CN113631145A - 包含花作为原料的凝胶的制备方法及包含其的化妆品组合物 - Google Patents
包含花作为原料的凝胶的制备方法及包含其的化妆品组合物 Download PDFInfo
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Abstract
本发明涉及一种包含花作为原料的凝胶的制备方法及包含其的化妆品组合物，涉及一种包含诸如山茶花、百合、白牡丹、玫瑰花、莲花等多种花作为原料的凝胶的制备方法及包含其凝胶的化妆品组合物。本发明的包含花作为原料的凝胶是安全的，因为其无需添加分散剂或者稳定剂，还具有良好的分散稳定性和使用感，无毒性。并且，本发明的包含花作为原料的凝胶不仅可以用作凝胶状组合物，还可以有效用作用于皮肤美白、防止或改善皮肤老化，以及保湿的组合物。
Description
技术领域
本申请要求于2019年3月27日向韩国知识产权局提交的申请号为第10-2019-0035382号的专利申请的优先权。
本发明涉及一种包含花作为原料的凝胶的制备方法及包含其的化妆品组合物，涉及一种包含诸如山茶花、百合、白牡丹、玫瑰花、莲花等多种花为原料的凝胶的制备方法及包含其凝胶的化妆品组合物。
背景技术
以往，开发了以花等植物为原料的食品，以及包括美容用途等各种用途的组合物，在以花为原料的组合物的情况下，通过包含粉碎花而得到的花粉末或者从花提取有效成分而得到的提取物作为成分来制备。然而，当花粉末本身用作化妆品组合物的成分时，由于花粉末在组合物的溶液中的分散性非常低，容易出现在溶液中沉淀，或者溶剂和粉末相互分离的分层现象。另外，在包含花的提取物作为组合物的有效成分的情况下，由于提取有效成分的提取工艺复杂、设备昂贵、成本高，因此不经济，并且每种花的有效成分的性质不同，因此持有的提取设备和提取工艺无法适用于各种植物。因此，急需一种改善花粉末在溶液中的分散性的方案，该方案在以花为原料的组合物的制备方法中，无需经过提取工艺即可适用于各种花。
发明内容
技术问题
本发明人进行了深入研究以开发一种改善植物粉末在溶液中的分散性的方案，该方案在以花为原料的组合物的制备方法中，无需经过提取工艺即可适用于各种植物。结果，当氧化工艺引入到微粉碎的花的粉末时，无需添加额外的分散剂或者稳定剂，即可制备具有良好的分散稳定性和使用感的凝胶状组合物，确认其具有良好的功效，从而完成了本发明。因此，本发明的目的在于提供一种包含花作为原料的凝胶组合物及其用途和制备方法。
解决问题的方案
根据本发明的一方面，本发明提供一种花凝胶的制备方法，包括：
步骤(a)，向微粉碎(pulverized)的花粉末中加入至少一种氧化剂进行反应；
步骤(b)，将花粉末提纯并用纯化水稀释；以及
步骤(c)，将花粉末稀释液均质化并浓缩或过滤来制备花凝胶。
本说明书中的术语“花”是指通过在植物中形成种子而进行繁殖功能的生殖器官。在本发明中，“花”只要是本领域中已知为花的植物的一部分就能够足以用作本发明的凝胶组合物的原料，而与形态、开花时期、栽培地点等园艺类型和用途无关。
在本发明的一实例中，上述花由樱花、野杜鹃、连翘、玉兰、蒲公英、牡丹、紫玉兰、兴安杜鹃、油菜花、郁金香、紫罗兰、白头翁、野蔷薇、水仙花、山茱萸、福寿草、映山红、石竹、薤白、紫云英、三色堇、风信子、莓叶委陵菜、三枝九叶草、辽宁堇菜、拟扁果草、朝鲜鸢尾、细辛、银兰、独行菜、长尾鸢尾、鲜黄连、孩儿参、葶苈、欧洲千里光、麻叶绣线菊、韩信草、多腺悬钩子、荷包牡丹、细柱柳、宝盖草、筋骨草、附地菜、婆婆纳、野芝麻、杏花、红蕾荚蒾、齿瓣延胡索、锦带花、兰草、西山堇菜、齿叶白鹃梅、虞美人、黄耆、韩信草、喜林草、勿忘草、白菜花、苹果花、银莲花属、鸢尾属、樱草、橙、铃兰、桂花、缕丝花、牵牛、玫瑰、百合、向日葵、无穷花、打破碗花、鸡冠花、凤仙花、康乃馨、睡莲、鸦片罂粟、火绒草、莲花、桔梗、石榴、鹿蹄草、地锦、雏菊、玉簪、吉林景天、矢车菊、荷包牡丹、水晶兰、柳穿鱼、薄叶皱叶委陵菜、大岩桐、牛膝、林泽兰、蓟、花荵、短果杜鹃、猴子花、草夹竹桃、红花酢浆草、溲疏、锐齿马兰、老鹳草、狼牙委陵菜、忍冬、山野豌豆、黄花石蒜、长鬃蓼、萍蓬草、滨海珍珠菜、女娄菜、鸡矢藤、龙葵、花菖蒲、海棠花、海索面、卵叶扭柄花、小连翘、戟叶蓼、苦参、月见草、鸭跖草、地锦、四叶野豌豆、歪头菜、尖被藜芦、百脉根、香蒲、细风轮菜、稀花蓼、花菖蒲、酸浆、唐菖蒲、含羞草、香蒲、浅裂剪秋罗、毛地黄、山萝花、合欢、多花紫藤、华北蓝盆花、
棣棠花、毛野扁豆、栀子、高山蓼、紫斑风铃草、菊花、秋英、紫茉莉、大花马齿苋、美人蕉、百日菊、翠菊、鸭绿乌头、月见草、少花马蓝、挖耳草、郁陵菊花、瘤毛獐牙菜、荩草、美花风毛菊、细叶菊、短柄乌头、芙蓉花、伪泥胡菜、柳叶白菀、全缘山柳菊、山柳菊、地榆、羌活、独活、紫花前胡、短梗胡枝子、大斑叶兰、雀斑党参、野苦麻、黄紫堇、蓝盆花、海州香薷、长鬃蓼、毛连菜、紫花野菊、山菊、瘤毛獐牙菜、圆苞紫菀、北马兜铃、大吴风草、鸭绿乌头、美花风毛菊、番红花、锐齿马兰、月桂、山茶花、梅花、秋海棠、水仙花、欧洲千里光、蟹爪兰、金盏花、君子兰、狗尾草、海州香薷、伽蓝菜、兰属、石斛属、一品红、朝鲜石蒜、蝴蝶兰、非洲紫罗兰、仙客来、非洲凤仙花、爪叶菊、一枝黄花、疣草、黄紫堇、天名精、山菊、紫菀、酢浆草、兩裂狸藻、黄花败酱、猛一撒、菩提树、夏雪片莲、四桃克、仙客来、红番花、小苍兰及它们的组合组成，但不限于此。
本说明书中的术语“花凝胶”是指以上述花为原料，本发明的制备方法制备的凝胶状组合物。
以下，详细说明本发明的花凝胶的制备方法。
步骤(a)：微粉碎的花粉末的氧化步骤
首先，获取微粉碎的花的粉末。可通过购买或者用粉碎机粉碎花来获得微粉碎的花的粉末。
