CN113663035A - 一种能抑制nr1d1活性的天然植物组方及其制备方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种能抑制NR1D1活性的天然植物组方，其原料组成及其质量份比为：百合35～55份、蜂王浆25～50份、大枣15～30份、薏苡仁5～20份、功劳木5～15份、山楂2～10份、火麻仁2～10份、飞扬草1～10份、土荆皮2～8份和茺蔚子2～5份。本发明涉及的组方选用纯天然植物，成分安全，该组方可以通过抑制生物钟调控因子NR1D1的活性进而减少NR1D1对转录活性的抑制作用，降低对CYP19A1启动子上RORE元件的识别与结合。此外，本发明还公开了上述活性天然植物组方的制备方法，采用加压提取法提取，喷雾干燥等，采用本发明的方法制备的粉末能够更大程度的保留有效成分。
Description
技术领域
本发明属于大健康领域，特别是涉及一种能抑制生物钟调控因子NR1D1活性天然植物组方及其制备方法。
背景技术
研究表明昼夜节律性可通过调节类固醇合成关键基因、激素受体基因的表达,以通过类固醇激素分泌的时间和幅度来调节排卵。
NR1D1是核受体亚家族1D组成员1，也是一个转录抑制因子，可以通过结合NR1D1反应元件来抑制靶基因的转录。NR1D1以血红素依赖性方式协调昼夜节律和代谢途径。NR1D1是血红素的受体，结合后会使其与NCOR1/HDAC3核心表达复合物相互作用，增强转录抑制作用。在NR1D1靶基因启动子中识别两类DNA响应元件，并可以根据单体的性质或同型二聚体与DNA结合，具体取决于响应元件的性质。作为单体与由序列5'-[A/G]GGTCA-3'开头并富含A/T的5'序列(RevRE)组成的应答元件结合，或与直接由两个核苷酸(RevDR-2)隔开的核心基序的重复序列。同时，NR1D1也是RORa发挥功能的有效竞争性阻遏物，并通过抑制PPARGC1A(一种有效的血红素合成诱导剂)的表达来调节其配体血红素的水平。NR1D1还调节代谢相关基因的表达，从而将昼夜节律与细胞代谢联系起来。
发明内容
有鉴于此，本发明的目的在于提供一种能抑制生物钟调控因子NR1D1活性天然植物组方及其制备方法。
为了达成上述目的，本发明的技术方案是：
一种能抑制NR1D1活性的天然植物组方，其原料组成及质量份比为：百合35～55份、蜂王浆25～50份、大枣15～30份、薏苡仁5～20份、功劳木5～15份、山楂2～10份、火麻仁2～10份、飞扬草1～10份、土荆皮2～8份和茺蔚子2～5份。
优选地，所述百合产自安徽省，其中王百合苷C含量≥0.30mg·g-1；
所述蜂王浆产自江苏省，其中10-羟基-2-癸烯酸含量≥2.15％；
所述大枣产自新疆，其中烨木酸含量≥800.6mg·kg-1；
所述薏苡仁产自云南曲靖师宗县，其中甘油三油酸酯含量≥0.91％；
所述功劳木产自广西，其中巴马亭含量≥1.28％；
所述山楂产自山东，其中枸橼酸含量≥5.0％；
所述火麻仁产自黑龙江，其中总酚含量≥3.432mg·mL-1；
所述飞扬草产自广西南宁，其中蒲公英萜醇含量≥0.031mg·g-1；
所述土荆皮产自湖北荆门，其中土荆皮乙酸含量≥4.27mg·g-1；
所述茺蔚子产自吉林吉安，其中盐酸水苏碱含量≥38.87mg·g-1。
