CN113613641A - 用于治疗癌症的免疫调节组合和方法 - Google Patents

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Abstract

本公开的实施方式涉及使用联合疗法治疗癌症的免疫调节组合物和方法。

Description

用于治疗癌症的免疫调节组合和方法
相关申请的交叉引用
本申请要求2018年12月26日提交的申请号为62/785,137的美国临时专利申请的优先权权益，其全部公开内容以引用的方式并入本文中。
技术领域
当前公开的实施方式涉及免疫调节组合和使用组合疗法治疗癌症的方法。
背景技术
髓源性抑制细胞(MDSC)是一种多样化的未成熟骨髓细胞群，其具有强大的免疫抑制活性，并且由于几乎在所有癌症患者体内积累，因此越来越多地被认为是抗肿瘤免疫的主要破坏者。髓源性抑制细胞包括一系列发育不成熟且处于不同骨髓生成阶段的骨髓细胞。
小鼠中有两种主要的MDSC亚型，单核细胞MDSC(M-MDSC)和粒细胞MDSC(G-MDSC)。M-MDSC是单核的，G-MDSC是多形核的。两种类型都表达髓系标记CD11b和粒细胞标记Gr1。Gr1包括两个不同的分子，Ly6C和Ly6G。M-MDSC具有较低水平的Gr1表达并表达Ly6C，而G-MDSC具有较高水平的Gr1并表达Ly6G。
还有两种类型的人类MDSC。两种类型都表达CD11b；但是，没有与小鼠Gr1标记等效的标记。相反，人类M-MDSC的特征在于其通过CD15和CD66b的表达来表达CD14和G-MDSC。这两种类型还表达一般髓系标记CD33，并且缺乏淋巴细胞和NK细胞的谱系标记。由于这些标志物也由单核细胞表达，因此MDSC与单核细胞的区别在于其不存在HLA-DR。
对小鼠和人类的研究表明，MDSC在大多数癌症患者体内积聚，促进肿瘤进展、抑制抗肿瘤免疫，并且是许多癌症免疫疗法的障碍。例如，MDSC通过产生VEGF促进新血管形成，并通过产生基质金属蛋白酶促进侵袭和转移，从而促进肿瘤生长；通过上调Arg1和诱导型NO合酶，MDSC阻止T细胞活化和作用。此外，MDSC下调巨噬细胞产生1型细胞因子IL-12，抑制NK介导的肿瘤细胞裂解，并诱导T调节细胞。
Toll样受体(TLR)是先天免疫的关键部分，是抵御病原体的第一道防线。瑞喹莫德是TLR7和8的配体，可直接激活先天免疫细胞，包括骨髓树突细胞、浆细胞样树突细胞和单核细胞/巨噬细胞。这种激活可能导致共刺激分子的激活、抗病毒细胞因子的产生以及细胞介导的NK细胞和T细胞免疫反应的刺激。
发明内容
一般而言，当前公开的实施方式提供用于治疗癌症的治疗组合和方法。
一方面，当前公开的实施方式提供了一种用于在需要这种治疗的受试者中治疗肿瘤或异常细胞增殖的方法，包括向所述受试者施用：
化学治疗剂，所述化学治疗剂的量能够减少所述受试者的血液、脾脏和/或肿瘤微环境中的髓源性抑制细胞(MDSC)群体；和
有效量的免疫治疗剂。
在一些实施方式中，化学治疗剂包含MDCS抑制剂。
在一些实施方式中，MDSC抑制剂是引起MDSC细胞凋亡和/或坏死，或引起细胞毒性，或引起c-kit、或VEGFR、或ARG1、或iNOS、或S100或MMPs功能，或者是ROS ERK激活或抗氧化基因的抑制的分子。在一些实施方式中，抑制剂选自紫杉醇、吉西他滨、5-氟尿嘧啶、奥沙利铂、顺铂、卡铂、达沙替尼、舒尼替尼和多柔比星组成的组。
在一些实施方式中，以能够将所述受试者的血液、脾脏和/或肿瘤微环境中的MDSC的量减少10％至95％，优选至少30％的量提供化学治疗剂。
在一些实施方式中，提供的化学治疗剂的量小于用作单一疗法时的量，例如为标准单一疗法剂量的50％。
在一些实施方式中，化学治疗剂为吉西他滨，并且量为400-625mg/m2。
在一些实施方式中，MDSC表达CD11b、CD15、CD33和CD66b。在一些实施方式中，MDSC表达CD11b、CD14和CD33。
在一些实施方式中，在施用所述免疫治疗剂之前并且在施用所述免疫治疗剂之前7天内施用化学治疗剂。
在一些实施方式中，在施用所述免疫治疗剂之前施用化学治疗剂。
在一些实施方式中，在施用所述免疫治疗剂之前至少一、二、三、四、五天、六天或七天施用化学治疗剂。
在一些实施方式中，在施用所述化学治疗剂之后，在所述受试者中血液和/或肿瘤微环境中的MDCS的量减少10％至95％，或至少约50％之后施用免疫治疗剂。
在一些实施方式中，免疫治疗剂包含TLR7激动剂但不包含TLR8激动剂、TLR8激动剂但不包含TLR7激动剂、或TRL7和TLR8两者的激动剂。
在一些实施方式中，免疫治疗剂是TLR7和TLR8的激动剂。
在一些实施方式中，免疫治疗剂具有式(I)的结构：
Figure BDA0003187013320000031
其中虚线代表键或键不存在；
X为S或-NR1，R1为-W0-W1-W2-W3-W4，
W0为键、烷基、烯基、炔基、烷氧基或-烷基-S-烷基--，
W1为键、--O--或-NR2--，其中R2为氢、烷基或烯基，
W2为键、--O--、--C(O)--、--C(S)--或-S(O)2-，
W3为键、--NR3--，其中R3为氢、烷基或烯基，
W4为氢、烷基、烯基、炔基、烷氧基、环烷基、芳基、芳氧基、杂芳基或杂环基，其各自任选地被一个或多个取代基取代，所述取代基选自羟基、烷氧基、烷基、烯基、炔基、环烷基、芳基、杂芳基、杂环基、--NH2、硝基、--烷基-羟基、--烷基-芳基、--烷基-杂芳基、--烷基-杂环基、--O-R4、--O-烷基-R4、--烷基-O-R4、--C(O)-R4、--烷基-C(O)-R4、--烷基-C(O)-O-R4、--C(O)-O-R4、--S-R4、--S(O)2-R4、--NH-S(O)2-R4、--烷基-S-R4、--烷基-S(O)2-R4、--NHR4、--NR4R4、--NH-烷基-R4、卤素、--CN、--NO2和-SH组成的组，其中R4独立地为氢、烷基、烯基、--烷基-羟基、芳基、杂芳基、杂环基或卤代烷基；
Z为氢、烷基、烯基、炔基、烷氧基、芳基、卤代烷基、杂芳基、杂环基，其各自任选地可被一个或多个取代基取代，所述取代基选自羟基、烷氧基、烷基、烯基、炔基、芳基、杂芳基、杂环基、卤素、氰基、硝基、--N(R5)2、--烷氧基-烷基、--烷氧基-烯基、-C(O)-烷基、-C(O)-O-烷基、--O-C(O)-烷基、--C(O)-N(R5)2、芳基、杂芳基、--CO-芳基和-CO-杂芳基组成的组，其中每个R5独立地为氢、烷基、卤代烷基、--烷基-芳基或-烷基-杂芳基；
R为氢、烷基、烷氧基、卤代烷基、卤素、芳基、杂芳基、杂环基，其各自任选地被被一个或多个取代基取代，所述取代基选自羟基、烷氧基、烷基、烯基、炔基、环烷基、芳基、杂芳基、杂环基、--NH2、硝基、--烷基-羟基、--烷基-芳基、--烷基-杂芳基、--烷基-杂环基、--O-R4、--O-烷基-R4、--烷基-O-R4、--C(O)-R4、--C(O)-NH-R4、--C(O)-NR4R4、--烷基-C(O)-R4、--烷基-C(O)-O-R4、--C(O)-O-R4、--OC(O)-R4、--S-R4、--C(O)-S-R4、--S-C(O)-R4、--S(O)2-R4、--NH-S(O)2-R4、--烷基-S-R4、--烷基-S(O)2-R4、--NHR4、--NR4R4、--NH-烷基-R4、卤素、-CN和-SH组成的组，其中R4独立地为氢、烷基、烯基、烷氧基、-烷基-羟基、芳基、杂芳基、杂环基或卤代烷基；
n为0、1、2、3或4；
Y为-NR6R7、-CR6R7R8或-烷基-NH2，其各自任选地可被一个或多个取代基取代，所述取代基选自羟基、烷氧基、烷基、烯基、炔基、--NH2、卤素、--N(R5)2、--烷氧基-烷基、--烷氧基-烯基、--C(O)-烷基、--C(O)-O-烷基、--C(O)-N(R5)2、芳基、杂芳基、--CO-芳基和-CO-杂芳基组成的组，
其中R6、R7和R8独立地为氢、烷基、烯基、烷氧基、烷氨基、二烷氨基、烷硫基、芳硫基、--烷基-羟基、--烷基-C(O)-O-R9、--烷基-C(O)-R9或-烷基-OC(O)-R9，其中每个R5独立地为氢、烷基、卤代烷基、--烷基-芳基或-烷基-杂芳基，其中R9为氢、烷基、烯基、卤素或卤代烷基；
X和Z一起可任选地形成(5-9)元环。
在一些实施方式中，免疫治疗剂是选自由：2-丙基噻唑并[4,5-c]喹啉-4-胺、1-(2-甲基丙基)-1H-咪唑并[4,5-c]喹啉-4-胺、4-氨基-2-(乙氧基甲基)-a,a-二甲基-1H-咪唑并[4,5-c]喹啉-1-乙醇、1-(4-氨基-2-乙基氨基甲基咪唑并)-[4,5-c]喹啉-1-基)-2-甲基丙-2-醇、N-[4-(4-氨基-2-乙基-1H-咪唑并[4,5-c]喹啉-1-基)丁基-]甲磺酰胺、4-氨基-2-乙氧基甲基-aa-二甲基-6,7,8,9-四氢-1h-咪唑并[4,5-c]喹啉-1-乙醇、4-氨基-aa-二甲基-2-甲氧基乙基-1h-咪唑并[4,5-c]喹啉-1-乙醇、1-{2-[3-(苄氧基)丙氧基]乙基}-2-(乙氧基甲基)-1H-咪唑并[4,5-c]喹啉-4-胺、N-[4-(4-氨基-2-丁基-1H-咪唑并[4,5-c][1,5]萘啶-1-基)丁基]-n'-丁基脲、N1-[2-(4-氨基-2-丁基-1H-咪唑并[4,5-c][1,5]萘啶-1-基)乙基]-2-氨基-4-甲基戊酰胺、N-(2-{2-[4-氨基-2-(2-甲氧基乙基)-1H-咪唑并[4,5-c]喹啉-1-基]乙氧基}乙基)-n'-苯基脲、1-(2-氨基-2-甲基丙基)-2-(乙氧基甲基)-1H-咪唑并[4,5-c]喹啉-4-胺、1-{4-[(3,5-二氯苯基)磺酰基]丁基}-2-乙基-1H-咪唑并[4,5-c]喹啉-4-胺、N-(2-{2-[4-氨基-2-(乙氧基甲基)-1H-咪唑并[4,5-c]喹啉-1-基]乙氧基}乙基)-n'-环己基脲、N-{3-[4-氨基-2-(乙氧基甲基)-1H-咪唑并[4,5-c]喹啉-1-基]丙基}-n'-(3-氰基苯基)硫脲、N-[3-(4-氨基-2-丁基-1H-咪唑并[4,5-c]喹啉-1-基)-2,2-二甲基丙基]苯甲酰胺、2-丁基-1-[3-(甲基磺酰基)丙基]-1H-咪唑并[4,5-c]喹啉-4-胺、N-{2-[4-氨基-2-(乙氧基甲基)-1H-咪唑并[4,5-c]喹啉-1-基]-1,1-二甲基乙基}-2-乙氧基乙酰胺、1-[4-氨基-2-乙氧基甲基-7-(吡啶-4-基)-1H-咪唑并[4,5-c]喹啉-1-基]-2-甲基丙-2-醇、1-[4-氨基-2-(乙氧基甲基)-7-(吡啶-3-基)-1H-咪唑并[4,5-c]喹啉-1-基]-2-甲基丙-2-醇、N-{3-[4-氨基-1-(2-羟基-2-甲基丙基)-2-(甲氧基乙基)-1H-咪唑并[4,5-c]喹啉-7-基]苯基}甲磺酰胺、1-[4-氨基-7-(5-羟甲基吡啶-3-基)-2-(2-甲氧基乙基)-1H-咪唑并[4,5-c]喹啉-1-基]-2-甲基丙-2-醇、3-[4-氨基-2-(乙氧基甲基)-7-(吡啶-3-基)-1H-咪唑并[4,5-c]喹啉-1-基]丙烷-1,2-二醇、1-[2-(4-氨基-2-乙氧基甲基-1H-咪唑并[4,5-c]喹啉-1-基)-1,1-二甲基乙基]-3-丙基脲、1-[2-(4-氨基-2-乙氧基甲基-1H-咪唑并[4,5-c]喹啉-1-基)-1,1-二甲基乙基]-3-环戊基脲、1-[(2,2-二甲基-1,3-二氧戊环-4-基)甲基]-2-(乙氧基甲基)-7-(4-羟甲基苯基)-1H-咪唑并[4,5-c]喹啉-4-胺、4-[4-氨基-2-乙氧基甲基-1-(2-羟基-2-甲基丙基)-1H-咪唑并[4,5-c]喹啉-7-基]-N-甲氧基-N-甲基苯甲酰胺、2-乙氧基甲基-N1-异丙基-6,7,8,9-四氢-1H-咪唑并[4,5-c]喹啉-1,4-二胺、1-[4-氨基-2-乙基-7-(吡啶-4-基)-1H-咪唑并[4,5-c]喹啉-1-基]-2-甲基丙-2-醇、N-[4-(4-氨基-2-乙基-1H-咪唑并[4,5-c]喹啉-1-基)丁基]甲磺酰胺、和N-[4-(4-氨基-2-丁基-1H-咪唑并[4,5-c][1,5]萘啶-1-基)丁基]-n'-环己基脲组成的组中的化合物。在进一步的个别实施方式中，免疫治疗剂选自以上列表的任何子集。
在一些实施方式中，免疫治疗剂包括瑞喹莫德。
在一些实施方式中，免疫治疗剂以能够：(1)在富集的人血液DC中诱导IFN-α；(2)在富集的人血液DC中诱导TNF-α；和/或(3)在富集的人血液DC中诱导IL-12-α的量提供。
在一些实施方式中，免疫治疗剂以能够激活人浆细胞样树突细胞、髓样树突细胞或NK细胞及其任何组合的量提供。
在一些实施方式中，免疫治疗剂与针对癌症的靶向治疗剂组合施用。
在一些实施方式中，与非肿瘤细胞相比，靶向治疗剂能够特异性地或优选地结合肿瘤细胞。
在一些实施方式中，肿瘤细胞是癌、肉瘤、淋巴瘤、骨髓瘤或中枢神经系统癌的肿瘤细胞。
在一些实施方式中，与非肿瘤抗原相比，靶向治疗剂能够特异性地或优选地结合肿瘤抗原。
在一些实施方式中，肿瘤抗原选自CD2、CD19、CD20、CD22、CD27、CD33、CD37、CD38、CD40、CD44、CD47、CD52、CD56、CD70、CD79和CD137组成的组。
在一些实施方式中，肿瘤抗原选自4-1BB、5T4、AGS-5、AGS-16、血管生成素2、B7.1、B7.2、B7DC、B7H1、B7H2、B7H3、BT-062、BTLA、CAIX、癌胚抗原、CTLA4、Cripto、ED-B、ErbB1、ErbB2、ErbB3、ErbB4、EGFL7、EpCAM、EphA2、EphA3、EphB2、FAP、纤连蛋白、叶酸受体、神经节苷脂GM3、GD2、糖皮质激素诱导的肿瘤坏死因子受体(GITR)、gp100、gpA33、GPNMB、ICOS、IGF1R、整合素αν、整合素ανβ、KIR、LAG-3、LewisY、间皮素、c-MET、MN碳酸酐酶IX、MUC1、MUC16、Nectin-4、NKGD2、NOTCH、OX40、OX40L、PD-1、PDL1、PSCA、PSMA、RANKL、ROR1、ROR2、SLC44A4、多配体蛋白聚糖-1(Syndecan-1)、TACI、TAG-72、肌腱蛋白、TIM3、TRAILR1、TRAILR2、VEGFR-1、VEGFR-2、VEGFR-3及其变体组成的组。在进一步的个别实施方式中，肿瘤抗原选自以上列表的任何子集。
在一些实施方式中，靶向治疗剂包括免疫球蛋白、蛋白质、肽、小分子、纳米颗粒或核酸。
在一些实施方式中，靶向治疗剂包括抗体或其功能片段。
在一些实施方式中，抗体选自由：美罗华(利妥昔单抗)、赫塞汀(曲妥珠单抗)、爱必妥(西妥昔单抗)、维克替比(帕尼单抗)、Arzerra(奥法木单抗)、Benlysta(贝利尤单抗)、Yervoy(伊匹单抗)、Perjeta(帕妥珠单抗)、曲美木单抗、纳武单抗、达妥珠单抗(Dacetuzumab)、乌瑞芦单抗(Urelumab)、MPDL3280A、帕博利珠单抗(Lambrolizumab)、博纳吐单抗、CT-011、MK-3475、BMS-936559、MED14736、MSB0010718C和马吉妥昔单抗(MGAH22)组成的组。在进一步的个别实施方式中，抗体选自以上列表的任何子集。
在一些实施方式中，靶向治疗剂包括Fab、Fab’、F(ab’)2、单域抗体、T和Abs二聚体、Fv、scFv、dsFv、ds-scFv、Fd、线性抗体、微抗体、双抗体、双特异性抗体片段、双抗体、三抗体、sc-双抗体、kappa(lamda)体、BiTE、DVD-Ig、SIP、SMIP、DART或包含一个或多个CDR的抗体类似物。
在一些实施方式中，靶向治疗剂包含VEGFR的ATWLPPR多肽、血小板反应蛋白-1模拟物、CDCRGDCFCG(环状)多肽、SCH 221153片段、NCNGRC(环状)多肽、CTTHWGFTLC多肽、CGNKRTRGC多肽(LyP-1)、奥曲肽、伐普肽、兰瑞肽、C-3940多肽、达必佳、利普安、诺雷德或西曲瑞克。
在一些实施方式中，靶向治疗剂包含胞外域(ECD)或可溶形式的PD-1、PDL-1、CTLA4、BTLA、KIR、TIM3、4-1BB、LAG3、表面配体双调蛋白的部分全长、β-细胞素、EGF、肝配蛋白、epigen、上皮调节蛋白、IGF、神经调节蛋白、TGF、TRAIL或VEGF。
在一些实施方式中，免疫治疗剂被全身递送。
在一些实施方式中，免疫治疗剂通过口服给药或肠胃外注射给药。
在一些实施方式中，免疫治疗剂通过静脉内注射或瘤内注射给药。
在一些实施方式中，异常细胞增殖包括癌前病变。
在一些实施方式中，异常增殖是癌细胞的异常增殖。
在一些实施方式中，癌症选自由急性髓系白血病(AML)、乳腺癌、慢性淋巴细胞白血病(CLL)、慢性粒细胞白血病(CML)、霍奇金淋巴瘤、多发性骨髓瘤、蕈状真菌病、神经母细胞瘤、非霍奇金淋巴瘤(NHL)、卵巢癌和视网膜母细胞瘤组成的组。
在一些实施方式中，该方法包括以约0.0005mg/kg、0.0006mg/mg/kg、0.0007mg/kg、0.0008mg/kg、0.0009mg/kg、0.001mg/kg、0.002mg/kg、0.003mg/kg、0.004mg/kg、0.005mg/kg、0.006mg/kg、0.007mg/kg、0.008mg/kg、0.009mg/kg或0.01mg/kg至约0.02mg/kg的剂量向受试者施用包含所述免疫治疗剂的口服制剂，包括所有在内，每周两次。
在一些实施方式中，该方法包括以0.0001mg/kg至小于或约0.0005mg/kg、0.0006mg/kg、0.0007mg/kg、0.0008mg/kg、0.0009mg/kg、0.001mg/kg、0.002mg/kg、0.003mg/kg、0.004mg/kg、0.005mg/kg、0.006mg/kg、0.007mg/kg、0.008mg/kg、0.009mg/kg、或0.01mg/kg的剂量向受试者施用包含所述免疫治疗剂的口服制剂，每周两次。
在一些实施方式中，该方法包括以约0.0005mg/kg、0.0006mg/kg、0.0007mg/kg、0.0008mg/kg、0.0009mg/kg、0.001mg/kg、0.002mg/kg、0.003mg/kg、0.004mg/kg、0.005mg/kg或0.006mg/kg至约0.015mg/kg的剂量向受试者施用包含所述免疫治疗剂的静脉内制剂，包括所有在内，每周一次。
在一些实施方式中，该方法包括以0.001mg/kg至小于或约0.003mg/kg、0.004mg/kg、0.005mg/kg或0.006mg/kg至约0.01mg/kg的剂量向受试者施用包含所述免疫治疗剂的静脉内制剂，每周一次。
在一些实施方式中，受试者中免疫治疗剂的局部浓度为约0.005μg/ml至约12μg/ml。
在一些实施方式中，受试者中免疫治疗剂的局部浓度为约0.05μg/ml、0.1μg/ml、0.15μg/ml、0.2μg/ml、0.3μg/ml或0.4μg/ml至约0.5μg/ml。
在一些实施方式中，该方法包括在2-5天内以约40-50mg/kg的分剂量向受试者施用包含化学治疗剂的静脉内制剂。
在一些实施方式中，在每个周期内以2、3或4周的间隔重复施用免疫治疗剂。
在一些实施方式中，该方法包括以约10至15mg/kg的剂量向受试者施用包含化学治疗剂的静脉内制剂，每7至10天给予一次。
在一些实施方式中，该方法包括以约3至5mg/kg的剂量向受试者施用包含化学治疗剂的静脉内制剂，每周两次。
在一些实施方式中，该方法包括以约60-120mg/m2/天的剂量向受试者施用包含化学治疗剂的静脉内制剂，连续输注。
在一些实施方式中，该方法包括以约400-1000mg/m2的剂量分4-5天向受试者施用包含化学治疗剂的口服制剂。
在一些实施方式中，该方法包括以约50-100mg/m2/天或1-5mg/kg/天的剂量向受试者施用包含化学治疗剂的静脉内制剂。
在另一方面，当前公开的实施方式提供了包含本公开提供的治疗组合和任选地使用说明的试剂盒。
附图说明
在所附权利要求中具体阐述了本发明的新颖特征。通过参考以下详细描述和附图，将获得对当前公开的实施例的特征和优点的更好理解，所述详细描述阐述了其中利用本发明的原理的说明性实施例，并且在附图中：
图1A-B描述了TLRL与抗PD-Ll和吉西他滨联合疗法在NR-S1同源肿瘤模型中的抗肿瘤作用的评估。图1A：将NR-S1细胞接种到C3H小鼠中，当肿瘤体积达到30mm3时开始治疗。对照试剂(PBS或大鼠IgG)、瑞喹莫德(RQ)(数据未显示)、抗PD-L1 mAb(PD-L1)(数据未显示)以及瑞喹莫德和抗体(RQ+PD)均经腹腔注射，每三天一次，共4次。在开始用瑞喹莫德和PD-L1 mAb(+Gem)治疗前一天腹膜内施用吉西他滨(30mg/kg)。每天测量肿瘤体积，图中显示的数据是来自两个独立实验(n＝11)的组合结果。左侧的三个较小的图显示了个体的生长曲线。显示了治疗开始后14天(第24天)的肿瘤生长曲线和肿瘤体积。图1B：在肿瘤接种后24天收集脾脏，并计算总细胞数(左图)。脾细胞和红细胞耗尽的外周血白细胞用抗CD11b和抗Gr-1mAb染色，并通过流式细胞术进行分析(分别为中图和右图)。显示了Gr-1highCD11b+细胞的百分比。脾细胞的值是两个结果相似的独立实验合并后的平均值±SD(n＝11)。外周血值是来自一组六只小鼠的平均值±SD。统计差异(*＝p<0.05)。
图2A-B描绘了来自NR-S1和SCCVII肿瘤的CD11b+细胞的细胞表面标志物谱。这两种肿瘤类型在TME中表现出不同的特征。Ly6GhighLy6C-F4/80-细胞在NR-S1肿瘤中占主导地位，而Ly6GlowLy6Clow/-F4/80+细胞在SCCVII肿瘤中占主导地位。皮下接种NR-S1或SCCVII肿瘤细胞，当肿瘤体积达到约1500mm3时切除肿瘤块和脾脏。图2A：在CD45+FSClow-high大淋巴细胞(CD45+gate)、FSClowCD3+CD11b-淋巴细胞(CD3+T-gate)、FSClow-highCD3-CD11b+骨髓细胞(CD11b+gate)、Ly6GhighLy6Clow-nega(Fr-1gate)和Ly6GlowLy6Clow-nega(Fr-2gate)上对肿瘤浸润淋巴细胞-部分进行染色和电子设门，显示了指定群体的百分比或表达谱(作为等高线图)。对于T细胞分析，显示了CD8+CD4-(CD8+T)、CD8-CD4+Foxp3-(常规T、CD4+Tcon)、CD8-CD4+Foxp3+(Treg)的比例。图2B：对脾脏的总细胞数进行计数，并用荧光染料偶联的抗CD3、抗CD11b、抗Ly6C和Ly6G mAb对细胞进行染色，并通过流式细胞术进行分析。电子门被放置在CD3-CD11b+细胞上(CD11b+gate)，Ly6C和Ly6G的表达谱显示为等高线图。所有象限标记都被定位为包括>95-98％的对照荧光染料染色的细胞。显示的值为平均值±SD(n＝5)。*p<0.05。
图3描绘了将4T1细胞接种到Balb/c小鼠中后的肿瘤生长，当肿瘤体积达到～100mm3时开始治疗。静脉注射对照试剂(PBS)、瑞喹莫德(RQ)、抗PD-L1 mAb(PD)以及免疫治疗剂和抗体(RQ+PD)，两次，间隔一周。在开始用瑞喹莫德和PD-L1 mAb(+Gem)治疗前一天腹膜内施用吉西他滨(30mg/kg)。在第14、17和21天测量肿瘤体积，显示的数据来自一项独立实验(n＝6)。下面五个较小的图形显示了个体的增长曲线。
具体实施方式
下面参考示例应用描述本发明的几个方面以用于说明。应当理解，阐述了许多具体细节、关系和方法以提供对本发明的全面理解。然而，相关领域的普通技术人员将容易认识到，可以在没有一个或多个具体细节或与其他方法一起的情况下实践本发明。当前公开的实施方式不受所说明的动作或事件的顺序的限制，因为一些动作可以以不同的顺序和/或与其他动作或事件同时发生。
此外，并非所有图示的动作或事件都需要实施根据当前公开的实施方式的方法。
本文中使用的术语仅用于描述特定实施方式的目的，并不旨在限制本发明。如本文所用，除非上下文另有明确指示，单数形式“一个(a)”、“一个(an)”和“这(the)”也旨在包括复数形式。此外，如果在详细说明和/或权利要求中使用术语“包括(including)”、“包括(include)”、“具有(having)”、“具有(has)”、“具有(with)”或其变体，则此类术语旨在以类似于术语“包括”的方式包括在内。
术语“约”或“大约”是指在由本领域普通技术人员确定的特定值的可接受误差范围内，这将部分取决于如何测量或确定该值，即，测量系统的局限性。例如，根据本领域的实践，“约”可以表示在1个标准偏差以内或超过1个标准偏差。或者，“约”可以表示给定值的最多20％，优选最多10％，更优选最多5％，更优选最多1％的范围。或者，特别是对于生物系统或过程，该术语可表示在一个数量级内，优选在5倍以内，更优选在2倍以内。在申请和权利要求中描述特定值的地方，除非另有说明，术语“约”的含义应假定在特定值的可接受误差范围内。
I.定义和缩写
除非另有定义，本文使用的所有技术和科学术语通常具有与本发明所属领域的普通技术人员通常理解的相同的含义。通常，本文所用的命名法以及细胞培养、分子遗传学、有机化学和核酸化学以及杂交中的实验室程序是本领域熟知和常用的那些。标准技术用于核酸和肽合成。这些技术和程序通常根据本领域的常规方法和本文件通篇提供的各种一般参考资料进行。本文中使用的命名法和分析化学中的实验室程序以及下文描述的有机合成是本领域众所周知的和常用的那些。标准技术或其修改用于化学合成和化学分析。
除非另有说明，术语“烷基”本身或作为另一取代基的一部分表示直链或支链或环状烃基或其组合，其可以是完全饱和的、单不饱和或多不饱和的且可以包括二价和多价基团，具有指定的碳原子数(即C1-C10表示一到十个碳)。饱和烃基的实例包括但不限于例如甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、叔丁基、异丁基、仲丁基、环己基、(环己基)甲基、环丙基甲基、例如正戊基、正己基、正庚基、正辛基的同系物和异构体等。不饱和烷基是具有一个或多个双键或三键的烷基。不饱和烷基的实例包括但不限于乙烯基、2-丙烯基、巴豆基、2-异戊烯基、2-(丁二烯基)、2,4-戊二烯基、3-(1,4-戊二烯基)、乙炔基、1-和3-丙炔基、3-丁炔基以及更高的同系物和异构体。除非另有说明，否则术语“烷基”还意在包括以下更详细定义的那些烷基衍生物，例如“杂烷基”。限于烃基的烷基被称为“homo烷基”。