在本发明中，上述步骤(a)的微粉碎的花粉末的粒径可以为1μm至300μm以下。上述微粉碎的花粉末的粒径越小，具有氧化反应在短时间内进行的比例高的优点。
在本发明的步骤中，向花粉末中加入至少一种氧化剂来进行氧化反应。上述氧化剂可以是次卤酸或其金属盐或者亚卤酸或其金属盐。
在本发明的一实例中，上述次卤酸或其金属盐以及亚卤酸或其金属盐中的“卤素”可以是氯、溴、碘。因此，具体地，可以是次氯酸、次溴酸、次碘酸、亚氯酸、亚溴酸、亚碘酸。
在本发明的另一实例中，上述次卤酸金属盐以及亚卤酸金属盐中的金属可以是锂、钾、钠等碱金属；钙、镁、锶等碱土金属。因此，上述次卤酸盐的具体实例可以例举次氯酸钠、次氯酸钾、次氯酸钙、次氯酸镁、次氯酸锶、次氯酸铵等。在亚氯酸的情况下，亚卤酸盐的具体实例可以例举亚氯酸锂、亚氯酸钾、亚氯酸钠、亚氯酸钙、亚氯酸镁、亚氯酸锶、亚氯酸铵等。并且，也可以使用与上述亚氯酸盐对应的亚溴酸盐、亚碘酸盐。
本步骤的氧化反应可以通过加入硝基氧自由基化合物作为催化剂来进行。上述“硝基氧自由基化合物”可以是硝基氧自由基化合物或者其衍生物。具体地，上述硝基氧自由基化合物为(2,2,6,6-四甲基哌啶-1-基)氧((2,2,6,6-Tetramethylpiperidin-1-yl)oxyl)，硝基氧自由基化合物的衍生物可以是选自由4-乙酰氨基-2,2,6,6-四甲基哌啶1-氧(4-Acetamido-2,2,6,6-tetramethylpiperidine 1-oxyl)；4-氨基-2,2,6,6-四甲基哌啶-d17-1-氧(4-Amino-2,2,6,6-tetramethylpiperidine-d17-1-oxyl)；4-氨基-2,2,6,6-四甲基哌啶-1-氧(4-Amino-2,2,6,6-tetramethylpiperidine-1-oxyl)；2-氮杂金刚烷-N-氧(2-Azaadamantane-N-oxyl)；4-羧基-2,2,6,6-四甲基哌啶1-氧(4-Carboxy-2,2,6,6-tetramethylpiperidine 1-oxyl)；4-羟基-2,2,6,6-四甲基哌啶1-氧(4-Hydroxy-2,2,6,6-tetramethylpiperidine 1-oxyl)；4-羟基-2,2,6,6-四甲基哌啶-d17-1-氧(4-Hydroxy-2,2,6,6-tetramethylpiperidine-d17-1-oxyl)；4-羟基-2,2,6,6-四甲基哌啶1-氧基苯甲酸酯(4-Hydroxy-2,2,6,6-tetramethylpiperidine 1-oxyl benzoate)；4-(2-碘乙酰胺基)-2,2,6,6-四甲基-1-哌啶氧(4-(2-Iodoacetamido)-2,2,6,6-tetramethyl-1-piperidinyloxy)；4-异硫氰酸盐-2,2,6,6-四甲基哌啶1-氧(4-Isothiocyanato-2,2,6,6-tetramethylpiperidine 1-oxyl)；4-马来酰亚胺-2,2,6,6-四甲基-1-哌啶氧(4-Maleimido-2,2,6,6-tetramethyl-1-piperidinyloxy)；4-甲氧基-2,2,6,6-四甲基-1-哌啶氧(4-Methoxy-2,2,6,6-tetramethyl-1-piperidinyloxy)；4-氧-2,2,6,6-四甲基-1-哌啶氧(4-Oxo-2,2,6,6-tetramethyl-1-piperidinyloxy)；4-氧-,2,2,6,6-四甲基哌啶-d16-1-氧(4-Oxo-,2,2,6,6-tetramethylpiperidine-d16-1-oxyl)；4-膦酰氧基-2,2,6,6-四甲基-1-哌啶氧(4-Phosphonooxy-2,2,6,6-tetramethyl-1-piperidinyloxy)；4-甲基丙烯酰氧-2,2,6,6-四甲基哌啶-1-氧(4-Methacryloyloxy-2,2,6,6-tetramethylpiperidine-1-oxyl)；以及2,2,6,6-四甲基-4-(甲基磺氧基)-1-哌啶氧(2,2,6,6-Tetramethyl-4-(methylsulfonyloxy)-1-piperidinooxy)组成的组中的一种以上化合物。
本步骤的氧化反应可以通过加入卤素和碱金属的盐(碱金属盐)、卤素和碱土金属的盐(碱土金属盐)、铵盐作为助催化剂来进行。
作为形成上述碱金属盐、碱土金属盐、铵盐的卤素，可以例举氯、溴、碘。作为形成碱金属盐的碱金属，可以例举锂、钾、钠等。作为形成碱土金属盐的碱土金属，可以例举钙、镁、锶等。
更具体地，可以例举溴化锂、溴化钾、溴化钠、碘化锂、碘化钾、碘化钠、氯化锂、氯化钾、氯化钠、溴化钙、溴化镁、溴化锶、碘化钙、碘化镁、碘化锶、氯化钙、氯化镁、氯化锶等，但不限于此。并且，作为铵盐可以例举溴化铵、碘化铵、氯化铵。其助催化剂可以单独使用或两种以上组合使用，其助催化剂可以形成水合物。
本发明的步骤(a)的氧化反应可以进行2小时至4小时，同时pH保持在9-11。
步骤(b)：氧化的花粉末的提纯和稀释步骤
接着，为了去除氧化的花粉末中未反应的原料和杂质(反应中使用的硝基氧自由基、NaBr、NaClO等原料，以及NaCl等反应副产物)，对花粉末进行提纯，在纯化水中稀释，以进一步微粒化(均质化)。
根据本发明的一实例，上述步骤(b)的提纯可以通过向步骤(a)的反应液中加入醇使花粉末沉淀后过滤沉淀的花粉末的步骤来进行。其中，上述醇可以使用C1至C5的低级醇，并且，将添加醇-沉淀花粉末-过滤的步骤可以重复2次以上。
