CN113658635B - 核酸检测结果的自动判定方法、装置及其应用 - Google Patents

核酸检测结果的自动判定方法、装置及其应用 Download PDF

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Abstract

本发明提供了一种核酸检测结果的自动判定方法、装置及其应用。该自动判定方法包括：获取多个核酸样本检测的原始数据；根据预设的不同大小的核酸区段，将原始数据转化并导出为相应区段的指标数值；根据相应区段的指标数值，按照预设的判定逻辑对多个核酸样本的检测结果进行判定，并生成对应判定结果。该方法利用自动化的核酸提取检测及数字化自动判定逻辑，提高检测通量的同时，消除主观判定结果偏差，节约人力成本。

Description

核酸检测结果的自动判定方法、装置及其应用
技术领域
本发明涉及核酸检测领域，具体而言，涉及一种核酸检测结果的自动判定方法、装置及其应用。
背景技术
DNA/RNA来源于不同的样本(如动物、植物、细菌等)，提取的核酸状态不同，其检测方法也有所不同。目前市面DNA检测常用的方法是琼脂糖凝胶电泳和qubit定量检测相结合的方式，RNA检测常用的方法是NanoDrop定量检测、琼脂糖凝胶电泳或者Agilent 2100定性检测相结合的方式。这些检测方式不仅通量低、时间长，而且依赖于人的主观判定。
发明内容
本发明的主要目的在于提供一种核酸检测结果的自动判定方法、装置及其应用，以解决现有技术中的检测通量低且存在主观判定偏差的问题。
为了实现上述目的，根据本发明的一个方面，提供了一种核酸检测结果的自动判定方法，该自动判定方法包括：获取多个核酸样本检测的原始数据；根据预设的不同大小的核酸区段，将原始数据转化并导出为相应区段的指标数值；根据相应区段的指标数值，按照预设的判定逻辑对多个核酸样本的检测结果进行判定，并生成对应判定结果。
进一步地，多个核酸样本为DNA样本；优选地，预设的不同大小的核酸区段为：50bp-170000bp、50-500bp、3000bp-170000bp、5000bp-170000bp及1000-170000bp。
进一步地，相应区段的指标数值指各区段的浓度值，根据相应区段的指标数值，按照预设的判定逻辑对多个核酸样本的检测结果进行判定，并生成对应判定结果包括：对50bp-170000bp区域的浓度进行判定，若50bp-170000bp的浓度<X1ng/μL，优选0.4≤X1≤0.8，则判定结果生成为“核酸总量不足”；若50bp-170000bp的浓度≥X1ng/μL，则进一步对DNA样本降解程度进行判定，若3000bp-170000bp浓度与50-170000bp浓度的比值<X2，优选25％≤X2≤35％，则判定结果生成为“第一程度的降解”，则进一步判定1000bp-170000bp浓度与50-170000bp的浓度比值是否<X3，优选55％≤X3≤70％；若1000bp-170000bp浓度与50-170000bp的浓度比值<X3，则判定结果生成为“第二程度的降解”，第二程度的降解比第一程度的降解严重；若1000bp-170000bp浓度与50-170000bp的浓度比值≥X3，或者3000bp-170000bp浓度与50-170000bp浓度的比值≥X2，则进一步对杂带进行判定；若50-500bp浓度与50-170000bp浓度的比值≤X4，优选25％≤X4≤35％，则判定结果生成为“合格”；若50-500bp浓度与50-170000bp浓度的比值>X4，则对杂带进行进一步判定；若50-500bp浓度与5000-170000bp浓度的比值<X5，优选45％≤X5≤60％，则判定结果生成为“合格，第一程度杂带”；若50-500bp浓度与5000-170000bp浓度的比值≥X5，则判定结果生成为“不合格，第二程度杂带”。
进一步地，多个核酸样本为RNA样本；优选地，预设的不同大小的核酸区段为：总浓度区段、18S浓度区段、18S降解区段、5S浓度区段以及基因组浓度区段；优选地，当RNA样本为动物样本时，总浓度区段为50nt-6500nt；当RNA样本为植物样本时，总浓度区段为50nt-4900nt；优选地，18S浓度区段为1500nt-2200nt；优选地，18S降解区段为200nt-1500nt；优选地，5S浓度区段为50nt-200nt；优选地，基因组浓度区段为10000nt-250000nt。
进一步地，RNA样本为动物样本，相应区段的指标数值指各区段的浓度值和RQN值，根据相应区段的指标数值，按照预设的判定逻辑对多个核酸样本的检测结果进行判定，并生成对应判定结果包括：对RNA样本的总浓度区段的浓度值进行判定，若总浓度区段的浓度值<Y1 ng/μL，优选3.0≤Y1≤3.8，则判定结果生成为“不合格”，需要重检；若总浓度区段的浓度值≥Y1 ng/μL，判定结果生成为“浓度合格”，需要进一步判定18S的浓度；若1500nt-2200nt浓度<Y2 ng/μL，优选0.8≤Y2≤1.5，则判定结果生成为“不合格”；若1500nt-2200nt浓度≥Y2 ng/μL，则进一步判定RQN值；若RQN≥Y3，优选5.1≤Y3≤5.8时，则判定结果生成为“合格”；若RQN<Y4，优选Y4≤2.5时，则判定结果生成为“不合格”；若Y4≤RQN<Y3时，则继续进行18S降解比例判定，若18S降解浓度/(18S+18S降解)总浓度>Y5，优选Y5≥80％，则判定结果生成为“不合格”；若18S降解浓度/(18S+18S降解)总浓度≤Y6，优选65％≤Y6≤75％，则判定结果生成为“4”；若Y6<18S降解/(18S+18S降解)≤Y5，则判定结果生成为“5”；对于18S比例的判断结果生成为“4”的动物样本，则进一步判定5S比例，若(50nt-200nt浓度)/(50nt-6500nt浓度)≤Y7，优选Y7≤55％，则判定结果生成为“合格”；对于18S比例的判断结果生成为“5”的动物样本，则进一步判定5S比例，若5S比例≤Y7，则判定结果生成为“风险”；若5S比例＞Y7，则判定结果生成为“不合格”；对于判定结果生成为“合格”的RNA样本，进一步判定基因组比例；若(10000nt-250000nt浓度)/(50nt-6500nt浓度)≥Y8，优选Y8≥4.5％，则判定结果生成为“基因组污染”。
进一步地，RNA样本为植物样本，相应区段的指标数值指各区段的浓度值和RQN值，根据相应区段的指标数值，按照预设的判定逻辑对多个核酸样本的检测结果进行判定，并生成对应判定结果包括：对RNA样本的总浓度区段的浓度值进行判定，若总浓度区段的浓度值<Z1 ng/μL，优选3.0≤Z1≤3.8，则判定结果生成为“不合格”，需要重检；若总浓度区段的浓度值≥Z1 ng/μL，判定结果生成为“浓度合格”，需要进一步判定RQN值；若RQN≥Z2，优选Z2≥4时，则判定结果生成为“合格”；若RQN<Z3，优选Z3≤2时，则判定结果生成为“不合格”；若Z3≤RQN<Z2时，则继续对18S降解比例进行判定，即对18S降解的浓度与(18S+18S降解)总浓度进行判定；若18S降解比例≤Z4，优选Z4≤35％，则判定结果生成为“4”；若18S降解比例＞Z5，优选Z5≥50％时，则判定结果生成为“不合格”；若Z4<18S降解比例≤Z5，则判定结果生成为“5”；对于判断结果生成为“4”的样本，进一步判定5S比例(50nt-200nt浓度)/(50nt-4900nt浓度)，若5S比例≤Z6，优选Z6≤55％，则判定结果生成为“合格”；对于判断结果生成为“5”的样本，进一步判定5S比例(50nt-200nt浓度)/(50nt-4900nt浓度)，若5S比例≤Z6，优选Z6≤55％，则判定结果生成为“风险”，若5S比例＞Z6，则判定结果生成为“不合格”；对于判定结果生成为“合格”的RNA样本，进一步判定基因组比例(10000nt-250000nt浓度)/(50nt-4900nt浓度)；若基因组比例≥Z7，优选Z7≥3.5％，则判定结果生成为“基因组污染”。
进一步地，在获取多个核酸样本检测的原始数据之前，自动判定方法还包括：对待检测的多个核酸样本进行扫码，从而获得多个核酸样本的样本信息，其中，样本信息包括如下多种：样本编号、核酸类型、物种来源、组织或细胞来源、核酸提取方式。
进一步地，在获取多个核酸样本检测的原始数据之前，自动判定方法还包括：采用核酸检测分析仪对多个核酸样本进行检测，获得原始数据；优选地，核酸检测分析仪为Agilent 5400；优选地，同时对95个核酸样本进行检测。
