CN113544152A

CN113544152A - Flt3激动剂抗体及其用途

Info

Publication number: CN113544152A
Application number: CN201980083493.0A
Authority: CN
Inventors: A·耶塔; P·戈贝尔; M·拜尔施密特; D·玛泽尔; J·弗朗森
Original assignee: Boehringer Ingelheim Canada Ltd
Current assignee: Boehringer Ingelheim Canada Ltd
Priority date: 2018-12-18
Filing date: 2019-12-17
Publication date: 2021-10-22
Also published as: JP2022513961A; WO2020128638A1; MA54614A; EP3902836A1; MX2021007339A; BR112021010948A2; PE20211474A1; KR20210111785A; DOP2021000114A; ECSP21044672A; SG11202104352XA; US20220025055A1; CO2021007689A2; EA202191650A1; CL2021001312A1; IL283922A; JOP20210151A1; WO2020128638A8; AU2019404098A1; EP3902836A4

Abstract

本文描述了抗FLT3激动性抗体。此类激动性抗体可用于树突状细胞的扩增和癌症的治疗。

Description

FLT3激动剂抗体及其用途

相关申请的交叉引用

本申请要求于2018年12月18日提交的美国临时专利申请号62/781,213的权益，将所述临时专利申请的全部通过引用以其整体并入本文。

背景技术

FMS样酪氨酸激酶3(FLT3)(又称为CD135)是一种在造血干细胞、成熟树突状细胞(DC)和DC祖细胞上表达的III类受体酪氨酸激酶。经由其配体FLT3配体(FTL3L)进行的FLT3信号传导导致这些细胞的扩增和分化。这种受体的突变使细胞增殖与配体信号传导脱离，并且与病理赘生物、特别是急性髓性白血病(AML)相关。相反，经由外源可溶性FLT3L治疗对FLT3的激动目前处于实体瘤疗法的临床研究中，其中其DC扩增特性充当肽疫苗接种疗法的佐剂，并且与免疫肿瘤和放射疗法组合增强抗肿瘤免疫应答。然而，FLT3L疗法具有有限的药代动力学利用度和复杂的给药要求。

发明内容

本文描述了FLT3激动剂抗体的开发，所述FLT3激动剂抗体诱导DC及其祖细胞的扩增和分化，从而改善肿瘤抗原呈递，同时克服配体的有限生物利用度。这些抗体在治疗癌症的方法中是有用的。

本文所述的一方面包括一种结合FMS样酪氨酸激酶3(FLT3)的重组抗体或所述重组抗体的抗原结合片段，其中所述重组抗体或所述重组抗体的抗原结合片段包含：可变区重链互补决定区1(VH-CDR1)，其包含SEQ ID NO:1(GFTFSNY)、2(NYGMA)或29(GFTFSNYGMA)中所示的氨基酸序列；可变区重链互补决定区2(VH-CDR2)，其包含SEQ ID NO:3(HSGGGD)或4(SIHSGGGDTYYRDSVKG)中所示的氨基酸序列；可变区重链互补决定区3(VH-CDR3)，其包含SEQ ID NO:5(GRTPTGYYFDH)中所示的氨基酸序列；可变区轻链互补决定区1(VL-CDR1)，其包含SEQ ID NO:6至10(RASEGIHXGLA)中任一个中所示的氨基酸序列；可变区轻链互补决定区2(VL-CDR2)，其包含SEQ ID NO:10(NANSLHS)中所示的氨基酸序列；以及可变区轻链互补决定区3(VL-CDR3)，其包含SEQ ID NO:11(QQYYDYPLT)中任一个中所示的氨基酸序列；其中X是任何氨基酸残基。在一些实施方案中，所述VL-CDR1包含选自以下的氨基酸序列：SEQ IDNO:7(RASEGIHDGLA)；SEQ ID NO:8(RASEGIHSGLA)；SEQ ID NO:9(RASEGIHTGLA)；和SEQ IDNO:10(RASEGIHLGLA)。在一些实施方案中，所述VL-CDR1包含SEQ ID NO:8(RASEGIHSGLA)中所示的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述重组抗体或所述重组抗体的抗原结合片段包含：免疫球蛋白重链可变区(VH)序列，其包含与SEQ ID NO:15、17、19、21和23中任一个中所示的氨基酸序列至少约90％、95％、97％、98％或99％、或100％相同的氨基酸序列；和免疫球蛋白轻链可变区(VL)序列，其包含与SEQ ID NO:16、18、20、22、24、25、26、27和28中任一个中所示的氨基酸序列至少约90％、95％、97％、98％或99％、或100％相同的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述免疫球蛋白重链可变区(VH)包含与SEQ ID NO:15中所示的氨基酸序列至少约90％、95％、97％、98％或99％、或100％相同的氨基酸序列；并且所述免疫球蛋白轻链可变区(VL)包含与SEQ ID NO:16中所示的氨基酸序列至少约90％、95％、97％、98％或99％、或100％相同的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述免疫球蛋白重链可变区(VH)包含与SEQ ID NO:15中所示的氨基酸序列至少约90％、95％、97％、98％或99％、或100％相同的氨基酸序列；并且所述免疫球蛋白轻链可变区(VL)包含与SEQ ID NO:26中所示的氨基酸序列至少约90％、95％、97％、98％或99％、或100％相同的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述重组抗体或所述重组抗体的抗原结合片段是嵌合的或人源化的。在一些实施方案中，所述重组抗体或所述重组抗体的抗原结合片段是IgG抗体。在一些实施方案中，所述重组抗体或所述重组抗体的抗原结合片段包含一个或多个突变以降低所述重组抗体或所述重组抗体的抗原结合片段的一种或多种效应子功能。在一些实施方案中，所述重组抗体或所述重组抗体的抗原结合片段的重链恒定区包含IGg4重链恒定区，其包含选自以下的以下氨基酸修饰或修饰组中的任一个：根据EU编号系统的IgG4修饰的N434A、N434H、T307A/E380A/N434A、M252Y/S254T/T256E、433K/434F/436H、T250Q、T250F、M428L、M428F、T250Q/M428L、N434S、V308W、V308Y、V308F、M252Y/M428L、D259I/V308F、M428L/V308F、Q311V/N434S、T307Q/N434A、E258F/V427T、S228P、L235E、S228P/L235E/R409K、S228P/L235E、K370Q、K370E、G446缺失、K447缺失及其任何组合。在一些实施方案中，所述重组抗体或所述重组抗体的抗原结合片段包括Fab、F(ab)2、单结构域抗体或单链可变片段(scFv)。在一些实施方案中，所述重组抗体或所述重组抗体的抗原结合片段在与人外周血单核细胞和/或骨髓来源的细胞接触时增加树突状细胞或血液树突状细胞前体的量。在一些实施方案中，树突状细胞或血液树突状细胞前体的量增加的EC50小于约200皮摩尔(pM)。在一些实施方案中，所述重组抗体或所述重组抗体的抗原结合片段增加表达FLT3的细胞系中的STAT5表达。在一些实施方案中，表达FLT3的所述细胞系中STAT5表达增加的EC50等于或小于由人FLT3配体诱导的表达FLT3的细胞系中STAT5表达增加的EC50。在一些实施方案中，所述重组抗体或所述重组抗体的抗原结合片段包含免疫调节部分。在一些实施方案中，所述免疫调节部分是干扰素基因刺激蛋白(STING)激动剂。在一些实施方案中，本文描述了一种药物组合物，其包含本文所述的重组抗体或所述重组抗体的抗原结合片段以及药学上可接受的赋形剂、载体或稀释剂。在一些实施方案中，所述药物组合物被配制用于静脉内施用。在一些实施方案中，所述药物组合物被配制用于皮下施用。在一些实施方案中，所述药物组合物被配制用于瘤内施用。在一些实施方案中，本文所述的重组抗体或所述重组抗体的抗原结合片段或本文所述的药物组合物用于在治疗癌症中使用。在一些实施方案中，所述癌症包括胶质母细胞瘤、胰腺癌、乳腺癌、膀胱癌、肾癌、头颈癌、卵巢癌、结肠癌、宫颈癌、前列腺癌或肺癌。在一些实施方案中，本文所述的重组抗体或所述重组抗体的抗原结合片段或本文所述的药物组合物用于在治疗被诊断患有或怀疑患有癌症的个体的癌症中使用。在一些实施方案中，所述癌症包括胶质母细胞瘤、胰腺癌、乳腺癌、膀胱癌、肾癌、头颈癌、卵巢癌、结肠癌、宫颈癌、前列腺癌或肺癌。在一些实施方案中，本文所述的重组抗体或所述重组抗体的抗原结合片段或本文所述的药物组合物用于在扩增或分化树突状细胞或血液树突状细胞前体群体中使用。在一些实施方案中，本文描述了一种在个体中扩增或分化树突状细胞或血液树突状细胞前体群体的方法，其包括将本文所述的重组抗体或所述重组抗体的抗原结合片段或本文所述的药物组合物施用至被诊断患有或怀疑患有癌症的个体。在一些实施方案中，所述树突状细胞或血液树突状细胞前体包括常规树突状细胞亚群cDC1、常规树突状细胞亚群cDC2、浆细胞样树突状细胞或其任何组合。在一些实施方案中，本文描述了一种在患有肿瘤或癌症的个体中将树突状细胞或血液树突状细胞前体募集和/或扩增至肿瘤微环境的方法，其包括将有效量的本文所述的重组抗体或所述重组抗体的抗原结合片段或本文所述的药物组合物施用至患有所述肿瘤或癌症的所述个体。在一些实施方案中，所述树突状细胞或血液树突状细胞前体包括常规树突状细胞亚群cDC1、常规树突状细胞亚群cDC2、浆细胞样树突状细胞或其任何组合。在一些实施方案中，本文描述了一种核酸，其编码本文所述的重组抗体或所述重组抗体的抗原结合片段。在一些实施方案中，本文描述了一种细胞，其包含本文所述的核酸。在一些实施方案中，所述细胞是真核细胞。在一些实施方案中，所述细胞是中国仓鼠卵巢(CHO)细胞。在一些实施方案中，本文描述了一种制备癌症治疗剂的方法，其包括在培养基中在足以将本文所述的重组抗体或所述重组抗体的抗原结合片段分泌到所述培养基中的条件下孵育本文所述的细胞。在一些实施方案中，制备癌症治疗剂的所述方法还包括使所述培养基经受至少一个纯化步骤。在一些实施方案中，本文描述了一种制备癌症治疗剂的方法，其包括将本文所述的重组抗体或所述重组抗体的抗原结合片段与药学上可接受的赋形剂、载体或稀释剂混合。在一些实施方案中，本文描述了本文所述的重组抗体或所述重组抗体的抗原结合片段或本文所述的药物组合物在治疗癌症中的用途。在一些实施方案中，所述癌症包括胶质母细胞瘤、胰腺癌、乳腺癌、膀胱癌、肾癌、头颈癌、卵巢癌、结肠癌、宫颈癌、前列腺癌或肺癌。在一些实施方案中，本文描述了本文所述的重组抗体或所述重组抗体的抗原结合片段或本文所述的药物组合物在治疗被诊断患有或怀疑患有癌症的个体的所述癌症中的用途。在一些实施方案中，所述癌症包括胶质母细胞瘤、胰腺癌、乳腺癌、膀胱癌、肾癌、头颈癌、卵巢癌、结肠癌、宫颈癌、前列腺癌或肺癌。在一些实施方案中，本文描述了本文所述的重组抗体或所述重组抗体的抗原结合片段或本文所述的药物组合物在扩增或分化树突状细胞或血液树突状细胞前体群体中的用途。在一些实施方案中，本文描述了本文所述的重组抗体或所述重组抗体的抗原结合片段或本文所述的药物组合物在个体中扩增或分化树突状细胞或血液树突状细胞前体群体中的用途。在一些实施方案中，所述树突状细胞或血液树突状细胞前体包括常规树突状细胞亚群cDC1、常规树突状细胞亚群cDC2、浆细胞样树突状细胞或其任何组合。在一些实施方案中，本文描述了本文所述的重组抗体或所述重组抗体的抗原结合片段或本文所述的药物组合物在个体中将树突状细胞或血液树突状细胞前体募集至肿瘤微环境中的用途。在一些实施方案中，所述树突状细胞或血液树突状细胞前体包括常规树突状细胞亚群cDC1、常规树突状细胞亚群cDC2、浆细胞样树突状细胞或其任何组合。在一些实施方案中，本文描述了本文所述的重组抗体或所述重组抗体的抗原结合片段和药学上可接受的赋形剂、载体或稀释剂在制造用于治疗癌症的药物中的用途。在一些实施方案中，本文描述了本文所述的重组抗体或所述重组抗体的抗原结合片段或本文所述的药物组合物在制造用于治疗癌症的药物中的用途。在一些实施方案中，所述癌症包括胶质母细胞瘤、胰腺癌、乳腺癌、膀胱癌、肾癌、头颈癌、卵巢癌、结肠癌、宫颈癌、前列腺癌或肺癌。在一些实施方案中，本文描述了本文所述的重组抗体或所述重组抗体的抗原结合片段或本文所述的药物组合物在制造用于治疗被诊断患有或怀疑患有癌症的个体的药物中的用途。在一些实施方案中，所述癌症包括胶质母细胞瘤、胰腺癌、乳腺癌、膀胱癌、肾癌、头颈癌、卵巢癌、结肠癌、宫颈癌、前列腺癌或肺癌。在一些实施方案中，本文描述了本文所述的重组抗体或所述重组抗体的抗原结合片段或本文所述的药物组合物在制造用于扩增或分化树突状细胞或血液树突状细胞前体群体的药物中的用途。在一些实施方案中，本文描述了本文所述的重组抗体或所述重组抗体的抗原结合片段或本文所述的药物组合物在制造用于在被诊断患有或怀疑患有癌症的个体中扩增或分化树突状细胞或血液树突状细胞前体群体的药物中的用途。在一些实施方案中，所述树突状细胞或血液树突状细胞前体包括常规树突状细胞亚群cDC1、常规树突状细胞亚群cDC2、浆细胞样树突状细胞或其任何组合。在一些实施方案中，本文描述了本文所述的重组抗体或所述重组抗体的抗原结合片段或本文所述的药物组合物在制造用于在被诊断患有或怀疑患有癌症的个体中将树突状细胞或血液树突状细胞前体募集至肿瘤微环境的药物中的用途。在一些实施方案中，所述树突状细胞或血液树突状细胞前体包括常规树突状细胞亚群cDC1、常规树突状细胞亚群cDC2、浆细胞样树突状细胞或其任何组合。