根据本发明的另一实例，上述步骤(b)的提纯可以通过向步骤(a)的反应液中加入纯化水并膜过滤(超滤)的步骤来进行。如果采用膜过滤方法，在花粉末的氧化步骤中产生的未反应原料和杂质可以在单一过程中去除，而不需要进行上述醇沉淀和纯化水稀释的步骤。
步骤(c)：花粉末稀释液的均质化和花凝胶的制备步骤
最后，将花粉末稀释液通过高压匀质机(microfluidizer)均质化(微粒化)，浓缩或过滤，制备本发明的花凝胶。上述步骤(c)的均质化可以在800巴(bar)至1000巴的压力下进行。
根据本发明的一实例，上述均质化后的浓缩步骤可以在50-65℃的温度下通过减压浓缩或者真空浓缩工艺来进行。
根据本发明的另一实例，上述均质化后的过滤步骤能够以与步骤(b)相同的方式通过膜过滤来进行。
并且，最终制备的花凝胶的花粉末含量可以为0.01-20％(w/v)。根据本发明的一实例，当将上述微粒化的氧化的植物粉末调节到0.01-20％(w/v)的浓度时，表现为凝胶状，同时表现出花原料本身的功能性。当上述制备的花凝胶的花粉末含量小于0.01％(w/v)时，难以根据植物粉末的添加来期待植物原料本身的功效，当大于20％(w/v)时，相对于添加量，功效的增加较小，从而不经济。
根据本发明的另一方面，本发明提供一种花凝胶，包含0.01-20％(w/v)的氧化的微粉碎(pulverized)花粉末和余量的溶剂。
在本发明的一实例中，上述花凝胶通过上述的花凝胶的制备方法来制备。
根据本发明的另一方面，本发明提供一种包含上述花凝胶的化妆品组合物。
本发明所述的上述化妆品组合物可以按照选自由溶液、外用软膏、霜剂、泡沫、营养化妆水、柔软化妆水、面膜、柔软水、乳液、隔离霜、精华素、精油、护发精油、头皮护理液、护发营养液、护发剂、头发护理剂、护发乳、洗发水、护发素、二合一洗发水、头发营养化妆水、啫喱、发蜡、发胶、染发剂、香皂、液体洗涤剂、沐浴用品、防晒霜、防晒油、悬浮液、乳浊液、糊剂(paste)、凝胶、润肤乳、粉末、香皂、含表面活性剂的洗面奶、油剂、粉末状粉底、乳液状粉底、膏状粉底、贴剂、口红、唇彩、眼影、腮红或者眉笔类的彩妆剂型和喷剂组成的组中的剂型来制备，但不限于此。
本发明的化妆品组合物中包含的化妆品可接受的载体根据剂型而不同。当本发明的化妆品组合物的剂型为糊剂、霜剂或者凝胶时，可以使用动物油、植物油、蜡、石蜡、淀粉、西黄蓍胶、纤维素衍生物、聚乙二醇、有机硅、膨润土、硅胶、滑石或者氧化锌等作为载体成分。
当本发明的剂型为粉末或者喷剂时，可以使用乳糖、滑石、硅胶、氢氧化铝、硅酸钙、聚酰胺粉末等作为载体成分，特别是在喷剂的情况下，可进一步包含氢氯氟烃、丙烷/丁烷或者二甲醚等推进剂，但不限于此。这些可以单独使用或两种以上混合使用。
当本发明的剂型为溶液或者乳浊液时，可以使用溶剂、增溶剂或者乳浊化剂作为载体成分，例如可以使用水、乙醇、异丙醇、碳酸二乙酯、乙酸乙酯、苯甲醇、苯甲酸苄酯、丙二醇、1,3-丁基乙二醇油、甘油脂肪酸酯、聚乙二醇或者脱水山梨醇的脂肪酸酯。
当本发明的剂型为悬浮液时，可以使用如水、乙醇或者丙二醇等液体稀释剂、如乙氧基化异硬脂醇、聚氧乙烯山梨糖醇酯和聚氧乙烯脱水山梨醇酯等悬浮剂、微晶纤维素、偏氢氧化铝、膨润土、琼脂或者西黄蓍胶等作为载体成分。
当本发明的剂型为含表面活性剂的洗面奶时，可以使用脂肪醇硫酸盐、脂肪醇醚硫酸盐、磺基琥珀酸单酯、羟乙基磺酸盐、咪唑啉衍生物、牛磺酸甲酯、肌氨酸盐、脂肪醚硫酸胺、烷基酰胺甜菜碱、脂肪醇、脂肪酸甘油酯、脂肪肌氨酸盐、脂肪酸二乙醇酰胺、植物油、羊毛脂衍生物或者乙氧基化甘油脂肪酸酯等作为载体成分。
当本发明的剂型为香皂时，可以使用脂肪酸的碱金属盐、脂肪酸半酯盐、脂肪酸蛋白质水解产物、羟乙基磺酸盐、羊毛脂衍生物、脂肪醇、植物油、甘油、糖等作为载体成分，但不限于此。这些可以单独使用或两种以上混合使用。
本发明的化妆品组合物中的花凝胶的量没有特别限制，但优选包含足以实现植物原料的功效的量。例如基于化妆品组合物的总重量包含0.0001重量百分比至20重量百分比的足量上述花凝胶，更具体地，可以包含0.0005重量百分比至15重量百分比、0.001重量百分比至15重量百分比、0.01重量百分比至15重量百分比、0.1重量百分比至15重量百分比等的足量上述花凝胶。在上述含量范围内，适量使用上述花凝胶，既经济又具有优异的皮肤美白、皮肤保湿、防止皮肤老化等效果。
在本发明的一实例中，本发明的包含选自由山茶花凝胶、百合花凝胶、牡丹花凝胶、玫瑰花凝胶以及莲花凝胶组成的组中的花凝胶的化妆品组合物可以用于皮肤保湿用途。
在本发明的再一实例中，本发明的包含选自由山茶花凝胶、百合花凝胶、牡丹花凝胶、玫瑰花凝胶以及莲花凝胶组成的组中的花凝胶的化妆品组合物可以用于防止皮肤老化或者改善皱纹用途。
在本发明的另一实例中，本发明的包含山茶花凝胶、或者玫瑰花凝胶的化妆品组合物可以用于皮肤美白用途。
本发明的化妆品组合物中包含的成分除了上述花凝胶和载体成分之外，还包含常用于化妆品组合物的成分，例如可以包含抗氧化剂、稳定剂、增溶剂、维生素、颜料和香料等常规助剂。
发明的效果
本发明的包含花作为原料的凝胶无需添加分散剂或者稳定剂，还具有良好的分散稳定性和使用感。并且，本发明的凝胶组合物安全无毒，具有优异的皮肤美白、抗皱和改善弹性的效果，不仅能激活细胞功能和能量代谢，还能减少经皮水分丢失量(TEWL)，具有优异的保湿效果。因此，本发明的包含花作为原料的凝胶不仅可以用作凝胶状组合物，还可以有效用作用于皮肤美白、防止或改善皮肤老化，以及保湿的组合物。
附图说明
图1至图5为示出实施例1至实施例5的花凝胶的图(山茶花凝胶、白牡丹凝胶、百合凝胶、玫瑰花凝胶以及莲花凝胶)。
