CN113474659A - Mcm5作为妇科癌症标记物的用途 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及用于检测受试者存在或不存在妇科癌症的方法，该方法包括(a)获取从受试者分离的非侵入性样本；(b)处理非侵入性样本以从非侵入性样本中的细胞释放至少一种生物标记物。本发明还涉及可用于此类方法的裂解缓冲液、单克隆抗体和试剂盒。本发明还涉及一种用于诊断受试者患有妇科癌症或良性妇科病症的方法。本发明还涉及一种用于区分与妇科癌症相关的非侵入性样本和与良性妇科癌症相关的非侵入性样本的方法。本发明进一步涉及一种用于将受试者分层为两个治疗组之一的方法。

Description

MCM5作为妇科癌症标记物的用途
技术领域
本发明涉及用于检测受试者存在或不存在妇科癌症的方法以及裂解缓冲液在所述方法中的用途。本发明还涉及一种用于诊断受试者患有妇科癌症或良性妇科病症的方法。本发明还涉及一种用于区分与妇科癌症相关的非侵入性样本和与良性妇科癌症相关的非侵入性样本的方法。本发明还涉及将受试者分层(stratifying)为两个治疗组之一的方法。本发明还涉及第一单克隆抗体和/或第二单克隆抗体在检测受试者存在或不存在妇科癌症的方法中的用途。本发明还涉及包含裂解缓冲液、第一单克隆抗体和/或第二单克隆抗体的试剂盒，以及所述试剂盒在检测受试者存在或不存在妇科癌症的方法中的用途。
背景技术
早期诊断妇科癌症(例如卵巢癌和子宫内膜癌)的方法存在未满足的医学需求。卵巢癌是英国女性癌症死亡的主要原因之一，每年有几乎4,300人死亡。这部分是由于卵巢癌在晚期表现出。在每年诊断出的7,000例卵巢癌中，由于与该疾病相关的非特异性症状，大多数将表现为晚期疾病。因此，人们对开发筛查程序以实现较早检测感兴趣，这有可能增加生存的可能性。目前，诊断为卵巢癌的患者中只有40％能存活5年。
有史以来规模最大的卵巢癌筛查试验(UKCTOCS)于2016年发表，结果发现，使用目前的筛查方法(包括CA125血液检测和经阴道扫描)，对死亡率没有显著影响。与对照人群相比，筛查的低特异性导致许多良性疾病患者经受了不必要的复杂手术(Lancet 2016；387：945–56)。
因此，对于能够检测早期疾病的卵巢癌筛查工具存在真正未满足的需求。
子宫内膜癌是英国女性中第四大最常被诊断出的癌症，每年有9000名女性被诊断出来。由于更特定的症状，子宫内膜癌的诊断相对较早。统计数据显示，在最早期被确诊时，95％的子宫内膜癌患者可以存活五年或更长时间，而在最晚期被确诊的患者中只有15％可以存活五年或更长时间。因此，通过使用子宫内膜癌筛查工具来增加更早期检测可能有助于提高存活率。
因此，对于能够以高特异性和敏感度诊断妇科癌症的非手术方法仍然存在真正未满足的需求。此外，对于可以在诊所或者甚至在家中轻松执行的此类方法，仍然存在真正未满足的需求。
发明内容
本发明提供了用于早期检测妇科癌症而无需侵入性手术治疗的方法、用途和试剂盒。本发明的方法可以使用非侵入性样本进行，因此适用于临床实验室和/或即时护理点(point-of-care)应用。此外，本发明的方法易于实施，因为它们不需要复杂的处理步骤。
特别地，本发明人已经证明，可以以高精度直接在非侵入性样本中容易地检测妇科癌症。本发明的方法、用途和试剂盒也已证明对低级别和早期妇科癌症具有特别高的敏感度。此外，本发明人已经发现，本发明的方法、用途和试剂盒能够在患有最常见良性妇科病症的受试者中准确地检测妇科癌症。这些结果表明，在非侵入性样本中检测妇科癌症对于作为有症状人群的诊断测试和作为筛查工具在无症状人群中识别妇科癌症都具有明显的潜力。最终，这使得较早期诊断和治疗成为可能，这在妇科癌症中以提高生存率而闻名。
因此，在第一方面，本发明提供了一种用于检测受试者存在或不存在妇科癌症的方法，该方法包括以下步骤：
获取从受试者分离的非侵入性样本；和
检测至少一种生物标记物或确定至少一种生物标记物的浓度。
在一个实施方式中，非侵入性样本选自尿液样本、卫生棉条样本和阴道拭子样本。
在一个实施方式中，该方法进一步包括处理非侵入性样本以从非侵入性样本中的细胞释放至少一种生物标记物的步骤。在一个实施方式中，该方法进一步包括将经确定的至少一种生物标记物的浓度与参照进行比较。参照可以是针对从一个或多个健康个体制备的一个或多个样本确定的至少一种生物标记物的平均浓度。
在一个实施方式中，如果与参照相比，至少一种生物标记物的浓度异常，则可能存在妇科癌症。在一个实施方式中，如果至少一种生物标记物的浓度高于参照，则可能存在妇科癌症。
在一个实施方式中，确定至少一种生物标记物的浓度的步骤包括：进行ELISA测定以检测至少一种生物标记物或测量至少一种生物标记物的浓度。在一个实施方式中，如果确定至少一种生物标记物的浓度高于5pg/mL、6pg/mL、7pg/mL、8pg/mL、9pg/mL、10pg/mL、11pg/mL、12pg/mL、13pg/mL、14pg/mL、15pg/mL、16pg/mL、17pg/mL、18pg/mL、19pg/mL、20pg/mL、21pg/mL、22pg/mL、23pg/mL、24pg/mL、25pg/mL、26pg/mL、27pg/mL、28pg/mL、29pg/mL、30pg/mL、35pg/mL、45pg/mL、50pg/mL、55pg/mL、60pg/mL、65pg/mL或70pg/mL，则可能存在妇科癌症。在一个实施方式中，如果确定至少一种生物标记物的浓度高于约12pg/mL，则可能存在妇科癌症。在一个实施方式中，如果确定至少一种生物标记物的浓度高于约17pg/mL，则可能存在妇科癌症。在一个实施方式中，如果确定至少一种生物标记物的浓度高于约70pg/mL，则可能存在妇科癌症。
在一个实施方式中，应用12pg/mL、17pg/mL或70pg/mL的截止值(cut-off)。在一个实施方式中，应用12pg/mL的截止值。在这种情况下，用户确定至少一种生物标记物的浓度是否高于截止值，并且如果是，则确定可能存在妇科癌症。
在一个实施方式中，非侵入性样本是尿液样本。
在一个实施方式中，该方法是一种用于诊断受试者中妇科癌症的方法，任选地，其中该方法还包括以下步骤：
如果可能存在妇科癌症，则诊断受试者患有妇科癌症。
在一个实施方式中，处理非侵入性样本以释放至少一种生物标记物的步骤包括：使非侵入性样本暴露于能够从非侵入性样本中的细胞释放至少一种生物生物标记物的裂解缓冲液。
在另一方面，本发明提供了一种用于诊断受试者患有妇科癌症或良性妇科病症的方法，该方法包括以下步骤：
提供先前从受试者分离的非侵入性样本；
确定非侵入性样本中至少一种生物标记物的浓度；
将非侵入性样本中至少一种生物标记物的浓度与参照进行比较；
如果非侵入性样本中至少一种生物标记物的浓度高于参照，则诊断该受试者患有妇科癌症，或者如果非侵入性样本中至少一种生物标记物的浓度低于参照，则诊断该受试者患有良性妇科病症。
另一方面，本发明提供了一种用于区分与妇科癌症相关的非侵入性样本和与良性妇科癌症相关的非侵入性样本的方法，该方法包括以下步骤：
提供先前从受试者分离的非侵入性样本；
确定非侵入性样本中至少一种生物标记物的浓度；
将非侵入性样本中至少一种生物标记物的浓度与参照进行比较；
如果非侵入性样本中至少一种生物标记物的浓度高于参照，则确定非侵入性样本与妇科癌症相关，或者如果非侵入性样本中至少一种生物标记物的浓度低于参照，则确定非侵入性样本与良性妇科病症相关。
在另一方面，本发明提供用于将受试者分层为第一或第二治疗组的方法，该方法包括以下步骤：
提供先前从受试者分离的非侵入性样本；
确定非侵入性样本中至少一种生物标记物的浓度；
基于非侵入性样本中至少一种生物标记物的浓度，将受试者分配到两个治疗组中的一个，其中第一治疗组接受妇科癌症的治疗，第二治疗组不接受治疗或接受良性妇科病症的治疗。
在一个实施方式中，如果非侵入性样本中至少一种生物标记物的浓度高于参照，则将受试者分层为第一治疗组，或者如果非侵入性样本中至少一种生物标记物的浓度低于参照，则将受试者分层为第二治疗组。
在本文描述的用于诊断受试者患有妇科癌症或良性妇科病症的方法、本文描述的用于区分与妇科癌症相关的非侵入性样本和与良性妇科癌症相关的非侵入性样本的方法、或者本文描述的用于将受试者分层为第一或第二治疗组的方法的具体实施方式中：
(i)良性妇科病症选自停经后出血(post-menopausal bleeding，PMB)、子宫内膜异位、纤维瘤和多囊卵巢综合征(polycystic ovary syndrome，PCOS)；
(ii)非侵入性样本为尿液样本；
(iii)至少一种生物标记物是MCM蛋白，任选地MCM5；
(iv)确定至少一种生物标记物浓度的步骤包括进行ELISA测定以检测至少一种生物标记物或确定至少一种生物标记物的浓度，任选地进行MCM5 ELISA测定；和/或
(v)参照约为12pg/mL。
在一个实施方式中，处理非侵入性样本以释放至少一种生物标记物的步骤包括：
使非侵入性样本通过用于捕获细胞的过滤器，从而将细胞捕获在过滤器中；
使裂解缓冲液通过过滤器，使得捕获的细胞暴露于裂解缓冲液中；和/或
将过滤器孵育一段时间，使得裂解缓冲液使细胞释放至少一种生物标记物。
在一个实施方式中，至少一种生物标记物包含MCM蛋白或由MCM蛋白组成。在一个实施方式中，MCM蛋白为MCM5。在一个实施方式中，至少一种生物标记物是MCM蛋白，任选地MCM5，并且裂解缓冲液能够从非侵入性样本中的细胞释放MCM蛋白，任选地MCM5。
在一个实施方式中，裂解缓冲液能够从非侵入性样本中的细胞释放MCM5，并且基本上不使MCM5蛋白质变性。在一个实施方式中，裂解缓冲液不使抗体变性。
在一个实施方式中，裂解缓冲液包含去垢剂。去垢剂可以包括riton X-100或由Triton X-100组成。去垢剂可以包括浓度在0.01％和25％之间、0.01％和10％之间、0.05％和5％之间、0.1％和2％之间、0.5％和2％之间、0.75％和1.25％之间、或约1％的Triton X-100。去垢剂可以包括脱氧胆酸钠。去垢剂可包括浓度在0.1％和20％之间、0.1％和10％之间、0.1％和5％之间、0.5％和5％之间、0.5％和2.5％之间、0.75％和2.5％之间、0.75％和1.25％之间、或约1％的脱氧胆酸钠。去垢剂可包括十二烷基硫酸钠(SDS)。去垢剂可包含浓度在0.001％和10％之间、0.01％和5％之间、0.05％和5％之间、0.01％和1％之间、0.05％和1％之间、0.05％和0.5％之间、0.075％和0.25％之间、或约0.1％的十二烷基硫酸钠(SDS)。在一个实施方式中，去垢剂由Triton X-100、脱氧胆酸钠和十二烷基硫酸钠(SDS)组成。在一个实施方式中，去垢剂由在0.5％和2％之间的Triton X-100、在0.5％和2％之间的脱氧胆酸钠和0.05％和0.5％之间的十二烷基硫酸钠(SDS)组成。
在一个实施方式中，裂解缓冲液包含缓冲剂组分。缓冲剂组分的pH值可以在pH 4和pH9之间、在pH 5和pH 8.5之间、在pH 6和pH 8之间、在pH 6.5和pH 8之间、在pH 7和pH8之间、在pH 7.3和pH 7.9之间、在pH 7.4和pH 7.8之间、在pH 7.5和pH 7.7之间、或约pH7.6；和/或将裂解缓冲液的pH维持在pH 4和pH 9之间、pH 5和pH 8.5之间、pH 6和pH8之间、pH 6.5和pH 8之间、pH 7和pH 8之间、pH 7.3之间和pH 7.9之间、pH 7.4和pH 7.8之间、pH7.5和pH 7.7之间、或约pH 7.6。缓冲剂组分可以包括Tris或由Tris组成。缓冲剂组分可包含以下浓度的Tris或由以下浓度的Tris组成：大于1mM、1mM和350mM之间、5mM和200mM之间、5mM和100mM之间、5mM和50mM之间、5mM和40mM之间、5mM和35mM之间、10mM和35mM之间、15mM和35mM之间、15mM和30mM之间、20mM和30mM之间、或约25mM。在一个实施方式中，缓液组分由浓度在15mM和35mM之间的Tris组成。
在一个实施方式中，裂解缓冲液包含盐。盐可以是氯化钠。在一个实施方式中，裂解缓冲液包含浓度在10mM和350mM之间、在20mM和300mM之间、在50mM和250mM之间、在100mM和250mM之间、在100mM和200mM之间、在125mM和175mM之间、或约150mM的氯化钠。
在一个实施方式中，裂解缓冲液包括：
(i)在1mM和100mM之间的Tris；
(ii)在50mM和300mM之间的氯化钠；
(iii)在0.1％和5％之间的脱氧胆酸钠；
(iv)在0.01％和1％之间的十二烷基硫酸钠；和/或
(v)在0.1％和5％之间的Triton-X100。
在一个实施方式中，裂解缓冲液包括：
(i)在10mM和40mM之间的Tris；
(ii)在100mM和200mM之间的氯化钠；
(iii)在0.5％和2％之间的脱氧胆酸钠；
(iv)在0.05％和0.5％之间的十二烷基硫酸钠；和/或
(v)在0.5％和2％之间的Triton-X100。
在一个实施方式中，裂解缓冲液包括：
(i)约25mM的Tris；
(ii)约150mM的氯化钠；
(iii)约1％的脱氧胆酸钠；
(iv)约0.1％的十二烷基硫酸钠；和/或
(v)约1％的Triton-X100。
在一个实施方式中，检测至少一种生物标记物或确定至少一种生物标记物的浓度的步骤包括：
将非侵入性样本暴露于第一单克隆抗体和/或第二单克隆抗体；和
检测与第一单克隆抗体和/或第二单克隆抗体结合的至少一种生物标记物或确定与第一单克隆抗体和/或第二单克隆抗体结合的至少一种生物标记物的浓度。在一个实施方式中，第一单克隆抗体和第二单克隆抗体结合MCM5。
在一个实施方式中，第一个单克隆抗体是这样的抗体，其：
(i)结合至具有SEQ ID NO:1的氨基酸序列的多肽；
(ii)包含至少一个选自由以下组成的组的互补决定区(ComplementaryDetermining Region，CDR)：
(a)12A7 CDRH1，其具有SEQ ID NO:9的序列或具有与SEQ ID NO:9不同之处在于单个氨基酸取代的序列；
(b)12A7 CDRH2，其具有SEQ ID NO:11的序列或具有与SEQ ID NO:11不同之处在于单个氨基酸取代的序列；
(c)12A7 CDRH3，其具有SEQ ID NO:13的序列或具有与SEQ ID NO:13不同之处在于单个氨基酸取代的序列；
(d)12A7 CDRL1，其具有SEQ ID NO:3的序列或具有与SEQ ID NO:3不同之处在于单个氨基酸取代的序列；
(e)12A7 CDRL2，其具有SEQ ID NO:5的序列或具有与SEQ ID NO:5不同之处在于单个氨基酸取代的序列；和
(f)12A7 CDRL3，其具有SEQ ID NO:7的序列或具有与SEQ ID NO:7不同之处在于单个氨基酸取代的序列；
(iii)包含重链可变区，其序列与SEQ ID NO:29具有至少85％、90％、95％、98％、99％或100％同一性；
(iv)包含轻链可变区序列，其序列与SEQ ID NO:27具有至少85％、90％、95％、98％、99％或100％同一性；或者
(v)与(i)、(ii)、(iii)或(iv)的抗体竞争。
在一个实施方式中，第二单克隆抗体是这样的抗体，其：
(i)结合至具有SEQ ID NO:2的氨基酸序列的多肽；
(ii)包含至少一个选自由以下组成的组的互补决定区(CDR)：
(a)4B4 CDRH1，其具有SEQ ID NO:21的序列或具有与SEQ ID NO:21不同之处在于单个氨基酸取代的序列；
(b)4B4 CDRH2，其具有SEQ ID NO:23的序列或具有与SEQ ID NO:23不同之处在于单个氨基酸取代的序列；
(c)4B4 CDRH3，其具有SEQ ID NO:25的序列或具有与SEQ ID NO:25同之处在于单个氨基酸取代的序列；
(d)4B4 CDRL1，其具有SEQ ID NO:15的序列或具有与SEQ ID NO:15不同之处在于单个氨基酸取代的序列；
(e)4B4 CDRL2，其具有SEQ ID NO:17的序列或具有与SEQ ID NO:17不同之处在于单个氨基酸取代的序列；和
(f)4B4 CDRL3，其具有SEQ ID NO:19的序列或具有与SEQ ID NO:19不同之处在于单个氨基酸取代的序列；
(iii)包含重链可变区，其序列与SEQ ID NO:33具有至少85％、90％、95％、98％、99％或100％同一性相同；
(iv)包含轻链可变区序列，其序列与SEQ ID NO:31具有至少85％、90％、95％、98％、99％或100％同一性；或者
(v)与(i)、(ii)、(iii)或(iv)的抗体竞争。
在一个实施方式中，第一单克隆抗体和/或第二单克隆抗体对MCM5的亲和力在0.001-10nM、0.001-5nM、0.001-1nM、0.005-1nM、0.01-0.5nM、0.01-0.25nM、0.025-0.25nM或0.04-0.25nM的范围内。在一个实施方式中，第一和/或第二单克隆抗体对MCM5的亲和力为约0.01nM、0.02nM、0.03nM、0.04nM、0.05nM、0.06nM、0.07nM、0.08nM、0.09nM、0.1nM、0.2nM、0.3nM、0.4nM或0.5nM。在一个实施方式中，第一单克隆抗体和/或第二单克隆抗体对MCM5的亲和力约为0.05nM。在一个实施方式中，第一单克隆抗体和/或第二单克隆抗体对MCM5的亲和力约为0.2nM。在一个实施方式中，第一单克隆抗体和/或第二单克隆抗体对MCM5的亲和力约为0.233nM。在一个实施方式中，第一单克隆抗体对MCM5的亲和力约为0.05nM，第二单克隆抗体对MCM5的亲和力约为0.2nM。在一个实施方式中，第一单克隆抗体对MCM5的亲和力约为0.05nM，第二单克隆抗体对MCM5的亲和力约为0.233nM。在一个实施方式中，第一单克隆抗体是12A7且对MCM5的亲和力约为0.05nM，第二单克隆抗体是4B4且对MCM5的亲和力约为0.2nM。在一个实施方式中，第一单克隆抗体是12A7且对MCM5的亲和力约为0.05nM，第二单克隆抗体是4B4且对MCM5的亲和力约为0.233nM。
在一个实施方式中，第一单克隆抗体和/或第二单克隆抗体是Fab'2、F'(ab)2、Fv、单链抗体或双抗体(diabody)。
在一个实施方式中，第一单克隆抗体包括12A7 CDRH1、12A7 CDRH2和12A7CDRH3。在一个实施方式中，第一单克隆抗体包含12A7 CDRL1、12A7 CDRL2和12A7CDRL3。在一个实施方式中，第一单克隆抗体包含具有SEQ ID NO:9的序列的12A7CDRH1、具有SEQ ID NO:11的序列的12A7 CDRH2和具有SEQ ID NO:13的序列的12A7CDRH3。在一个实施方式中，第一单克隆抗体包含具有SEQ ID NO:3的序列的12A7CDRL1、具有SEQ ID NO:5的序列的12A7CDRL2和具有SEQ ID NO:7的序列的12A7CDRL3。
在一个实施方式中，第二单克隆抗体包含4B4 CDRH1、4B4 CDRH2和4B4 CDRH3。在一个实施方式中，第二单克隆抗体包含4B4 CDRL1、4B4 CDRL2和4B4 CDRL3。在一个实施方式中，第二单克隆抗体包含具有SEQ ID NO：21的序列的4B4 CDRH1、具有SEQ ID NO：23的序列的4B4 CDRH2和具有SEQ ID NO：25的序列的4B4 CDRH3。在一个实施方式中，第二单克隆抗体具有：具有SEQ ID NO:15的序列的4B4 CDRL1、具有SEQ ID NO:17的序列的4B4 CDRL2和具有SEQ ID NO:19的序列的4B4 CDRL3。
在一个实施方式中，第一单克隆抗体包含重链可变区，其序列与SEQ ID NO:29具有至少95％同一性。在一个实施方式中，第一单克隆抗体包含重链可变区，其序列与SEQ IDNO:29具有至少98％同一性。在一个实施方式中，第一单克隆抗体包含轻链可变区，其序列与SEQ ID NO:27具有至少95％同一性。在一个实施方式中，第一单克隆抗体包含轻链可变区，其序列与SEQ ID NO:27具有至少98％同一性。
在一个实施方式中，第二单克隆抗体包含重链可变区，其序列与SEQ ID NO:33具有至少95％同一性。在一个实施方式中，第二单克隆抗体包含重链可变区，其序列与SEQ IDNO:33具有至少98％同一性。在一个实施方式中，第二单克隆抗体包含轻链可变区，其序列与SEQ ID NO:31具有至少95％同一性。在一个实施方式中，第二单克隆抗体包含轻链可变区，其序列与SEQ ID NO:31具有至少98％同一性。
在一个实施方式中，非侵入性样本为尿液样本，且该方法比使用拭子样本执行的等效方法和/或使用卫生棉条样本执行的等效方法具有更高的敏感度。在一个实施方式中，非侵入性样本为尿液样本，且该方法比使用拭子样本执行的等效方法和/或使用卫生棉条样本执行的等效方法具有更高的特异性。
在一个实施方式中，该方法对妇科癌症的敏感度为至少约40％、42％、44％、46％、48％或50％。在一个实施方式中，该方法对妇科癌症的敏感度为至少约50％、52％、54％、55％、56％、57％、58％、59％、60％或61％。在一个实施方式中，该方法对妇科癌症的敏感度为至少约75％、76％、77％、78％、79％、80％或81％。在一个实施方式中，该方法对妇科癌症的敏感度为至少约90％、92％、93％、94％、95％或96％。
在一个实施方式中，该方法对妇科癌症的特异性为至少约40％、41％、42％或43％。在一个实施方式中，该方法对妇科癌症的特异性为至少约50％、52％、54％、55％、56％、57％、58％、59％或60％。在一个实施方式中，该方法对妇科癌症的特异性为至少约为60％、62％、64％、66％、68％、70％、71％、72％、73％、74％或75％。在一个实施方式中，该方法对妇科癌症的特异性为至少约80％、82％、83％、84％、85％或86％。
在一个实施方式中，非侵入性样本是尿液样本，该方法对妇科癌症的敏感度为至少约75％，且对妇科癌症的特异性为至少约55％。
在一个实施方式中，非侵入性样本是阴道拭子样本，该方法对妇科癌症的敏感度为至少约55％，且对妇科癌症的特异性为至少约70％。
在一个实施方式中，非侵入性样本是卫生棉条样本，该方法对妇科癌症的敏感度为至少约90％，且对妇科癌症的特异性为至少约35％。
在一个实施方式中，非侵入性样本是卫生棉条样本，该方法对妇科癌症的敏感度为至少约45％，且对妇科癌症的特异性为至少约80％。
在一个实施方式中，非侵入性样本是卫生棉条样本，该方法对妇科癌症的敏感度为至少约90％，且对妇科癌症的特异性为至少约80％。
在另一方面，本发明提供了本文所述的裂解缓冲液在检测受试者存在或不存在妇科癌症的方法中的用途。
在另一方面，本发明提供了本文所述的第一单克隆抗体和/或本文所述的第二单克隆抗体在检测受试者存在或不存在妇科癌症的方法中的用途。
在另一方面，本发明提供了试剂盒在检测受试者存在或不存在妇科癌症的方法中的用途，其中试剂盒包括：
(a)如本文所述的裂解缓冲液；
(b)如本文所述的第一单克隆抗体；和/或
(c)如本文所述的第二单克隆抗体。
在另一方面，本发明提供了一种试剂盒，包括：
(a)如本文所述的裂解缓冲液；
(b)如本文所述的第一种单克隆抗体；和/或
(c)如本文所述的第二单克隆抗体；
和