根据本申请的第二个方面，提供了一种建库用核酸质检方法，该核酸质检方法包括按照上述任一种自动判定方法对核酸检测结果进行判定。
根据本申请第三个方面，提供了一种建库方法，该建库方法包括：对待建库的核酸，采用上述任一种自动判定方法进行质检；对质检结果为合格者进行文库构建，得到测序文库。
根据本申请第四个方面，提供了一种核酸检测结果的自动判定装置，该自动判定装置包括获取模块、转化导出模块及判断模块，其中，获取模块用于获取多个核酸样本检测的原始数据；转化导出模块用于根据预设的不同大小的核酸区段，将原始数据转化并导出为相应区段的指标数值；判断模块用于根据相应区段的指标数值，按照预设的判定逻辑对多个核酸样本的检测结果进行判定，并生成对应判定结果。
进一步地，多个核酸样本为DNA样本；优选地，预设的不同大小的核酸区段为：50bp-170000bp、50-500bp、3000bp-170000bp、5000bp-170000bp及1000-170000bp。
进一步地，相应区段的指标数值指各区段的浓度值，判断模块包括：DNA总浓度判断子模块，用于对50bp-170000bp区域的浓度进行判定，若50bp-170000bp的浓度<X1ng/μL，优选0.4≤X1≤0.8，则判定结果生成为“核酸总量不足”；第一降解程度判断子模块，用于当50bp-170000bp的浓度≥X1ng/μL时，进一步对DNA样本降解程度进行判定，并且当3000bp-170000bp浓度与50-170000bp浓度的比值<X2，优选25％≤X2≤35％时，将判定结果生成为“第一程度的降解”，第二降解程度判断子模块，用于进一步判定1000bp-170000bp浓度与50-170000bp的浓度比值是否<X3，优选55％≤X3≤70％，并且当1000bp-170000bp浓度与50-170000bp的浓度比值<X3时，将判定结果生成为“第二程度的降解”，第二程度的降解比第一程度的降解严重；第一杂带判断子模块，用于当1000bp-170000bp浓度与50-170000bp的浓度比值≥X3，或者3000bp-170000bp浓度与50-170000bp浓度的比值≥X2时，则进一步对杂带进行判定，并且当50-500bp浓度与50-170000bp浓度的比值≤X4，优选25％≤X4≤35％，将判定结果生成为“合格”；第二杂带判断子模块，用于当50-500bp浓度与50-170000bp浓度的比值>X4，则对杂带进行进一步判定，并且当50-500bp浓度与5000-170000bp浓度的比值<X5，优选45％≤X5≤60％时，将判定结果生成为“合格，第一程度杂带”；第三杂带判断子模块，用于当50-500bp浓度与5000-170000bp浓度的比值≥X5，则判定结果生成为“不合格，第二程度杂带”，其中第二程度杂带的严重程度高于第一程度杂带。
进一步地，多个核酸样本为RNA样本；优选地，预设的不同大小的核酸区段为：总浓度区段、18S浓度区段、18S降解区段、5S浓度区段以及基因组浓度区段；优选地，当RNA样本为动物样本时，总浓度区段为50nt-6500nt；当RNA样本为植物样本时，总浓度区段为50nt-4900nt；优选地，18S浓度区段为1500nt-2200nt；优选地，18S降解区段为200nt-1500nt；优选地，5S浓度区段为50nt-200nt；优选地，基因组浓度区段为10000nt-250000nt。
进一步地，RNA样本为动物样本，相应区段的指标数值指各区段的浓度值和RQN值，判断模块包括：第一RNA总浓度判断子模块，用于对RNA样本的总浓度区段的浓度值进行判定，若总浓度区段的浓度值<Y1 ng/μL，优选3.0≤Y1≤3.8，则判定结果生成为“不合格”，需要重检；第一18S浓度判断子模块，用于当总浓度区段的浓度值≥Y1 ng/μL，判定结果生成为“浓度合格”时，进一步判定18S的浓度，并且当1500nt-2200nt浓度<Y2 ng/μL，优选0.8≤Y2≤1.5时，将判定结果生成为“不合格”；第一RQN值判断子模块，用于当1500nt-2200nt浓度≥Y2 ng/μL时，进一步判定RQN值，并且当RQN≥Y3，优选5.1≤Y3≤5.8时，将判定结果生成为“合格”；第二RQN值判断子模块，用于当RQN<Y4，优选Y4≤2.5时，将判定结果生成为“不合格”；第一18S降解比例判断子模块，用于当Y4≤RQN<Y3时，继续进行18S降解比例判定，并且当18S降解浓度/(18S+18S降解)总浓度>Y5，优选Y5≥80％时，将判定结果生成为“不合格”；第二18S降解比例判断子模块，用于当18S降解浓度/(18S+18S降解)总浓度≤Y6，优选65％≤Y6≤75％，将判定结果生成为“4”；第三18S降解比例判断子模块，Y6<18S降解/(18S+18S降解)≤Y5，则判定结果生成为“5”；第一5S比例判断子模块，用于对于18S比例的判断结果生成为“4”的动物样本，进一步判定5S比例，并且当(50nt-200nt浓度)/(50nt-6500nt浓度)≤Y7，优选Y7≤55％时，将判定结果生成为“合格”；第二5S比例判断子模块，用于对于18S比例的判断结果生成为“5”的动物样本，进一步判定5S比例，并且当5S比例≤Y7，则判定结果生成为“风险”；若5S比例＞Y7，则判定结果生成为“不合格”；第一基因组比例判子模块，用于对于判定结果生成为“合格”的RNA样本，进一步判定基因组比例，并且当(10000nt-250000nt浓度)/(50nt-6500nt浓度)≥Y8，优选Y8≥4.5％，则判定结果生成为“基因组污染”。
进一步地，RNA样本为植物样本，相应区段的指标数值指各区段的浓度值和RQN值，判断模块包括：第二RNA总浓度判断子模块，用于对RNA样本的总浓度区段的浓度值进行判定，若总浓度区段的浓度值<Z1 ng/μL，优选3.0≤Z1≤3.8，则判定结果生成为“不合格”，需要重检；第三RQN值判断子模块，用于当总浓度区段的浓度值≥Z1ng/μL时，判定结果生成为“浓度合格”，进一步判定RQN值；并当RQN≥Z2，优选Z2≥4时，将判定结果生成为“合格”；第四RQN值判断子模块，用于当RQN<Z3，优选Z3≤2时，将判定结果生成为“不合格”；第一18S降解程度判断子模块值，用于当Z3≤RQN<Z2时，进一步对18S降解比例，即18S降解的浓度/(18S+18S降解)总浓度进行判定，并当18S降解比例≤Z4，优选Z4≤35％，将判定结果生成为“4”；第二18S降解程度判断子模块值，用于当18S降解比例＞Z5，优选Z5≥50％时，将判定结果生成为“不合格”；第三18S降解程度判断子模块值，用于当Z4<18S降解比例≤Z5，将判定结果生成为“5”；第三5S比例判断子模块，用于对于判断结果生成为“4”的植物样本，进一步判定5S比例，即(50nt-200nt浓度)/(50nt-4900nt浓度)，并当5S比例≤Z6，优选Z6≤55％时，将判定结果生成为“合格”；第四5S比例判断子模块，用于对于判断结果生成为“5”的植物样本，进一步判定5S比例(50nt-200nt浓度)/(50nt-4900nt浓度)，并当5S比例≤Z6，优选Z6≤55％时，将判定结果生成为“风险”；第五5S比例判断子模块，用于对于判断结果生成为“5”的植物样本，当5S比例＞Z6时，则将判定结果生成为“不合格”；第二基因组比例判子模块，用于对于判定结果生成为“合格”的RNA样本，进一步判定基因组比例，即(10000nt-250000nt浓度)/(50nt-4900nt浓度)，并当基因组比例≥Z7，优选Z7≥3.5％时，将判定结果生成为“基因组污染”。
进一步地，自动判定装置还包括：扫码模块，用于对待检测的多个核酸样本进行扫码，从而获得多个核酸样本的样本信息，其中，样本信息包括如下多种：样本编号、核酸类型、物种来源、组织或细胞来源、核酸提取方式。
进一步地，自动判定装置还包括：检测模块，用于利用核酸检测分析仪对多个核酸样本进行检测，获得原始数据；优选地，核酸检测分析仪为Agilent 5400；优选地，检测模块同时对95个核酸样本进行检测。
应用本发明的技术方案，依托于高通量的片段分析仪(如Agilent 5400)对核酸检测完毕后生成的检测原始数据，通过自动获取原始检测数据，根据设定好的核酸不同大小区段信息，自动导出相关区段的数字结果(即指标数值)，根据孔位抓取区段信息(即95个样本每个样本占一个孔位，对应一个样本的不同区段的信息)，按照预设判定逻辑进行判定，生成对应的判定结果。该方法利用自动化的核酸提取检测及数字化自动判定逻辑，提高检测通量的同时，消除主观判定结果偏差，节约人力成本。
附图说明