图6为示出实施例2的百合凝胶对水通道蛋白-3的基因表达量的影响的效果的图。(每个条形代表来自三个独立实验的平均值±标准偏差。用学生t检验评价统计显着性(Each bar represents mean±Standard deviation from three independentexperiments.Statistical significance was assessed with the Student's t test)。(***p<0.001))
图7为示出实施例3的白牡丹凝胶对透明质酸受体CD-44的基因表达量的影响的效果的图。(每个条形代表来自三个独立实验的平均值±标准偏差。用学生t检验评价统计显着性。(*p<0.05，**p<0.01，***p<0.001))
图8为示出实施例5的莲花凝胶对博来霉素水解酶(Blomycin hydrolase，BLMH)和聚丝蛋白(FLG)蛋白表达的影响的效果的图。(每个条形代表来自三个独立实验的平均值±标准误差。用学生t检验评价统计显着性。(*p<0.05，**p<0.01，***p<0.001))
图9为示出实施例4的玫瑰花凝胶对聚丝蛋白(FLG)蛋白表达的影响的效果的图。
图10和图11为通过经皮水分丢失量(TEWL)及其变化率示出实施例1的山茶花凝胶对皮肤屏障功能的影响的效果的图。(每个条形代表来自三个独立实验的平均值±标准误差。)
图12至图16为示出实施例1至实施例5的花凝胶对皮肤皱纹形成因子MMP-1的基因表达量的影响的效果的图。
图17至图20为示出实施例1至实施例3和实施例5的花凝胶对影响皮肤弹性的I型胶原蛋白的基因表达量的影响的效果的图。
图21为通过JC-1染色示出实施例1的山茶花凝胶对皮肤活力的影响的效果的图。
图22为通过测定PGC-1α的基因表达量示出实施例1的山茶花凝胶对皮肤活力的影响的效果的图。
图23和图24为通过测定黑色素形成率示出实施例1(山茶花凝胶)和实施例4(玫瑰花凝胶)的花凝胶对皮肤美白的影响的效果的图。
图25a至25c和图26a至26c为通过测定酪氨酸酶(Tyrosinase)、TRP-1以及TRP-2的基因表达量示出实施例1(山茶花凝胶)和实施例4(玫瑰花凝胶)的花凝胶对皮肤美白的影响的效果的图。
具体实施方式
以下，将通过实施例更详细地描述本发明。这些实施例仅用于更详细地说明本发明，对于本领域普通技术人员来说显而易见的是，根据本发明的要旨，本发明的范围不受这些实施例的限制。
实施例
在本说明书中，除非另有说明，用于表示特定物质浓度的“％”中的固体/固体为(重量/重量)％，固体/液体为(重量/体积)％，液体/液体为(体积/体积)。
实验材料
本发明的花凝胶组合物中使用的材料如下。作为本发明植物原料的山茶花、百合、白牡丹、玫瑰花、莲花在香草村和中药材市场购买和使用。(2,2,6,6-四甲基哌啶-1-基)氧(TEMPO)试剂使用阿法埃莎(Alfa Aesar)公司的产品，NaClO使用大井化金(DaejungChemicals&Metals Co.,Ltd)的产品，NaBr和NaOH、HCl、乙醇使用德山药品工业(duksan)的产品。
实施例1：山茶花凝胶的制备
将干燥的山茶花用粉碎机粉碎后，用150目(Mesh)筛分获得100μm以下的山茶花粉末。在15g的上述粉碎的山茶花粉末中加入300mL的纯化水并搅拌。然后，加入0.47g的TEMPO、3.09g的NaBr并溶解。滴加200mL的NaClO后，在常温下用NaOH氧化15小时，同时pH保持在10～11。向上述氧化的山茶花反应液中加入HCl中和pH至6～7，去除上述氧化反应中使用的原料和反应副产物提纯山茶花粉末。提纯主要通过两种方式进行。
在第一种方法(乙醇沉淀法)中，向反应液中加入300mL的乙醇进行沉淀，然后过滤得到滤液。将滤液加入50％的乙醇中，通过重复搅拌并洗涤后过滤的过程来提纯。在第二种方法(膜滤法)中，通过使用膜过滤器(FMX-B5，UF的一种，韩国BKT公司)向反应液中连续加入纯化水直至去除杂质来提纯。
向上述提纯的山茶花粉末中加入3L的纯化水，使用均化器(PRIMIX，ROBOMIXER)以2500RPM搅拌30分钟来分散。通过使用高压匀质机(M-110Y高压匀质机，美国微流控公司(Microfluidics Corporation))将上述山茶花粉末分散液在800～1000巴下通过5次来微粒化。使用减压浓缩机(R-210set，步琪公司(BUCHI))或者膜过滤器(FMX-B5，韩国BKT公司)浓缩上述微粒化的山茶花组合物，得到172g的本发明的山茶花凝胶。制备的山茶花凝胶见图1。
实施例2：百合凝胶的制备
将干燥的百合用粉碎机粉碎后，用150目筛分获得100μm以下的百合粉末。以与实施例1相同的方法制备15g的上述粉碎的百合粉末，得到210g的本发明的百合凝胶。制备的百合凝胶见图2。
实施例3：白牡丹凝胶的制备
将干燥的白牡丹花用粉碎机粉碎后，用150目筛分获得100μm以下的白牡丹粉末。以与实施例1相同的方法制备15g的上述粉碎的白牡丹粉末，得到187g的本发明的白牡丹凝胶。制备的白牡丹凝胶见图3。
实施例4：玫瑰花凝胶的制备
将干燥的玫瑰花用粉碎机粉碎后，用150目筛分获得100μm以下的玫瑰花粉末。以与实施例1相同的方法制备15g的上述粉碎的玫瑰花粉末，得到160g的本发明的玫瑰花凝胶。制备的玫瑰花凝胶见图4。
实施例5：莲花凝胶的制备
将干燥的莲花用粉碎机粉碎后，用150目筛分获得100μm以下的莲花粉末。以与实施例1相同的方法制备15g的上述粉碎的莲花粉末，得到110g的本发明的莲花凝胶。制备的莲花凝胶见图5。
实验例
实验例1：皮肤保湿功效评价(体外)
1-1.对于为皮肤表面提供水分的水通道蛋白-3(AQP-3)的基因表达的评价
