CN113548981B - 三苯胺酚类化合物及其制备方法与其检测色氨酸的应用 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了三苯胺酚类化合物及其制备方法与其检测色氨酸的应用，其化学结构为
Figure DDA0003198083570000011
其中，R1为氢或烷基，R2为
Figure DDA0003198083570000012
或
Figure DDA0003198083570000013
R3为
Figure DDA0003198083570000014
或
Figure DDA0003198083570000015
R4为氢或烷基，R5为氢或烷基，R6为氢或烷基，R7为氢或烷基，本发明提供的三苯胺酚类化合物可以作为色氨酸专一性识别的荧光分子探针，对色氨酸的检测灵敏度高、抗干扰性强，可以用于色氨酸的痕量检测。

Description

三苯胺酚类化合物及其制备方法与其检测色氨酸的应用
技术领域
本发明荧光检测技术领域，涉及氨基酸的荧光检测，具体涉及三苯胺酚类 化合物及其制备方法与其检测色氨酸的应用。
背景技术
公开该背景技术部分的信息仅仅旨在增加对本发明的总体背景的理解，而 不必然被视为承认或以任何形式暗示该信息构成已经成为本领域一般技术人 员所公知的现有技术。
化学传感器是能够选择性地连接给定离子和生物分子物质的分子，当附着 时会感应出可测量的信号，主要是发色团或荧光团的光谱特性发生变化。受体 中离子和生物分子物种的受体在结合位点中，当该分子从客体分子侵袭到结合 位点主动脱位时，就会发生转变。发明人研究发现，尽管目前使用某些比较高 端仪器的分析方法(例如气相色谱法、凝胶许可色谱法)来检测这些含量较低 的生物分子，但它们仍存在一些缺点，例如耗时且昂贵等。而且目前，对色氨酸具有高选择性的人工合成的分子探针的报道还非常的不足，因此迫切需要廉 价且简单的检测这些生物分子。
发明内容
为了解决现有技术的不足，本发明的目的是提供三苯胺酚类化合物及其制 备方法与其检测色氨酸的应用，本发明提供的三苯胺酚类化合物可以作为色氨 酸专一性识别的荧光分子探针，对色氨酸的检测灵敏度高、抗干扰性强，可以 用于色氨酸的痕量检测。
为了实现上述目的，本发明的技术方案为：
一方面，一种三苯胺酚类化合物，其化学结构如下所示，
其中，R1为氢或烷基，R2为R3为 R4为氢或烷基，R5为氢或烷基，R6为氢或烷基，R7为氢或烷基。
另一方面，一种三苯胺酚类化合物的制备方法，以三(4-氨基苯基)胺和醛 类化合物为原料按照如下反应路线获得：
其中，R1为氢或烷基，R2为R3为 R4为氢或烷基，R5为氢或烷基，R6为氢或烷基，R7为氢或烷基。
第三方面，一种上述三苯胺酚类化合物在检测色氨酸中的应用。
第四方面，一种检测色氨酸的荧光试剂，包括荧光探针和载体，所述荧光 探针为上述三苯胺酚类化合物。
第五方面，一种色氨酸的检测方法，将上述三苯胺酚类化合物或检测色氨 酸的荧光试剂加入至含有色氨酸的待测溶液中获得检测溶液，对检测溶液进行 荧光检测。
本发明的有益效果为：
1.本发明提供的三苯胺酚类化合物与色氨酸混合后，荧光发射强度均有了 非常明显的提升，可以作为水中色氨酸的荧光探针。
2.本发明提供的三苯胺酚类化合物对色氨酸的选择性优于其他氨基酸，检 测限低至0.96bbs，能够实现对色氨酸的痕量检测。
3.本发明提供的三苯胺酚类化合物，仅需要采用三(4-氨基苯基)胺和2,3-二 羟基苯甲醛一步合成即可，反应原料易得，合成步骤简单，有利于降低对色氨 酸的检测成本。
附图说明
构成本发明的一部分的说明书附图用来提供对本发明的进一步理解，本发 明的示意性实施例及其说明用于解释本发明，并不构成对本发明的不当限定。
图1为本发明实施例制备的TNB的核磁氢谱图；
图2为本发明实施例制备的TNB的核磁碳谱图；
