CN113621524A - 一种黑牛肝菌菌株ac2266与应用 - Google Patents

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刀明晶
李恒
陶玲
晏汐蓓
王秋兰
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Abstract

本发明公开一种黑牛肝菌菌株AC2266与应用，该菌株是由YL1701‑2自体杂交获得，已于2021年3月3日保藏在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心CGMCC，保藏编号CGMCC NO.21923,分类命名为：黑牛肝菌(Phlebopus portentosus)AC2266。本发明还公开了黑牛肝菌菌株在生产黑牛肝菌的应用。该菌株菌丝体生长较快，最适生长温度较低，菌盖颜色更深，菌盖更厚，菌柄更黄，是可用于黑牛肝菌工厂化生产的优良新品种。

Description

一种黑牛肝菌菌株AC2266与应用
技术领域
本发明属于食用菌人工育种技术领域，具体是涉及一种黑牛肝菌新菌株与应用。
背景技术
黑牛肝菌(Phlebopus portentosus)是牛肝菌目(Boletales)小牛肝菌科(Boletinellaceae)脉柄牛肝菌属(Phlebopus)的一种大型真菌，暗褐网柄牛肝菌的俗称。目前黑牛肝菌是一种可以离开宿主树，培养出成熟子实体，实现人工栽培的牛肝菌种类，市场前景广阔。
规模化的生产离不开优良菌种。目前获得优良菌种的方式主要有野生驯化和杂交育种。其中，杂交育种是获得优良菌株最有效的途径，具体方法包括：自体杂交、近缘杂交、异缘杂交、远缘杂交等。杂交育种工作的过程包括选配、鉴定、筛选和扩大验证等环节。在杂交育种过程中亲本的基因会重新组合，出现很多和亲本差异较大的新性状。
黑牛肝菌属于四极性交配系统，因此选择近亲配子进行杂交的自体杂交手段，所需工作量远大于远亲配子杂交。相比于其他杂交方式，自体杂交具有聚集和纯合优良基因的优势，同时基因的重新组合出现很多和亲本差异较大的新性状。因此也为许多育种工作者所选用。
发明内容
有鉴于此，本发明实施例提供一种具有优良栽培性状，可用于工厂化生产的黑牛肝菌菌株AC2266，并提供该AC2266菌株在生产黑牛肝菌中的应用。
为达到上述目的，本发明主要提供如下技术方案：
一方面，本发明的实施例提供一种黑牛肝菌菌株，由黑牛肝菌菌株YL1701-2自体杂交而得，分类命名为：黑牛肝菌(Phlebopus portentosus)AC2266，已于2021年3月3日保藏在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心CGMCC，保藏编号CGMCC NO.21923。
本发明菌株由黑牛肝菌菌株YL1701-2单孢菌丝自体杂交获得。其子实体形态特征包括菌盖棕褐色，菌柄黄色，圆柱形，较短，菌盖直径略大于或等于菌柄直径。菌孔黄褐色，肉质致密、紧实，菌肉金黄，伤后无变色，土腥味淡。经SSR标记鉴别，与菌株YL1701-2及其他菌株具有一定的遗传差异，确定为基因重组的新菌株。
另一方面，本发明的实施例提供上述黑牛肝菌AC2266菌株在产黑牛肝菌中的应用。
本发明的优点在于：
与目前黑牛肝菌工厂化栽培所使用的菌株YL1701-2相比，AC2266菌株菌丝体生长较快，最适生长温度较低，菌盖颜色更深，菌盖更厚，菌柄更黄，是可用于黑牛肝菌工厂化生产的优良新品种。
附图说明
图1为实施例3所述的非加权配对算术平均法(UPGMA)聚类分析结果图。
具体实施方式
以下结合实施例对本发明作进一步的详细说明，但实施例并不是对本发明技术方案的限定，所有基于本发明教导所作出的等同替换或变化，均应该属于本发明的保护范围。
本发明中所用原料等均为可以通过市售购买获得的常规产品。
本发明所述的一种黑牛肝菌菌株，由黑牛肝菌菌株YL1701-2单孢菌丝自体杂交而得，分类命名为：黑牛肝菌(Phlebopus portentosus)AC2266，已于2021年3月3日保藏在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心CGMCC，保藏编号CGMCC NO.21923。
下面将结合具体的实施例，对本发明一种黑牛肝菌菌株及应用做进一步的详细介绍：
实施例1：
黑牛肝菌AC2266菌株的选育制作方法：
采用自体杂交育种选育的方法得到本发明。
1.1亲本菌株YL1701-2子实体培养及孢子收集：
可在菇房中挑选菇型长势好的YL1701-2菌株的子实体，待子实体菌盖完全展开，菌盖边缘菌孔明显时采下收集孢子。
1.2亲本菌株YL1701-2孢子涂布和单菌落的转接培养及鉴定：
将上述步骤获得的孢子通过涂布于培养基上并进行转接培养以获得单核菌丝。其中，该培养基采用M1培养基较适合，该培养基组成包括马铃薯200g(煮水)、葡萄糖20g、酵母膏2g、MgSO4 1g、KH2PO4 1g、琼脂16g、定容至1000mL。