为了评价本发明的组合物的皮肤保湿功效，进行了实验以确认水通道蛋白-3(Aquaporin-3，AQP-3)的基因表达。在60mm的培养皿(康宁(corning))中接种4.5×105个细胞的正常人角质细胞(Normal human keratinocyte)(gibco)，培养1天(37℃、5％的CO2)后，更换为无血清(Serum-free)培养基(Epilife，gibco)。24小时后，将实施例2的百合凝胶按每个浓度处理并在37℃的温度、5％的CO2的培养箱(incubator)中培养24小时。培养后，用TRIzol收集细胞，根据制造商的方法分离RNA。对分离的RNA进行定量后，用1μg的RNA合成cDNA并进行实时(Real-time)PCR。PCR中使用的水通道蛋白-3以及β-肌动蛋白(actin)的引物通过在cosmogenetech公司(韩国)合成来使用。使用视黄酸(Retinoic acid)作为阳性对照组。结果见表1和图6。
表1
实验结果，对于作为水转运的AQP-3，实施例2的百合凝胶统计学显著增加了阳性对照组(视黄酸)的水平以上的表达量。由以上结果确认，实施例2的百合凝胶可有效地用作能够为干燥的皮肤表面提供水分的用于保湿的组合物。
1-2.对于CD-44(透明质酸受体)的基因表达的评价
为了评价本发明的组合物的皮肤保湿功效，进行以下实验，以确认已知为对皮肤保湿有很大贡献的作为保湿因子的透明质酸的受体的CD-44的基因表达。在60mm的培养皿(culture dish)(康宁)中接种4.5×105个细胞的正常人角质细胞(gibco)，培养1天(37℃、5％的CO2)后，更换为无血清培养基(Epilife，gibco)。24小时后，将实施例3的白牡丹凝胶按每个浓度处理并在37℃的温度、5％的CO2的培养箱中培养24小时。培养后，用TRIzol收集细胞，根据制造商的方法分离RNA。对分离的RNA进行定量后，用1μg的RNA合成cDNA并进行实时PCR。在cosmogenetech公司(韩国)合成CD-44、β-肌动蛋白引物并用于PCR。使用视黄酸作为阳性对照组。结果见表2和图7。
表2
如表2和表7所示，对于存在于表皮的透明质酸的受体CD-44，实施例3的白牡丹凝胶显著增加了阳性对照组(视黄酸)水平以上的mRNA表达量。因此，实施例3的白牡丹凝胶增加了对于皮肤中存在的天然保湿因子之一的透明质酸的受体的表达来积极参与相关机制，确认可有效地用作用于皮肤水分保湿的组合物。
1-3.对于天然保湿因子(NMF)合成机制相关蛋白质(博来霉素水解酶、聚丝蛋白)表达的评价
为了评价本发明的组合物的皮肤保湿功效，进行以下实验，以确认作为与天然保湿因子(natural moisturizing factor)的合成机制相关的蛋白质的博来霉素水解酶(bleomycin hydrolase)和聚丝蛋白(filaggrin)的表达。在100mm的培养皿中接种包含人类生长因子(human growth factor，gibco)的Epilife(gibco)培养基和3.5×105个细胞的人角质细胞，在37℃的温度、5％的二氧化碳的条件下培养24小时。24小时后，将试样在无血清(serum-free)培养基中按每个浓度处理并培养5天。用刮刀(scrapper)刮下细胞后，通过离心分离沉淀颗粒(pellet)。然后，加入蛋白质提取溶液(protein extraction solution)并孵育后，使用QubitTM荧光计(fluorometer)定量蛋白质。向定量的蛋白质中加入上样缓冲液(loading buffer)后，上样到SDS-PAGE。
使用iBlot Dry Blotting系统来转移(transfer)，然后进行封闭(blocking)。然后，处理与聚丝蛋白、博来霉素水解酶以及β-肌动蛋白特异性结合的第一抗体和第二(GAM-HRP)抗体。处理抗体后，处理west save cold ECL溶液，然后用chemi doc LuminoGraph±拍摄条带，对其数值化的值进行定量并示于表3至表5。使用对终末分化过程(terminallydifferentiation process)有非常重要影响的氯化钙(CaCl2)作为阳性对照组。结果见表3至表5，以及图8和图9。
表3
实施例5的莲花凝胶的博来霉素水解酶蛋白表达结果
通过western印迹确认直接参与天然保湿因子(NMF)的合成机制的酶之一的博来霉素水解酶(BLMH)的蛋白表达，结果表示实施例5的莲花凝胶以浓度依赖性方式显著增加了BLMH的表达量。因此，确认到实施例5的莲花凝胶增加合成天然保湿因子所需的BLMH的表达，可有效地用作用于皮肤保湿的组合物。
表4
实施例5的莲花凝胶的聚丝蛋白的蛋白表达结果
并且，通过western印迹确认作为天然保湿因子(NMF)转录体之一用作NMF形成的间接指标的聚丝蛋白(FLG)的蛋白表达。如上表4所示，即使与阳性对照组相比，实施例5的莲花凝胶也显著增加了FLG的表达量。
因此，实施例5的莲花凝胶显著增加了与天然保湿因子相关的蛋白质(FLG，BLMH)的表达，诱导皮肤中存在的天然保湿因子的合成，表现出优异的皮肤保湿功效。
表5
实施例4的玫瑰花凝胶的聚丝蛋白的蛋白表达结果
并且，如上所述，对于实施例4的玫瑰花凝胶，通过western印迹确认天然保湿因子(NMF)转录体之一的聚丝蛋白(FLG)的蛋白表达，结果表示实施例4的玫瑰花凝胶显著增加了聚丝蛋白的蛋白表达量。因此，确认到实施例4的玫瑰花凝胶还诱导皮肤中存在的天然保湿因子的合成，表现出皮肤保湿功效。
实验例2：皮肤屏障功能和保湿功效评价(临床试验)-经皮水分丢失量(TEWL)测定