图3为本发明实施例制备的TCN的核磁氢谱图；
图4为本发明实施例制备的TCN的核磁碳谱图；
图5为本发明实施例制备的TNB(a)、TNN(b)与色氨酸反应后的紫外 吸收谱图；
图6为本发明实施例制备化合物的荧光发射性质的表征图，(a)为TNB的 荧光发射曲线，(b)为TNB的荧光柱状图，TNB+Trp的检测波长为353nm， TNB的检测波长为323nm，Trp的检测波长为330nm，TNB与其它氨基酸的混 合物的检测波长为330nm，(c)为TNN的荧光发射曲线；
图7为本发明实施例制备TNB与色氨酸反应后的稳定性表征图；
图8为本发明实施例中pH值对TNB检测色氨酸影响的表征图，(a)探针的 可恢复性表征图，(b)不同pH值下TNB和色氨酸反应物的荧光发射强度，激 发波长：275nm，检测波长为353nm；
图9为本发明实施例中TNB检测色氨酸的性能表征图，(a)探针TNB和色 氨酸(0～3当量)的紫外可见光谱，(b)探针TNB和色氨酸(0～3当量)的荧 光发射光谱，(c)色氨酸的TNB的检测限；
图10为本发明实施例中TNB检测色氨酸的抗干扰表征图，TNB+Other amino acid+Trp的检测波长为353nm；TNB+Other amino acid的检测波长为330 nm；
图11为本发明实施例中TNB检测色氨酸的机理研究的核磁谱图，(a)TNB、 TNB与色氨酸的1H NMR谱图，(b)TNN,TNN与色氨酸的1H NMR谱图；
图12为本发明实施例中TNB与色氨酸质子转移机理图。
具体实施方式
应该指出，以下详细说明都是示例性的，旨在对本发明提供进一步的说明。 除非另有指明，本文使用的所有技术和科学术语具有与本发明所属技术领域的 普通技术人员通常理解的相同含义。
需要注意的是，这里所使用的术语仅是为了描述具体实施方式，而非意图 限制根据本发明的示例性实施方式。如在这里所使用的，除非上下文另外明确 指出，否则单数形式也意图包括复数形式，此外，还应当理解的是，当在本说 明书中使用术语“包含”和/或“包括”时，其指明存在特征、步骤、操作、 器件、组件和/或它们的组合。
针对现有对于色氨酸具有高选择性的分子探针极少的问题，本发明提出了 三苯胺酚类化合物及其制备方法与其检测色氨酸的应用。
本发明的一种典型实施方式，提供了一种三苯胺酚类化合物，其化学结构 如下所示，
其中，R1为氢或烷基，R2为R3为 R4为氢或烷基，R5为氢或烷基，R6为氢或烷基，R7为氢或烷基。
R1为烷基时，其位置可以位于4位、5位或6位。
R4为烷基时，其位置可以位于2位、3位或4位。
R5为烷基时，其位置可以位于4位、5位或6位。
R6为烷基时，其位置可以位于2位、3位或4位。
R7为烷基时，其位置可以位于4位、5位或6位。
该实施方式的一些实施例中，所述烷基为C1-C6的烷基。例如甲基、乙基、 丙基、正丁基、异丁基、戊基、己基等。
该实施方式的一些实施例中，R1为氢。
该实施方式的一些实施例中，R2为
该实施方式的一些实施例中，R3为
该实施方式的一些实施例中，化合物结构式为
本发明的另一种实施方式，提供了一种三苯胺酚类化合物的制备方法，以 三(4-氨基苯基)胺和醛类化合物为原料按照如下反应路线获得：
其中，R1为氢或烷基，R2为R3为 R4为氢或烷基，R5为氢或烷基，R6为氢或烷基，R7为氢或烷基。
该实施方式的一些实施例中，三(4-氨基苯基)胺和醛类化合物进行席夫碱 反应获得。所述席夫碱反应是指伯胺与羰基进行缩合生成碳氮双键的反应。
在一种或多种实施例中，所述席夫碱反应的温度为30～40℃。该温度下， 能够保证反应效率较高，而且反应温度较低，有利于生产成本的降低。
该实施方式的一些实施例中，三(4-氨基苯基)胺和醛类化合物的摩尔比为 1:2.9～3.1。能够保证伯胺基与醛基的完全反应。