本文所述的另一方面包括一种结合FMS样酪氨酸激酶3(FLT3)的重组抗体或所述重组抗体的抗原结合片段，其中所述重组抗体或所述重组抗体的抗原结合片段包含以下中的任一个：可变区重链互补决定区1(VH-CDR1)，其包含SEQ ID NO:1(GFTFSNY)、2(NYGMA)或29(GFTFSNYGMA)中所示的氨基酸序列；可变区重链互补决定区2(VH-CDR2)，其包含SEQ IDNO:3(HSGGGD)或4(SIHSGGGDTYYRDSVKG)中所示的氨基酸序列；可变区重链互补决定区3(VH-CDR3)，其包含SEQ ID NO:5(GRTPTGYYFDH)中所示的氨基酸序列；可变区轻链互补决定区1(VL-CDR1)，其包含SEQ ID NO:6至10(RASEGIHXGLA)中任一个中所示的氨基酸序列；可变区轻链互补决定区2(VL-CDR2)，其包含SEQ ID NO:10(NANSLHS)中所示的氨基酸序列；或可变区轻链互补决定区3(VL-CDR3)，其包含SEQ ID NO:11(QQYYDYPLT)中任一个中所示的氨基酸序列；其中X是任何氨基酸残基。在一些实施方案中，所述VL-CDR1包含选自以下的氨基酸序列：SEQ ID NO:7(RASEGIHDGLA)；SEQ ID NO:8(RASEGIHSGLA)；SEQ ID NO:9(RASEGIHTGLA)；和SEQ ID NO:10(RASEGIHLGLA)。在一些实施方案中，所述VL-CDR1包含SEQID NO:8(RASEGIHSGLA)中所示的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述重组抗体或所述重组抗体的抗原结合片段包含：免疫球蛋白重链可变区(VH)序列，其包含与SEQ ID NO:15、17、19、21和23中任一个中所示的氨基酸序列至少约90％、95％、97％、98％或99％、或100％相同的氨基酸序列；和免疫球蛋白轻链可变区(VL)序列，其包含与SEQ ID NO:16、18、20、22、24、25、26、27和28中任一个中所示的氨基酸序列至少约90％、95％、97％、98％或99％、或100％相同的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述免疫球蛋白重链可变区(VH)包含与SEQ ID NO:15中所示的氨基酸序列至少约90％、95％、97％、98％或99％、或100％相同的氨基酸序列；并且所述免疫球蛋白轻链可变区(VL)包含与SEQ ID NO:16中所示的氨基酸序列至少约90％、95％、97％、98％或99％、或100％相同的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述免疫球蛋白重链可变区(VH)包含与SEQ ID NO:15中所示的氨基酸序列至少约90％、95％、97％、98％或99％、或100％相同的氨基酸序列；并且所述免疫球蛋白轻链可变区(VL)包含与SEQ ID NO:26中所示的氨基酸序列至少约90％、95％、97％、98％或99％、或100％相同的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述重组抗体或所述重组抗体的抗原结合片段是嵌合的或人源化的。在一些实施方案中，所述重组抗体或所述重组抗体的抗原结合片段是IgG抗体。在一些实施方案中，所述重组抗体或所述重组抗体的抗原结合片段包含一个或多个突变以降低所述重组抗体或所述重组抗体的抗原结合片段的一种或多种效应子功能。在一些实施方案中，所述重组抗体或所述重组抗体的抗原结合片段的重链恒定区包含IGg4重链恒定区，其包含选自以下的以下氨基酸修饰或修饰组中的任一个：根据EU编号系统的IgG4修饰的N434A、N434H、T307A/E380A/N434A、M252Y/S254T/T256E、433K/434F/436H、T250Q、T250F、M428L、M428F、T250Q/M428L、N434S、V308W、V308Y、V308F、M252Y/M428L、D259I/V308F、M428L/V308F、Q311V/N434S、T307Q/N434A、E258F/V427T、S228P、L235E、S228P/L235E/R409K、S228P/L235E、K370Q、K370E、G446缺失、K447缺失及其任何组合。在一些实施方案中，所述重组抗体或所述重组抗体的抗原结合片段包括Fab、F(ab)2、单结构域抗体或单链可变片段(scFv)。在一些实施方案中，所述重组抗体或所述重组抗体的抗原结合片段在与人外周血单核细胞和/或骨髓来源的细胞接触时增加树突状细胞或血液树突状细胞前体的量。在一些实施方案中，树突状细胞或血液树突状细胞前体的量增加的EC50小于约200皮摩尔(pM)。在一些实施方案中，所述重组抗体或所述重组抗体的抗原结合片段增加表达FLT3的细胞系中的STAT5表达。在一些实施方案中，表达FLT3的所述细胞系中STAT5表达增加的EC50小于由人FLT3配体诱导的表达FLT3的细胞系中STAT5表达增加的EC50。在一些实施方案中，所述重组抗体或所述重组抗体的抗原结合片段包含免疫调节部分。在一些实施方案中，所述免疫调节部分是干扰素基因刺激蛋白(STING)激动剂。在一些实施方案中，本文描述了一种药物组合物，其包含本文所述的重组抗体或所述重组抗体的抗原结合片段以及药学上可接受的赋形剂、载体或稀释剂。在一些实施方案中，所述药物组合物被配制用于静脉内施用。在一些实施方案中，所述药物组合物被配制用于皮下施用。在一些实施方案中，所述药物组合物被配制用于瘤内施用。在一些实施方案中，本文所述的重组抗体或所述重组抗体的抗原结合片段或本文所述的药物组合物用于在治疗癌症中使用。在一些实施方案中，所述癌症包括胶质母细胞瘤、胰腺癌、乳腺癌、膀胱癌、肾癌、头颈癌、卵巢癌、结肠癌、宫颈癌、前列腺癌或肺癌。在一些实施方案中，本文所述的重组抗体或所述重组抗体的抗原结合片段或本文所述的药物组合物用于在治疗被诊断患有或怀疑患有癌症的个体的癌症中使用。在一些实施方案中，所述癌症包括胶质母细胞瘤、胰腺癌、乳腺癌、膀胱癌、肾癌、头颈癌、卵巢癌、结肠癌、宫颈癌、前列腺癌或肺癌。在一些实施方案中，本文所述的重组抗体或所述重组抗体的抗原结合片段或本文所述的药物组合物用于在扩增或分化树突状细胞或血液树突状细胞前体群体中使用。在一些实施方案中，本文描述了一种在个体中扩增或分化树突状细胞或血液树突状细胞前体群体的方法，其包括将本文所述的重组抗体或所述重组抗体的抗原结合片段或本文所述的药物组合物施用至被诊断患有或怀疑患有癌症的个体。在一些实施方案中，所述树突状细胞或血液树突状细胞前体包括常规树突状细胞亚群cDC1、常规树突状细胞亚群cDC2、浆细胞样树突状细胞或其任何组合。在一些实施方案中，本文描述了一种在个体中将树突状细胞或血液树突状细胞前体募集至肿瘤微环境的方法，其包括将有效量的本文所述的重组抗体或所述重组抗体的抗原结合片段或本文所述的药物组合物施用至被诊断患有或怀疑患有癌症的个体。在一些实施方案中，当施用至个体时，所述树突状细胞或血液树突状细胞前体包括常规树突状细胞亚群cDC1、常规树突状细胞亚群cDC2、浆细胞样树突状细胞或其任何组合。在一些实施方案中，本文描述了一种核酸，其编码本文所述的重组抗体或所述重组抗体的抗原结合片段。在一些实施方案中，本文描述了一种细胞，其包含本文所述的核酸。在一些实施方案中，所述细胞是真核细胞。在一些实施方案中，所述细胞是中国仓鼠卵巢(CHO)细胞。在一些实施方案中，本文描述了一种制备癌症治疗剂的方法，其包括在培养基中在足以将本文所述的重组抗体或所述重组抗体的抗原结合片段分泌到所述培养基中的条件下孵育本文所述的细胞。在一些实施方案中，制备癌症治疗剂的所述方法还包括使所述培养基经受至少一个纯化步骤。在一些实施方案中，本文描述了一种制备癌症治疗剂的方法，其包括将本文所述的重组抗体或所述重组抗体的抗原结合片段与药学上可接受的赋形剂、载体或稀释剂混合。在一些实施方案中，本文描述了本文所述的重组抗体或所述重组抗体的抗原结合片段或本文所述的药物组合物在治疗癌症中的用途。在一些实施方案中，所述癌症包括胶质母细胞瘤、胰腺癌、乳腺癌、膀胱癌、肾癌、头颈癌、卵巢癌、结肠癌、宫颈癌、前列腺癌或肺癌。在一些实施方案中，本文描述了本文所述的重组抗体或所述重组抗体的抗原结合片段或本文所述的药物组合物在治疗被诊断患有或怀疑患有癌症的个体的所述癌症中的用途。在一些实施方案中，所述癌症包括胶质母细胞瘤、胰腺癌、乳腺癌、膀胱癌、肾癌、头颈癌、卵巢癌、结肠癌、宫颈癌、前列腺癌或肺癌。在一些实施方案中，本文描述了本文所述的重组抗体或所述重组抗体的抗原结合片段或本文所述的药物组合物在扩增或分化树突状细胞或血液树突状细胞前体群体中的用途。在一些实施方案中，本文描述了本文所述的重组抗体或所述重组抗体的抗原结合片段或本文所述的药物组合物在个体中扩增或分化树突状细胞或血液树突状细胞前体群体中的用途。在一些实施方案中，所述树突状细胞或血液树突状细胞前体包括常规树突状细胞亚群cDC1、常规树突状细胞亚群cDC2、浆细胞样树突状细胞或其任何组合。在一些实施方案中，本文描述了本文所述的重组抗体或所述重组抗体的抗原结合片段或本文所述的药物组合物在个体中将树突状细胞或血液树突状细胞前体募集至肿瘤微环境中的用途。在一些实施方案中，所述树突状细胞或血液树突状细胞前体包括常规树突状细胞亚群cDC1、常规树突状细胞亚群cDC2、浆细胞样树突状细胞或其任何组合。在一些实施方案中，本文描述了本文所述的重组抗体或所述重组抗体的抗原结合片段和药学上可接受的赋形剂、载体或稀释剂在制造用于治疗癌症的药物中的用途。在一些实施方案中，本文描述了本文所述的重组抗体或所述重组抗体的抗原结合片段或本文所述的药物组合物在制造用于治疗癌症的药物中的用途。在一些实施方案中，所述癌症包括胶质母细胞瘤、胰腺癌、乳腺癌、膀胱癌、肾癌、头颈癌、卵巢癌、结肠癌、宫颈癌、前列腺癌或肺癌。在一些实施方案中，本文描述了本文所述的重组抗体或所述重组抗体的抗原结合片段或本文所述的药物组合物在制造用于治疗被诊断患有或怀疑患有癌症的个体的药物中的用途。在一些实施方案中，所述癌症包括胶质母细胞瘤、胰腺癌、乳腺癌、膀胱癌、肾癌、头颈癌、卵巢癌、结肠癌、宫颈癌、前列腺癌或肺癌。在一些实施方案中，本文描述了本文所述的重组抗体或所述重组抗体的抗原结合片段或本文所述的药物组合物在制造用于扩增或分化树突状细胞或血液树突状细胞前体群体的药物中的用途。在一些实施方案中，本文描述了本文所述的重组抗体或所述重组抗体的抗原结合片段或本文所述的药物组合物在制造用于在被诊断患有或怀疑患有癌症的个体中扩增或分化树突状细胞或血液树突状细胞前体群体的药物中的用途。在一些实施方案中，所述树突状细胞或血液树突状细胞前体包括常规树突状细胞亚群cDC1、常规树突状细胞亚群cDC2、浆细胞样树突状细胞或其任何组合。在一些实施方案中，本文描述了本文所述的重组抗体或所述重组抗体的抗原结合片段或本文所述的药物组合物在制造用于在被诊断患有或怀疑患有癌症的个体中将树突状细胞或血液树突状细胞前体募集至肿瘤微环境的药物中的用途。在一些实施方案中，所述树突状细胞或血液树突状细胞前体包括常规树突状细胞亚群cDC1、常规树突状细胞亚群cDC2、浆细胞样树突状细胞或其任何组合。

本文所述的另一方面包括一种特异性结合FMS样酪氨酸激酶3(FLT3)的重组抗体或所述重组抗体的抗原结合片段，所述重组抗体或所述重组抗体的抗原结合片段包含：免疫球蛋白重链可变区(VH)序列，其包含与SEQ ID NO:15、17、19、21和23中任一个中所示的氨基酸序列至少约90％、95％、97％、98％或99％、或100％相同的氨基酸序列；和免疫球蛋白轻链可变区(VL)序列，其包含与SEQ ID NO:16、18、20、22、24、26、27和28中任一个中所示的氨基酸序列至少约90％、95％、97％、98％或99％、或100％相同的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述免疫球蛋白重链可变区(VH)包含与SEQ ID NO:15中所示的氨基酸序列至少约90％、95％、97％、98％或99％、或100％相同的氨基酸序列；并且所述免疫球蛋白轻链可变区(VL)包含与SEQ ID NO:16中所示的氨基酸序列至少约90％、95％、97％、98％或99％、或100％相同的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述免疫球蛋白重链可变区(VH)包含与SEQ ID NO:15中所示的氨基酸序列至少约90％、95％、97％、98％或99％、或100％相同的氨基酸序列；并且所述免疫球蛋白轻链可变区(VL)包含与SEQ ID NO:26中所示的氨基酸序列至少约90％、95％、97％、98％或99％、或100％相同的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述重组抗体或所述重组抗体的抗原结合片段是嵌合的或人源化的。在一些实施方案中，所述重组抗体或所述重组抗体的抗原结合片段是IgG抗体。在一些实施方案中，所述重组抗体或所述重组抗体的抗原结合片段包含一个或多个突变以降低所述重组抗体或所述重组抗体的抗原结合片段的一种或多种效应子功能。在一些实施方案中，所述重组抗体或所述重组抗体的抗原结合片段的重链恒定区包含IGg4重链恒定区，其包含选自以下的以下氨基酸修饰或修饰组中的任一个：根据EU编号系统的IgG4修饰的N434A、N434H、T307A/E380A/N434A、M252Y/S254T/T256E、433K/434F/436H、T250Q、T250F、M428L、M428F、T250Q/M428L、N434S、V308W、V308Y、V308F、M252Y/M428L、D259I/V308F、M428L/V308F、Q311V/N434S、T307Q/N434A、E258F/V427T、S228P、L235E、S228P/L235E/R409K、S228P/L235E、K370Q、K370E、G446缺失、K447缺失及其任何组合。在一些实施方案中，所述重组抗体或所述重组抗体的抗原结合片段包括Fab、F(ab)2、单结构域抗体或单链可变片段(scFv)。在一些实施方案中，所述重组抗体或所述重组抗体的抗原结合片段在与人外周血单核细胞和/或骨髓来源的细胞接触时增加树突状细胞或血液树突状细胞前体的量。在一些实施方案中，树突状细胞或血液树突状细胞前体的量增加的EC50小于约200皮摩尔(pM)。在一些实施方案中，所述重组抗体或所述重组抗体的抗原结合片段增加表达FLT3的细胞系中的STAT5表达。在一些实施方案中，表达FLT3的所述细胞系中STAT5表达增加的EC50小于由人FLT3配体诱导的表达FLT3的细胞系中STAT5表达增加的EC50。在一些实施方案中，所述重组抗体或所述重组抗体的抗原结合片段包含免疫调节部分。在一些实施方案中，所述免疫调节部分是干扰素基因刺激蛋白(STING)激动剂。在一些实施方案中，本文描述了一种药物组合物，其包含本文所述的重组抗体或所述重组抗体的抗原结合片段以及药学上可接受的赋形剂、载体或稀释剂。在一些实施方案中，所述药物组合物被配制用于静脉内施用。在一些实施方案中，所述药物组合物被配制用于皮下施用。在一些实施方案中，所述药物组合物被配制用于瘤内施用。在一些实施方案中，本文所述的重组抗体或所述重组抗体的抗原结合片段或本文所述的药物组合物用于在治疗癌症中使用。在一些实施方案中，所述癌症包括胶质母细胞瘤、胰腺癌、乳腺癌、膀胱癌、肾癌、头颈癌、卵巢癌、结肠癌、宫颈癌、前列腺癌或肺癌。在一些实施方案中，本文所述的重组抗体或所述重组抗体的抗原结合片段或本文所述的药物组合物用于在治疗被诊断患有或怀疑患有癌症的个体的癌症中使用。在一些实施方案中，所述癌症包括胶质母细胞瘤、胰腺癌、乳腺癌、膀胱癌、肾癌、头颈癌、卵巢癌、结肠癌、宫颈癌、前列腺癌或肺癌。在一些实施方案中，本文所述的重组抗体或所述重组抗体的抗原结合片段或本文所述的药物组合物用于在扩增或分化树突状细胞或血液树突状细胞前体群体中使用。在一些实施方案中，本文描述了一种在个体中扩增或分化树突状细胞或血液树突状细胞前体群体的方法，其包括将本文所述的重组抗体或所述重组抗体的抗原结合片段或本文所述的药物组合物施用至被诊断患有或怀疑患有癌症的个体。在一些实施方案中，所述树突状细胞或血液树突状细胞前体包括常规树突状细胞亚群cDC1、常规树突状细胞亚群cDC2、浆细胞样树突状细胞或其任何组合。在一些实施方案中，本文描述了一种在个体中将树突状细胞或血液树突状细胞前体募集至肿瘤微环境的方法，其包括将有效量的本文所述的重组抗体或所述重组抗体的抗原结合片段或本文所述的药物组合物施用至被诊断患有或怀疑患有癌症的个体。在一些实施方案中，当施用至个体时，所述树突状细胞或血液树突状细胞前体包括常规树突状细胞亚群cDC1、常规树突状细胞亚群cDC2、浆细胞样树突状细胞或其任何组合。在一些实施方案中，本文描述了一种核酸，其编码本文所述的重组抗体或所述重组抗体的抗原结合片段。在一些实施方案中，本文描述了一种细胞，其包含本文所述的核酸。在一些实施方案中，所述细胞是真核细胞。在一些实施方案中，所述细胞是中国仓鼠卵巢(CHO)细胞。在一些实施方案中，本文描述了一种制备癌症治疗剂的方法，其包括在培养基中在足以将本文所述的重组抗体或所述重组抗体的抗原结合片段分泌到所述培养基中的条件下孵育本文所述的细胞。在一些实施方案中，制备癌症治疗剂的所述方法还包括使所述培养基经受至少一个纯化步骤。在一些实施方案中，本文描述了一种制备癌症治疗剂的方法，其包括将本文所述的重组抗体或所述重组抗体的抗原结合片段与药学上可接受的赋形剂、载体或稀释剂混合。在一些实施方案中，本文描述了本文所述的重组抗体或所述重组抗体的抗原结合片段或本文所述的药物组合物在治疗癌症中的用途。在一些实施方案中，所述癌症包括胶质母细胞瘤、胰腺癌、乳腺癌、膀胱癌、肾癌、头颈癌、卵巢癌、结肠癌、宫颈癌、前列腺癌或肺癌。在一些实施方案中，本文描述了本文所述的重组抗体或所述重组抗体的抗原结合片段或本文所述的药物组合物在治疗被诊断患有或怀疑患有癌症的个体的所述癌症中的用途。在一些实施方案中，所述癌症包括胶质母细胞瘤、胰腺癌、乳腺癌、膀胱癌、肾癌、头颈癌、卵巢癌、结肠癌、宫颈癌、前列腺癌或肺癌。在一些实施方案中，本文描述了本文所述的重组抗体或所述重组抗体的抗原结合片段或本文所述的药物组合物在扩增或分化树突状细胞或血液树突状细胞前体群体中的用途。在一些实施方案中，本文描述了本文所述的重组抗体或所述重组抗体的抗原结合片段或本文所述的药物组合物在个体中扩增或分化树突状细胞或血液树突状细胞前体群体中的用途。在一些实施方案中，所述树突状细胞或血液树突状细胞前体包括常规树突状细胞亚群cDC1、常规树突状细胞亚群cDC2、浆细胞样树突状细胞或其任何组合。在一些实施方案中，本文描述了本文所述的重组抗体或所述重组抗体的抗原结合片段或本文所述的药物组合物在个体中将树突状细胞或血液树突状细胞前体募集至肿瘤微环境中的用途。在一些实施方案中，所述树突状细胞或血液树突状细胞前体包括常规树突状细胞亚群cDC1、常规树突状细胞亚群cDC2、浆细胞样树突状细胞或其任何组合。在一些实施方案中，本文描述了本文所述的重组抗体或所述重组抗体的抗原结合片段和药学上可接受的赋形剂、载体或稀释剂在制造用于治疗癌症的药物中的用途。在一些实施方案中，本文描述了本文所述的重组抗体或所述重组抗体的抗原结合片段或本文所述的药物组合物在制造用于治疗癌症的药物中的用途。在一些实施方案中，所述癌症包括胶质母细胞瘤、胰腺癌、乳腺癌、膀胱癌、肾癌、头颈癌、卵巢癌、结肠癌、宫颈癌、前列腺癌或肺癌。在一些实施方案中，本文描述了本文所述的重组抗体或所述重组抗体的抗原结合片段或本文所述的药物组合物在制造用于治疗被诊断患有或怀疑患有癌症的个体的药物中的用途。在一些实施方案中，所述癌症包括胶质母细胞瘤、胰腺癌、乳腺癌、膀胱癌、肾癌、头颈癌、卵巢癌、结肠癌、宫颈癌、前列腺癌或肺癌。在一些实施方案中，本文描述了本文所述的重组抗体或所述重组抗体的抗原结合片段或本文所述的药物组合物在制造用于扩增或分化树突状细胞或血液树突状细胞前体群体的药物中的用途。在一些实施方案中，本文描述了本文所述的重组抗体或所述重组抗体的抗原结合片段或本文所述的药物组合物在制造用于在被诊断患有或怀疑患有癌症的个体中扩增或分化树突状细胞或血液树突状细胞前体群体的药物中的用途。在一些实施方案中，所述树突状细胞或血液树突状细胞前体包括常规树突状细胞亚群cDC1、常规树突状细胞亚群cDC2、浆细胞样树突状细胞或其任何组合。在一些实施方案中，本文描述了本文所述的重组抗体或所述重组抗体的抗原结合片段或本文所述的药物组合物在制造用于在被诊断患有或怀疑患有癌症的个体中将树突状细胞或血液树突状细胞前体募集至肿瘤微环境的药物中的用途。在一些实施方案中，所述树突状细胞或血液树突状细胞前体包括常规树突状细胞亚群cDC1、常规树突状细胞亚群cDC2、浆细胞样树突状细胞或其任何组合。