(d)裂解缓冲液和/或第一单克隆抗体和/或第二单克隆抗体在检测受试者存在或不存在妇科癌症的方法中的使用说明。
在本发明的方法、用途和试剂盒的具体实施方式中，妇科癌症是妇科恶性肿瘤。在本发明的方法、用途和试剂盒的具体实施方式中，妇科癌症是选自由以下组成的组中的妇科癌症：卵巢癌、子宫内膜癌症(endometrial cancer)、子宫癌、宫颈癌、外阴癌、阴道癌、输卵管肿瘤、上皮性卵巢肿瘤、卵巢畸胎瘤、未成熟卵巢畸胎瘤、间质瘤、生殖细胞卵巢肿瘤、未分化肿瘤、交界性卵巢肿瘤、子宫内膜癌(endometrial carcinoma)、子宫内膜腺癌、子宫内膜样腺癌、子宫内膜鳞状细胞癌、浆液性癌、浆液性子宫内膜上皮内癌、子宫内膜癌肉瘤、透明细胞癌、粘液癌、未分化子宫内膜癌、混合性子宫内膜癌、粘液性肿瘤、恶性苗勒氏管混合瘤、子宫内膜透明细胞肉瘤、颗粒细胞瘤、浆液性输卵管上皮内癌、未成熟囊性畸胎瘤、浆液性卵巢肿瘤和小细胞癌。
在本发明的方法、用途和试剂盒的具体实施方式中，妇科癌症是卵巢癌或子宫内膜癌。
在本发明的方法、用途和试剂盒的具体实施方式中，妇科癌症是卵巢癌。卵巢癌可选自由以下组成的组：上皮性卵巢肿瘤、卵巢畸胎瘤、未成熟卵巢畸胎瘤、间质瘤、生殖细胞卵巢肿瘤、未分化肿瘤、交界性卵巢肿瘤、粘液性肿瘤、颗粒细胞瘤和未成熟囊性畸胎瘤、浆液性卵巢肿瘤和小细胞癌。
在本发明的方法、用途和试剂盒的具体实施方式中，妇科癌症是子宫内膜癌。子宫内膜癌可选自由以下组成的组：子宫内膜癌、子宫内膜腺癌、子宫内膜样腺癌、子宫内膜鳞状细胞癌、浆液性癌、浆液性子宫内膜上皮内癌、子宫内膜癌肉瘤、透明细胞癌、粘液癌、未分化子宫内膜癌、混合性子宫内膜癌、恶性苗勒氏管混合瘤和子宫内膜透明细胞肉瘤。
在本发明的方法、用途和试剂盒的具体实施方式中，妇科癌症是低级别癌症。在本发明的方法、用途和试剂盒的具体实施方式中，妇科癌症是G1癌症。在本发明的方法、用途和试剂盒的具体实施方式中，妇科癌症是高级别癌症。在本发明的方法、用途和试剂盒的具体实施方式中，妇科癌症为G2或更高级癌症。
在本发明的方法、用途和试剂盒的具体实施方式中，妇科癌症是早期癌症。在本发明的方法、用途和试剂盒的具体实施方式中，妇科癌症是S1癌症。在本发明的方法、用途和试剂盒的具体实施方式中，妇科癌症是晚期癌症。在本发明的方法、用途和试剂盒的具体实施方式中，妇科癌症为S2或更高期癌症。
在本发明的方法、用途和试剂盒的具体实施方式中，妇科癌症是卵巢癌并且该方法对卵巢癌具有至少约25％的特异性。在本发明的方法、用途和试剂盒的具体实施方式中，妇科癌症是卵巢癌并且该方法对卵巢癌具有至少约50％的敏感度。在本发明的方法、用途和试剂盒的具体实施方式中，妇科癌症是卵巢癌并且该方法对卵巢癌具有至少约25％的特异性且对卵巢癌具有至少约50％的敏感度。
在本发明的方法、用途和试剂盒的具体实施方式中，妇科癌症是子宫内膜癌并且该方法对子宫内膜癌具有至少约40％的特异性。在本发明的方法、用途和试剂盒的具体实施方式中，妇科癌症是子宫内膜癌并且该方法对子宫内膜癌具有至少约80％的敏感度。在本发明的方法、用途和试剂盒的具体实施方式中，妇科癌症是子宫内膜癌并且该方法对子宫内膜癌具有至少约40％的特异性且对子宫内膜癌具有至少约80％的敏感度。
在本发明方法的具体实施方式中，非侵入性样本为尿液样本，妇科癌症为卵巢癌，该方法对卵巢癌具有至少约60％的敏感度且对卵巢癌具有至少约70％的特异性，任选地其中应用12pg/ml的MCM5浓度参照。
在本发明方法的具体实施方式中，非侵入性样本为尿液样本，妇科癌症为子宫内膜癌，该方法对子宫内膜癌具有至少约80％的敏感度且对子宫内膜癌具有至少约70％的特异性，任选地其中应用12pg/ml的MCM5浓度参照。
在本发明的方法的具体实施方式中，非侵入性样本为尿液样本，妇科癌症为低级别卵巢癌，且该方法对低级别卵巢癌具有至少约70％的敏感度，任选地其中应用12pg/ml的MCM5浓度参照。
在本发明的方法的具体实施方式中，非侵入性样本为尿液样本，妇科癌症为早期卵巢癌，且该方法对早期卵巢癌具有至少约70％的敏感度，任选地其中应用12pg/ml的MCM5浓度参照。
在本发明的方法的具体实施方式中，非侵入性样本为尿液样本，妇科癌症为低级别子宫内膜癌，且该方法对低级别子宫内膜癌具有至少约80％的敏感度，任选地其中应用12pg/ml的MCM5浓度参照。
在本发明的方法的具体实施方式中，非侵入性样本是尿液样本，妇科癌症是早期子宫内膜癌，且该方法对早期子宫内膜癌具有至少约85％的敏感度，任选地其中应用12pg/ml的MCM5浓度参照。
在本发明的方法、用途和试剂盒的具体实施方式中，受试者是患有良性妇科病症的受试者。良性妇科病症可选自停经后出血(PMB)、子宫内膜异位、纤维瘤和多囊卵巢综合征(PCOS)。
附图说明
图1示出比较子宫内膜癌症患者尿液和健康个体尿液中的MCM5水平的图。
图2示出比较来自子宫内膜癌症患者和健康个体的阴道拭子样本中的MCM5水平的图。
图3示出比较来自子宫内膜癌症患者和健康个体的阴道卫生棉条样本中的MCM5水平的图。
图4示出比较卵巢癌患者尿液和健康个体尿液中的MCM5水平的图。
图5示出比较来自卵巢癌患者和健康个体的阴道拭子样本中的MCM5水平的图。
图6示出比较来自卵巢癌患者和健康个体的阴道卫生棉条样本中的MCM5水平的图表。
图7示出比较来自妇科癌症患者的尿液样本(A)、阴道拭子样本(B)和阴道卫生棉条样本(C)以及来自健康个体的等效样本中的MCM5水平的图。
图8示出比较患者尿液样本中的MCM5水平的图(水平“截止”线表示12pg/mL)。(A)来自子宫内膜癌患者和良性妇科病症患者的尿液样本中的MCM5水平。(B)来自良性妇科病症患者以及1级(G1)和2级(G2)及更高级的子宫内膜癌患者的尿液样本中的MCM5水平。(C)良性妇科病症患者和子宫内膜癌患者1期(S1)、2期(S2)及更高期患者的尿液样本中的MCM5水平(注意，图8C未包括与三种未知分期癌症相关的数据)。
图9示出用于测量来自卵巢癌患者和良性妇科病症患者的尿液样本中的MCM5水平的MCM5ELISA的结果的图(水平“截止”线表示12pg/mL)。
图10示出比较来自良性妇科病症(即子宫内膜异位、多囊卵巢综合征(PCOS)、纤维瘤和停经后出血(PMB))患者和子宫内膜癌症患者的尿液中的MCM5水平的图(水平“截止”线表示12pg/mL)。
具体实施方式
定义
术语“包含”(包括、含有)应理解为具有其在本领域中的通常含义，即包括所陈述的特征或特征组，但该术语不排除也存在任何其他陈述的特征或特征组。例如，包含去垢剂的裂解缓冲液可以包含其他组分。
术语“由……组成”也应理解为具有其在本领域中的通常含义，即包括所述的特征或特征组，排除其他特征。例如，由去垢剂组成的裂解缓冲液含有去垢剂，不含其他组分。包含由聚山梨酯80组成的去垢剂的裂解缓冲液可以包含除去垢剂以外的组分，但裂解缓冲液中的去垢剂仅为聚山梨酯80。
对于每个使用“包含”或“包括”的实施方式，我们预期可使用“由……组成”或“由……构成”的另外实施方式。因此，每一次“包含”的披露都应被视为“由...组成”的披露。
序列同源性/同一性
尽管序列同源性也可以从功能相似性(即具有相似化学性质/功能的氨基酸残基)方面考虑，但在本文件的上下文中，优选在序列同一性方面表达同源性。
序列比较可以通过肉眼进行，或者更常见的是借助容易获得的序列比较程序进行。这些公开的和市售的计算机程序可以计算两个或更多个序列之间的同源性百分比(例如同一性百分比)。
可以计算连续序列的同一性百分比，即一个序列与另一序列比对，并且一个序列中的每个氨基酸直接与另一序列中的相应氨基酸进行比较，一次一个残基。这称为“无缺口(ungapped)”比对。通常，这种无缺口比对仅在相对较短数量的残基上进行(例如少于50个连续氨基酸)。为了在更长的序列上进行比较，使用缺口评分来产生最佳比对，以准确反映彼此之间具有插入或缺失的相关序列的同一性水平。进行这种比对的合适计算机程序是GCG Wisconsin Bestfit程序包(美国威斯康星大学；Devereux等人，1984，Nucleic AcidsResearch,12：387)。可以进行序列比较的其他软件的例子包括但不限于BLAST包、FASTA(Altschul等人，1990，J.Mol.Biol.215:403-410)和GENEWORKS比较工具套件。
通常在参考序列的长度上进行序列比较。例如，如果用户希望确定给定序列是否与SEQ ID NO:27具有95％同一性，则SEQ ID NO:27将是参考序列。例如，为了评估序列是否与SEQ ID NO:27(参考序列的一个例子)具有至少80％同一性，技术人员将在SEQ ID NO:27的长度上进行比对，并确定测试序列中的多少位置与SEQ ID NO:27的位置相同。如果至少80％的位置相同，则测试序列与SEQ ID NO:27具有至少80％同一性。如果序列短于SEQ IDNO：27，则缺口或缺失位置应被视为不同的位置。
技术人员知道可用于确定两个序列之间的同源性或同一性的不同计算机程序。例如，序列的比较和两个序列之间的同一性百分比的确定可以使用数学算法来完成。在实施方式中，两个氨基酸或核酸序列之间的同一性百分比是使用Needleman和Wunsch(1970)算法确定的，该算法已并入Accelrys GCG软件包的GAP程序中(可在http:// www.accelrys.com/products/gcg/获得)，其使用Blosum 62矩阵或PAM250矩阵，缺口权重为16、14、12、10、8、6或4，长度权重为1、2、3、4、5或6。
出于本发明的目的，术语“片段”是指参考序列的连续部分。例如，长度为50个核苷酸的SEQ ID NO:28的片段是指SEQ ID NO:28的50个连续核苷酸。在另一个例子中，长度为50个氨基酸的SEQ ID NO:27的片段是指SEQ ID NO:27的50个连续的氨基酸。
在本文件的上下文中，同源氨基酸序列被认为包括至少40％、50％、60％、70％、80％或90％同一性的氨基酸序列。最合适的是，与感兴趣的生物标记物具有至少90％序列同一性的多肽将被视为指示该生物标记物的存在；更合适地，在氨基酸水平上95％或更合适地98％同一性的多肽将被视为指示该生物标记物的存在。合适地，所述比较至少在被测定以确定感兴趣的生物标记物存在或不存在的多肽或片段的长度上进行。最合适地，在感兴趣的多肽的全长上进行比较。
参照/健康个体
在一些实施方式中，本发明的方法涉及检测至少一种生物标记物或确定从非侵入性样本中的细胞释放的至少一种生物标记物的浓度的步骤。在该方法涉及确定至少一种生物标记物的浓度时，该方法可以进一步包括将至少一种生物标记物的浓度与参照进行比较的步骤。
在一些实施方式中，在该方法涉及检测至少一种生物标记物的步骤时，检测至少一种生物标记物的步骤是定性步骤。在本发明的上下文中，检测至少一种生物标记物的定性步骤是在没有确定非侵入性样本中的至少一种生物标记物的浓度的数值和/或没有确定或使用先前确定的至少一种生物标记物浓度的数值作为参照的情况下执行的步骤。例如，用户可能无法确定至少一种生物标记物的量或浓度的实际值，但可以仅确定至少一种生物标记物的量或浓度与参照相比是否不同。任选地，检测所述至少一种生物标记物包括确定所述至少一种生物标记物的量或浓度是否高于参照。
在一些实施方式中，在本发明涉及检测至少一种生物标记物的步骤时，检测至少一种生物标记物的步骤包括：将从非侵入性样本中的细胞释放的至少一种生物标记物的量或浓度与参照进行定性比较。
适当地，参照可以是针对从一个或多个健康个体获得的样本确定的至少一种生物标记物的浓度。健康个体是指目前没有患有妇科癌症的个体。例如，健康个体可以是从未患过妇科癌症的个体。
在本发明方法中使用的参照是针对从一个或多个健康个体制备的样本确定的至少一种生物标记物的浓度时，参照可以是针对从单个健康个体获得的多个样本确定的至少一种生物标记物的平均浓度。可替代地，参照可以是针对从多个健康个体制备的多个样本确定的至少一种生物标记物的平均浓度。在这种情况下，“一个或多个样本”可以是至少10、100、500、1000、10000、100000或1000000个样本。
在一个实施方式中，参照可以是从一个或多个健康个体制备的一个或多个样本中确定的至少一种生物标记物的平均浓度，并行检测从本发明方法获得的非侵入性样本中释放的至少一种生物标记物或者确定其浓度，例如非侵入性样本受本发明的用于检测妇科癌症存在或不存在的方法的影响。
在另一个实施方式中，参照可以是先前针对从健康个体制备的一个或多个样本测定的至少一种生物标记物的平均浓度。在这样的实施方式中，可以通过将针对本发明中获得的非侵入性样本确定的至少一种生物标记物的浓度与参照进行比较而进行数值比较。这样做的优势是不必在每次分析来自受试者的非侵入性样本时通过平行确定参照来重复该分析。
适当地，参照可以与被分析的受试者相匹配，例如按性别，例如按年龄，例如通过种族背景或本领域众所周知的其他此类标准。例如，参照可以适当地匹配到特定的患者亚组，例如老年受试者、或有先前相关病史(如妇科癌症倾向)的受试者。
适当地，参照可以与被分析的样本类型相匹配。例如，从受试者中获得的非侵入性样本中生物标记物的浓度可以根据样本的类型或性质变化。因此，在一些实施方式中，期望用于确定参照的样本类型和非侵入性样本类型是相同的。例如，在非侵入性样本是尿液样本时，参照可以从一个或多个健康个体制备的一个或多个尿液样本确定。
在一些实施方式中，被确定的至少一种生物标记物的浓度可以与先前从相同受试者获得的非侵入性样本确定的至少一种生物标记物的浓度进行比较。在这些实施方式中，使用先前确定的至少一种生物标记物的浓度作为参照。这可以有益于监测受试者复发的可能性，而这又可以有益于监测受试者治疗的过程和/或有效性。
生物标记物检测
技术人员可以使用本领域已知的任何合适的技术来检测至少一种生物标记物或确定至少一种生物标记物的浓度。例如，可以通过以下来检测至少一种生物标记物或者确定至少一种生物标记物的浓度：与一个或多个配体的相互作用、一维或二维凝胶系分析系统、液相色谱法、组合的液相色谱和任何质谱技术(包括MSMS)、ICAT(R)或iTRAQ(R)、凝集试验、薄层色谱、NMR光谱、夹心免疫测定、酶联免疫吸附测定(ELISA)、放射免疫测定(RAI)、酶免疫测定(EIA)、侧流/免疫色谱条带测试、蛋白质印迹、免疫沉淀、包括使用金、银或乳胶颗粒和磁性颗粒或Q-点的基于颗粒的免疫测定、或本领域已知的任何其他合适的技术。
在本发明方法的一些实施方式中，检测至少一种生物标记物或确定至少一种生物标记物的浓度的步骤包括进行ELISA测定以检测至少一种生物标记物或确定至少一种生物标记物的浓度。在另一个实施方式中，ELISA测定是夹心ELISA测定。夹心ELISA测定包括以下步骤：使用已经结合在板上的“捕获抗体”捕获待检测的至少一种生物标记物或其浓度待确定的至少一种生物标记物，并检测使用“检测抗体”已捕获的至少一种生物标记物的量。检测抗体可以与诸如酶HRP(辣根过氧化物酶(Horse Radish Peroxidase))等标记物预缀合。然后可以将ELISA板暴露于标记的检测抗体，使得标记的检测抗体与捕获的至少一种生物标记物结合。在暴露于标记的检测抗体后，应清洗ELISA板以去除任何过量的未结合的标记检测抗体。然后可以将洗涤过的板暴露于试剂，该试剂的性能以可测量的方式通过(检测抗体的)标记改变。然后可以确定检测抗体的浓度。例如，如果检测抗体通过例如与HRP缀合而被标记，则ELISA板可能会暴露于3,3',5,5'-四甲基联苯胺(TMB)底物。然后可以通过与TMB转化成有色产物相对应的颜色变化的定量来确定检测抗体的浓度，并因此确定原始的非侵入性样本中的至少一种生物标记物的浓度。
在一些实施方式中，当检测至少一种生物标记物的步骤包括进行ELISA测定以检测至少一种生物标记物时，ELISA测定可以是定性ELISA测定。在本发明的上下文中，定性ELISA测定是在没有测定非侵入性样本中的至少一种生物标记物的浓度的数值，和/或没有确定或使用先前确定的至少一种生物标记物的浓度的数值作为参照时进行的。例如，在定性ELISA测定中，可以将有色产物(例如由与检测抗体连接的酶产生的有色产物)的强度与参照进行比较。在该实施方式中，有色产物的强度指示至少一种生物标记物的浓度，而无需确定至少一种生物标记物的浓度的数值。在这种类型的定性ELISA中使用的参照可以是先前确定的有色产物的阈值强度。
在一些实施方式中，当ELISA测定用于检测至少一种生物标记物或测量至少一种生物标记物的浓度时，如果至少一种生物标记物的浓度高于约5pg/mL、6pg/mL、7pg/mL、8pg/mL、9pg/mL、10pg/mL、11pg/mL、12pg/mL、13pg/mL、14pg/mL、15pg/mL、16pg/mL、17pg/mL、18pg/mL、19pg/mL、20pg/mL、25pg/mL、30pg/mL、35pg/mL、45pg/mL、50pg/mL、55pg/mL、60pg/mL、65pg/mL或70pg/mL，任选地高于约12pg/mL，则可能存在妇科癌症。在一个实施方式中，在使用ELISA测定检测至少一种生物标记物或测量至少一种生物标记物的浓度时，如果至少一种生物标记物的浓度高于约12pg/mL，则可能存在妇科癌症。在一个实施方式中，在使用ELISA测定检测至少一种生物标记物或测量至少一种生物标记物的浓度时，如果至少一种生物标记物的浓度高于约17pg/mL，则可能存在妇科癌症。在一个实施方式中，在使用ELISA测定检测至少一种生物标记物或测量至少一种生物标记物的浓度时，如果至少一种生物标记物的浓度高于约70pg/mL，则可能存在妇科癌症。
在一个实施方式中，在非侵入性样本是尿液样本并使用ELISA测定检测至少一种生物标记物或测量至少一种生物标记物的浓度时，如果至少一种生物标记物的浓度高于约12pg/mL，则可能存在妇科癌症。在一个实施方式中，在非侵入性样本是尿液样本并使用ELISA测定检测至少一种生物标记物或测量至少一种生物标记物的浓度时，如果至少一种生物标记物的浓度高于约70pg/mL，则可能存在妇科癌症。
在一个实施方式中，在非侵入性样本是拭子样本或卫生棉条样本并使用ELISA测定检测至少一种生物标记物或测量至少一种生物标记物的浓度时，如果至少一种生物标记物的浓度高于约12pg/mL，则可能存在妇科癌症。在一个实施方式中，在非侵入性样本是拭子样本或卫生棉条样本并使用ELISA测定检测至少一种生物标记物或测量至少一种生物标记物的浓度时，如果至少一种生物标记物的浓度高于约17pg/mL，则可能存在妇科癌症。在一个实施方式中，在非侵入性样本是拭子样本或卫生棉条样本并使用ELISA测定检测至少一种生物标记物或测量至少一种生物标记物的浓度时，如果至少一种生物标记物的浓度高于约70pg/mL，则可能存在妇科癌症。在一个实施方式中，在非侵入性样本是卫生棉条样本并使用ELISA测定检测至少一种生物标记物或测量至少一种生物标记物的浓度时，如果至少一种生物标记物的浓度高于约17pg/mL，则可能存在妇科癌症。在一个实施方式中，在非侵入性样本是卫生棉条样本并使用ELISA测定检测至少一种生物标记物或测量至少一种生物标记物的浓度时，如果至少一种生物标记物的浓度高于约70pg/mL，则可能存在妇科癌症。
当至少一种生物标记物是MCM蛋白(例如MCM5)和/或非侵入性样本是尿液样本和/或用于检测至少一种生物标记物的测定是ELISA测定时，特别优选地使用约12pg/mL的参照。已经发现，使用12pg/mL参照使得以高特异性和敏感度检测妇科癌症(或与妇科癌症相关的样本)。此外，如下面的实施例5中所讨论的，本发明人已经观察到，与来自妇科癌症患者的尿液样本中的MCM5水平相比，来自良性妇科病症患者的尿液样本具有统计学上显著更低的MCM5水平。特别地，发明人已发现，几乎所有从良性妇科病症受试者获得的尿液样本的MCM5浓度都低于12pg/mL–见图8和10(水平截止线为12pg/mL)。然而，相比之下，从子宫内膜癌患者获得的大部分尿液样本的MCM5浓度高于12pg/mL–参见图8和10。因此，使用12pg/mL参照允许妇科癌症(或与妇科癌症相关的样本)与良性妇科病症(或与良性妇科病症相关的样本)准确区分，良性妇科病症例如子宫内膜异位、多囊卵巢综合征(PCOS)、纤维瘤、停经后出血(PMB)。
在一些实施方式中，至少一种生物标记物是MCM蛋白，并且确定MCM蛋白浓度的步骤包括进行ELISA测定。在一些实施方式中，至少一种生物标记物是MCM蛋白，并且确定MCM蛋白浓度的步骤包括进行夹心ELISA测定。在一些实施方式中，至少一种生物标记物是MCM5蛋白，并且确定MCM5蛋白浓度的步骤包括进行ELISA测定。在一些实施方式中，生物标记物为MCM5蛋白，并且确定MCM5蛋白浓度的步骤包括进行夹心ELISA测定。
在一些实施方式中，ELISA测定或夹心ELISA测定包括使用一种或多种本文所述的单克隆抗体。在一个实施方式中，ELISA测定或夹心ELISA测定包括将非侵入性样本暴露于本文所述的第一单克隆抗体。在一个实施方式中，ELISA测定或夹心ELISA测定包括将非侵入性样本暴露于本文所述的第二单克隆抗体。在一个实施方式中，ELISA测定或夹心ELISA测定包括将非侵入性样本暴露于本文所述的第一单克隆抗体和/或本文所述的第二单克隆抗体。在一个实施方式中，ELISA测定或夹心ELISA测定包括将非侵入性样本暴露于本文所述的第一单克隆抗体和本文所述的第二单克隆抗体。在一些实施方式中，ELISA测定或夹心ELISA测定中使用的第一单克隆抗体和/或第二单克隆抗体与MCM5特异性结合。
在一些实施方式中，ELISA测定或夹心ELISA测定中使用的第一单克隆抗体与SEQID NO:1结合。在一些实施方式中，ELISA测定或夹心ELISA测定中使用的第二单克隆抗体与SEQ ID NO:2结合。在一些实施方式中，ELISA测定或夹心ELISA测定中使用的第一单克隆抗体与SEQ ID NO:1结合并且ELISA测定或夹心ELISA测定中使用的第二单克隆抗体与SEQ IDNO:2结合。
在一些实施方式中，ELISA测定或夹心ELISA测定中使用的第一单克隆抗体包含本文所述的12A7的CDR中的至少一个。在一些实施方式中，ELISA测定或夹心ELISA测定中使用的第二单克隆抗体包含本文所述的4B4的CDR中的至少一个。在一些实施方式中，ELISA测定或夹心ELISA测定中使用的第一单克隆抗体包含本文所述的12A7的CDR中的至少一个并且ELISA测定或夹心ELISA测定中使用的第二单克隆抗体包含本文所述的4B4的CDR中的至少一个。
在一些实施方式中，ELISA测定或夹心ELISA中使用的第一单克隆抗体是本文所述的包含12A7的CDR中的至少一个的单克隆抗体。在一些实施方式中，ELISA测定或夹心ELISA测定中使用的第二单克隆抗体是本文所述的包含4B4的CDR中的至少一个的单克隆抗体。在一些实施方式中，ELISA测定或夹心ELISA测定中使用的第一单克隆抗体是本文所述的包含12A7的CDR中的至少一个的单克隆抗体，并且ELISA测定或夹心ELISA测定中使用的第二单克隆抗体是本文所述的包含4B4的CDR中的至少一个的单克隆抗体。
在一些实施方式中，ELISA测定或夹心ELISA中使用的第一单克隆抗体是本文所述的单克隆抗体，其包含12A7的CDR中的至少一个且结合SEQ ID NO:1。在一些实施方式中，ELISA测定或夹心ELISA测定中使用的第二单克隆抗体是本文所述的单克隆抗体，其包含4B4的CDR中的至少一个且结合至SEQ ID NO:2。在一些实施方式中，ELISA测定或夹心ELISA测定中使用的第一单克隆抗体是本文所述的包含12A7的CDR中的至少一个且结合至SEQ IDNO:1的单克隆抗体，并且ELISA测定或夹心ELISA测定中使用的第二单克隆抗体是包含4B4的CDR中的至少一个且结合至SEQ ID NO:2的单克隆抗体。