为了评价本发明的组合物对皮肤屏障功能的影响和保湿功效，对5名健康成年女性受试者进行TEWL(经皮水分丢失)测定来评价。通过测定前臂内侧面半径为1.2cm的2个位置作为试验部位来分析。作为测定方法，用洗涤剂洗涤前臂内侧后，在恒温恒湿室(温度24±2℃，相对湿度42±3％)中适用实施例1的山茶花凝胶30分钟，然后在1小时、3小时、6小时、9小时、18小时、24小时后对每个测定部位进行3次测定。在测定时，探头与皮肤表面垂直接触。测定值用每单位面积蒸发的水分量(g×m2/h)和变化率(change rate(％))表示。结果见表6和图10、图11。通过下式1的方法计算变化率。
式1
(Vehicle或者实施例的每小时平均值－未涂敷组的每小时平均值)/未涂敷组的每小时平均值×100
表6
如上表6所示，确认到实施例1的山茶花凝胶涂敷后的TEWL值显著低于未涂敷组和Vehicl。尤其可以确认实施例1的山茶花凝胶涂敷18小时候后的变化率为-16.9％，与对照组Vehicl的-5.9％相比，防止皮肤表面水分损失的效果非常好。因此，确认实施例1的山茶花凝胶可有效地用作用于强化皮肤屏障功能和皮肤保湿的组合物。
实验例3：抗皱和弹性功效评价(体外)
3-1.皮肤皱纹形成因子MMP-1表达评价
为了评价本发明的组合物的抑制皮肤老化和改善皱纹的功效，进行了以下实验。将正常人成纤维细胞(Normal human fibroblast，ATCC)接种到60mm的培养皿(NUNC)中培养1天(37℃，5％的CO2)后，更换为无血清培养基(IMDM，Simply)。24小时后，在HBSS的存在下照射6J/cm2的UVA，按每个浓度处理试样，在37℃的温度、5％的CO2的培养箱中培养24小时。培养后，用TRIzol收集细胞，根据制造商的方法分离RNA。对分离的RNA进行定量后，用1μg的RNA合成cDNA并进行实时PCR。在cosmogenetech公司(韩国)合成MMP-1、β-肌动蛋白引物并用于PCR。结果见表7至表11，以及图12至图16。
表7
表8
表9
表10
表11
如上表7至表11所示，实施例1(山茶花凝胶)、实施例2(百合凝胶)、实施例3(白牡丹凝胶)，以及实施例4(玫瑰花凝胶)降低了因照射UV诱导的皱纹相关因子MMP-1表达，实施例5(莲花凝胶)也降低了在特定浓度下的MMP-1表达。由以上结果确认，本发明的实施例1至实施例5的花凝胶具有已知因老化产生的皱纹的效果。
3-2.用于改善皮肤弹性的I型胶原蛋白(Collagen type I)表达评价
为了评价本发明的组合物的抑制皮肤老化、改善皱纹和皮肤弹性的功效，进行了以下实验。将正常人成纤维细胞(ATCC)接种到60mm的培养皿(NUNC)中培养1天(37℃，5％的CO2)后，更换为无血清培养基(IMDM，Simply)。24小时后，在HBSS的存在下照射6J/cm2的UVA，按每个浓度处理试样，在37℃的温度、5％的CO2的培养箱中培养24小时。培养后，用TRIzol收集细胞，根据制造商的方法分离RNA。对分离的RNA进行定量后，用1μg的RNA合成cDNA并进行实时PCR。在cosmogenetech公司(韩国)合成Col-I、β-肌动蛋白引物并用于PCR。结果见表12至图15和图17至图20。
表12
表13
表14
表15
实施例1(山茶花凝胶)、实施例2(百合凝胶)、实施例3(白牡丹凝胶)显著增加了因照射UV降低的I型胶原蛋白表达，实施例5(莲花凝胶)在特定浓度下增加了I型胶原蛋白表达。因此，确认到实施例1(山茶花凝胶)、实施例2(百合凝胶)、实施例3(白牡丹凝胶)以及实施例5(莲花凝胶)的花凝胶可以补充随年龄减少的皮肤中的主要成分，从而用作用于改善皮肤弹性的化妆品组合物。
实验例4：皮肤再生(Skin revitalizing)功效评价(体外)
4-1.细胞功能活性化测定：JC-1染色
为了评价本发明的组合物的抑制皮肤老化和赋予皮肤活力的功效，进行了以下实验。将正常人成纤维细胞(ATCC)接种到24孔的培养皿(NUNC)中培养1天(37℃、5％的CO2)后，更换为无血清培养基(IMDM，Simply)。24小时后，在HBSS的存在下照射50mJ/cm2的UVB，按每个浓度处理试样，在37℃的温度、5％的CO2的培养箱中培养18-20小时。去除细胞的培养基后，用HBSS洗涤，更换为添加JC-1染料(dye)的无血清培养基，保持遮光状态下培养1小时。用HBSS洗涤，然后用酶联免疫检测仪测定荧光(Red：Ex＝530nm，Em＝590nm/green：Ex＝485nm，Em＝530nm)，用荧光显微镜拍摄。结果见表16和图21。
表16
如上表16和图21所示，确认到本发明的实施例1(山茶花凝胶)增加了因照射UV减少的线粒体膜电位(mitochondrial membrane potential)，从而恢复细胞活性并具有赋予皮肤活力的效果。
4-2.线粒体生物合成的诱导：PGC-1α基因表达评价
为了评价本发明的组合物的抑制皮肤老化和赋予皮肤活力的功效，进行了以下实验。将正常人成纤维细胞(ATCC)接种到60mm的培养皿(NUNC)中培养1天(37℃，5％的CO2)后，更换为无血清培养基(IMDM，Simply)。24小时后，在HBSS的存在下照射50mJ/cm2的UVB，按每个浓度处理试样，在37℃的温度、5％的CO2的培养箱中培养24小时。培养后，用TRIzol收集细胞，根据制造商的方法分离RNA。对分离的RNA进行定量后，用1μg的RNA合成cDNA并进行实时PCR。在cosmogenetech公司(韩国)合成PGC-1α、GAPDH引物并用于PCR。结果见表17和图22。
表17
如上表17和图22所示，本发明的实施例1(山茶花凝胶)增加了因照射UV减少的PGC-1α的表达。因此，确认到实施例1(山茶花凝胶)增加诱导线粒体生物合成的PGC-1α的表达来帮助产生能量，从而具有赋予皮肤活力的效果。
实验例5：抑制黑色素生成的效果测定