术语“亚烷基”本身或作为另一取代基的一部分表示衍生自烷烃的二价基团，例如但不限于-CH2CH2CH2CH2-，并且进一步包括以下描述为“杂亚烷基”的那些基团。通常，烷基(或亚烷基)将具有1至24个碳原子，在当前公开的实施方式中优选具有10个或更少碳原子的那些基团。“低级烷基”或“低级亚烷基”是较短链的烷基或亚烷基，通常具有八个或更少的碳原子。
术语“烷氧基”、“烷氨基”和“烷硫基”(或硫代烷氧基)以其常规含义使用，分别是指通过氧原子、氨基或硫原子连接到分子其余部分的那些烷基。
除非另有说明，否则术语“杂烷基”本身或与另一术语组合表示稳定的直链或支链、或环状烃基、或其组合，由所述数目的碳原子和在选自由O、N、Si和S组成的组的至少一个杂原子组成，其中氮和硫原子可任选地被氧化并且氮杂原子可任选地被季铵化。杂原子O、N和S和Si可位于杂烷基的任何内部位置或烷基与分子其余部分连接的位置。实例包括但不限于-CH2-CH2-O-CH3、-CH2-CH2-NH-CH3、-CH2-CH2-N(CH3)-CH3、-CH2-S-CH2-CH3、-CH2-CH2、-S(O)-CH3、-CH2-CH2-S(O)2-CH3、-CH＝CH-O-CH3、-Si(CH3)3、-CH2-CH＝N-OCH3和–CH＝CH-N(CH3)-CH3。最多两个杂原子可以是连续的，例如-CH2-NH-OCH3和-CH2-O-Si(CH3)3。类似地，术语“杂亚烷基”本身或作为另一取代基的一部分表示衍生自杂烷基的二价基团，例如但不限于-CH2-CH2-S-CH2CH2-和-CH2-S-CH2-CH2-NH-CH2-。对于杂亚烷基，杂原子也可以占据链末端的一个或两个(例如，亚烷基氧基、亚烷基二氧基、亚烷基氨基、亚烷基二氨基等)。更进一步，对于亚烷基和杂亚烷基连接基团，连接基团的公式的书写方向并不暗示连接基团的方向。例如，式–C(O)2R’-表示–C(O)2R’-和–R’C(O)2-。
通常，“酰基取代基”也选自上述组。如本文所用，术语“酰基取代基”是指连接至羰基碳并满足其化合价的基团，所述羰基碳直接或间接连接至本公开实施方式的化合物的多环核。
除非另有说明，否则术语“环烷基”和“杂环烷基”本身或与其他术语组合分别代表“烷基”和“杂烷基”的环状形式。此外，对于杂环烷基，杂原子可占据杂环与分子其余部分连接的位置。环烷基的实例包括但不限于环戊基、环己基、1-环己烯基、3-环己烯基、环庚基等。杂环烷基的实例包括但不限于1-(1,2,5,6-四氢吡啶基)、1-哌啶基、2-哌啶基、3-哌啶基、4-吗啉基、3-吗啉基、四氢呋喃-2-基、四氢呋喃-3-基、四氢噻吩-2-基、四氢噻吩-3-基、1-哌嗪基、2-哌嗪基等。
除非另有说明，术语“卤代”或“卤素”本身或作为另一取代基的一部分表示氟、氯、溴或碘原子。此外，诸如“卤代烷基”之类的术语意在包括单卤代烷基和多卤代烷基。例如，术语“卤代(C1-C4)烷基”表示包括但不限于三氟甲基、2,2,2-三氟乙基、4-氯丁基、3-溴丙基等。
如本文所用，术语“卤代烷基”是指如本文定义的烷基，其被一个或多个如本文定义的卤素基团取代。优选地，卤代烷基可以是单卤代烷基、二卤代烷基或多卤代烷基，包括全卤代烷基。单卤代烷基可在烷基内具有一个碘、溴、氯或氟。二卤代烷基和多卤代烷基可在烷基内具有两个或多个相同的卤原子或不同卤基的组合。优选地，多卤代烷基含有最多12、10或8、或6、或4、或3、或2个卤基。卤代烷基的非限制性实例包括氟甲基、二氟甲基、三氟甲基、氯甲基、二氯甲基、三氯甲基、五氟乙基、七氟丙基、二氟氯甲基、二氯氟甲基、二氟乙基、二氟丙基、二氯乙基和二氯丙基。全卤代烷基是指所有氢原子都被卤原子取代的烷基。
如本文所用，术语“杂芳基”是指具有选自N、O、S或Se的1至8个杂原子的5-14元单环-或双环-或稠合多环-环体系。优选地，杂芳基是5-10元环体系。典型的杂芳基包括2-或3-噻吩基，2-或3-呋喃基，2-或3-吡咯基，2-、4-或5-咪唑基，3-、4-或5-吡唑基，2-、4-或5-噻唑基，3-、4-或5-异噻唑基，2-、4-或5-恶唑基，3-、4-或5-异恶唑基，3-或5-1,2,4-三唑基，4-或5-1,2,3-三唑基，四唑基，2-、3-或4-吡啶基、3-或4-哒嗪基、3-、4-或5-吡嗪基，2-吡嗪基，2-、4-或5-嘧啶基。
术语“杂芳基”还指其中杂芳环稠合至一个或多个芳基、脂环族或杂环烷基环的基团，其中基团或连接点在杂芳环上。非限制性实例包括但不限于1-、2-、3-、5-、6-、7-或8-吲哚啉基，1-、3-、4-、5-、6-或7-异吲哚基、2-、3-、4-、5-、6-或7-吲哚基，2-、3-、4-、5-、6-或7-吲唑基，2-、4-、5-、6-、7-或8-嘌呤基，1-、2-、3-、4-、6-、7-、8-或9-喹啉基，2-、3-、4-、5-、6-、7-或8-喹啉，1-、3-、4-、5-、6-、7-或8-异喹啉，1-、4-、5-、6-、7-或8-酞嗪基，2-、3-、4-、5-或6-萘啶基，2-、3-、5-、6-、7-或8-喹唑啉基，3-、4-、5-、6-、7-或8-肉桂基，2-、4-、6-或7-蝶啶基，1-、2-、3-、4-、5-、6-、7-或8-4aH咔唑基，1-、2-、3-、4-、5-、6-、7-、或8-咔唑基，1-、3-、4-、5-、6-、7-、8-、或、9-咔啉基，1-、2-、3-、4-、6-、7-、8-、9-或10-菲啶基，1-、2-、3-、4-、5-、6-、7-、8-或9-吖啶基，1-、2-、4-、5-、6-、7-、8-或9-咟啶基(perimidinyl)，2-、3-、4-、5-、6-、8-、9-或10-菲咯啉基，1-、2-、3-、4-、6-、7-、8-或9-吩嗪基，1-、2-、3-、4-、6-、7-、8-、9-或10-吩噻嗪基，1-、2-、3-、4-、6-、7-、8-、9-或10-吩恶嗪基，2-、3-、4-、5-、6-或1-、3-、4-、5-、6-、7-、8-、9-或10-苯并异喹啉基，2-、3-、4-或5-噻吩并[2,3-b]呋喃基，2-、3-、5-、6-、7-、8-、9-、10-或11-7H-吡嗪并[2,3-c]咔唑基，2-、3-、5-、6-或7-2H-呋喃并[3,2-b]-吡喃基、2-、3-、4-、5-、7-或8-5H-吡啶并[2,3-d]-o-恶嗪基，1-、3-或5-1H-吡唑并[4,3-d]-恶唑基，2-、4-或54H-咪唑并[4,5-d]噻唑基，3-、5-或8-吡嗪并[2,3-d]哒嗪基，2-、3-、5-或6-咪唑并[2,1-b]噻唑基，1-、3-、6-、7-、8-或9-呋喃并[3,4-c]肉桂基，1-、2-、3-、4-、5-、6-、8-、9-、10或11-4H-吡啶并[2,3-c]咔唑基，2-、3-、6-或7-咪唑并[1,2-b][1,2,4]三嗪基、7-苯并[b]噻吩基，2-、4-、5-、6-或7-苯并恶唑基，2-、4-、5-、6-或7-苯并咪唑基，2-、4-、4-、5-、6-或7-苯并噻唑基，1-、2-、4-、5-、6-、7-、8-或9-苯并恶嗪基，2-、4-、5-、6-、7-或8-苯并恶嗪基，1-、2-、3-、5-、6-、7-、8-、9-、10-或11-1H-吡咯并[1,2-b][2]苯并氮杂基。典型的稠合杂芳基包括但不限于2-、3-、4-、5-、6-、7-或8-喹啉基，1-、3-、4-、5-、6-、7-或8-异喹啉基，2-、3-、4-、5-、6-或7-吲哚基，2-、3-、4-、5-、6-或7-苯并[b]噻吩基、2-、4-、5-、6-或7-苯并恶唑基，2-、4-、5-、6-或7-苯并咪唑基，2-、4-、5-、6-或7-苯并噻唑基。
如本文所用，术语“杂环基”或“杂环”是指任选取代的、完全饱和或不饱和的、芳香族或非芳香族环状基团，例如，其为4-至7元单环、7-至12-元双环或10-至15-元三环体系，在至少一个含碳原子的环中具有至少一个杂原子。含有杂原子的杂环基团的每个环可具有选自氮原子、氧原子和硫原子的1、2或3个杂原子，其中氮和硫杂原子也可任选被氧化。杂环基团可以连接在杂原子或碳原子上。
示例性的单环杂环基团包括吡咯烷基、吡咯基、吡唑基、氧杂环丁烷基、吡唑啉基、咪唑基、咪唑啉基、咪唑烷基、三唑基、恶唑基、恶唑烷基、异恶唑啉基、异恶唑基、噻唑基、噻二唑基、噻唑烷基、异噻唑基、异噻唑烷基、呋喃基、四氢呋喃基、噻吩基、恶二唑基、哌啶基、哌嗪基、2-氧代哌嗪基、2-氧代哌啶基、2-氧代吡咯烷基、2-氧氮杂基、氮杂基、4-哌啶基、吡啶基、吡嗪基、嘧啶基、哒嗪基、四氢吡喃基、吗啉基、噻吗啉基、噻吗啉基亚砜、噻吗啉基砜、1,3-二氧戊环和四氢-1,1-二氧噻吩基、1,1,4三氧-1,2,5-噻二唑啉-2-基等。
示例性的双环杂环基团包括吲哚基、二氢吲哚基、苯并噻唑基、苯并恶嗪基、苯并恶唑基、苯并噻吩基、苯并噻嗪基、奎宁环基、喹啉基、四氢喹啉基、十氢喹啉基、异喹啉基、四氢异喹啉基、十氢异喹啉基、苯并咪唑基、苯并吡喃基、吲哚嗪基、苯并呋喃基、色酮基、香豆素基、苯并吡喃基、肉桂基、喹喔啉基、吲唑基、吡咯并吡啶基、呋喃吡啶基(例如呋喃并[2,3-c]吡啶基、呋喃并[3,2-b]-吡啶基]或呋喃并[2,3-b]吡啶基)、二氢异吲哚基、1,3-二氧代-1,3-二氢异吲哚-2-基、二氢喹唑啉基(例如3,4-二氢-4-氧代-喹唑啉基)、酞嗪基等。
示例性的三环杂环基团包括咔唑基、二苯并氮杂环基、二噻吩并氮杂环基、苯并吲哚基、菲咯啉基、吖啶基、菲啶基、吩恶嗪基、吩噻嗪基、呫吨基、咔啉基等。
术语“杂环基”还指如本文定义的被1、2或3个选自以下的取代基取代的杂环基团：
(a)烷基；
(b)羟基(或受保护的羟基)；
(c)环；
(d)氧代，即＝O；
(e)氨基、烷基氨基或二烷基氨基；
(f)烷氧基；
(g)环烷基；
(h)羧基；
(i)杂环氧基，其中杂环氧基表示通过氧桥键合的杂环基团；
(j)烷基-O-C(O)--；
(k)巯基；
(l)硝基；
(m)氰基；
(n)氨磺酰或磺酰氨基；
(o)芳基；
(p)烷基-C(O)-O--；
(q)芳基-C(O)-O--；
(r)芳基-S--；
(s)芳氧基；
(t)烷基-S--；
(u)甲酰基，即HC(O)--；
(v)氨基甲酰基；
(w)芳基-烷基--；和
(x)被烷基、环烷基、烷氧基、羟基、氨基、烷基-C(O)-NH--、烷基氨基、二烷基氨基或卤素取代的芳基。
如本文所用，术语“烯基”是指具有2至20个碳原子并且包含至少一个双键的直链或支链烃基。烯基优选具有约2至8个碳原子。
除非另有说明，术语“芳基”是指多不饱和芳族烃取代基，其可以是单环或多环(优选1至3个环)，它们稠合在一起或共价连接。术语“杂芳基”是指包含选自N、O和S的一到四个杂原子的芳基(或环)，其中氮和硫原子任选地被氧化，并且氮原子任选地被季铵化。杂芳基可以通过杂原子连接到分子的其余部分。芳基和杂芳基的非限制性实例包括苯基、1-萘基、2-萘基、4-联苯基、1-吡咯基、2-吡咯基、3-吡咯基、3-吡唑基、2-咪唑基、4-咪唑基、吡嗪基、2-恶唑基、4-恶唑基、2-苯基-4-恶唑基、5-恶唑基、3-异恶唑基、4-异恶唑基、5-异恶唑基、2-噻唑基、4-噻唑基、5-噻唑基、2-呋喃基、3-呋喃基、2-噻吩基、3-噻吩基、2-吡啶基、3-吡啶基、4-吡啶基、2-嘧啶基、4-嘧啶基、5-苯并噻唑基、嘌呤基、2-苯并咪唑基、5-吲哚基、1-异喹啉基、5-异喹啉基、2-喹喔啉基、5-喹喔啉基、3-喹啉基和6-喹啉基。上述每个芳基和杂芳基环体系的取代基选自下述可接受的取代基。
为简洁起见，当与其他术语(例如，芳氧基、芳硫氧基、芳烷基)组合使用时，术语“芳基”包括如上定义的芳基环和杂芳基环。因此，术语“芳基烷基”意在包括其中芳基连接至烷基(例如苄基、苯乙基、吡啶甲基等)的那些基团，包括其中碳原子(例如亚甲基)已被例如氧原子(例如苯氧基甲基、2-吡啶氧基甲基、3-(1-萘氧基)丙基等)取代的那些烷基基团。
上述每个术语(例如，“烷基”、“杂烷基”、“芳基”和“杂芳基”)包括指定基团的取代和未取代形式。下面提供了每种类型基团的优选取代基。
烷基和杂烷基的取代基(包括通常称为亚烷基、烯基、杂亚烷基、杂烯基、炔基、环烷基、杂环烷基、环烯基和杂环烯基的那些基团)通常分别称为“烷基取代基”和“杂烷基取代基”，并且它们可以是选自但不限于以下的多种基团中的一个或多个：OR’、＝O、＝NR’、＝N-OR’、-NR’R”、-SR’、-卤素、-SiR’R”R”’、-OC(O)R’、-C(O)R’、-CO2R’、-CONR’R”、-OC(O)NR’R”、-NR”C(O)R’、-NR’-C(O)NR”R”’、-NR”C(O)2R’、-NR-C(NR’R”R’”)＝NR””、-NR-C(NR’R”)＝NR’”、-S(O)R’、-S(O)2R’、-S(O)2NR’R”、-NRSO2R’、-CN和-NO2，其数量范围从零到(2m’+1)，其中m’是此类基团中碳原子的总数。R’、R”、R”’和R””各自优选独立地指氢，取代或未取代的杂烷基，取代或未取代的芳基、例如被1-3个卤素取代的芳基，取代或未取代的烷基、烷氧基或硫代烷氧基、或芳烷基。例如，当本发明的化合物包括多于一个R基团时，每个R基团都是独立选择的，当存在多于一个R’、R”、R”’和R””基团时，这些基团也是独立地选择的。当R’和R”连接到同一个氮原子时，它们可以与氮原子结合形成5、6或7元环。例如，-NR’R”旨在包括但不限于1-吡咯烷基和4-吗啉基。根据对取代基的上述讨论，本领域技术人员将理解术语“烷基”意在包括含有碳原子的基团，所述含有碳原子的基团与除氢基团以外的基团键合，例如卤代烷基(例如，-CF3和-CH2CF3)和酰基(例如-C(O)CH3、-C(O)CF3、-C(O)CH2OCH3等)。
与针对烷基的取代基描述类似，芳基取代基和杂芳基取代基通常分别称为“芳基取代基”和“杂芳基取代基”，并且可以变化并选自例如：卤素、-OR’、＝O、＝NR’、＝N-OR’、-NR’R”、-SR’、-卤素、-SiR’R”R”’、-OC(O)R’、-C(O)R’、-CO2R’、-CONR’R”、-OC(O)NR’R”、-NR”C(O)R’、-NR’-C(O)NR”R”’、-NR”C(O)2R’、-NR-C(NR’R”)＝NR’”、-S(O)R’、-S(O)2R’、-S(O)2NR’R”、-NRSO2R’、-CN和–NO、-R’、-N3、-CH(Ph)2、氟(C1-C4)烷氧基、和氟(C1-C4)烷基，其数量为从零到芳环体系上的开环化合价总数；其中R’、R”、R”’和R””优选独立地选自氢，(C1-C8)烷基和杂烷基，未取代的芳基和杂芳基，(未取代的芳基)-(C1-C4)烷基和(未取代的芳基)氧基-(C1-C4)烷基。例如，当本发明的化合物包括多于一个R基团时，每个R基团都是独立选择的，当存在多于一个R’、R”、R”’和R””基团时，这些基团也是独立地选择的。
芳基或杂芳基环的相邻原子上的两个芳基取代基可任选地被式–TC(O)-(CRR’)q-U-的取代基取代，其中T和U独立地为–NR-、-O-、-CRR’-或单键，q为0到3的整数。或者，芳基或杂芳基环的相邻原子上的两个取代基可任选地被式–A-(CH2)r-B的-取代基取代，其中A和B独立为–CRR’-、-O-、-NR-、-S-、-S(O)-、S(O)2-、-S(O)2NR’-或单键，r为1至4的整数。如此形成的新环的单键之一可任选地替换为双键。或者，芳基或杂芳基环的相邻原子上的两个取代基可任选地被式–(CRR’)s-X-(CR”R”’)d-的取代，其中s和d独立地为从0到3的整数，X为–O-、-NR’-、-S-、-S(O)-、-S(O)2-或-S(O)2NR’-。取代基R’、R”、R”’和R””优选独立地选自氢或取代或未取代的(C1-C6)烷基。
如本文所用，术语“杂原子”包括氧(O)、氮(N)、硫(S)、磷(P)和硅(Si)。
如本文所用，术语“芳氧基”是指-O-芳基和-O-杂芳基，其中芳基和杂芳基在本文中定义。
如本文所用，术语“药学上可接受的盐”是指保留本发明化合物的生物学有效性和特性并且在生物学上或其他方面不是不合需要的盐。在许多情况下，由于存在氨基和/或羧基或与其类似的基团(例如苯酚或羟基酰胺酸)，本发明公开的实施方式中的化合物能够形成酸和/或碱盐。可与无机酸和有机酸形成药学上可接受的酸加成盐。可衍生出盐的无机酸包括例如盐酸、氢溴酸、硫酸、硝酸、磷酸等。可衍生出盐的有机酸包括例如乙酸、丙酸、乙醇酸、丙酮酸、草酸、马来酸、丙二酸、琥珀酸、富马酸、酒石酸、柠檬酸、苯甲酸、肉桂酸、扁桃酸、甲磺酸、乙磺酸、对甲苯磺酸、水杨酸等。可与无机碱和有机碱形成药学上可接受的碱加成盐。可衍生盐的无机碱包括例如钠、钾、锂、铵、钙、镁、铁、锌、铜、锰、铝等；特别优选的是铵盐、钾盐、钠盐、钙盐和镁盐。可衍生出盐的有机碱包括例如伯胺、仲胺和叔胺、包括天然存在的取代胺在内的取代胺、环胺、碱性离子交换树脂等，特别是例如异丙胺、三甲胺、二乙胺、三乙胺、三丙胺和乙醇胺。本发明公开的实施方式中药学上可接受的盐可以通过常规化学方法从母体化合物、碱性或酸性部分合成。通常，此类盐可以通过这些化合物的游离酸形式与化学计量的适当碱(例如Na、Ca、Mg或K的氢氧化物、碳酸盐、碳酸氢盐等)反应来制备，或通过这些化合物的游离碱形式与化学计量的适当酸反应来制备。此类反应通常在水或有机溶剂中或在两者的混合物中进行。通常，在可行的情况下，优选非水介质，如乙醚、乙酸乙酯、乙醇、异丙醇或乙腈。其他合适的盐的列表可以在例如Remington's PharmaceuticalSciences,20th ed.,Mack Publishing Company,Easton,Pa.,(1985)中找到，该文献通过引用并入本文。
如本文所用，术语“药学上可接受的载体/赋形剂”包括任何和所有溶剂、分散介质、包衣、表面活性剂、抗氧化剂、防腐剂(例如，抗菌剂、抗真菌剂)、等渗剂、吸收延迟剂、盐、药物、药物稳定剂、粘合剂、赋形剂、崩解剂、润滑剂、甜味剂、调味剂、染料、例如本领域普通技术人员已知的材料和它们的组合(例如，参见Remington's PharmaceuticalSciences,18th Ed.Mack Printing Company,1990,pp.1289-1329，通过引用并入本文)。除非任何常规载体与活性成分不相容，否则考虑将其用于治疗或药物组合物中。
如本文所用，术语“受试者”是指动物。优选地，动物为哺乳动物。受试者还指例如灵长类动物(例如人)、牛、绵羊、山羊、马、狗、猫、兔、大鼠、小鼠、鱼、鸟等。在一个优选的实施方式中，受试者是人。
如本文所用，术语“治疗组合”或“组合”是指一种或多种活性药物物质即具有治疗效用的化合物的组合，特别是化学治疗剂和免疫治疗剂的组合，或如本文所述的化学治疗剂、免疫治疗剂和靶向治疗剂。通常，当前公开的实施方式的治疗组合中的每种这样的化合物将存在于药物组合物，所述药物组合物包含该化合物和药学上可接受的载体。本发明公开的实施方式的治疗组合中的化合物可以作为方案的一部分同时或分开施用。在特定实施方式中，组合的各种组分可以单独或一起配制，通过相同或不同的施用途径施用，或根据相同或不同的时间表施用。然而，即使通过不同的途径或以不同的时间表施用，也可以配合施用，从而与组分不全部施用或在没有配合的情况下施用相比，使受试者在更大的治疗效果和/或减少的不良副作用方面获得更大的益处。
II.组合物
一般而言，当前公开的实施方式提供治疗组合、药物组合物和使用组合疗法治疗癌症的方法；更具体地说，可以减少髓源性抑制细胞(MDSC)的化疗药物和免疫疗法(例如使用Toll样受体配体“TLRL”)(例如TLR7和8双激动剂，以激活先天性DC免疫)的组合。在进一步的实施方式中，该组合还将包括靶向治疗剂。
在一个方面，当前公开的实施方式提供了一种用于在需要这种治疗的受试者中治疗肿瘤或异常细胞增殖的方法，包括向受试者施用：以能够减少所述受试者的血液、脾脏和/或肿瘤微环境中的MDSC群体的量提供的化学治疗剂；和有效量的免疫治疗剂。在一些实施方式中，当作为组合的一部分使用时，免疫治疗剂的有效量比单独使用免疫治疗剂或不与化学治疗剂的使用配合使用时少。
可以使用多于一种药物组合物提供治疗组合。在这样的实施方式中，化学治疗剂可以在一种药物组合物中提供，免疫治疗剂可以在第二种药物组合物中提供，使得两种化合物可以分开施用，例如在不同时间，通过不同施用途径等。因此，还可以以不同的给药方案提供化学治疗剂和免疫治疗剂。类似地，当组合中另外包括靶向治疗时，它可以在第三种药物组合物中提供，尽管仍然以配合的方式，但可以独立于组合的其他组分中的一种或两种施用。
除非另有说明，所述化合物可包括任何药学上可接受的形式的化合物，包括任何异构体(例如，非对映异构体或对映异构体)、盐、溶剂化物、多晶型物等。特别地，如果化合物是光学活性的，则所述化合物可包括该化合物的每种对映异构体以及该对映异构体的外消旋混合物。
通常，化学治疗剂和免疫治疗剂不相互连接，例如通过共价接头。在一些实施方式中，化学治疗剂和/或免疫治疗剂不与肿瘤细胞或另一种含有肿瘤相关抗原的免疫原性组合物共同配制。在更进一步的实施方式中，化学治疗剂和/或免疫治疗剂的施用不与肿瘤细胞或另一种含有肿瘤相关抗原的免疫原性组合物的施用配合。
A.化学治疗剂
一般而言，本公开提供的方法包括在施用免疫治疗剂以及可选的靶向治疗剂之前首先向受试者施用化学治疗剂，所述化学治疗剂以能够减少受试者血液、脾脏和/或肿瘤微环境中的MDSC群体的量提供。
在一些实施方式中，化学治疗剂包含髓源性抑制细胞(MDSC)抑制剂。
本文中的“髓源性抑制细胞(MDSC)抑制剂”是指能够调节免疫抑制细胞例如MDSC的治疗剂。一般而言，MDSC抑制剂通过抑制MDSC的c-kit、或VEGFR、或ARG1、或iNOS、或S100或MMP的功能和ROS ERK活化或抗氧化基因而引起MDSC凋亡和/或坏死或细胞毒性的诱导。在一些实施方式中，MDSC抑制剂选自：紫杉醇、吉西他滨、5-氟尿嘧啶、奥沙利铂、顺铂、卡铂、达沙替尼、舒尼替尼和多柔比星。
B.免疫治疗剂
一般而言，当前公开的实施方式的组合或组合物包含免疫治疗剂。
本文中的“免疫治疗剂”是指能够刺激或增强身体免疫系统的化合物、分子或药剂。免疫治疗剂用于通过诱导、增强或抑制免疫反应来治疗疾病。目前公开的实施方式的免疫治疗剂通常被设计为引发或放大免疫反应，而不是抑制免疫反应。然而，在一些实施方式中，免疫治疗剂的主要作用可以是抑制免疫抑制细胞的分化或增殖，而不是更直接地引发或放大抗肿瘤免疫反应。
一般而言，当前公开的实施方式的免疫治疗剂直接或间接作用于toll样受体、核苷酸寡聚化结构域样受体、RIG-I样受体、c-型凝集素受体或胞质DNA传感器或其组合。特别地，当前公开的实施方式的免疫治疗剂能够激活人浆细胞样树突细胞、髓样树突细胞、NK细胞或肿瘤细胞或其组合。
在一些实施方式中，当前公开的实施方式的免疫治疗剂激活人类免疫细胞，包括但不限于树突细胞、巨噬细胞、单核细胞、髓源性抑制细胞、NK细胞、B细胞、T细胞或肿瘤细胞或其组合。
树突细胞是最有效的抗原呈递细胞。树突状细胞在先天性和适应性免疫反应的启动中发挥着重要作用。树突细胞还在免疫耐受的诱导和维持中起关键作用。
本文中的“树突细胞”(DC)是指包括两种主要亚型：即骨髓DC(mDC)和浆细胞DC(pDC)的异质细胞群(Steinman et al.,1979,J.Exp.Med.,149,1-16)。这两个血液DC亚群最初是通过它们的CD11c(整合素补体受体)和CD123(IL-3Rα)的表达来区分的。pDC和mDC群体各构成约0.2％至约0.6％的人类PBMC群体。
本文中的“pDC”是指浆细胞样树突细胞并且它们代表在血液和外周淋巴器官中发现的树突细胞的亚型。这些细胞表达表面标志物CD123、BDCA-2(CD303)、BDCA-4(CD304)和HLA-DR，但不表达CD11c、CD14、CD3、CD20或CD56，这将它们与常规树突状细胞、单核细胞、T细胞、B细胞和NK细胞区分开来。作为先天免疫系统的组成部分，这些细胞表达细胞内Toll样受体7和9，它们能够检测病毒和细菌核酸，例如ssRNA或CpG DNA基序。在刺激和随后的激活后，这些细胞产生大量I型干扰素(主要是IFN-α和IFN-β)和III型干扰素(例如，IFN-λ)，它们是关键的多效性抗病毒化合物，可介导广泛的作用。通过产生大量I型干扰素、细胞因子和趋化因子，浆细胞样树突状细胞广泛参与机体的先天性和适应性免疫反应。它们可以调节NK细胞、T细胞、B细胞和其他参与免疫反应强度、持续时间和反应模式的细胞，从而在肿瘤、感染和自身免疫疾病中发挥非常重要的作用。(Liu YJ.IPC:professional type 1interferon-producing cells and plasmacytoid dendritic cell precursors.AnnualRev Immunol.2005；23:275-306.Gilliet M,Cao W,Liu YJ.Plasmacytoid dendriticcells:sensing nucleic acids in viral infection and autoimmune diseases.NatRev Immunol.2008 Aug；8(8):594-606)。
本文中的“mDC”是指髓样树突细胞并且它们代表在血液和外周淋巴器官中发现的循环树突细胞的亚型。这些细胞表达表面标志物CD11c、CD1a、HLA-DR和BDCA-1(CD1c)或BDCA-3(CD141)。它们不表达BDCA-2或CD123，这将它们pDC区分开来。mDC也不表达CD3、CD20或CD56。作为先天免疫系统的组成部分，mDC表达Toll样受体(TLR)，包括TLR2、3、4、5、6和8，它们可以检测细菌和病毒成分。在刺激和随后激活后，这些细胞是最有效的抗原呈递细胞，可激活抗原特异性CD4和CD8 T细胞。此外，mDC具有产生大量IL-12和IL23的能力，这对于诱导Th1介导或Th17细胞介导的免疫至关重要。