在一些实施方式中，用于ELISA测定或夹心ELISA的第一单克隆抗体是12A7。在一些实施方式中，用于ELISA测定或夹心ELISA测定的第二单克隆抗体是4B4。在一些实施方式中，ELISA测定或夹心ELISA测定中使用的第一单克隆抗体是12A7，且ELISA测定或夹心ELISA测定中使用的第二单克隆抗体是4B4。
妇科癌症的检测
本方法用于“检测受试者存在或不存在妇科癌症”。在一个实施方式中，受试者是女性人类。在一个实施方式中，受试者是具有女性生殖系统的一个或多个组成部分的人类。例如，在一个实施方式中，受试者是具有一个或多个卵巢、一个或多个输卵管、子宫内膜、子宫、子宫颈、外阴、阴道和/或胎盘的人。
在一些实施方式中，受试者年龄在18、17、16、15、14、13、12、11、10、9、8、7、6、5、4、3、2或1岁以下。在一些实施方式中，受试者处于青春期前。在一些实施例中，受试者是成年人。在一些实施方式中，受试者处于绝经期。在一些实施方式中，受试者是绝经后的。在一些实施方式中，受试者是老年人，例如至少65、70、75、80、85或90岁。
在一些实施方式中，受试者患有妇科癌症。在一些实施方式中，受试者处于妇科癌症的缓解期。在一些实施方式中，受试者疑似患有妇科癌症。在一些实施方式中，受试者是健康的。在一些实施方式中，受试者处于形成妇科癌症的风险。在一些实施方式中，受试者具有增加的形成妇科癌症的风险。在受试者先前已被鉴定为携带指示形成妇科癌症的风险增加的遗传标记时，受试者可能处于形成妇科癌症的风险或者受试者可能具有增加的形成妇科癌症的风险。在受试者具有妇科癌症家族史时，受试者可能处于形成妇科癌症的风险或者受试者可能具有增加的形成妇科癌症的风险。在受试者正患有或者先前已经被诊断患有癌症，例如非妇科癌症时，受试者可能处于形成妇科癌症的风险或者受试者可能具有增加的形成妇科癌症的风险。
在一些实施方式中，受试者正患有选自由以下组成的组的疾病：停经后出血、子宫内膜异位、纤维瘤和多囊卵巢综合征。在一些实施方式中，受试者先前已被诊断患有选自由以下组成的组的疾病：停经后出血、子宫内膜异位、纤维瘤和多囊卵巢综合征。
在本发明的任何方法、用途或试剂盒中，受试者可能正患有停经后出血(PMB)。在本发明的任何方法、用途或试剂盒中，受试者可能正患有子宫内膜异位。在本发明的任何方法、用途或试剂盒中，受试者可能正患有纤维瘤。在本发明的任何方法、用途或试剂盒中，受试者可能正患有多囊卵巢综合征(PCOS)。
在一些实施方式中，受试者正处于形成选自由以下组成的组中的疾病的风险：停经后出血、子宫内膜异位、纤维瘤和多囊卵巢综合征。在一些实施方式中，受试者具有增加的形成选自由以下组成的组中的疾病的风险：停经后出血、子宫内膜异位、纤维瘤和多囊卵巢综合征。在受试者先前已经被鉴定为携带有分别指示形成停经后出血、子宫内膜异位、纤维瘤或者多囊卵巢综合征的风险增加的遗传标记时，受试者可能处于形成停经后出血、子宫内膜异位、纤维瘤和多囊卵巢综合征的风险或者可能具有增加的形成停经后出血、子宫内膜异位、纤维瘤和多囊卵巢综合征的风险。在受试者分别具有停经后出血、子宫内膜异位、纤维瘤和多囊卵巢综合征的家族史时，受试者可能处于形成停经后出血、子宫内膜异位、纤维瘤或多囊卵巢综合征的风险或者可能具有增加的形成停经后出血、子宫内膜异位、纤维瘤或多囊卵巢综合征的风险。在受试者正患有或者先前已经被诊断患有分别与停经后出血、子宫内膜异位、纤维瘤和多囊卵巢综合征有关的疾病或病症时，受试者可能处于形成停经后出血、子宫内膜异位、纤维瘤和多囊卵巢综合征的风险或者可能具有增加的形成停经后出血、子宫内膜异位、纤维瘤和多囊卵巢综合征的风险。
停经后出血(PMB)、子宫内膜异位、纤维瘤和多囊卵巢综合征(PCOS)可统称为良性妇科病症。此类病症被称为良性，因为尽管它们在医学上可能是严重的，但所述病症不是恶性的，因为所述病症没有扩散到或侵入其他组织的能力。因此，在本文所述的任何方法和用途中，受试者可能患有良性妇科病症，其任选地选自停经后出血(PMB)、子宫内膜异位、纤维瘤和多囊卵巢综合征(PCOS)。受试者可能先前已被诊断患有良性妇科病症，其任选地选自停经后出血(PMB)、子宫内膜异位、纤维瘤和多囊卵巢综合征(PCOS)。受试者可能处于形成良性妇科病症的风险中或具有增加的形成良性妇科病症的风险，良性妇科病症任选地选自停经后出血(PMB)、子宫内膜异位、纤维瘤和多囊卵巢综合征(PCOS)。如果受试者先前已经被鉴定为携带有指示形成良性妇科病症的风险增加的遗传标记，和/或如果受试者具有良性妇科病症的家族史，和/或如果受试者正患有或先前已经被诊断患有与良性妇科病症有关的疾病或病症时，则受试者可能处于形成良性妇科病症的风险中或具有增加的形成良性妇科病症的风险，良性妇科病症任选地选自停经后出血(PMB)、子宫内膜异位、纤维瘤和多囊卵巢综合征(PCOS)。
在其他实施方式中，受试者是雌性非人类哺乳动物或具有与所述非人类哺乳动物共有的雌性生殖系统中的一个或多个组分的非人类哺乳动物。非人类哺乳动物可以是灵长类动物、猫科动物、犬科动物、牛科动物、马科动物、鼠科动物、绵羊类动物(ovine)或猪科动物。
通常，诊断方法不可能100％的准确预测受试者是否存在癌症。因此，措辞“检测受试者存在或者不存在妇科癌症”可以理解指确定受试者是否可能存在或不存在妇科癌症。
在一些实施例中，如果与参照相比至少一种生物标记物的浓度异常，则可能存在妇科癌症。如果至少一种生物标记物的浓度与参照之间在统计学上存在显著差异，则可以称至少一种生物标记物的浓度与参照相比是异常的。例如，如果至少一种生物标记物的浓度显著低于参照，则所述至少一种生物标记物的浓度是异常的。替代地，如果至少一种生物标记物的浓度显著高于参照，则所述至少一种生物标记物的浓度是异常的。因此，在本发明的一个实施方式中，如果至少一种生物标记物的浓度高于参照，则可能存在妇科癌症。例如，在参照是至少一种生物标记物的平均浓度时，当至少一种生物标记物的浓度比参照高至少一个、至少两个、至少三个或至少四个标准差时，可能存在妇科癌症。
在一个实施方式中，如果至少一种生物标记物的浓度比参照高至少1.05倍、至少1.10倍、至少1.15倍、至少1.2倍、至少1.3倍、至少1.4倍、至少1.5倍、至少1.6倍、至少1.7倍、至少1.8倍、至少1.9倍、至少2.0倍、至少2.1倍、至少2.2倍、至少2.3倍、至少2.5倍、至少3倍、至少3.5倍、至少4倍、至少5倍、至少10倍、至少25倍、至少50倍、至少75倍或至少100倍时，则可能存在妇科癌症。
在一些实施方式中，如果与参照相比至少一种生物标记物的浓度正常，则可能不存在妇科癌症。如果至少一种生物标记物的浓度与参照之间在统计学上没有显著差异，则可以称至少一种生物标记物的浓度与参照相比是正常的。例如，如果至少一种生物标记物的浓度与参照之间的差异小于两个或至少一个标准差时，则该至少一种生物标记物的浓度与参照相比可被称为正常的。
在一些实施方式中，本发明的方法是用于诊断受试者妇科癌症的方法。在这样的实施方式中，如果针对非侵入性样本测定的至少一种生物标记物的浓度显著高于针对健康个体确定的平均值，则受试者可被诊断为患有妇科癌症。在这样的实施方式中，“针对健康个体确定的平均值”是一类如本文定义的“参照”。应当理解，本文定义的“参照”的各种实施方式和特征也可以适用于“针对健康个体确定的平均值”。在一些实施方式中，如果至少一种生物标记物的浓度高于针对健康个体确定的平均值加上针对健康个体确定的平均值的标准偏差的倍数，例如，高于平均值加上针对健康个体确定的平均值的1、2、3、4或5个标准差，则该至少一种生物标记物的浓度高于针对健康个体确定的平均值。替代地，如果至少一种生物标记物的浓度与针对健康个体确定的平均值没有显著差异，则受试者可能被诊断为没有患有妇科癌症。
敏感度和特异性
本发明的方法允许以高特异性和高敏感度检测妇科癌症。在医学诊断领域中并且如本文所使用的，术语“敏感度”(也称为真阳性率)是指本身被正确鉴定的实际阳性比例的量度。换句话说，诊断测试的敏感度可以表示为真阳性的数量，即正确鉴定为患有疾病的个体占测试群体中所有患有所述疾病的个体(即真阳性和假阴性结果的总和)的比例。因此，高敏感度的诊断测试是希望的，因为它很少会错误地鉴定患有疾病的个体。这意味着通过高度灵敏的测试获得的阴性结果很有可能排除该疾病。
在医学诊断领域中，并且如本文所用，术语“特异性”(也称为真阴性率)是指被正确识别的实际阴性比例的量度。换句话说，诊断测试的特异性可以表示为真阴性数量(即正确鉴定为没有患有疾病的健康个体)占测试群体中所有健康个体(即真阴性和假阳性结果的总和)的比例。因此，高特异性诊断测试是希望的，因为它很少错误地鉴定健康个体。这意味着通过高度特异的测试获得的阳性结果很有可能判定该疾病。
在医学诊断领域，如本文所用，术语“阳性预测值(PPV)”是指由诊断测试产生的所有阳性结果为真阳性结果的比例。换句话说，PPV可以定义为真阳性结果的数量除以真阳性结果和假阳性结果的总和。在医学诊断领域，如本文所用，术语“阴性预测值(NPV)”是指诊断测试产生的所有阴性结果为真阴性结果的比例。换句话说，NPV可以定义为真阴性结果的数量除以真阴性结果和假阴性结果的总和。
在医学诊断领域，如本文所用，“接受者操作特征(Receiver OperatingCharacteristic,ROC)曲线”是指所有可能的截止值的真阳性率(敏感度)对假阳性率(1-特异性)的图。在医学诊断领域，如本文所用，“约登指数(Youdens index)”是指ROC曲线与机会线(45度线)之间的距离最大的截止点。这些术语在本领域技术人员众所周知的。方法的特异性和/或敏感度可以通过对已知为阳性样本的样本(例如来自患有妇科癌症的患者的样本)和/或已知为阴性样本的样本(例如来自健康个体的样本)执行所述方法进行确定。因此，可以确定该方法正确鉴定已知阳性样本的程度(即该方法的敏感度/真阳性率)和/或已知阴性样本的程度(即该方法的特异性/真阴性率)。
在本发明方法的一些实施方式中，该方法对妇科癌症的敏感度为至少约40％、42％、44％、46％、48％或50％。在本发明的方法的一些实施例中，非侵入性样本是卫生棉条样本，并且该方法对妇科癌症的敏感度为至少约40％、42％、44％、46％、48％、50％。
在本发明方法的一些实施方式中，该方法对妇科癌症的敏感度为至少约50％、52％、54％、55％、56％、57％、58％、59％、60％或61％。在本发明方法的一些实施方式中，非侵入性样本是阴道拭子样本，并且该方法对妇科癌症的敏感度为至少约50％、52％、54％、55％、56％、57％、58％、59％、60％或61％。
在本发明方法的一些实施方式中，该方法对妇科癌症的敏感度为至少约75％、76％、77％、78％、79％、80％或81％。在本发明的方法的一些实施方式中，非侵入性样本是尿液样本，并且该方法对妇科癌症的敏感度至少为约75％、76％、77％、78％、79％、80％或81％。
在本发明方法的一些实施方式中，该方法对妇科癌症的敏感度为至少约90％、92％、93％、94％、95％或96％。在本发明的方法的一些实施方式中，非侵入性样本是卫生棉条样本，并且该方法对妇科癌症的敏感度为至少约90％、92％、93％、94％、95％或96％。
在本发明方法的一些实施方式中，该方法对妇科癌症的特异性为至少约40％、41％、42％或43％。在本发明方法的一些实施方式中，非侵入性样本是卫生棉条样本，并且该方法对妇科癌症的特异性为至少约40％、41％、42％或43％。
在本发明方法的一些实施方式中，该方法对妇科癌症的特异性为至少约50％、52％、54％、55％、56％、57％、58％、59％或60％。在本发明方法的一些实施方式中，非侵入性样本是尿液样本，并且该方法对妇科癌症的特异性为至少约50％、52％、54％、55％、56％、57％、58％、59％或60％。
在本发明方法的一些实施方式中，该方法对妇科癌症的特异性为至少约60％、62％、64％、66％、68％、70％、71％、72％、73％、74％或75％。在本发明方法的一些实施方式中，非侵入性样本是阴道拭子样本，该方法对妇科癌症的特异性为至少约60％、62％、64％、66％、68％、70％、71％、72％、73％、74％或75％。
在本发明方法的一些实施方式中，该方法对妇科癌症的特异性为至少约80％、82％、83％、84％、85％或86％。在本发明的方法的一些实施方式中，非侵入性样本是卫生棉条样本，并且该方法对妇科癌症的特异性为至少约80％、82％、83％、84％、85％或86％。
在本发明方法的一些实施方式中，非侵入性样本为尿液样本，该方法对卵巢癌的敏感度为至少约60％。在本发明方法的一些实施方式中，非侵入性样本是尿液样本，并且当应用12pg/mL截止值时，该方法对卵巢癌的敏感度为至少约60％。
在本发明方法的一些实施方式中，非侵入性样本为尿液样本，该方法对卵巢癌的特异性为至少约65％。在本发明方法的一些实施方式中，非侵入性样本是尿液样本，并且当应用12pg/mL截止值时，该方法对卵巢癌的特异性为至少约65％。
在本发明方法的一些实施方式中，非侵入性样本为尿液样本，该方法对卵巢癌的敏感度为至少约60％且对卵巢癌的特异性为至少约65％。在本发明的方法的一些实施方式中，非侵入性样本为尿液样本，当应用12pg/mL截止值时，该方法对卵巢癌的敏感度为至少约60％且对卵巢癌的特异性为至少约65％。
在本发明的方法的一些实施方式中，非侵入性样本为尿液样本，该方法具有至少约60％的卵巢癌敏感度、至少约65％的卵巢癌特异性、至少约15％的阳性预测值(PPV)和至少约90％的阴性预测值(NPV)。在本发明方法的一些实施方式中，非侵入性样本为尿液样本，当应用12pg/mL截止值时，该方法具有至少约60％的卵巢癌敏感度、至少约65％的卵巢癌特异性、至少约15％的阳性预测值(PPV)和至少约90％的阴性预测值(NPV)。
在本发明方法的一些实施方式中，非侵入性样本为尿液样本，且该方法对子宫内膜癌症的敏感度为至少约80％。在本发明方法的一些实施方式中，非侵入性样本是尿液样本，并且当应用12pg/mL截止值时，该方法对子宫内膜癌症的敏感度为至少约80％。
在本发明方法的一些实施方式中，非侵入性样本为尿液样本，该方法对子宫内膜癌症的特异性为至少约65％。在本发明方法的一些实施方式中，非侵入性样本是尿液样本，并且当应用12pg/mL截止值时，该方法对子宫内膜癌症的特异性为至少约65％。
在本发明方法的一些实施方式中，非侵入性样本为尿液样本，该方法对子宫内膜癌症的敏感度为至少约80％且对子宫内膜癌症的特异性为至少约65％。在本发明方法的一些实施方式中，非侵入性样本为尿液样本，并且当应用12pg/mL截止值时，该方法对子宫内膜癌症的敏感度为至少约80％且对子宫内膜癌症的特异性为至少约65％。
在本发明方法的一些实施方式中，非侵入性样本为尿液样本，该方法具有至少约80％的子宫内膜癌症敏感度、至少约65％的子宫内膜癌症特异性、至少约35％的阳性预测值(PPV)和至少约90％的阴性预测值(NPV)。在本发明方法的一些实施例中，非侵入性样本为尿液样本，并且当应用12pg/mL截止值时，该方法具有至少约80％的子宫内膜癌症敏感度、至少约65％的子宫内膜癌症特异性、至少约35％的阳性预测值(PPV)和至少约90％的阴性预测值(NPV)。
在本发明的方法的一些实施例中，非侵入性样本为卫生棉条样本，该方法对卵巢癌的敏感度为至少约55％。在本发明方法的一些实施方式中，非侵入性样本是卫生棉条样本，并且当应用70pg/mL截止值时，该方法对卵巢癌的敏感度为至少约55。在本发明方法的一些实施例中，非侵入性样本为卫生棉条样本，该方法对卵巢癌的特异性为至少约75％。在本发明方法的一些实施方式中，非侵入性样本为卫生棉条样本，并且当应用70pg/mL截止值时，该方法对卵巢癌的特异性为至少约75％。在本发明方法的一些实施方式中，非侵入性样本为卫生棉条样本，该方法对卵巢癌的敏感度为至少约55％且对卵巢癌的特异性为至少约75％。在本发明方法的一些实施方式中，非侵入性样本为卫生棉条样本，并且当应用70pg/mL截止值时，该方法对卵巢癌的敏感度为至少约55％且对卵巢癌的特异性为至少约75％。
在本发明的方法的一些实施方式中，非侵入性样本为卫生棉条样本，并且该方法对卵巢癌的敏感度为至少约80％。在本发明方法的一些实施方式中，非侵入性样本是卫生棉条样本，并且当应用12pg/mL截止值时，该方法对卵巢癌的敏感度为至少约80％。在本发明方法的一些实施方式中，非侵入性样本为卫生棉条样本，该方法对卵巢癌的特异性为至少约20％。在本发明方法的一些实施方式中，非侵入性样本是卫生棉条样本，并且当应用12pg/mL截止值时，该方法对卵巢癌的特异性为至少约20％。在本发明方法的一些实施方式中，非侵入性样本为卫生棉条样本，该方法对卵巢癌的敏感度为至少约80％且对卵巢癌的特异性为至少约20％。在本发明方法的一些实施方式中，非侵入性样本为卫生棉条样本，并且当应用12pg/mL截止值时，该方法对卵巢癌的敏感度为至少约80％且对卵巢癌的特异性为至少约20％。
在本发明方法的一些实施方式中，非侵入性样本为卫生棉条样本，该方法对子宫内膜癌症的敏感度为至少约45％。在本发明方法的一些实施方式中，非侵入性样本是卫生棉条样本，并且当应用70pg/mL的截止值时，该方法对子宫内膜癌症的敏感度为至少约45％。在本发明的方法的一些实施方式中，非侵入性样本为卫生棉条样本，该方法对子宫内膜癌症的特异性为至少约75％。在本发明方法的一些实施方式中，非侵入性样本是卫生棉条样本，并且当应用70pg/mL的截止值时，该方法对子宫内膜癌症的特异性为至少约75％。在本发明的方法的一些实施方式中，非侵入性样本为卫生棉条样本，该方法对子宫内膜癌症的敏感度为至少约45％且对子宫内膜癌症的特异性为至少约75％。在本发明的方法的一些实施例中，非侵入性样本为卫生棉条样本，并且当应用70pg/mL的截止值时，该方法对子宫内膜癌症的敏感度为至少约45％且对子宫内膜癌症的特异性为至少约75％。
在本发明方法的一些实施方式中，非侵入性样本为卫生棉条样本，该方法对子宫内膜癌症的敏感度为至少约95％。在本发明方法的一些实施方式中，非侵入性样本是卫生棉条样本，并且当应用17pg/mL的截止值时，该方法对子宫内膜癌症的敏感度为至少约95％。在本发明的方法的一些实施方式中，非侵入性样本为卫生棉条样本，该方法对子宫内膜癌症的特异性为至少约20％。在本发明方法的一些实施方式中，非侵入性样本是卫生棉条样本，并且当应用17pg/mL的截止值时，该方法对子宫内膜癌症的特异性为至少约20％。在本发明的方法的一些实施方式中，非侵入性样本为卫生棉条样本，该方法对子宫内膜癌症的敏感度为至少约95％且对子宫内膜癌症的特异性为至少约20％。在本发明的方法的一些实施例中，非侵入性样本为卫生棉条样本，并且当应用17pg/mL的截止值时，该方法对子宫内膜癌症的敏感度为至少约95％且对子宫内膜癌症的特异性为至少约20％。
在本发明方法的一些实施方式中，该方法对妇科癌症的敏感度为至少约81％且对妇科癌症的特异性为至少约60％。在本发明方法的一些实施方式中，非侵入性样本是尿液样本，并且该方法对妇科癌症的敏感度为至少约81％且对妇科癌症的特异性为至少约60％。
在本发明方法的一些实施方式中，该方法对妇科癌症的敏感度为至少约61％且对妇科癌症的特异性为至少约75％。在本发明方法的一些实施方式中，非侵入性样本是阴道拭子样本，并且该方法对妇科癌症的敏感度为至少约61％且对妇科癌症的特异性为至少约75％。
在本发明方法的一些实施方式中，该方法对妇科癌症的敏感度为至少约96％且对妇科癌症的特异性为至少约43％。在本发明方法的一些实施方式中，非侵入性样本是卫生棉条样本，并且该方法对妇科癌症的敏感度为至少约96％且对妇科癌症的特异性为至少约43％。
在本发明方法的一些实施方式中，该方法对妇科癌症的敏感度为至少约50％且对妇科癌症的特异性为至少约86％。在本发明方法的一些实施方式中，非侵入性样本是卫生棉条样本，并且该方法对妇科癌症的敏感度为至少约50％且对妇科癌症的特异性为至少约86％。
在本发明方法的一些实施方式中，该方法对妇科癌症的敏感度为至少约96％且对妇科癌症的特异性为至少约86％。在本发明方法的一些实施方式中，非侵入性样本是卫生棉条样本，并且该方法对妇科癌症的敏感度为至少约96％且对妇科癌症的特异性为至少约86％。
在本发明方法的一些实施方式中，该方法对子宫内膜癌症的敏感度为至少约40％、42％、44％、46％、48％或50％。在本发明的方法的一些实施方式中，非侵入性样本为卫生棉条样本，并且该方法对子宫内膜癌症的敏感度为至少约40％、42％、44％、46％、48％、50％。
在本发明方法的一些实施方式中，该方法对子宫内膜癌症的敏感度为至少约60％、65％、70％、71％、72％、73％或74％。在本发明方法的一些实施方式中，非侵入性样本为阴道拭子样本，该方法对子宫内膜癌症的敏感度为至少约60％、65％、70％、71％、72％、73％或74％。
在本发明方法的一些实施方式中，该方法对子宫内膜癌症的敏感度为至少约78％、80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％或87％。在本发明的方法的一些实施方式中，非侵入性样本是尿液样本，并且该方法对子宫内膜癌症的敏感度为至少约78％、80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％或87％。
在本发明方法的一些实施方式中，该方法对子宫内膜癌症的敏感度为至少约90％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％。在本发明的方法的一些实施方式中，非侵入性样本为卫生棉条样本，且该方法对子宫内膜癌症的敏感度为至少约90％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％。
在本发明方法的一些实施方式中，该方法对子宫内膜癌症的特异性为至少约40％、41％、42％或43％。在本发明方法的一些实施方式中，非侵入性样本为卫生棉条样本，该方法对子宫内膜癌症的特异性为至少约40％、41％、42％或43％。
在本发明方法的一些实施方式中，该方法对子宫内膜癌症的特异性为至少约50％、52％、54％、55％、56％、57％、58％、59％、60％、62％、64％、66％、68％、70％、71％、72％、73％或74％。在本发明的方法的一些实施例中，非侵入性样本是尿液样本，并且该方法对子宫内膜癌症的特异性为至少约50％、52％、54％、55％、56％、57％、58％、59％或60％、62％、64％、66％、68％、70％、71％、72％、73％或74％。
在本发明方法的一些实施方式中，该方法对子宫内膜癌症的特异性为至少约60％、62％、64％、66％、68％、70％、71％、72％、73％、74％或75％。在本发明方法的一些实施方式中，非侵入性样本为阴道拭子样本，该方法对子宫内膜癌症的特异性为至少约60％、62％、64％、66％、68％、70％、71％、72％、73％、74％或75％。
在本发明方法的一些实施方式中，该方法对子宫内膜癌症的特异性为至少约80％、82％、83％、84％、85％、86％或87％。在本发明方法的一些实施方式中，非侵入性样本为卫生棉条样本，该方法对子宫内膜癌症的特异性为至少约80％、82％、83％、84％、85％、86％或87％。
