CN113563467A - 针对人补体蛋白c5的抗体及其应用 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种抗人C5蛋白的抗体或其抗原结合片段，该抗体或其抗原结合片段以高亲和力结合人C5蛋白，阻断C5蛋白或其R885突变体裂解为C5a和C5b，可以用于治疗类风湿性关节炎、阵发性睡眠性血红蛋白尿、非典型溶血性尿毒症综合征、重症肌无力、视神经脊髓炎或黄斑变性等疾病从而使患者受益。

Description

针对人补体蛋白C5的抗体及其应用
技术领域
本发明涉及抗体药物领域，具体而言，本发明涉及针对人补体蛋白C5的抗体及其用于制备药物的用途。
背景技术
已知补体系统由数十种蛋白(C1(C1q、C1r、C1s)、C2、C3、C4、C5、C6、C7、C8、C9等)组成，是一个复杂的免疫监测系统，作为抵御其他生物感染的第一道宿主防御系统起作用，并且也将健康的宿主组织与细胞碎片、凋亡的和坏死的细胞区别开；此外，参与清除免疫复合体、调节适应性免疫反应、促进组织再生、血管生成、干细胞动员和中枢神经系统的发育。
补体蛋白C5是补体系统的主要成分，是先天免疫系统的关键部分。C5是190kDa的糖蛋白，包含两个由二硫键连接的多肽链α和β，其分子质量是115kDa和75kDa。在C5α-链N末端下游第74个氨基酸的精氨酸残基处被C5转化酶切割，会产生C5a和C5b补体裂解产物。其中，C5a是一种过敏毒素，可通过嗜碱性细胞和巨细胞释放的组胺刺激血管舒张；C5b可在细胞表面依次与补体蛋白C6、C7、C8、C9一同形成膜攻击复合体(MAC)的初始组分，MAC在靶细胞表面的积累最终导致细胞胶体渗透性裂解，促成促炎环境和细胞损失。
正常条件下，补体激活及其末端效应均处于严密调控之下，从而有效地维持机体的自稳功能，MAC的形成也会由于存在细胞表面组分和可溶性调节组分而不影响外围组织。但是，不受控制或不适当的补体激活或调节也会对自身组织细胞造成损伤，诱导急性和慢性疾病状态，例如类风湿性关节炎、缺血再灌注损伤、肾小球肾炎、系统性红斑狼疮、阵发性睡眠性血红蛋白尿(PNH)、非典型溶血性尿毒症综合征(aHUS)、重症肌无力以及黄斑变性例如年龄相关性黄斑变性等。
针对补体蛋白C5，已有不同报道描述了抗C5的抗体，部分抗体已经被批准上市用于相关适应症的治疗，或处于临床开发中。例如，由亚力兄制药(Alexion)研发的单克隆抗体依库珠单抗(Eculizumab)，作为人源化的靶向补体蛋白C5的IgG2/4κ型单克隆抗体，能与补体蛋白C5高亲和性结合且有效抑制其裂解为C5a和C5b，阻止终端补体复合物C5b-9的生成，从而有效抑制补体末端介导的血管内溶血，已被批准用于治疗成人和儿童阵发性睡眠性血红蛋白尿症(PNH)、非典型溶血性尿毒症综合征(aHUS)、重症肌无力和视神经脊髓炎谱系疾病。依库珠单抗的第二代Ravulizumab，则通过抗体工程实现了长效化：与C5结合为pH敏感性的，在细胞外中性条件下与C5结合，被内皮细胞内吞后，在酸性环境中与C5解离，避免了抗体被降解，从而再循环到细胞外继续结合C5，达到长效目的。
但是，虽然以上两种药物可以有效治疗大部分PNH、aHUS患者，但由于部分患者C5的多态性(Arg885突变型)，导致患者对二者不响应。因此，目前仍需要开发新型的针对补体蛋白C5的结合剂，例如抗体，特别是适用于在具有补体蛋白C5多态性的患者中作为替代或更佳的相关适应症治疗药物。
发明内容
本发明要解决的技术问题是，通过杂交瘤筛选和人源化技术，获得特异性结合人C5蛋白的高亲和力抗体，其不但能够有效阻断C5裂解为C5a和C5b，而且对R885多态性人群有效。
针对上述技术问题，本发明的目的是提供一种特异性结合人C5蛋白的抗体或其功能片段，并提供其用途。其中，本发明所述的抗体的片段涵盖抗体的各种功能性片段，例如其抗原结合部分，如Fab、F(ab’)2或scFv片段。
本发明的技术方案如下：
一方面，本发明提供一种抗体或其抗原结合片段，所述抗体或其抗原结合片段在中性pH下结合C5蛋白的亲和力比在酸性pH下更高。并且，所述抗体或其抗原结合片段能够有效阻断C5蛋白或其R885突变体裂解为C5a和C5b。
根据序列结构域的组成，本发明提供的抗体或其抗原结合片段包含重链可变区(VH)和轻链可变区(VL)，所述重链可变区和轻链可变区重链可变区(HCVR)和轻链可变区(LCVR)，所述重链可变区和轻链可变区包含选自以下的重链CDR和轻链CDR的组合：
(1)依次示于SEQ ID NO:47、48、49的HCDR1(DYHLD)、HCDR2(YIDPDNGGTFYNQKFKG)、HCDR3(WHDYAPSFAY)；和，依次示于SEQ ID NO:50、51、52的LCDR1(HASQNINVWLS)、LCDR2(KASNLHT)、LCDR3(QQGQSYPLT)；
(2)依次示于SEQ ID NO:47、97、49的HCDR1(DYHLD)、HCDR2(YIDPDTGGTFYNQKFKG)、HCDR3(WHDYAPSFAY)；和，依次示于SEQ ID NO:50、51、52的LCDR1(HASQNINVWLS)、LCDR2(KASNLHT)、LCDR3(QQGQSYPLT)；
(3)依次示于SEQ ID NO:65、66、67的HCDR1(NFYLH)、HCDR2(WIYPENLSTKYNDKFKD)、HCDR3(SHYNDYLTGAMDH)；和，依次示于SEQ ID NO:68、69、70的LCDR1(RASKSISKYLA)、LCDR2(SGSTLQF)、LCDR3(QQHDQYPWT)；
(4)依次示于SEQ ID NO:65、98、67的HCDR1(NFYLH)、HCDR2(WIYPENPSTKYNDKFKD)、HCDR3(SHYNDYLTGAMDH)；和，依次示于SEQ ID NO:68、69、70的LCDR1(RASKSISKYLA)、LCDR2(SGSTLQF)、LCDR3(QQHDQYPWT)；
(5)依次示于SEQ ID NO:65、99、100的HCDR1(NFYLH)、HCDR2(WIYPEQLSTKYNDKFKD)、HCDR3(SHFTDYLTGAMDH)；和，依次示于SEQ ID NO:68、69、70的LCDR1(RASKSISKYLA)、LCDR2(SGSTLQF)、LCDR3(QQHDQYPWT)；
(6)依次示于SEQ ID NO:65、99、100的HCDR1(NFYLH)、HCDR2(WIYPEQLSTKYNDKFKD)、HCDR3(SHFTDYLTGAMDH)；和，依次示于SEQ ID NO:68、101、70的LCDR1(RASKSISKYLA)、LCDR2(SGSTLIF)、LCDR3(QQHDQYPWT)；
(7)依次示于SEQ ID NO:71、72、73的HCDR1(DIYIH)、HCDR2(RIDPASGHTEYDPKFQA)、HCDR3(EDYEGIGY)；和，依次示于SEQ ID NO:74、75、76的LCDR1(RASQNVDTHVA)、LCDR2(LASYRYS)、LCDR3(QQYNTYPLT)；
(8)依次示于SEQ ID NO:77、78、79的HCDR1(DAWMD)、HCDR2(AIRNKTNNHATYYTESVKG)、HCDR3(QGDGYYVRFAY)；和，依次示于SEQ ID NO:80、81、82的LCDR1(RASENTYSYLA)、LCDR2(DAKTLAE)、LCDR3(QHHYGTPYT)。
按照本领域公知的抗体中重链可变区、轻链可变区的结构域组成，本发明的抗体或其抗原结合片段还包含框架区(Framework Region；FR)，该重链可变区或轻链可变区以FR1-HCDR1-FR2-HCDR2-FR3-HCDR3-FR4的顺序或以FR1-LCDR1-FR2-LCDR2-FR3-LCDR3-FR4的顺序包含上述结构域组分。
优选地，在本发明提供的抗体或其抗原结合片段中，所述重链可变区包含与示于SEQ ID NO:1、9、11、13、23、25、26、27、28、30、32、33、35、37、39或41的氨基酸序列具有至少75％同一性的氨基酸序列；和，所述轻链可变区包含与示于SEQ ID NO:2、10、12、14、24、29、31、34、36、38、40或42的氨基酸序列具有至少75％同一性的氨基酸序列。
更优选地，在本发明提供的抗体或其抗原结合片段中，所述重链可变区包含与示于SEQ ID NO:1、23、25、26或27的氨基酸序列具有至少75％同一性的氨基酸序列；和，所述轻链可变区包含与示于SEQ ID NO:2或24的氨基酸序列具有至少75％同一性的氨基酸序列；或者，
所述重链可变区包含与示于SEQ ID NO:9、28、30、32或33的氨基酸序列具有至少75％同一性的氨基酸序列；和，所述轻链可变区包含与示于SEQ ID NO:10、29、31或34的氨基酸序列具有至少75％同一性的氨基酸序列；或者
所述重链可变区包含与示于SEQ ID NO:11、35或37的氨基酸序列具有至少75％同一性的氨基酸序列；和，所述轻链可变区包含与示于SEQ ID NO:12、36或38的氨基酸序列具有至少75％同一性的氨基酸序列；或者，
所述重链可变区包含与示于SEQ ID NO:13、39或41的氨基酸序列具有至少75％同一性的氨基酸序列；和，所述轻链可变区包含与示于SEQ ID NO:14、40或42的氨基酸序列具有至少75％同一性的氨基酸序列。
根据本发明的具体实施方式，所述抗体或其抗原结合片段中：
(1)重链可变区：包含与示于SEQ ID NO:1的氨基酸序列具有至少75％同一性的氨基酸序列；和，轻链可变区：包含与示于SEQ ID NO:2的氨基酸序列具有至少75％同一性的氨基酸序列；
(2)重链可变区：包含与示于SEQ ID NO:23的氨基酸序列具有至少75％同一性的氨基酸序列；和，轻链可变区：包含与示于SEQ ID NO:24的氨基酸序列具有至少75％同一性的氨基酸序列；
(3)重链可变区：包含与示于SEQ ID NO:25的氨基酸序列具有至少75％同一性的氨基酸序列；和，轻链可变区：包含与示于SEQ ID NO:24的氨基酸序列具有至少75％同一性的氨基酸序列；
(4)重链可变区：包含与示于SEQ ID NO:26的氨基酸序列具有至少75％同一性的氨基酸序列；和，轻链可变区：包含与示于SEQ ID NO:24的氨基酸序列具有至少75％同一性的氨基酸序列；
(5)重链可变区：包含与示于SEQ ID NO:27的氨基酸序列具有至少75％同一性的氨基酸序列；和，轻链可变区：包含与示于SEQ ID NO:24的氨基酸序列具有至少75％同一性的氨基酸序列；
(6)重链可变区：包含与示于SEQ ID NO:9的氨基酸序列具有至少75％同一性的氨基酸序列；和，轻链可变区：包含与示于SEQ ID NO:10的氨基酸序列具有至少75％同一性的氨基酸序列；
(7)重链可变区：包含与示于SEQ ID NO:28的氨基酸序列具有至少75％同一性的氨基酸序列；和，轻链可变区：包含与示于SEQ ID NO:29的氨基酸序列具有至少75％同一性的氨基酸序列；
(8)重链可变区：包含与示于SEQ ID NO:30的氨基酸序列具有至少75％同一性的氨基酸序列；和，轻链可变区：包含与示于SEQ ID NO:31的氨基酸序列具有至少75％同一性的氨基酸序列；
(9)重链可变区：包含与示于SEQ ID NO:32的氨基酸序列具有至少75％同一性的氨基酸序列；和，轻链可变区：包含与示于SEQ ID NO:31的氨基酸序列具有至少75％同一性的氨基酸序列；
(10)重链可变区：包含与示于SEQ ID NO:33的氨基酸序列具有至少75％同一性的氨基酸序列；和，轻链可变区：包含与示于SEQ ID NO:31的氨基酸序列具有至少75％同一性的氨基酸序列；