构成本申请的一部分的说明书附图用来提供对本发明的进一步理解，本发明的示意性实施例及其说明用于解释本发明，并不构成对本发明的不当限定。在附图中：
图1示出了本发明的实施例7中的采用NanoDrop检测与采用Agilent 5400检测的相关性曲线；
图2示出了本发明的实施例7中的采用Agilent 2100检测与采用Agilent 5400检测的相关性曲线；以及
图3示出了本发明的实施例7中的采用Agilent 2100检测RIN值与采用Agilent5400检测RQN值的相关性曲线。
具体实施方式
需要说明的是，在不冲突的情况下，本申请中的实施例及实施例中的特征可以相互组合。下面将结合实施例来详细说明本发明。
术语解释：
RQN：全称为RNA Quality Number，RNA质量数，可以通过毛细管电泳仪直接给出该指标的数值，是对28S和18S质量及浓度的评估，一般认为RQN值越高，降解程度越低。需要说明的是，本申请中的28S、18S和5S分别是指28S rRNA、18S rRNA和5S rRNA。
如背景技术所提到的，传统的核酸检测的操作和判断是人手工完成，并且人为手动输入，手动导出，人为手动判定，这样的检测及判断过程，不仅通量低且依赖人的主观判定，为了改造这一状况，本发明尝试提供一种自动化的核酸提取检测及数字化自动判定逻辑，提高检测通量的同时，消除主观判定结果偏差，节约人力成本。具体改进思路如下：
在原有的qubit定量检测、NanoDrop定量检测、凝胶电泳定性检测、Agilent 2100定性检测相结合的检测方式的基础上进行检测方法的优化，并通过对大量不同来源和物种的DNA和RNA进行检测，与原有的qubit定量检测+凝胶电泳(DNA)和NanoDrop定量检测+Agilent 2100定性检测(RNA)检测结果进行比对，并结合后期的建库结果，梳理开发出一套数字化的逻辑化的判定软件。从将通量低、耗时长并且依托于人工主观判定的流程，升级为数字化的逻辑判定，并且将95个核酸样本进行同步检测，提高检测通量，并且实现同步检测95个核酸样本，用时一个小时左右。
升级后的检测设备依托于高通量的片段分析仪(如Agilent 5400)，设备检测完毕后生成对应的检测原始数据，本申请改进后的分析软件通过自动载入原始检测数据，根据设定好的核酸不同大小区段信息，自动导出相关区段的数字结果，系统根据孔位抓取区段信息(即95个样本每个样本占一个孔位，对应一个样本的不同区段的信息)，按照预设判定逻辑进行判定，生成对应的判定结果。
该软件判定方法实现了定性和定量同时判定，形成一套针对WGS(Whole GenomeSequencing)、WES(Whole Exome Sequencing)文库构建的DNA判定标准，和RNA-seq文库构建的RNA判定标准。通过该判定结果决定DNA/RNA是否进行后续建库，实现了大量的人员成本的节约。
传统的检测动作和判断是人手工完成，并且人为手动输入，手动导出，人为手动判定，但本申请开发的操作流程为机械化、自动化完成检测任务，依靠软件自动导出并完成分析和结果传输。
本申请的主要流程如下：
(1)自动检测：配置试剂之前，系统给到机械臂指令，利用机械臂将所需耗材和试剂搬运到工作站上，搬运完毕后，机械臂给到系统指令，此时系统给与工作站指令，调用配置试剂的程序，然后工作站根据程序去执行动作，配置好需要上Agilent 5400检测的混合液，配置好后，系统收到指令，同时系统将接下来要进行操作的指令发送给机械臂，机械臂将配置好的混合液封膜，离心后撕膜，放置在暂时存放区，同时系统开始给Agilent 5400指令；Agilent 5400收到指令后，自动推出样本检测所需要用的上样区，机械臂将对应的混合液运送到Agilent 5400样本检测的上样区板位，放置好后，机械臂给与系统指令，系统给与Agilent 5400指令，将上样区收回，Agilent 5400调用对应检测的方法，进行样本检测，DNA和RNA检测时间均为64min左右，其中分析软件在Smear Analysis界面依次从上到下输入区段，输入完毕后点击Apply to all，最后点击该界面的右下角的Save CurrentConfiguration即弹出对应的文件夹，将此区段保存到相应的检测方法下即可。
(2)自动判定：核酸检测结束后，设备根据已经保存好的设定的区段信息，自动对检测后的原始数据进行分析，并自动导出图片和分析好的区段信息，其中系统已经写好对应的判定逻辑，区段信息导好后，系统抓取自动导出的区段信息，根据判定逻辑输出判定结果，并将判定结果生成CSV文件，通过开发的回传接口，将判定结果自动导入系统中，并指导建库。
在上述研究结果基础上，申请人提出了本申请的技术方案。
实施例1
在一典型的实施例中，提供了一种核酸检测结果的自动判定方法，该自动判定方法包括：获取多个核酸样本检测的原始数据；根据预设的不同大小的核酸区段，将原始数据转化并导出为相应区段的指标数值；根据相应区段的指标数值，按照预设的判定逻辑对多个核酸样本的检测结果进行判定，并生成对应判定结果。
上述核酸检测结果的自动判定方法，依托于高通量的片段分析仪(如Agilent5400)对核酸检测完毕后生成的检测原始数据，通过自动获取原始检测数据，根据设定好的核酸不同大小区段信息，自动导出相关区段的数字结果(即指标数值)，根据孔位抓取区段信息(即95个样本每个样本占一个孔位，对应一个样本的不同区段的信息)，按照预设判定逻辑进行判定，生成对应的判定结果。该方法利用自动化的核酸提取检测及数字化自动判定逻辑，提高检测通量的同时，消除主观判定结果偏差，节约人力成本。
由于是自动化的核酸片段分析仪及自动化的判断流程，因而能够同时处理多个核酸样本。具体的核酸样本可以是DNA样本，也可以是RNA样本，RNA样本又可以根据物种类别的不同进一步细分为植物RNA样本或动物RNA样本。不同的核酸类型和/或物种类别，上述自动化判定方法中，采用不同的预设核酸区段，各区段的核酸片段大小也不同。
在一种优选的实施例中，多个核酸样本为DNA样本；优选地，预设的不同大小的核酸区段为：50bp-170000bp、50-500bp、3000bp-170000bp、5000bp-170000bp及1000bp-170000bp。其中，50bp-170000bp代表了DNA总浓度，50-500bp代表杂带，3000bp-170000bp代表3000bp以上DNA的总浓度，5000bp-170000bp及1000bp-170000bp分别代表了5000bp以上及1000bp以上的DNA的总浓度。
上述预设的判断逻辑，根据核酸类型和物种类别的不同而有所不同。其中，DNA样本与RNA样本的判断逻辑不同。
在一种优选的实施例中，相应区段的指标数值指各区段的浓度值，根据相应区段的指标数值，按照预设的判定逻辑对多个核酸样本的检测结果进行判定，并生成对应判定结果包括：对50bp-170000bp区域的浓度进行判定，若50bp-170000bp的浓度<X1ng/μL，优选0.4≤X1≤0.8，则判定结果生成为“核酸总量不足”；若50bp-170000bp的浓度≥X1ng/μL，则进一步对DNA样本降解程度进行判定，若3000bp-170000bp浓度与50-170000bp浓度的比值<X2，优选25％≤X2≤35％，则判定结果生成为“第一程度的降解”，则进一步判定1000bp-170000bp浓度与50-170000bp的浓度比值是否<X3，优选55％≤X3≤70％；若1000bp-170000bp浓度与50-170000bp的浓度比值<X3，则判定结果生成为“第二程度的降解”，第二程度的降解比第一程度的降解严重；若1000bp-170000bp浓度与50-170000bp的浓度比值≥X3，或者3000bp-170000bp浓度与50-170000bp浓度的比值≥X2，则进一步对杂带进行判定；若50-500bp浓度与50-170000bp浓度的比值≤X4，优选25％≤X4≤35％，则判定结果生成为“合格”；若50-500bp浓度与50-170000bp浓度的比值>X4，则对杂带进行进一步判定；若50-500bp浓度与5000-170000bp浓度的比值<X5，优选45％≤X5≤60％，则判定结果生成为“合格，第一程度杂带”；若50-500bp浓度与5000-170000bp浓度的比值≥X5，则判定结果生成为“不合格，第二程度杂带”。
RNA样本的判断逻辑与DNA样本的判断逻辑不同，基本流程如下(根据植物样本或动物样本略有不同)：
1)先判断总浓度区段的浓度是否满足建库要求，满足则直接判定合格，若不满足，则进一步判定RQN值的范围；