在本发明方法的一些实施方式中，该方法对子宫内膜癌症的敏感度为至少约87％且对子宫内膜癌症的特异性为至少约60％。在本发明的方法的一些实施方式中，非侵入性样本是尿液样本，并且该方法对子宫内膜癌症的敏感度为至少约87％且对子宫内膜癌症的特异性为至少约60％。
在本发明方法的一些实施方式中，该方法对子宫内膜癌症的敏感度为至少约85％且对子宫内膜癌症的特异性为至少约70％。在本发明方法的一些实施方式中，非侵入性样本是尿液样本，并且该方法对子宫内膜癌症的敏感度为至少约85％且对子宫内膜癌症的特异性为至少约70％。
在本发明方法的一些实施方式中，该方法对子宫内膜癌症的敏感度为至少约74％且对子宫内膜癌症的特异性为至少约75％。在本发明方法的一些实施方式中，非侵入性样本是阴道拭子样本，该方法对子宫内膜癌症的敏感度为至少约74％且对子宫内膜癌症的特异性为至少约75％。
在本发明方法的一些实施方式中，该方法对子宫内膜癌症的敏感度为至少约100％且对子宫内膜癌症的特异性为至少约43％。在本发明方法的一些实施例中，非侵入性样本是卫生棉条样本，并且该方法对子宫内膜癌症的敏感度为至少约100％且对子宫内膜癌症的特异性为至少约43％。
在本发明方法的一些实施方式中，该方法对子宫内膜癌症的敏感度为至少约50％且对子宫内膜癌症的特异性为至少约86％。在本发明的方法的一些实施例中，非侵入性样本是卫生棉条样本，并且，该方法对子宫内膜癌症的敏感度为至少约50％且对子宫内膜癌症的特异性为至少约86％。
在本发明方法的一些实施方式中，该方法对子宫内膜癌症的敏感度为至少约100％且对子宫内膜癌症的特异性为至少约86％。在本发明的方法的一些实施例中，非侵入性样本是卫生棉条样本，并且该方法对子宫内膜癌症的敏感度为至少约100％且对子宫内膜癌症的特异性为至少约86％。
在本发明方法的一些实施方式中，该方法对卵巢癌的敏感度为至少约40％、42％、44％、46％、47％、48％、49％或50％。在本发明的方法的一些实施方式中，非侵入性样本为卫生棉条样本，且该方法对卵巢癌的敏感度为至少约40％、42％、44％、46％、47％、48％、49％或50％。
在本发明方法的一些实施方式中，该方法对卵巢癌的敏感度为至少约70％、75％、80％、81％、82％、83％、84％或85％。在本发明方法的一些实施例中，非侵入性样本为阴道拭子样本，且该方法对卵巢癌的敏感度为至少约70％、75％、80％、81％、82％、83％、84％或85％。
在本发明方法的一些实施方式中，该方法对卵巢癌的敏感度为至少约55％、56％、57％、58％、59％、60％、60％、61％、62％、63％、64％或65％。在本发明的方法的一些实施方式中，非侵入性样本为尿液样本，且该方法对卵巢癌的敏感度为至少约55％、56％、57％、58％、59％、60％、60％、61％、62％、63％、64％或65％。
在本发明方法的一些实施方式中，该方法对卵巢癌的敏感度为至少约80％、82％、84％、85％、86％、87％、88％、89％或90％。在本发明的方法的一些实施方式中，非侵入性样本为卫生棉条样本，且该方法对卵巢癌的敏感度为至少约80％、82％、84％、85％、86％、87％、88％、89％或90％。
在本发明方法的一些实施方式中，该方法对卵巢癌的特异性为至少约35％、38％、40％、41％、42％或43％。在本发明的方法的一些实施方式中，非侵入性样本为卫生棉条样本，并且该方法对卵巢癌的特异性为至少约35％、38％、40％、41％、42％或43％。
在本发明方法的一些实施方式中，该方法对卵巢癌的特异性为至少约50％、55％、56％、57％、58％、59％、60％、62％、64％、66％、68％、70％、71％、72％、73％或74％。在本发明的方法的一些实施方式中，非侵入性样本是尿液样本，并且该方法对卵巢癌的特异性为至少约50％、55％、56％、57％、58％、59％、60％、62％、64％、66％、68％、70％、71％、72％、73％或74％。
在本发明方法的一些实施方式中，该方法对卵巢癌的特异性为至少约15％、18％、20％、21％、22％、23％、24％或25％。在本发明方法的一些实施方式中，非侵入性样本是阴道拭子样本，且该方法对卵巢癌的特异性为至少约15％、18％、20％、21％、22％、23％、24％或25％。
在本发明方法的一些实施方式中，该方法对卵巢癌的特异性为至少约75％、80％、82％、83％、84％、85％、86％或87％。在本发明的方法的一些实施方式中，非侵入性样本为卫生棉条样本，且该方法对卵巢癌的特异性为至少约75％、80％、82％、83％、84％、85％、86％或87％。
在本发明方法的一些实施方式中，该方法对卵巢癌的敏感度为至少约65％和对卵巢癌的特异性为至少约60％。在本发明方法的一些实施方式中，非侵入性样本是尿液样本，并且该方法对卵巢癌的敏感度为至少约65％和对卵巢癌的特异性为至少约60％。
在本发明方法的一些实施方式中，该方法对卵巢癌的敏感度为至少约60％且对卵巢癌的特异性为至少约70％。在本发明方法的一些实施例中，非侵入性样本是尿液样本，并且该方法对卵巢癌的敏感度为至少约60％且对卵巢癌的特异性为至少约70％。
在本发明方法的一些实施方式中，该方法对卵巢癌的敏感度为至少约85％且对卵巢癌的特异性为至少约25％。在本发明方法的一些实施方式中，非侵入性样本是阴道拭子样本，并且该方法对卵巢癌的敏感度为至少约85％且对卵巢癌的特异性为至少约25％。
在本发明方法的一些实施方式中，该方法对卵巢癌的敏感度为至少约90％切对卵巢癌的特异性为至少约43％。在本发明方法的一些实施方式中，非侵入性样本为卫生棉条样本，并且，该方法对卵巢癌的敏感度为至少约90％切对卵巢癌的特异性为至少约43％。
在本发明方法的一些实施方式中，该方法对卵巢癌的敏感度为至少约50％且对卵巢癌的特异性为至少约86％。在本发明方法的一些实施方式中，非侵入性样本是卫生棉条样本，并且该方法对卵巢癌的敏感度为至少约50％且对卵巢癌的特异性为至少约86％。
在本发明方法的一些实施方式中，该方法对卵巢癌的敏感度为至少约90％且对卵巢癌的特异性为至少约86％。在本发明方法的一些实施方式中，非侵入性样本是卫生棉条样本，并且该方法对卵巢癌的敏感度为至少约90％且对卵巢癌的特异性为至少约86％。
妇科癌症
本发明提供了用于检测受试者存在或不存在妇科癌症的方法。妇科癌症是一种与女性生殖系统相关的癌症，例如影响卵巢、输卵管、子宫内膜、子宫、子宫颈、外阴、阴道和胎盘中的一个或多个的癌症。
在一些实施方式中，妇科癌症是卵巢癌。卵巢癌可选自由以下组成的组：上皮性卵巢肿瘤、卵巢畸胎瘤、未成熟卵巢畸胎瘤、间质瘤、生殖细胞卵巢肿瘤、未分化肿瘤、交界性卵巢肿瘤、粘液性肿瘤、颗粒细胞瘤、未成熟囊性畸胎瘤、浆液性卵巢肿瘤和小细胞癌。
在一些实施例中，妇科癌症是子宫内膜癌症。子宫内膜癌症可选自自由以下组成的组：子宫内膜癌、子宫内膜腺癌、子宫内膜样腺癌、子宫内膜鳞状细胞癌、浆液性癌、浆液性子宫内膜上皮内癌、子宫内膜癌肉瘤、透明细胞癌、粘液癌、未分化子宫内膜癌、混合性子宫内膜癌、恶性苗勒氏管混合瘤和子宫内膜透明细胞肉瘤。
在一些实施方式中，妇科癌症可选自自由以下组成的组：卵巢癌、子宫内膜癌症、子宫癌、宫颈癌、外阴癌、阴道癌、输卵管肿瘤、上皮性卵巢肿瘤、卵巢畸胎瘤、未成熟卵巢畸胎瘤、间质瘤、生殖细胞卵巢肿瘤、未分化肿瘤、交界性卵巢肿瘤、子宫内膜癌、子宫内膜腺癌、子宫内膜样腺癌、子宫内膜鳞状细胞癌、浆液性癌、浆液性子宫内膜上皮内癌、子宫内膜癌肉瘤、透明细胞癌、粘液癌、未分化子宫内膜癌、混合性子宫内膜癌、粘液性肿瘤、恶性苗勒氏管混合瘤、子宫内膜透明细胞肉瘤、颗粒细胞瘤、浆液性输卵管上皮内癌、未成熟囊性畸胎瘤、浆液性卵巢肿瘤和小细胞癌。
在一些实施例中，妇科癌症是妇科恶性肿瘤。妇科恶性肿瘤的细胞的特征可能在于发育不全(例如细胞分化差和/或与健康细胞相关的形态特征的丧失)、侵袭性(即扩散到健康组织的能力)、转移(即从初始位点扩散到不同的次级位点的能力)和/或基因组不稳定性。
在一些实施方式中，本发明的方法可用于检测低级别妇科癌症。在一些实施方式中，本发明的方法可用于检测高级别妇科癌症。高级别妇科癌症可能与细胞增殖率过高有关，通常细胞寿命较长且细胞分化较差。癌症生物学和医学中使用的分级系统根据其缺乏细胞分化对癌细胞进行分类。这反映了癌细胞在形态上与癌细胞起源组织中发现的健康细胞不同的程度。分级系统可用于提供指示特定癌症的预期生长速度。通常使用的癌症等级是等级(G)X和1至4。GX表示无法评估癌症等级。G1(低级别)癌细胞与正常、健康的细胞具有相似的形态(即它们分化良好)，且将预计生长缓慢，扩散的可能性较小。G2(中级)癌细胞中度分化，即它们看起来更异常，且将预计比G1细胞生长速度略快。G3(高级别)癌细胞与正常细胞相比具有极其不同的形态(即它们分化差)，并且将预计比G1和G2细胞生长得更快。G4(高级)癌细胞未分化(也称为间变性的)，并且将预计具有最高的增殖能力。因此，在一些实施方式中，本发明的方法可用于检测G1、G2、G3和/或G4妇科癌症。在一些实施方式中，本发明的方法可特别用于检测G3和/或G4癌症。
癌症分级与癌症分期不同，癌症分期给出了癌症可能如何扩散的指示。常见的癌症分期系统有五期，即0期：原位癌细胞(即位于其正常组织中)；I期：癌症局限于身体的一个部位；II期：癌症局部晚期；III期：癌症也是局部晚期(癌症被指定为II期还是III期取决于癌症的具体类型)；和IV期：癌症通常已经转移或扩散到其他器官或全身。
FIGO(Fédération Internationale de Gynécologie et d’Obstétrique)系统通常用于卵巢癌和子宫内膜癌症的分级和/或分期。FIGO系统也有五期，即0期：原位癌(常见于宫颈癌、阴道癌和外阴癌)；I期：局限于起源器官；II期：侵入周围的器官或组织；III期：扩散到骨盆内远处的结或组织；IV期：远处转移。
非侵入性样本
本发明的方法可以包括“从受试者获取非侵入性样本”的步骤。本文所用术语“非侵入性”是指不需要手术干预的步骤，例如获取组织样本进行活检所需的步骤。可用于本发明的示例性非侵入性样本包括但不限于尿液样本、卫生棉条样本和阴道拭子样本。
在一些实施方式中，本发明的方法中使用的非侵入性样本是尿液样本。可以使用本领域技术人员知道的任何已知技术获得尿液样本。例如，可以通过要求受试者将尿液排入收集器皿(例如无菌容器)中来从受试者获得尿液样本。如本文所用，术语“尿液样本”涵盖源自最初从受试者获得的尿液样本的任何样本。例如，尿液样本可以离心处理以获得例如包含含有细胞的尿沉渣的团。可以丢弃上清液并且将尿沉渣细胞团重新悬浮在合适的缓冲液中，例如根据本发明的或本文中另外描述的裂解缓冲液。
在其他实施方式中，本发明方法中使用的非侵入性样本是阴道拭子样本。可以使用本领域技术人员知道的任何已知技术获得阴道拭子样本。例如，阴道拭子样本可以通过受过适当训练的医学专业人员将软的宫颈内收集刷(称为“拭子”)插入受试者的阴道并旋转它来从受试者获得。拭子可以插入阴道3-5厘米并旋转四次(两次向左，两次向右)。如本文所用，术语“阴道拭子样本”涵盖源自最初从受试者获得的阴道拭子样本的任何样本。例如，阴道拭子样本可以通过将拭子放入含有合适的缓冲液(例如PBS)的容器中进行处理，从而将细胞从拭子转移到缓冲液中。从容器中取出拭子后，可以通过离心处理包含来自拭子的细胞的缓冲液以获得例如包含含有细胞的尿沉渣的团。可以丢弃上清液并且将尿沉渣细胞团重新悬浮在合适的缓冲液中，例如根据本发明的或本文中另外描述的裂解缓冲液。
在其他实施方式中，本发明的方法中使用的非侵入性样本是卫生棉条样本。可以使用本领域技术人员知道的任何已知方法获得卫生棉条样本。例如，可以通过要求受试者佩戴卫生棉条来获得卫生棉条样本。卫生棉条是一种适当形状的吸收材料块，其可以插入阴道内持续指定的时间段以吸收阴道分泌物，例如经血。如本文所用，术语“卫生棉条样本”涵盖源自受试者最初佩戴的卫生棉条的任何样本。在一些实施方式中，卫生棉条样本可源自受试者佩戴2小时至14小时、4小时至12小时或6小时至8小时的卫生棉条。在一些实施方式中，卫生棉条样本可源自受试者佩戴约4、5、6、7、8、9或10小时的卫生棉条。可以通过从受试者的阴道中取出卫生棉条并将其置于含有合适缓冲液(例如PBS)的容器中从而将卫生棉条浸泡在缓冲液中来获得卫生棉条样本。替代地，可以将缓冲液添加到容器中的原位卫生棉条中。浸湿的卫生棉条然后可以被压缩，例如使用大注射器从卫生棉条中释放包含细胞的缓冲液，卫生棉条可以被收集到新的(fresh)容器中。然后可以通过离心处理包含细胞的缓冲液以获得例如包含含有细胞的尿沉渣的团。可以弃去上清液并且将尿沉渣细胞团重新悬浮在合适的缓冲液中，例如根据本发明或本文中另外描述的裂解缓冲液。
许多重要的妇科癌症生物标记物，如MCM蛋白，特别是MCM5，可以在侵入性样本中存在的细胞核中发现。因此，适当地，非侵入性样本包含细胞。更合适地，这些细胞可以通过本领域常见的任何已知技术浓缩，例如过滤或更合适地离心收集来自非侵入性样本的细胞。富集来自非侵入性样本的细胞可能增加信号，并可能促进检测。例如，在非侵入性样本为尿液样本时，该尿液样本可以包括尿沉渣，例如从尿液中收集的沉淀细胞。
本发明的方法可以包括“处理非侵入性样本以从非侵入性样本中的细胞释放至少一种生物标记物”的步骤。该步骤可以被认为是指对非侵入性样本进行操作，使得非侵入性样本中包含的细胞释放一种或多种生物标记物(或这些细胞的相当一部分释放一种或多种生物标记物)。在一些实施方式中，可以通过将非侵入性样本暴露于能够从非侵入性样本中的细胞释放至少一种生物标记物的裂解缓冲液，例如根据本发明或本文本文另外描述的裂解缓冲液，来处理非侵入性样本以释放至少一种生物标记物样本。合适地，非侵入性样本可以通过以下方式处理以释放至少一种生物标记物：将非侵入性样本通过用于捕获细胞的过滤器，使得细胞被捕获在过滤器中；使裂解缓冲液，例如根据本发明的或本文另外描述的裂解缓冲液通过过滤器，使得捕获的细胞暴露于裂解缓冲液；和/或将过滤器孵育一段时间，使得裂解缓冲液使细胞释放至少一种生物标记物。替代地，可以将非侵入性样本离心成样本团，丢弃上清液并将样本团重新悬浮在裂解缓冲液中。替代地，例如，可以将浓缩的裂解缓冲液组分添加到液体非侵入性样本中以形成包含暴露于裂解缓冲液的非侵入性样本的溶液。
抗体
术语“抗体”可以指天然存在的形式或重组抗体，例如单链抗体、嵌合抗体或人源化抗体。术语“抗体”也可以被认为涵盖可以结合至靶蛋白(例如MCM蛋白，如MCM5)的抗体片段。此类片段可包括Fab’2、F’(ab)2、Fv、单链抗体或双抗体。抗体可以是天然存在的全长抗体(而不是片段)。在另一个实施方式中，抗体不是人源化抗体。
通常，抗体由两条重链和两条轻链形成。每条重链由重链恒定区(CH)和重链可变区(VH)组成。类似地，每条轻链由轻链恒定区(CL)和轻链可变区(VL)组成。VH和VL区包含互补决定区(CDR)。CDR主要负责与靶蛋白的特异性结合。
在一些实施方式中，抗体将结合至MCM5的表位(片段)。因此，术语“结合至MCM5的抗体”是指仅结合至MCM5的单个表位的抗体。任选地，结合至MCM5的抗体是“特异性结合”至MCM5的抗体。术语“特异性结合”是指与靶标(例如MCM5)结合的抗体，结合亲和力比其对非靶标分子的结合亲和力大至少2倍、10倍、50倍或100倍。
检测抗体，例如本发明中使用的ELISA测定或夹心ELISA测定中使用的检测抗体，可以与标签(例如铕2+或辣根过氧化物酶)缀合。标签可以直接连接或可以通过接头(例如己二酸二酰肼或ADH)连接。标签可以通过化学缀合来连接。将标签与抗体缀合的方法是本领域已知的。例如，缀合的碳二亚胺(Bauminger&Wilchek(1980)Methods Enzymol.70,151-159)可用于将标签缀合到抗体上。也可以使用将标签与抗体缀合的其他方法。例如，可以使用适当反应物的高碘酸钠氧化、然后是还原烷基化或还原酰胺化，也可以使用戊二醛交联。然而，应认识到，无论选择哪种产生本发明缀合物的方法，都必须确定缀合的抗体保持其靶向能力并且缀合标签保持其功能。
开发与感兴趣的生物标记物蛋白(例如MCM5)结合的抗体完全在本领域技术人员的能力范围内。这可以通过用生物标记物蛋白(例如MCM5)对哺乳动物(例如小鼠、兔子或豚鼠)进行免疫来实现。包括佐剂(如弗氏完全佐剂)可能是有益的。取出免疫哺乳动物的脾细胞并与骨髓瘤细胞融合以形成杂交瘤细胞系，该细胞系在给定的适当条件下是永恒的并分泌抗体。将杂交瘤分成单个克隆，并评估每个克隆分泌的抗体与生物标记物蛋白(例如MCM5)的结合能力。
抗体靶点
在本发明的方法的一些实施方式中，将非侵入性样本暴露于第一单克隆抗体和/或第二单克隆抗体。如上所述，此类实施方式可涉及进行ELISA测定或夹心ELISA测定，其包括将非侵入性样本暴露于本文所述的第一单克隆抗体和/或本文所述的第二单克隆抗体。在一个实施方式中，第一单克隆抗体和/或第二单克隆抗体与MCM5特异性结合。优选地，第一单克隆抗体结合至SEQ ID NO:1。优选地，第二单克隆抗体结合至SEQ ID NO:2。
在一些实施方式中，第一单克隆抗体或第二单克隆抗体将结合至MCM5的表位(片段)(例如SEQ ID NO:1或SEQ ID NO:2)。因此，术语“结合至MCM5的抗体”是指仅结合至MCM5的单个表位(例如SEQ ID NO:1或SEQ ID NO:2)的抗体。
出于本发明的目的，术语“结合亲和力”是指抗体与其靶标结合的能力。出于本发明的目的，术语“特异性结合”是指抗体与靶标(例如MCM5)结合的结合亲和力比其与另一个非靶标分子结合的亲和力大至少2倍、10倍、50倍或100倍。在实施方式中，非靶标分子是MCM5以外的MCM蛋白，例如MCM2。优选地，第一单克隆抗体和/或第二单克隆抗体能够与MCM蛋白，任选地MCM5结合，结合亲和力比其与另一个非靶标分子结合的结合亲和力大至少2倍、10倍、50倍或100倍。甚至更优选地，第一单克隆抗体和/或第二单克隆抗体能够与SEQID NO:1(例如第一单克隆抗体)或SEQ ID NO:2(例如第二单克隆抗体)结合，结合亲和力比其与另一个非标靶分子结合的结合亲和力大至少2倍、10倍、50倍或100倍。
用于评估对MCM5的结合亲和力的优选方法是通过ELISA。优选地，第一单克隆抗体和/或第二单克隆抗体对MCM5的亲和力(测量为EC50或50％最大结合浓度，如实施例2中所述)为2500ng/ml或更低、1500ng/ml或更低、1000ng/ml或更低、600ng/ml或更低、50ng/ml或更低、30ng/ml或更低、20ng/ml或更低或10ng/ml或更低。EC 50通常高于1ng/ml，因此EC 50可以在1ng/ml和前一句中指定的任何上限之间。评估配体(例如抗体)对靶标的结合能力的其他标准测定是本领域已知的，包括例如蛋白质印迹、RIA和流式细胞术分析。抗体的结合动力学(例如结合亲和力)也可以通过本领域已知的标准测定来评估，例如通过表面等离子体共振(Surface Plasm Resonance,SPR)(例如Biacore TM系统)分析。与MCM5结合的亲和常数(KD)优选在0.01-10nM、0.01-5nM、0.01-1nM、0.01-0.5nM、0.01-0.25nM、0.025-0.25nM或0.04-0.25nM的范围内。在一个实施方式中，ELISA中使用的第一和/或第二单克隆抗体对MCM5的亲和力为约0.01nM、0.02nM、0.03nM、0.04nM、0.05nM、0.06nM、0.07nM、0.08nM、0.09nM、0.1nM、0.2nM、0.3nM、0.4nM或0.5nM。在一个实施方式中，ELISA中使用的第一单克隆抗体和/或第二单克隆抗体对MCM5的亲和力约为0.05nM。在一个实施方式中，ELISA中使用的第一单克隆抗体和/或第二单克隆抗体对MCM5的亲和力约为0.2nM。在一个实施方式中，ELISA中使用的第一单克隆抗体和/或第二单克隆抗体对MCM5的亲和力约为0.233nM。在一个实施方式中，第一单克隆抗体对MCM5的亲和力约为0.05nM，第二单克隆抗体对MCM5的亲和力约为0.2nM。在一个实施方式中，第一单克隆抗体对MCM5的亲和力约为0.05nM，第二单克隆抗体对MCM5的亲和力约为0.233nM。在一个实施方式中，第一单克隆抗体是12A7且对MCM5的亲和力约为0.05nM，第二单克隆抗体是4B4且对MCM5的亲和力约为0.2nM。在一个实施方式中，第一单克隆抗体为12A7且对MCM5的亲和力约为0.05nM，第二单克隆抗体为4B4且对MCM5的亲和力约为0.233nM。结合速率(ka)优选地在0.4x 106 1/M-3.4x 106 1/M的范围内。解离速率(kd)优选在1×10-3 1/s-10×10-3 1/s的范围内。这些值通常可以通过SPR(表面等离子体共振)来确定。
抗体互补决定区(CDR)
本发明的方法可以包括使用第一单克隆抗体和/或第二单克隆抗体，其包含抗体12A7或4B4的CDR中的至少一个，即选自由以下组成的组的CDR：
a.12A7 CDRH1，其具有SEQ ID NO:9的序列或具有与SEQ ID NO:9不同之处在于有1、2或3个氨基酸取代的序列；
b.12A7 CDRH2，其具有SEQ ID NO:11的序列或具有与SEQ ID NO:11不同之处在于有1、2或3个氨基酸取代的序列；
c.12A7 CDRH3，其具有SEQ ID NO:13的序列或具有与SEQ ID NO:13不同之处在于有1、2或3个氨基酸取代的序列；
d.12A7 CDRL1，其具有SEQ ID NO:3的序列或具有与SEQ ID NO:3不同之处在于有1、2或3个氨基酸取代的序列；
e.12A7 CDRL2，其具有SEQ ID NO:5的序列或具有与SEQ ID NO:5不同之处在于有1、2或3个氨基酸取代的序列；
f.12A7 CDRL3，其具有SEQ ID NO:7的序列或具有与SEQ ID NO:7不同之处在于有1、2或3个氨基酸取代的序列；
g.4B4 CDRH1，其具有SEQ ID NO:21的序列或具有与SEQ ID NO:21不同之处在于有1、2或3个氨基酸取代的序列；
h.4B4 CDRH2，其具有SEQ ID NO:23的序列或具有与SEQ ID NO:23不同之处在于有1、2或3个氨基酸取代的序列；
i.4B4 CDRH3，具有SEQ ID NO:25的序列或与具有与SEQ ID NO:25不同之处在于有1、2或3个氨基酸取代的序列；
j.4B4 CDRL1，其具有SEQ ID NO:15的序列或具有与SEQ ID NO:15不同之处在于有1、2或3个氨基酸取代的序列；
k.4B4 CDRL2，其具有SEQ ID NO:17的序列或具有与SEQ ID NO:17不同之处在于有1、2或3个氨基酸取代的序列；和
l.4B4 CDRL3，其具有SEQ ID NO:19的序列或具有与SEQ ID NO:19不同之处在于有1、2或3个氨基酸取代的序列。
与4B4和12A7抗体具有相同CDR的抗体可在其他区域与4B4和12A7的序列有很大不同。例如，此类抗体可以是抗体片段。
短语“与SEQ ID NO:3不同之处在于单个氨基酸取代的序列”是指可以用不同的氨基酸替换SEQ ID NO:3中定义的一个氨基酸。优选地，这种替换是保守的氨基酸取代。以下八组均包含通常彼此保守取代的氨基酸：(1)丙氨酸(Alanine)、甘氨酸(Glycine)；(2)天冬氨酸(Aspartic acid)、谷氨酸(Glutamic acid)；(3)天冬酰胺(Asparagine)、谷氨酰胺(Glutamine)；(4)精氨酸(Arginine)、赖氨酸(Lysine)；(5)异亮氨酸(Isoleucine)、亮氨酸(Leucine)、蛋氨酸(Methionine)、缬氨酸(Valine)；(6)苯丙氨酸(Phenylalanine)、酪氨酸(Tyrosine)、色氨酸(Tryptophan)；(7)丝氨酸(Serine)、苏氨酸(Threonine)；(8)半胱氨酸(Cysteine)、蛋氨酸(Methionine)。