(11)重链可变区：包含与示于SEQ ID NO:33的氨基酸序列具有至少75％同一性的氨基酸序列；和，轻链可变区：包含与示于SEQ ID NO:34的氨基酸序列具有至少75％同一性的氨基酸序列；
(12)重链可变区：包含与示于SEQ ID NO:11的氨基酸序列具有至少75％同一性的氨基酸序列；和，轻链可变区：包含与示于SEQ ID NO:12的氨基酸序列具有至少75％同一性的氨基酸序列；
(13)重链可变区：包含与示于SEQ ID NO:35的氨基酸序列具有至少75％同一性的氨基酸序列；和，轻链可变区：包含与示于SEQ ID NO:36的氨基酸序列具有至少75％同一性的氨基酸序列；
(14)重链可变区：包含与示于SEQ ID NO:37的氨基酸序列具有至少75％同一性的氨基酸序列；和，轻链可变区：包含与示于SEQ ID NO:38的氨基酸序列具有至少75％同一性的氨基酸序列；
(15)重链可变区：包含与示于SEQ ID NO:13的氨基酸序列具有至少75％同一性的氨基酸序列；和，轻链可变区：包含与示于SEQ ID NO:14的氨基酸序列具有至少75％同一性的氨基酸序列；
(16)重链可变区：包含与示于SEQ ID NO:39的氨基酸序列具有至少75％同一性的氨基酸序列；和，轻链可变区：包含与示于SEQ ID NO:40的氨基酸序列具有至少75％同一性的氨基酸序列；
(17)重链可变区：包含与示于SEQ ID NO:41的氨基酸序列具有至少75％同一性的氨基酸序列；和，轻链可变区：包含与示于SEQ ID NO:42的氨基酸序列具有至少75％同一性的氨基酸序列。
在本发明的上下文中，“至少75％同一性”为75％至100％之间的任何百分比数字的同一性，例如75％、80％、85％、90％，甚至91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性。可选地，所述“至少75％同一性”导致的氨基酸序列的至多25％差异可存在于本发明的抗体或其抗原结合片段的重链可变区或轻链可变区中CDR以外的任意框架区中，或者存在于重链可变区和轻链可变区以外的任意结构域或序列中。所述差异可以由任何位置的氨基酸缺失、添加或置换产生，其中置换可以是保守置换或非保守置换。
进一步地，本发明的抗体或其抗原结合片段包含的重链可变区和轻链可变区分别为：
(1)示于SEQ ID NO:1和SEQ ID NO:2的氨基酸序列；
(2)示于SEQ ID NO:23和SEQ ID NO:24的氨基酸序列；
(3)示于SEQ ID NO:25和SEQ ID NO:24的氨基酸序列；
(4)示于SEQ ID NO:26和SEQ ID NO:24的氨基酸序列；
(5)示于SEQ ID NO:27和SEQ ID NO:24的氨基酸序列；
(6)示于SEQ ID NO:9和SEQ ID NO:10的氨基酸序列；
(7)示于SEQ ID NO:28和SEQ ID NO:29的氨基酸序列；
(8)示于SEQ ID NO:30和SEQ ID NO:31的氨基酸序列；
(9)示于SEQ ID NO:32和SEQ ID NO:31的氨基酸序列；
(10)示于SEQ ID NO:33和SEQ ID NO:31的氨基酸序列；
(11)示于SEQ ID NO:33和SEQ ID NO:34的氨基酸序列；
(12)示于SEQ ID NO:11和SEQ ID NO:12的氨基酸序列；
(13)示于SEQ ID NO:35和SEQ ID NO:36的氨基酸序列；
(14)示于SEQ ID NO:37和SEQ ID NO:38的氨基酸序列；
(15)示于SEQ ID NO:13和SEQ ID NO:14的氨基酸序列；
(16)示于SEQ ID NO:39和SEQ ID NO:40的氨基酸序列；
(17)示于SEQ ID NO:41和SEQ ID NO:42的氨基酸序列。
此外，基于本发明提供的上述重链可变区和轻链可变区的具体氨基酸序列的组合，本领域技术人员可以常规地确定其中包含的重链CDR和轻链CDR的氨基酸序列，以本领域其他已知方法确定得到的重轻链CDR及其组合也被涵盖在本发明的范围内。例如，在本发明的实施例中，划分的可变区氨基酸序列中的CDR按照Kabat定义。
本发明提供的所述抗体或其抗原结合片段结合哺乳动物C5蛋白，优选灵长类动物C5蛋白，进一步优选人或食蟹猴C5蛋白，特别是人C5蛋白。
根据本发明的具体实施方式，本发明的抗体或其抗原结合片段能够以高亲和力结合人C5蛋白，对人C5蛋白的裂解为C5a和C5b具有明显的抑制作用，显著抑制补体依赖性溶血，阻断补体依赖性细胞毒性，且对食蟹猴C5蛋白具有显著的结合亲和力；并且，对人C5蛋白(R885)突变体也具有高亲和力，抑制C5变体R885裂解为C5a和C5b。此外，本发明的抗体或其抗原结合片段具有pH依赖性结合C5抗原的特点，亲和力在酸性条件低于中性条件。
优选地，本发明提供的抗体可以为鼠源抗体、嵌合抗体或者完全或部分人源化抗体；提供的抗原结合片段可以为所述抗体的能够特异性结合抗原例如人C5蛋白或其R885H突变体的任何片段，例如scFv、dsFv、(dsFv)2、Fab、Fab'、F(ab')2或Fv片段。
优选地，本发明提供的抗体为单克隆抗体或单链抗体。
优选地，本发明提供的抗体或其抗原结合片段还包含人或鼠的恒定区，优选包含鼠或人的重链恒定区(CH)和/或轻链恒定区(CL)；优选地，所述抗体或其抗原结合片段包含重链和轻链，例如两条重链和轻链。更优选地，所述抗体或其抗原结合片段包含IgG、IgA、IgM、IgD或IgE的重链恒定区和/或κ或λ型轻链恒定区。
根据本发明的具体实施方式，本发明提供的抗体为单克隆抗体，优选为人源化的单克隆抗体。优选地，所述单克隆抗体的重链恒定区为IgG1型，轻链恒定区为κ型。例如，所述单克隆抗体的重链恒定区包含示于SEQ ID NO:45的氨基酸序列；所述单克隆抗体的轻链恒定区包含示于SEQ ID NO:46的氨基酸序列。
另一方面，本发明提供一种核酸分子，其包含编码本发明所述的抗体或其抗原结合片段中包含的重链CDR、轻链CDR、重链可变区、轻链可变区、重链或轻链的核苷酸序列。
本发明的核酸分子可以被克隆到载体中，进而转化或转染宿主细胞。因此，还一方面，本发明提供一种载体，其包含本发明的核酸分子。所述载体可以为真核表达载体、原核表达载体、人工染色体及噬菌体载体等。
本发明的载体或核酸分子可以用于转化或转染宿主细胞或者以任何方式进入宿主细胞内，用于保存或表达抗体等目的。因此，又一方面，本发明提供一种宿主细胞，所述宿主细胞包含本发明的核酸分子和/或载体，或者所述宿主细胞被本发明的核酸分子和/或载体转化或转染。宿主细胞可以是任何原核或真核细胞，例如细菌或昆虫、真菌、植物或动物细胞。
本发明提供的抗体可以利用本领域已知的任何方法获得。例如，在允许本发明提供的宿主细胞表达所述抗体的重链和轻链以组装成所述抗体的情况下，培养所述宿主细胞。任选地，所述方法还包括回收产生的抗体的步骤。在本发明提供的抗体或其抗原结合片段的如上结构域氨基酸序列的情况下，获得抗体或其抗原结合片段的手段是本领域公知的。
本发明提供的抗体或其抗原结合片段、核酸分子、载体或宿主细胞可以被包含在组合物中，更特别地被包含在药物制剂中，从而根据实际需要用于各种目的。因此，在又一方面，本发明还提供一种组合物，所述组合物包含本发明提供的抗体或其抗原结合片段、核酸分子、载体和/或宿主细胞。优选地，所述组合物为药物组合物，其可选地还包含药学上可接受的载体、辅料或赋形剂。
再一方面，本发明还提供所述抗体或其抗原结合片段、核酸分子、载体、宿主细胞和/或组合物在制备药物中的用途，所述药物用于治疗由补体介导的疾病。优选地，所述疾病为类风湿性关节炎、阵发性睡眠性血红蛋白尿(PNH)、非典型溶血性尿毒症综合征(aHUS)、重症肌无力、视神经性脊髓炎或黄斑变性例如年龄相关性黄斑变性。
另一方面，本发明还提供一种预防或治疗由补体介导的疾病的方法，所述方法包括给有此需要的受试者施用本发明的抗体或其抗原结合片段、核酸分子、载体、宿主细胞和/或组合物。优选地，所述疾病为类风湿性关节炎、阵发性睡眠性血红蛋白尿(PNH)、非典型溶血性尿毒症综合征(aHUS)、重症肌无力、视神经性脊髓炎或黄斑变性例如年龄相关性黄斑变性。其中，所述受试者为哺乳动物，优选灵长类动物，更优选人。
再一方面，本发明还提供所述抗体或其抗原结合片段、核酸分子、载体、宿主细胞和/或组合物在制备用于诊断疾病的试剂中的用途，所述疾病由补体介导。优选地，所述疾病为类风湿性关节炎、阵发性睡眠性血红蛋白尿(PNH)、非典型溶血性尿毒症综合征(aHUS)、重症肌无力、视神经性脊髓炎或黄斑变性例如年龄相关性黄斑变性。
由此相应地，本发明还提供一种诊断疾病的方法，所述方法包括使本发明的抗体或其抗原结合片段、核酸分子、载体、宿主细胞和/或组合物与来自受试者的样品相接触，所述疾病由补体介导。优选地，所述疾病为类风湿性关节炎、阵发性睡眠性血红蛋白尿(PNH)、非典型溶血性尿毒症综合征(aHUS)、重症肌无力、视神经性脊髓炎或黄斑变性例如年龄相关性黄斑变性。其中，所述受试者为哺乳动物，优选灵长类动物，更优选人。
由此相应地，又一方面，本发明提供一种试剂盒，所述试剂盒包括本发明的抗体或其抗原结合片段、核酸分子、载体、宿主细胞和/或组合物。所述试剂盒可以用于治疗或诊断用途。
本发明中，利用重组补体蛋白C5成功免疫小鼠后取脾细胞，利用杂交瘤技术建立抗体库，筛选获得与C5具有高亲和力并且具有生物学活性的抗C5单克隆抗体。获得多个先导抗体分子，不仅和C5具有高亲和力，而且具有溶血抑制活性。基于鼠源先导抗体分子进行重组表达人鼠嵌合抗体及人源化抗体，最终获得与鼠源抗体具有相似生物学活性的人源化抗体分子。体外药效学研究表明，本发明的抗体能够有效阻断人血清介导的溶血活性、抑制补体依赖性细胞毒活性。本发明的抗体对人C5蛋白(R885)突变体也具有高亲和力，抑制C5变体R885裂解为C5a和C5b。此外，本发明的抗体具有pH依赖性结合C5抗原的特点，亲和力在酸性条件低于中性条件，实验证明，其解离速率常数Koff和亲和力常数KD在pH5.8和pH7.4条件下的比值均大于对照抗体依库珠单抗，表明本发明的抗体比依库珠单抗更容易在酸性条件下与抗原C5蛋白解离。并且，表位竞争实验表明本发明的抗体与依库珠单抗具有不同的抗原结合表位，为具有不同结合特征的新型候选抗体药物。
附图说明
以下，结合附图来详细说明本发明的实施方案，其中：
图1显示了杂交瘤细胞株上清的ELISA鉴定结果。
图2显示了杂交瘤细胞株上清对补体依赖型溶血的抑制作用。
图3显示了嵌合抗体与人C5蛋白的结合活性。
图4显示了嵌合抗体与食蟹猴C5蛋白的结合活性。
图5显示了嵌合抗体与人C5蛋白(R885H)突变体的结合活性。
图6显示了嵌合抗体、人源化抗体与人C5蛋白的结合活性。
具体实施方式
以下参照具体的实施例来说明本发明。本领域技术人员能够理解，这些实施例仅用于说明本发明，其不以任何方式限制本发明的范围。
下述实施例中的实验方法，如无特殊说明，均为常规方法。下述实施例中所用的药材原料、试剂材料等，如无特殊说明，均为市售购买产品。
人C5蛋白：购自义翘神州，货号13416-H18H，NP_001726.2(Gln19-Cys1676)；
hIgG1亚型的重链恒定区：SEQ ID NO:45；
hIgG-Kappa亚型的轻链恒定区：SEQ ID NO:46。
实施例1人补体蛋白C5对Balb/c小鼠的免疫
抗原重组人补体蛋白C5(Gln19-Cys1676)购自义翘神州(货号13416-H18H)，该蛋白由人293细胞(HEK293)重组表达，C端含有组氨酸标签，N端含有Flag标签。