2)若RQN值满足要求，则直接判定合格；若低于最低阈值，则直接判定不合格；若处于最低阈值与合格要求值之间，则进一步判定18S降解比例；
3)若18S降解比例低于一定阈值，则进一步判定5S的比例，若5S的比例低于阈值，则判定该样本合格；若18S降解比例高于一定阈值，则直接判定不合格；若18S降解比例处于中间程度，则进一步判定5S的比例；
4)若5S的比例低于阈值，则判定该样本存在一定风险，若5S RNA的比例高于阈值，则判断为不合格；
5)对所有判定为合格的样本，进一步进行基因组比例判定，若基因组DNA的浓度占比大于阈值，则判定存在基因组污染，不能进行后续建库。
在一种优选的实施例中，多个核酸样本为RNA样本；优选地，预设的不同大小的核酸区段为：总浓度区段、18S浓度区段、18S降解区段(28S和5.8S在现行的NGS判定方法中，不作为主要的判定依据)、5S浓度区段以及基因组浓度区段；优选地，当RNA样本为动物样本时，总浓度区段为50nt-6500nt；当RNA样本为植物样本时，总浓度区段为50nt-4900nt；优选地，18S浓度区段为1500nt-2200nt；优选地，18S降解区段为200nt-1500nt；优选地，5S浓度区段为50nt-200nt；优选地，基因组浓度区段为10000nt-250000nt。
在一种优选的实施例中，RNA样本为动物样本，相应区段的指标数值指各区段的浓度值和RQN值，根据相应区段的指标数值，按照预设的判定逻辑对多个核酸样本的检测结果进行判定，并生成对应判定结果包括：对RNA样本的总浓度区段的浓度值进行判定，若总浓度区段的浓度值<Y1 ng/μL，优选3.0≤Y1≤3.8，则判定结果生成为“不合格”，需要重检；若总浓度区段的浓度值≥Y1 ng/μL，判定结果生成为“浓度合格”，需要进一步判定18S的浓度；若1500nt-2200nt浓度<Y2 ng/μL，优选0.8≤Y2≤1.5，则判定结果生成为“不合格”；若1500nt-2200nt浓度≥Y2 ng/μL，则进一步判定RQN值；若RQN≥Y3，优选5.1≤Y3≤5.8时，则判定结果生成为“合格”；若RQN<Y4，优选Y4≤2.5时，则判定结果生成为“不合格”；若Y4≤RQN<Y3时，则继续进行18S降解比例判定，若18S降解浓度/(18S+18S降解)总浓度>Y5，优选Y5≥80％，则判定结果生成为“不合格”；若18S降解浓度/(18S+18S降解)总浓度≤Y6，优选65％≤Y6≤75％，则判定结果生成为“4”；若Y6<18S降解/(18S+18S降解)≤Y5，则判定结果生成为“5”；对于18S比例的判断结果生成为“4”的动物样本，则进一步判定5S比例，若(50nt-200nt浓度)/(50nt-6500nt浓度)≤Y7，优选Y7≤55％，则判定结果生成为“合格”；对于18S比例的判断结果生成为“5”的动物样本，则进一步判定5S比例，若5S比例≤Y7，则判定结果生成为“风险”；若5S比例＞Y7，则判定结果生成为“不合格”；对于判定结果生成为“合格”的RNA样本，进一步判定基因组比例；若(10000nt-250000nt浓度)/(50nt-6500nt浓度)≥Y8，优选Y8≥4.5％，则判定结果生成为“基因组污染”。
在一种优选的实施例中，RNA样本为植物样本，相应区段的指标数值指各区段的浓度值和RQN值，根据相应区段的指标数值，按照预设的判定逻辑对多个核酸样本的检测结果进行判定，并生成对应判定结果包括：对RNA样本的总浓度区段的浓度值进行判定，若总浓度区段的浓度值<Z1 ng/μL，优选3.0≤Z1≤3.8，则判定结果生成为“不合格”，需要重检；若总浓度区段的浓度值≥Z1 ng/μL，判定结果生成为“浓度合格”，需要进一步判定RQN值；若RQN≥Z2，优选Z2≥4时，则判定结果生成为“合格”；若RQN<Z3，优选Z3≤2时，则判定结果生成为“不合格”；若Z3≤RQN<Z2时，则继续对18S降解比例进行判定，即对18S降解的浓度与(18S+18S降解)总浓度进行判定；若18S降解比例≤Z4，优选Z4≤35％，则判定结果生成为“4”；若18S降解比例＞Z5，优选Z5≥50％时，则判定结果生成为“不合格”；若Z4<18S降解比例≤Z5，则判定结果生成为“5”；对于判断结果生成为“4”的样本，进一步判定5S比例(50nt-200nt浓度)/(50nt-4900nt浓度)，若5S比例≤Z6，优选Z6≤55％，则判定结果生成为“合格”；对于判断结果生成为“5”的样本，进一步判定5S比例(50nt-200nt浓度)/(50nt-4900nt浓度)，若5S比例≤Z6，优选Z6≤55％，则判定结果生成为“风险”，若5S比例＞Z6，则判定结果生成为“不合格”；对于判定结果生成为“合格”的RNA样本，进一步判定基因组比例(10000nt-250000nt浓度)/(50nt-4900nt浓度)；若基因组比例≥Z7，优选Z7≥3.5％，则判定结果生成为“基因组污染”。
上述植物RNA样本和动物RNA样本的判断逻辑中各判定标准的数值范围，本申请通过无数次实验总结，并经试验验证得到，采用这些数值范围进行判断准确率高。
为进一步提高自动化程度，本申请的自动化判定方法还包括了自动判定样本类型等其他信息的步骤，为核酸检测结果的判定之前及之后各步骤的自动化操作提供方便，从而利于形成从样本接受到核酸提取、核酸检测、核酸检测结果判定以及后续文库构建形成一整套自动化流程奠定基础。
在一种优选的实施例中，在获取多个核酸样本检测的原始数据之前，自动判定方法还包括：对待检测的多个核酸样本进行扫码(对每个样本设置条形码或二维码，以记录各样本的具体信息)，从而获得多个核酸样本的样本信息，其中，样本信息包括如下多种：样本编号、核酸类型、物种来源、组织或细胞来源、核酸提取方式。通过扫描获取待判定样本的样本信息，有助于上述自动化判定流程中根据获取的核酸样本的样本信息，自动配置核酸区段信息及判定逻辑。
在一种优选的实施例中，在获取多个核酸样本检测的原始数据之前，自动判定方法还包括：采用核酸检测分析仪对多个核酸样本进行检测，获得原始数据；优选地，核酸检测分析仪为Agilent 5400；优选地，同时对95个核酸样本进行检测。利用该自动化判定方法能够提供检测及判定通量。
实施例2
在本实施例中，提供了一种建库用核酸质检标准，该核酸质检标准包括按照上述任一种自动判定方法对核酸检测结果进行判定。
通过上述自动判定方法对待测核酸样本进行质量判定，从而为建库提供可靠依据，提高建库成功率，节省人力及时间成本。
实施例3
在本实施例中，提供了一种建库方法，该建库方法包括：对待建库的核酸，采用上述任一种自动判定方法进行质检；对质检结果为合格者进行文库构建，得到测序文库。
通过上述自动判定方法对待测核酸样本进行质检，并质检通过者进行建库，从而为建库提供了可靠依据，提高建库成功率，节省人力及时间成本。
下面进一步结合更多实施例来详细介绍本申请的方案及其效果。
实施例4：DNA自动判定软件设计及结果导出
1)DNA检测自动导出设置如下：在Agilent 5400分析软件中输入目标区段：50bp-170000bp、50-500bp、3000bp-170000bp、5000bp-170000bp、1000-170000bp；
2)输好后将对应的区段配置进行保存，并保存到对应的运行方法下，则分析软件已配置好自动导出区段设置，程序运行结束后则分析软件自动进行打开，并按区段导出对应的图片和smear分析区段，将对应的区段配置进行保存，并保存到对应的运行方法下，则分析软件已配置好自动导出区段设置，程序运行结束后则分析软件自动进行打开，并按照图中的区段导出对应的图片和smear分析区段。
3)DNA检测结果系统输入
将判定逻辑写入到系统中，系统会将上述自动导出的Smear分析结果，按照系统中写入的判定逻辑分别获取对应的区段，并按照判定逻辑进行逐步的判定。最终判定合格的样本进行建库。DNA根据导出的5个区段：50bp-170000bp、50-500bp、3000bp-170000bp、5000bp-170000bp、1000-170000bp，按照如下判定逻辑分别进行逐步判定。
①对50bp-170000bp软件微积分得出的区域浓度进行判定，如果50bp-170000bp的浓度<0.6ng/μL，则该DNA核酸样本总量不足，不建议进行建库。
②如果50bp-170000bp的浓度≥0.6ng/μL，则对DNA样本降解程序进行判定，即
(1)3000bp-170000bp浓度/50-170000bp浓度占比<30％则在判定结果处输出“中度降解”；
(2)再进行1000bp-170000bp/50-170000bp浓度占比的判定，如果此占比<60％，则直接输出“严重降解”，