为了评价本发明的组合物的皮肤美白相关功效，进行了以下实验。将含有10％的牛血清的DMEM培养基和黑色素瘤(B16-F10)细胞接种到6孔的培养皿(NUNC)中，在37℃的温度、5％的CO2的条件下培养24小时。24小时后，将试样在含有α-MSH和10％的牛血清的新的DMEM培养基中按每个浓度稀释并培养72小时。培养后，将去除所有培养基的细胞用2mL的PBS洗涤，用0.5mL的1N NaOH处理并收集细胞，得到细胞内黑色素。测定收集的细胞在450nm处的吸光度，得到每规定量的蛋白质中黑色素的量，使用熊果苷(Arbutin，韩国百朗德(SKBioland))作为阳性对照组。抑制黑色素生物合成的测试结果见表18和19和图23和24。
表18
表19
如上表18和19所示，确认到当用实施例1(山茶花凝胶)、实施例4(玫瑰花凝胶)处理时以浓度依赖性方式减少因α-MSH而增加的黑色素形成率，从而具有显著的黑色素生成的抑制功效。
实验例6：黑素原生成相关酪氨酸酶、TRP-1、TRP-2表达评价
为了评价本发明的组合物的皮肤美白相关功效，进行了以下实验。将含有10％的牛血清的DMEM培养基和黑色素瘤(B16-F10)细胞接种到6孔的培养皿(NUNC)中，在37℃的温度、5％的CO2的条件下培养24小时。24小时后，将试样在含有α-MSH和10％的牛血清的新的DMEM培养基中按每个浓度稀释并培养24小时。培养后，用TRIzol收集细胞，根据制造商的方法分离RNA。定量分离的RNA后合成cDNA并进行实时PCR。在cosmogenetech公司(韩国)合成酪氨酸酶、TRP-1、TRP-2、GAPDH引物并用于PCR。结果见表20至表25，以及图25a至图25c和图26a至图26c。
表20
酪氨酸酶基因表达
表21
TRP-1基因表达
表22
TRP-2基因表达
表23
酪氨酸酶基因表达
表24
TRP-1基因表达
表25
TRP-2基因表达
如表20至表25，以及图25a至图25c和图26a至图26c所示，当用本发明的实施例1(山茶花凝胶)、实施例4(玫瑰花凝胶)处理时，由α-MSH诱导表达的酪氨酸酶、TRP-1和TRP-2基因表达量显著减少。因此，确认到实施例1(山茶花凝胶)、实施例4(玫瑰花凝胶)抑制黑色素的产生，从而具有皮肤美白功效。
制剂例
另外，下面描述了包含本发明的花凝胶的组合物的制剂例。然而，对于本领域普通技术人员来说显而易见的是，以下制剂例仅用于详细说明本发明的使用例，本发明的发明要求保护范围不限于以下制剂例。
制剂例1：营养化妆水(润肤乳)的制备
如下表26所示，根据常规方法制备含有实施例1至实施例5中获得的花凝胶的营养化妆水(润肤乳)。
表26
| 序号 | 原料 | 含量(重量百分比) |
| 1 | 实施例1-15 | 10.0 |
| 2 | 谷甾醇 | 1.7 |
| 3 | 聚甘油-2油酸酯 | 1.5 |
| 4 | 鲸蜡硬脂醇聚醚-4 | 1.2 |
| 5 | 胆固醇 | 1.5 |
| 6 | 双十六烷基磷酸 | 0.4 |
| 7 | 甘油 | 5.0 |
| 8 | 羧乙烯聚合物 | 10.0 |
| 9 | 葵花油 | 0.2 |
| 10 | 黄原胶 | 0.3 |
| 11 | 防腐剂 | 微量 |
| 12 | 香料 | 微量 |
| 13 | 纯化水 | 余量 |
制剂例2：柔软化妆水(柔肤水)的制备
如下表27所示，根据常规方法制备含有实施例1至实施例5中获得的花凝胶的柔软化妆水(柔肤水)。
表27
| 序号 | 原料 | 含量(重量百分比) |
| 1 | 实施例1-5 | 5.0 |
| 2 | 甘油 | 3.0 |
| 3 | 丁二醇 | 2.0 |
| 4 | 丙二醇 | 2.0 |
| 5 | 聚氧乙烯(60)氢化蓖麻油 | 1.0 |
| 6 | 乙醇 | 10.0 |
| 7 | 三乙醇胺 | 0.1 |
| 8 | 防腐剂 | 微量 |
| 9 | 色素 | 微量 |
| 10 | 香料 | 微量 |
| 11 | 纯化水 | 余量 |
制剂例3：营养霜的制备
如下表28所示，根据常规方法制备含有实施例1至实施例5中获得的花凝胶的营养霜。
表28
制剂例4：精华素的制备
如下表29所示，根据常规方法制备含有实施例1至实施例5中获得的花凝胶的精华素。
表29
| 序号 | 原料 | 含量(重量百分比) |
| 1 | 实施例1-5 | 5.0 |
| 2 | 谷甾醇 | 1.7 |
| 3 | 聚甘油-2油酸酯 | 1.5 |
| 4 | 鲸蜡硬脂醇聚醚-4 | 2.0 |
| 5 | 胆固醇 | 3.0 |
| 6 | 双十六烷基磷酸 | 0.4 |
| 7 | 浓甘油 | 5.0 |
| 8 | 葵花油 | 22.0 |
| 9 | 羧乙烯聚合物 | 0.5 |
| 10 | 三乙醇胺 | 0.5 |
| 11 | 防腐剂 | 微量 |
| 12 | 香料 | 微量 |
| 13 | 纯化水 | 余量 |
制剂例5：粉底的制备
如下表30所示，根据常规方法制备含有实施例1至实施例5中获得的花凝胶的粉底。
表30
制剂例6：护发素的制备
如下表31所示，根据常规方法制备含有实施例1至实施例5中获得的花凝胶的护发素。
表31
| 序号 | 原料 | 含量(重量百分比) |
| 1 | 实施例1-5 | 5.0 |
| 2 | 乙醇 | 3.5 |
| 3 | 甘油 | 1.5 |
| 4 | 丙二醇 | 2.5 |
| 5 | 硬脂基三乙炔氯化铵 | 2.0 |
| 6 | 色素 | 微量 |
| 7 | 香料 | 微量 |
| 8 | 纯化水 | 余量 |
序列表
<110> SK bioland Co., Ltd.