采用上述技术方案后，本发明一种能抑制NR1D1活性的天然植物组方，具有以下有益效果：本发明采用天然植物，来源广、成本低、无毒副作用，植物组分配方合理，使各植物组分在疗效上产生良好的协同作用，能够明显抑制生物钟调控因子NR1D1的活性(P<0.05)，进而减少NR1D1对转录活性的抑制作用，降低对CYP19A1启动子上RORE元件的识别与结合。能够明显抑制生物钟调控因子NR1D1的活性进而减少NR1D1对转录活性的抑制作用，降低对CYP19A1启动子上RORE元件的识别与结合。
一种能抑制NR1D1活性的天然植物组方的制备方法，包括如下步骤：
S1.称取处方量百合、大枣、薏苡仁、功劳木、山楂、火麻仁、飞扬草和土荆皮，按料液比1：5～1：10加入水，浸泡1～3小时，在压力0.01～0.10MPa，提取温度80～110℃条件下加压提取1小时，三层纱布过滤，重复三次，合并提取液；
S2.将提取液在压力0～0.1MPa，温度为65～90℃条件下减压浓缩至密度为1.06～1.15，在浓缩液中按比例为55％～85％加入无水乙醇除杂，室温静置24～48小时，过滤，在压力0.05～0.1MPa，温度为55～85℃条件下减压浓缩至无乙醇味，得A液；
S3.将S2中所得A液输入雾化器，在进口温度为180～220℃，出口温度为65～80℃条件下进行喷雾干燥，既得粉末B；
S4.称取配方量的蜂王浆加入等体积无菌蒸馏水，混匀后用滤网过滤除杂的纯净蜂王浆溶液；再将纯净蜂王浆溶液放入冷冻干燥剂的托盘中，厚度控制在8-10mm，再将托盘放入冷冻干燥机冷冻成块状固体；
S5.待蜂王浆冷冻成固体后启动真空泵使冷冻干燥机内压力降至20Pa以下，再启动加热系统使冷冻干燥剂内温度上升至-25℃，12h后使其含水量降至10％；
S6.将S4中所得固体进一步真空干燥，即启动真空泵降低冷冻干燥机中的压力，同时将温度稳定在不超过40℃的温度条件下，约4-6h后使其含水量降至约2％，得到块状固体，再将块状固体用粉碎机粉碎，过筛，即得粉末C；
S7.将粉末B和粉末C混合均匀，加入5％-20％的崩解剂并采用直接粉末压片法压成片，片重0.5g，即得本发明所述片剂。
优选地，所述S7中的崩解剂为淀粉黄原酸酯、半纤维素酶、聚乙烯醇接枝共聚淀粉、羧甲基纤维素钠中的一种或几种。
优选地，所述S2中，A液的浓缩密度为1.06～1.15。
采用上述技术方案后，本发明一种能抑制NR1D1活性的天然植物组方的制备方法，通过采用加压提取法(提取压力为0.01～0.10MPa，提取温度80～110℃)提取，相较于传统的常压提取，其植物组分中有效成分的转移率提高4.3倍；此外，采用水提醇沉的提取方法，能够减少药液中的杂质成分，降低给药量，本组方采用喷雾干燥的方式，大大减小粉末的粒度，使粉末的流动性、溶解性大大增加，提高患者依从性，除此之外，蜂王浆经过冷冻干燥，不仅可以完全保留蜂王浆的营养成分和活性组方，而且也能有效解决蜂王浆保质期短、运输不便等问题。
具体实施方式
为了进一步解释本发明的技术方案，下面通过具体实施例来对本发明进行详细阐述。
实施例1
本发明提供的一种能抑制生物钟调控因子NR1D1活性的天然植物组方，其原料组成及质量份比为：百合35～55份、蜂王浆25～50份、大枣15～30份、薏苡仁5～20份、功劳木5～15份、山楂2～10份、火麻仁2～10份、飞扬草1～10份、土荆皮2～8份和茺蔚子2～5份，上述原料均为天然原料。
具体地，所述百合产自安徽省，其中王百合苷C含量≥0.30mg·g-1；
所述蜂王浆产自江苏省，其中10-羟基-2-癸烯酸含量≥2.15％；
所述大枣产自新疆，其中烨木酸含量≥800.6mg·kg-1；