参考Antibodies:A Laboratory Manual,Second Edition(Edward A.Greenfield2012)，以14天为间隔共计42天的过程免疫8周龄Balb/c小鼠。将人C5蛋白在完全或不完全弗氏佐剂中乳化，将其以单侧的方式注射于小鼠颈背部、尾根部、腹股沟3处皮下组织和腹膜腔内。在免疫第35天尾静脉采血，用ELISA方法检测抗体滴度后，取免疫小鼠脾细胞与骨髓瘤细胞融合。
实施例2抗人C5单克隆抗体杂交瘤细胞株的筛选、鉴定
取人C5蛋白免疫Balb/c小鼠脾脏细胞，与骨髓瘤细胞使用PEG或者电融合方法进行融合，将融合后的杂交瘤细胞以1x107个/孔密度接种于含HAT培养基中铺于384孔板中，培养5天后换含HT培养基继续培养2-3天筛选杂交瘤细胞。于384孔板中培养7-10天后，取细胞上清进行ELISA实验，筛选能够分泌抗人C5抗体的杂交瘤母克隆。
用ELISA法筛选人C5结合剂的方法如下：将人C5蛋白用PBS缓冲液稀释至1μg/ml，每孔100μl包被于96孔板(Microwell 96F 167008，Thermo)4℃孵育过夜；次日取出96孔板，用PBST(含0.5％吐温20)洗板，每次浸润1min后彻底甩干残余水分。样品孔中加入200μl的含2％BSA的PBST，置于37℃封闭1h；然后用PBST洗板，并甩干孔中水分。向96孔板中加入待测样品100μl 4℃孵育过夜。取出96孔板后用PBST洗板后每孔加入1:20000稀释的二抗羊抗鼠偶联辣根过氧化物酶100μl，并置于37℃孵育1h。再用PBST洗5次，每孔加入100μlSubstrate Solution(Invitrogen)，于37℃孵育10min；每孔加入2N硫酸50μl终止反应后于酶标仪(M5e，Molecular Device)450nm波长处检测吸光度。部分结果见图1中的图1A、图1B。
随后将ELISA阳性的克隆从384孔板转到96孔板扩大培养，然后取30μl杂交瘤细胞培养上清进行溶血实验检测，评估补体依赖性溶血的抑制作用。方法如下：将人血清补体(Normal Human Serum Complement,Quidel Corporator,A112)使用PBS稀释4倍，制备人补体母液，30μl/孔加于96孔U型板中，并加入30μl杂交瘤细胞培养上清；10％绵羊血红细胞使用PBS洗涤，3000rpm离心3min，重复洗涤3次，30μl/孔加入前面加有人补体和杂交瘤细胞培养上清的96孔U型板中，轻轻混匀；将96孔板放置于37℃孵育1h；孵育完成后将96孔板置于96孔板离心机以3000rpm转速离心3min；取60μl离心上清液加入到新的96孔板中，用酶标仪测OD405吸光度值。部分结果见图2，发现克隆6A2和1P5的上清无溶血抑制活性，5N19等克隆的上清有溶血抑制活性。
实施例3抗人C5单克隆抗体序列测定
将分泌抗人C5抗体且有抑制补体依赖性溶血活性的杂交瘤母克隆采用有限稀释法加入96孔板中，第2-3天后显微镜下观察并标记单克隆细胞，第7天后通过ELISA实验和溶血实验筛选能够分泌抗人C5单克隆抗体的单克隆杂交瘤细胞。
将筛选的单克隆杂交瘤细胞扩大培养后，按照RNAfast200试剂盒(上海飞捷生物技术有限公司)说明书步骤提取细胞总RNA；利用5×PrimeScript RT Master Mix(Takara)将杂交瘤细胞总RNA反转录成cDNA；使用简并引物和Extaq PCR试剂(Takara)扩增抗体轻链可变区IgVL(κ)和重链可变区VH序列；利用PCR clean-up Gel extraction试剂盒(Macherey-Nagel)纯化PCR扩增产物；按照pmd19T Simple Vector Kit试剂盒(Takara)说明书将扩增PCR产物连接至T载体并转化大肠杆菌感受态细胞，菌株扩增、抽提质粒后进行DNA测序获得单克隆抗体可变区序列。
获取鼠源抗体(以克隆编号命名)的可变区序列并分析，见表1。
表1鼠源抗体可变区及其CDR(按Kabat定义)的序列
Figure BDA0002470524700000121
实施例4重组嵌合抗体表征
将鼠源抗体的完整轻、重链可变区克隆进入重组表达载体，重链恒定区均选用hIgG1亚型，轻链均选用hIgG-Kappa亚型，得到的重组嵌合抗体命名为“鼠源抗体简称-xi”，用于抗体生产和纯化。对照抗体依库珠单抗，重轻链可变区序列(SEQ ID NO:43；SEQ IDNO:44)全基因合成后也构建入hIgG1和hIgG-Kappa亚型的嵌合表达载体，本文中命名为“Ref1”。
通过下述方法对上述重组嵌合抗体蛋白进行表达和纯化：转染前一天HEK293-6E细胞以1.0x106个细胞/ml密度用F17培养基稀释传代。24小时后，细胞密度达到1.8-2.0x106个细胞/ml可用于转染。以每1.0x106个细胞含有1μg DNA(重链和轻链质粒比例为1:1.5)、4μg PEI(聚乙烯亚胺-线形，Polysciences,24885-2)、0.4μl 293Expression MAX-1(Acro,EXP-711)的转染复合物，用Optimal MEM培养基(Gibco,31985-070)稀释并在室温下孵育15min后加入细胞中。在5％CO2、37℃和125rpm振荡速度的条件下，在培养瓶中培养转染细胞。转染22-26h后加入1％蛋白胨培养基。转染后第6天收集培养的细胞并以3000rpm离心30min保留上清液。将培养上清用Mabselect Sure柱纯化，洗脱的抗体蛋白透析至PBS并在-80℃下长期保存。用SDS-PAGE检测抗体纯度为95％以上的纯化抗体可用于后续实验。
采用Fortebio公司Octet RED 96仪器分析嵌合抗体的亲和力。配制缓冲液1(磷酸盐缓冲液(PBS)+0.1％BSA+0.02％吐温20(Tween 20)+0.05％Priclin300，pH7.4)，用于稀释抗原和各抗体。在pH7.4条件下，使用抗人IgG Fc捕获(AHC)传感器，先结合浓度稀释为100nM的嵌合抗体，再在pH 7.4条件下结合缓冲液1稀释的浓度为50nM抗原人C5蛋白，随后在pH 7.4的缓冲液1中解离。AHC传感器通过甘氨酸脉冲再生可多次使用。用Fortebio的Data analysis 10.0处理数据，结果见图3中图3A、图3B、图3C。
为评估嵌合抗体对人C5蛋白裂解的抑制作用，进行了补体依赖性溶血实验。将人血清补体使用PBS稀释4倍，制备人补体母液，30μl/孔加于96孔U型板中备用；抗人C5嵌合抗体使用PBS稀释至100μg/mL起始，然后2倍稀释，设置8个梯度，两个复孔，30μl/孔加于带有人补体的96孔U型板中，室温放置1h；10％绵羊血红细胞使用PBS洗涤，再以3000rpm转速离心3min，重复洗涤3次，30μl/孔加入前面加有人补体和抗C5抗体的96孔U型板中，轻轻混匀；将96孔板放置于37℃孵育1h；孵育完成后将96孔板置于96孔板离心机3000rpm离心3min；取60μL离心上清液加入到新的96孔板中，用酶标仪测OD405吸光度值。最后使用酶标仪自带softMax软件处理数据，使用四参数拟合法计算R2和IC50值。结果见表2。
表2溶血实验检测嵌合抗体对人C5蛋白裂解的抑制作用
Figure BDA0002470524700000131
Figure BDA0002470524700000141
为进一步验证嵌合抗体对补体活性的抑制作用，进行了补体依赖性细胞毒性(CDC)阻断分析实验。利用抗CD20单克隆抗体利妥昔单抗(Rituximab)在一定条件下致Raji细胞发生CDC反应为基础，观察使用抗C5抗体对此反应是否有阻断作用。首先，将利妥昔单抗使用稀释液(RPMI1640培养基)稀释至10μg/mL，50μL/孔加入96孔平底板中；将待测抗C5抗体使用稀释液稀释至10μg/mL，然后2倍稀释，设置9个梯度，2个复孔，50μL/孔加入96孔平底板中；Raji细胞计数调整密度至2x106个/mL，50μL/孔加入96孔平底板中；人血清补体稀释5倍，20μL/孔加入96孔平底板中；37℃孵育2.5h；30μL/孔CCK-8试剂加入96孔平底板中，37℃继续孵育3h；通过酶标仪检测450nm吸光度。通过吸光值采用softmax pro软件进行4参数拟合曲线，计算样品的EC50值。每块板可以测得3个样品的EC50，其中1个为对照抗体Ref1作为内参样品，计算每种待测嵌合抗体与对照抗体EC50的比值即为效价，结果见表3。
表3嵌合抗体的补体依赖性细胞毒性阻断分析
Figure BDA0002470524700000142
Figure BDA0002470524700000151
实施例5抗体的种属交叉性和R885H突变体结合活性
用Octet RED 96仪器分析嵌合抗体与食蟹猴(cynomolgus monkey)C5蛋白的交叉反应性。参考实施例4进行，区别仅在于将抗原人C5蛋白替换为抗原食蟹猴C5蛋白(Acro，货号CO5-C52Hx)。结果见图4中图4A、图4B、图4C、图4D、图4E。结果表明，对照抗体Ref1与食蟹猴C5蛋白亲和力很低，而其它待测分子与食蟹猴C5蛋白均有高亲和力。
用Octet RED 96仪器分析嵌合抗体与人C5蛋白(R885H)突变体的结合活性。同样参考实施例4进行，区别仅在于将抗原人C5蛋白替换为抗原人C5蛋白(R885H)突变体(Acro，货号CO5-H52Hx)。结果见图5中图5A、图5B、图5C、图5D、图5E。结果表明，对照抗体Ref1与人C5(R885H)蛋白亲和力很低，而其它待测分子与人C5(R885H)蛋白均有高亲和力。
实施例6抗体的表位分析
采用Fortebio公司Octet RED 96仪器分析嵌合抗体与对照抗体Ref1的表位竞争关系。配制缓冲液1(磷酸盐缓冲液(PBS)+0.1％BSA+0.02％吐温20(Tween 20)+0.05％Priclin300，pH7.4)，用于稀释抗原和各抗体。在pH 7.4条件下，使用NTA芯片，先结合浓度为50nM抗原人C5蛋白，再结合浓度为100nM的对照抗体Ref1，随后结合浓度为100nM的嵌合抗体。用Fortebio的Data analysis 10.0处理数据，结果见表4，13F21、8K13、4E5与对照抗体Ref1不竞争表位，而11D5与Ref1表位有竞争关系，结合种属交叉和R885H突变体的结合特点，表明11D5和Ref1有相近表位。
表4嵌合抗体与Ref1的抗原表位竞争关系
Figure BDA0002470524700000152
Figure BDA0002470524700000161
实施例7抗体人源化改造及人源化抗体的表征
对鼠源抗体13F21、11D5、8K13、4E5进行人源化改造。在对鼠源抗体重链序列进行综合分析，确定抗体与抗原结合的抗原互补决定簇(CDR)区域及支撑抗体保守三维构象的框架区(framework)后，通过分析搜索已知人源抗体序列，选择与鼠源抗体最为相似接近的人源抗体重链序列，如IGHV1-3*01，选择其抗体框架区序列作为模板。将鼠源抗体重链CDR嵌入到人源抗体框架区，生成人源化抗体重链序列(重链版本0)。随后，对可能参与抗原抗体结合的鼠源框架区个别氨基酸位点进行回复，生成人源化抗体重链序列(版本1，2，3)。同样过程，生成人源化抗体轻链序列(版本0，1，2……)。将设计合成的人源化抗体轻重链共转染293细胞，重组表达人源化抗体(版本命名方式例如：重链版本0+轻链版本0共表达，即为H0L0)。各人源化抗体的重链和轻链可变区及CDR区序列见表5。
表5人源化抗体可变区和CDR(按Kabat定义)序列
Figure BDA0002470524700000162
