓冲液反复清洗磁珠；3)磁珠重悬，加入化学发光试剂标记的端粒酶逆转录酶抗体，孵育；4)孵育结束后，磁吸附，去除上清，使用缓冲液反复清洗磁珠；5)磁珠使用预激发液重悬，之后加入激发液，孵育；6)孵育结束后，放在化学发光仪上检测并读取数据。其中，化学发光检测的目标蛋白为在细胞核内有表达的蛋白，优选地，该蛋白为端粒酶逆转录酶。
实施例1
取MCF-7细胞6000个与健康人白细胞300000个，混匀，平均分为三份(编号依次为M1，M2，M3)，重悬到0.1％的triton-100溶液中，震荡孵育10分钟；
取健康人白细胞300000个作为对照，平均分为三份(编号依次为W1，W2，W3)，重悬到0.1％的triton-100溶液中，震荡孵育10分钟；
3.将孵育后的样本，500g离心10分钟，去除上清，得到的细胞核沉淀使用200uLPBS缓冲液重悬。
4.细胞核分选：
1)进样，打开第一阀门，将细胞核的PBS重悬液注入加样腔，关闭第一阀门，打开第二阀门以及第三阀门，打开压力往复泵，对加样腔增压，将样本通过压力送入出样口。
2)核分选，细胞核的PBS重悬液经过出样口进入分液通道，由分液通道进入不同的微单元中，其中微单元流路直径为80um，捕获通道前端直径为60um，捕获通道前端后端为8um。样本流经微单元时，白细胞的细胞核可以顺利流过捕获通道，而肿瘤细胞MCF7的细胞核则滞留在捕获通道，未经过分选的液体则继续通过流路进入下一个微单元。
3)PBS洗涤，细胞核分选结束后，关闭第二阀门及第三阀门，打开第一阀门，将200uL PBS注入加样腔，关闭第一阀门，打开第二阀门以及第三阀门，打开压力往复泵，对加样腔增压，将PBS通过压力送入出样口，并对分选装置进行清洗，洗掉分选体系中残留的细胞核。之后，再重复进样PBS洗涤一次。
5.核裂解，PBS洗涤后，关闭第二阀门及第三阀门，打开第一阀门，将200uL细胞核裂解液(150mMNaCl，1％NP-40，1％脱氧胆酸钠，0.1％SDS，25mM Tris-HCl(pH7.6))注入加样腔，关闭第一阀门，打开第二阀门以及第三阀门，打开压力往复泵，对加样腔增压，将细胞核裂解液通过压力送入出样口，并进入分选装置，静置孵育，孵育结束后通过压力往复泵对分选装置内液体进行反复抽吸以达到充分裂解的效果，之后增压，在出液口收集细胞核裂解液。
化学发光检测：
1)取细胞核裂解液100uL，加端粒酶逆转录酶抗体(ab230527，abcam)包被的磁珠(BMB-1-S，北京百欧泰生物科技有限公司)，室温孵育15min；
2)孵育结束后，磁吸附3min，去除上清，使用200uL PBS缓冲液反复清洗磁珠；
3)使用100uL PBS缓冲液磁珠重悬，加入吖啶酯(深圳羽众医药科技有限公司)标记的端粒酶逆转录酶抗体(ab105632，abcam)2uL，室温孵育10min；
4)孵育结束后，磁吸附3min，去除上清，使用PBS缓冲液反复清洗磁珠；
5)磁珠使用预激发液100uL(0.1M HNO3、1.32％H2O2)重悬，之后加入100uL激发液(0.35M NaOH)震荡混匀后，放在化学发光仪上L(Molecular Devices公司)检测并读取数据。
7.检测结果如表1所示，检测结果显示，健康人的白细胞检测本底的发光值在一百多，而包含有有MCF细胞的样本检测的发光值在一千多，二者具有明显的差异，说明该分选装置具有明显的肿瘤细胞核的分选及富集效果。
表1肿瘤细胞MCF7细胞核分选检测结果
实施例2膀胱癌尿液样本中肿瘤细胞核的分选及检测
细胞核重悬液准备：取膀胱癌患者尿液样本5例(编号依次为U1，U2，U3，U4，U5)，膀胱良性病变患者尿液样本5例(编号依次为U6，U7，U8，U9，U10)，样本量各50mL，500g离心，5分钟，沉淀用0.1％的triton-100溶液中，震荡孵育10分钟，之后，500g离心，5分钟，收集细胞核沉淀并用200uL PBS重悬；
细胞核分选及化学发光检测：具体实验检测流程如实施例1所示；
检测结果如表2所示，检测结果显示，这5例膀胱癌患者样本均有肿瘤细胞检出，而良性病变患者则无信号值检出，说明该体系能够很好的用于尿液样本中肿瘤细胞细胞核的分选及检测。
表2尿液样本肿瘤细胞核的检测结果
| 样本类型 | 检测项目 | 发光值 | 浓度值 |
| U1 | TERT | 267 | 0.12 |