附图说明

本文所述的新颖特征在所附权利要求中具体阐述。通过参考阐述其中利用了本文所述特征原理的说明性实施例的以下具体实施方式和附图将更好地理解本文所述的特征和特征优点，在所述附图中：

图1示出了FLT3抗体在单剂量STAT5-萤光素酶报告物测定中的活性。将值针对500ng/ml下测试的FLT3L(灰色条)进行归一化。将顶级克隆(通过*表示的6B2)推进用于进一步筛选。

图2示出了图1中突出显示的顶级克隆(6B2)在STAT5-Luc报告物测定中与人FLT3L相比的剂量反应曲线。

图3示出了在AML5增殖测定中，图1中突出显示的顶级克隆(6B2)的二价F(ab)'2(左)和单价Fab(右)之间的活性差异。

图4示出了NB1113对表达人或食蟹猴FLT3的HEK 293T细胞的剂量反应结合曲线。

图5示出了NB1113在人(左)和食蟹猴(右)FLT3-STAT5-Luc报告物测定中的剂量反应曲线。

图6示出了在用FLT3L、NB1113或阴性对照处理12天后，从原代人骨髓体外扩增的HLA-DR+CD1c+细胞的频率。FLT3L和NB1113的EC50分别为0.023nM和0.113nM。

图7示出了在单次静脉内剂量注射后，对单独的雌性食蟹猴血清中NB1113的药代动力学(PK)分析。

图8示出了在单剂量注射NB1113后，单独的雌猴中总树突状细胞(DC)、经典DC2(cDC2)和浆细胞DC(pDC)群体的变化。

图9显示，在单剂量的NB1113后，观察到B细胞和T细胞频率没有显著变化。

图10显示，在单剂量的NB1113后，观察到血小板计数的适度变化。

具体实施方式

在以下描述中，阐述了某些具体细节以便提供对各种实施方案的透彻理解。然而，本领域技术人员将理解，所提供的实施方案可以在没有这些细节的情况下实践。除非上下文另外要求，否则在整个说明书和随后的权利要求中，词语“包含(comprise)”及其变体如“包含(comprises)”和“包含(comprising)”应以开放、包含性的含义解释，即“包括但不限于”。除非上下文另外明确规定，否则如在本说明书和所附权利要求中所用的，单数形式“一种/一个(a)”、“一种/一个(an)”和“所述”包括复数指示物。还应当注意，除非内容另外明确规定，否则术语“或”通常以其包括“和/或”的含义使用。此外，本文提供的标题仅是为了方便，并且不解释所要求保护的实施方案的范围或含义。

如本文所用，术语“约”是指在所述量附近10％或更少的量。

如本文所用，术语“个体”、“患者”或“受试者”是指被诊断患有、怀疑患有或有风险患上所述组合物和方法可用于治疗的至少一种疾病的个体。在某些实施方案中，个体是哺乳动物。在某些实施方案中，哺乳动物是小鼠、大鼠、兔、狗、猫、马、牛、绵羊、猪、山羊、美洲驼、羊驼或牦牛。在某些实施方案中，个体是人。

当在本文中使用时，术语“特异性结合”或“结合”是指由提及的抗体或片段的CDR的一个或多个氨基酸残基、或提及的抗体或片段的一个或多个可变区氨基酸残基介导的结合。如本文所用，关于抗体结合或与特定靶标结合的术语“接触(contact)”或“接触(contacts)”是指可变区或CDR的氨基酸残基在所叙述接触残基的5、4、3或更少埃的范围内。接触包括抗体的可变区或CDR的氨基酸残基与所叙述残基之间的氢键合、范德瓦尔斯相互作用以及盐桥形成。

所提供的抗体包括单克隆抗体、多特异性抗体(例如，双特异性抗体和多反应性抗体)和抗体片段。抗体包括抗体缀合物和包含抗体的分子(如嵌合分子)。因此，抗体包括但不限于全长和天然抗体，以及保留其结合特异性的其片段和部分，如其任何特异性结合部分，包括具有任何数量的免疫球蛋白类别和/或同种型(例如，IgGl、IgG2、IgG3、IgG4、IgA、IgD、IgE和IgM)的那些；及其生物学相关(抗原结合)片段或特异性结合部分，包括但不限于Fab、F(ab')2、Fv和scFv(单链或相关实体)。单克隆抗体通常是基本上同质抗体的组合物内的一种；因此，除了可能以少量存在的可能天然存在的突变之外，单克隆抗体组合物内包含的任何单独抗体都是相同的。单克隆抗体可以包含人IgG1恒定区。单克隆抗体可以包含人IgG4恒定区。

本文的术语“抗体”是以最广泛的含义使用，并且包括多克隆和单克隆抗体，包括完整抗体及其功能性(抗原结合)抗体片段，包括片段抗原结合(Fab)片段、F(ab')₂片段、Fab'片段、Fv片段、重组IgG(rIgG)片段、单链抗体片段(包括单链可变片段(sFv或scFv))和单结构域抗体(例如，sdAb、sdFv、纳米抗体)片段。所述术语涵盖免疫球蛋白的基因工程化和/或以其他方式修饰的形式，如胞内抗体、肽抗体、嵌合抗体、全人抗体、人源化抗体和异源缀合抗体、多特异性(例如，双特异性)抗体、双抗体、三抗体和四抗体、串联二scFv、串联三scFv。除非另外说明，否则术语“抗体”应当理解为涵盖其功能性抗体片段。所述术语还涵盖完整或全长抗体，包括任何类别或亚类(包括IgG及其亚类、IgM、IgE、IgA和IgD)的抗体。抗体可以包含人IgG1恒定区。抗体可以包含人IgG4恒定区。

术语“互补决定区”和“CDR”(其与“高变区”或“HVR”同义)在本领域中已知是指抗体可变区内的氨基酸的非连续序列，其赋予抗原特异性和/或结合亲和力。通常，在每个重链可变区中有三个CDR(CDR-H1、CDR-H2、CDR-H3)，并且在每个轻链可变区中有三个CDR(CDR-L1、CDR-L2、CDR-L3)。“框架区”和“FR”在本领域中已知是指重链和轻链的可变区的非CDR部分。通常，在每个全长重链可变区中有四个FR(FR-H1、FR-H2、FR-H3和FR-H4)，并且在每个全长轻链可变区中有四个FR(FR-L1、FR-L2、FR-L3和FR-L4)。给定CDR或FR的精确氨基酸序列边界可以使用许多熟知方案中的任一种容易地确定，所述方案包括以下文献中所述的那些：Kabat等人(1991),“Sequences of Proteins of Immunological Interest,”第5版Public Health Service,National Institutes of Health,贝塞斯达,马里兰州(“Kabat”编号方案)；Al-Lazikani等人,(1997)JMB273,927-948(“Chothia”编号方案)；MacCallum等人,J.Mol.Biol.262:732-745(1996),“Antibody-antigen interactions:Contact analysis and binding site topography,”J.Mol.Biol.262,732-745.”(“Contact”编号方案)；Lefranc MP等人,“IMGT unique numbering for immunoglobulinand T cell receptor variable domains and Ig superfamily V-like domains,”DevComp Immunol,2003年1月；27(1):55-77(“IMGT”编号方案)；Honegger A和Plückthun A,“Yet another numbering scheme for immunoglobulin variable domains:anautomatic modeling and analysis tool,”J Mol Biol,2001年6月8号；309(3):657-70(“Aho”编号方案)；以及Whitelegg NR和Rees AR,“WAM:an improved algorithm formodelling antibodies on the WEB,”Protein Eng.2000年12月；13(12):819-24(“AbM”编号方案)。

给定CDR或FR的边界可能根据用于鉴定的方案而变化。例如，Kabat方案是基于结构比对，而Chothia方案是基于结构信息。Kabat和Chothia方案的编号都是基于最常见的抗体区序列长度，其中通过插入字母(例如，“30a”)提供插入，并且在一些抗体中出现缺失。这两种方案将某些插入和缺失(“插入缺失(indel)”)放置在不同的位置，从而产生不同的编号。Contact方案是基于对复杂晶体结构的分析，并且在许多方面与Chothia编号方案相似。

术语“可变区”或“可变结构域”是指抗体重链或轻链的参与抗体与抗原的结合的结构域。天然抗体的重链和轻链的可变结构域(分别为V_H和V_L)通常具有相似的结构，其中每个结构域包含四个保守的框架区(FR)和三个CDR(参见例如，Kindt等人Kuby Immunology,第6版,W.H.Freeman and Co.,第91页(2007))。单个V_H或V_L结构域可以足以赋予抗原结合特异性。此外，可以使用来自结合特定抗原的抗体的V_H或V_L结构域分离结合所述抗原的抗体，以分别筛选互补的V_L或V_H结构域的文库(参见例如，Portolano等人,J.Immunol.150:880-887(1993)；Clarkson等人,Nature 352:624-628(1991))。

所提供的抗体包括抗体片段。“抗体片段”是指不同于完整抗体的分子，其包含完整抗体的结合完整抗体所结合的抗原的部分。抗体片段的例子包括但不限于Fv、Fab、Fab'、Fab'-SH、F(ab')2；双抗体；线性抗体；单链抗体分子(例如，scFv或sFv)；和从抗体片段形成的多特异性抗体。在特定实施方案中，抗体是包含可变重链区和/或可变轻链区的单链抗体片段，如scFv。

抗体片段可以通过各种技术制备，所述技术包括但不限于完整抗体的蛋白水解消化以及通过重组宿主细胞产生。在一些实施方案中，抗体是重组产生的片段，如包含不天然存在的排列的片段(如具有通过合成接头(例如，多肽接头)连接的两个或更多个抗体区或链的那些)，和/或不通过酶消化天然存在的完整抗体产生的那些。在一些方面，抗体片段是scFv。

“人源化”抗体是这样的抗体，其中全部或基本上全部CDR氨基酸残基来源于非人CDR，并且全部或基本上全部FR氨基酸残基来源于人FR。人源化抗体任选地可以包括来源于人抗体的抗体恒定区的至少一部分。非人抗体的“人源化形式”是指非人抗体的变体，其经历人源化以通常降低对人的免疫原性，同时保留亲本非人抗体的特异性和亲和力。在一些实施方案中，人源化抗体中的一些FR残基被来自非人抗体(例如，CDR残基所来源的抗体)的相应残基取代，例如以恢复或改善抗体特异性或亲和力。

所提供的抗体包括人抗体。“人抗体”是具有与由人或人细胞或者非人来源产生的抗体的氨基酸序列对应的氨基酸序列的抗体，所述非人来源利用人抗体库或其他人抗体编码序列(包括人抗体文库)。所述术语不包括包含非人抗原结合区的非人抗体的人源化形式，例如其中全部或基本上全部CDR是非人CDR的那些。

人抗体可以通过将免疫原施用至转基因动物来制备，所述转基因动物已经被修饰以响应于抗原激发而产生完整人抗体或具有人可变区的完整抗体。此类动物通常含有全部或部分的人免疫球蛋白基因座，其替代内源免疫球蛋白基因座，或者其在染色体外存在或随机整合到动物的染色体中。在此类转基因动物中，通常已经使内源性免疫球蛋白基因座失活。人抗体也可以来源于人抗体文库，包括噬菌体展示和无细胞文库，其含有来源于人库的抗体编码序列。

在一些实施方案中，工程化的人抗体分子的轻链或重链可变结构域可以与人轻链或重链恒定结构域融合(视情况而定)。可以考虑抗体的建议功能、特别是可能需要的效应子功能的缺少来选择工程化的人抗体分子的人恒定结构域(在存在的情况下)。例如，与重链可变区融合的重链恒定结构域可以是人IgA、IgG或IgM结构域。优选地，使用人IgG结构域。根据人恒定结构域的选择，可能需要通过例如使用定点诱变或寡核苷酸定向诱变来改变特定氨基酸残基以去除任何不需要的效应子功能，以便产生中性同种型抗体。可以与轻链可变区融合的轻链人恒定结构域包括人λ或人κ链。

在一些实施方案中，可以可替代地有利地使用人恒定结构域的类似物。这些包括与相应人结构域相比含有一个或多个另外氨基酸的那些，或其中相应人结构域的一个或多个存在的氨基酸已经被取代、添加、缺失或改变的那些恒定结构域。此类结构域可以例如通过寡核苷酸定向诱变获得。

术语“多肽”和“蛋白质”可互换地用于指氨基酸残基的聚合物，并且不限于最小长度。多肽(包括所提供的抗体和抗体链以及其他肽(例如，接头和结合肽))可以包括含有天然和/或非天然氨基酸残基的氨基酸残基。所述术语还包括多肽的表达后修饰，例如糖基化、唾液酸化、乙酰化、磷酸化等。在一些方面，多肽可以含有关于原生或天然序列的修饰，只要蛋白质保持所需活性即可。这些修饰可能是故意的(如通过定点诱变)，或者可能是偶然的(如通过产生蛋白质的宿主的突变或由于PCR扩增引起的错误)。