在实施方式中，第一单克隆抗体包含来自12A7的重链的至少一个CDR(12A7CDRH1、12A7 CDRH2或12A7 CDRH3)以及来自12A7的轻链的至少一个CDR(12A7 CDRL1、12A7CDRL2或12A7 CDRL3)。在另一个实施方式中，第一单克隆抗体包含来自12A7的重链的至少两个CDR和来自12A7的轻链的至少两个CDR。在优选的实施方式中，第一单克隆抗体包含来自12A7的重链的所有三个CDR和/或来自12A7的轻链的所有三个CDR。在实施方式中，第一单克隆抗体包含12A7 CDRL1和12A7 CDRL2、12A7 CDRL1和12A7 CDRL3、12A7CDRL1和12A7CDRH1、12A7 CDRL1和12A7 CDRH2、12A7 CDRL1和12A7 CDRH3、12A7CDRL2和12A7 CDRL3、12A7 CDRL2和12A7 CDRH1、12A7 CDRL2和12A7 CDRH2、12A7CDRL2和12A7 CDRH3、12A7CDRL3和12A7 CDRH1、12A7 CDRL3和12A7 CDRH2、12A7CDRL3和12A7 CDRH3、12A7 CDRH1和12A7 CDRH2、12A7 CDRH1和12A7 CDRH3、或者12A7 CDRH2和12A7 CDRH3。
在实施方式中，第二单克隆抗体包含来自4B4的重链的至少一个CDR(4B4 CDRH1、4B4CDRH2或4B4 CDRH3)以及来自4B4的轻链的至少一个CDR(4B4 CDRL1、4B4 CDRL2或4B4CDRL3)。在另一个实施方式中，第二单克隆抗体包含来自4B4的重链的至少两个CDR和来自4B4的轻链的至少两个CDR。在优选的实施方式中，第二单克隆抗体包含来自4B4的重链的所有三个CDR和/或来自4B4的轻链的所有三个CDR。在实施方式中，第二单克隆抗体包含4B4CDRL1和4B4 CDRL2、4B4 CDRL1和4B4 CDRL3、4B4 CDRL1和4B4 CDRH1、4B4 CDRL1和4B4CDRH2、4B4 CDRL1和4B4 CDRH3、4B4 CDRL2和4B4 CDRL3、4B4CDRL2和4B4 CDRH1、4B4 CDRL2和4B4 CDRH2、4B4 CDRL2和4B4 CDRH3、4B4 CDRL3和4B4 CDRH1、4B4 CDRL3和4B4 CDRH2、4B4 CDRL3和4B4 CDRH3、4B4 CDRH1和4B4CDRH2、4B4 CDRH1和4B4 CDRH3、或者4B4 CDRH2和4B4 CDRH3。
在优选的实施方式中，抗体包含至少一个CDR，其具有与以下描述的任一序列相同的序列：SEQ ID NO:3(12A7 CDRL1)、SEQ ID NO:5(12A7 CDRL2)、SEQ ID NO:7(12A7CDRL3)、SEQ ID NO:9(12A7 CDRH1)、SEQ ID NO:11(12A7 CDRH2)、SEQ ID NO:13(12A7 CDRH3)、SEQ ID NO:15(4B4 CDRL1)、SEQ ID NO:17(4B4 CDRL2)、SEQ ID NO:19(4B4CDRL3)、SEQ ID NO:21(4B4 CDRH1)、SEQ ID NO:23(4B4 CDRH2)或SEQ ID NO:25(4B4CDRH3)。在第一单克隆抗体包含12A7 CDRL2的实施方式中，12A7 CDRL2具有SEQ ID NO:5中描述的序列。在第一单克隆抗体包含12A7 CDRL1的另一实施方式中，12A7 CDRL1具有ID NO:3中描述的序列。在第一单克隆抗体包含12A7 CDRL3的另一实施方式中，12A7CDRL3具有SEQ ID NO:7中描述的序列。在第一单克隆抗体包含12A7 CDRH1的另一实施方式中，12A7 CDRH1具有SEQID NO:9中描述的序列。在第一单克隆抗体包含12A7 CDRH2的另一个实施方式中，12A7CDRH2具有SEQ ID NO:11中描述的序列。在第一单克隆抗体包含12A7 CDRH3的另一个实施方式中，12A7 CDRH3具有SEQ ID NO:13中描述的序列。在第二单克隆抗体包含4B4 CDRL1的另一个实施方式中，4B4 CDRL1具有SEQ ID NO:15中描述的序列。在第二单克隆抗体包含4B4 CDRL2的另一个实施方式中，4B4 CDRL2具有SEQ ID NO:17中描述的序列。在第二单克隆抗体包含4B4 CDRL3的另一个实施方式中，4B4 CDRL3具有SEQ ID NO:19中描述的序列。在第二单克隆抗体包含4B4 CDRH1的另一个实施方式中，4B4 CDRH1具有SEQ ID NO:21中描述的序列。在第二单克隆抗体包含4B4 CDRH2的另一个实施方式中，4B4 CDRH2具有SEQ IDNO:23中描述的序列。在第二单克隆抗体包含4B4CDRH3的另一个实施方式中，4B4 CDRH3具有SEQ ID NO:25中描述的序列。
优选地，包含12A7或4B4的CDR中的至少一个的第一单克隆抗体和/或第二单克隆抗体结合(任选地特异性结合)至MCM5。甚至更优选地，包含12A7或4B4的CDR中的至少一个的第一单克隆抗体和/或第二单克隆抗体结合(任选地特异性结合)至至SEQ ID NO:1或SEQID NO:2。
重链可变区和轻链可变区
在一些实施方式中，本发明中使用的第一单克隆抗体包含具有与SEQ ID NO:29至少85％、90％、95％、98％、99％或100％同一性的序列的重链可变区。在一些实施方式中，本发明中使用的第一单克隆抗体包含具有与SEQ ID NO:27至少85％、90％、95％、98％、99％或100％同一性的序列的轻链可变区序列。在一些实施方式中，本发明中使用的第二单克隆抗体包含具有与SEQ ID NO:33至少85％、90％、95％、98％、99％或100％同一性的序列的重链可变区。在一些实施方式中，本发明中使用的第二单克隆抗体包含具有与SEQ ID NO:31至少85％、90％、95％、98％、99％或100％同一性的序列的轻链可变区序列。此类抗体可称为“变体抗体”。
在一个实施方式中，第一单克隆抗体包含具有与SEQ ID NO:29至少95％同一性的序列的重链可变区。在另一个实施方式中，第一单克隆抗体包含具有与SEQ ID NO:29至少98％同一性的序列的重链可变区。在一个实施方式中，第一单克隆抗体包含具有与SEQ IDNO:27至少95％同一性的序列的轻链可变区。在另一个实施方式中，第一单克隆抗体包含具有与SEQ ID NO:27至少98％同一性的序列的轻链可变区。在另一个实施方式中，第一单克隆抗体包含与SEQ ID NO:27具有至少95％同一性的序列的轻链可变区和与SEQ ID NO:29具有至少95％同一性的序列的重链可变区。在一个优选的实施方式中，第一单克隆抗体包含与SEQ ID NO:29具有至少98％同一性的序列的重链可变区和与SEQ ID NO:27具有至少98％同一性的序列的轻链可变区。
在另一个实施方式中，第二单克隆抗体包含与SEQ ID NO:33具有至少95％同一性的序列的重链可变区。在另一个实施方式中，第二单克隆抗体包含与SEQ ID NO:33具有至少98％同一性的序列的重链可变区。在另一个实施方式中，第二单克隆抗体包含与SEQ IDNO:31具有至少95％同一性的序列的轻链可变区。在另一个实施方式中，第二单克隆抗体包含与SEQ ID NO:31具有至少98％同一性的序列的轻链可变区。在另一个实施方式中，第二单克隆抗体具有与SEQ ID NO:33至少95％同一性的序列的重链可变区和与SEQ ID NO:31至少95％同一性的序列的轻链可变区。在优选的实施方式中，第二单克隆抗体具有与SEQID NO:33至少98％同一性的序列的重链可变区和与SEQ ID NO:31至少98％同一性的序列的轻链可变区。
如本领域技术人员已知的，抗体包含包括框架区的多个区域。在框架区中氨基酸的缺失或添加不太可能影响抗体与其靶标结合的能力。另一方面，CDR中的突变更有可能影响抗体与靶标结合的能力。因此，在本发明的某些实施方式中，变体抗体具有与12A7或4B4抗体的CDR相同的CDR，或具有仅单个氨基酸取代(优选保守氨基酸取代)变化的CDR。第一单克隆抗体和/或第二单克隆抗体可以具有与SEQ ID NO:27、29、31或33中描述的那些在序列上显著不同的框架区。
任选地，当第一单克隆抗体包含具有与SEQ ID NO:29至少85％、90％、95％、98％、99％或100％同一性的序列的重链可变区时，该抗体进一步包含12A7 CDRH1、12A7 CDRH2或12A7 CDRH3中的至少一个。本领域技术人员理解，由于靶标结合特异性由CDR决定，因此即使抗体序列的其余部分非常可变，包含12A7的CDR的抗体仍可与MCM5结合。由于这个原因，当第一单克隆抗体包含12A7 CDRH1、12A7 CDRH2或12A7 CDRH3中的至少一个时，第一单克隆抗体优选包含与SEQ ID NO:29具有至少90％同一性的序列的重链可变区。在更优选的实施方式中，本发明的第一单克隆抗体包含12A7 CDRH1、12A7 CDRH2和12A7CDRH3，并且包含与SEQ ID NO:29具有至少95％同一性的序列的重链可变区。
任选地，当第二单克隆抗体包含具有与SEQ ID NO:33至少85％、90％、95％、98％、99％或100％同一性的序列的重链可变区时，第二单克隆抗体进一步包含在4B4 CDRH1、4B4CDRH2或4B4 CDRH3中的至少一个。本领域技术人员理解，由于靶标结合特异性由CDR决定，因此即使抗体序列的其余部分非常可变，包含4B4的CDR的抗体仍可与MCM5结合。由于这个原因，当第二单克隆抗体包含4B4 CDRH1、4B4 CDRH2或4B4 CDRH3中的至少一个时，第二单克隆抗体优选包含具有与SEQ ID NO:33至少90％同一性的序列的重链可变区。在更优选的实施方式中，第二单克隆抗体包含4B4 CDRH1、4B4 CDRH2和4B4 CDRH3，并且包含具有与SEQ ID NO:33至少95％同一性的序列的重链可变区。
任选地，当第一单克隆抗体包含具有与SEQ ID NO:27至少85％、90％、95％、98％、99％或100％同一性的序列的轻链可变区时，第一单克隆抗体进一步包含12A7 CDRL1、12A7CDRL2或12A7 CDRL3中的至少一个。本领域技术人员理解，由于靶标结合特异性由CDR决定，因此即使抗体序列的其余部分非常可变，包含12A7的CDR的抗体仍可与MCM5结合。由于这个原因，当第一单克隆抗体包含12A7 CDRL1、12A7 CDRL2或12A7 CDRL3中的至少一个时，第一单克隆抗体优选包含具有与SEQ ID NO:27至少90％同一性的序列的轻链可变区。在更优选的实施方式中，第一单克隆抗体包含12A7 CDRL1、12A7 CDRL2和12A7 CDRL3并且包含具有与SEQ ID NO:27至少95％同一性的序列的轻链可变区。
任选地，当本发明的第二单克隆抗体包含具有与SEQ ID NO:31至少85％、90％、95％、98％、99％或100％同一性的序列的轻链可变区时，第二单克隆抗体进一步包含4B4CDRL1、4B4 CDRL2或4B4 CDRL3中的至少一个。本领域技术人员理解，由于靶标结合特异性由CDR决定，即使抗体序列的其余部分非常可变，包含4B4的CDR的抗体仍可与MCM5结合。由于这个原因，当第二单克隆抗体包含4B4 CDRL1、4B4 CDRL2或4B4 CDRL3中的至少一个时，第二单克隆抗体优选包含具有与SEQ ID NO:31至少90％同一性的序列的重链可变区。在更优选的实施方式中，第二单克隆抗体包含4B4 CDRL1、4B4 CDRL2和4B4 CDRL3并且包含具有与SEQ ID NO:31至少95％同一性的序列的重链可变区。
在本发明的另一个实施方式中，第一单克隆抗体包含：
(i)12A7 CDRH1、12A7 CDRH2和12A7 CDRH3；
(ii)具有与SEQ ID NO:29至少95％同一性的序列的重链可变区；
(iii)12A7 CDRL1、12A7 CDRL2和12A7 CDRL3；和
(iv)具有与SEQ ID NO:27至少95％同一性的序列的轻链可变区。
在另一个实施方式中，第二单克隆抗体包含：
(i)4B4 CDRH1、4B4 CDRH2和4B4 CDRH3；
(ii)具有与SEQ ID NO:33至少95％同一性的序列的重链可变区；
(iii)4B4 CDRL1、4B4 CDRL2和4B4 CDRL3；和
(iv)具有与SEQ ID NO:31至少95％同一性的序列的重链可变区。
具有与SEQ ID NO:29相同的重链可变序列和与SEQ ID NO:27相同的轻链可变序列的抗体可称为抗体12A7。具有与SEQ ID NO:33相同的重链可变序列和与SEQ ID NO:31相同的轻链可变序列的抗体可称为抗体4B4。
如何制备与MCM5结合的变体抗体在本领域技术人员的知识范围内。与SEQ ID NO:27、29、31或33相比，此类变体抗体可包含1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、15、20、25、50或100个取代或缺失突变。“缺失”变体抗体可包含1、2、3、4、5或更多个氨基酸的缺失，或在一些情况下，SEQ ID NO:27、29、31或33的整个区域的缺失。“取代”变体可以包括用相同数目的新氨基酸替换1、2、3、4、5或更多个氨基酸。
优选地，本文所述的变体抗体包含通过保守氨基酸取代(任选仅通过保守氨基酸取代)与SEQ ID NO:27、29、31或33不同的序列。技术人员非常清楚，此类保守取代不太可能改变抗体的结合特性。
裂解缓冲液
裂解缓冲液通常是能够裂解细胞的缓冲液。除了从细胞中释放一种或多种生物标记物外，裂解缓冲液可与用于后续分析的方法兼容。例如，在分析方法是双抗体夹心ELISA的情况下，可能希望裂解缓冲液不会降解结合到微滴定板表面的捕获抗体。裂解缓冲液通常但不排他地包含一种或多种去垢剂(也称为表面活性剂)、一种或多种盐和缓冲剂。在某些情况下，这些组分的浓度可能会影响裂解缓冲液的功效。
在一个实施方式中，如果缓冲液能够裂解非侵入性样本中的至少10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或基本所有的细胞，则该缓冲液可被称作是“裂解缓冲液”。在一个实施方式中，如果缓冲液能够裂解尿液样本中的至少10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或基本所有的细胞，则该缓冲液可被称作是“裂解缓冲液”。
在一个实施方式中，在非侵入性样本中的细胞暴露于裂解缓冲液至少1分钟、5分钟、10分钟、20分钟、30分钟、60分钟、1小时、2小时、6小时、12小时、24小时或过夜的情况下，如果缓冲液能够裂解非侵入性样本中的至少10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或基本所有的细胞，则该缓冲液可被称作是“裂解缓冲液”。在一个实施方式中，在尿液样本中的细胞暴露于裂解缓冲液至少1分钟、5分钟、10分钟、20分钟、30分钟、60分钟、1小时、2小时、6小时、12小时、24小时或过夜的情况下，如果缓冲液能够裂解尿液样本中的至少10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或基本所有的细胞，则该缓冲液可被称作是“裂解缓冲液”。
在一个实施方式中，在非侵入性样本中的细胞在4℃、20℃或室温暴露于裂解缓冲液至少1分钟、5分钟、10分钟、20分钟、30分钟、60分钟、1小时、2小时、6小时、12小时、24小时或过夜的情况下，如果缓冲液能够裂解非侵入性样本中的至少10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或基本所有的细胞，则该缓冲液可被称作是“裂解缓冲液”。在一个实施方式中，在尿液中的细胞在4℃、20℃或室温暴露于裂解缓冲液至少1分钟、5分钟、10分钟、20分钟、30分钟、60分钟、1小时、2小时、6小时、12小时、24小时或过夜的情况下，如果缓冲液能够裂解尿液样本中的至少10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或基本所有的细胞，则该缓冲液可被称作是“裂解缓冲液”。
在一个实施方式中，裂解缓冲液能够从侵袭性样本中的细胞释放至少一种生物标记物，例如MCM蛋白或MCM5。如果释放的生物标记物(如MCM5)的量大于当使用包含25mMTris pH7.6、150mM氯化钠、1％脱氧胆酸钠、0.1％十二烷基硫酸钠(SDS)和1％Triton-X100的缓冲液时释放的量的40％、50％、60％、70％或80％，则裂解缓冲液将被视为“能够从非侵入性样本中的细胞释放生物标记物”。释放的生物标记物(例如MCM5)的量可以使用ELISA测定(例如实施例1中描述的测定)进行测量。测定中使用的抗体应该是与生物标记物结合的抗体。例如，在生物标记物为MCM5时，应使用与MCM5结合的第一单克隆抗体和/或第二单克隆抗体。优选使用12A7和4B4抗体。
如果暴露于裂解缓冲液后的抗体活性是暴露于裂解缓冲液前的抗体活性的40％、50％、60％、70％或80％，则可以认为裂解缓冲液不使抗体变性。抗体的活性可以使用ELISA测定(例如实施例1中描述的测定)来测试。
在一些实施方式中，裂解缓冲液包含去垢剂(也称为表面活性剂)。一般来说，去垢剂是已知破坏细胞壁的化合物。去垢剂是两亲性的，既有疏水区，也有亲水区。合适的去垢剂为本领域技术人员所熟知。可适用于本发明的裂解缓冲液的去垢剂的实例包括但不限于Triton X-100、十二烷基硫酸钠(SDS)、脱氧胆酸钠。
在一些实施方式中，裂解缓冲液包含缓冲剂组分。缓冲剂组分可以被认为是将裂解缓冲液的pH维持在pH变化小于2.0个pH单位、1.5个pH单位或1.0个pH单位的任何组分。适用于该目的缓冲剂是本领域技术人员众所周知的。可适用于本发明的裂解缓冲液的缓冲剂的一个实例是Tris。
在一些实施方式中，裂解缓冲液包含盐。各种盐是本领域技术人员众所周知的。在一些实施方式中，将盐加入到裂解缓冲液中以提供特定水平的离子强度。本领域技术人员理解盐浓度与离子强度之间的关系并且能够选择合适的盐和所述盐的合适浓度以提供具有所需离子强度的裂解缓冲液。可适用于根据本发明的裂解缓冲液的盐的一个实例是氯化钠。
微小染色体维持(Minichromosome Maintenance，MCM)蛋白
适当地，根据本发明优选的生物标记物是MCM蛋白。最合适地，MCM蛋白是MCM5。
MCM蛋白2-7包含在染色质上形成且是后续DNA复制的必要先决条件或许可因素的复制前复合物的一部分。MCM蛋白复合物充当复制解旋酶，因此是DNA复制机制的核心组件。MCM蛋白在从细胞周期中的G0到G1/S期的转变中上调，并积极参与细胞周期调节。MCM蛋白在染色质周围形成环状结构。
人类MCM5基因对映于22q13.1，成熟MCM5蛋白由734个氨基酸组成(SEQ ID NO:35；UNIPROT P33992：人类DNA复制许可因子MCM5)。术语“MCM5”是指SEQ ID NO:35的多肽，其为一种与SEQ ID NO:35具有85％、90％、95％、98％或100％同一性的多肽。
试剂盒
本发明还提供了一种试剂盒，其包含：(a)如本文所定义的裂解缓冲液；(b)如本文所定义的第一种单克隆抗体；和/或(c)如本文所定义的第二单克隆抗体；和(d)在检测受试者体内存在或不存在妇科癌症的方法中使用裂解缓冲液和/或第一单克隆抗体和/或第二单克隆抗体的使用说明书。该试剂盒可用于实施本发明的方法。例如，裂解缓冲液可用于从非侵入性样本中的细胞释放至少一种生物标记物蛋白。第一单克隆抗体和/或第二单克隆抗体可用于免疫测定以确定至少一种生物标记物的浓度。在一些实施方式中，免疫测定是ELISA测定，任选地为夹心ELISA测定。在此类实施方式中，第一单克隆抗体可用作捕获抗体，而第二单克隆抗体可用作检测抗体，反之亦然。
用途
本发明的另一方面涉及本发明的或本文以其他方式描述的裂解缓冲液、单克隆抗体和试剂盒在检测受试者体中存在或不存在妇科癌症的方法中的用途。本发明或本文以其他方式描述的裂解缓冲液、单克隆抗体和试剂盒可用于检测受试者体中存在或不存在妇科癌症的任何合适的方法中。在一些实施方式中，在根据本发明的检测受试者存在或不存在妇科癌症的方法中使用本发明的或本文以其他方式描述的裂解缓冲液、单克隆抗体和试剂盒。本发明的用途和方法可以是体外或离体用途或方法。
实施例
实施例1-材料与方法
研究人群
患者于2017年3月至2018年1月在曼彻斯特圣玛丽医院(St Mary Hospital)参加研究，获得South Central-Oxford B研究伦理委员会的伦理批准(16/SC/0643)，并在收集尿液、卫生棉条或拭子样本之前获得所有患者的知情同意。所有已知患有或强烈怀疑患有卵巢癌或子宫内膜癌症的符合条件的患者都被纳入研究。如果患者是完整的处女，如果她们之前被诊断为膀胱癌或肾癌，如果患者在前两周内接受过任何泌尿外科器械，或者如果患者目前正在接受化疗或放疗，则排除在外。要求患者提供两个样本，完全排放(fullvoid)的尿液样本，以及研究护士收集的阴道拭子，或在预约前6-8小时佩戴的阴道卫生棉条。
样本处理-尿液
从每位患者收集最少25mL尿液，搅动尿液以确保均匀混合，并将最多50mL转移到干净的离心管中。样本在室温下以1500g离心5分钟。弃去上清液，注意不要干扰细胞沉渣团，将管倒置在吸水纸上沥干。将细胞沉渣团重悬于适当体积的裂解缓冲液(包含25mMTris pH7.6、150mM氯化钠、1％脱氧胆酸钠、0.1％十二烷基硫酸钠(SDS)和1％Triton-X100)(每毫升尿液10uL裂解缓冲液)中，并在低于-20℃存放之前，在室温下孵育1小时。
样本处理-阴道卫生棉条
要求患者佩戴市售的塑料涂抹器阴道卫生棉条，并指示患者在就诊前将卫生棉条放入阴道6-8小时。取出卫生棉条并置于50mL离心管中并添加PBS。将卫生棉条转移到大注射器中并压缩以从卫生棉条中释放PBS/细胞。将来自卫生棉条的PBS/细胞收集在新的50mL离心管中。将含有从注射器中提取的PBS/细胞的管在室温以1500g离心5分钟。弃去上清液，注意不要干扰细胞沉渣团。将管倒置在吸水纸上以排干水，并将细胞沉渣团重悬于300μL的裂解缓冲液(包含25mM Tris pH7.6、150mM氯化钠、1％脱氧胆酸钠、0.1％十二烷基硫酸钠(SDS)和1％Triton-X100)中，并在低于-20℃存放之前，在室温下孵育1小时。
样本处理-阴道拭子
研究护士简单地采集了阴道拭子；将软的宫颈内收集刷插入阴道3-5厘米并旋转四次(两次向左，两次向右)。然后将拭子放入5mL PBS中。从管中取出阴道拭子，将PBS在室温以1500g离心5分钟。弃去上清液，注意不要干扰细胞沉渣团。将管倒置在吸水纸上以排干水，并将细胞沉渣团重悬于300μL的裂解缓冲液(包含25mM Tris pH7.6、150mM氯化钠、1％脱氧胆酸钠、0.1％十二烷基硫酸钠(SDS)和1％Triton-X100)中，并在低于-20℃存放之前，在室温下孵育1小时。