采用Fortebio公司Octet RED 96仪器分析比较嵌合抗体和人源化抗体的亲和力。同样参照实施例4进行，人源化抗体也为100nM的检测浓度。结果见图6中图6A、图6B、图6C、图6D、图6E和图6F。
为评估人源化抗体对人C5蛋白裂解的抑制作用，部分抗体进行了补体依赖性溶血实验。参考实施例4进行，结果见表6。
表6溶血实验检测人源化抗体对人C5蛋白裂解的抑制作用
样品名称 IC50(ug/ml) R2
Ref1 8.728 0.999
13F21-H0L0 6.471 0.994
13F21-H1L0 6.858 0.993
13F21-H3L1 7.962 0.999
13F21-H4L1 6.702 0.990
13F21-H10L1 8.846 0.999
13F21-H11L1 8.69 0.999
为进一步验证人源化抗体对补体活性的抑制作用，进行了补体依赖性细胞毒性(CDC)阻断分析实验。参考实施例4进行，结果见表7。
表7人源化抗体的补体依赖性细胞毒性阻断分析
样品名称 EC50(ug/ml) R2
Ref1 2.627 0.995
13F21-H0L0 2.422 0.987
13F21-H1L0 2.632 0.993
13F21-H3L1 28.34 0.998
13F21-H4L1 4.273 0.997
13F21-H10L1 2.269 0.999
13F21-H11L1 2.427 0.997
实施例8 Biacore系统检测单克隆抗体与人C5蛋白在不同pH条件下的结合动力学(Kon，Koff)和亲和力常数KD
采用GE公司BIAcore仪器S200测定抗体抗原相互作用力。参考GE公司Humanantibody capture kit商品试剂盒(货号BR-1008-39，Lot 10261753)操作说明，分别在pH7.4和pH5.8条件下测定抗体与人C5蛋白在不同pH条件下的结合动力学(Kon，Koff)和亲和力常数KD。首先在传感芯片CM4分析通道和对照样品通道都饱和偶联最大量抗人Fc抗体，然后在分析通道流过7.5μg/ml抗体，使纯化的单克隆抗体均匀分布，最后在分析通道和样品通道一起流过梯度稀释的抗原样品(起始浓度50nM，1:2稀释6-8个浓度点，并且设定0.741nm浓度点重复)，测定抗体抗原结合后发生的光反应值。随后，经仪器软件拟合分析，最终得到抗体的结合常数Kon和解离速率常数Koff，以及亲和力常数KD。结果见表8，中性条件下，13F21-H4L1、13F21-H10L1、13F21-H11L1亲和力优于对照抗体Ref1；13F21-H3L1、13F21-H4L1、13F21-H10L1、13F21-H11L1、4E5-H9L1和4E5-H9L3解离速率常数Koff和亲和力常数KD在pH5.8和pH7.4条件下的比值均大于对照抗体Ref1，表明这些抗体比Ref1更容易在酸性条件下与抗原C5蛋白解离。
表8人源化抗体与抗原在中性和酸性条件下的结合动力学和亲和力常数
Figure BDA0002470524700000181
以上对本发明具体实施方式的描述并不限制本发明，本领域技术人员可以根据本发明作出各种改变或变形，只要不脱离本发明的精神，均应属于本发明所附权利要求的范围。
序列表
<110> 上海普铭生物科技有限公司
<120> 针对人补体蛋白C5的抗体及其应用
<130> LC20110027
<160> 101
<170> SIPOSequenceListing 1.0
<210> 1
<211> 119
<212> PRT
<213> 人工序列(artificial sequence)
<400> 1
Glu Val Leu Leu Leu Gln Ser Gly Pro Glu Leu Val Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Leu Lys Ile Pro Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Tyr
20 25 30
His Leu Asp Trp Val Lys Gln Ser His Gly Lys Arg Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Tyr Ile Asp Pro Asp Asn Gly Gly Thr Phe Tyr Asn Gln Lys Phe
50 55 60
Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Val Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu His Ser Leu Thr Ser Glu Asp Thr Ala Ala Tyr Tyr Cys
85 90 95
Thr Arg Trp His Asp Tyr Ala Pro Ser Phe Ala Tyr Trp Gly Gln Gly
100 105 110
Thr Leu Val Thr Val Ser Ala
115
<210> 2
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列(artificial sequence)
<400> 2
Asp Ile Gln Met Asn Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Leu Gly
1 5 10 15
Asp Thr Ile Thr Ile Thr Cys His Ala Ser Gln Asn Ile Asn Val Trp
20 25 30
Leu Ser Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Asn Ile Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Lys Ala Ser Asn Leu His Thr Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Gly Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Ile Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Gly Gln Ser Tyr Pro Leu
85 90 95
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105
<210> 3
<211> 119
<212> PRT
<213> 人工序列(artificial sequence)
<400> 3
Gln Val His Leu Gln Gln Ser Gly Pro Glu Leu Val Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Arg Leu Ser Cys Lys Ala Ser Asp Tyr Thr Phe Thr Asn Tyr
20 25 30
Asp Ile Asn Trp Val Arg Gln Arg Pro Glu Gln Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Trp Ile Phe Pro Gly Asp Asp Ser Thr Lys Tyr Asn Glu Lys Phe
50 55 60
Lys Asp Lys Ala Thr Leu Thr Thr Asp Arg Ser Ser Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Ile Gln Leu Ser Arg Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Phe Cys
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Ala Arg Asp Tyr Asp Asn Ser Tyr Val Phe Asp His Trp Gly Gln Gly
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Thr Thr Leu Thr Val Ser Ser
115
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<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列(artificial sequence)
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Leu Ser Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Asn Ile Pro Lys Leu Leu Ile
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Tyr Lys Ala Ser Asn Leu His Thr Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
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Ser Gly Ser Gly Thr Gly Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Ile Ala Thr Tyr Phe Cys Gln Gln Gly Gln Ser Tyr Pro Leu
85 90 95
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20 25 30
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<213> 人工序列(artificial sequence)
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<213> 人工序列(artificial sequence)
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<400> 30
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<213> 人工序列(artificial sequence)
<400> 31
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1 5 10 15
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100 105
<210> 32
<211> 122
<212> PRT
<213> 人工序列(artificial sequence)
<400> 32
Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
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20 25 30
Tyr Leu His Trp Val Gln Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Met