关于参考多肽序列的序列同一性百分比(％)是在用以实现最大序列同一性百分比而比对序列和引入缺口(如果需要)并且不将任何保守取代视为序列同一性的一部分后，候选序列中与参考多肽序列中的氨基酸残基相同的氨基酸残基的百分比。用于确定氨基酸序列同一性百分比的目的的比对可以以多种已知方式来实现，例如使用可公开获得的计算机软件，如BLAST、BLAST-2、ALIGN或Megalign(DNASTAR)软件。能够确定用于比对序列的适当参数，包括在所比较序列的全长上实现最大比对所需的算法。然而，出于本文的目的，使用序列比较计算机程序ALIGN-2产生氨基酸序列同一性％值。ALIGN-2序列比较计算机程序由Genentech,Inc.编写，并且源代码已经以用户文档提交在美国版权局(U.S.CopyrightOffice)，华盛顿，20559中，其中它在美国版权登记号TXU510087下进行了注册。ALIGN-2程序可从加利福尼亚州南旧金山的Genentech,Inc.公开获得，或者可以从源代码编译。应当编译ALIGN-2程序以在UNIX操作系统(包括数字UNIX V4.0D)上使用。所有序列比较参数均由ALIGN-2程序设置，并且不改变。

在采用ALIGN-2进行氨基酸序列比较的情况下，给定氨基酸序列A与(to、with或against)给定氨基酸序列B的氨基酸序列同一性％(其可替代地可以用短语表示为与(to、with或against)给定氨基酸序列B具有或包含一定氨基酸序列同一性％的给定氨基酸序列A)如下计算：100乘以分数X/Y，其中X是通过序列比对程序ALIGN-2在该程序的A和B的比对中作为相同匹配得分的氨基酸残基数，并且其中Y是B中氨基酸残基的总数。将理解的是，在氨基酸序列A的长度不等于氨基酸序列B的长度的情况下，A与B的氨基酸序列同一性％将不等于B与A的氨基酸序列同一性％。除非另外明确说明，否则本文所用的全部氨基酸序列同一性％值如紧接上一段中所述那样使用ALIGN-2计算机程序获得。

在一些实施方案中，考虑了本文提供的抗体的氨基酸序列变体。变体通常与本文明确公开的多肽相差一个或多个取代、缺失、添加和/或插入。此类变体可以是天然存在的或可以是合成产生的，例如通过修饰本发明的以上多肽序列中的一个或多个并且评价如本文所述的多肽的一种或多种生物活性，和/或使用许多已知技术中的任一种。例如，可能需要改善抗体的结合亲和力和/或其他生物特性。可以通过向编码抗体的核苷酸序列中引入适当的修饰或通过肽合成来制备抗体的氨基酸序列变体。此类修饰包括例如抗体的氨基酸序列内的残基的缺失和/或插入和/或取代。可以进行缺失、插入和取代的任何组合以获得最终的构建体，条件是最终的构建体具有所需的特征(例如，抗原结合)。

在一些实施方案中，提供了具有一个或多个氨基酸取代的抗体变体。用于通过取代进行诱变的目的位点包括CDR和FR。可以将氨基酸取代引入目的抗体中，并且筛选产物的所需活性，例如保留/改善的抗原结合、降低的免疫原性或改善的ADCC或CDC。

在一些实施方案中，取代、插入或缺失可以发生在一个或多个CDR内，其中取代、插入或缺失基本上不降低抗体与抗原的结合。例如，可以在CDR中进行基本上不降低结合亲和力的保守取代。此类改变可以在CDR“热点”之外。在变体V_H和V_L序列的一些实施方案中，每个CDR是未改变的。

可以在CDR中进行改变(例如，取代)，例如以改善抗体亲和力。此类改变可以在体细胞成熟期间以较高的突变率在CDR编码密码子中进行(参见例如，Chowdhury,MethodsMol.Biol.207:179-196(2008))，并且可以测试所得变体的结合亲和力。亲和力成熟(例如，使用易错PCR、链改组、CDR的随机化或寡核苷酸定向诱变)可以用于改善抗体亲和力(参见例如，Hoogenboom等人于Methods in Molecular Biology 178:1-37(2001))。可以例如使用丙氨酸扫描诱变或建模来特异性地鉴定参与抗原结合的CDR残基(参见例如，Cunningham和Wells Science,244:1081-1085(1989))。特别地，通常靶向CDR-H3和CDR-L3。可替代地或另外地，抗原-抗体复合物的晶体结构用于鉴定抗体和抗原之间的接触点。可以靶向或消除此类接触残基和邻近残基作为取代候选物。可以筛选变体以确定它们是否含有所需的特性。

氨基酸序列插入和缺失包括长度范围从一个残基到含有一百个或更多个残基的多肽的氨基和/或羧基末端融合、以及单个或多个氨基酸残基的序列内插入和缺失。末端插入的例子包括具有N末端甲硫氨酰基残基的抗体。抗体分子的其他插入变体包括将抗体的N末端或C末端与酶(例如，用于ADEPT)或增加抗体的血清半衰期的多肽融合。抗体分子的序列内插入变体的例子包括在轻链中插入3个氨基酸。末端缺失的例子包括在轻链末端具有7个或更少氨基酸缺失的抗体。

在一些实施方案中，改变抗体以增加或减少其糖基化(例如，通过改变氨基酸序列使得产生或去除一个或多个糖基化位点)。可以改变附接至抗体Fc区的碳水化合物。来自哺乳动物细胞的天然抗体通常包含支链二天线寡糖，其通过N键联附接至Fc区CH2结构域的Asn₂₉₇(参见例如，Wright等人TIBTECH 15:26-32(1997))。寡糖可以是各种碳水化合物，例如甘露糖、N-乙酰基葡糖胺(GlcNAc)、半乳糖、唾液酸、附接至二天线寡糖结构的茎中GlcNAc的岩藻糖。例如，可以对抗体中的寡糖进行修饰，以产生具有某些改善特性的抗体变体。抗体糖基化变体可以具有改善的ADCC和/或CDC功能。在一些实施方案中，提供了抗体变体，其具有缺少(直接或间接)附接至Fc区的岩藻糖的碳水化合物结构。例如，这种抗体中岩藻糖的量可以为1％至80％、1％至65％、5％至65％或20％至40％。岩藻糖的量通过以下方式来确定：相对于附接至Asn297的所有糖结构的总和，计算在Asn₂₉₇处糖链内的岩藻糖的平均量(参见例如WO 08/077546)。Asn₂₉₇是指位于Fc区中约第297位的天冬酰胺残基(Fc区残基的EU编号；参见例如，Edelman等人Proc Natl Acad Sci U S A.1969年5月；63(1):78–85)。然而，由于抗体中的微小序列变异，Asn₂₉₇也可以位于第297位上游或下游约±3个氨基酸，即在第294位与第300位之间。此类岩藻糖基化变体可以具有改善的ADCC功能(参见例如，Okazaki等人J.Mol.Biol.336:1239-1249(2004)；以及Yamane-Ohnuki等人Biotech.Bioeng.87:614(2004))。可以使用细胞系(例如，敲除细胞系)及其使用方法来产生去岩藻糖基化抗体，例如缺乏蛋白质岩藻糖基化的Lec13 CHO细胞和α-1,6-岩藻糖基转移酶基因(FUT8)敲除CHO细胞(参见例如，Ripka等人Arch.Biochem.Biophys.249:533-545(1986)；Yamane-Ohnuki等人Biotech.Bioeng.87:614(2004)；Kanda,Y.等人,Biotechnol.Bioeng.,94(4):680-688(2006))。还包括其他抗体糖基化变体(参见例如美国专利号6,602,684)。

在一些实施方案中，可以将一个或多个氨基酸修饰引入本文所提供的抗体的Fc区中，从而产生Fc区变体。本文的Fc区是免疫球蛋白重链的含有恒定区的至少一部分的C末端区。Fc区包括天然序列Fc区和变体Fc区。Fc区变体可以包含在一个或多个氨基酸位置处包含氨基酸修饰(例如，取代)的人Fc区序列(例如，人IgG1、IgG2、IgG3或IgG4 Fc区)。

如本文所用，短语“效应子功能”旨在包括由含Fc的蛋白质在与FcγR结合时所赋予的功能性能力。不受任何一种理论的束缚，Fc/FcγR复合物的形成将多种效应细胞募集至结合抗原的位点，通常导致细胞内不同的信号传导事件和重要的后续免疫应答。

如本文所用的短语“抗体依赖性细胞介导的细胞毒性”和“ADCC”是指细胞介导的反应，其中表达FcR的非特异性细胞毒性细胞(例如自然杀伤(NK)细胞、嗜中性粒细胞和巨噬细胞)识别靶细胞上的结合抗体，随后导致靶细胞裂解。介导ADCC的原代细胞NK细胞仅表达FcγRIII，而单核细胞表达FcγRI、FcγRII和FcγRIII。

如本文所用的短语“抗体依赖性细胞吞噬作用”和“ADCP”是指借此通过与免疫球蛋白Fc区结合的吞噬免疫细胞(例如，巨噬细胞、嗜中性粒细胞和树突状细胞)将抗体包被的细胞全部或部分内化的过程。

短语“补体依赖性细胞毒性”或“CDC”是指抗体Fc区触发补体激活，从而导致在靶向细胞表面上形成膜攻击复合物的能力。

在一些实施方案中，本公开文本的抗体包括具有一些但不是所有效应子功能的变体，这使其成为以下应用的理想候选物，在所述应用中抗体体内半衰期是重要的，但某些效应子功能(如补体和ADCC)是不必要或有害的。可以进行体外和/或体内细胞毒性测定以确认CDC和/或ADCC活性的降低/消耗。例如，可以进行Fc受体(FcR)结合测定以确保抗体缺少FcγR结合(因此可能缺少ADCC活性)，但是保留FcRn结合能力。用于评估目的分子的ADCC活性的体外测定的非限制性例子描述于美国专利号5,500,362和5,821,337中。可替代地，可以采用非放射性测定方法(例如，ACTI^TM和CytoTox

非放射性细胞毒性测定)。用于此类测定的有用效应细胞包括外周血单核细胞(PBMC)、单核细胞、巨噬细胞和自然杀伤(NK)细胞。

在一些实施方案中，与包含野生型Fc的抗体相比，本文所述的抗体可以调节效应子功能。此调节可能是Fc区的选择结果(例如，IgG4比IgG1具有固有地更低的效应子功能)。此调节可能是将一个或多个变体引入至Fc区(IgG1或IgG4 Fc区)的结果。在一些实施方案中，所述调节是ADCC和/或ADCP和/或CDC(补体依赖性细胞毒性)的调节。在一些实施方案中，所述调节是效应的下调或降低。在一些实施方案中，所述调节是ADCC的调节；并且在一些实施方案中，所述调节是ADCC的下调。在一些实施方案中，所述调节是ADCC和CDC的下调。在一些实施方案中，所述调节是仅ADCC的下调。在一些实施方案中，所述调节是ADCC和CDC和/或ADCP的下调。在一些实施方案中，所述抗体下调或降低ADCC/CDC和ADCP。在一些实施方案中，由包含Fc变体的抗体诱导的ADCC或CDC或ADCP的降低或下调是降低至对于由包含野生型Fc区的抗体分别对ADCC或CDC或ADCP的诱导所观察到的值的0％、2.5％、5％、10％、20％、50％或75％。在一些实施方案中，由所述抗体诱导的ADCC的调节是效力的降低，使得与包含野生型Fc区的抗体相比，所述Fc变体的EC50降低大约>10倍。在一些实施方案中，与包含野生型Fc区的抗体相比，在存在人效应细胞的情况下，所述抗体没有任何实质性的ADCC和/或CDC和/或ADCP。在一些实施方案中，所述抗体展现出降低的(例如降低至少20％)或强烈降低(例如降低至少50％)的效应子功能，这可能是ADCC(下调)、CDC和/或ADCP的降低。

可以进行体外和/或体内细胞毒性测定以确认CDC和/或ADCC活性的降低/消耗。例如，可以进行Fc受体(FcR)结合测定以确保抗体缺少FcγR结合(因此可能缺少ADCC活性)，但是保留FcRn结合能力。

通过使补体系统的第一组分(Clq)与和同源抗原复合的分子(例如抗体)结合而启动补体激活途径。不同变体与Clq的结合特性可以通过ELISA夹心型免疫测定进行分析。半最大反应时的抗体浓度决定了EC₅₀值。此读取报告为与在同一板上测量的参考标准的相对差异以及样品和参考的变异系数。

在一些实施方案中，相对于相应的野生型抗体，本文所述的抗体展现出降低的与Clq的亲和力。在一些实施方案中，抗体展现出的对Clq受体的亲和力与相应的野生型抗体相比低至少2倍、或至少3倍、或至少5倍、或至少7倍、或至少10倍、或至少20倍、或至少30倍、或至少40倍、或至少50倍、或至少60倍、或至少70倍、或至少80倍、或至少90倍、或至少100倍、或至少200倍。

在一些实施方案中，本文所述的抗体展现出的对Clq的亲和力比相应的野生型抗体对Clq的亲和力低至少90％、至少80％、至少70％、至少60％、至少50％、至少40％、至少30％、至少20％、至少10％或至少5％。在一些实施方案中，本文所述的抗体展现出的对Clq的亲和力在约100nM至约100μΜ、或约100nM至约10μΜ、或约100nM至约1μΜ、或约1nM至约100μΜ、或约10nM至约100μΜ、或约1μΜ至约100μΜ、或约10μΜ至约100μΜ之间。在一些实施方案中，本文所述的抗体展现出的对Clq的亲和力大于1μΜ、大于5μΜ、大于10μΜ、大于25μΜ、大于50μΜ或大于100μΜ。

在一些实施方案中，与相应的野生型Fc抗体相比，本文所述的抗体展现出降低的CDC活性。在一些实施方案中，本文所述的抗体展现出的CDC活性比相应的野生型抗体的CDC活性低至少2倍、或至少3倍、或至少5倍或至少10倍或至少50倍或至少100倍。在一些实施方案中，相对于相应的野生型抗体，本文所述的抗体展现出降低至少10％、或至少20％、或至少30％、或至少40％、或至少50％、或至少60％、或至少70％、或至少80％、或至少90％、或至少100％、或至少200％、或至少300％、或至少400％、或至少500％的CDC活性。在一些实施方案中，本文所述的抗体不展现出可检测的CDC活性。在一些实施方案中，CDC活性的降低和/或消除可以归因于本文所述的抗体对Fc配体和/或受体的亲和力降低。

在本领域中应理解，生物疗法可能具有不良毒性问题，所述问题与指导免疫系统识别并攻击不想要的细胞和/或靶标的复杂性质相关。当识别和/或靶向攻击不发生在需要治疗的地方时，可能出现诸如不良毒性等后果。例如，非靶向组织的抗体染色可以指示潜在的毒性问题。在一些实施方案中，与相应的野生型抗体相比，本文所述的抗体展现出减少的非靶向组织染色。在一些实施方案中，本文所述的抗体展现出减少的非靶向组织染色，其比相应的野生型抗体的非靶向组织染色低至少2倍、或至少3倍、或至少5倍、或至少7倍、或至少10倍、或至少20倍、或至少30倍、或至少40倍、或至少50倍、或至少60倍、或至少70倍、或至少80倍、或至少90倍、或至少100倍、或至少200倍。在一些实施方案中，本文所述的抗体展现出减少的非靶向组织染色，其相对于相应的野生型抗体减少至少10％、或至少20％、或至少30％、或至少40％、或至少50％、或至少60％、或至少70％、或至少80％、或至少90％、或至少100％、或至少200％、或至少300％、或至少400％、或至少500％。

在一些实施方案中，与相应的野生型抗体相比，本文所述的抗体展现出降低的抗体相关毒性。在一些实施方案中，本文所述的抗体展现出的毒性比相应的野生型抗体的毒性低至少2倍、或至少3倍、或至少5倍、或至少7倍、或至少10倍、或至少20倍、或至少30倍、或至少40倍、或至少-50倍、或至少60倍、或至少70倍、或至少80倍、或至少90倍、或至少100倍、或至少200倍。在一些实施方案中，相对于相应的野生型抗体，本文所述的抗体展现出降低至少10％、或至少20％、或至少30％、或至少40％、或至少50％、或至少60％、或至少70％、或至少80％、或至少90％、或至少100％、或至少200％、或至少300％、或至少400％、或至少500％的毒性。