研究发现，许多实体瘤，例如乳腺癌、头颈癌和卵巢癌具有驻留的pDC(TreilleuxI,Blay JY,Bendriss-Vermare N et al.Dendritic cell infiltration and prognosisof early stage breast cancer,Clin Cancer Res 2004,10:7466-7474；Hartmann E,Wollenberg B,Rothenfusser S et al.,Identification and functional analysis oftumor-infiltrating plasmacytoid dendritic cells in head and neck cancer,Cancer Res 2003；63:6478-6487；Zou WP,Machelon V,Coulomb-L'Hermin A,etal.Stromal-derived factor-1in human tumors recruits and alters the functionof plasmacytoid precursor dendritic cells,Nat Med 2001,7:1339-1346)以及肿瘤细胞分泌的因子抑制DC成熟(Gabrilovich DI,Corak J,Ciernik IF et al.,Decreasedantigen presentation by dendritic cells in patients with breast cancer,ClinCancer Res 1997,3:483-490；Bell D,Chomarat P,Broyles D et al.,In breastcarcinoma tissue,immature dendritic cells reside within the tumor,whereasmature dendritic cells are located in peritumoral areas,J Exp Med 1999,190:1417-1425；Menetrier-Caux C,Montmain G,Dieu MC et al.Inhibition of thedifferentiation of dendritic cells from CD34(+)progenitors by tumor cells:role of interleukin-6and macrophage colony-stimulating factor,Blood 1998,92:4778-4791)。这些未成熟的DC并没有起到促进抗肿瘤免疫的作用。相比之下，肿瘤微环境中的DC通过抑制抗肿瘤免疫和促进血管生成来促进肿瘤生长。有证据表明，Toll样受体7激动剂咪喹莫特和Toll样受体9激动剂CpG药物可以刺激肿瘤微环境内的pDC以抑制肿瘤发展(Dummer R,Urosevic M,Kempf W et al.,Imiquimod in basal cell carcinoma:howdoes it work？,Br J Dermatol 2003,149:57-58；Miller RL,Gerster JF,Owens ML etal.,Imiquimod applied topically:a novel immune response modifier and newclass of drug,Int J Immunopharmacol 1999,21:1-14；Hofmann MA,Kors C,Audring Het al.,Phase 1 evaluation of intralesionally injected TLR9-agonist PF-3512676in patients with basal cell carcinoma or metastatic melanoma,J Immunother2008,31:520-527)。
自然杀伤(NK)细胞是一种构成免疫系统主要成分的细胞毒性淋巴细胞。NK细胞是外周血淋巴细胞的子集，由CD56或CD16的表达以及T细胞受体(CD3)的缺失限定。它们无需以MHC不受限制的方式启动即可识别并杀死转化细胞系。NK细胞在排斥肿瘤和被病毒感染的细胞中起主要作用。NK细胞识别靶细胞并传递足够的信号以触发靶细胞裂解的过程由细胞表面上的一系列抑制性和激活性受体决定。NK区分自身与改变的自身涉及MHC-I分子和非MHC配体如CD48和Clr-1b的抑制性受体识别。NK对感染或受损细胞(自身改变)的识别是通过应激诱导的配体(例如MICA、MICB、Rae1、H60、Mult1)或由各种激活受体识别的病毒编码配体(例如m157、血凝素)来协调的，激活受体包括NKG2D、Ly49H和NKp46/Ncr1。
在同种异体或自体干细胞移植后数月内，NK细胞代表外周血中的主要淋巴细胞，在此期间它们在对病原体的免疫中起主要作用(Reittie et al.,(1989)Blood 73:1351-1358；Lowdell et al.,(1998)Bone Marrow Transplant 21:679-686)。在Lowdell(2003)Transfusion Medicine 13:399-404中综述了NK细胞在移植、移植物抗宿主病、抗白血病活性和移植后感染中的作用。
人类NK细胞通过天然细胞毒性和抗体依赖性细胞毒性(ADCC)介导肿瘤细胞和病毒感染细胞的裂解。
人类NK细胞受阳性和阴性细胞溶解信号控制。阴性(抑制)信号由含有C-凝集素结构域的受体CD94/NKG2A和一些杀伤性免疫球蛋白样受体(KIR)转导。抑制性信号对NK裂解的调节被称为“自身缺失”假说，其中在靶细胞表面表达的特定HLA类I等位基因与NK细胞上的抑制性受体连接。肿瘤细胞和一些病毒感染细胞(例如CMV)上HLA分子的下调将这种抑制降低到目标阈值以下，如果靶细胞也携带NK引发和激活分子，则靶细胞可能对NK细胞介导的裂解敏感。TLR7、TLR8或TLR9激动剂可以激活mDC和pDC以产生I型IFN并表达共刺激分子，如GITR配体，随后激活NK细胞产生IFN-γ并有效促进NK细胞杀伤功能。
抑制性受体分为两组，称为杀伤性免疫球蛋白样受体(KIR)的Ig超家族的那些和在细胞表面与CD94形成二聚体的凝集素家族NKG2的那些。KIR具有2或3域的细胞外结构，并与HLA-A、-B或-C结合。HLA-E是NKG2/CD94复合物的配体。
抑制性KIR具有多达4个包含ITIM的细胞内结构域，并且表征最好的是已知结合HLA-C分子的KIR2DL1、KIR2DL2和KIR2DL3。KIR2DL2和KIR2DL3结合组1HLA-C等位基因，而KIR2DL1结合组2等位基因。某些白血病/淋巴瘤细胞表达组1和组2HLA-C等位基因，并且已知对NK介导的细胞裂解具有抗性。
关于阳性激活信号，ADCC被认为是通过CD16介导的，并且已经确定了许多负责天然细胞毒性的触发受体，包括CD2、CD38、CD69、NKRP-1、CD40、B7-2、NK-TR、NKp46、NKp30和NKp44。几个具有短胞质内尾巴的KIR分子也具有刺激性。已知这些KIR(KIR2DS1、KIR2DS2和KIR2DS4)与HLA-C结合；它们的细外结构域与其相关的抑制性KIR相同。激活性KIR缺乏ITIM，而是与DAP12相关联，导致NK细胞激活。抑制性与激活性KIR表达的控制机制仍然未知。
一些报道描述了TLR在小鼠或人类癌症或癌细胞系中的表达。例如，TLR1到TLR6由结肠、肺、前列腺和黑色素瘤小鼠肿瘤细胞系表达(Huang B,et al.,Toll-like receptorson tumor cells facilitate evasion of immune surveillance,Cancer Res.2005,65(12):5009–5014)；TLR3在人类乳腺癌细胞中表达(Salaun B,Coste I,Rissoan MC,Lebecque SJ,Renno T,TLR3 can directly trigger apoptosis in human cancercells,J Immunol.2006；176(8):4894–4901)；肝癌和胃癌细胞表达TLR2和TLR4(Huang B,et al.,Listeria monocytogenes promotes tumor growth via tumor cell toll-likereceptor 2 signaling,Cancer Res.2007,67(9):4346–4352)；TLR9(Droemann D,et al.,Human lung cancer cells express functionally active Toll-like receptor 9,Respir Res.2005,6:1)；和TLR4(He W,Liu Q,Wang L,Chen W,Li N,Cao X,TLR4signaling promotes immune escape of human lung cancer cells by inducingimmunosuppressive cytokines and apoptosis resistance,Mol Immunol.2007,44(11):2850–2859)由人类肺癌细胞表达。TLR7和TLR8存在于人类肺癌的肿瘤细胞中(Cherfils-Vicini J,Platonova S,Gillard M,Laurans L,Validire P,Caliandro R,MagdeleinatP,Mami-Chouaib F,Dieu-Nosjean MC,Fridman WH,Damotte D,Sautès-Fridman C,CremerI,J.Clin Invest.2010,120(4):1285–1297)。
TLR是一个蛋白质家族，其感知微生物产物和/或启动适应性免疫反应。TLR激活树突状细胞(DC)。TLR是保守的跨膜分子，包含富含亮氨酸重复的胞外域、跨膜域和细胞内TIR(Toll/白细胞介素受体)域。TLR识别微生物中的不同结构，通常称为“PAMP”(病原体相关分子模式)。配体与TLR的结合会引发一系列细胞内信号通路，诱导炎症和免疫相关因子的产生。
在一些实施方式中，免疫治疗剂是TLR7和/或TLR8激动剂。TLR7和TLR8在系统发育和结构上是相关的。TLR7由人类pDC和B细胞选择性表达。TLR8主要表达mDC、单核细胞、巨噬细胞和骨髓抑制细胞。TLR7特异性激动剂激活浆细胞样DC(pDC)以产生大量1型IFN并表达高水平的共刺激分子，促进T细胞、NK细胞、B细胞和mDC的激活。TLR8特异性激动剂激活髓系DC、单核细胞、巨噬细胞或髓源性抑制细胞以产生大量1型IFN、IL-12和IL-23，并表达高水平的MHC I类、MHC II类和共刺激分子，促进抗原特异性CD4+和CD8+T细胞的活化。
TLR7和TLR8的双重激动剂包括瑞喹莫德、CL075(3M002)、CL097、天然ssRNA、polyU、poly(dT)、富含GU的寡核苷酸，例如ssRNA40、ssRNA-DR和ORN06。
TLR7特异性激动剂包括CL264、CL307、加地喹莫特(gardiquimod)、咪喹莫特和洛索立宾。TLR8特异性激动剂包括TL8-506和ORN02。
在一些实施方式中，免疫治疗剂是由式(I)的结构表示的TLR7和/或TLR8激动剂或其药学上可接受的盐或溶剂化物：
Figure BDA0003187013320000241
其中虚线代表键或键不存在；
X为S或-NR1，R1为-W0-W1-W2-W3-W4，
W0为键、烷基、烯基、炔基、烷氧基或-烷基-S-烷基--，
W1为键、--O--或-NR2--，其中R2为氢、烷基或烯基，
W2为键、--O--、--C(O)--、--C(S)--或-S(O)2-，
W3为键、--NR3--，其中R3为氢、烷基或烯基，
W4为氢、烷基、烯基、炔基、烷氧基、环烷基、芳基、芳氧基、杂芳基或杂环基，其各自任选地被一个或多个取代基取代，所述取代基选自羟基、烷氧基、烷基、烯基、炔基、环烷基、芳基、杂芳基、杂环基、--NH2、硝基、--烷基-羟基、--烷基-芳基、--烷基-杂芳基、--烷基-杂环基、--O-R4、--O-烷基-R4、--烷基-O-R4、--C(O)-R4、--烷基-C(O)-R4、--烷基-C(O)-O-R4、--C(O)-O-R4、--S-R4、--S(O)2-R4、--NH-S(O)2-R4、--烷基-S-R4、--烷基-S(O)2-R4、--NHR4、--NR4R4、--NH-烷基-R4、卤素、--CN、--NO2和-SH组成的组，其中R4独立地为氢、烷基、烯基、--烷基-羟基、芳基、杂芳基、杂环基或卤代烷基；
Z为氢、烷基、烯基、炔基、烷氧基、芳基、卤代烷基、杂芳基、杂环基，其各自任选地可被一个或多个取代基取代，所述取代基选自羟基、烷氧基、烷基、烯基、炔基、芳基、杂芳基、杂环基、卤素、氰基、硝基、--N(R5)2、--烷氧基-烷基、--烷氧基-烯基、-C(O)-烷基、-C(O)-O-烷基、--O-C(O)-烷基、--C(O)-N(R5)2、芳基、杂芳基、--CO-芳基和-CO-杂芳基组成的组，其中每个R5独立地为氢、烷基、卤代烷基，--烷基-芳基，或-烷基-杂芳基；
R为氢、烷基、烷氧基、卤代烷基、卤素、芳基、杂芳基、杂环基，其各自任选地被被一个或多个取代基取代，所述取代基选自羟基、烷氧基、烷基、烯基、炔基、环烷基、芳基、杂芳基、杂环基、--NH2，硝基、--烷基-羟基、--烷基-芳基、--烷基-杂芳基、--烷基-杂环基、--O-R4、--O-烷基-R4、--烷基-O-R4、--C(O)-R4、--C(O)-NH-R4、--C(O)-NR4R4、--烷基-C(O)-R4、--烷基-C(O)-O-R4、--C(O)-O-R4、--OC(O)-R4、--S-R4、--C(O)-S-R4、--S-C(O)-R4、--S(O)2-R4、--NH-S(O)2-R4、--烷基-S-R4、--烷基-S(O)2-R4、--NHR4、--NR4R4、--NH-烷基-R4、卤素、-CN和-SH组成的组，其中R4独立地为氢、烷基、烯基、烷氧基、-烷基-羟基、芳基、杂芳基、杂环基或卤代烷基；
n为0、1、2、3或4；
Y为-NR6R7、-CR6R7R8或-烷基-NH2，其各自任选地可被一个或多个取代基取代，所述取代基选自羟基、烷氧基、烷基、烯基、炔基、--NH2、卤素、--N(R5)2、--烷氧基-烷基、--烷氧基-烯基、--C(O)-烷基、--C(O)-O-烷基、--C(O)-N(R5)2、芳基、杂芳基、--CO-芳基和-CO-杂芳基组成的组，
其中R6、R7和R8独立地为氢、烷基、烯基、烷氧基、烷氨基、二烷氨基、烷硫基、芳硫基、--烷基-羟基、--烷基-C(O)-O-R9、--烷基-C(O)-R9或-烷基-OC(O)-R9，其中每个R5独立地为氢、烷基、卤代烷基、--烷基-芳基或-烷基-杂芳基，其中R9为氢、烷基、烯基、卤素或卤代烷基；
X和Z一起可任选地形成(5-9)元环。
在一些实施方式中，式(I)的X为S。
在一些实施方式中，式(I)的X为-NR1，R1为烷基、--烷基-W4、--烷基-O-W4、--烷基-NH-C(O)-W4、--烷氧基-NH-C(O)-W4、--烷基-NH-C(O)-NH-W4、--烷氧基-NH-C(O)-NH-W4、--烷基-S(O)2-W4或--烷基-NH-C(S)-W4，其中W4如上所定义。
在一些实施方式中，式(I)的Z是氢、烷基、烷氧基、芳基、杂芳基、卤代烷基，其中每一个任选地被一到三个取代基取代，所述取代基选自羟基、烷基、芳基、杂芳基、杂环基、氰基、-烷氧基-烷基、硝基和-N(R5)2组成的组，其中每个R5独立地为氢、烷基、卤代烷基、-烷基-芳基或-烷基-杂芳基。
在一些实施方方式中，式(I)的Y为-NH2、--烷基-NH2，其中每一个任选地被一到三个取代基取代，所述取代基选自烷基、烷氧基、烯基和炔基组成的组。
在一些实施方式中，式(I)的n为1或2。
在一些实施方式中，式(I)的R为芳基或杂芳基，其各自任选地被一到三个取代基取代，所述取代基选自羟基、烷氧基、--烷基-羟基、--O-R4、--O-烷基-R4、--烷基-O-R4、--C(O)-R4、--C(O)-NH-R4、--C(O)-NR4R4、--烷基-C(O)-R4、--烷基-C(O)-O-R4、--C(O)-O-R4、--OC(O)-R4、--S-R4、--C(O)-S-R4、--SC(O)-R4、--S(O)2-R4、--NH-S(O)2-R4、--烷基-S-R4、--烷基-S(O)2-R4、--NHR4、-NR4R4、--NH-烷基-R4、卤素、--CN和-SH组成的组，其中R4独立地为氢、烷基、烯基、烷氧基、--烷基-羟基、芳基、杂芳基、杂环基或卤代烷基。
在一些实施方式中，免疫治疗剂是选自表2的TLR7和/或TLR8激动剂。表2中的化合物在US4,689,338、US5,389,640、US5,226,575、US6,110,929、US6,194,425、US5,352,784、US6,331,539、US5,482,936、US6,451810、WO2002/46192、WO2002/46193、WO2002/46194、US2004/0014779和US2004/0162309中有更详细的描述和表征。
表2代表性TLR7和/或TLR8激动剂
Figure BDA0003187013320000261
Figure BDA0003187013320000271
Figure BDA0003187013320000281
Figure BDA0003187013320000291
Figure BDA0003187013320000301
Figure BDA0003187013320000311
Figure BDA0003187013320000321
优选地，在一些实施方式中，免疫治疗剂是瑞喹莫德或咪喹莫特。
在一些实施方式中，免疫治疗剂是由式(II)的结构表示的TLR调节剂(例如，TLR7和/或TLR8激动剂)：
Figure BDA0003187013320000322
其中V为–NR6R7，其中R6和R7中各自独立地为氢、烷基、烯基、烷氧基、烷氨基、二烷氨基、烷硫基、芳硫基、--烷基-羟基、--烷基-C(O)-O-R9、--烷基-C(O)-R9或–烷基-OC(O)-R9，其中R9为氢、烷基、烯基、氢或卤代烷基；
R10和R11独立地为氢、烷基、烯基、芳基、卤代烷基、杂芳基、杂环基或环烷基，其各自任选被一个或多个取代基取代，所述取代基选自羟基、烷氧基、烷基、烯基、炔基、卤素、--N(R5)2、--烷氧基-烷基、--烷氧基-烯基、--C(O)-烷基、--C(O)-O-烷基、--C(O)-N(R5)2、芳基、杂芳基、--CO-芳基和–CO-杂芳基组成的组，其中每个R5独立地为氢、烷基、卤代烷基、--烷基-芳基或–烷基-杂芳基，
或其药学上可接受的盐或溶剂化物。
在一些实施方式中，免疫治疗剂是为式(III)的结构表示的TLR调节剂(例如，TLR7和/或TLR8激动剂)：
Figure BDA0003187013320000331
其中
Figure BDA0003187013320000332
为双键或单键；R2和R3独立地选自H和低级烷基，或R2和R3连接形成具有3至7个环成员的饱和碳环；R7和R8中一个为
Figure BDA0003187013320000333
Figure BDA0003187013320000334
另一个为氢；R4为—NRcRd或—OR10；Rc和Rd为低级烷基，其中该烷基任选被一个或多个-OH取代；R10为烷基，其中该烷基任选地被一个或多个-OH取代；Z为C且
Figure BDA0003187013320000335
为双键，或Z为N且
Figure BDA0003187013320000336
为单键；Ra和Rb独立地选自H、烷基、烯基、炔基和Re，其中烷基任选被一个或多个—OR10或Re取代，Re选自—NH2、—NH(烷基)和—N(烷基)2；当
Figure BDA0003187013320000337
为双键时，R1不存在，或当
Figure BDA0003187013320000338
为单键时，N1—R1和Ra或Rb中的一个连接形成饱和、部分不饱和或不饱和的具有5-7个环成员的杂环，Ra或Rb中的另一个可以是氢或不存在以适应环不饱和度；并且以下A-D中的至少一个适用：A)R7不是氢；B)R8不是氢并且Ra和Rb中的至少一个不是氢；C)Z为N；或D)N1—R1与Ra或Rb中的一个连接形成具有5-7个环成员的饱和、部分不饱和或不饱和杂环。US20140088085A1的公开内容以全文引用的方式并入本文中。
在一些实施方式中，式(III)化合物的R7为
Figure BDA0003187013320000341
此外，在式(III)化合物中，Ra和Rb中的至少一个不是氢，或者，例如，Ra和Rb中的一个为烷基并且另一个为氢。此外，式(III)的烷基被Re取代。在一个不同的实施方式中，Ra和Rb两者都是烷基，或者Ra和Rb中的一个为Re而另一个为氢。例如，式(III)的R8不是氢。
在一些替代实施方式中，式(III)的N1和Ra或Rb中的一个连接以形成具有5-7个环成员的饱和、部分不饱和或不饱和杂环，并且Ra或Rb中的另一个为氢，或根据需要不存在以适应环不饱和度，其中环是5元环，或者，例如，环是：
Figure BDA0003187013320000342
在一些实施方式中，式(III)化合物中的R2和R3中的至少一个不为氢，或者例如，R2和R3连接形成饱和碳环，其中饱和碳环是环丙基。或者，式(III)化合物中，Z是N。
在一些实施方式中，TLR激动剂或调节剂具有式(IV)的结构：
Figure BDA0003187013320000343
其中R4选自—NRcRd和—OR10；Rc和Rd是低级烷基，其中该烷基任选被一个或多个—OH取代；R10为烷基，其中该烷基任选地被一个或多个—OH取代；Rf和Rg为低级烷基或Rf和Rg与它们所连接的氮原子一起形成具有4-6个环成员的饱和杂环。例如，式(IV)化合物中的Rf和Rg与它们所连接的氮原子一起形成饱和杂环，其中杂环为吡咯烷。
在一些替代实施方式中，式(III)或式(IV)的R4为—OR10，其中R10为烷基或乙基。在另一个实施方式中，式(III)或式(IV)的R4为—NRcRd，其中两者都为烷基或两者都为丙基。此外，在某些实施方式中，Rc或Rd中的至少一个是被一个—OH取代的烷基或Rc和Rd中的至少一个为
Figure BDA0003187013320000351
，并且剩下的Rc或Rd为丙基。
在一些替代实施方式中，TLR激动剂为选自
Figure BDA0003187013320000352
Figure BDA0003187013320000353
的化合物。
或者，该化合物选自
Figure BDA0003187013320000354
Figure BDA0003187013320000361
在一些替代实施方式中，TLR激动剂化合物为
Figure BDA0003187013320000362
在一些替代实施方式中，TLR激动剂是选自
Figure BDA0003187013320000363
Figure BDA0003187013320000371
Figure BDA0003187013320000372
的化合物。
在一些替代实施方式中，TLR激动剂为
Figure BDA0003187013320000373
在一些替代实施方式中，TLR激动剂是选自：
Figure BDA0003187013320000374
Figure BDA0003187013320000381
Figure BDA0003187013320000391
Figure BDA0003187013320000401
Figure BDA0003187013320000402
的化合物。
在一些实施方式中，免疫治疗剂为由式(V)：
Figure BDA0003187013320000403
的结构表示的TLR调节剂(例如，TLR7和/或TLR8激动剂)及其代谢物、溶剂化物、互变异构体和药物前体，其中：
Y为CF2CF3、CF2CF2R6或芳基或杂芳基环，其中所述芳基和杂芳基环被独立地选自烯基、炔基、Br、CN、OH、NR6R7、C(＝O)R8、NR6SO2R7、(C1-C6烷基)氨基、R6OC(＝O)CH＝CH2-、SR6和SO2R6的一个或多个基团取代，并且其中芳基和杂芳基环任选地进一步被独立地选自F、Cl、CF3、CF3O-、HCF2O-、烷基、杂烷基和ArO-的一个或多个基团取代；
R1、R3和R4独立地选自H、烷基、烯基、炔基、杂烷基、环烷基、环烯基、杂环烷基、芳基和杂芳基，其中烷基、烯基、炔基、杂烷基、环烷基、环烯基、杂环烷基、芳基和杂芳基任选地被独立选自烷基、烯基、炔基、F、Cl5、Br、I、CN、OR6、NR6R7、C(＝O)R6、C(＝O)OR6、OC(＝O)R6、C(＝O)NR6R7、(C1-C6烷基)氨基、CH3OCH2O-、R6OC(^O)CH＝CH2-、NR6SO2R7、SR6和SO2R6的一个或多个基团取代，
或R3和R4与它们所连接的原子一起形成饱和或部分不饱和的碳环，其中该碳环任选地被独立地选自烷基、烯基、炔基、F、Cl、Br、I、CN、OR6、NR6R7、C(＝O)R6、C(＝O)OR6、0C(＝0)R6、C(＝O)NR6R7、(C1-C6烷基)氨基、CH3OCH2O-、R6OC(＝O)CH＝CH2-、NR6SO2R7、SR6和SO2R6的一个或多个基团取代；
R2和R8独立地选自H、OR6、NR6R7、烷基、烯基、炔基、杂烷基、环烷基、环烯基、杂环烷基、芳基和杂芳基，其中烷基、烯基、炔基、杂烷基、环烷基、环烯基、杂环烷基、芳基和杂芳基任选地被独立地选自烷基、烯基、炔基、F、Cl、Br5I、CN、OR6、NR6R7、C(＝O)R6、C(＝O)OR6、OC(＝O)R6、C(^O)NR6R7、(C1-C6烷基)氨基、CH3OCH2O-、R6OC(＝O)CH＝CH2-、NR6SO2R7、SR6和SO2R6的一个或多个基团取代；
R5a、R5b和R5c独立地为H、F、Cl、Br、I5 OMe5CH3、CH2F5CHF2或CF3；
R6和R7独立地选自H5烷基、烯基、炔基、杂烷基、环烷基、环烯基、杂环烷基、芳基和杂芳基，其中所述烷基、烯基、炔基、杂烷基、环烷基、环烯基、杂环烷基、芳基和杂芳基任选地被独立地选自烷基、烯基、炔基、F、Cl、Br、I、CN、OR6、NR6R7、C(＝O)R6、C(＝O)OR6、OC(＝O)R6、C(＝O)NR6R7、(C1-C6烷基)氨基、CH3OCH2O-、R6OC(^O)CH＝CH2-、NR6SO2R7、SR6和SO2R6的一个或多个基团取代，