所述薏苡仁产自云南曲靖师宗县，其中甘油三油酸酯含量≥0.91％；
所述功劳木产自广西，其中巴马亭含量≥1.28％；
所述山楂产自山东，其中枸橼酸含量≥5.0％；
所述火麻仁产自黑龙江，其中总酚含量≥3.432mg·mL-1；
所述飞扬草产自广西南宁，其中蒲公英萜醇含量≥0.031mg·g-1；
所述土荆皮产自湖北荆门，其中土荆皮乙酸含量≥4.27mg·g-1；
所述茺蔚子产自吉林吉安，其中盐酸水苏碱含量≥38.87mg·g-1。
与现有技术相比，本发明具有的效益：本发明采用天然植物组方，来源广、成本低、无毒副作用，植物组分配方合理，使各植物组分在疗效上产生良好的协同作用，能够明显抑制生物钟调控因子NR1D1的活性，具体能够通过抑制生物钟调控因子NR1D1的活性进而减少NR1D1对转录活性的抑制作用，降低对CYP19A1启动子上RORE元件的识别与结合。
在本发明上述一种能抑制生物钟调控因子NR1D1活性的天然植物组方配伍的基础上，本发明进一步还提出该组方的制备方法，包括如下步骤：
S1.称取处方量百合、大枣、薏苡仁、功劳木、山楂、火麻仁、飞扬草、土荆皮，按料液比1：5～1：10加入水，浸泡1～3小时，在压力0.01～0.10MPa，提取温度80～110℃条件下加压提取1小时，三层纱布过滤，重复三次，合并提取液；
S2.将提取液在压力0～0.1MPa，温度为65～90℃条件下减压浓缩至密度为1.06～1.15，在浓缩液中按比例为55％～85％加入无水乙醇除杂，室温静置24～48小时，过滤，在压力0.05～0.1MPa，温度为55～85℃条件下减压浓缩至无乙醇味，得A液；
S3.将S2中所得A液输入雾化器，在进口温度为180～220℃，出口温度为65～80℃条件下进行喷雾干燥，既得粉末B；
S4.称取处方量的蜂王浆加入等体积无菌蒸馏水，混匀后用滤网(100目)过滤除杂，的纯净蜂王浆溶液；再将纯净蜂王浆溶液放入冷冻干燥剂的托盘中，厚度控制在8-10mm，再将托盘放入冷冻干燥机冷冻成块状固体；
S5.待蜂王浆冷冻成固体后启动真空泵使冷冻干燥机内压力降至20Pa以下，再启动加热系统使冷冻干燥剂内温度上升至-25℃，12h后使其含水量降至约10％；
S6.将S4中所得固体进一步真空干燥，即启动真空泵降低冷冻干燥机中的压力，同时将温度稳定在30℃左右(不超过40℃)，约4-6h后使其含水量降至约2％，得到块状固体，再将块状固体用粉碎机粉碎，过筛(100目)，即得粉末C；
S7.将粉末B和粉末C混合均匀，加入5％-20％的崩解剂并采用直接粉末压片法压成片，片重0.5g，即得本发明所述片剂。
采用本发明的上述方法步骤，制备一种能抑制生物钟调控因子NR1D1活性的天然植物组方的过程中，上述步骤S1中采用加压水提取的处理方式，优选提取压力为0.01～0.10MPa，温度80～110℃，采用该条件下提取的本发明中药组方，其植物组分中有效成分的转移率提高4.3倍，使其疗效更佳。
同时，在上述步骤S2中减压浓缩，优选压力为0～0.1MPa，温度为65～90℃，浓缩液密度为1.06～1.15，加醇比例为55％～85％，醇沉时间为24～48小时，在此条件下的药液，其醇沉后有效成分的转移率最大。
除此之外，本组方采用喷雾干燥的方式，优选进口温度为180～220℃，出口温度为65～80℃，此方法大大减小粉末的粒度，使粉末的流动性、溶解性大大增加，为患者服用增加依从性。
本发明的一种能抑制生物钟调控因子NR1D1活性的天然植物组方，最终产品形态为片剂，治疗时给药剂量为：每日2次，每次早晚各1片。