具体地，将收集好的孢子用无菌水稀释后涂布于M1培养基上，孢子萌发后，转接M1培养基上培养，菌丝长满后进行单核菌丝的鉴定并保存。
1.3单核菌丝交配型鉴定。
1.4可亲和的孢子单核菌丝配对，镜检，培养及出菇验证：
将上述步骤获得的单核菌丝中可亲和的单核菌丝进行配对，并将配对成功的菌丝转接至培养基培养后进行出菇验证，从而选育出黑牛肝菌AC2266菌株。
具体地，可亲和的孢子单核菌丝配对后培养至菌丝相互接触时进行镜检，将特殊情况下未形成锁状联合的菌株排除。将配对成功的菌丝转接至斜面培养基培养。菌丝长满后即可进行出菇验证。出菇验证记录自交菌株的出菇率、出菇整齐度、产量、产品特性等。经初筛、复筛、生产验证，对出菇率高，污染率低，平均产量高，子实体形态完整无畸形，肉质硬耐保藏的菌株进行反复筛选，最终选育得到本发明AC2266菌株。
本发明的黑牛肝菌AC2266菌株应用于生产黑牛肝菌，通过AC2266菌株产出的黑牛肝菌产量高，菌盖颜色更深，菌盖更厚更大，菌柄更黄更短，适合用于黑牛肝菌工厂化生产。下述实施例提供了AC2266菌株在产黑牛肝菌应用中的情况。
实施例2
本发明AC2266菌株的基本情况及子实体形态特征：
2.1培养基
AC2266菌种最适培养基为M1培养基，配方如下：马铃薯200g(煮水)、葡萄糖20g、酵母膏2g、MgSO4 1g、KH2PO4 1g、琼脂16g、定容至1000mL。
2.2菌丝生长情况
菌种AC2266在M1培养基上生长25天，菌落深黄褐色，菌丝浓密，生长旺盛，无菌核，无吐水，30℃下培养日生长量达：3.2mm/天，与亲本菌株YL1701-2相比快0.67mm/天。最适生长温度范围是AC2266：25-30℃，YL1701-2：30-35℃。
具体数据见表1。
表1不同温度培养25d菌丝生长情况
Figure BDA0003193040380000041
Figure BDA0003193040380000051
2.3子实体形态特征
菌株AC2266子实体形态与亲本菌株YL1701-2相比，存在以下异同点：
相同点：菌盖半球形，口感上无土腥味，伤后无变色。
差别：①AC2266菌盖颜色较深，厚度较厚；②AC2266菌柄颜色较黄。
具体数据见表2。
表2黑牛肝菌菌株AC2266与YL1701-2子实体形态特征比较
Figure BDA0003193040380000052
实施例3
SSR分子标记鉴别。
收集菌株AC2266，YL1701-2及其他6个黑牛肝菌菌株的菌丝，提取DNA后，以文中的21对引物对DNA样品进行PCR扩增，合成引物时在正向引物末端加上FAM或HEX荧光标记。PCR产物使用ABI 3730测序仪进行基因分型。使用软件Gene mapper 4.1(Applied BiosystemsCo.，Ltd.，USA)，参照引物对应关系的核心碱基重复数进行数据准确位点的分析。采用Popgene 32计算等位基因数、有效等位基因数、Shannon's信息指数、期望杂合度、观测杂合度。应用NTSYSpc-2.10软件计算遗传相似系数，用非加权配对算术平均法(UPGMA)进行聚类分析。UPGMA聚类分析结果如图1所示。
所使用的21对SSR引物信息如下表所示。
表3用于菌株鉴别的SSR引物信息
Figure BDA0003193040380000061
Figure BDA0003193040380000071
分析结果显示，菌株AC2266在用于鉴别的SSR位点上，与包括其亲本YL1701-2在内的其他菌株均有遗传差异，是全新的菌株。
以上所述，仅是本发明的较佳实施例而已，并非对本发明作任何形式上的限制，依据本发明的技术实质对以上实施例所作的任何简单修改、等同变化与修饰，均仍属于本发明技术方案的范围内。

Claims (2)

1.一种黑牛肝菌菌株AC2266，其特征在于，由黑牛肝菌菌株YL1701-2自体杂交而得，分类命名为：黑牛肝菌(Phlebopus portentosus)AC2266，已于2021年3月3日保藏在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心CGMCC，保藏编号CGMCC NO.21923。
2.一种权利要求1所述的黑牛肝菌菌株AC2266在生产黑牛肝菌中的应用。
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* Cited by examiner, † Cited by third party
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CN113736666A (zh) * 2021-06-03 2021-12-03 景洪宏臻农业科技有限公司 一种黑牛肝菌菌株与应用
CN117025415A (zh) * 2023-08-17 2023-11-10 景洪宏臻农业科技有限公司 一种暗褐脉柄牛肝菌菌株ｖ239.04及其应用

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