(3)若3000bp-170000bp浓度/50-170000bp浓度占比≥30％，或1000bp-170000bp/50-170000bp浓度占比判定后≥60％则进行杂带的判定；
③杂带判定中，50-500bp/50-170000bp≤30％，则对杂带的判定为合格，如果50-500bp/50-170000bp>30％,则对杂带再次进行判定，50-500bp/5000-170000bp≥50％则输出“不合格，严重杂带”，若50-500bp/5000-170000bp<50％则输出杂带的判定结果，“合格，轻微杂带”；
④对上述的判定结果进行组合，输出最终的判定结果。
将上述逻辑写到自动判定系统中，系统根据抓取的片段进行自动判定。
实施例5：RNA自动判定软件设计及结果导出
1)RNA检测系统设置
RNA检测自动导出设置如下：在Agilent 5400分析软件中输入目标区段：总浓度区段(50nt-6500nt)、18S浓度区段(1500nt-2200nt)、18S降解区段(200nt-1500nt)、5S浓度区段(50nt-200nt)及基因组浓度区段(10000nt-250000nt)。
2)输好后将对应的区段配置进行保存，并保存到对应的运行方法下，则分析软件已配置好自动导出区段设置，程序运行结束后则分析软件自动进行打开，并按照区段导出对应的图片和smear分析区段。
3)RNA检测结果系统输入
将RNA的判定逻辑写入到系统中，系统会将自动导出的smear分析结果文件(SmearAnalysis Result.csv)和质量表文件(Quality Table.csv)两个文件按照系统中写入的逻辑分别获取对应的区段，并按照逻辑进行逐步的判定，最终判定合格的样本用来指导后续RNA建库。
4)动物RNA检测结果判定
动物RNA检测对应的总浓度Conc.(ng/μL)和RQN值，查看Quality Table.csv表格，每一个孔位对应一个检测样本，每一个样本对应一个检测浓度和RQN值。
对应导入系统后的判定结果包含总浓度区段(50nt-6500nt)、18S浓度区段(1500nt-2200nt)、18S降解区段(200nt-1500nt)、5S浓度区段(50nt-200nt)、基因组浓度区段(10000nt-250000nt)。
RNA动物判定根据Smear Analysis Result.csv和Quality Table.csv两个表格中的导出数据进行逐步判定，判定逻辑如下：
①先在对应Quality Table的Excel中，查看Conc.(ng/μL)，如果Conc.(ng/μL)<3.5ng/μL时，输出“不合格”重检(可能存在未加上样本)或总量不足”。在Conc.(ng/μL)≥3.5ng/μL时，输出“浓度合格”，进行第2步判定。
②查看Smear Analysis Result.csv表格，18S浓度即1500nt-2200nt浓度<1ng/μL,输出“不合格”，1500nt-2200nt浓度≥1,则进行下一步判定；
③进行RQN值的判定，若RQN≥5.5时，输出“合格”，若RQN<2时，则直接输出“不合格”，若2≤RQN<5.5时，则继续进行下一步判定；
④进行主条带的判定，18S降解比例判定，18S降解浓度/(18S+18S降解)总浓度>85％，则直接输出“不合格”，18S降解浓度/(18S+18S降解)总浓度≤70％，输出“4”，70％<18S降解浓度/(18S+18S降解)总浓度≤85％，输出“5”；
⑤18S比例判定输出“4”的动物样本，5S比例，即(50nt-200nt浓度)/(50nt-6500nt浓度)≤50％，输出“合格”，18S比例判定输出“5”的动物样本，5S比例≤50％，输出“风险”，5S比例≥50％，输出“不合格”5S严重；
⑥判断了不合格“浓度低”的RNA样品，不再判定基因组污染，合格RNA样本筛选基因组比例≥5％，判定基因组污染。将上述逻辑写到自动判定系统中，系统根据抓取的片段进行自动判定。
5)植物RNA检测结果判定
与动物RNA检测判定类似，植物RNA导出的片段区域包括总浓度区段(50nt-4900nt)、18S浓度区(1500nt-2000nt)、18S降解区段(200nt-1500nt)、5S浓度区段(50nt-200nt)、基因组浓度区段(10000nt-250000nt)。
RNA植物判定根据Smear Analysis Result.csv和Quality Table.csv两个表格中的导出数据进行逐步判定：
①在Quality Table表格中，Conc.(ng/μL)<3.5ng/μL时，输出“不合格”重检(可能存在未加上样本)/总量不足。在Conc.(ng/μL)≥3.5ng/μL时，输出“2”，进行第2步判定；
②浓度输出“2”的植物样本，若RQN≥4.5时，输出“合格”，2≤RQN<4.5时输出“3”，进行第3步判定，若RQN<2时，输出“不合格”；
③RQN输出“3”的植物样本，继续进行18S降解比例判定，即18S降解浓度/(18S+18S降解)总浓度，若18S降解比例≤30％，输出“4”；若30％<18S降解比例/18S比例≤50％，输出“5”；若18S降解比例>50％，输出“不合格”。
④18S降解比例判定输出“4”的植物样本，若5S比例，即(50nt-200nt浓度)/(50nt-4900nt浓度)≤50％，输出“合格”，18S降解比例判定输出“5”的植物样本，若5S比例≤50％，输出“风险”；若5S比例≥>50％，输出“不合格”5S严重；
⑤判断了不合格“浓度低”的RNA样品，不再判定基因组污染，合格RNA样本筛选基因组比例(10000nt-25000nt浓度)/(50nt-4900nt浓度)≥5％，判定基因组污染。
实施例6DNA检测判定结果对比分析
通过对大量的DNA核酸样本的检测，其中DNA核酸样本采用Agilent 5400检测，与原qubit+凝胶电泳检测相结合方式共同检测样本数971个，其中一致率高达99％(表1)。同时对Agilent 5400检测合格和不合格的样本均进行建库验证，检测合格的样本建库成功，检测不合格的样本建库失败，表明Agilent 5400按照上述逻辑进行结果判定结果准确，对建库具有指导意义。
表1：Agilent 5400检测与原qubit+凝胶电泳检测结果一致性比较
区域 DNA
检测一致样本数 961
检测不一致样本数 9
合计 970
判定一致比例 99.07％
实施例7RNA检测判定结果对比分析
通过对比Agilent 5400检测和Agilent 2100结果，两种方法同时检测动物样本940个，植物1028个，其中两种检测方式的一致比例见表2。使用相同的样本，进行NanoDrop检测、Agilent 2100检测和Agilent 5400(片段分析仪)检测浓度相关性数据如图1和图2所示(NanoDrop检测与Agilent 5400检测的相关性曲线为y＝0.7295x+30.31,R2＝0.9302；Agilent 2100检测和Agilent 5400检测的相关性曲线为y＝1.0204x+49.626,R2＝0.9084)。Agilent 2100检测RIN值和Agilent 5400检测RQN值相关性曲线如图3所示(y＝0.7812x+2.0967,R2＝0.8916)。同时对Agilent 5400检测合格和不合格的样本均进行建库验证，检测合格的样本建库成功，检测不合格的样本建库失败，说明Agilent 5400按照上述自动化判定方法的判定结果准确率较高，因而对建库具有指导意义。
表2：Agilent 5400和Agilent 2100检测结果对比
区域 RNA-动物 RNA-植物
检测一致样本数 846 956
检测不一致样本数 94 72
合计 940 1028
判定一致比例 90.00％ 93.00％
进一步对Agilent 5400和Agilent 2100检测结果合格的样本进行建库合格率统计，结果如表3所示：
表3：Agilent 5400和Agilent 2100检测合格样本建库合格率
RNA-动物建库合格率 RNA-植物建库合格率
Agilent 5400 95.37％ 95.7％
Agilent 2100 93.21％ 94.1％
通过以上的实施方式的描述，本领域的技术人员可以清楚地了解到根据上述实施例的方法可借助软件加必需的通用硬件平台的方式来实现，当然也可以通过硬件，但很多情况下前者是更佳的实施方式。基于这样的理解，本发明的技术方案本质上或者说对现有技术做出贡献的部分可以以软件产品的形式体现出来，该计算机软件产品存储在一个存储介质(如ROM/RAM、磁碟、光盘)中，包括若干指令用以使得一台终端设备(可以是手机，计算机，服务器，或者网络设备等)执行本发明各个实施例所述的方法。