在本领域中应理解，生物疗法可能具有凝血细胞聚集的不良影响。可以使用体外和体内测定来测量凝血细胞聚集。在一些实施方案中，与相应的野生型抗体相比，本文所述的抗体在体外测定中展现出减少的凝血细胞聚集。在一些实施方案中，本文所述的抗体在体外测定中展现出减少的凝血细胞聚集，其比相应的野生型抗体的凝血细胞聚集低至少2倍、或至少3倍、或至少5倍、或至少7倍、或至少10倍、或至少20倍、或至少30倍、或至少40倍、或至少50倍、或至少60倍、或至少70倍、或至少80倍、或至少90倍、或至少100倍、或至少200倍。在一些实施方案中，本文所述的抗体在体外测定中展现出减少的凝血细胞聚集，其相对于相应的野生型抗体减少至少10％、或至少20％、或至少30％、或至少40％、或至少50％、或至少60％、或至少70％、或至少80％、或至少90％、或至少100％、或至少200％、或至少300％、或至少400％、或至少500％。

在一些实施方案中，与相应的野生型抗体相比，本文所述的抗体展现出减少的体内凝血细胞聚集。在一些实施方案中，本文所述的抗体在体内测定中展现出减少的凝血细胞聚集，其比相应的野生型抗体的凝血细胞聚集低至少2倍、或至少3倍、或至少5倍、或至少7倍、或至少10倍、或至少20倍、或至少30倍、或至少40倍、或至少50倍、或至少60倍、或至少70倍、或至少80倍、或至少90倍、或至少100倍、或至少200倍。在一些实施方案中，本文所述的抗体在体内测定中展现出减少的凝血细胞聚集，其相对于相应的野生型抗体减少至少10％、或至少20％、或至少30％、或至少40％、或至少50％、或至少60％、或至少70％、或至少80％、或至少90％、或至少100％、或至少200％、或至少300％、或至少400％、或至少500％。

在一些实施方案中，与相应的野生型抗体相比，本文所述的抗体展现出减少的血小板激活和/或血小板聚集。

在一些实施方案中，本文所述的抗体靶向FLT3。在一些实施方案中，本文所述的抗体缺少Fc区(例如，(Fab')₂片段)。在一些实施方案中，本文所述的抗体包含位于或接近于N-糖基化位点的突变残基。在一些实施方案中，本文所述的抗体具有选自以下的氨基酸修饰或修饰组：根据EU编号系统的IgG4的N434A、N434H、T307A/E380A/N434A、M252Y/S254T/T256E、433K/434F/436H、T250Q、T250F、M428L、M428F、T250Q/M428L、N434S、V308W、V308Y、V308F、M252Y/M428L、D259I/V308F、M428L/V308F、Q311V/N434S、T307Q/N434A、E258F/V427T、S228P、L235E、S228P/L235E/R409K、S228P/L235E、K370Q、K370E、G446缺失、K447缺失及其任何组合。在一些实施方案中，本文所述的抗体包含IgG4。在一些实施方案中，所述抗体包含修饰的IgG4，其中IgG2(直至T260)与IgG4 Fc的末端连接。

抗体可以具有增加的半衰期和改善的与新生儿Fc受体(FcRn)的结合(参见例如US2005/0014934)。此类抗体可以包含在其中具有改善Fc区与FcRn的结合的一个或多个取代的Fc区，并且包括在以下Fc区残基中的一个或多个处具有取代的那些：根据EU编号系统的238、256、265、272、286、303、305、307、311、312、317、340、356、360、362、376、378、380、382、413、424或434(参见例如美国专利号7,371,826)。还考虑了Fc区变体的其他例子(参见例如，Duncan和Winter,Nature 322:738-40(1988)；美国专利号5,648,260和5,624,821；以及WO94/29351)。

在一些实施方案中，可能需要产生半胱氨酸工程化的抗体，例如“thioMAb”，其中抗体的一个或多个残基被半胱氨酸残基取代。在一些实施方案中，被取代的残基存在于抗体的可及位点处。反应性硫醇基团可以定位于用于与其他部分(如药物部分或接头药物部分)缀合以产生免疫缀合物的位点处。在一些实施方案中，可以用半胱氨酸取代以下残基中的任何一个或多个：轻链的V205(Kabat编号)；重链的A118(EU编号)；和重链Fc区的S400(EU编号)。

在一些实施方案中，本文提供的抗体可以进一步被修饰以含有已知且可用的另外的非蛋白质部分。适合于衍生化抗体的部分包括但不限于水溶性聚合物。水溶性聚合物的非限制性例子包括但不限于聚乙二醇(PEG)、乙二醇/丙二醇的共聚物、羧甲基纤维素、葡聚糖、聚乙烯醇、聚乙烯吡咯烷酮、聚-1,3-二氧戊环、聚-1,3,6-三噁烷、乙烯/马来酸酐共聚物、聚氨基酸(均聚物或无规共聚物)、和葡聚糖或聚(n-乙烯基吡咯烷酮)聚乙二醇、聚丙二醇均聚物、聚氧化丙烯/氧化乙烯共聚物、聚氧乙基化多元醇(例如，甘油)、聚乙烯醇及其混合物。聚乙二醇丙醛由于其在水中的稳定性而可以在制造中具有优势。聚合物可以具有任何分子量，并且可以是有支链或无支链的。附接至抗体的聚合物的数量可以变化，并且如果附接两种或更多种聚合物，则它们可以是相同或不同的分子。

本文所述的抗体可以由核酸编码。核酸是一种类型的包含两个或更多个核苷酸碱基的多核苷酸。在某些实施方案中，核酸是可以用于将多肽编码多核苷酸转移到细胞中的载体的组分。如本文所用，术语“载体”是指能够转运与它连接的另一个核酸的核酸分子。一种类型的载体是基因组整合载体或“整合载体”，其可以被整合到宿主细胞的染色体DNA中。另一种类型的载体是“附加型”载体，例如能够进行染色体外复制的核酸。能够指导它们可操作地连接的基因的表达的载体在本文中称为“表达载体”。合适的载体包括质粒、细菌人工染色体、酵母人工染色体、病毒载体等。在表达载体中，用于控制转录的调节元件如启动子、增强子、聚腺苷酸化信号可以来源于哺乳动物、微生物、病毒或昆虫基因。也可以另外掺入在宿主中复制的能力(通常由复制起点赋予)以及有利于转化体识别的选择基因。可以采用来源于病毒如慢病毒、逆转录病毒、腺病毒、腺相关病毒等的载体。可以将质粒载体线性化以整合到染色体位置中。载体可以包含将位点特异性整合指导到基因组中的限定位置或一组受限制位点的序列(例如，AttP-AttB重组)。另外地，载体可以包含来源于可转座元件的序列。

如本文所用，术语“同源的”、“同源性”或“同源性百分比”当在本文中用于相对于参考序列描述氨基酸序列或核酸序列时可以使用由以下描述的公式来确定：Karlin和Altschul(Proc.Natl.Acad.Sci.USA 87:2264-2268,1990，如在Proc.Natl.Acad.Sci.USA90:5873-5877,1993中那样修改)。这种公式被并入Altschul等人(J.Mol.Biol.215:403-410,1990)的基本局部比对搜索工具(BLAST)程序中。可以使用截至本申请提交日最新版本的BLAST来确定序列的同源性百分比。

编码本文所述的抗体的核酸可以用于感染、转染、转化合适的细胞或以其他方式使合适的细胞是核酸转基因的，从而使得能够产生用于商业或治疗用途的抗体。用于从大规模细胞培养中产生抗体的标准细胞系和方法是本领域已知的。参见例如，Li等人,“Cellculture processes for monoclonal antibody production.”Mabs.2010年9月-10月；2(5):466–477。在某些实施方案中，细胞是真核细胞。在某些实施方案中，真核细胞是哺乳动物细胞。在某些实施方案中，哺乳动物细胞是可用于产生抗体的细胞系，是中国仓鼠卵巢细胞(CHO)细胞、NS0鼠骨髓瘤细胞或PER.

细胞。在某些实施方案中，将编码抗体的核酸整合到可用于产生抗体的细胞的基因组基因座中。在某些实施方案中，本文描述了制备抗体的方法，其包括将包含编码抗体的核酸的细胞在足以允许产生和分泌所述抗体的条件下在体外培养。

在某些实施方案中，本文描述了主细胞库，其包含：(a)哺乳动物细胞系，其包含整合在基因组位置处的编码本文所述抗体的核酸；和(b)冷冻保护剂。在某些实施方案中，冷冻保护剂包含甘油或DMSO。在某些实施方案中，主细胞库包含：(a)CHO细胞系，其包含整合在基因组位置处的编码抗体的核酸，所述抗体具有(i)由SEQ ID NO:11、13、15、17或19中任一个所示的重链氨基酸序列；和(ii)由SEQ ID NO:12、14、16、18或20中任一个所示的轻链氨基酸序列；以及(b)冷冻保护剂。在某些实施方案中，冷冻保护剂包含甘油或DMSO。在某些实施方案中，将主细胞库包含在能够承受液氮冷冻的合适的小瓶或容器中。

本文还描述了产生本文所述的抗体的方法。此类方法包括将包含编码抗体的核酸的细胞或细胞系在细胞培养基中在足以允许抗体表达和分泌的条件下孵育，以及进一步从细胞培养基中收获抗体。所述收获可以还包括一个或多个纯化步骤以去除活细胞、细胞碎片、非抗体蛋白或多肽、不希望的盐、缓冲液和培养基组分。在某些实施方案中，一个或多个另外的纯化步骤包括离心、超速离心、蛋白A、蛋白G、蛋白A/G或蛋白L纯化、和/或离子交换色谱。

FLT3激动剂抗体

本文描述了FLT3激动性抗体及其抗原结合片段。这些抗体和抗原结合片段具有增加通过FLT3受体的信号传导的作用。在某些实施方案中，与同种型对照相比，本文所述的抗体和抗原结合片段以至少约2倍、3倍、5倍或10倍激活STAT5转录。在某些实施方案中，当与人外周血单核细胞和/或骨髓细胞一起培养时，本文所述的抗体和抗原结合片段使树突状细胞或血液树突状细胞前体的量增加至少约1.25倍、1.5倍、2倍或3倍。树突状细胞可以通过CD11c阳性细胞、或CD11c阳性和高水平的MHC II类表达的组合来鉴定。在某些实施方案中，当与人外周血单核细胞和/或骨髓来源的细胞接触时，树突状细胞或血液树突状细胞前体的量增加的EC50小于约200皮摩尔(pM)、150pM、140pM、130pM、126pM、120pM、110pM或100pM。

在一些实施方案中，本文所述的抗体与FLT3结合。在一些实施方案中，本文所述的抗体在与FLT3结合时诱导FLT3的磷酸化。在一些实施方案中，本文所述的抗体使两个FLT3受体交联或二聚化，从而导致这两个FLT3受体的磷酸化和激活。在一些实施方案中，本文所述的抗体在与FLT3结合时诱导表达所述FLT3的细胞内化并降解所述FLT3。

在某一方面，FLT3激动性抗体或抗原结合片段包含免疫球蛋白可变区重链和免疫球蛋白可变区轻链，其包含嵌合NB 1016、人源化1063、或脱酰胺化变体NB112、NB113、NB114或NB115的互补决定区。在某些实施方案中，所述FLT3激动性抗体包含免疫球蛋白可变区重链和免疫球蛋白可变区轻链，其中所述免疫球蛋白可变区重链包含：(a)可变区重链互补决定区1(VH-CDR1)，其包含SEQ ID NO:1(GFTFSNY)、2(NYGMA)或29(GFTFSNYGMA)中所示的氨基酸序列；(b)可变区重链互补决定区2(VH-CDR2)，其包含SEQ ID NO:3(HSGGGD)或4(SIHSGGGDTYYRDSVKG)中所示的氨基酸序列；以及(c)可变区重链互补决定区3(VH-CDR3)，其包含SEQ ID NO:5(GRTPTGYYFDH)中所示的氨基酸序列；并且所述免疫球蛋白可变区轻链包含：(d)可变区轻链互补决定区1(VL-CDR1)，其包含SEQ ID NO:6(RASEGIHNGLA)中所示的氨基酸序列；(e)可变区轻链互补决定区2(VL-CDR2)，其包含SEQ ID NO:11(NANSLHS)中所示的氨基酸序列；以及(f)可变区轻链互补决定区3(VL-CDR3)，其包含SEQ ID NO:12(QQYYDYPLT)中任一个中所示的氨基酸序列。在NB 1016和NB1063的VL-CDR1中存在潜在的“NG”脱酰胺化位点。这可能在下游处理中导致异质产物。因此，本文公开了包含VL-CDR1变体的抗体，所述变体在SEQ ID NO:6的第8位处不具有天冬酰胺并且仍保留FLT3结合活性。在某些实施方案中，所述重组抗体还包含人轻链恒定区和人重链恒定区。在某些实施方案中，所述重组抗体是人源化的。

嵌合NB 1016和人源化NB 1063克隆的可变区轻链互补决定区1中的天冬酰胺是潜在的脱酰胺化位点。脱酰胺化对用作治疗剂的抗体可能是有害的，因为脱酰胺化增加了抗体异质性并降低了抗体稳定性。因此，本文考虑了NB1016和NB1063 CDR区的突变体，其用另一种氨基酸取代天冬酰胺。在某些实施方案中，与NB1016或NB1063相比，用不同氨基酸取代不导致或仅导致忽略不计的如通过靶标结合或STAT5表达诱导所定义的亲和力或功能活性损失。在某些实施方案中，本文描述了特异性结合FMS样酪氨酸激酶3(FLT3)的重组抗体，其包含免疫球蛋白可变区重链和免疫球蛋白可变区轻链，其中所述免疫球蛋白可变区重链包含：(a)可变区重链互补决定区1(VH-CDR1)，其包含SEQ ID NO:1(GFTFSNY)、2(NYGMA)或29(GFTFSNYGMA)中所示的氨基酸序列；(b)可变区重链互补决定区2(VH-CDR2)，其包含SEQ IDNO:3(HSGGGD)或4(SIHSGGGDTYYRDSVKG)中所示的氨基酸序列；(c)可变区重链互补决定区3(VH-CDR3)，其包含SEQ ID NO:5(GRTPTGYYFDH)中所示的氨基酸序列；并且所述免疫球蛋白可变区轻链包含：(d)可变区轻链互补决定区1(VL-CDR1)，其包含如(RASEGIHXGLA)所示的氨基酸序列；(e)可变区轻链互补决定区2(VL-CDR2)，其包含SEQ ID NO:11(NANSLHS)中所示的氨基酸序列；以及(f)可变区轻链互补决定区3(VL-CDR3)，其包含SEQ ID NO:12(QQYYDYPLT)中任一个中所示的氨基酸序列。在某些实施方案中，RASEGIHXGLA中的X是与NB1016或NB1063相比不导致靶标结合或STAT5表达诱导减少的任何氨基酸。在某些实施方案中，RASEGIHXGLA中的X是与NB1016或NB1063相比导致少于约25％、20％、15％、10％或5％的靶标结合或STAT5表达诱导减少的任何氨基酸。在某些实施方案中，RASEGIHXGLA中的X是选自天冬氨酸、丝氨酸、苏氨酸或亮氨酸的氨基酸。在某些实施方案中，所述VL-CDR1包含选自以下的氨基酸序列：SEQ ID NO:7(RASEGIHDGLA)、SEQ ID NO:8(RASEGIHSGLA)、SEQ IDNO:9(RASEGIHTGLA)和SEQ ID NO:10(RASEGIHLGLA)。在某些实施方案中，所述重组抗体还包含人轻链恒定区和人重链恒定区。在某些实施方案中，所述重组抗体是人源化的。

在某些实施方案中，所述FLT3激动性抗体包含免疫球蛋白可变区重链和免疫球蛋白可变区轻链，其中所述免疫球蛋白可变区重链包含：(a)可变区重链互补决定区1(VH-CDR1)，其包含SEQ ID NO:1(GFTFSNY)、2(NYGMA)或29(GFTFSNYGMA)中所示的氨基酸序列；(b)可变区重链互补决定区2(VH-CDR2)，其包含SEQ ID NO:3(HSGGGD)或4(SIHSGGGDTYYRDSVKG)中所示的氨基酸序列；以及(c)可变区重链互补决定区3(VH-CDR3)，其包含SEQ ID NO:5(GRTPTGYYFDH)中所示的氨基酸序列；并且所述免疫球蛋白可变区轻链包含：(d)可变区轻链互补决定区1(VL-CDR1)，其包含SEQ ID NO:7(RASEGIHDGLA)中所示的氨基酸序列；(e)可变区轻链互补决定区2(VL-CDR2)，其包含SEQ ID NO:11(NANSLHS)中所示的氨基酸序列；以及(f)可变区轻链互补决定区3(VL-CDR3)，其包含SEQ ID NO:12(QQYYDYPLT)中任一个中所示的氨基酸序列。在某些实施方案中，所述重组抗体还包含人轻链恒定区和人重链恒定区。在某些实施方案中，所述重组抗体是人源化的。