MCM5 ELISA(MCM5酶联免疫吸附测定法)
根据制造商的使用说明书，使用MCM5 ELISA测试患者裂解物。简言之，向MCM5ELISA微滴定板的两个孔的每个孔中加入100μL的裂解物(样本和对照一式两份)，并在室温在板式振荡器(700RPM)上孵育60分钟。孵育后，使用自动洗板机，用350μL的1x洗涤缓冲液洗涤孔6次。将100μL的MCM5-HRP缀合的抗体加入每个孔中，并在如上所述用350μL的1x洗涤缓冲液洗涤六次之前，在室温孵育30分钟。向每个孔中加入100μL的TMB，并将其在添加终止溶液(0.5M H2SO4)之前，在黑暗中孵育30分钟。在450nm和630nm(参照波长)测量光密度(optical density，OD)。使用已知重组MCM5对照(1.3mg/mL)与阴性对照(裂解缓冲液)的系列稀释标准曲线计算MCM5的浓度。
实施例2-子宫内膜癌的检测
MCM5 ELISA能够高敏感度地检测子宫内膜癌症患者的尿液、阴道拭子和阴道卫生棉条中的MCM5阳性细胞。对于尿液样本，在约登指数截止值处的MCM5 ELISA的敏感度为87％，特异性为60％(表1)。此外，与正常尿液相比，子宫内膜癌症患者尿液中的MCM5水平显著更高(图1A；p＝0.007)。另外，与正常人相比，在1期癌症(图1B；p＝0.02)和3级癌症(图1C；p＝0.02)中，MCM5表达水平显著更高。
当应用于阴道拭子样本时，在约登指数截止值处，MCM5 ELISA测试对子宫内膜肿瘤的检测的敏感度为74％，特异性为75％。然而，对于阴道卫生棉条样本，约登指数截止值给出的对MCM5 ELISA的敏感度为100％，但43％的较低特异性，ROC曲线上的第二约登指数点给出了50％的敏感度以及86％的特异性。发现子宫内膜癌症患者的阴道卫生棉条样本的MCM5水平显著高于良性疾病患者(图3A；p＝0.03)。
表1
尿液、阴道拭子和阴道卫生棉条样本的敏感度和特异性，其根据相应的ROC曲线计算(数据未显示)，其中截止点基于约登指数计算。
子宫内膜 尿液 拭子 卫生棉条
敏感度 87％ 74％ 100％(/50％)
特异性 60％ 75％ 43％(/86％)
实施例3-卵巢癌的检测
MCM5 ELISA能够以高的敏感度检测来自卵巢癌患者的尿液样本、阴道拭子样本和阴道卫生棉条样本中的MCM5阳性细胞。当应用于尿液样本时，在约登指数截止值处的MCM5ELISA的敏感度为65％，特异性为60％(表2)。此外，与正常尿液相比，卵巢癌患者的尿液中MCM5的水平更高(图4A)，其中2期卵巢癌患者的MCM5表达水平显著高于正常人(图4C；p＝0.04)。
在约登指数截止值处，MCM5 ELISA测试对阴道拭子样本中卵巢癌检测的敏感度也为85％，但特异性低，为25％。对于阴道卫生棉条样本，约登指数截止值给出的对MCM5ELISA的敏感度为90％，然而特异性较低，为43％，ROC曲线上的第二约登指数点给出了50％的敏感度以及86％的特异性。还发现与患有良性疾病的个体相比，来自卵巢癌患者的阴道卫生棉条样本中的MCM5平更高(图6A)。
表2
尿液、阴道拭子和阴道卫生棉条样本的敏感度和特异性，其根据相应的ROC曲线计算(数据未显示)，其中截止点基于约登指数计算。
卵巢 尿液 拭子 卫生棉条
敏感度 65％ 85％ 90％(/50％)
特异性 60％ 25％ 43％(/86％)
实施例4-妇科癌症的检测
MCM5 ELISA能够以非常高的敏感度检测来自妇科癌症患者的尿液样本、阴道拭子样本和阴道卫生棉条样本中的MCM5阳性细胞。应用于尿液样本时，在约登指数截止值处的MCM5ELISA的敏感度为81％，特异性为60％(表3)。此外，与正常个体相比，妇科癌症患者尿液中MCM5的水平显著更高(图7A；p＝0.02)。
当应用于阴道拭子样本时，在约登指数截止值处的MCM5 ELISA测试对于妇科癌症检测的敏感度为61％，特异性为75％。
对于阴道卫生棉条样本，约登指数截止值给出的对MCM5 ELISA的敏感度为90％，特异性为43％，ROC曲线上的第二约登指数点给出了50％的敏感度以及86％的特异性。发现与患有良性疾病的那些相比，来自妇科肿瘤患者的阴道卫生棉条中的MCM5水平显著更高(图7C；p＝0.03)。
表3
尿液、阴道拭子和阴道卫生棉条样本的敏感度和特异性，其根据相应的ROC曲线计算(数据未显示)，其中截止点基于约登指数计算。
妇科 尿液 拭子 卫生棉条
敏感度 81％ 61％ 96％(/50％)
特异性 60％ 75％ 43％(/86％)
总之，这些结果表明，使用非侵入性样本检测妇科癌症作为无症状人群的诊断测试或作为筛查工具鉴定无症状人群的这些癌症都是有潜力的，从而实现早期诊断和治疗，众所周知这可以提高妇科癌症的存活率。
实施例5-良性妇科病症对MCM5 ELISA检测妇科癌症的诊断准确性的影响
研究人群
已知具有人群中常见的良性妇科病症(即子宫内膜异位、纤维瘤、多囊卵巢综合征(PCOS)和停经后变性(PMB))的患者被纳入用于研究，该研究旨在确定常见良性病症的存在是否影响MCM5 ELISA测试的特异性。从South Central Oxford B研究伦理委员会获得伦理批准(16/SC/0643-实质性修正案1)，并于2018年9月和2019年7月之间在曼彻斯特圣玛丽医院招募患者。在收集尿液和/或卫生棉条样本之前，获得所有患者的知情同意。所有具有上述已知良性病症的符合条件的患者均被纳入。如果患者是完整的处女，如果她们之前被诊断为膀胱癌或肾癌，如果患者在前两周内接受过任何泌尿外科器械，或者如果患者目前正在接受化疗或放疗，则排除在外。患者被要求提供完全排放的尿液样本。
除了良性病症样本外，还从具有已知卵巢癌或子宫内膜癌症患者中收集了其他样本，如实施例1-4中所述。尿液样本按上述实施例1所述进行处理。MCM5 ELISA如以上实施例1中所述进行。
结果
子宫内膜癌症
MCM5 ELISA能够以高敏感度检测从子宫内膜癌症患者获得的尿液样本中的MCM5阳性细胞。在确定的截止值12pg/mL处，MCM5 ELISA的敏感度为86.1％(95％CI：72.1％至94.7％)，特异性为74.6％(95％CI：61.6％至85.0％)(见下表4)。
表4-应用于来自子宫内膜癌症患者的尿液样本的MCM5 ELISA的敏感度和特异性，其根据相应的ROC曲线计算(数据未显示)
子宫内膜 尿液
敏感度 86.1％
特异性 74.6％
此外，与来自良性妇科病症患者的尿液相比，来自子宫内膜癌症患者的尿液中的MCM5水平显著更高(p<0.0001，图8A)。重要的是，低级别和早期子宫内膜癌症的MCM5检测水平在统计学上都显示出显著增加(分别为图8B和8C)。特别地，MCM5 ELISA能够检测低级别子宫内膜癌症尿液中的MCM5阳性细胞，敏感度为83.3％(95％CI：51.6％至97.9％)，以及1期癌症尿液中的MCM5阳性细胞，敏感度为89.2％(95％CI：71.8％至97.7％)。因此，尿液样本中MCM5的检测显示对低级别(83.3％)和早期(89.2％)子宫内膜癌症具有非常高的敏感度。
卵巢癌
MCM5 ELISA能够以高敏感度检测来自卵巢癌患者的尿液样本中的MCM5阳性细胞。在鉴定的截止值12pg/mL处，MCM5 ELISA的敏感度为61.5％(95％CI：40.6％至79.8％)，特异性为74.6％(95％CI：61.6％至85.0％)(参见下表5)。此外，与普通良性妇科病症患者相比，来自卵巢癌患者的尿液样本中的MCM5水平显著更高(p＝0.02；图9)。
表5-应用于来自卵巢癌患者的尿液样本的MCM5 ELISA的敏感度和特异性，其通过相应的ROC曲线计算(数据未显示)
卵巢 尿液
敏感度 61.5％
特异性 74.6％
MCM5 ELISA还能够检测低级别卵巢癌尿液中的MCM5阳性细胞，敏感度为71.4％(95％CI：29.0％至96.3％)，以及1期癌症尿液中的MCM5阳性细胞，敏感度为70.0％(95％)CI：34.8％至93.3％)。因此，尿液样本中MCM5的检测表明对低级别(71.4％)和早期(70％)卵巢癌肿瘤具有非常高的敏感度。
良性妇科病症
与来自子宫内膜癌症患者的尿液样本中的MCM5水平相比，来自良性妇科病症患者的尿液样本中的MCM5水平在统计学上显著更低(图10)。因此，在应用于尿液样品时，最常见的良性妇科病症，即子宫内膜异位、纤维瘤、多囊卵巢综合征(PCOS)和停经后出血(PMB)对MCM5 ELISA的诊断准确性没有任何显著的影响：子宫内膜异位(p<0.0001)、PCOS(p＝0.03)、纤维瘤(p＝0.0005)和PMB(p＝0.003)。
本发明的其他方面：
1.一种检测受试者存在或不存在妇科癌症的方法，所述方法包括以下步骤：
获取从所述受试者分离的非侵入性样本；和
检测至少一种生物标记物或确定至少一种生物标记物的浓度。
2.方面1所述的方法，其中所述非侵入性样本选自由以下组成的组：尿液样本、卫生棉条样本和阴道拭子样本。
3.方面1或2所述的方法，还包括以下步骤：
对所述非侵入性样本进行处理以从所述非侵入性样本中的细胞释放所述至少一种生物标记物。
4.前述方面中任一个所述的方法，还包括以下步骤：
将确定的所述至少一种生物标记物的浓度与参照进行比较。
5.方面4的方法，其中所述参照是针对从一个或多个健康个体制备的一个或多个样本确定的所述至少一种生物标记物的平均浓度。
6.方面4或5所述的方法，其中如果与所述参照相比，所述至少一种生物标记物的浓度异常，则可能存在妇科癌症。
7.方面4至6中任一个所述的方法，其中如果所述至少一种生物标记物的浓度高于所述参照，则可能存在妇科癌症。
8.前述方面中任一个所述的方法，其中检测所述至少一种生物标记物或确定所述至少一种生物标记物的浓度的步骤包括：
进行ELISA测定以检测所述至少一种生物标记物或确定所述至少一种生物标记物的浓度。
9.方面8所述的方法，其中如果确定所述至少一种生物标记物的浓度高于5pg/mL、6pg/mL、7pg/mL、8pg/mL、9pg/mL、10pg/mL、11pg/mL、12pg/mL、13pg/mL、14pg/mL、15pg/mL、16pg/mL、17pg/mL、18pg/mL、19pg/mL、20pg/mL、21pg/mL、22pg/mL、23pg/mL、24pg/mL、25pg/mL、26pg/mL、27pg/mL、28pg/mL、29pg/mL、30pg/mL、35pg/mL、45pg/mL、50pg/mL、55pg/mL、60pg/mL、65pg/mL或70pg/mL，则可能存在所述妇科癌症。
10.方面8或9所述的方法，其中如果确定所述至少一种生物标记物的浓度高于(i)约12pg/mL；(ii)约17pg/mL；或(iii)约70pg/mL；优选约12pg/mL，则可能存在所述妇科癌症。
11.方面8-10中任一个所述的方法，其中应用12pg/mL、17pg/mL或70pg/mL，优选12pg/mL的截止值。
12.前述方面中任一个所述的方法，其中所述非侵入性样本是尿液样本。
13.前述方面中任一个所述的方法，其中所述方法是用于诊断受试者中妇科癌症的方法，任选地，其中所述方法还包括以下步骤：
如果可能存在妇科癌症，则诊断所述受试者患有妇科癌症。
14.一种用于诊断受试者患有妇科癌症或良性妇科病症的方法，所述方法包括以下步骤：
提供先前从所述受试者分离的非侵入性样本；
确定所述非侵入性样本中的至少一种生物标记物的浓度；
将所述非侵入性样本中的所述至少一种生物标记物的浓度与参照进行比较；
如果所述非侵入性样本中的所述至少一种生物标记物的浓度高于所述参照，则诊断所述受试者患有妇科癌症；或者，如果所述非侵入性样本中的所述至少一种生物标记物的浓度低于所述参照，则诊断所述受试者患有良性妇科病症。
15.一种用于区分与妇科癌症相关的非侵入性样本和与良性妇科癌症相关的非侵入性样本的方法，所述方法包括以下步骤：
提供先前从受试者分离的非侵入性样本；
确定所述非侵入性样本中至少一种生物标记物的浓度；
将所述非侵入性样本中的所述至少一种生物标记物的浓度与参照进行比较；
如果非侵入性样本中的所述至少一种生物标记物的浓度高于参照，则确定所述非侵入性样本与妇科癌症有关，或者如果所述非侵入性样本中至少一种生物标记物的浓度低于所述参照，则确定所述非侵入性样本与良性妇科病症相关。
16.一种用于将受试者分层为第一或第二治疗组的方法，所述方法包括以下步骤：
提供先前从受试者分离的非侵入性样本；
确定所述非侵入性样本中至少一种生物标记物的浓度；
基于所述非侵入性样本中所述至少一种生物标记物的浓度，将所述受试者分配到两个治疗组中的一个，其中第一治疗组接受用于妇科癌症的治疗，第二治疗组不接受治疗或接受用于良性妇科病症的治疗。
17.方面16所述的方法，其中如果所述非侵入性样本中所述至少一种生物标记物的浓度高于参照，则将所述受试者分层为所述第一治疗组，或者如果所述非侵入性样本中所述至少一种生物标记物的浓度低于所述参照，则将所述受试者分层为所述第二治疗组。
18.方面14-17中任一个所述的方法，其中所述良性妇科病症选自停经后出血(PMB)、子宫内膜异位、纤维瘤和多囊卵巢综合征(PCOS)。
19.方面14-18中任一个所述的方法，其中所述非侵入性样本是尿液样本。
20.方面14-19中任一个所述的方法，其中所述至少一种生物标记物是MCM蛋白。
21.方面14-20中任一个所述的方法，其中所述至少一种生物标记物是MCM5。
22.方面14-21中任一个所述的方法，其中确定所述至少一种生物标记物的浓度的步骤包括进行ELISA测定以检测所述至少一种生物标记物或确定所述至少一种生物标记物的浓度。
23.方面14-22中任一个所述的方法，其中确定所述至少一种生物标记物的浓度的步骤包括进行MCM5 ELISA测定以检测MCM5或确定MCM5的浓度。
24.前述方面中任一个所述的方法，其中所述非侵入性样本是尿液样本。
25.前述方面中任一个所述的方法，还包括以下步骤：
对所述非侵入性样本进行处理以从所述非侵入性样本中的细胞释放所述至少一种生物标记物。
26.前述方面中任一个所述的方法，其是体外方法。
27.方面3至26中任一个所述的方法，其中处理所述非侵入性样本以释放所述至少一种生物标记物的步骤包括：将所述非侵入性样本暴露于能够从所述非侵入性样本中的细胞释放所述至少一种生物标记物的裂解缓冲液。
28.方面3至27中任一个所述的方法，其中处理所述非侵入性样本以释放所述至少一种生物标记物的步骤包括：
使所述非侵入性样本通过用于捕获细胞的过滤器，使得细胞被捕获在所述过滤器中；
使裂解缓冲液通过所述过滤器，使得捕获的细胞暴露于所述裂解缓冲液中；和/或
将所述过滤器孵育一段时间，使得所述裂解缓冲液使所述细胞释放至少一种生物标记物。
29.前述方面中任一个所述的方法，其中所述至少一种生物标记物包含MCM蛋白或由MCM蛋白组成。
30.方面29所述的方法，其中所述MCM蛋白是MCM5。
31.方面3至30中任一个所述的方法，其中所述至少一种生物标记物是MCM蛋白，任选地为MCM5，并且所述裂解缓冲液能够从所述非侵入性样本的细胞中释放MCM蛋白，任选地MCM5。
32.方面27至31中任一个所述的方法，其中所述裂解缓冲液能够从所述非侵入性样本的细胞中释放MCM5并且基本上不使MCM5蛋白变性。
33.方面27至32中任一个所述的方法，其中所述裂解缓冲液不使抗体变性。
34.方面27至33中任一个所述的方法，其中所述裂解缓冲液包含去垢剂。
35.方面34所述的方法，其中所述去垢剂包括Triton X-100。
36.方面35所述的方法，其中所述去垢剂包括浓度在0.01％和25％之间、在0.01％和10％之间、在0.05％和5％之间、在0.1％和2％之间、在0.5％和2％之间、在0.75％和1.25％之间、或约1％的Triton X-100。
37.方面34至36中任一个所述的方法，其中所述去垢剂包括脱氧胆酸钠或由脱氧胆酸钠组成。
38.方面37所述的方法，其中所述去垢剂包含浓度在0.1％和20％之间、在0.1％和10％之间、在0.1％和5％之间、在0.5％和5％之间、在0.5％和2.5％之间、在0.75％和2.5％之间、在0.75％和1.25％之间、或约1％的去垢剂，或由浓度在0.1％和20％之间、在0.1％和10％之间、在0.1％和5％之间、在0.5％和5％之间、在0.5％和2.5％之间、在0.75％和2.5％之间、在0.75％和1.25％之间、或约1％的去垢剂组成。
39.方面34至38中任一个所述的方法，其中所述去垢剂包含十二烷基硫酸钠(SDS)或由十二烷基硫酸钠(SDS)组成。
40.方面39所述的方法，其中所述去垢剂包含浓度在0.001％和10％之间、在0.01％和5％之间、在0.05％和5％之间、在0.01％和1％之间、在0.05％和1％之间、在0.05％和0.5％之间、在0.075％和0.25％之间、或约0.1％的十二烷基硫酸钠(SDS)，或由浓度在0.001％和10％之间、在0.01％和5％之间、在0.05％和5％之间、在0.01％和1％之间、在0.05％和1％之间、在0.05％和0.5％之间、在0.075％和0.25％之间、或约0.1％的十二烷基硫酸钠(SDS)组成。
41.方面34至40中任一个所述的方法，其中所述去垢剂由Triton X-100、脱氧胆酸钠和十二烷基硫酸钠(SDS)组成。
42.方面41所述的方法，其中所述去垢剂由在0.5％和2％之间的Triton X-100、在0.5％和2％之间的脱氧胆酸钠和在0.05％和0.5％之间的十二烷基硫酸钠(SDS)组成。
43.方面27至42中任一个所述的方法，其中所述裂解缓冲液包含缓冲剂组分。
44.方面43的方法，其中所述缓冲剂组分具有在pH 4和pH 9之间、在pH 5和pH 8.5之间、在pH 6和pH 8之间、在pH 6.5和pH 8之间、在pH 7和pH 8之间、在pH 7.3和pH 7.9之间、在pH 7.4和pH 7.8之间、pH 7.5和pH 7.7之间、或约pH 7.6的pH；和/或将所述裂解缓冲液的pH维持在pH 4和pH 9之间、pH 5和pH 8.5之间、pH 6和pH 8之间、pH 6.5和pH 8之间、pH 7和pH 8之间、pH 7.3和pH 7.9之间、pH 7.4和pH 7.8之间、pH 7.5和pH 7.7之间、或约pH 7.6。
45.方面43或44所述的方法，其中所述缓冲剂组分包含Tris或由Tris组成。
46.方面45所述的方法，其中所述缓冲剂组分包含浓度大于1mM、在1mM和350mM之间、在5mM和200mM之间、在5mM和100mM、在5mM和50mM、在5mM和40mM之间、在5mM和35mM之间、在10mM和35mM之间、15mM和35mM之间、在15mM和30mM之间、在20mM和30mM之间、或约25mM的Tris；或由浓度大于1mM、在1mM和350mM之间、在5mM和200mM之间、在5mM和100mM、在5mM和50mM、在5mM和40mM之间、在5mM和35mM之间、在10mM和35mM之间、15mM和35mM之间、在15mM和30mM之间、在20mM和30mM之间、或约25mM的Tris组成。
47.方面43至46中任一个所述的方法，其中所述缓冲剂组分由浓度在15mM和35mM之间的Tris组成。
48.方面27至47中任一个所述的方法，其中所述裂解缓冲液包含盐。
49.方面48所述的方法，其中所述盐是氯化钠。
50.方面49所述的方法，其中所述裂解缓冲液包含浓度在10mM和350mM之间、在20mM和300mM之间、在50mM和250mM之间、在100mM和250mM之间、在100mM和200mM之间、在125mM和175mM之间、或约150mM的氯化钠。
51.方面50所述的方法，其中所述裂解缓冲液包含浓度在100mM和200mM之间的氯化钠。
52.如方面27至51中任一个所述的方法，其中所述裂解缓冲液包括：
(i)在1mM和100mM之间的Tris；
(ii)在50mM和300mM之间的氯化钠；
(iii)在0.1％和5％之间的脱氧胆酸钠；
(iv)在0.01％和1％之间的十二烷基硫酸钠；和/或
(v)在0.1％和5％之间的Triton-X100。
53.方面52所述的方法，其中所述裂解缓冲液包含：
(i)在10mM和40mM之间的Tris；
(ii)在100mM和200mM之间的氯化钠；
(iii)在0.5％和2％之间的脱氧胆酸钠；
(iv)在0.05％和0.5％之间的十二烷基硫酸钠；和/或
(v)在0.5％和2％之间的Triton-X100。
54.方面53所述的方法，其中所述裂解缓冲液包含：
(i)约25mM的Tris；
(ii)约150mM的氯化钠；
(iii)约1％的脱氧胆酸钠；
(iv)约0.1％的十二烷基硫酸钠；和/或
(v)约1％的Triton-X100。
55.前述方面中任一个所述的方法，其中检测所述至少一种生物标记物或确定所述至少一种生物标记物的浓度的步骤包括：
将所述非侵入性样本暴露于第一单克隆抗体和/或第二单克隆抗体；和
检测与所述第一单克隆抗体和/或所述第二单克隆抗体结合的所述至少一种生物标记物或确定与所述第一单克隆抗体和/或所述第二单克隆抗体结合的所述至少一种生物标记物的浓度。
56.方面55所述的方法，其中所述第一单克隆抗体和所述第二单克隆抗体结合至MCM5。
57.方面56所述的方法，其中所述第一单克隆抗体是这样的抗体：
(i)结合至具有SEQ ID NO:1的氨基酸序列的多肽；
(ii)包含至少一个选自由以下组成的组的互补决定区(CDR)：
(a)12A7 CDRH1，其具有SEQ ID NO:9的序列或与SEQ ID NO:9不同之处在于单个氨基酸取代的序列；
(b)12A7 CDRH2，其具有SEQ ID NO:11的序列或与SEQ ID NO:11不同之处在于单个氨基酸取代的序列；
(c)12A7 CDRH3，其具有SEQ ID NO:13的序列或与SEQ ID NO:13不同之处在于单个氨基酸取代的序列；
(d)12A7 CDRL1，其具有SEQ ID NO:3的序列或与SEQ ID NO:3不同之处在于单个氨基酸取代的序列；
(e)12A7 CDRL2，其具有SEQ ID NO:5的序列或与SEQ ID NO:5不同之处在于单个氨基酸取代的序列；和
(f)12A7 CDRL3，其具有SEQ ID NO:7的序列或与SEQ ID NO:7不同之处在于单个氨基酸取代的序列；
(iii)包含具有与SEQ ID NO:29至少85％、90％、95％、98％、99％或100％同一性的序列的重链可变区；
(iv)包含具有与SEQ ID NO:27至少85％、90％、95％、98％、99％或100％同一性的序列的轻链可变区序列；或者
(v)与(i)、(ii)、(iii)或(iv)的抗体竞争。
58.方面56或57所述的方法，其中所述第二单克隆抗体是这样的抗体：
(i)结合至具有SEQ ID NO:2的氨基酸序列的多肽；
(ii)包含至少一个选自由以下组成的组的互补决定区(CDR)：
(a)4B4 CDRH1，其具有SEQ ID NO:21的序列或与SEQ ID NO:21不同之处在于单个氨基酸取代的序列；
(b)4B4 CDRH2，其具有SEQ ID NO:23的序列或与SEQ ID NO:23不同之处在于单个氨基酸取代的序列；
(c)4B4 CDRH3，其具有SEQ ID NO:25的序列或与SEQ ID NO:25不同之处在于单个氨基酸取代的序列；