<120> 包含花作为原料的凝胶的制备方法及包含其的化妆品组合物
<130> PP190078
<150> KR 10-2019-0035382
<151> 2019-03-27
<160> 20
<170> KoPatentIn 3.0
<210> 1
<211> 19
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> APQ3正向引物
<400> 1
gggaccagtc ggaagggat 19
<210> 2
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> APQ3反向引物
<400> 2
cacagatgga caggctgcct 20
<210> 3
<211> 19
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> β-肌动蛋白正向引物
<400> 3
ggcacccagc acaatgaag 19
<210> 4
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> β-肌动蛋白反向引物
<400> 4
ccgatccaca cggagtactt g 21
<210> 5
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> CD44正向引物
<400> 5
gctattgaaa gccttgcaga g 21
<210> 6
<211> 23
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> CD44反向引物
<400> 6
cgcagatcga tttgaatata acc 23
<210> 7
<211> 24
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> MMP-1正向引物
<400> 7
gttcagggac agaatgtgct acac 24
<210> 8
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> MMP-1反向引物
<400> 8
tctagggaag ccaaaggagc t 21
<210> 9
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> Col-I正向引物
<400> 9
agcaagaacc ccaaggacaa 20
<210> 10
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> Col-I反向引物
<400> 10
cgaactggaa tccatcggtc 20
<210> 11
<211> 22
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> PGC-1α正向引物
<400> 11
ctttgcccag atcttcctga ac 22
<210> 12
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> PGC-1α反向引物
<400> 12
cactgcacca cttgagtcca c 21
<210> 13
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> GADPH正向引物
<400> 13
caatgacccc ttcattgacc 20
<210> 14
<211> 19
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> GADPH反向引物
<400> 14
aaatgagccc cagccttct 19
<210> 15
<211> 29
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 酪氨酸酶正向引物
<400> 15
tataaactca gtgtttccct ttatcacaa 29
<210> 16
<211> 24
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 酪氨酸酶反向引物
<400> 16
tctatgatga catgaagtgg caaa 24
<210> 17
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> TRP1正向引物
<400> 17
gttcaatggc caggtcagga 20
<210> 18
<211> 19
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> TRP1反向引物
<400> 18
caacgcagcc actacagca 19
<210> 19
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> TRP2正向引物
<400> 19
tggctcactc cttcctgaat g 21
<210> 20
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> TRP2反向引物
<400> 20
caaacacagg gtcgttggct 20
Claims (17)
1.一种花凝胶的制备方法，其特征在于，包括：
步骤(a)，向微粉碎的花粉末中加入至少一种氧化剂进行反应；
步骤(b)，将花粉末提纯并用纯化水稀释；以及
步骤(c)，将花粉末稀释液均质化并浓缩或过滤来制备花凝胶。
2.根据权利要求1所述的花凝胶的制备方法，其特征在于，上述步骤(a)的微粉碎的花粉末的粒径为1μm至300μm以下。
3.根据权利要求1所述的花凝胶的制备方法，其特征在于，上述氧化剂为次卤酸或其金属盐或者亚卤酸或其金属盐。
4.根据权利要求3所述的花凝胶的制备方法，其特征在于，上述次卤酸或其金属盐以及亚卤酸或其金属盐的卤素为氯、溴或者碘。
5.根据权利要求3所述的花凝胶的制备方法，其特征在于，上述次卤酸金属盐以及亚卤酸金属盐的金属为碱金属或者碱土金属。
6.根据权利要求1所述的花凝胶的制备方法，其特征在于，上述步骤(a)中加入硝基氧自由基化合物作为催化剂。
7.根据权利要求1所述的花凝胶的制备方法，其特征在于，上述步骤(b)的提纯包括向步骤(a)的反应液中加入醇使花粉末沉淀后过滤沉淀的花粉末的步骤。
8.根据权利要求7所述的花凝胶的制备方法，其特征在于，上述醇为C1至C5的低级醇。
9.根根据权利要求1所述的花凝胶的制备方法，其特征在于，上述步骤(b)的提纯通过向步骤(a)的反应液中加入纯化水并膜过滤的工艺来进行。
10.根据权利要求1所述的花凝胶的制备方法，其特征在于，上述步骤(c)的均质化在800巴至1000巴的压力下进行。
11.根据权利要求1所述的花凝胶的制备方法，其特征在于，上述步骤(c)的浓缩在50-65℃的温度下通过减压浓缩或者真空浓缩工艺来进行。
12.根据权利要求1所述的花凝胶的制备方法，其特征在于，上述步骤(c)的过滤通过膜过滤来进行。
13.一种花凝胶，其特征在于，包含0.01-20重量体积百分比的氧化的微粉碎的花粉末以及余量的溶剂。
14.根据权利要求13所述的花凝胶，其特征在于，上述花凝胶通过权利要求1至12中任一项所述的方法制备。
15.一种用于皮肤保湿的组合物，其特征在于，包含权利要求13所述的花凝胶，上述花选自由山茶花、百合花、牡丹花、玫瑰花以及莲花组成的组中。
16.一种用于防止皮肤老化或改善皱纹的组合物，其特征在于，包含权利要求13所述的花凝胶，上述花选自由山茶花、百合花、牡丹花、玫瑰花以及莲花组成的组中。
17.一种用于皮肤美白的组合物，其特征在于，包含权利要求13所述的花凝胶，上述花为山茶花或玫瑰花。
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