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115 120
<210> 33
<211> 122
<212> PRT
<213> 人工序列(artificial sequence)
<400> 33
Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
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20 25 30
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Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
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Ala Lys Ser His Phe Thr Asp Tyr Leu Thr Gly Ala Met Asp His Trp
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115 120
<210> 34
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列(artificial sequence)
<400> 34
Asp Val Gln Ile Thr Gln Ser Pro Ser Phe Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Lys Ser Ile Ser Lys Tyr
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Ser Gly Ser Thr Leu Ile Phe Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln His Asp Gln Tyr Pro Trp
85 90 95
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105
<210> 35
<211> 117
<212> PRT
<213> 人工序列(artificial sequence)
<400> 35
Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Thr Val Lys Ile Ser Cys Lys Val Ser Gly Phe Asn Ile Arg Asp Ile
20 25 30
Tyr Ile His Trp Val Gln Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Arg Ile Asp Pro Ala Ser Gly His Thr Glu Tyr Asp Pro Lys Phe
50 55 60
Gln Ala Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Thr Ser Thr Asp Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Thr Glu Asp Tyr Glu Gly Ile Gly Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu
100 105 110
Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 36
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列(artificial sequence)
<400> 36
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Asn Val Asp Thr His
20 25 30
Val Ala Trp Phe Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Ser Leu Ile
35 40 45
Tyr Leu Ala Ser Tyr Arg Tyr Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Asn Thr Tyr Pro Leu
85 90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105
<210> 37
<211> 117
<212> PRT
<213> 人工序列(artificial sequence)
<400> 37
Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Thr Val Lys Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Phe Asn Ile Arg Asp Ile
20 25 30
Tyr Ile His Trp Val Gln Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Arg Ile Asp Pro Ala Ser Gly His Thr Glu Tyr Asp Pro Lys Phe
50 55 60
Gln Ala Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Thr Ser Thr Asn Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Glu Asp Tyr Glu Gly Ile Gly Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu
100 105 110
Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 38
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列(artificial sequence)
<400> 38
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Asn Val Asp Thr His
20 25 30
Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Ser Leu Ile
35 40 45
Tyr Leu Ala Ser Tyr Arg Tyr Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Phe Cys Gln Gln Tyr Asn Thr Tyr Pro Leu
85 90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105
<210> 39
<211> 122
<212> PRT
<213> 人工序列(artificial sequence)
<400> 39
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asp Ala
20 25 30
Trp Met Asp Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Gly Ala Ile Arg Asn Lys Thr Asn Asn His Ala Thr Tyr Tyr Thr Glu
50 55 60
Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser Lys Asn Ser
65 70 75 80
Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Thr Glu Asp Thr Ala Val Tyr
85 90 95
Tyr Cys Ala Arg Gln Gly Asp Gly Tyr Tyr Val Arg Phe Ala Tyr Trp
100 105 110
Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 40
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列(artificial sequence)
<400> 40
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Glu Asn Thr Tyr Ser Tyr
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Asp Ala Lys Thr Leu Ala Glu Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln His His Tyr Gly Thr Pro Tyr
85 90 95
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105
<210> 41
<211> 122
<212> PRT
<213> 人工序列(artificial sequence)
<400> 41
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asp Ala
20 25 30
Trp Met Asp Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Ala Ile Arg Asn Lys Thr Asn Asn His Ala Thr Tyr Tyr Thr Glu
50 55 60
Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser Lys Ser Ser
65 70 75 80
Val Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Thr Glu Asp Thr Ala Val Tyr
85 90 95
Tyr Cys Ala Arg Gln Gly Asp Gly Tyr Tyr Val Arg Phe Ala Tyr Trp
100 105 110
Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 42
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列(artificial sequence)
<400> 42
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Glu Asn Thr Tyr Ser Tyr
20 25 30
Leu Ala Trp Phe Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Val
35 40 45
Tyr Asp Ala Lys Thr Leu Ala Glu Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln His His Tyr Gly Thr Pro Tyr
85 90 95