实施例2
本发明一种能抑制生物钟调控因子NR1D1活性的天然植物组方，其天然植物组方原料包括：百合50份、蜂王浆50份、大枣30份、薏苡仁20份、功劳木15份、山楂10份、火麻仁10份、飞扬草10份、土荆皮8份和茺蔚子5份。
进一步地，本发明一种能抑制生物钟调控因子NR1D1活性的天然植物组方的制备方法，包括如下步骤：
S1.称取处方量百合、大枣、薏苡仁、功劳木、山楂、火麻仁、飞扬草、土荆皮，按料液比1：5～1：10加入水，浸泡1～3小时，在压力0.01～0.10MPa，提取温度80～110℃条件下加压提取1小时，三层纱布过滤，重复三次，合并提取液；
S2.将提取液在压力0～0.1MPa，温度为65～90℃条件下减压浓缩至密度为1.06～1.15，在浓缩液中按比例为55％～85％加入无水乙醇除杂，室温静置24～48小时，过滤，在压力0.05～0.1MPa，温度为55～85℃条件下减压浓缩至无乙醇味，得A液；
S3.将S2中所得A液输入雾化器，在进口温度为180～220℃，出口温度为65～80℃条件下进行喷雾干燥，既得粉末B；
S4.称取处方量的蜂王浆加入等体积无菌蒸馏水，混匀后用滤网(100目)过滤除杂，的纯净蜂王浆溶液；再将纯净蜂王浆溶液放入冷冻干燥剂的托盘中，厚度控制在8-10mm，再将托盘放入冷冻干燥机冷冻成块状固体；
S5.待蜂王浆冷冻成固体后启动真空泵使冷冻干燥机内压力降至20Pa以下，再启动加热系统使冷冻干燥剂内温度上升至-25℃，12h后使其含水量降至约10％；
S6.将S4中所得固体进一步真空干燥，即启动真空泵降低冷冻干燥机中的压力，同时将温度稳定在30℃左右(不超过40℃)，约4-6h后使其含水量降至约2％，得到块状固体，再将块状固体用粉碎机粉碎，过筛(100目)，即得粉末C；
S7.将粉末B和粉末C混合均匀，加入5％的淀粉黄原酸酯并采用直接粉末压片法压成片，片重0.5g，即得本发明所述片剂。
实施例3
本发明一种能抑制生物钟调控因子NR1D1活性的天然植物组方，其天然植物组方原料包括：百合35份、蜂王浆30份、大枣15份、薏苡仁8份、功劳木15份、山楂8份、火麻仁10份、飞扬草10份、土荆皮8份和茺蔚子5份。
S1.称取处方量百合、大枣、薏苡仁、功劳木、山楂、火麻仁、飞扬草和土荆皮，按料液比1：5～1：10加入水，浸泡1～3小时，在压力0.01～0.10MPa，提取温度80～110℃条件下加压提取1小时，三层纱布过滤，重复三次，合并提取液；
S2.将提取液在压力0～0.1MPa，温度为65～90℃条件下减压浓缩至密度为1.06～1.15，在浓缩液中按比例为55％～85％加入无水乙醇除杂，室温静置24～48小时，过滤，在压力0.05～0.1MPa，温度为55～85℃条件下减压浓缩至无乙醇味，得A液；
S3.将S2中所得A液输入雾化器，在进口温度为180～220℃，出口温度为65～80℃条件下进行喷雾干燥，既得粉末B；
S4.称取处方量的蜂王浆加入等体积无菌蒸馏水，混匀后用滤网(100目)过滤除杂，的纯净蜂王浆溶液；再将纯净蜂王浆溶液放入冷冻干燥剂的托盘中，厚度控制在8-10mm，再将托盘放入冷冻干燥机冷冻成块状固体；
S5.待蜂王浆冷冻成固体后启动真空泵使冷冻干燥机内压力降至20Pa以下，再启动加热系统使冷冻干燥剂内温度上升至-25℃，12h后使其含水量降至约10％；