对应于上述方式，本申请还分别提供了一种核酸检测结果的自动判定装置，该装置用于实现上述实施例及优选实施方式，已经进行过说明的不再赘述。如以下所使用的，术语“模块”可以实现预定功能的软件和/或硬件的组合。尽管以下实施例所描述的装置较佳地以软件来实现，但是硬件，或者软件和硬件的组合的实现也是可能并被构想的。
下面结合可选的实施例进一步说明。
实施例9
本实施例提供了一种核酸检测结果的自动判定装置，该自动判定装置包括获取模块、转化导出模块及判断模块，其中，获取模块用于获取多个核酸样本检测的原始数据；转化导出模块用于根据预设的不同大小的核酸区段，将原始数据转化并导出为相应区段的指标数值；判断模块用于根据相应区段的指标数值，按照预设的判定逻辑对多个核酸样本的检测结果进行判定，并生成对应判定结果。
在一种优选的实施例中，多个核酸样本为DNA样本；优选地，预设的不同大小的核酸区段为：50bp-170000bp、50-500bp、3000bp-170000bp、5000bp-170000bp及1000-170000bp。
在一种优选的实施例中，相应区段的指标数值指各区段的浓度值，判断模块包括：DNA总浓度判断子模块，用于对50bp-170000bp区域的浓度进行判定，若50bp-170000bp的浓度<X1ng/μL，优选0.4≤X1≤0.8，则判定结果生成为“核酸总量不足”；第一降解程度判断子模块，用于当50bp-170000bp的浓度≥X1ng/μL时，进一步对DNA样本降解程度进行判定，并且当3000bp-170000bp浓度与50-170000bp浓度的比值<X2，优选25％≤X2≤35％时，将判定结果生成为“第一程度的降解”，第二降解程度判断子模块，用于进一步判定1000bp-170000bp浓度与50-170000bp的浓度比值是否<X3，优选55％≤X3≤70％，并且当1000bp-170000bp浓度与50-170000bp的浓度比值<X3时，将判定结果生成为“第二程度的降解”，第二程度的降解比第一程度的降解严重；第一杂带判断子模块，用于当1000bp-170000bp浓度与50-170000bp的浓度比值≥X3，或者3000bp-170000bp浓度与50-170000bp浓度的比值≥X2时，则进一步对杂带进行判定，并且当50-500bp浓度与50-170000bp浓度的比值≤X4，优选25％≤X4≤35％，将判定结果生成为“合格”；第二杂带判断子模块，用于当50-500bp浓度与50-170000bp浓度的比值>X4，则对杂带进行进一步判定，并且当50-500bp浓度与5000-170000bp浓度的比值<X5，优选45％≤X5≤60％时，将判定结果生成为“合格，第一程度杂带”；第三杂带判断子模块，用于当50-500bp浓度与5000-170000bp浓度的比值≥X5，则判定结果生成为“不合格，第二程度杂带”，其中第二程度杂带的严重程度高于第一程度杂带。
在一种优选的实施例中，多个核酸样本为RNA样本；优选地，预设的不同大小的核酸区段为：总浓度区段、18S浓度区段、18S降解区段、5S浓度区段以及基因组浓度区段；优选地，当RNA样本为动物样本时，总浓度区段为50nt-6500nt；当RNA样本为植物样本时，总浓度区段为50nt-4900nt；优选地，18S浓度区段为1500nt-2200nt；优选地，18S降解区段为200nt-1500nt；优选地，5S浓度区段为50nt-200nt；优选地，基因组浓度区段为10000nt-250000nt。
在一种优选的实施例中，RNA样本为动物样本，相应区段的指标数值指各区段的浓度值和RQN值，判断模块包括：第一RNA总浓度判断子模块，用于对RNA样本的总浓度区段的浓度值进行判定，若总浓度区段的浓度值<Y1 ng/μL，优选3.0≤Y1≤3.8，则判定结果生成为“不合格”，需要重检；第一18S浓度判断子模块，用于当总浓度区段的浓度值≥Y1 ng/μL，判定结果生成为“浓度合格”时，进一步判定18S的浓度，并且当1500nt-2200nt浓度<Y2 ng/μL，优选0.8≤Y2≤1.5时，将判定结果生成为“不合格”；第一RQN值判断子模块，用于当1500nt-2200nt浓度≥Y2 ng/μL时，进一步判定RQN值，并且当RQN≥Y3，优选5.1≤Y3≤5.8时，将判定结果生成为“合格”；第二RQN值判断子模块，用于当RQN<Y4，优选Y4≤2.5时，将判定结果生成为“不合格”；第一18S降解比例判断子模块，用于当Y4≤RQN<Y3时，继续进行18S降解比例判定，并且当18S降解浓度/(18S+18S降解)总浓度>Y5，优选Y5≥80％时，将判定结果生成为“不合格”；第二18S降解比例判断子模块，用于当18S降解浓度/(18S+18S降解)总浓度≤Y6，优选65％≤Y6≤75％，将判定结果生成为“4”；第三18S降解比例判断子模块，Y6<18S降解/(18S+18S降解)≤Y5，则判定结果生成为“5”；第一5S比例判断子模块，用于对于18S比例的判断结果生成为“4”的动物样本，进一步判定5S比例，并且当(50nt-200nt浓度)/(50nt-6500nt浓度)≤Y7，优选Y7≤55％时，将判定结果生成为“合格”；第二5S比例判断子模块，用于对于18S比例的判断结果生成为“5”的动物样本，进一步判定5S比例，并且当5S比例≤Y7，则判定结果生成为“风险”；若5S比例＞Y7，则判定结果生成为“不合格”；第一基因组比例判子模块，用于对于判定结果生成为“合格”的RNA样本，进一步判定基因组比例，并且当(10000nt-250000nt浓度)/(50nt-6500nt浓度)≥Y8，优选Y8≥4.5％，则判定结果生成为“基因组污染”。
在一种优选的实施例中，RNA样本为植物样本，相应区段的指标数值指各区段的浓度值和RQN值，判断模块包括：第二RNA总浓度判断子模块，用于对RNA样本的总浓度区段的浓度值进行判定，若总浓度区段的浓度值<Z1 ng/μL，优选3.0≤Z1≤3.8，则判定结果生成为“不合格”，需要重检；第三RQN值判断子模块，用于当总浓度区段的浓度值≥Z1ng/μL时，判定结果生成为“浓度合格”，进一步判定RQN值；并当RQN≥Z2，优选Z2≥4时，将判定结果生成为“合格”；第四RQN值判断子模块，用于当RQN<Z3，优选Z3≤2时，将判定结果生成为“不合格”；第一18S降解程度判断子模块值，用于当Z3≤RQN<Z2时，进一步对18S降解比例，即18S降解的浓度/(18S+18S降解)总浓度进行判定，并当18S降解比例≤Z4，优选Z4≤35％，将判定结果生成为“4”；第二18S降解程度判断子模块值，用于当18S降解比例＞Z5，优选Z5≥50％时，将判定结果生成为“不合格”；第三18S降解程度判断子模块值，用于当Z4<18S降解比例≤Z5，将判定结果生成为“5”；第三5S比例判断子模块，用于对于判断结果生成为“4”的植物样本，进一步判定5S比例，即(50nt-200nt浓度)/(50nt-4900nt浓度)，并当5S比例≤Z6，优选Z6≤55％时，将判定结果生成为“合格”；第四5S比例判断子模块，用于对于判断结果生成为“5”的植物样本，进一步判定5S比例(50nt-200nt浓度)/(50nt-4900nt浓度)，并当5S比例≤Z6，优选Z6≤55％时，将判定结果生成为“风险”；第五5S比例判断子模块，用于对于判断结果生成为“5”的植物样本，当5S比例＞Z6时，则将判定结果生成为“不合格”；第二基因组比例判子模块，用于对于判定结果生成为“合格”的RNA样本，进一步判定基因组比例，即(10000nt-250000nt浓度)/(50nt-4900nt浓度)，并当基因组比例≥Z7，优选Z7≥3.5％时，将判定结果生成为“基因组污染”。
在一种优选的实施例中，自动判定装置还包括：扫码模块，用于对待检测的多个核酸样本进行扫码，从而获得多个核酸样本的样本信息，其中，样本信息包括如下多种：样本编号、核酸类型、物种来源、组织或细胞来源、核酸提取方式。
在一种优选的实施例中，自动判定装置还包括：检测模块，用于利用核酸检测分析仪对多个核酸样本进行检测，获得原始数据；优选地，核酸检测分析仪为Agilent 5400；优选地，检测模块同时对95个核酸样本进行检测。