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105
<210> 43
<211> 122
<212> PRT
<213> 人工序列(artificial sequence)
<400> 43
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ile Phe Ser Asn Tyr
20 25 30
Trp Ile Gln Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Glu Ile Leu Pro Gly Ser Gly Ser Thr Glu Tyr Thr Glu Asn Phe
50 55 60
Lys Asp Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Thr Ser Thr Val Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Tyr Phe Phe Gly Ser Ser Pro Asn Trp Tyr Phe Asp Val Trp
100 105 110
Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 44
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列(artificial sequence)
<400> 44
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Gly Ala Ser Glu Asn Ile Tyr Gly Ala
20 25 30
Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Gly Ala Thr Asn Leu Ala Asp Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Asn Val Leu Asn Thr Pro Leu
85 90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105
<210> 45
<211> 330
<212> PRT
<213> 人工序列(artificial sequence)
<400> 45
Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys
1 5 10 15
Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr
20 25 30
Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser
35 40 45
Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser
50 55 60
Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr
65 70 75 80
Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys
85 90 95
Arg Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys
100 105 110
Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro
115 120 125
Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys
130 135 140
Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp
145 150 155 160
Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu
165 170 175
Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu
180 185 190
His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn
195 200 205
Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly
210 215 220
Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu
225 230 235 240
Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr
245 250 255
Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn
260 265 270
Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe
275 280 285
Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn
290 295 300
Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr
305 310 315 320
Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
325 330
<210> 46
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列(artificial sequence)
<400> 46
Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu
1 5 10 15
Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe
20 25 30
Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln
35 40 45
Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser
50 55 60
Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu
65 70 75 80
Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser
85 90 95
Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
100 105
<210> 47
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列(artificial sequence)
<400> 47
Asp Tyr His Leu Asp
1 5
<210> 48
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列(artificial sequence)
<400> 48
Tyr Ile Asp Pro Asp Asn Gly Gly Thr Phe Tyr Asn Gln Lys Phe Lys
1 5 10 15
Gly
<210> 49
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列(artificial sequence)
<400> 49
Trp His Asp Tyr Ala Pro Ser Phe Ala Tyr
1 5 10
<210> 50
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列(artificial sequence)
<400> 50
His Ala Ser Gln Asn Ile Asn Val Trp Leu Ser
1 5 10
<210> 51
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列(artificial sequence)
<400> 51
Lys Ala Ser Asn Leu His Thr
1 5
<210> 52
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列(artificial sequence)
<400> 52
Gln Gln Gly Gln Ser Tyr Pro Leu Thr
1 5
<210> 53
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列(artificial sequence)
<400> 53
Asn Tyr Asp Ile Asn
1 5
<210> 54
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列(artificial sequence)
<400> 54
Trp Ile Phe Pro Gly Asp Asp Ser Thr Lys Tyr Asn Glu Lys Phe Lys
1 5 10 15
Asp
<210> 55
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列(artificial sequence)
<400> 55
Asp Tyr Asp Asn Ser Tyr Val Phe Asp His
1 5 10
<210> 56
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列(artificial sequence)
<400> 56
Thr Tyr Asp Leu Asn
1 5
<210> 57
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列(artificial sequence)
<400> 57
Trp Ile Ser Pro Gly Asp Gly Asn Thr Asn Tyr Asn Glu Lys Phe Lys
1 5 10 15
Asp
<210> 58
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列(artificial sequence)
<400> 58
Val Gly Asp Tyr Ser Tyr Tyr Phe Asp Tyr
1 5 10
<210> 59
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列(artificial sequence)
<400> 59
His Ala Ser Gln Asn Ile Asn Val Trp Leu Asn
1 5 10
<210> 60
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列(artificial sequence)
<400> 60
Lys Ala Ser Asn Leu Tyr Thr
1 5
<210> 61