或R6和R7与它们所连接的原子一起形成饱和或部分不饱和的杂环，其中所述杂环任选地被独立地选自烷基、烯基、炔基、F、Cl、Br、I、CN、OR6、NR6R7、C(＝O)R6、C(＝O)OR6、OC(＝O)R6、C(＝O)NR6R7、(C1-C6烷基)氨基、CH3OCH2O-、R6OC(＝O)CH＝CH2-、NR6SO2R7、SR6和SO2R6的一个或多个基团取代。在某些实施方式中，R1、R3和R4各自为氢。在某些实施式中，R5a、R5b和R5c各自为氢。WO2007024612A2的公开内容以全文引用的方式并入本文中。
在式(V)化合物的一些实施方式中，R2为OR6。在一些实施方式中，R6为烷基，例如(C1-4)烷基。在特定实施方式中，R6为乙基。
在式(V)化合物的一些实施方式中，R2为NR6R7。在一些实施方式中，R6和R7独立地为H、烷基，例如(1-6C)烷基或杂烷基，例如(C1-4烷氧基C2-4)烷基。在特定实施方式中，R6和R7独立地为H、乙基、丙基或CH2CH2OCH3。在式V化合物的一些实施方式中，Y是芳基，例如苯基。在一些实施方式中，芳基被C(＝O)R8取代，例如在对-R8C(＝O)苯基中。在一些实施方式中，R8为OR6、NR6R7或杂环烷基。在一些实施方式中，R6和R7独立地为H或烷基，例如(C1-6)烷基。在一些其他实施方式中，R6和R7与它们所连接的氮原子一起形成4-6元氮杂环烷基环，例如吡咯烷基。在一些实施方式中，Y为
Figure BDA0003187013320000421
在式(V)化合物的一些实施方式中，Y为CF2CF3。
在一些实施方式中，免疫治疗剂为由式(VI)的结构表示的TLR调节剂(例如，TLR8激动剂)及其代谢物、溶剂化物、互变异构体和药学上可接受的药物前体和盐：
Figure BDA0003187013320000422
其中：
Z为H、烷基、烯基、炔基、杂烷基、环烷基、杂环烷基、芳基、杂芳基、OR6或NR6R7，其中烷基、烯基、炔基、杂烷基、环烷基、杂环烷基、芳基和杂芳基任选地被独立选自烷基、烯基、炔基、F、Cl3Br、I、CN、OR6、NR6R7、C(＝O)R6、C(＝O)OR6、OC(＝O)R6、C(＝O)NR6R7、(C1-C6烷基)氨基、CH3OCH2O-、R6OCC＝O)CH＝CH2-、NR6SO2R7、SR6和SO2R6的一个或多个基团取代；
R1、R2、R3和R4独立地选自H、烷基、烯基、炔基、杂烷基、环烷基、环烯基、杂环烷基、芳基和杂芳基，其中所述烷基、烯基、炔基、杂烷基、环烷基、环烯基、杂环烷基、芳基和杂芳基任选地被独立选自烷基、烯基、炔基、F、Cl、Br、I、CN、OR6、NR6R7、CC＝O)R6、C(＝O)OR6、OC(＝O)R6、CC＝O)NR6R7、(C1-C6烷基)氨基、CH3OCH2O-、R6OCC＝O)CH＝CH2-、NR6SO2R7、SR6和SO2R6的一个或多个基团取代，
或R1和R2与它们所连接的原子一起形成饱和或部分不饱和的碳环，其中所述碳环任选地被独立地选自烷基、烯基、炔基、F、Cl、Br、I、CN、OR6、NR6R7、C(＝O)R6、CC＝O)OR6、OC(＝O)R6、CC＝O)NR6R7、CCi-C6烷基)氨基、CH3OCH2O-、R6OCC＝O)CH＝CH2-、NR6SO2R7、SR6和SO2R6的一个或多个基团取代；
或R3和R4一起是氧代(oxo)；
每个R5独立地选自H、F、Cl、Br、I、OMe、CH3、CH2F、CHF2、CF3和CF2CF3；
R6和R7独立地选自H、烷基、烯基、炔基、杂烷基、环烷基、环烯基、杂环烷基、芳基和杂芳基，其中所述烷基、烯基、炔基、杂烷基、环烷基、环烯基、杂环烷基、芳基和杂芳基任选地被独立地选自烷基、烯基、炔基、F、Cl、Br、I、CN、OR6、NR6R7、CC＝O)R6、C(＝0)0R6、0C(＝0)R6、CC＝O)NR6R7、(C1-C6烷基)氨基、CH3OCH2O-、R6OC(＝O)CH＝CH2-、NR6SO2R7、SR6和SO2R6的一个或多个基团取代，
或R6和R7与它们所连接的原子一起形成饱和或部分不饱和的杂环，其中所述杂环任选地被独立地选自烷基、烯基、炔基、F、Cl、Br、I、CN、OR6、NR6R7、CC＝O)R6、C(＝0)0R6、0C(＝0)R6、CC＝O)NR6R7、(C1-C6烷基)氨基、CH3OCH2O-、R6OC(＝O)CH＝CH2-、NR6SO2R7、SR6和SO2R6的一个或多个基团取代；n为O、1、2、3或4。WO2007040840A2的公开内容以全文引用的方式并入本文中。
在一些实施方式中，免疫治疗剂为由式(VI)的结构表示的TLR调节剂(例如，TLR7和/或8激动剂)及其代谢物、溶剂化物、互变异构体及药学上可接受的盐和药物前体：
Figure BDA0003187013320000431
其中：Z为H、烷基、烯基、炔基、杂烷基、环烷基、杂环烷基、芳基、杂芳基、OR6或NR6R7，其中所述烷基、烯基、炔基、杂烷基、环烷基、杂环烷基、芳基和杂芳基任选地被独立选自烷基、烯基、炔基、F、Cl、Br、I、CN、OR6、NR6R7、C(＝O)R6、C(＝O)OR6、OC(＝O)R6、C(＝O)NR6R7、(C1-C6烷基)氨基、CH3OCH2O-、R6OCC＝O)CH＝CH2-、NR6SO2R7、SR6和SO2R6的一个或多个基团取代；
R1、R2、R3和R4独立地选自H、烷基、烯基、炔基、杂烷基、环烷基、环烯基、杂环烷基、芳基和杂芳基，其中所述烷基、烯基、炔基、杂烷基、环烷基、环烯基、杂环烷基、芳基和杂芳基任选地被独立选自烷基、烯基、炔基、F、Cl、Br、I9CN、OR6、NR6R7、CC＝0)R6、C(＝O)OR6、OC(＝O)R6、C(＝O)NR6R7、(C1-C6烷基)氨基、CH3OCH2O-、R6OCC＝O)CH＝CH2-、NR6SO2R7、SR6和SO2R6的一个或多个基团取代，
或R1和R2与它们所连接的原子一起形成饱和或部分不饱和的碳环，其中所述碳环任选地被独立地选自烷基、烯基、炔基、F、Cl、Br、I、CN、OR6、NR6R7、C(＝0)R6、C(＝O)OR6、OC(＝O)R6、C(＝O)NR6R7、(C1-C6烷基)氨基、CH3OCH2O-、R6OC(＝O)CH＝CH2-、NR6SO2R7、SR6和SO2R6的一个或多个基团取代；
或R3和R4一起是氧代(oxo)；
R5为H、F、Cl、Br、I、OMe、CH3、CH2F、CHF2、CF3和CF2CF3；
R6和R7独立地选自H、烷基、烯基、炔基、杂烷基、环烷基、环烯基、杂环烷基、芳基和杂芳基，其中所述烷基、烯基、炔基、杂烷基、环烷基、环烯基、杂环烷基、芳基和杂芳基任选地被独立地选自烷基、烯基、炔基、F、Cl、Br、I、CN、OR6、NR6R7、C(＝O)R6、C(＝0)0R6、0C(＝0)R6、C(＝O)NR6R7、(C1-C6烷基)氨基、CH3OCH2O-、R6OC(＝O)CH＝CH2-、NR6SO2R7、SR6和SO2R6的一个或多个基团取代，
或R6和R7与它们所连接的原子一起形成饱和或部分不饱和的杂环，其中所述杂环任选地被独立地选自烷基、烯基、炔基、F、Cl、Br、I、CN、OR6、NR6R7、C(＝O)R6、C(＝O)OR6、OC(＝O)R6、CC＝O)NR6R7、(C1-C6烷基)氨基、CH3OCH2O-、R6OC(＝O)CH＝CH2-、NR6SO2R7、SR6和SO2R6的一个或多个基团取代；
n为O、1、2、3或4。
在一些实施方式中，Z为OR6。在一些实施方式中，R6为烷基，例如(1-6C)烷基。在特定实施方式中，R6为乙基、丙基、异丙基或异丁基。
在一些实施方式中，Z为NR6R7。在一些实施方式中，R6和R7独立地为H或烷基，例如(1-6C)烷基。在一些实施方式中，R6和R7为乙基。在一些实施方式中，n为O或1。
在一些实施方式中，R5是CF2CF3。在某些实施方式中，R3为H或烷基，例如(1-4C)烷基，并且R4为H。在某些实施方式中，R为烷基，例如(1-4C)烷基。在一些实施方式中，R为甲基。在其他特定实施方式中，R3为H。在一些实施方式中，R为H或烷基，例如(1-4C)烷基且R为H。在一些实施方式中，R1为烷基。在一些实施方式中，R1为甲基。在一些特定实施方式中，R1为H。
在一些实施方式中，由式(XV)的结构表示TLR7和/或TLR8激动剂：
Figure BDA0003187013320000451
其中环A代表6-10元芳香碳环或5-10元杂芳香环；
R表示卤原子、烷基、羟烷基、卤代烷基、烷氧基、羟基烷氧基、卤代烷氧基、氨基、烷基氨基、二烷基氨基或4-7元环状基团，所述4-7元环状基团在环中含有选自1-2个氮原子和任选地0-1个氧原子或0-1个硫原子的1-2个杂原子；
n表示0-2的整数，且n为2时，Rs可以相同也可以不同；
Z1表示取代或未取代的亚烷基或取代或未取代的亚环烷基；
X2代表氧原子、硫原子、SO2、NR5、CO、CONR5、NR5CO、SO2NR5、NR5SO2、NR5CONR6或NR5CSNR6(其中R5和R6各自独立地为氢原子、取代或未取代的烷基、或取代或未取代的环烷基)；
Y1、Y2和Y3各自独立地表示单键或亚烷基；
X1代表氧原子、硫原子、SO2、NR4(其中R4为氢原子或烷基)或单键；
R2代表氢原子、取代或未取代的烷基、取代或未取代的烯基、取代或未取代的炔基或取代或未取代的环烷基；和
R1代表氢原子、羟基、烷氧基、烷氧基羰基、卤代烷基、卤代烷氧基、取代或未取代的芳基、取代或未取代的杂芳基或取代或未取代的环烷基。接头连接至激动剂的可能连接位点之一，例如连接至–NH2。
在一些实施方式中，R1代表氢、羟基或C1-C6烷氧基、C2-C5烷氧基羰基、C1-C6卤代烷基、C1-C6卤代烷氧基、C6-C10芳基、C5-C10杂芳基或C3-C8环烷基，每个基团任选地被独立选自卤素、羟基、C1-C6烷基、C1-C6卤代烷基、C1-C6烷氧基、C1-C6卤代烷氧基、C2-C5烷氧基羰基、氨基(NH2)、(单)-C1-C6烷基氨基和(二)-C1-C6烷基氨基的一个或多个取代基取代；
Y1代表单键或C1-C6亚烷基；
X1代表单键、氧、硫原子、磺酰基(SO2)或NR3；
Z1代表C2-C6亚烷基或C3-C8亚环烷基，每个基团任选被至少一个羟基取代；
X2代表NR4；
Y2代表单键或C1-C6亚烷基；
Y3代表单键或C1-C6亚烷基；
n是整数0、1或2；
R代表卤素或C1-C6烷基、C1-C6羟基烷基、C1-C6卤代烷基、C1-C6烷氧基、C1-C6羟基烷氧基、C1-C6卤代烷氧基、氨基(NH2)、(单)-C1-C6烷基氨基、(二)-C1-C6烷基氨基或C3-C8饱和杂环，所述饱和杂环包含环氮原子和任选地独立地选自氮、氧和硫的一个或多个其他杂原子，所述杂环任选地被独立地选自卤素、羟基、氧代、C1-C6烷基、C1-C6烷氧基、C2-C5烷基羰基和C2-C5烷氧基羰基的一个或多个取代基取代；
R2代表氢或C1-C6烷基、C2-C6烯基、C2-C6炔基或C3-C8环烷基，每个基团任选地被独立地选自卤素、羟基或C1-C6烷氧基、C2-C10酰氧基的一个或多个取代基取代，C2-C10酰氧基选自C2-5烷基羰氧基、C2-C5烯基羰氧基、C2-C5炔基羰氧基、C6-C9芳基羰氧基和C5-C9杂芳基羰氧基，其中每个酰氧基可任选地被独立地选自卤素、羟基、C1-C3烷氧基和苯基的一个或多个取代基取代，条件是酰氧基中的碳原子总数不超过10，氨基(NH2)、(单)-C1-C6烷基氨基、(二)-C1-C6烷基氨基和包含环氮原子和任选地独立地选自氮、氧和硫的一个或多个其他杂原子的C3-C8饱和杂环，该杂环转而任选地被独立地选自卤素、羟基、氧代、C1-C6烷基、C1-C6烷氧基、C2-C5烷基羰基和C2-C5烷氧基羰基的一个或多个取代基取代；
R3代表氢或C1-C6烷基；
R4代表CO2R5、SO2R5、COR5、SO2NR6R7和CONR6R7；
R5独立代表
(i)含有1或2个选自环基NR8、S(O)m或氧的杂原子的3至8元杂环，该3至8元杂环任选地被独立选自卤素、羟基或C1-C6烷基和C1-C6烷氧基的一个或多个取代基取代，或
(ii)C6-C10芳基或C5-C10杂芳基，其各自可任选地被独立地选自卤素、氰基、C1-C6烷基、C1-C3卤代烷基、羧基、S(O)mR9、OR10、CO2R10、SO2NR10R11、CONR10R11、NR10R11、NR10SO2R9、NR10CO2R9、NR10COR9的一个或多个取代基取代，或
(iii)C1-C6烷基、C2-C6烯基、C2-C6炔基或C3-C8环烷基，其各自可任选地被独立地选自卤素、CN、C3-C8环烷基、S(O)pR12、OR13、COR13、CO2R13、SO2NR13R14、CONR13R14、NR13R14、NR13SO2R12、NR13CO2R12、NR13COR12、NR13SO2R12或C6-C10芳基或C5-C10杂芳基或杂环的一个或多个取代基取代，后三个基团可任选地被独立地选自C1-C6烷基(任选被羟基、C1-C6烷氧基、C1-C6烷氧基羰基、氨基、C1-C6烷基氨基、二-C1-C6烷基氨基、NH2C(O)—、C1-C6烷基NHC(O)、二-C1-C6烷基NC(O)、—OCH2CH2OH、吡咯烷基、吡咯烷基羰基、呋喃基、哌啶基、甲基哌啶基或苯基取代)、C2-C6烯基(任选被苯基取代)、卤素、羟基、氰基、羧基、氨基、C1-C6烷基氨基、二-C1-C6烷基氨基、NH2C(O)—、C1-C6烷基NHC(O)—、二-C1-C6烷基NC(O)、C1-C6烷氧基羰基、C1-C6烷基磺酰基、C1-C6烷基羰基氨基、C1-C6烷基羰基甲基氨基、苯基(任选被羟基、氟或甲基取代)、吡咯烷基、吡啶基、哌啶基、苯并噻唑基或嘧啶基的一个或多个取代基取代；
R6代表氢或C1-C6烷基、C2-C6烯基、C2-C6炔基、C3-C8环烷基或杂环，其各自可任选地被独立地选自卤素、羟基、氧代、氰基、C1-C6烷基、C2-C6烯基、C2-C6炔基、C3-C8环烷基、OR15、S(O)qR15、CO2R16、COR16、NR16R17、CONR16R17、NR16COR17、NR16CO2R15、SO2NR16R17、NR16SO2R15、C6-C10芳基或C5-C10杂芳基或杂环的一个或多个取代基取代，后三个基团任选被独立地选自C1-C6烷基、C3-C8环烷基、卤素、S(O)qR15、CO2R16、COR16、羟基或氰基的一个或多个取代基取代；和
R7代表氢、C1-C6烷基、C2-C6烯基、C2-C6炔基或C3-C8环烷基，每个基团可任选地被独立地选自卤素、C3-C8环烷基、C6-C10芳基或C5-C10杂芳基、羧基、氰基、OR15、羟基或NR18R19的一个或多个取代基取代，或
R6和R7与它们所连接的氮原子一起形成3至8元饱和或部分饱和的杂环，所述杂环任选地进一步包含选自氮、S(O)m或氧的其他杂原子或杂基，所述杂环可任选地被独立地选自卤素、羟基、羧基、氰基、OR20、NR21R22、S(O)qR23、COR24、CO2R24、NR24R25、CONR24R25、NR24COR25、NR24CO2R23、SO2NR24R25、NR24SO2R23、C6-C10芳基、C5-C10杂芳基、杂环、C1-C6烷基、C2-C6烯基、C2-C6炔基或C3-C8环烷基的一个或多个取代基取代，后七个基团任选地被独立地选自卤素、羟基、氧代、氰基、OR20、S(O)qR23、COR24、CO2R24、NR24R25、CONR24R25、NR24CO2R23、NR24COR25、SO2NR24R25、NR24SO2R23、杂环或C6-C10芳基或C5-C10杂芳基的一个或多个取代基取代，后三个基团任选地被独立地选自C1-C6烷基、卤素、羟基和氰基的一个或多个取代基取代；
R8代表氢、CO2R26、COR26、SO2R26、C1-C6烷基或C3-C6环烷基，每个基团可任选地被独立地选自卤素、羟基和NR27R28的一个或多个取代基取代；
R10、R11、R16、R17、R18、R19、R21、R22、R26、R27或R28各自独立地代表氢、C1-C6烷基或C3-C6环烷基；
R24和R25各自独立地表示氢、C1-C6烷基或C3-C6环烷基；或
R24和R25与它们所连接的氮原子一起形成3至8元饱和或部分饱和的杂环，所述杂环任选地进一步包含选自氮、S(O)m或氧的其他杂原子或杂基；
R9、R12、R15和R23代表C1-C6烷基或C3-C6环烷基；
R13和R14的定义分别如R6和R7；
R20表示任选地被独立地选自卤素、羟基或OR23的一个或多个取代基取代的C1-C6烷基；
m、p、q和r各自独立地表示整数0、1或2；和
A代表C6-C10芳基或C5-C12杂芳基。参见WO2008004948A1、US 8,138,172和US8,575,180，它们的公开内容通过引用整体并入。
在一些实施方式中，TLR7和/或TLR8激动剂具有以下结构：
Figure BDA0003187013320000481
其中，R为Me或H。
在一些实施方式中，TLR7和/或TLR8激动剂具有以下结构：
Figure BDA0003187013320000482
Figure BDA0003187013320000491
Figure BDA0003187013320000501
在一些实施方式中，TLR7和/或TLR8激动剂具有式(XVI)的结构：
Figure BDA0003187013320000502
其中：R1独立地为H、-C(O)R3或外消旋、L-或D-氨基酸基团
-C(O)CHNH2R4，其中R3为取代或未取代的烷基，R4为H、或取代或未取代的烷基；
R2为H、O、OR5或N(R6)2，其中R5独立地为H或烷基，且其中R6独立地为H、取代或未取代的烷基、环烷基或与氮一起形成取代或未取代的杂环烷基环；并且其中如果R是-OH，则R基团中的至少一个为外消旋、L-或D-氨基酸基团-C(O)CHNH2R4。参见US6,924,271，其公开内容通过引用整体并入。
在一些实施方式中，R1基团中的至少一个为外消旋、L-或D-氨基酸基团-C(O)CHNH2R4，其中R4是取代或未取代的烷基，并且其中其余的R1基团为H；R2为OR5或N(R6)2，其中R5独立地选自H或烷基，且其中R独立地为H、取代或未取代的烷基、环烷基或与氮一起形成取代或未取代的杂环烷基环。
在一些实施方式中，至少一个R1基团为L-氨基酸基团-C(O)CHNH2R4，其中R4是取代或未取代的烷基，并且其中其余的R1基团是H；R2为OR5或N(R6)2，其中R4为取代的烷基，且其中R6独立地为H或取代或未取代的烷基。
在一些实施方式中，至少一个R1基团为L-氨基酸基团-C(O)CHNH2R，其中R4为-CH(CH3)2，并且其中其余的R1基团为H；R2为OH。
在一些实施方式中，TLR7和/或激动剂选自由：
Figure BDA0003187013320000511
Figure BDA0003187013320000521
Figure BDA0003187013320000522
组成的组。
在一些实施方式中，TLR7和/或TLR8激动剂具有：
Figure BDA0003187013320000523
Figure BDA0003187013320000531
的结构，
其中：
每个R1为H、或取代或未取代的烷基、烯基或炔基，其可被一个或多个O、S或N杂原子间断，或取代或未取代的芳基或杂芳基；
R2为H、OH、SH、卤素或取代或未取代的烷基、烯基或炔基，其可以被一个或多个O、S或N杂原子间断，或取代或未取代的—O-(烷基)、—O-(芳基)、—O-(杂芳基)、—S-(烷基)、—S-(芳基)、—S-(杂芳基)、芳基或杂芳基；
R3为H、OH或SH、或取代或未取代的烷基、烯基、炔基、芳基、杂芳基、—O-(烷基)、—O-(芳基)、—O-(杂芳基)、—S-(烷基)、—S-(芳基)、-—S-(杂芳基)、—NH(烷基)、—NH(芳基)、—NH(杂芳基)、—NH(R4)(烷基)、—NH(R4)(芳基)或—NH(R4)(杂芳基)，其中R4是取代或未取代的烷基；
X为O或S；
Y为H、卤素、OH、OR4、SH、SR4或取代或未取代的烷基或芳基；
Z为H、卤素、OH、OR4、SH或SR4。参见US 7,576,068，其公开内容通过引用整体并入。
在一些实施方式中，TLR7和/或TLR8激动剂具有式(XVIII)的结构：
Figure BDA0003187013320000532
其中：
Y—Z为—CR4R5—、—CR4R5—CR4R5—、—C(O)CR4R5—、—CR4R5C(O)—、—NR8C(O)—、—C(O)NR8—、—CR4R5S(O)2—或—CR5═CR5—；
L1为—NR8—、—O—、—S—、—N(R8)C(O)—、—S(O)2—、—S(O)—C(O)N(R8)—、—N(R8)S(O)2—、—S(O)2N(R8)—或共价键；
R1为烷基、取代的烷基、卤代烷基、烯基、取代的烯基、炔基、取代的炔基、杂烷基、取代的杂烷基、碳环基、取代的碳环基、碳环基烷基、取代的碳环基烷基、杂环基、取代的杂环基、杂环基烷基、或取代的杂环基烷基、芳基烷基、取代的芳基烷基、杂芳基烷基、取代的杂芳基烷基、碳环基杂烷基、取代的碳环基杂烷基、杂环基杂烷基、取代的杂环基杂烷基、芳基杂烷基、取代的芳基杂烷基、杂芳基杂烷基或取代的杂芳基杂烷基；
X1为亚烷基、取代的亚烷基、杂亚烷基、取代的杂亚烷基、亚烯基、取代的亚烯基、亚炔基、取代的亚炔基、亚碳环、取代的亚碳环、亚杂环基、取代的亚杂环基、—NR8—、—O—、—C(O)—、—S(O)—、S(O)2—或键；
D为碳环基、取代的碳环基、杂环基或取代的杂环基，其中所述碳环基、取代的碳环基、杂环基或取代的杂环基被一个或两个-L2-NR6R7取代；或
D为杂环基、取代的杂环基、杂芳基或取代的杂芳基，其中所述杂环基、取代的杂环基、杂芳基或取代的杂芳基包含一到四个氮原子；
每个L2独立地为亚烷基、取代的亚烷基、杂亚烷基、取代的杂亚烷基或共价键；
每个R3独立地为卤素、氰基、叠氮基、硝基、烷基、取代的烷基、羟基、氨基、杂烷基、取代的杂烷基、烷氧基、卤代烷基、卤代烷氧基、—CHO、—C(O)OR8、—S(O)R8、—S(O)2R8；—C(O)NR9R10、—N(R9)C(O)R8、碳环基、取代的碳环基、碳环基烷基、取代的碳环基烷基、烯基、取代的烯基、炔基、取代的炔基、—S(O)2NR9R10、—N(R9)S(O)2R8、—N(R9)S(O)2OR10、—OS(O)2NR9R10；
n是0、1、2、3、4或5；
R4和R5各自独立地为H、烷基、取代的烷基、卤代烷基、杂烷基、取代的杂烷基、碳环基、取代的碳环基、碳环基烷基、取代的碳环基烷基、杂环基、取代的杂环基、杂环基烷基、取代的杂环基烷基、芳基烷基、取代的芳基烷基、杂芳基烷基、取代的杂芳基烷基，碳环基杂烷基、取代的碳环基杂烷基、杂环基杂烷基、取代的杂环基杂烷基、芳基杂烷基、取代的芳基杂烷基、杂芳基杂烷基或取代的杂芳基杂烷基、氰基、叠氮基、OR8、—C(O)H、—C(O)R8、—S(O)R8、—S(O)2R8、—C(O)OR8或—C(O)NR9R10；或
R4和R5与它们所连接的碳一起形成碳环、取代的碳环、杂环或取代的杂环；或
当在同一个碳原子上时，R4和R5连同它们所连接的碳一起为—C(O)—或—C(NR8)—；或
相邻碳原子上的两个R4或两个R5与它们所连接的碳一起形成3至6元碳环、取代碳环、杂环或取代杂环；
R6和R7各自独立地为H、烷基、取代的烷基、烯基、取代的烯基、炔基、取代的炔基、卤代烷基、杂烷基、取代的杂烷基、碳环基、取代的碳环基、碳环基烷基、取代的碳环基烷基、杂环基、取代的杂环基、杂环基烷基、取代的杂环基烷基、芳烷基、取代的芳烷基、杂芳烷基、取代的杂芳烷基、碳环基杂烷基、取代的碳环基杂烷基、杂环基杂烷基、取代的杂环基杂烷基、芳基杂烷基、取代的芳基杂烷基、杂芳基杂烷基或取代的杂芳基杂烷基、—C(O)H、—C(O)R8、—S(O)R8、—S(O)2R8、—C(O)OR8或—C(O)NR9R10、S(O)2NR9R10；或
R6和R7与它们所连接的氮一起形成取代或未取代的杂环，其可含有选自N、O、P或S的一个或多个额外杂原子；或
R7与L2以及它们所连接的N一起形成取代或未取代的3至8元杂环，其可含有选自N、O、S或P的一个或多个额外杂原子；
R8为H、烷基、取代的烷基、卤代烷基、烯基、取代的烯基、炔基、取代的炔基、杂烷基、取代的杂烷基、碳环基、取代的碳环基、碳环基烷基、取代的碳环基烷基、杂环基、取代的杂环基、杂环基烷基、取代的杂环基烷基、芳基烷基、取代的芳基烷基、杂芳基烷基、取代的杂芳基烷基、碳环基杂烷基、取代的碳环基杂烷基、杂环基杂烷基、取代的杂环基杂烷基、芳基杂烷基、取代的芳基杂烷基、杂芳基杂烷基或取代的杂芳基杂烷基；
R9和R10各自独立地为H、烷基、取代的烷基、烯基、取代的烯基、炔基、取代的炔基、卤代烷基、杂烷基、取代的杂烷基、碳环基、取代的碳环基、碳环基烷基、取代的碳环基烷基、杂环基、取代的杂环基、杂环基烷基、取代的杂环基烷基、芳基烷基、取代的芳基烷基、杂芳基烷基、取代的杂芳基杂烷基、碳环基杂烷基、取代的碳环基杂烷基、杂环基杂烷基、取代的杂环基杂烷基、芳基杂烷基、取代的芳基杂烷基、杂芳基杂烷基或取代的杂芳基杂烷基；或
R9和R10与它们所键合的氮一起形成取代或未取代的杂环；
其中每个取代的烷基、取代的烯基、取代的炔基、取代的杂烷基、取代的碳环基、取代的碳环基烷基、取代的杂环基、取代的杂环基烷基、取代的芳基烷基、取代的杂芳基烷基、取代的碳环基杂烷基、取代的杂环基杂烷基、取代的芳基杂烷基、取代的杂芳基杂烷基、取代的亚烷基、取代的杂亚烷基、取代的亚烯基、取代的亚炔基、取代的亚碳环基、或取代的亚杂环基独立地被选自-卤素、—R、—O-、═O、—OR、—SR、—S-、—NR2、—N(+)R3、═NR、—C(卤素)3、—CR(卤素)2、—CR2(卤素)、—CN、—OCN、—SCN、—N═C═O、—NCS、—NO、—NO2、═N2、—N3、—NRC(═O)R、—NRC(═O)OR、—NRC(═O)NRR、—C(═O)NRR、—C(═O)OR、—OC(═O)NRR、—OC(═O)OR、—C(═O)R、—S(═O)2OR、—S(═O)2R、—OS(═O)2OR、—S(═O)2NR、—S(═O)R、—NRS(═O)2R、—NRS(═O)2NRR、—NRS(═O)2OR、—OP(═O)(OR)2、—P(═O)(OR)2、—P(O)(OR)(O)R、—C(═O)R、—C(═S)R、—C(═O)OR、—C(═S)OR、—C(═O)SR、—C(═S)SR、—C(═O)NRR、—C(═S)NRR、
—C(═NR)NRR和—NRC(═NR)NRR组成的组的一至四个取代基取代；其中每个R独立地为H、烷基、环烷基、芳基、芳基烷基或杂环基。参见US 20100143301 A1，其公开内容通过引用整体并入。