反应溶剂可以为甲醇、乙醇、四氢呋喃、三氯甲烷、二氯甲烷、二甲基亚 砜、N,N-二甲基甲酰胺等。该实施方式的一些实施例中，反应溶剂为甲醇。经 过研究表明产物三苯胺酚类化合物不溶于甲醇，而原料易溶于甲醇，因而采用 甲醇作为反应溶剂能够大大简化产物的纯化过程，进一步降低成本。
在一种或多种实施例中，纯化过程为：过滤、乙醚洗涤、干燥。
本发明的第三种实施方式，提供了一种上述三苯胺酚类化合物在检测色氨 酸中的应用。
本发明的第四种实施方式，提供了一种检测色氨酸的荧光试剂，包括荧光 探针和载体，所述荧光探针为上述三苯胺酚类化合物。
本发明所述的载体可以为溶剂，例如四氢呋喃、二甲基亚砜、N,N-二甲基 甲酰胺等，可以溶解所述三苯胺酚类化合物，同时能够与水互溶，从而能够使 所述三苯胺酚类化合物能够更均匀分散在待测水样中，从而对待测水样进行检 测。
本发明的第五种实施方式，提供了一种色氨酸的检测方法，将上述三苯胺 酚类化合物或检测色氨酸的荧光试剂加入至含有色氨酸的待测溶液中获得检 测溶液，对检测溶液进行荧光检测。
该实施方式的一些实施例中，检测溶液的pH为6～8。经过研究表明pH对于 该检测方法的荧光信号。当pH为6～8，尤其为6.9～7.1时，荧光信号更明显。
该实施方式的一些实施例中，检测波长为400～410nm。
为了使得本领域技术人员能够更加清楚地了解本发明的技术方案，以下将 结合具体的实施例详细说明本发明的技术方案。
实施例
(1)1,1,3-二环己基-5-(9-乙基-9H-咔唑-3-基)亚甲基)嘧啶-2,4,6-(1H,3H,5H)-三酮(TNB)的合成。
三(4-氨基苯基)胺5mmol使用电子分析天平称取，然后添加到含有甲醇(15 mL)的三口烧瓶中，再次使用电子分析天平称取2,3-二羟基苯甲醛15mmol放 入三口烧瓶中，将三口烧瓶放入低温恒温搅拌反应浴中搅拌，并在回流的状态 下加热至35℃，持续反应12小时然后，三口烧瓶取出后在室温下冷却直至出 现固体沉淀。使用循环水式真空泵进行减压过滤后得到TNB，将得到的TNB用 无水乙醚进行纯化处理，即可得到无杂质的TNB，在60℃的真空烘箱中于进 行干燥处理14小时。产率：98％。颜色：深红色。熔点；244℃。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ13.29(s,3H),9.17(s,3H),8.94(s,3H),7.44(d,J＝8.5Hz, 6H),7.15(d,J＝8.6Hz,6H),7.10–7.05(m,3H),6.95–6.90(m,3H),6.78(t,J＝ 7.8Hz,3H)，核磁谱图如图1～2所示。
(2)(Z)-N1-亚苄基-N4,N4-双(4-(Z)-亚苄基氨基)苯基)苯-1,4-二胺(TNN) 的合成。
称取苯甲醛(5mmol)加至添加到含有甲醇(15mL)的三口烧瓶中，然 后称取2,3-二羟基苯甲醛15mmol，放入三口烧瓶内使混合溶液中的溶质能进行 缩合反应。在低温恒温搅拌反应浴中搅拌控制温度在40℃，持续搅拌12小时得 到粗产物TNN，将粗产物TNN在室温下冷却直至有固体出现沉淀，循环水式真 空泵进行减压过滤得到无杂质的TNN，将TNN进一步的纯化在无水乙醚溶剂中， 即可得到无杂质的TNN。将TNN放入50℃真空烘箱中进行干燥处理。产率：98％。 颜色：黄色。熔点；226℃。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.68(s,3H),7.93(dd,J＝6.5,2.9Hz,6H),7.56–7.49(m,9H),7.32(d,J＝8.3Hz,6H),7.11(d,J＝8.3 Hz,6H)，核磁谱图如图3～4所示。
TNB与TNN的性能检测如下。
1.溶解性
