CN113551957A - 生物组织切片封片液 - Google Patents
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Abstract
本发公开了一种生物组织切片封片液，包括溶质和溶剂，所述溶质包括松香甘油酯。其优点是：(1)与现有封片液相比，本发明的生物组织切片封片液不污染环境，对操作及使用者无健康危害，配制和使用方法简单，具有很高的经济和社会效益。(2)相比于现有快干封片剂以及采用松香制备的封片液，经本发明的封片液封固的生物组织切片在显微镜下观察组织细胞形态清晰度更高，并且切片的长期保存效果更好。凡是任何采用松香甘油酯作为溶质的封片液均属侵权。
Description
技术领域
本发明涉及一种生物组织切片制备技术，尤其是一种生物组织切片封片液。
背景技术
封片液又称封固剂，顾名思义，它既能使染色后的组织封固于载玻片和盖玻片之间，不使直接与空气接触，避免氧化褪色，以便于切片的长期保存和重复使用。另一方面使组织切片在封固剂的充实下，其折光率能和玻片的折光率相近，从而获得清晰的镜检效果。
制作切片时，通常是将生物组织进行处理后切片，将生物组织片裱在载玻片上进行染色等处理后，滴入封片液，再盖上盖玻片，即完成了生物组织切片的制作，将切片放在显微镜下对组织细胞进行阅片判读，完后将切片长期保存以备以后有需要时重阅。
传统的封片液是以中性树胶等原料与二甲苯配制而成，二甲苯对环境有污染，有害人体健康。八十年代，有学者提出可使用松香来配制封片液，而近年常用快干封片剂，但这两种封片液不管是在切片保存效果还是在镜检清晰度上都有所欠缺。
发明内容
为解决现有技术中存在的问题，提高生物组织切片的保存效果和镜检清晰度，本发明提供了一种生物组织切片封片液。
本发明所采用的技术方案是：生物组织切片封片液，包括溶质和溶剂，其特征在于：所述溶质包括松香甘油酯。
本领域技术人员能够理解，本发明的溶剂可以按照本领域的常识进行选择，只需要保证能够与松香甘油酯相溶，且具有不影响切片观察的透明度即可。例如优选的可以使用异构十六烷作为溶剂，除此之外也可以采用本领域常用的酒精、二甲苯等。
更佳的，当采用异构十六烷作为溶剂时，溶剂与所述松香甘油酯的质量之比为14～17:7。
本发明还公开了一种生物组织切片的制备方法，其特点是包括使用本发明的生物组织切片封片液进行封片的步骤。
本发明还公开了一种生物组织切片，其即是由本发明的生物组织切片的制备方法所制得。
本发明的有益效果是：(1)与现有封片液相比，本发明的生物组织切片封片液不污染环境，对操作及使用者无健康危害，配制和使用方法简单，具有很高的经济和社会效益。(2)相比于现有快干封片剂以及采用松香制备的封片液，经本发明的封片液封固的生物组织切片在显微镜下观察组织细胞形态清晰度更高，并且切片的长期保存效果更好。凡是任何采用松香甘油酯作为溶质的封片液均属侵权。
附图说明
图1是脑血管畸形组织H·E切片a显微组织形貌图(放大40×10倍)。
图2是脑血管畸形组织H·E切片b显微组织形貌图(放大40×10倍)。
图3是脑血管畸形组织H·E切片c显微组织形貌图(放大40×10倍)。
图4是上述脑血管畸形组织H·E切片a放置6个月后的显微组织形貌图(放大20×10倍)。
图5是上述脑血管畸形组织H·E切片b放置6个月后的显微组织形貌图(放大20×10倍)。
图6是上述脑血管畸形组织H·E切片c放置6个月后的显微组织形貌图(放大20×10倍)。
图7是肠肿瘤组织H·E切片放置两年后的显微组织形貌图(1)(放大40×10倍)
图8是肠肿瘤组织H·E切片放置两年后的显微组织形貌图(2)(放大40×10倍)
图9是肠肿瘤组织H·E切片放置两年后的显微组织形貌图(3)(放大20×10倍)
说明：图1、图2、图3是同一蜡块(组织)的3张切片，在同视野下的图像；图4、图5、图6分别对应于上述切片放置6个月后在不同视野下的图像。
说明：图7、图8、图9是同一张切片，在不同视野下的图像。
具体实施方式
下面结合实施例对本发明进一步说明。
实施例一：
按照如下方法制备生物组织切片封片液：
将溶剂异构十六烷与溶质松香甘油酯按照质量比15.7:7的比例混合均匀，即得封片液A。
实施例二：
将溶剂异构十六烷与溶质松香甘油酯按照质量比17.1:7的比例混合均匀，即得封片液B。