在一些实施方式中，TLR7和/或TLR8激动剂具有如下结构：
Figure BDA0003187013320000561
其中：
L1为—NH—或—O—；
R1为烷基、取代的烷基、杂烷基、取代的杂烷基、杂环基烷基、取代的杂环基烷基、碳环基烷基或取代的碳环基烷基；
R4和R5各自独立地为H或C1-C6烷基或R4和R5连同它们所连接的碳一起为—C(O)—；
X1为C1-C6亚烷基、C1-C6杂亚烷基或C1-C6取代的杂亚烷基；
D为苯基、联苯基或吡啶基，其中所述苯基、联苯基或吡啶基被-L2-NR6R7取代；或
D为吡啶基、哌啶基、哌嗪基或1,2,3,4-四氢异喹啉基；
n为0或1；
R3为卤素、氰基、烷基、碳环基、碳环基烷基、卤代烷基、—C(O)OR6、—C(O)NR9R10或—CHO；
L2为C1-C6亚烷基或共价键；
R6和R7各自独立地为H、烷基或杂芳基；或
R6和R7与它们所连接的氮一起形成包含选自N、O或S的0至2个杂原子的取代或未取代的4-6元杂环。
在一些实施方式中，TLR7和/或TLR8激动剂具有以下结构：
Figure BDA0003187013320000571
C.治疗组合中免疫治疗剂的量
在另一方面，本公开的实施方式提供了一种包含化学治疗剂和免疫治疗剂的治疗组合，其量适合用于疾病例如肿瘤和癌症的联合疗法治疗。
在一些实施方式中，免疫治疗剂的量能够：(1)在富集的人血液DC中诱导IFN-α；(2)在富集的人血液DC中诱导TNF-α；和/或(3)在富集的人血液DC中诱导IL-12-α。
测量免疫治疗剂活性的方法包括：1)测量免疫治疗剂刺激的人树突状细胞释放的细胞因子的测定；和2)在免疫治疗剂治疗的肿瘤模型中的功效研究。
在一些实施方式中，分别使用口服制剂或静脉内制剂口服或静脉内施用免疫治疗剂(例如瑞喹莫德或其类似物)，其量使得免疫治疗剂的局部浓度(例如在实体瘤的肿瘤部位附近或处)为约0.005μg/ml至约1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11或12μg/ml(全部包括在内)。
免疫治疗剂的局部浓度(例如在实体瘤的肿瘤部位或附近)可以使用本领域已知的方法测量，例如测量组织或血清浓度。治疗剂的局部有效浓度取决于其从各种途径、组织分布和代谢过程中的吸收，并且可以使用本领域已知的方法常规地测量药剂和组织浓度的血浆药代动力学。
在一些实施方式中，免疫治疗剂的给药量使得免疫治疗剂的局部浓度(例如在实体瘤的肿瘤部位或附近)为约0.05μg/ml、0.1μg/ml、0.15μg/ml、0.2μg/ml、0.3μg/ml或0.4μg/ml，至约0.5μg/ml(全部包括在内)。
在一些实施方式中，受试者以约0.001mg/kg至约0.0005mg/kg、0.0006mg/kg、0.0007mg/kg、0.0008mg/kg、0.0009mg/kg、0.001mg/kg、0.002mg/kg、0.003mg/kg、0.004mg/kg、0.005mg/kg、0.006mg/kg、0.007mg/kg、0.008mg/kg、0.009mg/kg、0.01mg/kg或0.015mg/kg，至约0.02mg/kg(全部包括在内)的剂量施用包含免疫治疗剂(例如瑞喹莫德或其类似物)的口服制剂，每周两次。在一些实施方式中，受试者以约0.0001mg/kg至约0.0005mg/kg、至约0.0006mg/kg、0.0007mg/kg、0.0008mg/kg、0.0009mg/kg、0.001mg/kg、0.002mg/kg、0.003mg/kg、0.004mg/kg、0.005mg/kg、0.006mg/kg、0.007mg/kg、0.008mg/kg、0.009mg/kg、0.01mg/kg、0.015mg/kg或0.02mg/kg(全部包括在内)的剂量施用包含免疫治疗剂(例如瑞喹莫德或其类似物)的口服制剂，每周两次。
在一些实施方式中，受试者以约0.0001mg/kg至约0.0005mg/kg、0.0006mg/kg、0.0007mg/kg、0.0008mg/kg、0.0009mg/kg、0.001mg/kg、0.002mg/kg、0.003mg/kg、0.004mg/kg、0.005mg/kg、0.006mg/kg、0.007mg/kg、0.008mg/kg、0.009mg/kg或0.01mg/kg的剂量施用包含免疫治疗剂(例如瑞喹莫德或其类似物)的口服制剂，每周两次。
在一些实施方式中，受试者以约0.0005mg/kg、0.0006mg/kg、0.0007mg/kg、0.0008mg/kg、0.0009mg/kg、0.001mg/kg、0.002mg/kg、0.003mg/kg、0.004mg/kg、0.005mg/kg、0.006mg/kg、0.007mg/kg、0.008mg/kg、0.009mg/kg、0.01mg/kg或约0.015mg/kg，至约0.02mg/kg(包括在内)的剂量施用包含免疫治疗剂(例如瑞喹莫德或其类似物)的静脉内制剂，每周一次。在一些实施方式中，受试者以约0.0005mg/kg，至约0.0006mg/kg、0.0007mg/kg、0.0008mg/kg、0.0009mg/kg、0.001mg/kg、0.002mg/kg、0.003mg/kg、0.004mg/kg、0.005mg/kg、0.006mg/kg、0.007mg/kg、0.008mg/kg、0.009mg/kg、0.01mg/kg、0.015mg/kg或0.02mg/kg(包括在内)的剂量施用包含免疫治疗剂(例如瑞喹莫德或其类似物)的静脉内制剂，每周一次。
在一些实施方式中，该方法包括以约0.0008mg/kg至约0.0133mg/kg的剂量向所述受试者施用包含所述免疫治疗剂(例如瑞喹莫德或其类似物)的静脉内制剂，每周一次。
在一些实施方式中，受试者以小于或约0.003mg/kg、0.004mg/kg、0.005mg/kg或0.006mg/kg至约0.01mg/kg的剂量施用包含免疫治疗剂(例如瑞喹莫德或其类似物)的静脉内制剂，每周一次。有关免疫治疗剂安全剂量的参考资料，参见Jurk et al.,NatureImmunology,Vol.4,No.6:499(2002)和Pockros et al.,J.Hepatology,47:174-182(2007)，其公开内容通过引用整体并入。
D.靶向治疗
在一些实施方式中，免疫治疗剂与靶向治疗剂组合施用，在同一制剂中或分开施用。
本文中的“靶向治疗剂”是指与靶分子、细胞、颗粒、组织或聚集体特异性或选择性结合的治疗剂，其通常被称为“靶标”或“标志物”，这些在本文进一步详细说明。
本文中的“治疗剂”是指具有治疗作用的药剂，例如在改善或治疗癌症方面。
在一些实施方式中，靶向治疗剂包括免疫球蛋白、蛋白质、肽、小分子、纳米颗粒或核酸。在其他实施方式中，这些中的一个或多个被明确排除。
在一些实施方式中，靶向治疗剂包含如本公开提供的抗体药物偶联物(ADC)。
在一些实施方式中，靶向治疗剂包含免疫球蛋白、蛋白质或肽，但不包含小分子。
在一些实施方式中，靶向治疗剂不是ADC。
示例性靶向治疗剂例如抗体(例如，嵌合的、人源化的和人的)在本领域中是公认的，并且在实践本公开的实施方式中是有用的且不受限制。
在一些实施方式中，靶向治疗剂是抗体、抗体片段、双特异性抗体或其他基于抗体的分子或化合物。
在一些实施方式中，靶向治疗剂是适体、高亲和性多聚体、受体结合配体、核酸、生物素-亲和素结合对、结合肽或蛋白质等，它们都特异性地或优选地结合到靶分子并且具有治疗效果，例如对抗癌症或肿瘤。
本文中的“靶标”或“标志物”是指能够特异性结合特定靶向治疗剂的任何实体，例如Her2/Neu。在一些实施方式中，靶标与一种或多种特定细胞或组织类型具体相关。在一些实施方式中，靶标与一种或多种特定疾病状态具体相关。在一些实施方式中，靶标与一种或多种特定发育阶段具体相关。例如，细胞类型特异性标志物在该细胞类型中的表达水平通常比在参考细胞群中高至少2倍。在一些实施方式中，细胞类型特异性标志物以比其在参考群体中的平均表达高至少3倍、至少4倍、至少5倍、至少6倍、至少7倍、至少8倍、至少9倍、至少10倍、至少50倍、至少100倍或至少1000倍的水平存在。细胞类型特异性标志物的检测或测量可以使得将感兴趣的细胞类型或多种类型与许多、大多数或所有其他类型的细胞区分开来成为可能。在一些实施方式中，靶标可包含蛋白质、碳水化合物、脂质和/或核酸，如本文所述。
本文中的“特异性结合”或“优选结合”是指两个结合配偶体之间(例如，靶向部分与其结合配偶体之间)的结合对两个结合配偶体是选择性的并且可以区别于不想要的或非特异性相互作用。例如，抗原结合部分与特定抗原决定簇结合的能力可以通过酶联免疫吸附测定(ELISA)或本领域技术人员熟悉的其他技术来测量，例如表面等离子共振技术(在BIAcore仪器上分析)(Liljeblad et al.，Glyco J 17,323-329(2000)，和传统的结合测定(Heeley,Endocr Res 28,217-229(2002))。术语“抗-[抗原]抗体”和“与[抗原]结合的抗体”是指能够以足够的亲和力结合相应抗原的抗体，使得该抗体在靶向抗原方面可用作诊断和/或治疗剂。在一些实施方式中，抗-[抗原]抗体与无关蛋白质的结合程度小于抗体与抗原结合的约10％，如通过例如放射免疫测定法(RIA)所测量的。在一些实施方式中，结合抗原的抗体的解离常数(KD)<1μM、<100nM、<10nM、<1nM、<0.1nM、<0.01nM或<0.001nM(例如，10-8M或更少，从10-8M到10-13M，或从10-9M到10-13M)。应理解，上述定义也适用于与抗原结合的非抗体抗原结合部分。
在某些特定实施方式中，靶标是肿瘤标志物。在一些实施方式中，肿瘤标志物是存在于肿瘤中的抗原，该肿瘤在正常器官、组织和/或细胞中不存在。在一些实施方式中，肿瘤标志物是在肿瘤中比在正常器官、组织和/或细胞中更普遍的抗原。在一些实施方式中，肿瘤标志物是在恶性癌细胞中比在正常细胞中更普遍的抗原。
本文中的“肿瘤抗原”是指在肿瘤细胞中产生的抗原物质，其也可以在宿主中触发免疫反应。由于自身耐受，体内的正常蛋白质不具有免疫原性，在这个过程中，自我反应的细胞毒性T淋巴细胞(CTL)和产生自身抗体的B淋巴细胞在初级淋巴组织(BM)中“中央”和在次级淋巴组织(主要是T细胞的胸腺和B细胞的脾/淋巴结)中“外周”被剔除。因此，任何在成熟过程中未暴露于免疫系统的蛋白质都可能引发免疫反应。这可能包括与免疫系统隔离良好的正常蛋白质、通常以极少量产生的蛋白质、通常仅在特定发育阶段产生的蛋白质，或因突变而改变结构的蛋白质。
在一些实施方式中，与正常组织和/或细胞相比，靶标优先在肿瘤组织和/或细胞中表达。
在一些实施方式中，标志物是肿瘤标志物。标志物可以是通过分裂比非分裂细胞以更高水平表达的多肽。例如，Her-2/neu(也称为ErbB-2)是EGF受体家族的成员，在与乳腺癌相关的肿瘤细胞表面表达。另一个实例是称为F3的肽，它是一种合适的靶向剂，用于将纳米颗粒引导至核仁蛋白(Porkka et al.,2002,Proc.Natl.Acad.Sci.,USA,99:7444；和Christian et al.,2003,J.Cell Biol.,163:871)。已经表明，包含纳米颗粒和A10适体(与PSMA特异性结合)的靶向颗粒能够将多西紫杉醇特异性地且有效地递送至前列腺癌肿瘤。
特异性靶向这些肿瘤靶点的抗体或其他药物可以特异性干扰和调节肿瘤细胞生物学行为的信号通路、直接调节或阻断信号通路，抑制肿瘤细胞生长或诱导细胞凋亡。迄今为止，已有数十种靶向药物被批准用于治疗实体瘤或血液系统恶性肿瘤。
在一些实施方式中，肿瘤抗原(或肿瘤靶标或肿瘤标志物)选自由CD2、CD19、CD20、CD22、CD27、CD33、CD37、CD38、CD40、CD44、CD47、CD52、CD56、CD70、CD79和CD137组成的组。
在一些实施方式中，肿瘤抗原(或肿瘤靶标或肿瘤标志物)选自由4-1BB、5T4、AGS-5、AGS-16、血管生成素2、B7.1、B7.2、B7DC、B7H1、B7H2、B7H3、BT-062、BTLA、CAIX、癌胚抗原、CTLA4、Cripto、ED-B、ErbB1、ErbB2、ErbB3、ErbB4、EGFL7、EpCAM、EphA2、EphA3、EphB2、FAP、纤维连接蛋白、叶酸受体、神经节苷脂GM3、GD2、糖皮质激素诱导的肿瘤坏死因子受体(GITR)、gp100、gpA33、GPNMB、ICOS、IGF1R、整合素αν、整合素ανβ、KIR、LAG-3、Lewis Y抗原、间皮素、c-MET、MN碳酸酐酶IX、MUC1、MUC16、Nectin-4、NKGD2、NOTCH、OX40、OX40L、PD-1、PDL1、PSCA、PSMA、RANKL、ROR1、ROR2、SLC44A4、多配体蛋白聚糖-1、TACI、TAG-72、腱生蛋白、TIM3、TRAILR1、TRAILR2、VEGFR-1、VEGFR-2、VEGFR-3及其变体。这些肿瘤抗原的变体包括本领域已知的和/或自然发生的各种突变体或多态性。
在一些实施方式中，靶向治疗剂包括抗体或其功能片段。
本文中的“免疫球蛋白”或“抗体”是指全长(例如，天然存在的或由正常免疫球蛋白基因片段重组过程形成的)免疫球蛋白分子(例如，IgG抗体)或免疫球蛋白分子的免疫活性(即，特异性结合)部分，如抗体片段。在要求保护的主题的范围内，抗体或抗体片段可以被缀合或以其他方式衍生。此类抗体包括IgG1、IgG2a、IgG3、IgG4(和IgG4亚型)以及IgA亚型。
本文中的术语“抗体”以最广泛的含义使用并涵盖各种抗体结构，包括但不限于单克隆抗体、多克隆抗体、多特异性抗体(例如双特异性抗体)和抗体片段，只要它们表现出所需的抗原结合活性。本文中的术语“全长抗体”、“完整抗体”和“全抗体”可互换使用，指具有与天然抗体结构基本相似的结构或具有包含Fc区的重链的抗体。抗体还包括已被设计为具有额外结构域的免疫球蛋白，例如完整抗体或与额外可变结构域融合的抗体片段，如可用于产生双特异性抗体。
本文中的“天然抗体”是指具有不同结构的天然存在的免疫球蛋白分子(即，具有可从动物免疫中产生的结构的免疫球蛋白分子)。例如，天然IgG抗体是约150000道尔顿的异源四聚体糖蛋白，由二硫键连接的两条相同的轻链和两条相同的重链组成。从N端到C端，每条重链都有一个可变区(VH)，也称为可变重链域或重链可变域，后面跟着三个恒定域(CH1、CH2和CH3)，也称为重链恒定区。类似地，从N-端到C-端，每条轻链都有一个可变区(VL)，也称为可变轻链域或轻链可变域，后面跟着一个恒定轻(CL)域，也称为轻链恒定区。基于其恒定域的氨基酸序列，抗体的轻链可被指定为两种类型中的一种，称为kappa(κ)和lambda(λ)。
本文中的“抗体片段”是指除完整抗体之外的分子，其包含结合完整抗体所结合抗原的完整抗体的一部分。抗体片段的实例包括但不限于Fv、Fab、Fab’、Fab’-SH、F(ab’)2、双抗体、线性抗体、单链抗体分子(例如scFv)、单域抗体和由抗体片段形成的多特异性抗体。对于某些抗体片段的综述，参见Hudson et al.,Nat Med 9,129-134(2003)。有关scFv片段的综述，参见例如Pliickthun,in The Pharmacology of Monoclonal Antibodies,vol.113,Rosenburg和Moore eds.,Springer-Verlag,New York,pp.269-315(1994)；也参见WO93/16185；和美国专利号5,571,894和5,587,458。有关包含补救受体结合表位残基并具有增加的体内半衰期的Fab和F(ab’)2片段的讨论，参见美国专利号5,869,046。双抗体是具有两个抗原结合位点的抗体片段，这些位点可以是二价的或双特异性的。参见，例如，EP404,097；WO 1993/01161；Hudson et al.,Nat Med 9,129-134(2003)；和Hollinger etal.,Proc Natl Acad Sci USA 90,6444-6448(1993)。三体和四体也描述于Hudson etal.,Nat Med 9,129-134(2003)。单域抗体是包含抗体的全部或部分重链可变域或全部或部分轻链可变域的抗体片段。在某些实施方式中，单域抗体是人单域抗体(Domantis,Inc.,Waltham,MA；参见例如美国专利号6,248,516 Bl)。抗体片段可以通过多种技术制备，包括但不限于完整抗体的蛋白水解消化以及重组宿主细胞(例如，大肠杆菌或噬菌体)的生产，如本文所述。
本文中的“抗原结合域”是指包含与抗原的部分或全部特异性结合并与之互补的区域的抗体部分。抗原结合域可由例如一个或多个抗体可变域(也称为抗体可变区)提供。特别地，抗原结合域包含抗体轻链可变区(VL)和抗体重链可变区(VH)。
本文中的“可变区”或“可变域”是指参与抗体与抗原结合的抗体重链或轻链的域。天然抗体的重链和轻链的可变域(分别为VH和VL)通常具有相似的结构，每个域包含四个保守框架区(FR)和三个高变区(HVR)。参见，例如Kindt et al.,Kuby Immunology,6th ed.,W.H.Freeman and Co.,page 91(2007)。单个VH或VL域可以足以赋予抗原结合特异性。
本文中的“高变区”或“HVR”在本文中是指抗体可变域的每个区域在序列上是高变的和/或形成结构上定义的环“高变环”)。通常，天然四链抗体包含六个HVR；VH中的三个(HI、H2、H3)和VL中的三个(LI、L2、L3)。HVR通常包含来自高变环和/或来自互补决定区(CDR)的氨基酸残基，后者具有最高的序列可变性和/或参与抗原识别。除了VH中的CDR1，CDR通常包含形成高变环的氨基酸残基。高变区(HVR)也称为“互补决定区”(CDR)，这些术语在本文中可互换使用，指的是形成抗原结合区的可变区部分。该特定区域通过Kabat etal.,U.S.Dept.of Health and Human Services,Sequences of Proteins ofImmunological Interest(1983)和Chothia et al.,J Mol Biol 196:901-917(1987)描述，其中当相互比较时，这些定义包括氨基酸残基的重叠或亚组集。然而，应用任一定义来指代抗体或其变体的CDR旨在落入本文所定义和使用的术语的范围内。包含特定CDR的确切残基数将根据CDR的序列和大小而变化。给定抗体的可变区氨基酸序列，本领域技术人员可以常规地确定哪些残基包含特定的CDR。
本公开的实施方式的抗体可以是嵌合抗体、人源化抗体、人抗体或抗体融合蛋白。
本文中的“嵌合抗体”是指含有抗体重链和轻链可变域的重组蛋白，包括源自一个物种的抗体的互补决定区(CDR)，该抗体优选啮齿动物抗体，更优选鼠抗体，而抗体分子的恒定域来自人抗体的恒定域。对于兽医应用，嵌合抗体的恒定域可以源自其他物种的恒定域，例如亚人灵长类动物、猫或狗。
本文中的“人源化抗体”是指重组蛋白，其中CDR来自一个物种的抗体；例如，啮齿动物抗体，从啮齿动物抗体的重链和轻链可变链转移到人重链和轻链可变域中。抗体分子的恒定域来源于人抗体的恒定域。在一些实施方式中，人源化抗体框架区的特定残基，特别是那些接触或接近CDR序列的残基，可以被修饰，例如替换为来自原始啮齿动物、亚人灵长类动物或其他抗体的相应残基。
本文中的“人抗体”是指从例如转基因小鼠获得的抗体，所述转基因小鼠已被“工程化”产生特异性人抗体以响应抗原性攻击。在该技术中，人重链和轻链基因座的元件被引入源自含有内源性重链和轻链基因座的靶向破坏的胚胎干细胞系的小鼠品系。转基因小鼠可以合成对人抗原特异的人抗体，小鼠可以用来产生分泌人抗体的杂交瘤。Green et al,Nature Genet.7:13(1994),Lonberg et al,Nature 368:856(1994)和Taylor et al,Int.Immun.6:579(1994)描述了从转基因小鼠获得人抗体的方法。全人抗体也可以通过遗传或染色体转染方法以及噬菌体展示技术构建，所有这些都是本领域已知的。关于从未免疫供体的免疫球蛋白可变域基因库在体外产生人抗体及其片段，参见例如，McCafferty etal,Nature348:552-553(1990)。在该技术中，抗体可变域基因被框内克隆到丝状噬菌体的主要或次要外壳蛋白基因中，并在噬菌体颗粒表面显示为功能性抗体片段。因为丝状颗粒包含噬菌体基因组的单链DNA拷贝，基于抗体功能特性的选择也会导致编码表现出这些特性的抗体基因的选择。通过这种方式，噬菌体模仿了B细胞的一些特性。噬菌体展示可以以多种形式进行，有关它们的综述，参见例如Johnson and Chiswell,Current Opinion inStructural Biology 3:5564-571(1993)。人抗体也可由体外活化的B细胞产生。参见美国专利号5,567,610和5,229,275，它们的全部内容通过引用并入本文。
本文中的“抗体融合蛋白”是指重组产生的抗原结合分子，其中连接了两个或多个相同或不同的天然抗体、单链抗体或具有相同或不同特异性的抗体片段区段。融合蛋白包含至少一个特异性结合位点。融合蛋白的效价表示融合蛋白与抗原或表位的结合臂或位点的总数；即，单价、二价、三价或多价。抗体融合蛋白的多价性意味着它可以利用多种相互作用与抗原结合，从而增加与抗原或与不同抗原结合的亲合力。特异性表明抗体融合蛋白能够结合多少种不同类型的抗原或表位；即，单特异性、双特异性、三特异性、多特异性。使用这些定义，天然抗体，例如IgG，是二价的，因为它有两个结合臂，但它是单特异性的，因为它与一种类型的抗原或表位结合。单特异性、多价融合蛋白对同一抗原或表位具有不止一个结合位点。例如，单特异性双抗体是具有两个与相同抗原反应的结合位点的融合蛋白。融合蛋白可以包含不同抗体成分的多价或多特异性组合或相同抗体成分的多个拷贝。融合蛋白还可包含治疗剂。
在一些实施方式中，靶向部分包含前体，例如美国专利号：8,518,404；8,513,390；和美国专利申请公开号：20120237977A1、20120149061A1、20130150558A1所公开的，其公开内容通过引用整体并入。
前体是单克隆抗体，其在癌症微环境中被选择性激活，将治疗性抗体的活性集中在肿瘤上并保护健康组织。
一般而言，抗体至少包含抗体或其抗体片段(统称为“AB”)，能够特异性结合靶标，其中AB被掩蔽部分(MM)修饰。当AB用MM修饰并存在靶标时，与未用MM修饰的AB的特异性结合或与亲本AB与靶标的特异性结合相比，AB与其靶标的特异性结合被降低或抑制。MM对AB的解离常数(Kd)通常大于AB对靶标的Kd。当AB用MM修饰并存在靶标时，与未用MM修饰的AB的特异性结合或与亲本AB与靶标的特异性结合相比，AB与其靶标的特异性结合可以被降低或抑制。当AB与MM偶联或被MM修饰时，MM可以“掩蔽”或减少或抑制AB与其靶标的特异性结合。当AB与MM偶联或被MM修饰时，这种偶联或修饰会影响结构变化，从而降低或抑制AB与其靶标特异性结合的能力。
在一些实施方式中，所述前体是可激活抗体(AA)，其中被MM修饰的AB可进一步包括一个或多个可切割部分(CM)。此类AA显示出与AB的靶标可激活的/可切换的结合。AA通常包括抗体或抗体片段(AB)，其由掩蔽部分(MM)和可修饰或可切割部分(CM)修饰或偶联。在一些实施方式中，CM含有用作目的蛋白酶的底物的氨基酸序列。在其他实施方式中，CM提供可通过还原裂解的半胱氨酸-半胱氨酸二硫键。在其他实施方式中，CM提供可通过光解激活的光解底物。
可以选择AA的CM和AB，使得AB代表感兴趣靶标的结合部分，并且CM代表蛋白酶的底物，该蛋白酶与受试者的治疗位点处的靶标共定位。或者或另外，CM是半胱氨酸-半胱氨酸二硫键，其可由于该二硫键的还原而裂解。AA包含蛋白酶可切割的CM或半胱氨酸-半胱氨酸二硫键中的至少一种，并且在一些实施方式中包括这两种CM。AA可替代地或进一步包括可被光源激活的光不稳定底物。本文公开的AA在以下情况下具有特殊用途，例如，与在非治疗位点的组织(例如健康组织)相比，能够切割CM中某个位点的蛋白酶以相对更高的水平存在于治疗位点(例如患病组织；例如用于治疗性治疗或诊断性治疗)的含靶组织中。本文公开的AA还具有特殊用途，例如，与非治疗非诊断位点的组织相比，能够还原CM位点的还原剂在治疗或诊断位点的含靶组织中以相对更高的水平存在。本文公开的AA还具有特殊用途，其中例如通过激光的方式将能够光解CM中的位点的光源引入治疗或诊断位点的含靶组织。
在一些实施方式中，AA可以提供降低的毒性和/或不良副作用，如果AB没有被掩蔽或以其他方式抑制与其靶标的结合，则这些毒性和/或不良副作用可以会因AB在非治疗位点的结合而导致。当AA含有可被促进二硫键还原的还原剂切割的CM时，可以选择此类AA的AB以利用AB的活化，其中感兴趣的靶标存在于以升高的还原剂水平为特征的所需治疗位点，使得环境具有比例如非治疗位点的环境更高的还原电位。
通常，可以通过选择感兴趣的AB并构建AA的其余部分来设计AA，以便在构象受限时，MM提供AB的掩蔽或减少AB与其靶标的结合。结构设计标准要考虑到提供此功能特征。
在一些实施方式中，靶向治疗剂是抗体或抗体片段，其基于其对在感兴趣的靶细胞上或在感兴趣的靶位点表达的抗原的特异性进行选择。已经鉴定了多种肿瘤特异性或其他疾病特异性抗原，并且已经使用或提议使用针对这些抗原的抗体来治疗此类肿瘤或其他疾病。本领域已知的抗体可用作治疗组合中的靶向治疗剂，特别是用于治疗与靶抗原相关的疾病。靶标治疗剂可以靶向的靶标抗原(及其相关疾病)的实例包括：CD2、CD19、CD20、CD22、CD27、CD33、CD37、CD38、CD40、CD44、CD47、CD52、CD56、CD70、CD79、CD137、4-1BB、5T4、AGS-5、AGS-16、血管生成素2、B7.1、B7.2、B7DC、B7H1、B7H2、B7H3、BT-062、BTLA、CAIX、癌胚抗原、CTLA4、Cripto、ED-B、ErbB1、ErbB2、ErbB3、ErbB4、EGFL7、EpCAM、EphA2、EphA3、EphB2、FAP、纤连蛋白、叶酸受体、神经节苷脂GM3、GD2、糖皮质激素诱导的肿瘤坏死因子受体(GITR)、gp100、gpA33、GPNMB、ICOS、IGF1R、整合素αν、整合素ανβ、KIR、LAG-3、Lewis Y、间皮素、c-MET、MN碳酸酐酶IX、MUC1、MUC16、Nectin-4、NKGD2、NOTCH、OX40、OX40L、PD-1、PDL1、PSCA、PSMA、RANKL、ROR1、ROR2、SLC44A4、多配体蛋白聚糖-1、TACI、TAG-72、生腱蛋白、TIM3、TRAILR1、TRAILR2、VEGFR-1、VEGFR-2、VEGFR-3。