选取7种常见溶剂(四氢呋喃、氯仿、二氯甲烷、N,N-二甲基甲酰胺、二 甲基亚砜、四氯甲烷、水)对TNB与TNN的溶解性能进行试验，通过肉眼观察 在25℃溶剂中的溶解速度。称取相同质量的两种化合物分别加入相同体积的7 种溶剂中，迅速溶解则为易溶表示，没有全部溶解为可溶，通过超声、加热等手段仍不能溶解则为难溶。研究结果如表1所示。
表1 TNB与TNN在常见溶剂中溶解性对比(25℃)
可以看到，两种化合物在7种溶剂中都能溶解，但是相比之下，TNN化合 物的溶解性比TNB差，这是由于化合物TNN不含有氢键的原因，根据相似相溶 原理TNN溶解性稍微差一点。
2.光学性质
2.1紫外-可见吸收性质
先分别配置1×10-5mol/L的TNB、TNN两种化合物的四氢呋喃溶液和1×10-3mol/L色氨酸的去离子水溶液，待其充分溶解之后，取500μL的色氨酸的去离子水溶液加入到TNB、TNN两种化合物的5mL容量瓶中，之后将溶液定容到5 mL，利用仪器反复的震荡溶液使其充分混合均匀，得到两种化合物与色氨酸 的荧光物质溶液。然后将配好的溶液放在紫外分光光度计下测量，结果如图5 所示。
图5(a)是关于TNB的三种吸收光谱。吸收波长为405nm和275nm的 峰分别为分子内电荷转移(ICT)峰和苯的π-π*跃迁峰，405nm谱带处有小的 肩峰。当向TNB中添加色氨酸时，405nm和275nm的峰的位置基本不变， 但TNB在405nm谱带的小的肩峰消失，峰形变得光滑。当TNB与色氨酸混 合一个小时后，则出现了新峰，这是因为TNB和色氨酸也发生了反应使色氨 酸的吸收峰得以出现。
图5(b)是关于TNN的三种吸收光谱。通过图5(b)可以看出，TNN以及 TNN与色氨酸的混合物的吸收光谱，以及将混合物放置一小时后的吸收光谱都 基本上没有变化，这说明TNN与色氨酸两者之间没有发生化学反应。通过对比 可以表明，图5(a)中产生的新吸收峰是因为色氨酸羟基与TNB上的羟基发生 了反应并形成了新的化学键，以及色氨酸上的杂环与TNB苯环发生了π-π共轭 效应。
2.2荧光发射性质
如图6(a)、(b)所示，在THF和水的混合溶液中与不同氨基酸(丙氨酸(Ala)、 亮氨酸(Leu)、异亮氨酸(Ile)、苯丙氨酸(Phe)、色氨酸(Trp)、蛋氨 酸(Met)、甘氨酸(Gly)、丝氨酸(Ser)、精氨酸(Arg)、组氨酸(His)、苏氨酸(Thr)、半胱氨酸(Cys)、天冬氨酸(Asp)、谷氨酸(Glu))的荧 光发射光谱，混合的TNB的荧光发射强度光谱。当TNB与色氨酸混合后，与其它氨基酸相比，荧光发射强度立即增加，而其它氨基酸的荧光强度几乎不变。 因此，TNB对色氨酸具有独特的选择性，并且可以简单快速地检测色氨酸。如 图6(c)所示，在THF和水的混合溶液中，TNN和色氨酸的荧光发射强度出现了 微弱的增加，引起发射强度增加的原因，可能是色氨酸自身的荧光发射强度。由于TNB与TNN的区别在于是否存在羟基，TNN的荧光发射光谱反映出，酚羟 基有可能是TNB与色氨酸混合后荧光发射强度增加的主要原因。具体原因可能 是，随着色氨酸的加入，TNB在405nm处的荧光发射强度迅速增加，TNB具有 柔性构造可以形成具有互补形状的腔，该腔可以通过酚羟基与氨基的质子转移 选择性地容纳色氨酸，以及经过π-π堆积形成主体-客体复合物使两种主客体的 自由旋转受到了限制，从而造成了荧光发射强度大幅度增强的现象。
2.3TNB加Trp的荧光稳定性检测
对TNB的THF-H2O溶液(体积比99:1)进行连续激发1800s，测其荧光强度随 激发时间的变化，结果如图7所示。从实验结果中发现荧光发射强度一直处于 一个相对较高的位置，而且随着时间的推移荧光发射强度的稳定性也非常的好， 最关键的是荧光发射强度在30分钟内仅仅下降了3％，完全可以满足对Trp的检 测。引起这种现象的原因是柔性的TNB分子具有多个酚羟基，因此主客体分子 间可以发生质子转移，同时也可以选择性地容纳Trp从而形成稳定的主体-客体 复合物，这才会使得TNB的荧光特别稳定，因此根据TNB的特异性和稳定性， TNB完全符合检测作为Trp的优秀传感器。