在某些实施方案中，所述FLT3激动性抗体包含免疫球蛋白可变区重链和免疫球蛋白可变区轻链，其中所述免疫球蛋白可变区重链包含：(a)可变区重链互补决定区1(VH-CDR1)，其包含SEQ ID NO:1(GFTFSNY)、2(NYGMA)或29(GFTFSNYGMA)中所示的氨基酸序列；(b)可变区重链互补决定区2(VH-CDR2)，其包含SEQ ID NO:3(HSGGGD)或4(SIHSGGGDTYYRDSVKG)中所示的氨基酸序列；以及(c)可变区重链互补决定区3(VH-CDR3)，其包含SEQ ID NO:5(GRTPTGYYFDH)中所示的氨基酸序列；并且所述免疫球蛋白可变区轻链包含：(d)可变区轻链互补决定区1(VL-CDR1)，其包含SEQ ID NO:8(RASEGIHSGLA)中所示的氨基酸序列；(e)可变区轻链互补决定区2(VL-CDR2)，其包含SEQ ID NO:11(NANSLHS)中所示的氨基酸序列；以及(f)可变区轻链互补决定区3(VL-CDR3)，其包含SEQ ID NO:12(QQYYDYPLT)中任一个中所示的氨基酸序列。在某些实施方案中，所述重组抗体还包含人轻链恒定区和人重链恒定区。在某些实施方案中，所述重组抗体是人源化的。

在某些实施方案中，所述FLT3激动性抗体包含免疫球蛋白可变区重链和免疫球蛋白可变区轻链，其中所述免疫球蛋白可变区重链包含：(a)可变区重链互补决定区1(VH-CDR1)，其包含SEQ ID NO:1(GFTFSNY)、2(NYGMA)或29(GFTFSNYGMA)中所示的氨基酸序列；(b)可变区重链互补决定区2(VH-CDR2)，其包含SEQ ID NO:3(HSGGGD)或4(SIHSGGGDTYYRDSVKG)中所示的氨基酸序列；以及(c)可变区重链互补决定区3(VH-CDR3)，其包含SEQ ID NO:5(GRTPTGYYFDH)中所示的氨基酸序列；并且所述免疫球蛋白可变区轻链包含：(d)可变区轻链互补决定区1(VL-CDR1)，其包含SEQ ID NO:9(RASEGIHTGLA)中所示的氨基酸序列；(e)可变区轻链互补决定区2(VL-CDR2)，其包含SEQ ID NO:11(NANSLHS)中所示的氨基酸序列；以及(f)可变区轻链互补决定区3(VL-CDR3)，其包含SEQ ID NO:12(QQYYDYPLT)中任一个中所示的氨基酸序列。在某些实施方案中，所述重组抗体还包含人轻链恒定区和人重链恒定区。在某些实施方案中，所述重组抗体是人源化的。

在某些实施方案中，所述FLT3激动性抗体包含免疫球蛋白可变区重链和免疫球蛋白可变区轻链，其中所述免疫球蛋白可变区重链包含：(a)可变区重链互补决定区1(VH-CDR1)，其包含SEQ ID NO:1(GFTFSNY)、2(NYGMA)或29(GFTFSNYGMA)中所示的氨基酸序列；(b)可变区重链互补决定区2(VH-CDR2)，其包含SEQ ID NO:3(HSGGGD)或4(SIHSGGGDTYYRDSVKG)中所示的氨基酸序列；以及(c)可变区重链互补决定区3(VH-CDR3)，其包含SEQ ID NO:5(GRTPTGYYFDH)中所示的氨基酸序列；并且所述免疫球蛋白可变区轻链包含：(d)可变区轻链互补决定区1(VL-CDR1)，其包含SEQ ID NO:10(RASEGIHLGLA)中所示的氨基酸序列；(e)可变区轻链互补决定区2(VL-CDR2)，其包含SEQ ID NO:11(NANSLHS)中所示的氨基酸序列；以及(f)可变区轻链互补决定区3(VL-CDR3)，其包含SEQ ID NO:12(QQYYDYPLT)中任一个中所示的氨基酸序列。在某些实施方案中，所述重组抗体还包含人轻链恒定区和人重链恒定区。在某些实施方案中，所述重组抗体是人源化的。

本文还描述了来自对FLT3具有激动剂活性的抗体的免疫球蛋白重链可变区和免疫球蛋白轻链可变区。

在某些实施方案中，本文描述了特异性结合FMS样酪氨酸激酶3(FLT3)的重组抗体，所述重组抗体包含：(a)免疫球蛋白重链可变区(VH)序列，其包含与SEQ ID NO:15、17、19、21或23中任一个中所示的氨基酸序列至少约85％、90％、95％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列；和(b)免疫球蛋白轻链可变区(VL)序列，其包含与SEQ ID NO:16、18、20、22、24、25、26、27和28中任一个中所示的氨基酸序列至少约85％、90％、95％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。在某些实施方案中，所述重组抗体包含：(a)免疫球蛋白重链可变区(VH)，其包含与SEQ ID NO:15中所示的氨基酸序列至少约85％、90％、95％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列；和(b)免疫球蛋白轻链可变区(VL)，其包含与SEQ ID NO:16中任一个中所示的氨基酸序列至少约85％、90％、95％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。SEQ ID NO:16、18、20、22或24中任一个的VL区的可变区轻链互补决定区1中的天冬酰胺是潜在的脱酰胺化位点。因此，本文考虑了VL-CDR区的突变体，其用另一种氨基酸取代天冬酰胺。在某些实施方案中，与NB1016或NB1063相比，用不同氨基酸取代不导致或仅导致忽略不计的如通过靶标结合或STAT5表达诱导所定义的亲和力或功能活性损失。在某些实施方案中，与NB1016或NB1063相比，用不同氨基酸取代导致少于约25％、20％、15％、10％或5％的靶标结合或STAT5表达诱导减少。在某些实施方案中，所述抗体的VL包含与SEQ ID NO:25、26、27和28中任一个中所示的氨基酸序列至少约85％、90％、95％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列，同时保留突变以减少VL-CDR1的脱酰胺化反应。

在某些实施方案中，本文描述了特异性结合FMS样酪氨酸激酶3(FLT3)的重组抗体，所述重组抗体包含：(a)免疫球蛋白重链可变区(VH)序列，其包含与SEQ ID NO:15中所示的氨基酸序列至少约85％、90％、95％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列；和(b)免疫球蛋白轻链可变区(VL)序列，其包含与SEQ ID NO:25、26、27和28中所示的氨基酸序列至少约85％、90％、95％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。在某些实施方案中，所述重组抗体包含：(a)免疫球蛋白重链可变区(VH)序列，其包含与SEQ ID NO:15中所示的氨基酸序列至少约85％、90％、95％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列；和(b)免疫球蛋白轻链可变区(VL)序列，其包含与SEQ ID NO:25中所示的氨基酸序列至少约85％、90％、95％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。在某些实施方案中，所述重组抗体包含：(a)免疫球蛋白重链可变区(VH)序列，其包含与SEQ ID NO:15中所示的氨基酸序列至少约85％、90％、95％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列；和(b)免疫球蛋白轻链可变区(VL)序列，其包含与SEQ ID NO:26中所示的氨基酸序列至少约85％、90％、95％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。在某些实施方案中，所述重组抗体包含：(a)免疫球蛋白重链可变区(VH)序列，其包含与SEQ ID NO:15中所示的氨基酸序列至少约85％、90％、95％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列；和(b)免疫球蛋白轻链可变区(VL)序列，其包含与SEQ ID NO:27中所示的氨基酸序列至少约85％、90％、95％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。在某些实施方案中，所述重组抗体包含：(a)免疫球蛋白重链可变区(VH)序列，其包含与SEQ ID NO:15中所示的氨基酸序列至少约85％、90％、95％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列；和(b)免疫球蛋白轻链可变区(VL)序列，其包含与SEQ ID NO:28中所示的氨基酸序列至少约85％、90％、95％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。

在一些实施方案中，当施用至个体时，本文的FLT3激动剂抗体导致树突状细胞或血液树突状细胞前体向肿瘤微环境的募集和/或扩增。在一些实施方案中，当施用至个体时，本文的FLT3激动剂抗体募集和/或扩增树突状细胞。在一些实施方案中，本文的FLT3激动剂抗体募集和/或扩增树突状细胞，树突状细胞可以通过针对细胞表面标记CDllc的阳性来鉴定。在一些实施方案中，当施用至个体时，本文的FLT3激动剂抗体募集和/或扩增常规树突状细胞(cDC)亚群–cDC1和cDC2。在一些实施方案中，当施用至个体时，本文的FLT3激动剂抗体募集和/或扩增浆细胞样树突状细胞(pDC)。在一些实施方案中，当施用至个体时，本文的FLT3激动剂抗体募集树突状细胞、常规树突状细胞亚群cDC1、cDC2浆细胞样树突状细胞或其任何组合。cDC1树突状细胞可以通过包含Lin^-HLA^-DR⁺CD11c⁺BDCA^-3⁺的细胞表面表达模式来鉴定。pDC树突状细胞可以通过包含Lin^-HLA^-DR⁺CD123⁺BDCA^-2⁺的细胞表面表达模式来鉴定。

本文所述的FLT3激动剂抗体可以进一步缀合至免疫调节部分。所述免疫调节部分可以包括能够扩增和/或激活树突状细胞或血液树突状细胞前体的任何部分。在某些实施方案中，所述免疫调节部分包括STING激动剂。干扰素基因刺激蛋白(STING)(又称为跨膜蛋白173(TMEM173))是免疫信号传导途径的有效激活因子，激活转录因子如STAT6和IRF3，导致I型干扰素的转录和分泌。在某些实施方案中，所述STING激动剂包括2',3'-cGAMP(CAS号，1441190-66-4)、4-[(2-氯-6-氟苯基)甲基]-N-(呋喃-2-基甲基)-3-氧代-1,4-苯并噻嗪-6-甲酰胺、MK-1454、ADU-S100/MIW815、SRCB-0074、SYNB1891、E-7766或SB11285。可以使用本领域已知的合适技术将STING激动剂与本公开文本的重组抗体或抗原结合片段共价偶联。STING激动剂可以按合适的药物与抗体比率(例如，1:1、2:1、3:1、4:1、5:1、6:1或7:1)与本公开文本的重组抗体或抗原结合片段共价偶联。

癌症的治疗

已经显示，在同基因甲基胆蒽(MCA)诱导的纤维肉瘤小鼠模型中，FLT3L导致体内树突状细胞数量的增加，并且在体内诱导肿瘤消退和抗肿瘤免疫应答。(参见Lynch,D.H.等人“Flt3 ligand induces tumor regression and antitumor immune responses invivo.”Nature Medicine,3(6),625–631.(1997))。然而，FLT3L疗法具有有限的药代动力学利用度和复杂的给药要求。研究显示，为了大幅降低肿瘤生长速度和诱导肿瘤消退需要FLT3L的至少10次每日注射，但14至19天的治疗似乎是最佳的。

已经显示，在MCA诱导的纤维肉瘤小鼠模型中，直至肿瘤激发后7天的每日FLT3L治疗导致肿瘤排斥。(参见Lynch,D.H.等人1997)。

在某些实施方案中，本文公开了可用于治疗癌症或肿瘤的抗体。治疗是指力求改善或减轻所治疗病症的方法。关于癌症，治疗包括但不限于肿瘤体积的减小、肿瘤体积生长的减少、无进展存活期或总体预期寿命的增加。在某些实施方案中，治疗将实现所治疗癌症的缓解。在某些实施方案中，治疗涵盖使用作为旨在防止先前治疗的癌症或肿瘤的复发或进展的预防或维持剂量。本领域技术人员应理解，并非所有个体都将对所施用的治疗有等同或完全反应，然而这些个体被认为是被治疗的。

在某些实施方案中，所述癌症或肿瘤是实体癌症或肿瘤。在某些实施方案中，所述癌症或肿瘤是血液癌症或肿瘤。在某些实施方案中，所述癌症或肿瘤包括乳腺肿瘤、心脏肿瘤、肺部肿瘤、小肠肿瘤、结肠肿瘤、脾脏肿瘤、肾脏肿瘤、膀胱肿瘤、头部肿瘤、颈部肿瘤、卵巢肿瘤、前列腺肿瘤、脑肿瘤、胰腺肿瘤、皮肤肿瘤、骨肿瘤、骨髓肿瘤、血液肿瘤、胸腺肿瘤、子宫肿瘤、睾丸肿瘤和肝脏肿瘤。在某些实施方案中，可以用本发明的抗体治疗的肿瘤包括腺瘤、腺癌、血管肉瘤、星形细胞瘤、上皮癌、生殖细胞瘤、胶质母细胞瘤、神经胶质瘤、血管内皮瘤、血管肉瘤、血肿、肝母细胞瘤、白血病、淋巴瘤、髓母细胞瘤、黑色素瘤、神经母细胞瘤、骨肉瘤、视网膜母细胞瘤、横纹肌肉瘤、肉瘤和/或畸胎瘤。在某些实施方案中，所述肿瘤/癌症选自肢端雀斑样黑色素瘤、光化性角化病、腺癌、腺样囊性癌、腺瘤、腺肉瘤、腺鳞癌、星形细胞肿瘤、前庭大腺癌、基底细胞癌、支气管腺癌、毛细血管类癌、癌、癌肉瘤、胆管癌、软骨肉瘤、囊腺瘤、内胚窦瘤、子宫内膜增生、子宫内膜间质肉瘤、子宫内膜样腺癌、室管膜肉瘤、斯温肉瘤(Swing's sarcoma)、局灶性结节性增生、胃泌素瘤(gastronoma)、生殖细胞系肿瘤、胶质母细胞瘤、胰高血糖素瘤、血管母细胞瘤、血管内皮瘤、血管瘤、肝腺瘤、肝腺瘤病、肝细胞癌、胰岛素瘤(insulinite)、上皮内瘤样病变、上皮内鳞状细胞瘤样病变、侵袭性鳞状细胞癌、大细胞癌、脂肪肉瘤、肺癌、成淋巴细胞性白血病、淋巴细胞性白血病、平滑肌肉瘤、黑色素瘤、恶性黑色素瘤、恶性间皮肿瘤、神经鞘瘤、髓母细胞瘤、髓上皮瘤、间皮瘤、粘液表皮样癌、髓性白血病、神经母细胞瘤、神经上皮腺癌、结节性黑色素瘤、骨肉瘤、卵巢癌、乳头状浆液性腺癌、垂体瘤、浆细胞瘤、假性肉瘤、前列腺癌、肺母细胞瘤、肾细胞癌、视网膜母细胞瘤、横纹肌肉瘤、肉瘤、浆液性癌、鳞状细胞癌、小细胞癌、软组织癌、生长抑素分泌肿瘤、鳞癌、鳞状细胞癌、未分化癌、葡萄膜黑色素瘤、疣状癌、阴道/外阴癌、舒血管肠肽瘤(VIPpoma)和肾母细胞瘤(Wilm's tumor)。在某些实施方案中，待用本发明的一种或多种抗体治疗的肿瘤/癌症包括脑癌、头颈癌、结直肠癌、急性髓性白血病、前B细胞急性成淋巴细胞性白血病、膀胱癌、星形细胞瘤(优选II、III或IV级星形细胞瘤)、胶质母细胞瘤、多形性胶质母细胞瘤、小细胞癌和非小细胞癌(优选非小细胞肺癌)、肺腺癌、转移性黑色素瘤、非雄激素依赖性转移性前列腺癌、雄激素依赖性转移性前列腺癌、前列腺腺癌和乳腺癌(优选乳腺导管癌和/或乳腺癌)。在某些实施方案中，用本公开文本的抗体治疗的癌症包括胶质母细胞瘤。在某些实施方案中，用本公开文本的一种或多种抗体治疗的癌症包括胰腺癌。在某些实施方案中，用本公开文本的一种或多种抗体治疗的癌症包括卵巢癌。在某些实施方案中，用本公开文本的一种或多种抗体治疗的癌症包括肺癌。在某些实施方案中，用本公开文本的一种或多种抗体治疗的癌症包括前列腺癌。在某些实施方案中，用本公开文本的一种或多种抗体治疗的癌症包括结肠癌。在某些实施方案中，所治疗的癌症包括胶质母细胞瘤、胰腺癌、卵巢癌、结肠癌、前列腺癌或肺癌。在某一实施方案中，所述癌症对于其他治疗是难治性的。在某一实施方案中，所治疗的癌症是复发性的。在某一实施方案中，所述癌症是复发性/难治性胶质母细胞瘤、胰腺癌、卵巢癌、结肠癌、前列腺癌或肺癌。