(d)4B4 CDRL1，其具有SEQ ID NO:15的序列或与SEQ ID NO:15不同之处在于单个氨基酸取代的序列；
(e)4B4 CDRL2，其具有SEQ ID NO:17的序列或与SEQ ID NO:17不同之处在于单个氨基酸取代的序列；和
(f)4B4 CDRL3，其具有SEQ ID NO:19的序列或与SEQ ID NO:19不同之处在于单个氨基酸取代的序列；
(iii)包含具有与SEQ ID NO:33至少85％、90％、95％、98％、99％或100％同一性的序列的重链可变区；
(iv)包含具有与SEQ ID NO:31至少85％、90％、95％、98％、99％或100％同一性的序列的轻链可变区序列；或者
(v)与(i)、(ii)、(iii)或(iv)的抗体竞争。
59.方面55至58中任一个所述的方法，其中所述第一单克隆抗体和/或第二单克隆抗体对MCM5的亲和力在0.001-1nM的范围内。
60.方面55至59中任一个所述的方法，其中所述第一单克隆抗体和/或第二单克隆抗体是Fab'2、F'(ab)2、Fv、单链抗体或双抗体。
61.方面55至60中任一个所述的方法，其中所述第一单克隆抗体包含12A7 CDRH1、12A7CDRH2和12A7 CDRH3。
62.方面55至61中任一个所述的方法，其中所述第一单克隆抗体包含12A7 CDRL1、12A7CDRL2和12A7 CDRL3。
63.方面55至62中任一个所述的方法，其中所述第一单克隆抗体包含具有SEQ IDNO:9的序列的12A7 CDRH1、具有SEQ ID NO:11的序列的12A7 CDRH2和具有SEQ ID NO:13的序列的12A7 CDRH3。
64.方面55至63中任一个所述的方法，其中所述第一单克隆抗体包含具有SEQ IDNO:3的序列的12A7 CDRL1、具有SEQ ID NO:5的序列的12A7 CDRL2和具有SEQ ID NO:7的序列的12A7 CDRL3。
65.方面55至64中任一个所述的方法，其中所述第二单克隆抗体包含4B4 CDRH1、4B4CDRH2和4B4 CDRH3。
66.方面55至65中任一个所述的方法，其中所述第二单克隆抗体包含4B4 CDRL1、4B4CDRL2和4B4 CDRL3。
67.方面55至66中任一个所述的方法，其中所述第二单克隆抗体包含具有SEQ IDNO:21的序列的4B4 CDRH1、具有SEQ ID NO:23的序列的4B4 CDRH2和具有SEQ ID NO:25的序列的4B4 CDRH3。
68.方面55至67中任一个所述的方法，其中所述第二单克隆抗体具有具有SEQ IDNO:15的序列的4B4 CDRL1、具有SEQ ID NO:17的序列的4B4 CDRL2和具有SEQ ID NO:19的序列的4B4 CDRL3。
69.方面55至68中任一个所述的方法，其中所述第一单克隆抗体包含具有与SEQID NO:29至少95％同一性的序列的重链可变区。
70.方面55至69中任一个所述的方法，其中所述第一单克隆抗体包含具有与SEQID NO:29至少98％同一性的序列的重链可变区。
71.方面55至70中任一个所述的方法，其中所述第一单克隆抗体包含具有与SEQID NO:27至少95％同一性的序列的轻链可变区。
72.方面55至71中任一个所述的方法，其中所述第一单克隆抗体包含具有与SEQID NO:27至少98％同一性的序列的轻链可变区。
73.方面55至72中任一个所述的方法，其中所述第二单克隆抗体包含具有与SEQID NO:33至少95％同一性的序列的重链可变区。
74.方面55至73中任一个所述的方法，其中所述第二单克隆抗体包含具有与SEQID NO:33至少98％同一性的序列的重链可变区。
75.方面55至74中任一个所述的方法，其中所述第二单克隆抗体包含具有与SEQID NO:31至少95％同一性的序列的轻链可变区。
76.方面55至75中任一个所述的方法，其中所述第二单克隆抗体包含具有与SEQID NO:31至少98％同一性的序列的轻链可变区。
77.前述方面中任一个所述的方法，其中所述非侵入性样本是尿液样本，并且所述方法比使用拭子样本进行的等效方法和/或使用卫生棉条样本进行的等效方法具有更高的敏感度。
78.前述方面中任一个所述的方法，其中所述非侵入性样本是尿液样本，并且所述方法比使用拭子样本进行的等效方法和/或使用卫生棉条样本进行的等效方法具有更高的特异性。
79.前述方面中任一个所述的方法，其中所述方法对所述妇科癌症的敏感度为至少约20％、22％、24％、26％、28％、30％、32％、34％、36％、38％、40％、42％、44％、46％、48％或50％。
80.前述方面中任一个所述的方法，其中所述方法对所述妇科癌症的敏感度为至少约50％、52％、54％、55％、56％、57％、58％、59％、60％或61％。
81.前述方面中任一个所述的方法，其中所述方法对所述妇科癌症的敏感度为至少约75％、76％、77％、78％、79％、80％或81％。
82.前述方面中任一个所述的方法，其中所述方法对所述妇科癌症的敏感度为至少约90％、92％、93％、94％、95％或96％。
83.前述方面中任一个所述的方法，其中所述方法对所述妇科癌症的特异性为至少约20％、22％、24％、26％、28％、30％、32％、34％、36％、38％或40％。
84.前述方面中任一个所述的方法，其中所述方法对所述妇科癌症的特异性为至少约50％、52％、54％、55％、56％、57％、58％、59％或60％。
85.前述方面中任一个所述的方法，其中所述方法对所述妇科癌症的特异性为至少约60％、62％、64％、66％、68％、70％、71％、72％、73％、74％或75％。
86.前述方面中任一个所述的方法，其中所述方法对所述妇科癌症的特异性为至少约80％、82％、83％、84％、85％或86％。
87.方面1至78中任一个所述的方法，其中所述非侵入性样本是尿液样本，并且所述方法对所述妇科癌症的敏感度为至少约75％和对所述妇科癌症的特异性为至少约55％。
88.方面1至76中任一个所述的方法，其中所述非侵入性样本是阴道拭子样本，并且所述方法对所述妇科癌症的敏感度为至少约55％和对所述妇科癌症的特异性为至少约70％。
89.方面1至76中任一个所述的方法，其中所述非侵入性样本是卫生棉条样本，并且所述方法对所述妇科癌症的敏感度为至少约90％和对所述妇科癌症的特异性为至少约35％。
90.方面1至76中任一个所述的方法，其中所述非侵入性样本是卫生棉条样本，并且所述方法对所述妇科癌症的敏感度为至少约45％和对所述妇科癌症的特异性为至少约80％。
91.方面1至76中任一个所述的方法，其中所述非侵入性样本是卫生棉条样本，并且所述方法对所述妇科癌症的敏感度为至少约90％和对所述妇科癌症的特异性为至少约80％。
92.前述方面中任一个所定义的裂解缓冲液在检测受试者存在或不存在妇科癌症的方法中的用途。
93.前述任一方面所定义的第一单克隆抗体和/或前述任一方面所定义的第二单克隆抗体在检测受试者存在或不存在妇科癌症的方法中的用途。
94.试剂盒在检测受试者存在或不存在妇科癌症的方法中的用途，其中所述试剂盒包括：
(a)前述方面中任一个所定义的裂解缓冲液；
(b)前述方面中任一个所定义的第一单克隆抗体；和/或
(c)前述方面中任一个所定义的第二单克隆抗体。
95.一种试剂盒，包括：
(a)前述方面中任一个所定义的裂解缓冲液；
(b)前述方面中任一个所定义的第一单克隆抗体；和/或
(c)前述方面中任一个项所定义的第二单克隆抗体；
和
(d)在检测受试者存在或不存在妇科癌症的方法中使用裂解缓冲液和/或第一单克隆抗体和/或第二单克隆抗体的使用说明书。
96.方面1至91中任一个所述的方法、方面92至94中任一个所述的用途或方面95所述的试剂盒，其中所述妇科癌症是妇科恶性肿瘤。
97.方面1至91中任一个所述的方法、根据方面92至94中任一个所述的用途或方面95所述的试剂盒，其中所述妇科癌症选自由以下组成的组：卵巢癌、子宫内膜癌症、子宫癌、宫颈癌、外阴癌、阴道癌、输卵管肿瘤、上皮性卵巢肿瘤、卵巢畸胎瘤、未成熟卵巢畸胎瘤、间质瘤、生殖细胞卵巢肿瘤、未分化肿瘤、交界性卵巢肿瘤、子宫内膜癌、子宫内膜腺癌、子宫内膜样腺癌、子宫内膜鳞状细胞癌、浆液性癌、浆液性子宫内膜上皮内癌、子宫内膜癌肉瘤、透明细胞癌、粘液癌、未分化子宫内膜癌、混合性子宫内膜癌、粘液性肿瘤、恶性苗勒氏管混合瘤、子宫内膜透明细胞肉瘤、颗粒细胞瘤、浆液性输卵管上皮内癌、未成熟囊性畸胎瘤、浆液性卵巢肿瘤和小细胞癌。
98.方面1至91中任一个所述的方法、方面92至94中任一个所述的用途或方面95所述的试剂盒，其中所述妇科癌症是卵巢癌或子宫内膜癌症。
99.方面1至91中任一个所述的方法、方面92至94中任一个所述的用途或方面95所述的试剂盒，其中所述妇科癌症是卵巢癌。
100.方面99所述的方法、用途或试剂盒，其中所述卵巢癌选自由以下组成的组：上皮性卵巢肿瘤、卵巢畸胎瘤、未成熟卵巢畸胎瘤、间质瘤、生殖细胞卵巢肿瘤、未分化肿瘤、交界性卵巢肿瘤、粘液性肿瘤、颗粒细胞瘤、未成熟囊性畸胎瘤、浆液性卵巢肿瘤和小细胞癌。
101.方面1至91中任一个所述的方法、方面92至94中任一个所述的用途或方面95所述的试剂盒，其中所述妇科癌症是子宫内膜癌症。
102.方面101所述的方法、用途或试剂盒，其中所述子宫内膜癌症选自由以下组成的组：子宫内膜癌、子宫内膜腺癌、子宫内膜样腺癌、子宫内膜鳞状细胞癌、浆液性癌、浆液性子宫内膜上皮内癌、子宫内膜癌肉瘤、透明细胞癌、粘液癌、未分化子宫内膜癌、混合性子宫内膜癌、恶性苗勒氏管混合瘤和子宫内膜透明细胞肉瘤。
103.前述方面中任一个所述的方法、用途或试剂盒，其中所述妇科癌症是低级别癌症。
104.方面103所述的方法、用途或试剂盒，其中所述妇科癌症是G1癌症。
105.方面1至102中任一个所述的方法、用途或试剂盒，其中所述妇科癌症是高级别癌症。
106.方面105所述的方法、用途或试剂盒，其中所述妇科癌症是G2或更高级别的癌症。
107.前述方面中任一个所述的方法、用途或试剂盒，其中所述妇科癌症是早期癌症。
108.方面107所述的方法、用途或试剂盒，其中所述癌症是S1癌症。
109.方面1至106中任一个所述的方法、用途或试剂盒，其中所述妇科癌症是晚期癌症。
110.方面109所述的方法、用途或试剂盒，其中所述妇科癌症是S2或更高级别的癌症。
111.前述方面中任一个所述的方法、用途或试剂盒，其中所述妇科癌症是卵巢癌并且所述方法对所述卵巢癌的特异性为至少约25％。
112.前述方面中任一个所述的方法、用途或试剂盒，其中所述妇科癌症是卵巢癌并且所述方法对所述卵巢癌的敏感度为至少约50％。
113.前述方面中任一个所述的方法、用途或试剂盒，其中所述妇科癌症是卵巢癌并且所述方法对所述卵巢癌的特异性为至少约25％和对卵巢癌的敏感度为至少约50％。
114.前述方面中任一个所述的方法、用途或试剂盒，其中所述妇科癌症是子宫内膜癌症并且所述方法对所述子宫内膜癌症的特异性为至少约40％。
115.前述方面中任一个所述的方法、用途或试剂盒，其中所述妇科癌症是子宫内膜癌症并且所述方法对所述子宫内膜癌症的敏感度为至少约80％。
116.前述方面中任一个所述的方法、用途或试剂盒，其中所述妇科癌症是子宫内膜癌症并且所述方法对所述子宫内膜癌症的特异性为至少约40％和对所述子宫内膜癌症的敏感度为至少约80％。
117.方面1至110中任一个所述的方法、用途或试剂盒，其中所述非侵入性样本是尿液样本，所述妇科癌症是卵巢癌，并且所述方法对所述卵巢癌的敏感度为至少约60％和对所述卵巢癌的特异性为至少约70％，任选地其中应用约12pg/ml的MCM5浓度参照。
118.方面1至110中任一个所述的方法、用途或试剂盒，其中所述非侵入性样本是尿液样本，所述妇科癌症是子宫内膜癌症，并且所述方法对所述子宫内膜癌症的敏感度为至少约80％和对所述子宫内膜癌症的特异性为至少约70％，任选地其中应用约12pg/ml的MCMS浓度参照。
119.方面1至110中任一个所述的方法、用途或试剂盒，其中所述非侵入性样本是尿液样本，所述妇科癌症是低级别卵巢癌，并且所述方法对所述低级别卵巢癌的敏感度为至少约70％，任选地其中应用约12pg/ml的MCM5浓度参照。
120.方面1至110中任一个所述的方法用途或试剂盒，其中所述非侵入性样本是尿液样本，所述妇科癌症是早期卵巢癌，并且所述方法对所述早期卵巢癌的敏感度为至少约70％，任选地其中应用约12pg/ml的MCM5浓度参照。
121.方面1至110中任一个所述的方法、用途或试剂盒，其中所述非侵入性样本是尿液样本，所述妇科癌症是低级别子宫内膜癌症，并且所述方法对所述低级别子宫内膜癌症的敏感度为至少约80％，任选地其中应用约12pg/ml的MCM5浓度参照。
122.方面1至110中任一个所述的方法、用途或试剂盒，其中所述非侵入性样本是尿液样本，所述妇科癌症是早期子宫内膜癌症，并且所述方法对所述早期子宫内膜癌症的敏感度为至少约85％，任选地其中应用约12pg/ml的MCM5浓度参照。
123.方面1至91、或96至122中任一个所述的方法，或方面92至94、或96至122中任一个的用途，或方面95至122中任一个的试剂盒，其中所述受试者患有良性妇科病症。
124.权利要求123所述的方法、用途或试剂盒，其中所述良性妇科病症选自停经后出血(PMB)、子宫内膜异位、纤维瘤和多囊卵巢综合征(PCOS)。
上述说明书中提及的所有出版物均通过引用并入本文。在不脱离本发明的范围的情况下，本发明的所描述的方面和实施方式的各种修改和变化对于本领域技术人员来说将是显而易见的。尽管已经结合特定的优选实施方式描述了本发明，但是应当理解，所要求保护的本发明不应被过度地限制于这些特定的实施方式。实际上，对本领域技术人员显而易见的用于执行本发明的所述模式的各种修改都规定在以下权利要求的范围内。
表4-序列
Figure BDA0003220353770000461
Figure BDA0003220353770000471
序列表
SEQ ID NO:1
WDETKGE
SEQ ID NO:2
DDRVAIH
SEQ ID NO:3
QNLVQSNGNTY
SEQ ID NO:4
CAGAACCTTGTACAAAGTAATGGAAACACCTATTTA
SEQ ID NO:5
KVS
SEQ ID NO:6
AAGTTTCCAA
SEQ ID NO:7
SQSTRVPYT
SEQ ID NO:8
TCTCAAAGTACACGTGTTCCGTACACA
SEQ ID NO:9
GFSLSTSGMG
SEQ ID NO:10
GGGTTTTCACTGAGCACTTCTGGTATGGGT
SEQ ID NO:11
IFWDDDK
SEQ ID NO:12
ATTTTCTGGGATGATGACAAG
SEQ ID NO:13
ARRSDYNYYSMDY
SEQ ID NO:14
GCGCGGCGAAGTGACTACAATTACTACTCTATGGACTAC
SEQ ID NO:15
QDIGSS
SEQ ID NO:16
CAGGACATTGGTAGTAGC
SEQ ID NO:17
ATS
SEQ ID NO:18
GCCACATCC
SEQ ID NO:19
LQYASSPPT
SEQ ID NO:20
CTACAATATGCTAGTTCTCCTCCGACG
SEQ ID NO:21
GFTFSNYA
SEQ ID NO:22
GGATTCACTTTCAGTAACTATGCC
SEQ ID NO:23
ISRGGSYT
SEQ ID NO:24
ATTAGTCGTGGTGGTAGTTACACC
SEQ ID NO:25
ARHGYNYDDGAWFAN
SEQ ID NO:26
GCAAGACATGGATATAATTACGACGACGGGGCCTGGTTTGCTAAC
SEQ ID NO:27
DIMLTQSPLSLSVTLGDQASISCRSSQNLVQSNGNTYLTWYLQKPGQSPKVLINKVSNRFYGVPDRFSGSGSGTDFTLRISRVEAEDLGIYFCSQSTRVPYTFGGGTKLEIRR
SEQ ID NO:28
GATATCATGCTGACCCAATCTCCACTCTCCCTGTCTGTCACTCTTGGAGATCAGGCCTCCATCTCTTGCAGATCTAGTCAGAACCTTGTACAAAGTAATGGAAACACCTATTTAACTTGGTACCTGCAGAAGCCAGGCCAGTCTCCAAAGGTCCTGATCAACAAAGTTTCCAACCGATTTTATGGGGTCCCAGACAGGTTCAGTGGCAGTGGATCAGGGACAGATTTCACACTCAGGATCAGCAGAGTGGAGGCTGAGGATCTGGGAATTTATTTCTGCTCTCAAAGTACACGTGTTCCGTACACATTCGGAGGGGGGACCAAGCTGGAAATAAGACG
SEQ ID NO:29
QQDLQQSGPGILQPTQTLSLTCSFSGFSLSTSGMGVSWIRQSSNMGLEWLAHIFWDDDKRYNPSLRSRLTLSKDTSSSQVFLMITSVSTADSATYYCARRSDYNYYSMDYWGQGTAVTVSS
SEQ ID NO:30
CAGCAAGATCTGCAGCAGTCTGGCCCTGGGATATTGCAGCCCACCCAGACCCTCAGTCTGACTTGTTCTTTCTCTGGGTTTTCACTGAGCACTTCTGGTATGGGTGTGAGTTGGATTCGTCAATCTTCAAATATGGGTCTGGAGTGGCTGGCACACATTTTCTGGGATGATGACAAGCGCTATAATCCCTCCCTGAGGAGCCGACTCACGCTCTCCAAGGATACCTCCAGTAGCCAGGTATTTCTCATGATCACCAGTGTGAGTACTGCAGATTCTGCCACATACTACTGTGCGCGGCGAAGTGACTACAATTACTACTCTATGGACTACTGGGGTCAAGGAACCGCAGTCACCGTCTCCTCA
SEQ ID NO:31
DIMLTQSPSSLSASLGERVSLTCRASQDIGSSLNWLQQEPDGTIKRLIYATSSLDSGVPKRFSGSRSGSDYSLTISSLESEDFVDYYCLQYASSPPTFGGGTKLEIK
SEQ ID NO:32
GATATCATGCTGACCCAATCTCCATCCTCCTTATCTGCCTCTCTGGGAGAAAGAGTCAGTCTCACTTGTCGGGCAAGTCAGGACATTGGTAGTAGCTTAAACTGGCTTCAACAGGAACCAGATGGAACTATTAAACGCCTAATCTACGCCACATCCAGTTTAGATTCTGGTGTCCCCAAAAGGTTCAGTGGCAGTAGGTCTGGGTCAGATTATTCTCTCACCATCAGCAGCCTTGAGTCTGAAGATTTTGTAGACTATTACTGTCTACAATATGCTAGTTCTCCTCCGACGTTCGGTGGAGGCACCAAGCTGGAAATCAAAC
SEQ ID NO:33
VKLQESGGGLVKPGGSLKLSCAASGFTFSNYAMSWVRQNPEKRLEWVATISRGGSYTYYPDSVKGRFTISRDNAKNTLYLQMNSLRSEDTAMYFCARHGYNYDDGAWFANWGQGTLVTVSA
SEQ ID NO:34
TAGGTGAAACTGCAGGAGTCTGGGGGAGGCTTAGTGAAGCCTGGAGGGTCCCTGAAACTCTCCTGTGCAGCCTCTGGATTCACTTTCAGTAACTATGCCATGTCTTGGGTTCGCCAGAATCCGGAGAAGAGGCTGGAGTGGGTCGCAACCATTAGTCGTGGTGGTAGTTACACCTACTATCCAGACAGTGTGAAGGGTCGATTCACCATCTCCAGAGACAATGCCAAGAACACCCTGTATCTGCAAATGAACAGTCTGAGGTCTGAGGACACGGCCATGTATTTCTGTGCAAGACATGGATATAATTACGACGACGGGGCCTGGTTTGCTAACTGGGGCCAAGGGACTCTGGTCACTGTCTCTGCA
SEQ ID NO:35
Figure BDA0003220353770000511
SEQ ID NO:36
智人微小染色体维持复合组分5(MCM5)，mRNA
NCBI序列：NM_006739.3
Figure BDA0003220353770000512
Figure BDA0003220353770000521
序列表
<110> 阿奎尔诊断有限公司
<120> 检测方法
<130> N413285WO
<150> GB1820867.8
<151> 2018-12-20
<160> 36
<170> PatentIn版本3.5
<210> 1
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗体12A7结合的表位
<400> 1
Trp Asp Glu Thr Lys Gly Glu
1 5
<210> 2
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗体4B4 结合的表位
<400> 2
Asp Asp Arg Val Ala Ile His
1 5
<210> 3
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 12A7 轻链 CDR 1的多肽序列
<400> 3
Gln Asn Leu Val Gln Ser Asn Gly Asn Thr Tyr
1 5 10
<210> 4
<211> 36
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 12A7 轻链 CDR 1的核苷酸序列
<400> 4
cagaaccttg tacaaagtaa tggaaacacc tattta 36
<210> 5
<211> 4
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 12A7 轻链 CDR 2的多肽序列
<220>
<221> misc_特征
<222> (4)..(4)
<223> Xaa可以是任意天然存在的氨基酸
<400> 5
Lys Val Ser Xaa
1
<210> 6
<211> 10
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 12A7 轻链 CDR 2 的核苷酸序列
<400> 6
aagtttccaa 10
<210> 7
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 12A7 轻链 CDR 3 的多肽序列
<400> 7
Ser Gln Ser Thr Arg Val Pro Tyr Thr
1 5
<210> 8
<211> 27
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 12A7 轻链 CDR 3 的核苷酸序列
<400> 8
tctcaaagta cacgtgttcc gtacaca 27
<210> 9