2.4pH值对TNB检测色氨酸的影响
利用浓盐酸溶液和氢氧化钠固体与去离子水配制pH＝1～14的TNB与色氨 酸混合溶液，使用荧光光谱仪测量每个pH值下的荧光发射强度。如图8(a)所 示，在pH＝7的中性条件下，TNB和色氨酸反应物在405nm处具有明显的荧光 发射。而在探针分子TNB和色氨酸的相互反应后的混合物中加入NaOH溶液， 结果发现TNB与色氨酸混合后的溶液的荧光发射强度峰几乎完全消失。但是， 当添加盐酸溶液来中和混合物的中的氢氧根后TNB和色氨酸的混合溶液的荧 光发射强度又有了非常明显的增强，原因可能是碱性条件下不利于TNB与色氨 酸的反应，而酸碱中和以后，探针TNB和色氨酸恢复反应。图8(b)显示了在不同pH值的环境下TNB和色氨酸混合后的荧光发射强度，由图可知，在强酸和 强碱的条件下，都不利于TNB与色氨酸的反应。只有在中性条件下探针TNB与色氨酸混合后的荧光发射强度才能达到最大值，因此在应用中虽然需要考虑的 因素很多，但是首先要注意检测环境的pH值应该为中性。
2.5TNB检测色氨酸的性能
先分别配置1×10-5mol/L的TNB化合物的四氢呋喃溶液和2g/L的色氨酸的 去离子水溶液，待其充分溶解之后，分别取50μL的化合物的水溶液加入到事 先准备的20个5mL的容量瓶中，然后向每个瓶中分别加入以300μL为梯度的 0～6000μL的2g/L的色氨酸水溶液。之后将溶液定容到5mL，利用仪器反复的 震荡溶液使其充分混合均匀，得到1×10-7mol/L的荧光物质溶液。然后将配好 的溶液放在紫外分光光度计下测量，测试的条件为：激发波长275nm、激发和 发射狭缝为2.5nm、5nm。如图9(a)所示，通过UV滴定实验检测TNB和色氨 酸反应的摩尔浓度比，发现当色氨酸在3当量(3×10-5mol/L)左右时，UV吸收 峰几乎不发生任何变化。原因可能是因为，探针TNB为每个分支都相同的三支 结构，因此需要三当量的色氨酸才能完全反应。如图9(b)所示，在加入3当量的色氨酸后，荧光发射强度达到了最大值，而在继续增加色氨酸的摩尔量时， 荧光强度几乎没有任何变化，又证明了两者之间完全反应的摩尔量之比为1:3。 在荧光最佳条件下，通过荧光发射强度的改变来研究TNB对各种不同浓度的色 氨酸(0-3×10-5M)的分析能力，从图9(b)中可以看出，探针TNB在340nm 处显示出较弱的荧光发射强度，几乎没有荧光，当加入色氨酸后，荧光发射强 度随着色氨酸浓度的增加而逐渐增加，荧光的恢复效率为[(F-F0)/F0](其中 F0和F分别代表在不存在和存在色氨酸分析物的情况下TNB的荧光强度)与色 氨酸浓度在此范围内具有良好的线性关系0-3×10-5M(图9(c))。通过计算 可以得到用于色氨酸检测的线性回归方程为Y＝10.67X+1.2258，由R2的数值 可以知道该线性方程具有极好的线性相关性(R2＝0.9988)，其中Y代表TNB 的荧光恢复效率，X代表色氨酸的浓度。由线性方程可知该探针足够灵敏，可 以检测到具有检测限(LOD)的生理色氨酸浓度(0～3×10-5mol/L)(S/N＝3， 生成的净信号所需的浓度等于背景标准偏差的三倍)在实验条件下检测限为 0.96bbs。
利用荧光光谱仪探究了探针TNB在其它氨基酸(色氨酸、亮氨酸、丙氨酸、 异亮氨酸、苯丙氨酸、蛋氨酸、甘氨酸、色氨酸、精氨酸、组氨酸、丝氨酸、 苏氨酸、半胱氨酸、谷氨酸、天冬氨酸)(3.0当量)存在下是否能对Trp的检 测产生干扰。如图10所示TNB溶液加入不同氨基酸后荧光强度几乎不发生变化，当Trp加入到TNB和其它氨基酸的混合溶液中后，荧光强度有了非常大的增强。 这种现象的出现可以表明，探针TNB对识别色氨酸具有高度专一的选择性，并 不受其它氨基酸的影响具有非常优异的抗干扰能力。