S6.将S4中所得固体进一步真空干燥，即启动真空泵降低冷冻干燥机中的压力，同时将温度稳定在30℃左右(不超过40℃)，约4-6h后使其含水量降至约2％，得到块状固体，再将块状固体用粉碎机粉碎，过筛(100目)，即得粉末C；
S7.将粉末B和粉末C混合均匀，加入10％淀粉黄原酸酯和半纤维素酶(1:1)并采用直接粉末压片法压成片，片重0.5g，即得本发明所述片剂。
实施例4
本发明一种能抑制生物钟调控因子NR1D1活性的天然植物组方，其天然植物组方原料包括：百合40份、蜂王浆45份、大枣25份、薏苡仁15份、功劳木10份、山楂5份、火麻仁4份、飞扬草3份、土荆皮5份和茺蔚子3份。
S1.称取处方量百合、大枣、薏苡仁、功劳木、山楂、火麻仁、飞扬草、土荆皮，按料液比1：5～1：10加入水，浸泡1～3小时，在压力0.01～0.10MPa，提取温度80～110℃条件下加压提取1小时，三层纱布过滤，重复三次，合并提取液；
S2.将提取液在压力0～0.1MPa，温度为65～90℃条件下减压浓缩至密度为1.06～1.15，在浓缩液中按比例为55％～85％加入无水乙醇除杂，室温静置24～48小时，过滤，在压力0.05～0.1MPa，温度为55～85℃条件下减压浓缩至无乙醇味，得A液；
S3.将S2中所得A液输入雾化器，在进口温度为180～220℃，出口温度为65～80℃条件下进行喷雾干燥，既得粉末B；
S4.称取处方量的蜂王浆加入等体积无菌蒸馏水，混匀后用滤网(100目)过滤除杂，的纯净蜂王浆溶液；再将纯净蜂王浆溶液放入冷冻干燥剂的托盘中，厚度控制在8-10mm，再将托盘放入冷冻干燥机冷冻成块状固体；
S5.待蜂王浆冷冻成固体后启动真空泵使冷冻干燥机内压力降至20Pa以下，再启动加热系统使冷冻干燥剂内温度上升至-25℃，12h后使其含水量降至约10％；
S6.将S4中所得固体进一步真空干燥，即启动真空泵降低冷冻干燥机中的压力，同时将温度稳定在30℃左右(不超过40℃)，约4-6h后使其含水量降至约2％，得到块状固体，再将块状固体用粉碎机粉碎，过筛(100目)，即得粉末C；
S7.将粉末B和粉末C混合均匀，加入16％的羧甲基纤维素钠并采用直接粉末压片法压成片，片重0.5g，即得本发明所述片剂。
上述实施例并非限定本发明的方法，任何所属技术领域的普通技术人员对其所做的适当变化或修饰，皆应视为不脱离本发明的专利范畴。
Claims (5)
1.一种能抑制NR1D1活性的天然植物组方，其特征在于：其原料组成及质量份比为：百合35～55份、蜂王浆25～50份、大枣15～30份、薏苡仁5～20份、功劳木5～15份、山楂2～10份、火麻仁2～10份、飞扬草1～10份、土荆皮2～8份和茺蔚子2～5份。
2.如权利要求1所述的一种能抑制NR1D1活性的天然植物组方，其特征在于：
所述百合产自安徽省，其中王百合苷C含量≥0.30mg·g-1；
所述蜂王浆产自江苏省，其中10-羟基-2-癸烯酸含量≥2.15％；
所述大枣产自新疆，其中烨木酸含量≥800.6mg·kg-1；
所述薏苡仁产自云南曲靖师宗县，其中甘油三油酸酯含量≥0.91％；
所述功劳木产自广西，其中巴马亭含量≥1.28％；
所述山楂产自山东，其中枸橼酸含量≥5.0％；
所述火麻仁产自黑龙江，其中总酚含量≥3.432mg·mL-1；
所述飞扬草产自广西南宁，其中蒲公英萜醇含量≥0.031mg·g-1；
所述土荆皮产自湖北荆门，其中土荆皮乙酸含量≥4.27mg·g-1；
所述茺蔚子产自吉林吉安，其中盐酸水苏碱含量≥38.87mg·g-1。