从以上的描述中，可以看出，本发明上述的实施例实现了如下技术效果：依托于高通量的片段分析仪Agilent 5400，设备检测完毕后生成对应的检测原始数据，本申请改进后的自动判定方法通过自动获取原始检测数据，根据设定好的核酸不同大小区段信息，自动导出相关区段的数字结果，系统根据孔位抓取区段信息(即95个样本每个样本占一个孔位，对应一个样本的不同区段的信息)，按照预设判定逻辑进行判定，生成对应的判定结果。该判定方法实现了定性和定量同时判定，形成一套针对WGS(Whole Genome Sequencing)、WES(Whole Exome Sequencing)文库构建的DNA判定标准，和RNA-seq文库构建的RNA判定标准。通过该判定结果决定DNA/RNA是否进行后续建库，实现了大量的人员成本的节约。
以上所述仅为本发明的优选实施例而已，并不用于限制本发明，对于本领域的技术人员来说，本发明可以有各种更改和变化。凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。

Claims (12)

1.一种核酸检测结果的自动判定方法，其特征在于，所述自动判定方法包括：
获取多个核酸样本检测的原始数据；
根据预设的不同大小的核酸区段，将所述原始数据转化并导出为相应区段的指标数值；
根据相应区段的所述指标数值，按照预设的判定逻辑对多个所述核酸样本的检测结果进行判定，并生成对应判定结果；
当多个所述核酸样本为DNA样本时，所述预设的不同大小的核酸区段为：50bp-170000bp、50-500bp、3000bp-170000bp、5000bp-170000bp及1000-170000bp；
所述相应区段的指标数值指各区段的浓度值，根据相应区段的所述指标数值，按照预设的判定逻辑对多个所述核酸样本的检测结果进行判定，并生成对应判定结果包括：
对50bp-170000bp区域的浓度进行判定，若50bp-170000bp的浓度<X1ng/μL， 0.4≤X1≤0.8，则所述判定结果生成为“核酸总量不足”；
若50bp-170000bp的浓度≥X1ng/μL，则进一步对DNA样本降解程度进行判定，
若3000bp-170000bp的浓度与50-170000bp的浓度的比值<X2，25%≤X2≤35%，则所述判定结果生成为“第一程度的降解”，则进一步判定1000bp-170000bp的浓度与50-170000bp的浓度的比值是否<X3，55%≤X3≤70%，
若1000bp-170000bp浓度与50-170000bp的浓度比值<X3，则所述判定结果生成为“第二程度的降解”，所述第二程度的降解比所述第一程度的降解严重；
若1000bp-170000bp浓度与50-170000bp的浓度比值≥X3，或者3000bp-170000bp浓度与50-170000bp浓度的比值≥X2，则进一步对杂带进行判定；
若50-500bp的浓度与50-170000bp的浓度的比值≤X4，25%≤X4≤35%，则所述判定结果生成为“合格”；
若50-500bp的浓度与50-170000bp的浓度的比值> X4，则对所述杂带进一步判定；
若50-500bp的浓度与5000-170000bp的浓度的比值<X5，45%≤X5≤60%，则所述判定结果生成为“合格，第一程度杂带”；
若50-500bp浓度与5000-170000bp浓度的比值≥X5，则所述判定结果生成为“不合格，第二程度杂带”，其中所述第二程度杂带的严重程度高于所述第一程度杂带；
当多个所述核酸样本为RNA样本时，所述预设的不同大小的核酸区段为：总浓度区段、18S浓度区段、18S降解区段、5S浓度区段以及基因组浓度区段；
当所述RNA样本为动物样本时，所述总浓度区段为50nt-6500nt；当所述RNA样本为植物样本时，所述总浓度区段为50nt-4900nt；所述18S浓度区段为1500nt-2200nt；所述18S降解区段为200nt-1500nt；所述5S浓度区段为50nt-200nt；所述基因组浓度区段为10000nt-250000nt；
当所述RNA样本为动物样本时，所述相应区段的指标数值指各区段的浓度值和RQN值，根据相应区段的所述指标数值，按照预设的判定逻辑对多个所述核酸样本的检测结果进行判定，并生成对应判定结果包括：
对所述RNA样本的总浓度区段的浓度值进行判定，若所述总浓度区段的浓度值<Y1 ng/μL，3.0≤Y1≤3.8，则所述判定结果生成为“不合格”，需要重检；
若所述总浓度区段的浓度值≥Y1 ng/μL，所述判定结果生成为“浓度合格”，需要进一步判定18S的浓度；
若1500nt-2200nt浓度<Y2 ng/μL，0.8≤Y2≤1.5，则所述判定结果生成为“不合格”；
若1500nt-2200nt浓度≥Y2 ng/μL，则进一步判定RQN值；
若RQN≥Y3，5.1≤Y3≤5.8时，则所述判定结果生成为“合格”；
若RQN<Y4，Y4≤2.5时，则所述判定结果生成为“不合格”；
若Y4≤RQN<Y3时，则继续进行18S降解比例判定，
若18S降解浓度/(18S+18S降解)总浓度>Y5，Y5≥80%，则所述判定结果生成为“不合格”；
若18S降解浓度/(18S+18S降解)总浓度≤Y6，65%≤Y6≤75%，则所述判定结果生成为“4”；
若Y6<18S降解浓度/(18S+18S降解) 总浓度≤Y5，则所述判定结果生成为“5”；
对于所述18S比例的所述判断结果生成为“4”的动物样本，则进一步判定5S比例，即（50nt-200nt浓度）/（50nt-6500nt浓度），若所述5S比例≤Y7，Y7≤55%，则所述判定结果生成为“合格”；
对于所述18S比例的所述判断结果生成为“5”的动物样本，则进一步判定5S比例，若所述5S比例≤Y7，则所述判定结果生成为“风险”；若所述5S比例＞Y7，则所述判定结果生成为“不合格”；
对于所述判定结果生成为“合格”的RNA样本，进一步判定基因组比例；
若（10000nt-250000nt浓度）/(50nt-6500nt浓度)≥Y8，Y8≥4.5%，则所述判定结果生成为“基因组污染”；
当所述RNA样本为植物样本时，所述相应区段的指标数值指各区段的浓度值和RQN值，根据相应区段的所述指标数值，按照预设的判定逻辑对多个所述核酸样本的检测结果进行判定，并生成对应判定结果包括：
对所述RNA样本的总浓度区段的浓度值进行判定，若所述总浓度区段的浓度值<Z1 ng/μL，3.0≤Z1≤3.8，则所述判定结果生成为“不合格”，需要重检；
若所述总浓度区段的浓度值≥Z1ng/μL，所述判定结果生成为“浓度合格”，需要进一步判定RQN值；
若RQN≥Z2，Z2≥4时，则所述判定结果生成为“合格”；
若RQN<Z3，Z3≤2时，则所述判定结果生成为“不合格”；
若Z3≤RQN<Z2时，则继续对18S降解比例进行判定，所述18S降解比例为18S降解浓度/(18S+18S降解)总浓度；
若所述18S降解比例≤Z4，Z4≤35%，则所述判定结果生成为“4”；
若所述18S降解比例＞Z5，Z5≥50%时，则所述判定结果生成为“不合格”；
若Z4<所述18S降解比例≤Z5，则所述判定结果生成为“5”；
对于所述判断结果生成为“4”的植物样本，进一步判定5S比例，即（50nt-200nt浓度）/（50nt-4900nt浓度），若所述5S比例≤Z6，Z6≤55%，则所述判定结果生成为“合格”；
对于所述判断结果生成为“5”的植物样本，进一步判定5S比例，即（50nt-200nt浓度）/（50nt-4900nt浓度），若所述5S比例≤Z6，Z6≤55%，则所述判定结果生成为 “风险”，若所述5S比例＞Z6，则所述判定结果生成为“不合格”；
对于所述判定结果生成为“合格”的RNA样本，进一步判定基因组比例，即（10000nt-250000nt浓度）/(50nt-4900nt浓度)；
若所述基因组比例≥Z7，Z7≥3.5%，则所述判定结果生成为“基因组污染”。
2.根据权利要求1所述的自动判定方法，其特征在于，在获取多个核酸样本检测的原始数据之前，所述自动判定方法还包括：
对待检测的多个所述核酸样本进行扫码，从而获得多个所述核酸样本的样本信息，其中，所述样本信息包括如下多种：样本编号、核酸类型、物种来源、组织或细胞来源或核酸提取方式。
3.根据权利要求1所述的自动判定方法，其特征在于，在获取多个核酸样本检测的原始数据之前，所述自动判定方法还包括：
采用核酸检测分析仪对多个所述核酸样本进行检测，获得所述原始数据。
4.根据权利要求3所述的自动判定方法，其特征在于，所述核酸检测分析仪为Agilent5400。
5.根据权利要求3所述的自动判定方法，其特征在于，同时对95个所述核酸样本进行检测。
6.一种建库用核酸质检方法，其特征在于，所述核酸质检方法包括按照权利要求1至5中任一项所述的自动判定方法对核酸检测结果进行判定。