| U2 | TERT | 1581 | 1.83 |
| U3 | TERT | 534 | 0.47 |
| U4 | TERT | 791 | 0.86 |
| U5 | TERT | 2359 | 2.17 |
| U6 | TERT | 141 | 0 |
| U7 | TERT | 174 | 0 |
| U8 | TERT | 145 | 0 |
| U9 | TERT | 123 | 0 |
| U10 | TERT | 135 | 0 |
实施例3胸水样本中肿瘤细胞核的分选及检测
细胞核重悬液准备：取肺癌患者胸水样本4例(编号依次为A1，A2，A3，A4)，样本量各30mL，500g离心，5分钟，沉淀用0.1％的triton-100溶液中，震荡孵育10分钟，之后，500g离心，5分钟，收集细胞核沉淀并用200uL PBS重悬；
细胞核分选及化学发光检测：具体实验检测流程如实施例1所示；
检测结果如表3所示，检测结果显示，这4例膀胱癌患者样本均有肿瘤细胞检出，说明该体系能够很好的用于胸水样本肿瘤细胞细胞核的分选及检测。
表3胸水样本肿瘤细胞核的检测结果
| 样本类型 | 检测项目 | 发光值 | 浓度值 |
| A1 | TERT | 367 | 0.17 |
| A2 | TERT | 893 | 0.86 |
| A3 | TERT | 434 | 023 |
| A4 | TERT | 1721 | 1.64 |
应当说明的是，上述实施例均可根据需要自由组合。以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。
Claims (7)
1.一种肿瘤细胞的细胞核分选装置，其特征在于，包括分选装置本体；所述分选装置本体沿长度方向的一端设有进液口，另一端设有出液口，所述分选装置本体内沿宽度方向设有多个腔室，多个所述腔室靠近所述进液口的一端分别与所述进液口连通，多个所述腔室靠近所述出液口的一端分别与所述出液口连通；
每个所述腔室内沿所述分选装置本体的长度方向依次设有多个微单元，所述微单元包括流路和捕获通道，相邻两个所述微单元通过所述流路连通，所述流路为弧形，所述流路位于所述捕获通道的下方，且所述流路的进口端和所述流路的出口端与所述捕获通道位于同一高度，所述捕获通道设置在所述流路的进口端，所述捕获通道的前端朝向所述流路的进口端设置，所述捕获通道的后端朝向所述流路的出口端设置，且所述捕获通道的前端宽度大于后端宽度。
2.根据权利要求1所述的一种肿瘤细胞的细胞核分选装置，其特征在于，
所述捕获通道的前端宽度为5～200μm；
所述捕获通道的后端宽度为1～30μm；
所述捕获通道前端至后端的距离为10～200μm；
所述捕获通道的厚度为10～200μm。
3.根据权利要求2所述的一种肿瘤细胞的细胞核分选装置，其特征在于，
所述捕获通道的前端宽度为20～70μm；
所述捕获通道的后端宽度为1～10μm；
所述捕获通道前端至后端的距离为20～70μm；
所述捕获通道的厚度为20～70μm。
4.根据权利要求1所述的一种肿瘤细胞的细胞核分选装置，其特征在于，
所述流路的宽度为5～200μm；
所述流路的厚度为5～200μm。
5.根据权利要求4所述的一种肿瘤细胞的细胞核分选装置，其特征在于，
所述流路的宽度为50～100μm；
所述流路的厚度为50～100μm。
6.根据权利要求1所述的一种肿瘤细胞的细胞核分选装置，其特征在于，还包括进样机构，所述进样机构包括加样腔和压力往复泵，所述加样腔的进样口设有第一阀门，所述加样腔的出样口设有第二阀门，所述出样口与所述分选装置本体的进液口连通，所述加样腔与所述压力往复泵通过通道连通，所述通道上设有第三阀门。
7.根据权利要求6所述的一种肿瘤细胞的细胞核分选装置，其特征在于，所述通道的内径为5～200μm。
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| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
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| GR01 | Patent grant | ||
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