在一些实施方式中，抗体选自由美罗华(利妥昔单抗)、赫塞汀(曲妥珠单抗)、爱必妥(西妥昔单抗)、维克替比(帕尼单抗)、Arzerra(奥法木单抗)、Bentysta(贝利尤单抗)、Yervoy(伊匹单抗)、Perjeta(帕妥珠单抗)、曲美木单抗(Tremelimumab)、Opdivo(纳武利尤单抗、ONO-4538、BMS-936558或MDX1106)、达曲珠单抗(Dacetuzumab)、乌瑞芦单抗(Urelumab)、MPDL3280A、帕博利珠单抗和博纳吐单抗、CT-011、可瑞达(帕博利珠单抗，MK-3475)、BMS-936559、MPDL3280A、MED14736或MSB0010718C组成的组。
美罗华(利妥昔单抗)是一种用于治疗B细胞非霍奇金淋巴瘤的嵌合抗体。它作用于表达CD20抗原的B细胞表面，该抗原在90％的B细胞非霍奇金淋巴瘤上表达。美罗华结合CD20以通过CDC和ADCC诱导B细胞裂解，并使对某些细胞毒性化疗药物具有耐药性的人类淋巴细胞敏感。
赫塞汀(曲妥珠单抗)是一种作用于人表皮生长因子受体Her2的胞外域的人源化单克隆抗体，在25％-30％的乳腺癌中表达。认为曲妥珠单抗通过(1)下调Her2受体，抑制Her2细胞内信号转导通路，诱导细胞凋亡；(2)免疫机制相关抗体依赖的ADCC和CDC杀伤肿瘤细胞；(3)增强化疗的效果而具有抗肿瘤作用。
爱必妥(西妥昔单抗)是一种作用于表皮生长因子受体(EGFR)的嵌合抗体。爱必妥结合EGFR抑制其信号转导通路，影响细胞增殖、侵袭和转移以及血管生成。抑制EGFR信号转导通路可以增强化疗药物和放射治疗的疗效。
安维汀(贝伐珠单抗)是一种靶向血管内皮生长因子(VEGF)的人源化单克隆抗体。其与VEGFR的结合抑制VEGF和信号转导，从而抑制肿瘤血管生成。
目前正在开发的其他抗体也可以用作靶向治疗。例如，针对以下靶点的治疗性单克隆抗体正在开发用于治疗肿瘤：CD2、CD19、CD20、CD22、CD27、CD33、CD37、CD38、CD40、CD44、CD47、CD52、CD56、CD70、CD79和CD137以及以下肿瘤的治疗靶点：4-1BB、5T4、AGS-5、AGS-16、血管生成素2、B7.1、B7.2、B7DC、B7H1、B7H2、B7H3、BT-062、BTLA、CAIX、癌胚抗原、CTLA4、Cripto、ED-B、ErbB1、ErbB2、ErbB3、ErbB4、EGFL7、EpCAM、EphA2、EphA3、EphB2、FAP、纤连蛋白、叶酸受体、神经节苷脂GM3、GD2、糖皮质激素诱导的肿瘤坏死因子受体(GITR)、gp100、gpA33、GPNMB、ICOS、IGF1R、整合素αν、整合素ανβ、KIR、LAG-3、Lewis、间皮素、c-MET、MN碳酸酐酶IX、MUC1、MUC16、Nectin-4、NKGD2、NOTCH、OX40、OX40L、PD-1、PDL1、PSCA、PSMA、RANKL、ROR1、ROR2、SLC44A4、多配体蛋白聚糖-1、TACI、TAG-72、生腱蛋白、TIM3、TRAILR1、TRAILR2、VEGFR-1、VEGFR-2、VEGFR-3及其变体。(Scott AM,Wolchok JD,Old LJ,AntibodyTherapy of Cancer.,Nat Rev Cancer 2012 Mar 22,12(4):278-87)。
在一些实施方式中，靶向治疗剂包括Fab、Fab’、F(ab’)2、单域抗体、T和Abs二聚体、Fv、scFv、dsFv、ds-scFv、Fd、线性抗体、微抗体、双链抗体、双特异性抗体片段、双抗体、三抗体、sc-双抗体、kappa(lamda)体、BiTE、DVD-Ig、SIP、SMIP、DART或包含一个或多个CDR的抗体类似物。
表1显示了各种抗体结构和正在研究的靶点。
表1
Figure BDA0003187013320000671
Figure BDA0003187013320000681
包含靶向部分的靶向治疗剂
在一些方面，根据本公开的实施方式，本公开的实施方式的靶向治疗剂包含靶向部分，例如ADC。
“靶向部分(TM)”或“靶向剂”在本文中是指与靶分子、细胞、颗粒、组织或聚集体特异性或选择性结合的分子、复合物或聚集体，其通常被称为“靶标”或“标记物”，这些在本文中进一步详细讨论。
在一些实施方式中，靶向部分包括免疫球蛋白、蛋白质、肽、小分子、纳米颗粒或核酸。
示例性靶向剂例如抗体(例如，嵌合的、人源化的和人的)、受体的配体、凝集素和糖类以及某些酶的底物，是本领域公认的，并且在实践本公开的实施方式中是有用的且不受限制。其他靶向剂包括一类不包括特定分子识别基序的化合物，包括纳米颗粒、大分子，例如聚(乙二醇)、多糖和聚氨基酸，它们为活化部分增加了分子量。额外的分子量影响活化部分的药代动力学，例如血清半衰期。
在一些实施方式中，靶向部分是抗体、抗体片段、双特异性抗体或其他基于抗体的分子或化合物。然而，靶向部分的其他实例是本领域已知的并且可以使用的，例如适体、avimer、受体结合配体、核酸、生物素-亲和素结合对、结合肽或蛋白质等。术语“靶向部分”和“结合部分”在本文中同义使用。
本文中的“靶标”或“标记物”是指能够与特定靶向部分特异性结合的任何实体。在一些实施方式中，靶标与一种或多种特定细胞或组织类型具体相关。在一些实施方式中，靶标与一种或多种特定疾病状态具体相关。在一些实施方式中，靶标与一个或多个特定发育阶段具体相关。例如，细胞类型特异性标志物在该细胞类型中的表达水平通常比在参考细胞群中高至少2倍。在一些实施方式中，细胞类型特异性标志物的表达水平比其在参考群体中高至少3倍、至少4倍、至少5倍、至少6倍、至少7倍、至少8倍、至少9倍、至少10倍、至少50倍、至少100倍或至少1000倍。细胞类型特异性标志物的检测或测量可以使得将感兴趣的细胞类型或多种类型与许多、大多数或所有其他类型的细胞区分开来成为可能。在一些实施方式中，靶标可包含蛋白质、糖类、脂质和/或核酸，如本文所述。
如果物质与核酸靶向部分特异性结合，则该物质被认为是用于本文所述目的的“靶向”。在一些实施方式中，核酸靶向部分在严格条件下与靶标特异性结合。如果靶向部分特异性结合靶标，从而将整个复合物或化合物组合物递送至特定器官、组织、细胞、细胞外基质成分和/或细胞内区室，则包含靶向部分的本发明复合物或化合物被认为是“靶向的”。
在某些实施方式中，根据本公开的实施方式的化合物包含与器官、组织、细胞、细胞外基质成分和/或细胞内区室相关的一种或多种靶标(例如抗原)特异性结合的靶向部分。在一些实施方式中，化合物包含与特定器官或器官系统相关的靶标特异性结合的靶向部分。在一些实施方式中，根据本公开的实施方式的化合物包含与一种或多种细胞内靶标(例如细胞器、细胞内蛋白质)特异性结合的核靶向部分。在一些实施方式中，化合物包含与患病器官、组织、细胞、细胞外基质成分和/或细胞内区室相关的靶标特异性结合的靶向部分。在一些实施方式中，化合物包含与特定细胞类型(例如内皮细胞、癌细胞、恶性细胞、前列腺癌细胞等)相关的靶标特异性结合的靶向部分。
在一些实施方式中，根据本公开的实施方式，本公开的实施方式的化合物包含与对一种或多种特定组织类型(例如肝组织vs.前列腺组织)特异的靶标结合的靶向部分。在一些实施方式中，根据本公开的实施方式，本公开的实施方式的化合物包含与对一种或多种特定细胞类型(例如T细胞vs.B细胞)特异的靶标结合的靶向部分。在一些实施方式中，根据本公开的实施方式，本公开的实施方式的化合物包含与对一种或多种特定疾病状态(例如肿瘤细胞与健康细胞)特异的靶标结合的靶向部分。在一些实施方式中，根据本公开的实施方式，本公开的实施方式的化合物包含与对一种或多种特定发育阶段(例如干细胞与分化细胞)特异的靶标结合的靶向部分。
在一些实施方式中，靶标可以是专门或主要与一种或几种细胞类型、一种或几种疾病和/或一种或几种发育阶段相关的标志物。细胞类型特异性标志物在该细胞类型中的表达水平通常比在参考细胞群中高至少2倍，参考细胞群可以由例如含有数量大致相等的多个(例如，5-10个或更多)来自不同组织或器官的细胞的混合物组成。在一些实施方式中，细胞类型特异性标志物以比其在参考群体中的平均表达高至少3倍、至少4倍、至少5倍、至少6倍、至少7倍、至少8倍、至少9倍、至少10倍、至少50倍、至少100倍或至少1000倍的水平存在。细胞类型特异性标志物的检测或测量可以使得将感兴趣的细胞类型或多种类型与许多、大多数或所有其他类型的细胞区分开来成为可能。
在一些实施方式中，靶标包括蛋白质、糖类、脂质和/或核酸。在一些实施方式中，靶标包含蛋白质和/或其特征部分，例如肿瘤标志物、整联蛋白、细胞表面受体、跨膜蛋白、细胞间蛋白、离子通道、膜转运蛋白、酶、抗体、嵌合蛋白、糖蛋白等等。在一些实施方式中，靶标包含糖类和/或其特征部分，例如糖蛋白、糖(例如，单糖、二糖、多糖)、糖萼(即，大多数真核细胞外表面上的富含糖类的外周区))等等。在一些实施方式中，靶标包含脂质和/或其特征部分，例如油、脂肪酸、甘油酯、激素、类固醇(例如胆固醇、胆汁酸)、维生素(例如维生素E)、磷脂、鞘脂、脂蛋白，等等。在一些实施方式中，靶标包含核酸和/或其特征部分，例如DNA核酸；RNA核酸；修饰的DNA核酸；修饰的RNA核酸；包括DNA、RNA、修饰的DNA和修饰的RNA的任意组合的核酸。
许多标志物是本领域已知的。典型的标志物包括细胞表面蛋白，例如受体。示例性受体包括但不限于转铁蛋白受体；LDL受体；生长因子受体，例如表皮生长因子受体家族成员(例如，EGFR、Her2、Her3、Her4)或血管内皮生长因子受体、细胞因子受体、细胞粘附分子、整联蛋白、选择蛋白和CD分子。标志物可以是专门存在于或以更高量存在于恶性细胞上的分子，例如肿瘤抗原。
在一些实施方式中，与非肿瘤细胞相比，靶向部分特异性地或优选地与肿瘤细胞结合。
靶标部分与肿瘤细胞的结合可以使用本领域已知的测定法来测量。
在一些实施方式中，肿瘤细胞是恶性上皮肿瘤、肉瘤、淋巴瘤、骨髓瘤或中枢神经系统癌症。
在一些实施方式中，与非肿瘤抗原相比，靶向部分能够特异性地或优选地结合肿瘤抗原。
在某些特定实施方式中，靶标是肿瘤标志物。在一些实施方式中，肿瘤标志物是存在于肿瘤中而不存在于正常器官、组织和/或细胞中的抗原。在一些实施方式中，肿瘤标志物是在肿瘤中比在正常器官、组织和/或细胞中更普遍的抗原。在一些实施方式中，肿瘤标志物是在恶性癌细胞中比在正常细胞中更普遍的抗原。
在一些实施方式中，靶向部分包含叶酸或其衍生物。
近年来，叶酸的研究取得了很大进展。叶酸是细胞分裂所必需的一种小分子维生素。肿瘤细胞异常分裂，肿瘤细胞表面有高表达叶酸受体(FR)以捕获足够的叶酸来支持细胞分裂。
数据表明肿瘤细胞中的FR表达比正常细胞高20-200倍。FR在各种恶性肿瘤中的表达率为：卵巢癌82％，非小细胞肺癌66％，肾癌64％，结肠癌34％，乳腺癌29％(Xia W,LowPS.Late-targeted therapies for cancer,J Med Chem.2010；53(19):6811-24)。FA的表达率与上皮性肿瘤侵袭转移的恶性程度呈正相关。FA通过FR介导的内吞作用进入细胞，FA通过其羧基与进入细胞的药物形成FA复合物。在酸性条件下(pH值为5)，FR与FA分离，FA将药物释放到细胞质中。
临床上，该系统可用于递送药物选择性地攻击肿瘤细胞。叶酸分子量小，无免疫原性，稳定性高，并且合成成本低。更重要的是，药物与载体之间的化学偶联简单，因此以FA作为靶向分子构建药物递送系统已成为癌症治疗的研究热点。目前正在进行临床试验的EC145(FA化疗药物偶联物)可以有效攻击癌细胞(Pribble P and Edelman MJ.EC145:anovel targeted agent for adenocarcinoma of the lung,ExpertOpin.Investig.Drugs,2012,21:755-761)。
在一些实施方式中，靶向部分包含胞外结构域(ECD)或可溶性形式的PD-1、PDL-1、CTLA4、CD47、BTLA、KIR、TIM3、4-1BB和LAG3，全长部分表面配体双调蛋白、细胞素、EGF、肝配蛋白、表观素、上皮调节蛋白、IGF、神经调节蛋白、TGF、TRAIL或VEGF。在一些实施方式中，这些胞外结构域或可溶形式可以与抗体Fc结构域(有时称为免疫粘附素)融合。
在一些实施方式中，靶向部分包含Fab、Fab’、F(ab’)2、单域抗体、T和Abs二聚体、Fv、scFv、dsFv、ds-scFv、Fd、线性抗体、微抗体、双链抗体、双特异性抗体片段、双抗体、三抗体、sc-双抗体、kappa(lamda)体、BiTE、DVD-Ig、SIP、SMIP、DART，或包含一个或多个CDR的抗体类似物。
在一些实施方式中，靶向部分是抗体或抗体片段，其基于对在感兴趣的靶细胞上或靶位点表达的抗原的特异性进行选择。已经鉴定了多种肿瘤特异性或其他疾病特异性抗原，并且已经使用或提议使用针对这些抗原的抗体来治疗此类肿瘤或其他疾病。本领域已知的抗体可用作本文公开的组合中的靶向治疗剂，特别是用于治疗与靶抗原相关的疾病。靶抗原(及其相关疾病)的实例包括：CD2、CD19、CD20、CD22、CD27、CD33、CD37、CD38、CD40、CD44、CD47、CD52、CD56、CD70、CD79、CD1374-1BB、5T4、AGS-5、AGS-16、血管生成素2、B7.1、B7.2、B7DC、B7H1、B7H2、B7H3、BT-062、BTLA、CAIX、癌胚抗原、CTLA4、Cripto、ED-B、ErbB1、ErbB2、ErbB3、ErbB4、EGFL7、EpCAM、EphA2、EphA3、EphB2、FAP、纤维连接蛋白、叶酸受体、神经节苷脂GM3、GD2、糖皮质激素诱导的肿瘤坏死因子受体(GITR)、gp100、gpA33、GPNMB、ICOS、IGF1R、整合素αν、整合素ανβ、KIR、LAG-3、Lewis Y、间皮素、c-MET、MN碳酸酐酶IX、MUC1、MUC16、Nectin-4、NKGD2、NOTCH、OX40、OX40L、PD-1、PDL1、PSCA、PSMA、RANKL、ROR1、ROR2、SLC44A4、多配体蛋白聚糖-1、TACI、TAG-72、腱生蛋白、TIM3、TRAILR1、TRAILR2、VEGFR-1、VEGFR-2、VEGFR-3。在一些实施方式中，靶向治疗剂可包含抗体-接头-药物缀合物。在其他实施方式中，特别排除了抗体-接头-药物缀合物。
在一些实施方式中，靶向部分包括核酸靶向部分。
—般而言，核酸靶向部分是与器官、组织、细胞、细胞外基质成分和/或细胞内区室(靶标)相关的成分结合的任何多核苷酸。
在一些实施方式中，核酸靶向部分是适体。
适体通常是与特定器官、组织、细胞、细胞外基质成分和/或细胞内区室相关的特定靶结构结合的多核苷酸。一般来说，适体的靶向功能是基于适体的三维结构。在一些实施方式中，适体与靶标的结合通常由适体和靶标的二维和/或三维结构之间的相互作用介导。在一些实施方式中，适体与靶标的结合不仅基于适体的一级序列，还取决于适体和/或靶标的三维结构。在一些实施方式中，适体通过互补的沃森-克里克(Watson-Crick)碱基配对与其靶标结合，该配对被破坏碱基配对的结构(例如发夹环)所中断。
在一些实施方式中，核酸靶向部分是镜像异构体(spiegelmers)(PCT公开号WO98/08856、WO02/100442和WO06/117217)。一般而言，镜像异构体是合成的镜像核酸，可以与靶标特异性结合(即镜像适体)。镜像异构体的特征在于结构特征，这使得它们对核酸外切酶和核酸内切酶不敏感。
本领域普通技术人员将认识到，根据本公开的实施方式，可以使用能够与靶标特异性结合的任何核酸靶向部分(例如适体或镜像异构体)。在一些实施方式中，根据本公开的实施方式使用的核酸靶向部分可以靶向与疾病、失调和/或病症相关的标志物。在一些实施方式中，根据本公开的实施方式使用的核酸靶向部分可以靶向癌症相关靶标。在一些实施方式中，根据本公开的实施方式使用的核酸靶向部分可以靶向肿瘤标志物。根据本公开的实施方式，可以使用核酸靶向部分靶向任何类型的癌症和/或任何肿瘤标志物。仅举几个实例，核酸靶向部分可以靶向与前列腺癌、肺癌、乳腺癌、结直肠癌、膀胱癌、胰腺癌、子宫内膜癌、卵巢癌、骨癌、食道癌、肝癌、胃癌、脑肿瘤、皮肤黑色素瘤和/或白血病相关的标志物。
本公开的实施方式的核酸(包括待递送的核酸核酸靶向部分和/或功能性RNA，例如RNAi诱导实体、核酶、tRNA等，在下文中进一步详细描述)可以根据任何可用技术包括但不限于化学合成、酶促合成、较长前体的酶促或化学裂解等。合成RNA的方法是本领域已知的(参见，例如Gait,M.J.(ed.)Oligonucleotide synthesis:a practical approach,Oxford[Oxfordshire],Washington,D.C.:IRL Press,1984；和Herdewijn,P.(ed.)Oligonucleotide synthesis:methods and applications,Methods in molecularbiology,v.288(Clifton,N.J.)Totowa,N.J.:Humana Press,2005)。
形成核酸靶向部分的核酸可以包含天然存在的核苷、修饰的核苷、具有插入在一个或多个核苷之间的烃接头(例如，亚烷基)或聚醚接头(例如，PEG接头)的天然存在的核苷、具有插入在一个或多个核苷之间的烃或PEG接头的修饰的核苷，或其组合。在一些实施方式中，核酸靶向部分的核苷酸或修饰的核苷酸可以用烃接头或聚醚接头替换，条件是核酸靶向部分的结合亲和力和选择性基本上不因取代而降低(例如，针对靶标的核酸靶向部分的解离常数不应大于约1x10-3M)。
本领域普通技术人员将理解，根据本公开的实施方式的核酸可以包含完全在天然存在的核酸中发现的类型的核苷酸，或者可以替代地包括一种或多种核苷酸类似物或具有在其他方面不同于天然存在的核酸的结构。美国专利申请号6,403,779；6,399,754；6,225,460；6,127,533；6,031,086；6,005,087；5,977,089；其中的参考文献公开了多种可以使用的特定核苷酸类似物和修饰物。参见C Crooke,S.(ed.)Antisense Drug Technology:Principles,Strategies,and Applications,Marcel Dekker；ISBN:0824705661；1stedition(2001)及其中的参考资料。例如，2,-修饰包括卤素、烷氧基和烯丙氧基。在一些实施方式中，2'-OH基团被选自H、OR、R、卤素、SH、SR、NH2、NHR、NR2或CN的基团取代，其中R是C1-C6烷基、烯基或炔基，卤素是F、Cl、Br或I。修饰的连接的实例包括硫代磷酸酯和5'-N-亚磷酰胺键。
根据本公开的实施方式，可以使用包含多种不同核苷酸类似物、修饰的主链或非天然存在的核苷间连接的核酸。本公开的实施方式的核酸可以包括天然核苷(即，腺苷、胸苷、鸟苷、胞苷、尿苷、脱氧腺苷、脱氧胸苷、脱氧鸟苷和脱氧胞苷)或修饰的核苷。修饰的核苷酸的实例包括碱基修饰的核苷(例如，阿糖胞苷、肌苷、异鸟苷、水粉蕈素(nebularine)、假尿苷、2,6-二氨基嘌呤、2-氨基嘌呤、2-硫代胸苷、3-脱氮-5-氮杂胞苷、2’-脱氧尿苷、3-硝基吡咯、4-甲基吲哚、4-硫代尿苷、4-硫代胸苷、2-氨基腺苷、2-硫代胸苷、2-硫代尿苷、5-溴代胞苷、5-碘代尿苷、肌苷、6-氮杂尿苷、6-氯代嘌呤、7-脱氮腺苷、7-脱氮鸟苷、8-氮杂腺苷、8-叠氮腺苷、苯并咪唑、M1-甲基腺苷、吡咯并嘧啶、2-氨基-6-氯嘌呤、3-甲基腺苷、5-丙炔基胞苷、5-丙炔基尿苷、5-溴代尿苷、5-氟代尿苷、5-甲基胞苷、7-脱氮腺苷、7-脱氮鸟苷、8-氧代腺苷、8-氧代鸟苷、O(6)-甲基鸟嘌呤和2-硫代胞苷)、化学或生物修饰的碱基(例如甲基化碱基)、修饰的糖(例如，2-氟核糖、2-氨基核糖、2-叠氮核糖、2-O-甲基核糖、L-对映体核苷阿拉伯糖和已糖)，修饰的磷酸基团(例如，硫代磷酸酯和5’-N-亚磷酰胺键)及其组合。用于核酸化学合成的天然和修饰的核苷酸单体很容易获得。在一些情况下，包含此类修饰的核酸相对于仅由天然存在的核苷酸组成的核酸显示出改进的特性。在一些实施方式中，本文所述的核酸修饰用于减少和/或防止核酸酶(例如核酸外切酶、核酸内切酶等)的消化。例如，可以通过在一条或两条链的3’端包含核苷酸类似物以减少消化来稳定核酸的结构。
修饰的核酸不需要沿分子的整个长度均匀地修饰。不同的核苷酸修饰和/或骨架结构可能存在于核酸的不同位置。本领域普通技术人员将理解，核苷酸类似物或其他修饰可位于核酸的任何位置，使得核酸的功能基本上不受影响。仅举一个实例，修饰可以位于核酸靶向部分的任何位置，使得核酸靶向部分特异性结合靶标的能力基本上不受影响。修饰区可以位于一条或两条链的5’端和/或3’端。例如，已经使用了修饰的核酸靶向部分，其中两条链中任何一条的5'和/或3'端的大约1-5个残基是核苷酸类似物和/或具有骨架修饰。修改可以是5’或3’终端修改。一条或两条核酸链可包含至少50％未修饰的核苷酸、至少80％未修饰的核苷酸、至少90％未修饰的核苷酸或100％未修饰的核苷酸。
根据本公开的实施方式的核酸可以例如包含对糖、核苷或核苷间连接的修饰，例如在美国专利申请公布2003/0175950、2004/0192626、2004/0092470、2005/0020525和2005/0032733中描述的那些。本公开的实施方式包括具有一种或多种本文所述的修饰的任何核酸的用途。例如，据报道，许多末端缀合物，例如胆固醇、石胆酸、铝酸或长烷基支链等脂质可改善细胞摄取。可以使用例如使用本领域已知的任何合适的测定法来测试类似物和修饰物，例如，以选择导致改善治疗剂或诊断剂的递送、改善核酸靶向部分与靶标的特异性结合的那些，等等。在一些实施方式中，根据本公开的实施方式的核酸可包含一个或多个非天然核苷连接。在一些实施方式中，在核酸靶向部分的3'-末端、5'-末端或3'-和5'-末端处的一个或多个内部核苷酸被反转以产生连接，例如3'-3’连接或5’-5’连接。
在一些实施方式中，根据本公开的实施方式的核酸不是合成的，而是从它们的天然环境中分离出来的天然存在的实体。
任何方法都可以用于设计新的核酸靶向部分(参见，例如，美国专利号6,716,583；6,465,189；6,482,594；6,458,543；6,458,539；6,376,190；6,344,318；6,242,246；6,184,364；6,001,577；5,958,691；5,874,218；5,853,984；5,843,732；5,843,653；5,817,785；5,789,163；5,763,177；5,696,249；5,660,985；5,595,877；5,567,588；和5,270,163；和美国专利申请公布2005/0069910、2004/0072234、2004/0043923、2003/0087301、2003/0054360和2002/0064780)。本公开的实施方式提供了用于设计新的核酸靶向部分的方法。本公开的实施方式进一步提供了用于从候选核酸靶向部分的混合物中分离或鉴定新型核酸靶向部分的方法。
可以设计和/或鉴定与蛋白质、糖类、脂质和/或核酸结合的核酸靶向部分。在一些实施方式中，可以设计和/或鉴定核酸靶向部分以用于在靶向治疗中能够结合蛋白质和/或其特征部分，例如肿瘤标志物、整联蛋白、细胞表面受体、跨膜蛋白、细胞间蛋白、离子通道、膜转运蛋白、酶、抗体、嵌合蛋白等。在一些实施方式中，可以设计和/或鉴定核酸靶向部分以用于在靶向治疗中能够结合糖类和/或其特征部分，例如糖蛋白、糖(例如单糖、二糖和多糖)、糖萼(即大多数真核细胞外表面上富含糖类的外围区域)等。在一些实施方式中，可以设计和/或鉴定核酸靶向部分以用于在靶向治疗中能够结合脂质和/或其特征部分，例如油、饱和脂肪酸、不饱和脂肪酸、甘油酯、激素、类固醇(例如胆固醇、胆汁酸)、维生素(例如维生素E)、磷脂、鞘脂、脂蛋白等。在一些实施方式中，可以设计和/或鉴定核酸靶向部分以用于在靶向治疗中能够结合核酸和/或其特征部分，例如DNA核酸；RNA核酸；修饰的DNA核酸；修饰的RNA核酸；和包括DNA、RNA、修饰的DNA和修饰的RNA的任意组合的核酸，等等。
可以使用任何可用的方法设计和/或鉴定核酸靶向部分(例如适体或镜像异构体)。在一些实施方式中，通过从候选核酸混合物中鉴定出核酸靶向部分来设计和/或鉴定核酸靶向部分。通过指数富集(SELEX)或其变体的配体系统进化是从候选核酸混合物中鉴定出与靶标结合的核酸靶向部分的常用方法。
可以通过SELEX工艺或其变体分离选择性结合到任何靶标的核酸靶向部分，前提是该靶标可以用作SELEX工艺中的靶标。
III、药物制剂和给药
本公开的实施方式进一步涉及包含所述组合(即，化学治疗剂、免疫治疗剂或靶向治疗剂)的化合物或其药学上可接受的盐和一种或多种药学上可接受的载体的药物制剂。
可以使用多种给药途径或模式将本文所述的包含药学上可接受的载体的药物制剂递送给患者。合适的给药途径包括吸入、经皮、口服、直肠、经粘膜、肠和肠胃外给药，包括肌肉内、皮下和静脉内注射。优选地，包含免疫调节剂(即，免疫治疗剂)的组合的化合物胃肠外给药，更优选静脉内给药。
如本文所用，术语“施用”或“给药”旨在涵盖将化合物直接和间接递送至其预期作用部位的所有方式。
本文所述的化合物或其药学上可接受的盐和/或水合物可以单独给药、与组合的其他化合物组合、和/或以与其他治疗剂组合的鸡尾酒形式给药。当然，可以与组合的化合物共同给药的治疗剂的选择将部分取决于所治疗的病症。在其他实施方式中，特别排除了对本文公开的组合的那些治疗剂的额外治疗剂的使用。
例如，当向患有由依赖自诱导剂的生物体引起的疾病状态的患者给药时，组合的化合物可以以含有用于治疗通常与疾病相关的疼痛、感染和其他症状和副作用的药剂的鸡尾酒形式给药。此类药剂包括例如镇痛剂、抗生素等。
当对接受癌症治疗的患者给药时，化合物可以以含有抗癌剂和/或补充增效剂的鸡尾酒形式给药。化合物也可以以含有治疗放射疗法副作用的药剂的鸡尾酒形式给药，例如止吐药、放射防护剂等。