对比例一：
将溶剂异构十六烷与溶质松香按照质量比15.7:7的比例混合均匀，即得封片液C。
对比例二：
市售快干封片剂，标记为封片液D。
封片液A、封片液C、封片液D处理的脑血管畸形组织H·E切片在显微镜下观察组织细胞形态清晰度对比实验：
1、按照如下方法分别使用封片液A、封片液C、封片液D制作脑血管畸形组织H·E切片：
(1)组织取材与固定：大体固定12h，然后切取体积为2.0cm×2.0cm×0.3cm组织块；放至自动脱水机中用10％中性福尔马林固定3h；
(2)脱水：采用不同浓度的乙醇溶液逐步脱水，先用80％的乙醇脱水60min，然后用90％的乙醇脱水90min，再用95％乙醇脱水2次，每次90min，最后用100％乙醇脱水2次，每次60min；
(3)透明：在二甲苯中透明两缸，每缸30min；
(4)浸蜡与包埋：在58～60℃的石蜡中浸蜡三缸，第一缸30min，第二缸90min，第三缸60min；最后将组织样品常规包埋；
(5)切片：用切片机切片，切片厚度为3～5μm；
(6)脱蜡、水化：将组织切片依次放入两缸二甲苯中浸泡，每缸10min；再放入一个装有无水乙醇的玻璃缸中2min；再放入装有95％乙醇的玻璃缸中2min；再放入装有85％乙醇的玻璃缸中2min，取出，最后用蒸馏水清洗；
(7)苏木素-伊红染色：浸入苏木素溶液中染色分化3～7s后，用水反复洗涤至水不变色，再用1％盐酸酒精分化1～2s后，水冲洗，再用反蓝水洗2min；然后进入伊红染液30s后水洗；
(8)脱水与透明：依次放入80％、95％、95％乙醇溶液的玻璃缸中，每缸浸泡2min，取出；再依次放入2个装有无水乙醇的玻璃缸中，每缸浸泡2min，取出；再依次放入2个装有二甲苯的玻璃缸中，每缸浸泡2min，取出；
(9)封片：滴一滴封片液，取干净的盖玻片从封片液滴的一侧放下盖好，避免产生气泡；贴上标签，之后收入切片盒中。
按照上述方法分别使用封片液A、封片液C、封片液D制作脑血管畸形组织H·E切片a、脑血管畸形组织H·E切片b、脑血管畸形组织H·E切片c，将新制作好的切片置于同一光学显微镜下观察，结果分别见图1、图2、图3；并对图像进行感官评价，结果见表1。
将上述切片在室温下保存6个月后再次使用同一光学显微镜观察切片是否出现发黄、褪色、形成空洞、清晰度变差等影响切片保存效果的情况，结果见图4、图5、图6；并将切片保存情况感官评价记录于表1中。
封片液B处理的肠肿瘤组织H·E切片长期保存后在显微镜下观察组织细胞形态清晰度实验：
按照上述脑血管畸形组织H·E切片的制作方法制作肠肿瘤组织H·E切片，并将制作好的切片在室温下保存2年后使用同一光学显微镜在不同视野下观察切片是否出现发黄、褪色、形成空洞、清晰度变差等影响切片保存效果的情况，结果见图7、图8、图9；并将切片保存情况感官评价记录于表1中。
表1切片清晰度的感官评价及保存情况记录表
由图1～图3以及表1中的组织细胞形态清晰度感官评价对比可以看出，相比于采用松香制备的封片液或市售快干封片剂，经本发明的封片液封固的生物组织切片在显微镜下观察组织细胞形态清晰度更高(原图为彩色，更为清晰，区别更明显)。
由图4～图6，图7～图9，以及表1中的分别保存6个月、两年后的切片情况对比可以看出，相比于采用松香制备的封片液或市售快干封片剂，经本发明的封片液封固的生物组织切片的长期保存效果更好(原图为彩色，更为清晰，区别更明显)。
Claims (7)
1.生物组织切片封片液，包括溶质和溶剂，其特征在于：所述溶质包括松香甘油酯。
2.根据权利要求1所述的生物组织切片封片液，其特征在于：所述溶剂能够与松香甘油酯相溶。
3.根据权利要求1所述的生物组织切片封片液，其特征在于：所述溶剂为透明溶剂。
4.根据权利要求1所述的生物组织切片封片液，其特征在于：所述溶剂为异构十六烷。
5.根据权利要求4所述的生物组织切片封片液，其特征在于：所述溶剂与所述松香甘油酯的质量之比为14～17:7。
6.生物组织切片的制备方法，其特征在于：包括使用权利要求1～5中任一权利要求所述的生物组织切片封片液进行封片的步骤。
7.由权利要求6所述的生物组织切片的制备方法制得的生物组织切片。
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