2.6TNB检测色氨酸的机理研究
使用DMSO-d6作为溶剂来制备TNB溶液、TNB和色氨酸混合溶液(TNB溶 液与3当量的色氨酸去离子水溶液混合后，在35℃的真空环境中反应二十四小时，然后再提高真空干燥箱的温度至60℃，将溶液中微量的水蒸发出来，得到 无水分的TNB与色氨酸混合溶液进行检测)，测试它们的核磁共振谱，见图11 (a)。如图11(a)所示，TNB溶液在化学位移δ＝9.0附近有两个羟基峰，而 另一个特征峰是在δ＝13.5处的亚甲基峰。观察TNB与色氨酸的混合溶液的核 磁谱图，可以发现化学位移δ＝9.0附近的羟基峰消失，这可能是探针TNB的酸 性酚羟基与色氨酸的碱性氨基基团发生了质子转移反应，使酚羟基失去氢质子 变成带负电，色氨酸氨基得到氢质子发生转移带正电荷，见图12。亚甲基质子 由于其靠近加合物负电荷(酚氧负离子)的位置而向高场移动(δ＝11)，由 于给电子-N＝CH的存在使去质子化的化合物TNB与色氨酸形成稳定的主客体 络合物。这一质子转移机理在文献中也有报道。此外，在δ＝2.50～3.50处出现 的几个新峰为色氨酸的特征峰。因为色氨酸在DMSO中不溶解，这些色氨酸特征峰的出现，说明色氨酸与TNB发生了反应，生成了可溶于DMSO的产物。
为了证明色氨酸与TNB的酚羟基发生反应，设计合成了一种不含有酚羟基 且与TNB的结构类似的化合物TNN，向TNN的DMSO溶液中加入3当量的色氨酸，在35℃的真空环境中反应二十四小时，然后再提高真空干燥箱的温度至60 ℃，将溶液中微量的水蒸发出来，得到不含水分的TNN与色氨酸混合溶液，过 滤去除不溶物，测其1H NMR谱，与TNN的DMSO溶液的1H NMR谱进行对比， 如图11(b)所示。可以看出，加入色氨酸后的TNN溶液与未加入色氨酸的TNN 溶液的核磁谱几乎完全相同。这说明TNN与色氨酸没有发生反应，游离的色氨酸因不溶于DMSO而被过滤除去，因此，最终这两种溶液实际上均为TNN的 DMSO溶液，所以它们具有相同的核磁谱。这一现象证实了TNB中的酚羟基在与色氨酸的反应中起到了至关重要的作用。
总结
TNB与色氨酸混合后，荧光发射强度均有了非常明显的提升。因为色氨酸 和TNB的羟基触发的主客体结合堆积将荧光强度提高了5倍，从而将弱荧光的 TNB转变为高荧光的主客体复合物。TNB对色氨酸的选择性优于其他氨基酸，检测限低至0.96bbs，完全满足于痕量的检测，而且配体中非共价相互作用的 存在对用于选择性检测色氨酸的微环境非常敏感。
以上所述仅为本发明的优选实施例而已，并不用于限制本发明，对于本领 域的技术人员来说，本发明可以有各种更改和变化。凡在本发明的精神和原则 之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之 内。

Claims (5)

1.一种三苯胺酚类化合物在检测色氨酸中的应用，其特征是，三苯胺酚类化合物化学结构如下所示，
。
2.一种检测色氨酸的荧光试剂，其特征是，包括荧光探针和载体，所述荧光探针为三苯胺酚类化合物，所述三苯胺酚类化合物结构如下所示：
。
3.如权利要求2所述的检测色氨酸的荧光试剂，其特征是，所述的载体为溶剂。
4.一种色氨酸的检测方法，其特征是，将权利要求1所述的三苯胺酚类化合物或权利要求2所述的检测色氨酸的荧光试剂加入至含有色氨酸的待测溶液中获得检测溶液，对检测溶液进行荧光检测。
5.如权利要求4所述的色氨酸的检测方法，其特征是，检测溶液的pH为6~8；
或，检测波长为400~410 nm。
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