3.如权利要求1所述的一种能抑制NR1D1活性的天然植物组方的制备方法，其特征在于：包括如下步骤：
S1.称取处方量百合、大枣、薏苡仁、功劳木、山楂、火麻仁、飞扬草和土荆皮，按料液比1：5～1：10加入水，浸泡1～3小时，在压力0.01～0.10MPa，提取温度80～110℃条件下加压提取1小时，三层纱布过滤，重复三次，合并提取液；
S2.将提取液在压力0～0.1MPa，温度为65～90℃条件下减压浓缩至密度为1.06～1.15，在浓缩液中按比例为55％～85％加入无水乙醇除杂，室温静置24～48小时，过滤，在压力0.05～0.1MPa，温度为55～85℃条件下减压浓缩至无乙醇味，得A液；
S3.将S2中所得A液输入雾化器，在进口温度为180～220℃，出口温度为65～80℃条件下进行喷雾干燥，既得粉末B；
S4.称取配方量的蜂王浆加入等体积无菌蒸馏水，混匀后用滤网过滤除杂的纯净蜂王浆溶液；再将纯净蜂王浆溶液放入冷冻干燥剂的托盘中，厚度控制在8-10mm，再将托盘放入冷冻干燥机冷冻成块状固体；
S5.待蜂王浆冷冻成固体后启动真空泵使冷冻干燥机内压力降至20Pa以下，再启动加热系统使冷冻干燥剂内温度上升至-25℃，12h后使其含水量降至10％；
S6.将S4中所得固体进一步真空干燥，即启动真空泵降低冷冻干燥机中的压力，同时将温度稳定在不超过40℃的温度条件下，约4-6h后使其含水量降至约2％，得到块状固体，再将块状固体用粉碎机粉碎，过筛，即得粉末C；
S7.将粉末B和粉末C混合均匀，加入5％-20％的崩解剂并采用直接粉末压片法压成片，片重0.5g，即得本发明所述片剂。
4.如权利要求3所述的一种能抑制NR1D1活性的天然植物组方的制备方法，其特征在于：所述S7中的崩解剂为淀粉黄原酸酯、半纤维素酶、聚乙烯醇接枝共聚淀粉、羧甲基纤维素钠中的一种或几种。
5.如权利要求3所述的一种能抑制NR1D1活性的天然植物组方的制备方法，其特征在于：所述S2中，A液的浓缩密度为1.06～1.15。
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| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN114854792A (zh) * | 2022-04-24 | 2022-08-05 | 广州中医药大学(广州中医药研究院) | 人nr1d1报告基因质粒、稳转细胞株及其构建方法和应用 |
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2021
- 2021-09-01 CN CN202111020546.XA patent/CN113663035A/zh active Pending
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN114854792A (zh) * | 2022-04-24 | 2022-08-05 | 广州中医药大学(广州中医药研究院) | 人nr1d1报告基因质粒、稳转细胞株及其构建方法和应用 |
| CN114854792B (zh) * | 2022-04-24 | 2023-12-12 | 广州中医药大学(广州中医药研究院) | 人nr1d1报告基因质粒、稳转细胞株及其构建方法和应用 |
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