7.一种建库方法，其特征在于，所述建库方法包括：
对待建库的核酸，采用权利要求1至5中任一项所述的自动判定方法进行质检；
对质检结果为合格者进行文库构建，得到测序文库。
8.一种核酸检测结果的自动判定装置，其特征在于，所述自动判定装置包括：
获取模块，用于获取多个核酸样本检测的原始数据；
转化导出模块，用于根据预设的不同大小的核酸区段，将所述原始数据转化并导出为相应区段的指标数值；
判断模块，用于根据相应区段的所述指标数值，按照预设的判定逻辑对多个所述核酸样本的检测结果进行判定，并生成对应判定结果；
当所述多个所述核酸样本为DNA样本时，所述预设的不同大小的核酸区段为：50bp-170000bp、50-500bp、3000bp-170000bp、5000bp-170000bp及1000-170000bp，所述相应区段的指标数值指各区段的浓度值，所述判断模块包括：
DNA总浓度判断子模块，用于对50bp-170000bp区域的浓度进行判定，若50bp-170000bp的浓度<X1ng/μL，0.4≤X1≤0.8，则所述判定结果生成为“核酸总量不足”；
第一降解程度判断子模块，用于当50bp-170000bp的浓度≥X1ng/μL时，进一步对DNA样本降解程度进行判定，并且当3000bp-170000bp浓度与50-170000bp浓度的比值<X2，25%≤X2≤35%时，将所述判定结果生成为“第一程度的降解”，
第二降解程度判断子模块，用于进一步判定1000bp-170000bp浓度与50-170000bp的浓度比值是否<X3，55%≤X3≤70%，并且当1000bp-170000bp浓度与50-170000bp的浓度比值<X3时，将所述判定结果生成为“第二程度的降解”，所述第二程度的降解比所述第一程度的降解严重；
第一杂带判断子模块，用于当1000bp-170000bp浓度与50-170000bp的浓度比值≥X3，或者3000bp-170000bp浓度与50-170000bp浓度的比值≥X2时，则进一步对杂带进行判定，并且当50-500bp浓度与50-170000bp浓度的比值≤X4，25%≤X4≤35%，将所述判定结果生成为“合格”；
第二杂带判断子模块，用于当50-500bp浓度与50-170000bp浓度的比值>X4，则对所述杂带进行进一步判定，并且当50-500bp浓度与5000-170000bp浓度的比值<X5，45%≤X5≤60%时，将所述判定结果生成为“合格，第一程度杂带”；
第三杂带判断子模块，用于当50-500bp浓度与5000-170000bp浓度的比值≥X5，则所述判定结果生成为“不合格，第二程度杂带”，其中所述第二程度杂带的严重程度高于所述第一程度杂带；
当多个所述核酸样本为RNA样本时，所述预设的不同大小的核酸区段为：总浓度区段、18S浓度区段、18S降解区段、5S浓度区段以及基因组浓度区段；
当所述RNA样本为动物样本时，所述总浓度区段为50nt-6500nt；当所述RNA样本为植物样本时，所述总浓度区段为50nt-4900nt；所述18S浓度区段为1500nt-2200nt；所述18S降解区段为200nt-1500nt；所述5S浓度区段为50nt-200nt；所述基因组浓度区段为10000nt-250000nt；
当所述RNA样本为动物样本时，所述相应区段的指标数值指各区段的浓度值和RQN值，所述判断模块包括：
第一RNA总浓度判断子模块，用于对所述RNA样本的总浓度区段的浓度值进行判定，若所述总浓度区段的浓度值<Y1 ng/μL，3.0≤Y1≤3.8，则所述判定结果生成为“不合格”，需要重检；
第一18S浓度判断子模块，用于当所述总浓度区段的浓度值≥Y1 ng/μL，所述判定结果生成为“浓度合格”时，进一步判定18S的浓度，并且当1500nt-2200nt浓度<Y2 ng/μL，0.8≤Y2≤1.5时，将所述判定结果生成为“不合格”；
第一RQN值判断子模块，用于当1500nt-2200nt浓度≥Y2 ng/μL时，进一步判定RQN值，并且当RQN≥Y3，5.1≤Y3≤5.8时，将所述判定结果生成为“合格”；
第二RQN值判断子模块，用于当RQN<Y4，Y4≤2.5时，将所述判定结果生成为“不合格”；
第一18S降解比例判断子模块，用于当Y4≤RQN<Y3时，继续进行18S降解比例判定，并且当18S降解浓度/(18S+18S降解)总浓度>Y5，Y5≥80%时，将所述判定结果生成为“不合格”；
第二18S降解比例判断子模块，用于当18S降解浓度/(18S+18S降解)总浓度≤Y6，65%≤Y6≤75%，将所述判定结果生成为“4”；
第三18S降解比例判断子模块，Y6<18S降解/(18S+18S降解)≤Y5，则所述判定结果生成为“5”；
第一5S比例判断子模块，用于对于所述18S比例的所述判断结果生成为“4”的动物样本，进一步判定5S比例，并且当（50nt-200nt浓度）/（50nt-6500nt浓度）≤Y7，Y7≤55%时，将所述判定结果生成为“合格”；
第二5S比例判断子模块，用于对于所述18S比例的所述判断结果生成为“5”的动物样本，进一步判定5S比例，并且当所述5S比例≤Y7，则所述判定结果生成为“风险”；若所述5S比例＞Y7，则所述判定结果生成为“不合格”；
第一基因组比例判子模块，用于对于所述判定结果生成为“合格”的RNA样本，进一步判定基因组比例，并且当（10000nt-250000nt浓度）/(50nt-6500nt浓度)≥Y8，Y8≥4.5%，则所述判定结果生成为“基因组污染”；
当所述RNA样本为植物样本时，所述相应区段的指标数值指各区段的浓度值和RQN值，所述判断模块包括：
第二RNA总浓度判断子模块，用于对所述RNA样本的总浓度区段的浓度值进行判定，若所述总浓度区段的浓度值<Z1 ng/μL，3.0≤Z1≤3.8，则所述判定结果生成为“不合格”，需要重检；
第三RQN值判断子模块，用于当所述总浓度区段的浓度值≥Z1ng/μL时，所述判定结果生成为“浓度合格”，进一步判定RQN值；并当RQN≥Z2，Z2≥4时，将所述判定结果生成为“合格”；
第四RQN值判断子模块，用于当RQN<Z3，Z3≤2时，将所述判定结果生成为“不合格”；
第一18S降解程度判断子模块值，用于当Z3≤RQN<Z2时，进一步对18S降解比例，即18S降解的浓度/(18S+18S降解)总浓度进行判定，并当所述18S降解比例≤Z4，Z4≤35%，将所述判定结果生成为“4”；
第二18S降解程度判断子模块值，用于当所述18S降解比例＞Z5，Z5≥50%时，将所述判定结果生成为“不合格”；
第三18S降解程度判断子模块值，用于当Z4<所述18S降解比例≤Z5，将所述判定结果生成为“5”；
第三5S比例判断子模块，用于对于所述判断结果生成为“4”的植物样本，进一步判定5S比例，即（50nt-200nt浓度）/（50nt-4900nt浓度），并当所述5S比例≤Z6，Z6≤55%时，将所述判定结果生成为“合格”；
第四5S比例判断子模块，用于对于所述判断结果生成为“5”的植物样本，进一步判定5S比例（50nt-200nt浓度）/（50nt-4900nt浓度），并当所述5S比例≤Z6，Z6≤55%时，将所述判定结果生成为“风险”；
第五5S比例判断子模块，用于对于所述判断结果生成为“5”的植物样本，当所述5S比例＞Z6时，则将所述判定结果生成为“不合格”；
第二基因组比例判子模块，用于对于所述判定结果生成为“合格”的RNA样本，进一步判定基因组比例，即（10000nt-250000nt浓度）/(50nt-4900nt浓度)，并当所述基因组比例≥Z7，Z7≥3.5%时，将所述判定结果生成为“基因组污染”。
9.根据权利要求8所述的自动判定装置，其特征在于，所述自动判定装置还包括：
扫码模块，用于对待检测的多个所述核酸样本进行扫码，从而获得多个所述核酸样本的样本信息，其中，所述样本信息包括如下多种：样本编号、核酸类型、物种来源、组织或细胞来源、核酸提取方式。
10.根据权利要求8所述的自动判定装置，其特征在于，所述自动判定装置还包括：
检测模块，用于利用核酸检测分析仪对多个所述核酸样本进行检测，获得所述原始数据。
11. 根据权利要求10所述的自动判定装置，其特征在于，所述核酸检测分析仪为Agilent 5400。
12.根据权利要求10所述的自动判定装置，其特征在于，
所述检测模块同时对95个所述核酸样本进行检测。
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