治疗方法

在某些实施方案中，本文所述的抗体可以通过适合于施用含抗体的药物组合物的任何途径施用至有需要的受试者，所述任何途径诸如像皮下、腹膜内、静脉内、肌内、瘤内或脑内等。在某些实施方案中，静脉内施用所述抗体。在某些实施方案中，按合适的剂量时间表(例如，每周、每周两次、每月、每月两次、每两周一次、每三周一次或每月一次等)施用所述抗体。在某些实施方案中，每三周一次施用所述抗体。可以按任何治疗有效量施用所述抗体。在某些实施方案中，治疗上可接受的量在约0.1mg/kg与约50mg/kg之间。在某些实施方案中，治疗上可接受的量在约1mg/kg与约40mg/kg之间。在某些实施方案中，治疗上可接受的量在约5mg/kg与约30mg/kg之间。

本文所述的FLT3激动性抗体具有比可溶性配体更有利的PK/PD特征，从而允许不需要每日施用的给药时间表。在一些实施方案中，给用本文所述的抗体的个体的剂量之间的给药间隔可以是约2天至约14天。在一些实施方案中，给用本文所述的抗体的个体的剂量之间的给药间隔可以是约2天至约3天、约2天至约4天、约2天至约5天、约2天至约6天、约2天至约7天、约2天至约8天、约2天至约9天、约2天至约10天、约2天至约11天、约2天至约12天、约2天至约14天、约3天至约4天、约3天至约5天、约3天至约6天、约3天至约7天、约3天至约8天、约3天至约9天、约3天至约10天、约3天至约11天、约3天至约12天、约3天至约14天、约4天至约5天、约4天至约6天、约4天至约7天、约4天至约8天、约4天至约9天、约4天至约10天、约4天至约11天、约4天至约12天、约4天至约14天、约5天至约6天、约5天至约7天、约5天至约8天、约5天至约9天、约5天至约10天、约5天至约11天、约5天至约12天、约5天至约14天、约6天至约7天、约6天至约8天、约6天至约9天、约6天至约10天、约6天至约11天、约6天至约12天、约6天至约14天、约7天至约8天、约7天至约9天、约7天至约10天、约7天至约11天、约7天至约12天、约7天至约14天、约8天至约9天、约8天至约10天、约8天至约11天、约8天至约12天、约8天至约14天、约9天至约10天、约9天至约11天、约9天至约12天、约9天至约14天、约10天至约11天、约10天至约12天、约10天至约14天、约11天至约12天、约11天至约14天或约12天至约14天。在一些实施方案中，给用本文所述的抗体的个体的剂量之间的给药间隔可以是约2天、约3天、约4天、约5天、约6天、约7天、约8天、约9天、约10天、约11天、约12天或约14天。在一些实施方案中，给用本文所述的抗体的个体的剂量之间的给药间隔可以是至少约2天、约3天、约4天、约5天、约6天、约7天、约8天、约9天、约10天、约11天或约12天。在一些实施方案中，给用本文所述的抗体的个体的剂量之间的给药间隔可以是至多约3天、约4天、约5天、约6天、约7天、约8天、约9天、约10天、约11天、约12天或约14天。在一些实施方案中，给用本文所述的抗体的个体的剂量之间的给药间隔可以是约1周至约5周。在一些实施方案中，给用本文所述的抗体的个体的剂量之间的给药间隔可以是约1周至约2周、约1周至约3周、约1周至约4周、约1周至约5周、约2周至约3周、约2周至约4周、约2周至约5周、约3周至约4周、约3周至约5周或约4周至约5周。在一些实施方案中，给用本文所述的抗体的个体的剂量之间的给药间隔可以是约1周、约2周、约3周、约4周或约5周。在一些实施方案中，给用本文所述的抗体的个体的剂量之间的给药间隔可以是至少约1周、约2周、约3周或约4周。在一些实施方案中，给用本文所述的抗体的个体的剂量之间的给药间隔可以是至多约2周、约3周、约4周或约5周。

在一些实施方案中，可以将本文所述的抗体施用至有风险患上癌症的个体或先前已经成功治疗癌症的个体，所述癌症包括已经治疗至临床缓解的癌症或具有微小残留病的癌症。

药学上可接受的赋形剂、载体和稀释剂

在某些实施方案中，将本公开文本的激动剂FLT3抗体包括在药物组合物中，所述药物组合物包含一种或多种药学上可接受的赋形剂、载体或稀释剂。在某些实施方案中，将本公开文本的抗体悬浮于无菌溶液中来施用。在某些实施方案中，所述溶液包含约0.9％NaCl或约5％右旋糖、葡萄糖或蔗糖。在某些实施方案中，所述溶液还包含以下中的一种或多种：缓冲剂，例如乙酸盐、柠檬酸盐、组氨酸、琥珀酸盐、磷酸盐、碳酸氢盐和羟甲基氨基甲烷(Tris)；表面活性剂，例如聚山梨醇酯80(Tween 80)、聚山梨醇酯20(Tween 20)和泊洛沙姆188；多元醇/二糖/多糖，例如葡萄糖、右旋糖、甘露糖、甘露醇、山梨糖醇、蔗糖、海藻糖和葡聚糖40；氨基酸，例如甘氨酸或精氨酸；抗氧化剂，例如抗坏血酸、甲硫氨酸；或螯合剂，例如EDTA或EGTA。在某些实施方案中，将本公开文本的抗体冻干运输/储存并在施用前重构。在某些实施方案中，冻干抗体配制品包含填充剂，如甘露醇、山梨糖醇、蔗糖、海藻糖和葡聚糖40。可以将冻干配制品包含在由玻璃构成的小瓶中。所述抗体在配制时(无论是否重构)可以在一定pH(通常小于7.0)下缓冲。在某些实施方案中，pH可以在4.5与6.5、4.5与6.0、4.5与5.5、4.5与5.0或5.0与6.0之间。

本文还描述了试剂盒，其包含在合适容器中的本文所述的一种或多种抗体以及选自以下的一种或多种另外的组分：使用说明书、稀释剂、赋形剂、载体和用于施用的装置。

在某些实施方案中，本文描述了制备癌症治疗剂的方法，其包括将一种或多种药学上可接受的赋形剂、载体或稀释剂与本公开文本的抗体混合。在某些实施方案中，本文描述了制备用于储存或运输的癌症治疗剂的方法，其包括冻干本公开文本的一种或多种抗体。

实施例

以下说明性实施例代表本文所述的组合物和方法的实施方案，并不意味着以任何方式进行限制。

实施例1-FLT3激动性抗体的产生和筛选

为了产生用于表征的抗体，进行大鼠免疫。为了最大化库多样性，选择多种抗原和大鼠品系用于免疫。因此，将Wistar大鼠和Sprague Dawley大鼠都用重组FLT3蛋白(ECD)、编码全长FLT3的DNA或编码在胞内结构域中具有导致其固有二聚化的氨基酸插入的全长FLT3的DNA进行免疫。选择具有阳性滴度的大鼠用于收获和杂交瘤融合。针对与FLT3的结合筛选杂交瘤上清液组，并且将选定的克隆直接推进到基于STAT5-萤光素酶报告物的测定中的初步功能筛选中。

将稳定表达人FLT3-STAT5-萤光素酶细胞以40,000个细胞/孔接种在96孔透明底黑色聚苯乙烯微板中的补充有10％FBS的DMEM中。第二天，将细胞在补充有0.1％FBS的DMEM中血清饥饿24小时。然后将细胞在37℃下用FLT3L或抗体处理18小时，并且使用ONE-Glo萤光素酶试剂定量萤光素酶信号。从单剂量筛选中，如图1中所示，鉴定出相对于FLT3L具有最高活性的三个克隆，其中一个是6B2(图1，星号)。将这些克隆推进用于另外的筛选。由于表达不良且用于下游筛选的数量不足，对6B2的V区进行测序并将其作为大鼠/人嵌合分子(6B2-chim)产生。随后将这三个克隆推进到同一STAT5-Luc测定中的全剂量反应曲线中，以确定相对效力。从此筛选中，克隆6B2突出显示为具有如图所示的优越活性。

实施例2-嵌合6B2抗体NB1016及其人源化变体的产生

将克隆6B2的重链和轻链进一步嫁接到人IgG4PAA和人κ轻链骨架上，以产生第二嵌合分子NB1016。“PAA”是用于表示以下突变的缩写：(i)S228P突变，其稳定铰链区以防止Fab臂交换(参见Silva等人“The S228P mutation prevents in vivo and in vitro IgG4Fab-arm exchange as demonstrated using a combination of novel quantitativeimmunoassays and physiological matrix preparation”J Biol Chem.290(9):5462-9(2015))；和(ii)F234A/L235A突变，其导致减弱的与FcγR和C1q的结合并有效地消除ADCC和CDC功能(参见Glaesner等人“Engineering and characterization of the long-acting glucagon-like peptide-1analogue LY2189265,an Fc fusion protein”Diabetes Metab Res Rev；26:287–296(2010))。还通过CDR嫁接产生了人源化NB1016变体，将大鼠mAb 6B2 V区与IMGT数据库进行blast比对，并且选择最接近的相关VH和VL种系框架区作为用于CDR嫁接的模板。CDR是基于KABAT编号方案来鉴定的。总计，产生了5 x VH和5 xVL人源化V区，从而基于人源化VH和VL的每个组合产生25种用于筛选的人源化变体。将25种人源化变体与NB1016一起在单一低剂量STAT5-Luc测定中进行筛选，以确定如

表1中所示的相对活性。

从表1中的筛选中，选择12种人源化变体以在检查AML5细胞增殖的二次功能筛选中以剂量反应进行测试。将AML5细胞在含20％FBS和200ng/mL FLT3L的α-MEM中培养至少1周，之后运行实验。在开始测定的前一天，使用补充有0.1％FBS但不含FLT3L的α-MEM对细胞血清饥饿过夜。然后添加抗体或FLT3L，并且将板在37℃下孵育72小时，并且使用CellTiter-Glo试剂(Promega)评估增殖。表2显示，12种变体全部是高度有效的，显示出彼此以及与嵌合分子NB1016相当的活性。因此，选择代表人源化VH1 x人源化VL1(SEQ ID NO:11和12)的NB1063用于基于框架使用选择和初步分析表征的进一步分析(SEC/HIC；数据未示出)。

实施例3-6B2激动作用需要受体二聚化，并且是非FcR依赖性的

为了理解顶级克隆6B2激动FLT3的机制，产生了单价6B2 Fab和二价6B2 F(ab)'2，并且在使用OCI-AML5细胞(已知表达Fcγ受体并且被调理为FLT3L依赖性的)的细胞增殖测定中测量抗体各自的功能活性。将OCI-AML5细胞在αMEM+20％热灭活FBS和200ng/mL重组FLT3L中调理2周，之后在αMEM+0.1％热灭活FBS(无FLT3L)中血清饥饿24小时。然后将细胞在37℃下用6B2、6B2 Fab、6B2 F(Ab)'2或同种型对照处理3天，并且使用CellTiter-Glo(Promega)测量细胞活力。如图3(左)中所示，二价6B2F(ab)'₂保留了等同于6B2的激动功能，这表明FLT3激动与FcR接合无关。然而，单价6B2 Fab在此测定中没有显示出功能活性(图3右)，这表明FLT3激动需要FLT3的二聚化。

实施例4-易感性鉴定和NB1063变体产生

NB1063轻链的CDR1含有“NG”氨基酸基序。此基序代表脱酰胺化位点，其可能导致下游制造中的药物产品异质性。因此，产生了一系列轻链变体以去除此易感性并鉴定具有与NB1063相当的活性的变体。总计，产生了4种变体(N31D、N31S、N31T和N31L)，并且与NB1063平行地以剂量反应在AML5增殖测定中进行测试，结果示出在表3中。从此筛选中，将NB1113鉴定为去除了脱酰胺化位点的先导人源化轻链变体(N31S)，以用于在基于人原代细胞的测定中进行最终测试。

实施例5-NB1113对人和食蟹猴FLT3的结合和功能活性

由于NB1113与人FLT3结合，但不与小鼠FLT3结合，因此在人和食蟹猴(cyno)FLT3表达系统两者中评价了NB1113的结合和功能活性。将稳定表达人和食蟹猴FLT3-STAT5-萤光素酶细胞用于结合和功能测定两者。通过以下方式评估NB1113与人或食蟹猴FLT3的结合：使用在PBS+2％FBS中不同浓度的NB1113进行流式细胞术，之后使用AF488抗人IgG(H+L)二抗进行检测。如图4中所示，NB1113与人和食蟹猴FLT3两者类似地结合，其EC50为1.36nM(人)和0.90nM(食蟹猴)。这些结果证明了NB1113与人和猴FLT3的交叉反应性，同时也证明了NB1113的效力。

为了评估NB1113功能活性，将人和食蟹猴FLT3-STAT5-萤光素酶细胞以40,000个细胞/孔接种在96孔透明底黑色聚苯乙烯微板中的补充有10％FBS的DMEM中。第二天，将细胞在补充有0.1％FBS的DMEM中血清饥饿24小时。然后将细胞在37℃下用NB1113处理18小时，并且使用ONE-Glo萤光素酶试剂(Promega)定量萤光素酶信号。如图5中所示，NB1113在人和食蟹猴FLT3-STAT5-萤光素酶测定两者中显示出相似的活性，其EC50为1.1nM(人)和1.6nM(食蟹猴)。

实施例6-树突状细胞(DC)扩增测定

由于FLT3激动导致树突状细胞扩增，因此在相关的生理模型中对NB1113进行测试。人骨髓是从商业来源获得的，并且通过悬浮于ACK裂解缓冲液中耗尽了红细胞。将所得的RBC裂解的骨髓细胞重悬浮于含10％FBS、200nM L-谷氨酰胺和50uMβ-巯基乙醇的RPMI1640培养基中，并且以1.5x10⁵个细胞/孔接种于96孔培养板中。将培养物在存在FLT3L或NB1113的情况下以剂量反应孵育十二天。在这段时间结束时，使用标准流式细胞术染色方案和针对CD1c和HLA-DR+的抗体以及活-死染色通过流式细胞术分析细胞的树突状细胞增殖。如图6中所示，NB1113显示出与FLT3L相当的树突状细胞的有效扩增。

实施例7-对食蟹猴中NB1113和DC扩增的药代动力学分析

NB1113与食蟹猴FLT3结合，因此在雌性食蟹猴中评价了NB1113在体内扩增DC的药代动力学和能力。将亚洲起源的雌性食蟹猴(长尾猕猴(Macaca fascicularis))分配至两组并且分别接受1mg/kg或10mg/kg的NB1113。在给药阶段的第1天使动物通过经由隐静脉的静脉内推注接受单剂量，体积为5mL/kg。媒介物/稀释剂是磷酸盐缓冲盐水(PBS)，pH 7.4(1X)。毒性评估是基于死亡率、临床观察结果、体重、定性食物消耗量和临床病理学。向食蟹猴单次静脉内施用1或10mg/kg NB1113具有良好耐受性，没有NB1113相关的临床观察结果。在给药前1天以及给药后大约0.25、2、6、12、24、48、96、168、336、504和672小时，经由股静脉采集用于药代动力学评价的血液样品。将血液采集到血清分离管(不含抗凝剂)中，允许在室温下凝结，在的1小时内离心并在-60℃采集至-80℃下储存，直到分析。使用LC-MS/MS分析来使用液相色谱-串联质谱(LC-MS/MS)方法确定猴血清样品中NB1113的浓度。暴露(如通过在时间0的NB1113平均反向外推浓度(C₀)评估的)、最大观察浓度(_Cmax)和给药后0至672小时的浓度-时间曲线下面积(AUC_0-672)值随着剂量水平从1mg/kg增加至10mg/kg而增加(图7)。平均C_max和AUC_0-672值的增加是大致成剂量比例的。10mg/kg NB1113的剂量水平对应于分别为257μg/mL和33,300h·μg/mL的第1天平均血清C_max和AUC_0-672值。

在给药前阶段期间两次以及在给药阶段的第5、8、15、22和28天，经由股静脉采集用于免疫分型的血液样品。使用抗凝剂钾EDTA采集血液，并且立即使用流式细胞术进行分析。(参见表4)

1或10mg/kg NB1113的施用导致在给药阶段第5天与第22天之间总DC(定义为Lin^-CD16^-HLA^-DR⁺细胞)、cDC2(定义为Lin^-CD16^-HLA^-DR⁺BDCA^-1⁺)以及pDC群体(定义为Lin-CD16-HLA-DR+CD123+/亮BDCA-2+)的增加(图8)。结果证明，NB1113的单一IV剂量可以在体内有效扩增DC。