可与本发明化合物共同给药的补充增效剂包括例如三环抗抑郁药(例如丙咪嗪、地昔帕明、阿米替林、氯米帕明、曲米帕明、多虑平、去甲替林、普罗替林、阿莫沙平和马普替林)；非三环抗抑郁药(例如舍曲林、曲唑酮和西酞普兰)；Ca+2拮抗剂(例如维拉帕米、硝苯地平、尼群地平和卡罗维林)；两性霉素；曲帕拉醇类似物(例如它莫昔芬)；抗心律失常药(例如奎尼丁)；抗高血压药物(例如，利血平)；硫醇消耗剂(例如，丁硫氨酸和亚砜亚胺)；和亚叶酸钙。
组合的活性化合物本身或以药物组合物的形式给药，其中活性化合物与一种或多种药学上可接受的载体、赋形剂或稀释剂混合。根据本公开的实施方式使用的药物组合物通常使用一种或多种生理学可接受的载体以常规方式配制，所述载体包括赋形剂和助剂，其促进将活性化合物加工成可药用的制剂。适当的配方取决于所选择的给药途径。
对于经粘膜给药，在制剂中使用适合渗透屏障的渗透剂。这种渗透剂是本领域公知的。
对于口服给药，可通过将活性化合物与本领域公知的药学上可接受的载体组合来容易地配制化合物。此类载体能够将组合的化合物配制成供待治疗患者口服的片剂、丸剂、糖衣丸、胶囊、液体、凝胶、糖浆、浆液和悬浮液。口服药物制剂可以是获得的固体赋形剂，任选研磨得到的混合物，并且如果需要得到片剂或糖衣丸芯，则在加入合适的助剂后加工颗粒混合物。合适的赋形剂特别是诸如糖类的填充剂，包括乳糖、蔗糖、甘露醇或山梨糖醇；纤维素制剂，例如玉米淀粉、小麦淀粉、大米淀粉、马铃薯淀粉、明胶、黄蓍胶、甲基纤维素、羟丙基甲基纤维素、羧甲基纤维素钠和/或聚乙烯吡咯烷酮(PVP)。如果需要，可以加入崩解剂，如交联聚乙烯吡咯烷酮、琼脂或海藻酸或其盐如海藻酸钠。
糖衣丸芯具有合适的包衣。为此，可使用浓缩糖溶液，其可任选地包含阿拉伯树胶、滑石粉、聚乙烯吡咯烷酮、卡波姆凝胶、聚乙二醇和/或二氧化钛、漆溶液和合适的有机溶剂或溶剂混合物。可以将染料或颜料添加到片剂或糖衣丸包衣中，用于识别或表征活性化合物剂量的不同组合。
可口服使用的药物制剂包括由明胶制成的推入式胶囊，以及由明胶和增塑剂如甘油或山梨糖醇制成的软密封胶囊。推入式胶囊可包含与填充剂如乳糖、粘合剂如淀粉和/或润滑剂如滑石粉或硬脂酸镁以及任选地稳定剂混合的活性成分。在软胶囊中，活性化合物可以溶解或悬浮在合适的液体中，例如脂肪油、液体石蜡或液体聚乙二醇。此外，可以添加稳定剂。用于口服给药的所有制剂应适合这种给药的剂量。
对于口腔给药，组合物可以采用采取以常规方式配制的片剂或锭剂的形式。
对于吸入给药，根据本公开的实施方式使用的化合物以气雾剂喷雾形式从加压包或喷雾器方便地递送，使用合适的推进剂，例如二氯二氟甲烷、三氯氟甲烷、二氯四氟乙烷、二氧化碳或其他合适的气体。在加压气雾剂的情况下，可以通过提供阀以输送计量的量来确定剂量单位。可配制用于吸入器或吹入器的胶囊和例如明胶的药筒，其含有化合物和合适的粉末基质例如乳糖或淀粉的粉末混合物。
可以配制本文公开的组合的一种或多种组分用于通过注射例如通过推注或连续输注进行肠胃外给药。注射是优选的给药方法。注射制剂可以以单位剂型存在，例如安瓿或多剂量容器，并添加防腐剂。制剂可以采用油性或水性载体中的悬浮液、溶液或乳液等形式，并且可以包含配制剂，例如添加悬浮剂、稳定剂和/或分散剂，例如交联聚乙烯吡咯烷酮、琼脂或藻酸酸或其盐如海藻酸钠。
肠胃外给药的药物制剂包括水溶性形式的活性化合物的水溶液。此外，活性化合物的悬浮液可以制备成合适的油性注射悬浮液。合适的亲脂性溶剂或载体包括脂肪油如芝麻油，或合成脂肪酸酯如油酸乙酯或甘油三酯，或脂质体。水性注射悬浮液可以含有增加悬浮液粘度的物质，例如羧甲基纤维素钠、山梨糖醇或葡聚糖。任选地，悬浮液还可包含合适的稳定剂或试剂，其增加化合物的溶解度以允许制备高度浓缩的溶液。对于注射，本文公开的组合的组分可以配制在水溶液中，优选在生理相容的缓冲液中，例如汉克斯溶液、林格氏溶液或生理盐水缓冲液。
或者，活性成分可以是粉末形式，以便在使用前用合适的载体例如无菌无热原水配制。
化合物也可以配制成直肠组合物，例如栓剂或保留灌肠剂，例如含有常规栓剂基质，例如可可脂或其他甘油酯。
除了先前描述的制剂之外，化合物还可以配制成贮库制剂。此类长效制剂可通过植入或经皮递送(例如，皮下或肌内)、肌内注射或经皮贴剂给药。因此，例如，化合物可以与合适的聚合物或疏水材料(例如，作为可接受的油中的乳液)或离子交换树脂一起配制，或作为微溶衍生物，例如作为微溶盐。
药物组合物还可包含合适的固相或凝胶相载体或赋形剂。这种载体或赋形剂的实例包括碳酸钙、磷酸钙、各种糖、淀粉、纤维素衍生物、明胶和聚合物如聚乙二醇。
在一些实施方式中，本公开的实施方式的药物组合物进一步包括另外的治疗剂。
在一些实施方式中，另外的治疗剂是抗癌剂。
在一些实施方式中，另外的抗癌剂选自抗代谢物、拓扑异构酶I和II抑制剂、烷化剂、微管抑制剂、抗雄激素剂、GNRh调节剂或其混合物。
在一些实施方式中，另外的治疗剂是化学治疗剂。
本文中的“化学治疗剂”是指可用于治疗癌症的化合物。实例包括但不限于：吉西他滨、伊立替康、多柔比星、5-氟尿嘧啶、阿糖胞苷(“Ara-C”)、环磷酰胺、噻替派、白消安、Cytoxin、TAXOL、甲氨蝶呤、顺铂、美法仑、长春碱和卡铂。
在一些实施方式中，第二化学治疗剂选自他莫昔芬、雷洛昔芬、阿那曲唑、依西美坦、来曲唑、伊马他尼、紫杉醇、环磷酰胺、洛伐他汀、米诺辛、吉西他滨、阿糖胞苷、5-氟尿嘧啶、甲氨蝶呤、多西他赛、戈舍瑞林、长春新碱、长春碱、诺考达唑、替尼泊苷依托泊苷、吉西他滨、埃坡霉素、长春瑞滨、喜树碱、柔红霉素、放线菌素D、米托蒽醌、吖啶、阿霉素、表柔比星或伊达比星组成的组。
IV、试剂盒
在另一方面，本公开的实施方式提供包含本申请提供的治疗组合和使用该治疗组合的说明的试剂盒。该试剂盒还可包括容器和任选地一个或多个小瓶、试管、烧瓶、瓶子或注射器。试剂盒的其他形式对于本领域技术人员来说是显而易见的并且在本公开的实施方式的范围内。
V、医疗用途
在另一方面，本发明公开的实施方式提供了一种用于治疗需要这种治疗的受试者的疾病状况的方法，包括：向受试者施用治疗组合或药物组合物，所述治疗组合或药物组合物包含治疗有效量的本公开的实施方式的化合物或其药学上可接受的盐，以及药学上可接受的载体。
除了上述组合物和构建体之外，本公开的实施方式还提供了治疗组合的多种用途。本公开的组合包含具有髓源性抑制细胞抑制剂的一种或多种功能的化学治疗剂。这些用途包括向有需要的动物例如哺乳动物或人施用有效量的本公开的实施方式的化合物。
本公开的组合可用于治疗受试者例如人类的疾病例如癌症。通过以药学上可接受的组合物和方式向受试者提供组合的化合物以及药学有效量的本公开实施方式的组合物来治疗肿瘤的组合和用途。
本文中的“癌症”是指以不受调节的细胞增殖为特征的人类病理状况。实例包括但不限于：癌、肉瘤、淋巴瘤、母细胞瘤和白血病。癌症的更具体实例包括但不限于：急性髓系白血病(AML)、乳腺癌、慢性淋巴细胞白血病(CLL)、慢性髓性白血病(CML)、霍奇金淋巴瘤、多发性骨髓瘤、蕈样真菌病、神经母细胞瘤、非霍奇金淋巴瘤(NHL)、卵巢癌和视网膜母细胞瘤。
本文中的“抑制”或“治疗(treating)”或“治疗(treatment)”是指减少、治疗性治疗和预防性或防止性治疗，其中目的是减少或预防靶标病理障碍或病症。在一个实例中，在施用本公开的实施方式的化合物之后，癌症患者可能经历肿瘤尺寸的减小。“治疗”或“治疗”包括(1)抑制正在经历或表现出疾病病理或症状的受试者的疾病，(2)改善正在经历或表现出疾病病理或症状的受试者的疾病，(3)影响正在经历或表现出疾病的病理或症状的受试者或患者的疾病的任何可测量的减少。就本公开的实施方式的化合物可以防止癌细胞生长和/或杀死癌细胞而言，它可以是细胞抑制性的和/或细胞毒性的。
术语“治疗”或“治疗”广义上包括任何种类的治疗活动，包括减轻或预防人或其他动物的疾病，或以其他方式影响人或其他动物身体的结构或任何功能的任何活动。治疗活动包括向患者施用本文所述的药物、剂型和药物组合物，尤其是根据本文公开的各种治疗方法，无论是由医疗保健专业人员、患者本人还是任何其他人。治疗活动包括医疗保健专业人员例如医生、医师助理、执业护士等的命令、指示和建议，然后由包括其他医疗保健专业人员或患者本人在内的任何其他人采取行动。对于本公开的组合，不同的成分可以由不同的人给药；但是，该活动应被视为是按照处方或监督医疗保健专业人员的命令进行的，例如但不限于肿瘤学家或住院医师，或者在患者的要求下进行，目的是为了患者获得组合的益处。在一些实施方式中，治疗活动还可以包括鼓励、诱导或管理选择特定药物或其组合来治疗病症-并且该药物被实际使用-通过批准药物的保险覆盖、替代药物包括药物或组合的拒绝覆盖，或从药物处方集排除替代药物或组合，或提供使用药物或组合的经济激励，如保险公司或药房福利管理公司等可能所做的那样。在一些实施方式中，治疗活动还可以包括鼓励、诱导或管理选择特定的组合药物来治疗病症-并且该药物或组合被实际使用-通过由医院、诊所、健康维护组织、医疗实践或医师团体等可能建立的政策或实践标准。除了对患者的治疗益处之外，本文公开的治疗可参与与所有各方的成本和成本效率相关的益处，以及与由健康护理专业人员、机构和保险人产生的患者群体中的总体改善的效果相关的益处。
癌症治疗通常是循环进行的。如本文所用，最基本的治疗周期是指给药期间的时间间隔和随后的不给药的时间间隔。当重新开始给药时，新的周期开始。不给药的间隔为身体从治疗的不良副作用中恢复和/或为医务人员评估治疗效果的提供了机会。此外，当组合施用两种活性剂时，如在本公开的实施方式中，两种活性剂可以在不同的时间表给予，其中一种药剂的时间表定义了周期的开始。在一些实施方式中，活性剂可以以固定次数、以固定周期和/或在固定时间间隔内给药。在其他实施方式中，这些参数中的任何一个或多个可以是可变的。在如本文所述的特定实施方式中，一个周期从施用化学治疗剂组分开始，然后是例如1-7天后第一次施用免疫治疗剂组分。免疫治疗剂的施用的开始也可以基于实现MDCS降低的阈值程度。在一些实施方式中，化学治疗剂每周期施用一次。在一些实施方式中，化学治疗剂的施用持续超过免疫治疗剂的施用开始的点。在一些实施方式中，化学治疗剂的施用在一定时间间隔后停止。在一些实施方式中，在周期内的某些时间间隔或当MDCS数上升到超过其治疗前水平(pretreament level)的阈值比例，例如>30、>40、>50、>60、>70或>80％的它们治疗前水平时，重复施用化学治疗剂。在一些实施方式中，免疫治疗剂的施用在化学治疗剂的施用停止后在周期内持续一段时间。在一些实施方式中，周期定义为施用化学治疗剂组分的停止和重新开始。在替代实施方式中，在开始新的周期之前，同时施用化学治疗剂和免疫治疗剂会停止一段时间。
本文中的“治疗有效量”是指本公开提供的化合物有效“治疗”受试者或哺乳动物的病症的量。在癌症的情况下，治疗有效量的药物可以减少癌细胞的数量，减小肿瘤大小，抑制癌细胞向周围器官的渗透，抑制肿瘤转移，在一定程度上抑制肿瘤生长，和/或缓解在某种程度上与癌症相关的一种或多种症状。
癌症治疗的有效性通常以“反应”来衡量。监测反应的技术可能类似于用于诊断癌症的测试，例如但不限于：
·涉及一些淋巴结的肿块或肿瘤可以通过体格检查从外部摸到和测量。
·一些内部癌症肿瘤会出现在X射线或CT扫描中，可以用尺子测量。
·可以进行血液测试，包括那些测量器官功能的测试。
·某些癌症可以进行肿瘤标志物测试。
无论使用何种测试，无论是血液测试、细胞计数还是肿瘤标志物测试，都会在特定的时间间隔重复进行，以便将结果与相同类型的早期测试进行比较。
对癌症治疗的反应有几种定义：
·完全反应-所有癌症或肿瘤消失；没有疾病的迹象。肿瘤标志物(如适用)的表达水平可能在正常范围内。
·部分反应-癌症缩小了一定百分比，但疾病仍然存在。肿瘤标志物(如果适用)的水平可能已经下降(或增加，根据肿瘤标志物，作为肿瘤负荷减少的指示)，但疾病的迹象仍然存在。
·病情稳定-癌症既没有增长也没有缩小；疾病的数量没有改变。肿瘤标志物(如果适用)没有显著变化。
·疾病进展-癌症已经发展；现在的疾病比治疗前多。肿瘤标志物测试(如果适用)显示肿瘤标志物已经升高。
癌症治疗效果的其他测量包括总生存时间间隔(即从诊断或从正在评估的治疗的开始测量的任何原因导致死亡的时间)、无癌症生存期(即完全响应癌症保持不可检测之后的时间长度)和无进展生存期(即在疾病稳定或恢复肿瘤生长的部分反应不可检测后的时间长度)。
根据肿瘤大小(肿瘤负荷)评估实体癌治疗反应的标准方法有两种，即WHO和RECIST标准。这些方法测量实体瘤以将当前肿瘤与过去测量值进行比较或将变化与未来测量值进行比较并改变治疗方案。在WHO方法中，测量实体瘤的长短轴，然后计算这两个测量值的乘积；如果有多个实体瘤，则计算所有乘积的总和。在RECIST方法中，仅测量长轴。如果有多个实体瘤，计算所有长轴测量值的总和。然而，对于淋巴结，测量的是短轴而不是长轴。
与一种或多种其他治疗剂“联合”给药包括以任何顺序同时(并行)和连续给药。在一些实施方式中，“药物组合物”是指通过混合或组合活性成分获得的产品，并且包括活性成分的固定和非固定组合。术语“固定组合”是指活性成分以单一实体或剂量的形式同时向患者给药。术语“非固定组合”是指将活性成分作为单独的实体同时、并行或依次向患者给药，没有特定的时间限制，其中这种给药在患者体内提供治疗有效水平的活性成分。后者也适用于鸡尾酒疗法，例如三种或更多种活性成分的给药。
在一些实施方式中，疾病状况是肿瘤或癌症。在一些实施方式中，癌症或肿瘤选自胃癌、结肠癌、直肠癌、肝癌、胰腺癌、肺癌、乳腺癌、子宫颈癌、子宫体癌、卵巢癌、睾丸癌、膀胱癌、肾癌、脑/CNS、头颈癌、咽喉癌、霍奇金癌疾病、非霍奇金淋巴瘤、多发性骨髓瘤、白血病、黑色素瘤、非黑色素瘤皮肤癌、急性淋巴细胞白血病、急性髓系白血病、尤文氏肉瘤、小细胞肺癌、绒毛膜癌、横纹肌肉瘤、维尔姆斯瘤、神经母细胞瘤、毛细胞白血病、口腔/咽癌、食道癌、喉癌、肾癌或淋巴瘤。
在一些实施方式中，疾病状况包括异常细胞增殖，例如癌前病变。
本公开的组合特别适用于治疗癌症和抑制动物体内肿瘤细胞或癌细胞的增殖。癌症或癌前病症，包括肿瘤、转移或任何以不受控制的细胞生长为特征的疾病或病症，可以通过施用化学治疗剂-免疫治疗剂组合来治疗或预防。在包含靶向治疗剂的一些实施方式中，靶向部分特异性结合至或关联至癌细胞或肿瘤细胞相关抗原。在包含免疫治疗剂和靶向治疗剂的一些实施方式中，两者可以偶联，即，它们作为抗体-药物偶联物(ADC)提供。在一些实施方式中，ADC在与细胞结合后被内化，例如通过受体介导的内吞作用(TLR7和TLR8是内体受体)。抗原可以附着于肿瘤细胞或癌细胞，或者可以是与肿瘤细胞或癌细胞相关的细胞外基质蛋白。一旦进入细胞，连接体就被肿瘤细胞或癌细胞相关蛋白酶水解或酶促裂解，从而释放免疫治疗剂。然后释放的免疫治疗剂自由扩散并诱导或增强免疫细胞或肿瘤细胞的免疫活性。在另一个实施方式中，免疫治疗剂在肿瘤微环境中被裂解，免疫治疗剂随后渗透细胞。
本公开的实施方式的化合物可以靶向的癌前病症的代表性实例包括：化生、增生、发育不良、结肠直肠息肉、光化性角化病、光化性唇炎、人乳头瘤病毒、黏膜白斑病、扁平苔藓和鲍温病。
本公开实施方式的化合物可以靶向的癌症或肿瘤的代表性实例包括：肺癌、结肠癌、前列腺癌、淋巴瘤、黑色素瘤、乳腺癌、卵巢癌、睾丸癌、CNS癌、肾癌(renal cancer)、肾癌(kidney cancer)、胰腺癌、胃癌、口腔癌、鼻癌、宫颈癌和白血病。对于普通技术人员来说显而易见的是，可以选择化合物中使用的特定靶向部分，使其将活性部分靶向待用药物治疗的肿瘤组织。
在一些实施方式中，异常增殖是癌细胞的异常增殖。
在一些实施方式中，癌症选自由乳腺癌、结肠直肠癌、弥漫性大B细胞淋巴瘤、子宫内膜癌、滤泡性淋巴瘤、胃癌、胶质母细胞瘤、头颈癌、肝细胞癌、肺癌、黑色素瘤、多发性骨髓瘤、卵巢癌、胰腺癌、前列腺癌和肾细胞癌组成的组。
在一些实施方式中，所治疗的癌症选自由急性髓系白血病(AML)、乳腺癌、慢性淋巴细胞白血病(CLL)、慢性髓性白血病(CML)、霍奇金淋巴瘤、多发性骨髓瘤、蕈状真菌病、神经母细胞瘤、非霍奇金淋巴瘤(NHL)和卵巢癌组成的组。
在一些实施方式中，本公开的实施方式提供用于杀死细胞的化合物。将化合物以足以杀死所述细胞的量施用于细胞。在示例性实施方式中，将化合物施用于承载细胞的受试者。在另一个示例性实施方式中，给药用于延缓或停止包括细胞的肿瘤的生长(例如，细胞可以是肿瘤细胞)。对于延缓生长的给药，细胞的生长速度应比给药前的生长速度低至少10％。优选地，生长速度将被延迟至少20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％或完全停止。
此外，本公开的实施方式提供了用作药物的本公开的实施方式的化合物或药物组合物。本公开的实施方式还提供了用于杀死、抑制或延迟肿瘤或癌细胞的增殖，或用于治疗其中涉及TLR7和/或TLR8的疾病的化合物或药物组合物。
剂量和给药方式
在一些实施方式中，以能够将受试者中血液、脾脏和/或肿瘤微环境中的MDCS的量减少约10、20、30、40、50、60、70、80、90或95％的量提供化学治疗剂。优选减少30、40或50％。
在一些实施方式中，提供的化学治疗剂的量低于作为单一疗法使用时的量，例如为标准单一治疗剂量的约10、20、30、40、50、60、70、80、90或95％，优选约50％。
在一些实施方式中，化学治疗剂是吉西他滨并且其量为400-625mg/m2。
在一些实施方式中，化学治疗剂在免疫治疗施用之前并且在所述免疫治疗剂施用之前7天内施用。
在一些实施方式中，化学治疗剂在施用免疫治疗剂之前施用。
在一些实施方式中，化学治疗剂在施用所述免疫治疗剂之前至少一、二、三、四、五天、六天或七天施用。
在一些实施方式中，免疫治疗剂在施用所述化学治疗剂之后血液和/或肿瘤微环境中MDCS的量在所述受试者中减少10％至95％之后施用。
在一些实施方式中，免疫治疗剂与针对癌症的靶向治疗剂组合施用，或者同时施用，例如在单一制剂中，或者分开施用，例如在单独的制剂中。
在一些实施方式中，“以一定量提供”包括施用指定量。在一些实施方式中，“以一定量提供”包括提供剂型，包括但不限于单位剂型、继续指定的量。
有效剂量
适用于本公开的实施方式的药物组合物包括其中活性成分以治疗有效量，即以有效实现其预期目的的量包含的组合物。对特定应用有效的实际量尤其取决于所治疗的病症。
对于本文所述的任何化合物，治疗有效量可最初由细胞培养测定确定。靶标血浆浓度将是能够抑制细胞生长或分裂的活性化合物的那些浓度。在优选的实施方式中，细胞活性被抑制至少25％。活性化合物的靶标血浆浓度目前优选能够诱导至少约30％、50％、75％或甚至90％或更高的细胞活性抑制。可以监测患者细胞活性的抑制百分比以评估所达到的血浆药物浓度的适当性，并且可以向上或向下调整剂量以达到所需的抑制百分比。
用于人类的治疗有效量也可以从动物模型中确定。例如，可以配制用于人的剂量以达到已发现对动物有效的循环浓度。如上所述，可以通过监测细胞抑制和向上或向下调整剂量来调整人体剂量。
对于已知具有相似药理活性的化合物，治疗有效剂量也可以从人类数据中确定。可以根据所施用化合物与已知化合物相比的相对生物利用度和效力来调整施用剂量。
可以基于上述方法和本领域公知的其他方法来完成调整剂量以在人类中实现最大功效。
在一些实施方式中，将本公开的实施方式的组合物局部或区域递送至位于受试者体内的肿瘤、全身递送、或通过瘤内注射或通过直接注射到肿瘤脉管系统中递送。
在一些实施方式中，本公开提供的组合物被配制用于系统递送。在一些实施方式中，药物组合物被配制用于口服给药或肠胃外注射。在一些实施方式中，药物组合物被配制用于静脉内注射或瘤内注射。
在另一方面，本公开的实施方式提供了在需要这种治疗的受试者中治疗肿瘤或异常细胞增殖的方法，包括向受试者施用本公开提供的组合。
在一些实施方式中，本公开提供的方法包括以约0.0005mg/kg、0.0006mg/kg、0.0007mg/kg、0.0008mg/kg、0.0009mg/kg、0.001mg/kg、0.002mg/kg、0.003mg/kg、0.004mg/kg、0.005mg/kg、0.006mg/kg、0.007mg/kg、0.008mg/kg、0.009mg/kg或0.01mg/kg，至约0.02mg/kg的剂量，包括所有在内，向受试者施用包含所述免疫治疗剂的口服制剂，每周两次。
在一些实施方式中，本公开提供的方法包括以小于或约0.0005mg/kg、0.0006mg/kg、0.0007mg/kg、0.0008mg/kg、0.0009mg/kg、0.001mg/kg、0.002mg/kg、0.003mg/kg、0.004mg/kg、0.005mg/kg、0.006mg/kg、0.007mg/kg、0.008mg/kg、0.009mg/kg或0.01mg/kg的剂量，向受试者施用包含所述免疫治疗剂的口服制剂，每周两次。
在一些实施方式中，本公开提供的方法包括以约0.0005mg/kg、0.0006mg/kg、0.0007mg/kg、0.0008mg/kg、0.0009mg/kg、0.001mg/kg、0.002mg/kg、0.003mg/kg、0.004mg/kg、0.005mg/kg或0.006mg/kg至约0.015mg/kg的剂量，包括所有在内，向受试者施用包含所述免疫治疗剂的静脉内制剂，包括所有在内，每周一次。
在一些实施方式中，本公开提供的方法包括在2-5天内以约40-50mg/kg的剂量向受试者施用包含所述免疫治疗剂的静脉内制剂。
在一些实施方式中，在每个周期内以2、3或4周的间隔重复施用所述组合。
在一些实施方式中，本公开提供的方法包括以约10至15mg/kg的剂量向受试者施用包含化学治疗剂的静脉内制剂，每7至10天给予一次。
在一些实施方式中，本公开提供的方法包括以约3至5mg/kg的剂量向受试者施用包含化学治疗剂的静脉内制剂，每周两次。
在一些实施方式中，本公开提供的方法包括以约60-120mg/m2/天的剂量向受试者施用包含化学治疗剂的静脉内制剂，连续每天。
在一些实施方式中，本公开提供的方法包括以约400-1000mg/m2的剂量分4-5天向受试者施用包含化学治疗剂的口服制剂。
在一些实施方式中，本公开提供的方法包括以约50-100mg/m2/天或1-5mg/kg/天的剂量向受试者施用包含化学治疗剂的静脉内制剂。
在一些实施方式中，本公开提供的方法包括以间歇疗法的形式向受试者施用包含化学治疗剂的静脉内制剂，其中40-50mg/kg分成在2-5天内施用的剂量。可以在每个周期内以2-4周的间隔重复施用。在一些实施方式中，剂量为每7至10天给予10至15mg/kg；或3至5mg/kg，每周两次。
在一些实施方式中，本公开提供的方法包括以持续疗法的形式以1-2.5mg/kg/天的剂量向受试者施用包含的化学治疗剂的静脉内制剂。
在一些实施方式中，本公开提供的方法包括以间歇疗法的形式向受试者施用包含化学治疗剂的口服制剂，其中将40-50mg/kg的剂量分成在4-5天内施用。
在一些实施方式中，本公开提供的方法包括以1-5mg/kg/天的剂量向受试者施用包含化学治疗剂的口服制剂。
在局部给药的情况下，给药化合物的全身循环浓度不是特别重要。在这种情况下，施用化合物以在局部区域达到有效达到预期结果的浓度。
治疗量的本文公开的特异性抗体也可以作为组合的组分与免疫治疗剂一起以单一混合物形式或分开给药。在一些实施方式中，治疗量是消除或减少患者的肿瘤负荷，或防止或减少转移性细胞增殖的量。剂量将取决于许多参数，包括肿瘤的性质、患者病史、患者状况、其他溶瘤剂的可能共同使用以及给药方法。给药方法包括注射(例如，肠胃外、皮下、静脉内、腹膜内等)，其中抗体提供在无毒的药学上可接受的载体例如水、盐水、林格氏溶液、葡萄糖溶液、5％人血清白蛋白、固定油、油酸乙酯或脂质体中。典型的剂量范围可为约0.01至约20mg/kg，例如约0.1至约10mg/kg。其他有效的给药方法和剂量可以通过常规实验确定并且在本发明的范围内。
对于其他给药方式，剂量和间隔可以单独调整，以提供对所治疗的特定临床适应症有效的给药化合物的血浆水平。例如，在一个实施方式中，可以每天多次以相对高的浓度施用根据本公开的实施方式的化合物。或者，更希望以最小的有效浓度施用组合的化合物并使用频率较低的给药方案。这将提供与个体疾病的严重程度相称的治疗方案。
利用本公开提供的教导，可以计划有效的治疗方案，该方案不会引起显著的毒性并且完全有效地治疗由特定患者表现出的临床症状。该计划应包括通过考虑化合物效力、相对生物利用度、患者体重、不良副作用的存在和严重程度、首选给药方式和所选药物的毒性特征等因素来仔细选择活性化合物。
毒性和不良事件有时根据5级制进行分级。1级或轻度毒性是无症状或仅引起轻度症状；可能仅以临床或诊断观察为特征；并且没有指示干预。2级或中度毒性可能会损害日常生活活动(如准备膳食、购物、理财、使用电话等)，但指示只需要进行微量、局部或非侵入性干预。3级毒性具有医学意义，但不会立即危及生命；指示需要住院或延长住院时间；可能会影响与自我照顾相关的日常生活活动(如洗澡、穿衣和脱衣、自已吃饭、如厕、服药和不卧床不起)。4级毒性危及生命，指示需要紧急干预。5级毒性产生与不良事件相关的死亡。因此，在各种实施方式中，与使用类似有效剂量的单独免疫治疗剂相比(如果可以实现这种有效性的话)，所公开的组合的使用将使与治疗相关的毒性的等级降低至少一个等级。或者，免疫治疗剂作为组合的一部分具有更大的功效，其可以在单独使用的免疫治疗剂的最大耐受剂量下实现。在其他实施方式中，公开的组合的使用将毒性限制在2级或更低、1级或更低，或不产生特定毒性的观察。
虽然在此已经示出和描述了本公开的实施方式的优选实施例，但这些实施方式仅作为示例提供对于本领域技术人员来说是显而易见的。在不脱离本发明的情况下，本领域技术人员现在将想到许多变化、改变和替换。应当理解，在实践本发明时可以采用本文描述的实施方式的各种替代方案。
实施例
本公开的实施方式通过以下说明制备组合的化合物的实施方式进一步举例说明，但不限于此。
实施例1
在免疫活性小鼠中使用TLRL与PDL1和吉西他滨联合疗法在体内杀死肿瘤细胞
雌性6-7周龄C3H/HeN(C3H)小鼠购自日本SLC(日本滨松)。所有小鼠均在东京医科牙科大学保持在无特定病原体的条件下。所有实验程序均由东京医科牙科大学动物护理和使用委员会审查和批准(0170344A和A2018-262C)。NR-S1和SCC VII是C3H来源的鼠鳞状细胞癌(SCC)细胞系。细胞在用于肿瘤接种前培养5-7天。将NR-S1(1x106个细胞)和SCCVII(2x105个细胞)皮下(s.c.)注射到同源C3H小鼠的剃毛的右侧，并如前所述测量肿瘤大小。当个体小鼠的肿瘤体积达到30mm3(肿瘤接种后6-8天)时开始治疗。瑞喹莫德(1.7μg/小鼠)和/或抗PD-L1 mAb(MIH5，大鼠IgG2a，200μg/小鼠)腹膜内给药。沿三个正交轴(x、y和z)测量肿瘤直径，肿瘤体积通过(xyz)/2计算。