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列(artificial sequence)
<400> 61
Gln Gln Gly Gln Ser Phe Pro Leu Thr
1 5
<210> 62
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列(artificial sequence)
<400> 62
Asn Tyr Trp Met Asn
1 5
<210> 63
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列(artificial sequence)
<400> 63
Met Ile His Pro Ser Asp Ser Glu Ile Met Leu Asn Gln Lys Phe Lys
1 5 10 15
Gly
<210> 64
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列(artificial sequence)
<400> 64
Glu Asp Ser Ser Gly Tyr Trp Phe Ala Tyr
1 5 10
<210> 65
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列(artificial sequence)
<400> 65
Asn Phe Tyr Leu His
1 5
<210> 66
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列(artificial sequence)
<400> 66
Trp Ile Tyr Pro Glu Asn Leu Ser Thr Lys Tyr Asn Asp Lys Phe Lys
1 5 10 15
Asp
<210> 67
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列(artificial sequence)
<400> 67
Ser His Tyr Asn Asp Tyr Leu Thr Gly Ala Met Asp His
1 5 10
<210> 68
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列(artificial sequence)
<400> 68
Arg Ala Ser Lys Ser Ile Ser Lys Tyr Leu Ala
1 5 10
<210> 69
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列(artificial sequence)
<400> 69
Ser Gly Ser Thr Leu Gln Phe
1 5
<210> 70
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列(artificial sequence)
<400> 70
Gln Gln His Asp Gln Tyr Pro Trp Thr
1 5
<210> 71
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列(artificial sequence)
<400> 71
Asp Ile Tyr Ile His
1 5
<210> 72
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列(artificial sequence)
<400> 72
Arg Ile Asp Pro Ala Ser Gly His Thr Glu Tyr Asp Pro Lys Phe Gln
1 5 10 15
Ala
<210> 73
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列(artificial sequence)
<400> 73
Glu Asp Tyr Glu Gly Ile Gly Tyr
1 5
<210> 74
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列(artificial sequence)
<400> 74
Arg Ala Ser Gln Asn Val Asp Thr His Val Ala
1 5 10
<210> 75
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列(artificial sequence)
<400> 75
Leu Ala Ser Tyr Arg Tyr Ser
1 5
<210> 76
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列(artificial sequence)
<400> 76
Gln Gln Tyr Asn Thr Tyr Pro Leu Thr
1 5
<210> 77
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列(artificial sequence)
<400> 77
Asp Ala Trp Met Asp
1 5
<210> 78
<211> 19
<212> PRT
<213> 人工序列(artificial sequence)
<400> 78
Ala Ile Arg Asn Lys Thr Asn Asn His Ala Thr Tyr Tyr Thr Glu Ser
1 5 10 15
Val Lys Gly
<210> 79
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列(artificial sequence)
<400> 79
Gln Gly Asp Gly Tyr Tyr Val Arg Phe Ala Tyr
1 5 10
<210> 80
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列(artificial sequence)
<400> 80
Arg Ala Ser Glu Asn Thr Tyr Ser Tyr Leu Ala
1 5 10
<210> 81
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列(artificial sequence)
<400> 81
Asp Ala Lys Thr Leu Ala Glu
1 5
<210> 82
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列(artificial sequence)
<400> 82
Gln His His Tyr Gly Thr Pro Tyr Thr
1 5
<210> 83
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列(artificial sequence)
<400> 83
Asn Ala Lys Thr Leu Ala Asp
1 5
<210> 84
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列(artificial sequence)
<400> 84
Ser Tyr Tyr Leu His
1 5
<210> 85
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列(artificial sequence)
<400> 85
Trp Ile Tyr Pro Gly Asn Val Asn Thr Asn Tyr Asn Glu Arg Phe Lys
1 5 10 15
Gly
<210> 86
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列(artificial sequence)
<400> 86
Ser Asp Tyr Asp Tyr Asp Ala Met Asp Tyr
1 5 10
<210> 87
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列(artificial sequence)
<400> 87
Ser Ala Ser Ser Ser Val Ser Tyr Met Tyr
1 5 10
<210> 88
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列(artificial sequence)
<400> 88
Arg Thr Ser Asn Leu Ala Ser
1 5
<210> 89
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列(artificial sequence)
<400> 89
Gln Gln Tyr His Ser Tyr Pro Phe Thr
1 5
<210> 90
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列(artificial sequence)
<400> 90
Gly Tyr Asp Met His
1 5
<210> 91
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列(artificial sequence)
<400> 91
Tyr Ile Ser Cys Tyr Asn Gly Gly Thr Lys Tyr Asn Glu Lys Phe Met
1 5 10 15
Gly
<210> 92
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列(artificial sequence)
<400> 92
Glu Gly Asp Asp Gly Val Trp Phe Ala Tyr
1 5 10
<210> 93
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列(artificial sequence)
<400> 93
His Ala Ser Gln Asn Ile Asn Val Trp Leu Thr
1 5 10
<210> 94
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列(artificial sequence)
<400> 94
Gly Tyr Asp Met Ser
1 5
<210> 95
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列(artificial sequence)
<400> 95
Tyr Ile Ser Ser Gly Gly Gly Thr Asn Tyr Tyr Pro Asp Ile Val Lys
1 5 10 15
Gly
<210> 96
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列(artificial sequence)
<400> 96
Glu Gly Asp Tyr Gly Tyr Trp Phe Ala Tyr