在总T细胞(CD3+)、辅助性T细胞(Th：CD3+CD4+CD8-)、细胞毒性T细胞(CD3+CD4-CD8+)和B细胞(CD3-CD20+)群体中观察到的微小变化在幅度上较小并且在此物种中记录的生物变异性的正常范围内(图9)。NK细胞响应于NB1113处理略有减少，在整个分析阶段中水平保持低于给药前值。在单核细胞群体中观察到的小变化在动物与剂量组之间是可变的(图9)。

为了测试NB1113处理对血小板数量的影响，在给药阶段的第1、3、4、5、6、11和18天采集用于血液学分析的样品。经过股静脉或头静脉从禁食动物采集血液样品。与给药前阶段值相比，血小板计数从第2天至第6天大体降低(-1.1％至-17.8％)，并且从第8天至第22天增加(+1.1％至+42.8％)，之后它们到第28天回到基线值(图10)。降低的血小板计数被认为是NB1113相关的，这是鉴于在用FLT3受体配体处理的猴中的相似发现(Reeves等人“Systemic dendritic cell mobilization associated with administration of FLT3ligand to SIV-and SHIV-infected macaques.”AIDS Res Hum Retroviruses.12月；25(12):1313-28.(2009))。

注：由Lin-表示的完整表型表示为CD3-CD8-CD14-CD20。

虽然在本文已经显示和描述了本发明的优选实施方案，但对于本领域技术人员而言将明显的是，此类实施方案仅通过举例的方式来提供。在不背离本发明的情况下，本领域技术人员现在将想到许多变化、改变和替换。应当理解的是，本文所述的本发明的实施方案的各种替代方案可以用于实践本发明。

将本说明书中提及的所有出版物、专利申请、授权专利和其他文件均通过引用并入本文，如同具体且单独地指示将每个单独的出版物、专利申请、授权专利或其他文件通过引用以其整体并入一样。在通过引用并入的文本中包含的定义与本公开文本中的定义相抵触的程度上，将其排除。

Claims

1.一种结合FMS样酪氨酸激酶3(FLT3)的重组抗体或所述重组抗体的抗原结合片段，其中所述重组抗体或所述重组抗体的抗原结合片段包含：

a)可变区重链互补决定区1(VH-CDR1)，其包含SEQ ID NO:1(GFTFSNY)、2(NYGMA)或29(GFTFSNYGMA)中所示的氨基酸序列；

b)可变区重链互补决定区2(VH-CDR2)，其包含SEQ ID NO:3(HSGGGD)或4(SIHSGGGDTYYRDSVKG)中所示的氨基酸序列；

c)可变区重链互补决定区3(VH-CDR3)，其包含SEQ ID NO:5(GRTPTGYYFDH)中所示的氨基酸序列；

d)可变区轻链互补决定区1(VL-CDR1)，其包含SEQ ID NO:6至10(RASEGIHXGLA)中任一个中所示的氨基酸序列；

e)可变区轻链互补决定区2(VL-CDR2)，其包含SEQ ID NO:10(NANSLHS)中所示的氨基酸序列；以及

f)可变区轻链互补决定区3(VL-CDR3)，其包含SEQ ID NO:11(QQYYDYPLT)中任一个中所示的氨基酸序列；

其中X是任何氨基酸残基。

2.一种结合FMS样酪氨酸激酶3(FLT3)的重组抗体或所述重组抗体的抗原结合片段，其中所述重组抗体或所述重组抗体的抗原结合片段包含以下中的任何一个、两个、三个、四个或五个：

其中X是任何氨基酸残基。

3.根据权利要求1或权利要求2所述的重组抗体或所述重组抗体的抗原结合片段，其中所述VL-CDR1包含选自以下的氨基酸序列：SEQ ID NO:7(RASEGIHDGLA)；SEQ ID NO:8(RASEGIHSGLA)；SEQ ID NO:9(RASEGIHTGLA)；和SEQ ID NO:10(RASEGIHLGLA)。

4.根据权利要求1或权利要求2所述的重组抗体或所述重组抗体的抗原结合片段，其中所述VL-CDR1包含SEQ ID NO:8(RASEGIHSGLA)中所示的氨基酸序列。

5.根据权利要求1至4中任一项所述的重组抗体或所述重组抗体的抗原结合片段，所述重组抗体或所述重组抗体的抗原结合片段包含：

a)免疫球蛋白重链可变区(VH)序列，其包含与SEQ ID NO:15、17、19、21和23中任一个中所示的氨基酸序列至少约90％、95％、97％、98％或99％、或100％相同的氨基酸序列；以及

b)免疫球蛋白轻链可变区(VL)序列，其包含与SEQ ID NO:16、18、20、22、24、25、26、27和28中任一个中所示的氨基酸序列至少约90％、95％、97％、98％或99％、或100％相同的氨基酸序列。

6.根据权利要求5所述的重组抗体或所述重组抗体的抗原结合片段，其中：

a)所述免疫球蛋白重链可变区(VH)包含与SEQ ID NO:15中所示的氨基酸序列至少约90％、95％、97％、98％或99％、或100％相同的氨基酸序列；并且

b)所述免疫球蛋白轻链可变区(VL)包含与SEQ ID NO:16中所示的氨基酸序列至少约90％、95％、97％、98％或99％、或100％相同的氨基酸序列。

7.根据权利要求5所述的重组抗体或所述重组抗体的抗原结合片段，其中：

b)所述免疫球蛋白轻链可变区(VL)包含与SEQ ID NO:26中所示的氨基酸序列至少约90％、95％、97％、98％或99％、或100％相同的氨基酸序列。

8.一种特异性结合FMS样酪氨酸激酶3(FLT3)的重组抗体或所述重组抗体的抗原结合片段，所述重组抗体或所述重组抗体的抗原结合片段包含：

b)免疫球蛋白轻链可变区(VL)序列，其包含与SEQ ID NO:16、18、20、22、24、26、27和28中任一个中所示的氨基酸序列至少约90％、95％、97％、98％或99％、或100％相同的氨基酸序列。

9.根据权利要求8所述的重组抗体或所述重组抗体的抗原结合片段，其中：

10.根据权利要求8所述的重组抗体或所述重组抗体的抗原结合片段，其中：

11.根据权利要求1至10中任一项所述的重组抗体或所述重组抗体的抗原结合片段，其中所述重组抗体或所述重组抗体的抗原结合片段是嵌合的或人源化的。

12.根据权利要求1至11中任一项所述的重组抗体或所述重组抗体的抗原结合片段，其中所述重组抗体或所述重组抗体的抗原结合片段是IgG抗体。

13.根据权利要求1至12中任一项所述的重组抗体或所述重组抗体的抗原结合片段，其中所述重组抗体或所述重组抗体的抗原结合片段包含一个或多个突变以降低所述重组抗体或所述重组抗体的抗原结合片段的一种或多种效应子功能。

14.根据权利要求1至13中任一项所述的重组抗体或所述重组抗体的抗原结合片段，其中所述重组抗体或所述重组抗体的抗原结合片段的重链恒定区包含IGg4重链恒定区，其包含选自以下的以下氨基酸修饰或修饰组中的任一个：根据EU编号系统的IgG4修饰的N434A、N434H、T307A/E380A/N434A、M252Y/S254T/T256E、433K/434F/436H、T250Q、T250F、M428L、M428F、T250Q/M428L、N434S、V308W、V308Y、V308F、M252Y/M428L、D259I/V308F、M428L/V308F、Q311V/N434S、T307Q/N434A、E258F/V427T、S228P、L235E、S228P/L235E/R409K、S228P/L235E、K370Q、K370E、G446缺失、K447缺失及其任何组合。

15.根据权利要求1至14中任一项所述的重组抗体或所述重组抗体的抗原结合片段，其中所述重组抗体或所述重组抗体的抗原结合片段包括Fab、F(ab)₂、单结构域抗体或单链可变片段(scFv)。

16.根据权利要求1至15中任一项所述的重组抗体或所述重组抗体的抗原结合片段，其中所述重组抗体或所述重组抗体的抗原结合片段在与人外周血单核细胞和/或骨髓来源的细胞接触时增加树突状细胞或血液树突状细胞前体的量。

17.根据权利要求16所述的重组抗体或所述重组抗体的抗原结合片段，其中树突状细胞或血液树突状细胞前体的量增加的EC50小于约200皮摩尔(pM)。

18.根据权利要求1至17中任一项所述的重组抗体或所述重组抗体的抗原结合片段，其中所述重组抗体或所述重组抗体的抗原结合片段增加表达FLT3的细胞中的STAT5表达。

19.根据权利要求18所述的重组抗体或所述重组抗体的抗原结合片段，其中表达FLT3的所述细胞中STAT5表达增加的EC50等于或小于由人FLT3配体诱导的表达FLT3的细胞中STAT5表达增加的EC50。

20.根据权利要求1至19所述的重组抗体或所述重组抗体的抗原结合片段，所述重组抗体或所述重组抗体的抗原结合片段包含免疫调节部分。

21.根据权利要求20所述的重组抗体或所述重组抗体的抗原结合片段，其中所述免疫调节部分是干扰素基因刺激蛋白(STING)激动剂。

22.一种药物组合物，其包含根据权利要求1至21中任一项所述的重组抗体或所述重组抗体的抗原结合片段以及药学上可接受的赋形剂、载体或稀释剂。

23.根据权利要求22所述的药物组合物，其被配制用于静脉内施用。

24.根据权利要求22所述的药物组合物，其被配制用于皮下施用。

25.根据权利要求22所述的药物组合物，其被配制用于瘤内施用。

26.根据权利要求1至21中任一项所述的重组抗体或所述重组抗体的抗原结合片段或根据权利要求22至25中任一项所述的药物组合物，用于在治疗癌症中使用。

27.根据权利要求26所述的重组抗体或所述重组抗体的抗原结合片段，其中所述癌症包括胶质母细胞瘤、胰腺癌、乳腺癌、膀胱癌、肾癌、头颈癌、卵巢癌、结肠癌、宫颈癌、前列腺癌或肺癌。

28.一种治疗个体的癌症的方法，其包括将根据权利要求1至21中任一项所述的重组抗体或所述重组抗体的抗原结合片段或根据权利要求22至25中任一项所述的药物组合物施用至患有癌症的个体。

29.根据权利要求28所述的方法，其中所述癌症包括胶质母细胞瘤、胰腺癌、乳腺癌、膀胱癌、肾癌、头颈癌、卵巢癌、结肠癌、宫颈癌、前列腺癌或肺癌。

30.根据权利要求1至21中任一项所述的重组抗体或所述重组抗体的抗原结合片段或根据权利要求22至25中任一项所述的药物组合物，用于在扩增或分化树突状细胞或血液树突状细胞前体群体中使用。

31.一种在个体中扩增或分化树突状细胞或血液树突状细胞前体群体的方法，其包括将根据权利要求1至21中任一项所述的重组抗体或所述重组抗体的抗原结合片段或根据权利要求22至25中任一项所述的药物组合物施用至所述个体。

32.根据权利要求31所述的方法，其中所述树突状细胞或血液树突状细胞前体包括常规树突状细胞亚群cDC1、常规树突状细胞亚群cDC2、浆细胞样树突状细胞或其任何组合。

33.一种在患有肿瘤或癌症的个体中将树突状细胞或血液树突状细胞前体募集或扩增在肿瘤微环境中的方法，其包括将有效量的根据权利要求1至21中任一项所述的重组抗体或所述重组抗体的抗原结合片段或根据权利要求22至25中任一项所述的药物组合物施用至患有所述肿瘤或癌症的所述个体。

34.根据权利要求33所述的方法，其中所述树突状细胞或血液树突状细胞前体包括常规树突状细胞亚群cDC1、常规树突状细胞亚群cDC2、浆细胞样树突状细胞或其任何组合。

35.一种核酸，其编码根据权利要求1至19中任一项所述的重组抗体或所述重组抗体的抗原结合片段。

36.一种细胞，其包含根据权利要求35所述的核酸。

37.根据权利要求36所述的细胞，其中所述细胞是真核细胞。

38.根据权利要求37所述的细胞，其中所述细胞是中国仓鼠卵巢(CHO)细胞。

39.一种制备癌症治疗剂的方法，其包括将根据权利要求36至38中任一项所述的细胞在培养基中在足以将根据权利要求1至21中任一项所述的重组抗体或所述重组抗体的抗原结合片段分泌至所述培养基中的条件下孵育。

40.根据权利要求39所述的方法，其还包括使所述培养基经受至少一个纯化步骤。

41.一种制备癌症治疗剂的方法，其包括将根据权利要求1至21中任一项所述的重组抗体或所述重组抗体的抗原结合片段与药学上可接受的赋形剂、载体或稀释剂混合。

42.根据权利要求1至21中任一项所述的重组抗体或所述重组抗体的抗原结合片段或根据权利要求22至25中任一项所述的药物组合物在治疗癌症的方法中的用途。

43.根据权利要求42所述的所述重组抗体或所述重组抗体的抗原结合片段或所述药物组合物的用途，其中所述癌症包括胶质母细胞瘤、胰腺癌、乳腺癌、膀胱癌、肾癌、头颈癌、卵巢癌、结肠癌、宫颈癌、前列腺癌或肺癌。

44.根据权利要求1至21中任一项所述的重组抗体或所述重组抗体的抗原结合片段或根据权利要求22至25中任一项所述的药物组合物在扩增或分化树突状细胞或血液树突状细胞前体群体中的用途。

45.根据权利要求1至21中任一项所述的重组抗体或所述重组抗体的抗原结合片段或根据权利要求22至25中任一项所述的药物组合物在个体中扩增或分化树突状细胞或血液树突状细胞前体群体中的用途。

46.根据权利要求44或45所述的所述重组抗体或所述重组抗体的抗原结合片段或所述药物组合物的用途，其中所述树突状细胞或血液树突状细胞前体包括常规树突状细胞亚群cDC1、常规树突状细胞亚群cDC2、浆细胞样树突状细胞或其任何组合。

47.根据权利要求1至21中任一项所述的重组抗体或所述重组抗体的抗原结合片段或根据权利要求22至25中任一项所述的药物组合物在个体中将树突状细胞或血液树突状细胞前体募集至肿瘤微环境中的用途。

48.根据权利要求47所述的所述重组抗体或所述重组抗体的抗原结合片段或所述药物组合物的用途，其中所述树突状细胞或血液树突状细胞前体包括常规树突状细胞亚群cDC1、常规树突状细胞亚群cDC2、浆细胞样树突状细胞或其任何组合。

49.根据权利要求1至21中任一项所述的重组抗体或所述重组抗体的抗原结合片段和药学上可接受的赋形剂、载体或稀释剂在制造用于治疗癌症的药物中的用途。

50.根据权利要求49所述的所述重组抗体或所述重组抗体的抗原结合片段或所述药物组合物的用途，其中所述癌症包括胶质母细胞瘤、胰腺癌、乳腺癌、膀胱癌、肾癌、头颈癌、卵巢癌、结肠癌、宫颈癌、前列腺癌或肺癌。

51.根据权利要求1至21中任一项所述的重组抗体或所述重组抗体的抗原结合片段或根据权利要求22至25中任一项所述的药物组合物在制造用于治疗被诊断患有或怀疑患有癌症的个体的药物中的用途。

52.根据权利要求51所述的所述重组抗体或所述重组抗体的抗原结合片段或所述药物组合物的用途，其中所述癌症包括胶质母细胞瘤、胰腺癌、乳腺癌、膀胱癌、肾癌、头颈癌、卵巢癌、结肠癌、宫颈癌、前列腺癌或肺癌。

53.根据权利要求1至21中任一项所述的重组抗体或所述重组抗体的抗原结合片段或根据权利要求22至25中任一项所述的药物组合物在制造用于扩增或分化树突状细胞或血液树突状细胞前体群体的药物中的用途。

54.根据权利要求1至21中任一项所述的重组抗体或所述重组抗体的抗原结合片段或根据权利要求22至25中任一项所述的药物组合物在制造用于在患有癌症的个体中扩增或分化树突状细胞或血液树突状细胞前体群体的药物中的用途。

55.根据权利要求54所述的所述重组抗体或所述重组抗体的抗原结合片段或所述药物组合物的用途，其中所述树突状细胞或血液树突状细胞前体包括常规树突状细胞亚群cDC1、常规树突状细胞亚群cDC2、浆细胞样树突状细胞或其任何组合。

56.根据权利要求1至21中任一项所述的重组抗体或所述重组抗体的抗原结合片段或根据权利要求22至25中任一项所述的药物组合物在制造用于在患有癌症的个体中将树突状细胞或血液树突状细胞前体募集至肿瘤微环境的药物中的用途。

57.根据权利要求56所述的所述重组抗体或所述重组抗体的抗原结合片段或所述药物组合物的用途，其中所述树突状细胞或血液树突状细胞前体包括常规树突状细胞亚群cDC1、常规树突状细胞亚群cDC2、浆细胞样树突状细胞或其任何组合。