在两个独立的实验中，小鼠接受1.7μg TLRL(瑞喹莫德)或与200μg PDL1抗体(克隆：MIH5，大鼠IgG2Ga)联合治疗，在图1所示的NR-S1肿瘤模型中每三天进行一次，共4次，或在图3所示的4T1肿瘤模型中每周进行一次。在初始治疗前一天腹膜内注射吉西他滨(30mg/kg)。
实施例2
NR-S1和SCCVII肿瘤中MSDC的分析
通过使用胶原酶I、透明质酸酶和DNase的酶消化以及密度梯度离心分离肿瘤浸润淋巴细胞。使用针对CD3(17A2、大鼠IgG2b)、CD4(GK1.5、大鼠IgG2b)、CD8(53-6.72、大鼠IgG1)、CD45(30-F11、大鼠IgG2b)、IFN-r(XMG1.2、大鼠IgG1)、Foxp3(FJK-165、大鼠IgG2a)、CD11b(M1/70、大鼠IgG2b)、Gr-1(Ly6C/Ly6G、RB6-8C5、大鼠IgGa)、Ly6C(HK1.4、大鼠IgG2a)、Ly6G(1A8、大鼠IgG2a)、F4/80(BM8、大鼠IgG2a)、CD86(PO3.1、大鼠IgG2b)、MHC II类(M5/114、大鼠IgG2b)和PD-L1(MIH5、大鼠IgG2a)的单克隆抗体(mAb)。所有荧光染料(FITC、PE、PE-Cyanine7、APC、APC-eFluor780、eFluor450、Brmiant Violet 510)偶联的mAb均来自Thermo Fisher Scientific(加利福尼亚州卡尔斯巴德)、BD-Biosciences(加利福尼亚州圣何塞)或Biolegend(加利福尼亚州圣地亚哥)。使用FACSVerse流式细胞仪(BDBiosciences)和FlowJo软件(Tree Star,Ashland,OR)分析所有染色的细胞。使用Mann-Whitney U检验进行统计分析。p<0.05的值被认为表示显著性。
图2中描绘的结果表明，两种SCC肿瘤的肿瘤相关巨噬细胞的免疫状态不同，尤其是在CD11b+骨髓细胞方面。Ly6GhighLy6C-F4/80-肿瘤相关中性粒细胞在NR-S1肿瘤中占主导地位，Ly6GlowLy6Clow/-F4/80+肿瘤相关巨噬细胞在SCCVII肿瘤中占主导地位。
NR-S1肿瘤中CD11b+细胞比例明显低于SCCVII肿瘤中CD11b+细胞比例，CD3+T细胞比例较高(图2A)。
CD11b+细胞表现出不同水平的Gr-1表达(图2B，右上)。NR-S1肿瘤中的大部分CD11b+细胞具有Ly6GhighLy6C-表型(Fr-1)，而SCCVII肿瘤中的大部分CD11b+细胞具有Ly6GlowLy6C-表型(Fr-2)。SCCVII Fr-2细胞是FSChigh、SSChigh和F4/80+。
F4/80和Ly6G的表达、FSC的细胞大小和SSC的细胞内颗粒状态表明Fr-1和Fr-2分别是肿瘤相关的中性粒细胞和肿瘤相关的巨噬细胞。
来自NR-S1荷瘤小鼠的脾脏显示出明显的脾肿大和Ly6C和Ly6G的两倍大的表达谱(图2B)。
除非另有说明，否则在说明书和权利要求中使用的表示成分数量、性质如分子量、反应条件等的所有数字应理解为在所有情况下都被术语“约”修饰。如本文所用，术语“大约”和“约”是指在10％至15％内，优选在5％至10％内。因此，除非另有说明，说明书和所附权利要求中阐述的数值参数是近似值，其可根据本发明请求获得的所需特性而变化。至少，而不是试图将等效原则的应用限制在权利要求的范围内，每个数值参数至少应根据报告的有效数字的数量并通过应用普通的舍入技术来解释。尽管阐述本发明广泛范围的数值范围和参数是近似值，但在具体实施例中阐述的数值尽可能精确地报告。然而，任何数值都固有地包含某些误差，这些误差必然由在它们各自的测试测量中发现的标准偏差产生。
除非本文另有说明或与上下文明显矛盾，否则在描述本发明的上下文中(尤其是在所附权利要求的上下文中)使用的术语“一个”、“一种”、“该”和类似指代应被解释为涵盖单数和复数。本文中对数值范围的引用仅旨在用作单独指代落入该范围内的每个单独值的速记方法。除非本文另有说明，否则每个单独的值都被并入说明书中，如同其在本文中单独引用一样。除非本文另有说明或与上下文明显矛盾，否则本文所述的所有方法都可以任何合适的顺序进行。本公开提供的任何和所有示例或示例性语言(例如，“诸如”)的使用仅旨在更好地阐明本发明并且不对另外要求保护的本发明的范围构成限制。说明书中的任何语言都不应被解释为表示实践本发明的必不可少的任何未要求保护的元素。
本文公开的本发明的替代元素或实施方式的分组不应被解释为限制。每个组成员可以单独或与组的其他成员或本文中发现的其他元素的任何组合被提及和要求保护。可以预期的是，出于方便和/或可专利性的原因，组的一个或多个成员可能被包含在组中或从组中删除。当发生任何此类包含或删除时，本说明书被视为包含修改后的组，从而满足所附权利要求中使用的所有马库什组的书面描述。
本文描述了本发明的某些实施方式，包括发明人已知的用于实施本发明的最佳模式。当然，在阅读上述描述后，这些描述的实施方式的变化对于本领域普通技术人员将变得显而易见。发明人期望技术人员适当地采用这种变化，并且发明人希望以不同于本文具体描述的方式来实施本发明。因此，本发明包括在适用法律允许的情况下所附权利要求中记载的主题的所有修改和等效物。此外，除非本文另有说明或与上下文明显矛盾，否则本发明涵盖上述要素的所有可能变化形式的任何组合。
本文公开的具体实施方式可以在权利要求中使用由语言组成或基本上由语言组成来进一步限制。当在权利要求中使用时，无论是提交的还是按修改添加的，过渡术语“由……组成”排除权利要求中未指定的任何元素、步骤或成分。过渡术语“基本上由……组成”将权利要求的范围限制为特定的材料或步骤，以及那些不会对基本和新颖性产生实质性影响的材料或步骤。如此要求保护的本发明的实施方式在本文中被固有地或明确地描述和启用。
此外，在整个说明书中对专利和印刷出版物进行了大量参考。上面引用的参考文献和印刷出版物中的每一个都单独地通过引用整体并入本文。
最后，应当理解，本文公开的本发明的实施例说明了本发明的原理。可采用的其它修改在本发明的范围内。因此，作为示例而非限制，可以根据本文的教导使用本发明的替代配置。因此，本发明不限于所示出和描述的那些。

Claims (49)

1.一种用于在需要治疗的受试者中治疗肿瘤或异常细胞增殖的方法，包括向所述受试者施用：
(i)化学治疗剂，其量能够减少所述受试者的血液、脾脏和/或肿瘤微环境中的髓源性抑制细胞(MDSC)群体；和
(ii)有效量的免疫治疗剂。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述MDSC抑制剂选自由紫杉醇、吉西他滨、5-氟尿嘧啶、奥沙利铂、顺铂、卡铂、达沙替尼、舒尼替尼和多柔比星组成的组。
3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述化学治疗剂的量能够将所述受试者的血液、脾脏和/或肿瘤微环境中的MDCS的量减少10％至95％。
4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述化学治疗剂的量小于用作单一疗法时的量。
5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述化学治疗剂是吉西他滨，并且量为400-625mg/m2。
6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述MDSC表达CD11b、CD15、CD33和CD66b。
7.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述MDSC表达CD11b、CD14和CD33。
8.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，在施用所述免疫治疗剂之前并且在施用所述免疫治疗剂之前7天内施用所述化学治疗剂。
9.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，在施用所述免疫治疗剂之前施用所述化学治疗剂。
10.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，在施用所述免疫治疗剂之前至少1、2、3、4、5天、6天或7天施用所述化学治疗剂。
11.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，在施用所述化学治疗剂后，在所述受试者中血液和/或肿瘤微环境中的MDCS的量减少10％至95％之后施用所述免疫治疗剂。
12.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述免疫治疗剂包括TLR7和/或TLR8激动剂。
13.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述免疫治疗剂是TLR7和TLR8的激动剂。
14.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述免疫治疗剂具有式(I)的结构：
Figure FDA0003187013310000021
其中虚线代表键或键不存在；
X为S或-NR1，R1为-W0-W1-W2-W3-W4，
W0为键、烷基、烯基、炔基、烷氧基或-烷基-S-烷基--，
W1为键、--O--或-NR2--，其中R2为氢、烷基或烯基，
W2为键、--O--、--C(O)--、--C(S)--或-S(O)2-，
W3为键、--NR3--，其中R3为氢、烷基或烯基，
W4为氢、烷基、烯基、炔基、烷氧基、环烷基、芳基、芳氧基、杂芳基或杂环基，其各自任选地被一个或多个取代基取代，所述取代基选自羟基、烷氧基、烷基、烯基、炔基、环烷基、芳基、杂芳基、杂环基、--NH2、硝基、--烷基-羟基、--烷基-芳基、--烷基-杂芳基、--烷基-杂环基、--O-R4、--O-烷基-R4、--烷基-O-R4、--C(O)-R4、--烷基-C(O)-R4、--烷基-C(O)-O-R4、--C(O)-O-R4、--S-R4、--S(O)2-R4、--NH-S(O)2-R4、--烷基-S-R4、--烷基-S(O)2-R4、--NHR4、--NR4R4、--NH-烷基-R4、卤素、--CN、--NO2和-SH组成的组，其中R4独立地为氢、烷基、烯基、--烷基-羟基、芳基、杂芳基、杂环基或卤代烷基；
Z为氢、烷基、烯基、炔基、烷氧基、芳基、卤代烷基、杂芳基、杂环基，其各自任选地可被一个或多个取代基取代，所述取代基选自羟基、烷氧基、烷基、烯基、炔基、芳基、杂芳基、杂环基、卤素、氰基、硝基、--N(R5)2、--烷氧基-烷基、--烷氧基-烯基、-C(O)-烷基、-C(O)-O-烷基、--O-C(O)-烷基、--C(O)-N(R5)2、芳基、杂芳基、--CO-芳基和-CO-杂芳基组成的组，其中每个R5独立地为氢、烷基、卤代烷基、--烷基-芳基或-烷基-杂芳基；
R为氢、烷基、烷氧基、卤代烷基、卤素、芳基、杂芳基、杂环基，其各自任选地被被一个或多个取代基取代，所述取代基选自羟基、烷氧基、烷基、烯基、炔基、环烷基、芳基、杂芳基、杂环基、--NH2、硝基、--烷基-羟基、--烷基-芳基、--烷基-杂芳基、--烷基-杂环基、--O-R4、--O-烷基-R4、--烷基-O-R4、--C(O)-R4、--C(O)-NH-R4、--C(O)-NR4R4、--烷基-C(O)-R4、--烷基-C(O)-O-R4、--C(O)-O-R4、--O-C(O)-R4、--S-R4、--C(O)-S-R4、--S-C(O)-R4、--S(O)2-R4、--NH-S(O)2-R4、--烷基-S-R4、--烷基-S(O)2-R4、--NHR4、-NR4R4、--NH-烷基-R4、卤素、--CN和-SH组成的组，其中R4独立地为氢、烷基、烯基、烷氧基、--烷基-羟基、芳基、杂芳基、杂环基或卤代烷基；
n为0、1、2、3或4；
Y为-NR6R7、-CR6R7R8或-烷基-NH2，其各自任选地可被一个或多个取代基取代，所述取代基选自羟基、烷氧基、烷基、烯基、炔基、--NH2、卤素、--N(R5)2、--烷氧基-烷基、--烷氧基-烯基、--C(O)-烷基、--C(O)-O-烷基、--C(O)-N(R5)2、芳基、杂芳基、--CO-芳基和-CO-杂芳基组成的组，
其中R6、R7和R8独立地为氢、烷基、烯基、烷氧基、烷氨基、二烷氨基、烷硫基、芳硫基、--烷基-羟基、--烷基-C(O)-O-R9、--烷基-C(O)-R9或-烷基-OC(O)-R9，其中每个R5独立地为氢、烷基、卤代烷基、--烷基-芳基或-烷基-杂芳基，其中R9为氢、烷基、烯基、卤素或卤代烷基；
X和Z一起可任选地形成(5-9)元环。
15.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述免疫治疗剂是选自由：2-丙基噻唑并[4,5-c]喹啉-4-胺、1-(2-甲基丙基)-1H-咪唑并[4,5-c]喹啉-4-胺、4-氨基-2-(乙氧基甲基)-a,a-二甲基-1H-咪唑并[4,5-c]喹啉-1-乙醇、1-(4-氨基-2-乙基氨基甲基咪唑并)-[4,5-c]喹啉-1-基)-2-甲基丙-2-醇、N-[4-(4-氨基-2-乙基-1H-咪唑并[4,5-c]喹啉-1-基)丁基-]甲磺酰胺、4-氨基-2-乙氧基甲基-aa-二甲基-6,7,8,9-四氢-1h-咪唑并[4,5-c]喹啉-1-乙醇、4-氨基-aa-二甲基-2-甲氧基乙基-1h-咪唑并[4,5-c]喹啉-1-乙醇、1-{2-[3-(苄氧基)丙氧基]乙基}-2-(乙氧基甲基)-1H-咪唑并[4,5-c]喹啉-4-胺、N-[4-(4-氨基-2-丁基-1H-咪唑并[4,5-c][1,5]萘啶-1-基)丁基]-n'-丁基脲、N1-[2-(4-氨基-2-丁基-1H-咪唑并[4,5-c][1,5]萘啶-1-基)乙基]-2-氨基-4-甲基戊酰胺、N-(2-{2-[4-氨基-2-(2-甲氧基乙基)-1H-咪唑并[4,5-c]喹啉-1-基]乙氧基}乙基)-n'-苯基脲、1-(2-氨基-2-甲基丙基)-2-(乙氧基甲基)-1H-咪唑并[4,5-c]喹啉-4-胺、1-{4-[(3,5-二氯苯基)磺酰基]丁基}-2-乙基-1H-咪唑并[4,5-c]喹啉-4-胺、N-(2-{2-[4-氨基-2-(乙氧基甲基)-1H-咪唑并[4,5-c]喹啉-1-基]乙氧基}乙基)-n'-环己基脲、N-{3-[4-氨基-2-(乙氧基甲基)-1H-咪唑并[4,5-c]喹啉-1-基]丙基}-n'-(3-氰基苯基)硫脲、N-[3-(4-氨基-2-丁基-1H-咪唑并[4,5-c]喹啉-1-基)-2,2-二甲基丙基]苯甲酰胺、2-丁基-1-[3-(甲基磺酰基)丙基]-1H-咪唑并[4,5-c]喹啉-4-胺、N-{2-[4-氨基-2-(乙氧基甲基)-1H-咪唑并[4,5-c]喹啉-1-基]-1,1-二甲基乙基}-2-乙氧基乙酰胺、1-[4-氨基-2-乙氧基甲基-7-(吡啶-4-基)-1H-咪唑并[4,5-c]喹啉-1-基]-2-甲基丙-2-醇、1-[4-氨基-2-(乙氧基甲基)-7-(吡啶-3-基)-1H-咪唑并[4,5-c]喹啉-1-基]-2-甲基丙-2-醇、N-{3-[4-氨基-1-(2-羟基-2-甲基丙基)-2-(甲氧基乙基)-1H-咪唑并[4,5-c]喹啉-7-基]苯基}甲磺酰胺、1-[4-氨基-7-(5-羟甲基吡啶-3-基)-2-(2-甲氧基乙基)-1H-咪唑并[4,5-c]喹啉-1-基]-2-甲基丙-2-醇、3-[4-氨基-2-(乙氧基甲基)-7-(吡啶-3-基)-1H-咪唑并[4,5-c]喹啉-1-基]丙烷-1,2-二醇、1-[2-(4-氨基-2-乙氧基甲基-1H-咪唑并[4,5-c]喹啉-1-基)-1,1-二甲基乙基]-3-丙基脲、1-[2-(4-氨基-2-乙氧基甲基-1H-咪唑并[4,5-c]喹啉-1-基)-1,1-二甲基乙基]-3-环戊基脲、1-[(2,2-二甲基-1,3-二氧戊环-4-基)甲基]-2-(乙氧基甲基)-7-(4-羟甲基苯基)-1H-咪唑并[4,5-c]喹啉-4-胺、4-[4-氨基-2-乙氧基甲基-1-(2-羟基-2-甲基丙基)-1H-咪唑并[4,5-c]喹啉-7-基]-N-甲氧基-N-甲基苯甲酰胺、2-乙氧基甲基-N1-异丙基-6,7,8,9-四氢-1H-咪唑并[4,5-c]喹啉-1,4-二胺、1-[4-氨基-2-乙基-7-(吡啶-4-基)-1H-咪唑并[4,5-c]喹啉-1-基]-2-甲基丙-2-醇、N-[4-(4-氨基-2-乙基-1H-咪唑并[4,5-c]喹啉-1-基)丁基]甲磺酰胺和N-[4-(4-氨基-2-丁基-1H-咪唑并[4,5-c][1,5]萘啶-1-基)丁基]-n'-环己基脲组成的组中的化合物。
16.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述免疫治疗剂包括瑞喹莫德。
17.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述免疫治疗剂的量能够：
(1)在富集的人血液DC中诱导IFN-α；
(2)在富集的人血液DC中诱导TNF-α：和/或
(3)在富集的人血液DC中诱导IL-12-α。
18.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述免疫治疗剂的量能够激活人浆细胞样树突细胞、髓样树突细胞或NK细胞或其组合。
19.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述免疫治疗剂与针对癌症的靶向治疗剂组合施用。
20.根据权利要求19所述的方法，其特征在于，与非肿瘤细胞相比，所述靶向治疗剂能够特异性地或优选地与肿瘤细胞结合。
21.根据权利要求19所述的方法，其特征在于，所述肿瘤细胞是癌、肉瘤、淋巴瘤、骨髓瘤或中枢神经系统癌的肿瘤细胞。
22.根据权利要求19所述的方法，其特征在于，与非肿瘤抗原相比，所述靶向治疗剂能够特异性地或优选地与肿瘤抗原结合。
23.根据权利要求22所述的方法，其特征在于，所述肿瘤抗原选自由CD2、CD19、CD20、CD22、CD27、CD33、CD37、CD38、CD40、CD44、CD47、CD52、CD56、CD70、CD79和CD137组成的组。
24.根据权利要求22所述的方法，其特征在于，所述肿瘤抗原选自由4-1BB、5T4、AGS-5、AGS-16、血管生成素2、B7.1、B7.2、B7DC、B7H1、B7H2、B7H3、BT-062、BTLA、CAIX、癌胚抗原、CTLA4、Cripto、ED-B、ErbB1、ErbB2、ErbB3、ErbB4、EGFL7、EpCAM、EphA2、EphA3、EphB2、FAP、纤连蛋白、叶酸受体、神经节苷脂GM3、GD2、糖皮质激素诱导的肿瘤坏死因子受体(GITR)、gp100、gpA33、GPNMB、ICOS、IGF1R、整合素αν、整合素ανβ、KIR、LAG-3、Lewis Y、间皮素、c-MET、MN碳酸酐酶IX、MUC1、MUC16、Nectin-4、NKGD2、NOTCH、OX40、OX40L、PD-1、PDL1、PSCA、PSMA、RANKL、ROR1、ROR2、SLC44A4、多配体蛋白聚糖-1、TACI、TAG-72、肌腱蛋白、TIM3、TRAILR1、TRAILR2、VEGFR-1、VEGFR-2、VEGFR-3及其变体组成的组。
25.根据权利要求19所述的方法，其特征在于，所述靶向治疗剂包括免疫球蛋白、蛋白质、肽、小分子、纳米颗粒或核酸。
26.根据权利要求19所述的方法，其特征在于，所述靶向治疗剂包括抗体或其功能片段。
27.根据权利要求26所述的方法，其特征在于，所述抗体选自美罗华(利妥昔单抗)、赫塞汀(曲妥珠单抗)、爱必妥(西妥昔单抗)、维克替比(帕尼单抗)、Arzerra(奥法木单抗)、Bentysta(贝利尤单抗)、Yervoy(伊匹单抗)、Perjeta(帕妥珠单抗)、曲美木单抗、纳武单抗、达妥珠单抗、乌瑞芦单抗、MPDL3280A、帕博利珠单抗、博纳吐单抗、CT-011、MK-3475、BMS-936559、MED14736、MSB0010718C和马吉妥昔单抗(MGAH22)。
28.根据权利要求26所述的方法，其特征在于，所述靶向治疗剂包括Fab、Fab’、F(ab’)2、单域抗体、T和Abs二聚体、Fv、scFv、dsFv、ds-scFv、Fd、线性抗体、微抗体、双链抗体、双特异性抗体片段、双抗体、三抗体、sc-双抗体、kappa(lamda)体、BiTE、DVD-Ig、SIP、SMIP、DART或包含一个或多个CDR的抗体类似物。
29.根据权利要求19所述的方法，其特征在于，所述靶向治疗剂包括VEGFR的ATWLPPR多肽、血小板反应蛋白-1模拟物、CDCRGDCFCG(环状)多肽、SCH 221153片段、NCNGRC(环状)多肽、CTTHWGFTLC多肽、CGNKRTRGC多肽(LyP-1)、奥曲肽、伐普肽、兰瑞肽、C-3940多肽、达必佳、利普安、诺雷德或西曲瑞克。
30.根据权利要求19所述的方法，其特征在于，所述靶向治疗剂包括胞外域(ECD)或可溶形式的PD-1、PDL-1、CTLA4、BTLA、KIR、TIM3、4-1BB、LAG3、表面配体双调蛋白的部分全长、β-细胞素、EGF、肝配蛋白、epigen、上皮调节蛋白、IGF、神经调节蛋白、TGF、TRAIL或VEGF。
31.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述免疫治疗剂是全身递送的。
32.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述免疫治疗剂通过口服给药或肠胃外注射给药。
33.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述免疫治疗剂通过静脉注射或瘤内注射给药。
34.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述异常细胞增殖包括癌前病变。
35.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述异常增殖是癌细胞的异常增殖。
36.根据权利要求35所述的方法，其特征在于，所述癌症选自由急性髓系白血病(AML)、乳腺癌、慢性淋巴细胞白血病(CLL)、慢性粒细胞白血病(CML)、霍奇金淋巴瘤、多发性骨髓瘤、蕈状真菌病、神经母细胞瘤、非霍奇金淋巴瘤(NHL)、卵巢癌和视网膜母细胞瘤组成的组。
37.根据权利要求1所述的方法，其包括以约0.0005mg/kg、0.0006mg/mg/kg、0.0007mg/kg、0.0008mg/kg、0.0009mg/kg、0.001mg/kg、0.002mg/kg、0.003mg/kg、0.004mg/kg、0.005mg/kg、0.006mg/kg、0.007mg/kg、0.008mg/kg、0.009mg/kg或0.01mg/kg至约0.02mg/kg的剂量，包括所有在内，向受试者施用包含所述免疫治疗剂的口服制剂，每周两次。
38.根据权利要求1所述的方法，其包括以0.0001mg/kg至小于或约0.0005mg/kg、0.0006mg/kg、0.0007mg/kg、0.0008mg/kg、0.0009mg/kg、0.001mg/kg、0.002mg/kg、0.003mg/kg、0.004mg/kg、0.005mg/kg、0.006mg/kg、0.007mg/kg、0.008mg/kg、0.009mg/kg或0.01mg/kg的剂量，向受试者施用包含所述免疫治疗剂的口服制剂，每周两次。
39.根据权利要求1所述的方法，其包括以约0.0005mg/kg、0.0006mg/kg、0.0007mg/kg、0.0008mg/kg、0.0009mg/kg、0.001mg/kg、0.002mg/kg、0.003mg/kg、0.004mg/kg、0.005mg/kg或0.006mg/kg至约0.015mg/kg的剂量，包括所有在内，向受试者施用包含所述免疫治疗剂的静脉内制剂，每周一次。
40.根据权利要求1所述的方法，其包括以0.0001mg/kg至小于或约0.003mg/kg、0.004mg/kg、0.005mg/kg或0.006mg/kg至约0.01mg/kg的剂量，向受试者施用包含所述免疫治疗剂的静脉内制剂，每周一次。
41.根据权利要求18所述的方法，其特征在于，所述受试者中的所述免疫治疗剂的局部浓度为约0.005μg/ml至约12μg/ml。
42.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述受试者中的所述免疫治疗剂的局部浓度为约0.05μg/ml、0.1μg/ml、0.15μg/ml、0.2μg/ml、0.3μg/ml或0.4μg/ml至约0.5μg/ml。
43.根据权利要求1所述的方法，其包括在2-5天内以约40-50mg/kg的分剂量向所述受试者施用包含所述化学治疗剂的静脉内制剂。
44.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述免疫治疗剂以2-4周的间隔重复施用。
45.根据权利要求1所述的方法，其包括以约10至15mg/kg的剂量向所述受试者施用包含所述化学治疗剂的静脉内制剂，每7至10天给予一次。
46.根据权利要求1所述的方法，其包括以约3至5mg/kg的剂量每周两次向所述受试者施用包含所述化学治疗剂的静脉内制剂。
47.根据权利要求1所述的方法，其包括以约60-120mg/m2/天的剂量持续每天向所述受试者施用包含所述化学治疗剂的静脉内制剂。
48.根据权利要求1所述的方法，其包括以约400-1000mg/m2的剂量分4-5天向所述受试者施用包含所述化学治疗剂的口服制剂。
49.根据权利要求1所述的方法，包括以约50-100mg/m2/天或1-5mg/kg/天的剂量向所述受试者施用包含所述化学治疗剂的静脉内制剂。
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