1 5 10
<210> 97
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列(artificial sequence)
<400> 97
Tyr Ile Asp Pro Asp Thr Gly Gly Thr Phe Tyr Asn Gln Lys Phe Lys
1 5 10 15
Gly
<210> 98
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列(artificial sequence)
<400> 98
Trp Ile Tyr Pro Glu Asn Pro Ser Thr Lys Tyr Asn Asp Lys Phe Lys
1 5 10 15
Asp
<210> 99
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列(artificial sequence)
<400> 99
Trp Ile Tyr Pro Glu Gln Leu Ser Thr Lys Tyr Asn Asp Lys Phe Lys
1 5 10 15
Asp
<210> 100
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列(artificial sequence)
<400> 100
Ser His Phe Thr Asp Tyr Leu Thr Gly Ala Met Asp His
1 5 10
<210> 101
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列(artificial sequence)
<400> 101
Ser Gly Ser Thr Leu Ile Phe
1 5

Claims (12)

1.一种结合C5蛋白的抗体或其抗原结合片段，所述抗体或其抗原结合片段在中性pH下结合C5蛋白的亲和力比在酸性pH下更高。
2.根据权利要求1所述的抗体，其中所述抗体或其抗原结合片段能够有效阻断C5蛋白或其R885突变体裂解为C5a和C5b。
3.根据权利要求1或2所述的抗体或其抗原结合片段，所述抗体或其抗原结合片段包含重链可变区(HCVR)和轻链可变区(LCVR)，所述重链可变区和轻链可变区包含选自以下的重链CDR和轻链CDR的组合：
(1)依次示于SEQ ID NO:47、48、49的HCDR1、HCDR2、HCDR3；和，依次示于SEQ ID NO:50、51、52的LCDR1、LCDR2、LCDR3；
(2)依次示于SEQ ID NO:47、97、49的HCDR1、HCDR2、HCDR3；和，依次示于SEQ ID NO:50、51、52的LCDR1、LCDR2、LCDR3；
(3)依次示于SEQ ID NO:65、66、67的HCDR1、HCDR2、HCDR3；和，依次示于SEQ ID NO:68、69、70的LCDR1、LCDR2、LCDR3；
(4)依次示于SEQ ID NO:65、98、67的HCDR1、HCDR2、HCDR3；和，依次示于SEQ ID NO:68、69、70的LCDR1、LCDR2、LCDR3；
(5)依次示于SEQ ID NO:65、99、100的HCDR1、HCDR2、HCDR3；和，依次示于SEQ ID NO:68、69、70的LCDR1、LCDR2、LCDR3；
(6)依次示于SEQ ID NO:65、99、100的HCDR1、HCDR2、HCDR3；和，依次示于SEQ ID NO:68、101、70的LCDR1、LCDR2、LCDR3；
(7)依次示于SEQ ID NO:71、72、73的HCDR1、HCDR2、HCDR3；和，依次示于SEQ ID NO:74、75、76的LCDR1、LCDR2、LCDR3；
(8)依次示于SEQ ID NO:77、78、79的HCDR1、HCDR2、HCDR3；和，依次示于SEQ ID NO:80、81、82的LCDR1、LCDR2、LCDR3。
4.根据权利要求1至3中任一项所述的抗体或其抗原结合片段，其特征在于，所述抗体或其抗原结合片段中，所述重链可变区包含与示于SEQ ID NO:1、23、25、26或27的氨基酸序列具有至少75％同一性的氨基酸序列；和，所述轻链可变区包含与示于SEQ ID NO:2或24的氨基酸序列具有至少75％同一性的氨基酸序列；或者，
所述重链可变区包含与示于SEQ ID NO:9、28、30、32或33的氨基酸序列具有至少75％同一性的氨基酸序列；和，所述轻链可变区包含与示于SEQ ID NO:10、29、31或34的氨基酸序列具有至少75％同一性的氨基酸序列；或者
所述重链可变区包含与示于SEQ ID NO:11、35或37的氨基酸序列具有至少75％同一性的氨基酸序列；和，所述轻链可变区包含与示于SEQ ID NO:12、36或38的氨基酸序列具有至少75％同一性的氨基酸序列；或者，
所述重链可变区包含与示于SEQ ID NO:13、39或41的氨基酸序列具有至少75％同一性的氨基酸序列；和，所述轻链可变区包含与示于SEQ ID NO:14、40或42的氨基酸序列具有至少75％同一性的氨基酸序列。
5.根据权利要求1至4中任一项所述的抗体或其抗原结合片段，其特征在于，所述抗体或其抗原结合片段中：
(1)重链可变区：包含与示于SEQ ID NO:1的氨基酸序列具有至少75％同一性的氨基酸序列；和，轻链可变区：包含与示于SEQ ID NO:2的氨基酸序列具有至少75％同一性的氨基酸序列；
(2)重链可变区：包含与示于SEQ ID NO:23的氨基酸序列具有至少75％同一性的氨基酸序列；和，轻链可变区：包含与示于SEQ ID NO:24的氨基酸序列具有至少75％同一性的氨基酸序列；
(3)重链可变区：包含与示于SEQ ID NO:25的氨基酸序列具有至少75％同一性的氨基酸序列；和，轻链可变区：包含与示于SEQ ID NO:24的氨基酸序列具有至少75％同一性的氨基酸序列；
(4)重链可变区：包含与示于SEQ ID NO:26的氨基酸序列具有至少75％同一性的氨基酸序列；和，轻链可变区：包含与示于SEQ ID NO:24的氨基酸序列具有至少75％同一性的氨基酸序列；
(5)重链可变区：包含与示于SEQ ID NO:27的氨基酸序列具有至少75％同一性的氨基酸序列；和，轻链可变区：包含与示于SEQ ID NO:24的氨基酸序列具有至少75％同一性的氨基酸序列；
(6)重链可变区：包含与示于SEQ ID NO:9的氨基酸序列具有至少75％同一性的氨基酸序列；和，轻链可变区：包含与示于SEQ ID NO:10的氨基酸序列具有至少75％同一性的氨基酸序列；
(7)重链可变区：包含与示于SEQ ID NO:28的氨基酸序列具有至少75％同一性的氨基酸序列；和，轻链可变区：包含与示于SEQ ID NO:29的氨基酸序列具有至少75％同一性的氨基酸序列；
(8)重链可变区：包含与示于SEQ ID NO:30的氨基酸序列具有至少75％同一性的氨基酸序列；和，轻链可变区：包含与示于SEQ ID NO:31的氨基酸序列具有至少75％同一性的氨基酸序列；
(9)重链可变区：包含与示于SEQ ID NO:32的氨基酸序列具有至少75％同一性的氨基酸序列；和，轻链可变区：包含与示于SEQ ID NO:31的氨基酸序列具有至少75％同一性的氨基酸序列；
(10)重链可变区：包含与示于SEQ ID NO:33的氨基酸序列具有至少75％同一性的氨基酸序列；和，轻链可变区：包含与示于SEQ ID NO:31的氨基酸序列具有至少75％同一性的氨基酸序列；
(11)重链可变区：包含与示于SEQ ID NO:33的氨基酸序列具有至少75％同一性的氨基酸序列；和，轻链可变区：包含与示于SEQ ID NO:34的氨基酸序列具有至少75％同一性的氨基酸序列；
(12)重链可变区：包含与示于SEQ ID NO:11的氨基酸序列具有至少75％同一性的氨基酸序列；和，轻链可变区：包含与示于SEQ ID NO:12的氨基酸序列具有至少75％同一性的氨基酸序列；
(13)重链可变区：包含与示于SEQ ID NO:35的氨基酸序列具有至少75％同一性的氨基酸序列；和，轻链可变区：包含与示于SEQ ID NO:36的氨基酸序列具有至少75％同一性的氨基酸序列；
(14)重链可变区：包含与示于SEQ ID NO:37的氨基酸序列具有至少75％同一性的氨基酸序列；和，轻链可变区：包含与示于SEQ ID NO:38的氨基酸序列具有至少75％同一性的氨基酸序列；
(15)重链可变区：包含与示于SEQ ID NO:13的氨基酸序列具有至少75％同一性的氨基酸序列；和，轻链可变区：包含与示于SEQ ID NO:14的氨基酸序列具有至少75％同一性的氨基酸序列；
(16)重链可变区：包含与示于SEQ ID NO:39的氨基酸序列具有至少75％同一性的氨基酸序列；和，轻链可变区：包含与示于SEQ ID NO:40的氨基酸序列具有至少75％同一性的氨基酸序列；
(17)重链可变区：包含与示于SEQ ID NO:41的氨基酸序列具有至少75％同一性的氨基酸序列；和，轻链可变区：包含与示于SEQ ID NO:42的氨基酸序列具有至少75％同一性的氨基酸序列。
6.根据权利要求1至5中任一项所述的抗体或其抗原结合片段，其特征在于，所述抗体或其抗原结合片段结合哺乳动物C5蛋白，优选灵长类动物C5蛋白，进一步优选人或食蟹猴C5蛋白，特别是人C5蛋白；
优选地，所述抗体为鼠源抗体、嵌合抗体或者完全或部分人源化抗体；所述抗原结合片段为所述抗体的scFv、dsFv、(dsFv)2、Fab、Fab'、F(ab')2或Fv片段；
优选地，所述抗体为单克隆抗体或单链抗体；优选地，所述抗体或其抗原结合片段还包含恒定区，优选包含鼠或人的重链恒定区(CH)和/或轻链恒定区(CL)；优选地，所述抗体或其抗原结合片段包含重链和轻链；
更优选地，所述抗体或其抗原结合片段包含IgG、IgA、IgM、IgD或IgE的重链恒定区和/或κ或λ型轻链恒定区；
进一步优选地，所述抗体为单克隆抗体，优选为人源化的单克隆抗体；
优选地，所述单克隆抗体的重链恒定区为IgG1型，轻链恒定区为κ型。
7.一种核酸分子，其包含编码权利要求1至6中任一项所述的抗体或其抗原结合片段中包含的重链CDR、轻链CDR、重链可变区、轻链可变区、重链或轻链的核苷酸序列。
8.一种载体，其包含权利要求7所述的核酸分子。
9.一种宿主细胞，其包含权利要求7所述的核酸分子和/或权利要求8所述的载体，或者所述宿主细胞被权利要求7所述的核酸分子和/或权利要求8所述的载体转化或转染。
10.一种组合物，其包含权利要求1至6中任一项所述的抗体或其抗原结合片段、权利要求7所述的核酸分子、权利要求8所述的载体或权利要求9所述的宿主细胞；
优选地，所述组合物为药物组合物，其可选地还包含药学上可接受的载体、辅料或赋形剂。
11.权利要求1至6中任一项所述的抗体或其抗原结合片段、权利要求7所述的核酸分子、权利要求8所述的载体、权利要求9所述的宿主细胞或权利要求10所述的组合物在制备药物中的用途，所述药物用于治疗由补体介导的疾病；
优选地，所述疾病为类风湿性关节炎、阵发性睡眠性血红蛋白尿(PNH)、非典型溶血性尿毒症综合征(aHUS)、重症肌无力、视神经性脊髓炎或黄斑变性例如年龄相关性黄斑变性。
12.一种试剂盒，所述试剂盒包括权利要求1至6中任一项所述的抗体或其抗原结合片段、权利要求7所述的核酸分子、权利要求8所述的载体、权利要求9所述的宿主细胞或者权利要求10所述的组合物。
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