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 12A7 重链 CDR 1 的多肽序列
<400> 9
Gly Phe Ser Leu Ser Thr Ser Gly Met Gly
1 5 10
<210> 10
<211> 30
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 12A7 重链 CDR 1 的核苷酸序列
<400> 10
gggttttcac tgagcacttc tggtatgggt 30
<210> 11
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 12A7 重链 CDR 2 的多肽序列
<400> 11
Ile Phe Trp Asp Asp Asp Lys
1 5
<210> 12
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 12A7 重链 CDR 2 的核苷酸序列
<400> 12
attttctggg atgatgacaa g 21
<210> 13
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 12A7 重链 CDR 3 的多肽序列
<400> 13
Ala Arg Arg Ser Asp Tyr Asn Tyr Tyr Ser Met Asp Tyr
1 5 10
<210> 14
<211> 39
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 12A7 重链 CDR 3 的核苷酸序列
<400> 14
gcgcggcgaa gtgactacaa ttactactct atggactac 39
<210> 15
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 4B4 轻链 CDR 1 的多肽序列
<400> 15
Gln Asp Ile Gly Ser Ser
1 5
<210> 16
<211> 18
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 4B4 轻链 CDR 1 的核苷酸序列
<400> 16
caggacattg gtagtagc 18
<210> 17
<211> 4
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 4B4 轻链 CDR 2 的多肽序列
<220>
<221> misc_feature
<222> (4)..(4)
<223> Xaa 可以是任意天然存在的氨基酸
<400> 17
Ala Thr Ser Xaa
1
<210> 18
<211> 10
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 4B4 轻链 CDR 2 的核苷酸序列
<220>
<221> misc_特征
<222> (10)..(10)
<223> n is a, c, g, or t
<400> 18
gccacatccn 10
<210> 19
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 4B4 轻链 CDR 3 的多肽序列
<400> 19
Leu Gln Tyr Ala Ser Ser Pro Pro Thr
1 5
<210> 20
<211> 27
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 4B4 轻链 CDR 3 的核苷酸序列
<400> 20
ctacaatatg ctagttctcc tccgacg 27
<210> 21
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 4B4 重链 CDR 1 的多肽序列
<400> 21
Gly Phe Thr Phe Ser Asn Tyr Ala
1 5
<210> 22
<211> 24
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 4B4 重链 CDR 1 的核苷酸序列
<400> 22
ggattcactt tcagtaacta tgcc 24
<210> 23
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 4B4 重链 CDR 2 的多肽序列
<400> 23
Ile Ser Arg Gly Gly Ser Tyr Thr
1 5
<210> 24
<211> 24
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 4B4 重链 CDR 2 的核苷酸序列
<400> 24
attagtcgtg gtggtagtta cacc 24
<210> 25
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 4B4 重链 CDR 3 的多肽序列
<400> 25
Ala Arg His Gly Tyr Asn Tyr Asp Asp Gly Ala Trp Phe Ala Asn
1 5 10 15
<210> 26
<211> 45
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 4B4 重链 CDR 3 的核苷酸序列
<400> 26
gcaagacatg gatataatta cgacgacggg gcctggtttg ctaac 45
<210> 27
<211> 113
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 12A7 完整的可变轻链序列 (多肽)
<400> 27
Asp Ile Met Leu Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Ser Val Thr Leu Gly
1 5 10 15
Asp Gln Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Asn Leu Val Gln Ser
20 25 30
Asn Gly Asn Thr Tyr Leu Thr Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser
35 40 45
Pro Lys Val Leu Ile Asn Lys Val Ser Asn Arg Phe Tyr Gly Val Pro
50 55 60
Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Arg Ile
65 70 75 80
Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Leu Gly Ile Tyr Phe Cys Ser Gln Ser
85 90 95
Thr Arg Val Pro Tyr Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Arg
100 105 110
Arg
<210> 28
<211> 338
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 12A7 完整的可变轻链序列 (核苷酸)
<400> 28
gatatcatgc tgacccaatc tccactctcc ctgtctgtca ctcttggaga tcaggcctcc 60
atctcttgca gatctagtca gaaccttgta caaagtaatg gaaacaccta tttaacttgg 120
tacctgcaga agccaggcca gtctccaaag gtcctgatca acaaagtttc caaccgattt 180
tatggggtcc cagacaggtt cagtggcagt ggatcaggga cagatttcac actcaggatc 240
agcagagtgg aggctgagga tctgggaatt tatttctgct ctcaaagtac acgtgttccg 300
tacacattcg gaggggggac caagctggaa ataagacg 338
<210> 29
<211> 121
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 12A7 完整的可变重链序列 (多肽)
<400> 29
Gln Gln Asp Leu Gln Gln Ser Gly Pro Gly Ile Leu Gln Pro Thr Gln
1 5 10 15
Thr Leu Ser Leu Thr Cys Ser Phe Ser Gly Phe Ser Leu Ser Thr Ser
20 25 30
Gly Met Gly Val Ser Trp Ile Arg Gln Ser Ser Asn Met Gly Leu Glu
35 40 45
Trp Leu Ala His Ile Phe Trp Asp Asp Asp Lys Arg Tyr Asn Pro Ser
50 55 60
Leu Arg Ser Arg Leu Thr Leu Ser Lys Asp Thr Ser Ser Ser Gln Val
65 70 75 80
Phe Leu Met Ile Thr Ser Val Ser Thr Ala Asp Ser Ala Thr Tyr Tyr
85 90 95
Cys Ala Arg Arg Ser Asp Tyr Asn Tyr Tyr Ser Met Asp Tyr Trp Gly
100 105 110
Gln Gly Thr Ala Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 30
<211> 363
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 12A7 完整的可变重链序列 (核苷酸)
<400> 30
cagcaagatc tgcagcagtc tggccctggg atattgcagc ccacccagac cctcagtctg 60
acttgttctt tctctgggtt ttcactgagc acttctggta tgggtgtgag ttggattcgt 120
caatcttcaa atatgggtct ggagtggctg gcacacattt tctgggatga tgacaagcgc 180
tataatccct ccctgaggag ccgactcacg ctctccaagg atacctccag tagccaggta 240
tttctcatga tcaccagtgt gagtactgca gattctgcca catactactg tgcgcggcga 300
agtgactaca attactactc tatggactac tggggtcaag gaaccgcagt caccgtctcc 360
tca 363
<210> 31
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 4B4 完整的可变轻链序列 (多肽)
<400> 31
Asp Ile Met Leu Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Leu Gly
1 5 10 15
Glu Arg Val Ser Leu Thr Cys Arg Ala Ser Gln Asp Ile Gly Ser Ser
20 25 30
Leu Asn Trp Leu Gln Gln Glu Pro Asp Gly Thr Ile Lys Arg Leu Ile
35 40 45
Tyr Ala Thr Ser Ser Leu Asp Ser Gly Val Pro Lys Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Arg Ser Gly Ser Asp Tyr Ser Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Ser
65 70 75 80
Glu Asp Phe Val Asp Tyr Tyr Cys Leu Gln Tyr Ala Ser Ser Pro Pro
85 90 95
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105
<210> 32
<211> 322
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 4B4 完整的可变轻链序列 (核苷酸)
<400> 32
gatatcatgc tgacccaatc tccatcctcc ttatctgcct ctctgggaga aagagtcagt 60
ctcacttgtc gggcaagtca ggacattggt agtagcttaa actggcttca acaggaacca 120
gatggaacta ttaaacgcct aatctacgcc acatccagtt tagattctgg tgtccccaaa 180
aggttcagtg gcagtaggtc tgggtcagat tattctctca ccatcagcag ccttgagtct 240
gaagattttg tagactatta ctgtctacaa tatgctagtt ctcctccgac gttcggtgga 300
ggcaccaagc tggaaatcaa ac 322
<210> 33
<211> 121
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 4B4 完整的可变重链序列 (多肽)
<400> 33
Val Lys Leu Gln Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly Ser
1 5 10 15
Leu Lys Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asn Tyr Ala
20 25 30
Met Ser Trp Val Arg Gln Asn Pro Glu Lys Arg Leu Glu Trp Val Ala
35 40 45
Thr Ile Ser Arg Gly Gly Ser Tyr Thr Tyr Tyr Pro Asp Ser Val Lys
50 55 60
Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Leu Tyr Leu
65 70 75 80
Gln Met Asn Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Met Tyr Phe Cys Ala
85 90 95
Arg His Gly Tyr Asn Tyr Asp Asp Gly Ala Trp Phe Ala Asn Trp Gly
100 105 110
Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ala
115 120
<210> 34
<211> 366
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 4B4 完整的可变重链序列 (核苷酸)
<400> 34
taggtgaaac tgcaggagtc tgggggaggc ttagtgaagc ctggagggtc cctgaaactc 60
tcctgtgcag cctctggatt cactttcagt aactatgcca tgtcttgggt tcgccagaat 120
ccggagaaga ggctggagtg ggtcgcaacc attagtcgtg gtggtagtta cacctactat 180
ccagacagtg tgaagggtcg attcaccatc tccagagaca atgccaagaa caccctgtat 240
ctgcaaatga acagtctgag gtctgaggac acggccatgt atttctgtgc aagacatgga 300
tataattacg acgacggggc ctggtttgct aactggggcc aagggactct ggtcactgtc 360
tctgca 366
<210> 35
<211> 734
<212> PRT
<213> 智人（Homo sapiens）
<220>
<223> Mcm5 (多肽)
<400> 35
Met Ser Gly Phe Asp Asp Pro Gly Ile Phe Tyr Ser Asp Ser Phe Gly
1 5 10 15
Gly Asp Ala Gln Ala Asp Glu Gly Gln Ala Arg Lys Ser Gln Leu Gln
20 25 30
Arg Arg Phe Lys Glu Phe Leu Arg Gln Tyr Arg Val Gly Thr Asp Arg
35 40 45
Thr Gly Phe Thr Phe Lys Tyr Arg Asp Glu Leu Lys Arg His Tyr Asn
50 55 60
Leu Gly Glu Tyr Trp Ile Glu Val Glu Met Glu Asp Leu Ala Ser Phe
65 70 75 80
Asp Glu Asp Leu Ala Asp Tyr Leu Tyr Lys Gln Pro Ala Glu His Leu
85 90 95
Gln Leu Leu Glu Glu Ala Ala Lys Glu Val Ala Asp Glu Val Thr Arg
100 105 110
Pro Arg Pro Ser Gly Glu Glu Val Leu Gln Asp Ile Gln Val Met Leu
115 120 125
Lys Ser Asp Ala Ser Pro Ser Ser Ile Arg Ser Leu Lys Ser Asp Met
130 135 140
Met Ser His Leu Val Lys Ile Pro Gly Ile Ile Ile Ala Ala Ser Ala
145 150 155 160
Val Arg Ala Lys Ala Thr Arg Ile Ser Ile Gln Cys Arg Ser Cys Arg
165 170 175
Asn Thr Leu Thr Asn Ile Ala Met Arg Pro Gly Leu Glu Gly Tyr Ala
180 185 190
Leu Pro Arg Lys Cys Asn Thr Asp Gln Ala Gly Arg Pro Lys Cys Pro
195 200 205
Leu Asp Pro Tyr Phe Ile Met Pro Asp Lys Cys Lys Cys Val Asp Phe
210 215 220
Gln Thr Leu Lys Leu Gln Glu Leu Pro Asp Ala Val Pro His Gly Glu
225 230 235 240
Met Pro Arg His Met Gln Leu Tyr Cys Asp Arg Tyr Leu Cys Asp Lys
245 250 255
Val Val Pro Gly Asn Arg Val Thr Ile Met Gly Ile Tyr Ser Ile Lys
260 265 270
Lys Phe Gly Leu Thr Thr Ser Arg Gly Arg Asp Arg Val Gly Val Gly
275 280 285
Ile Arg Ser Ser Tyr Ile Arg Val Leu Gly Ile Gln Val Asp Thr Asp
290 295 300
Gly Ser Gly Arg Ser Phe Ala Gly Ala Val Ser Pro Gln Glu Glu Glu
305 310 315 320
Glu Phe Arg Arg Leu Ala Ala Leu Pro Asn Val Tyr Glu Val Ile Ser
325 330 335
Lys Ser Ile Ala Pro Ser Ile Phe Gly Gly Thr Asp Met Lys Lys Ala
340 345 350
Ile Ala Cys Leu Leu Phe Gly Gly Ser Arg Lys Arg Leu Pro Asp Gly
355 360 365
Leu Thr Arg Arg Gly Asp Ile Asn Leu Leu Met Leu Gly Asp Pro Gly
370 375 380
Thr Ala Lys Ser Gln Leu Leu Lys Phe Val Glu Lys Cys Ser Pro Ile
385 390 395 400
Gly Val Tyr Thr Ser Gly Lys Gly Ser Ser Ala Ala Gly Leu Thr Ala
405 410 415
Ser Val Met Arg Asp Pro Ser Ser Arg Asn Phe Ile Met Glu Gly Gly
420 425 430
Ala Met Val Leu Ala Asp Gly Gly Val Val Cys Ile Asp Glu Phe Asp
435 440 445
Lys Met Arg Glu Asp Asp Arg Val Ala Ile His Glu Ala Met Glu Gln
450 455 460
Gln Thr Ile Ser Ile Ala Lys Ala Gly Ile Thr Thr Thr Leu Asn Ser
465 470 475 480
Arg Cys Ser Val Leu Ala Ala Ala Asn Ser Val Phe Gly Arg Trp Asp
485 490 495
Glu Thr Lys Gly Glu Asp Asn Ile Asp Phe Met Pro Thr Ile Leu Ser
500 505 510
Arg Phe Asp Met Ile Phe Ile Val Lys Asp Glu His Asn Glu Glu Arg
515 520 525
Asp Val Met Leu Ala Lys His Val Ile Thr Leu His Val Ser Ala Leu
530 535 540
Thr Gln Thr Gln Ala Val Glu Gly Glu Ile Asp Leu Ala Lys Leu Lys
545 550 555 560
Lys Phe Ile Ala Tyr Cys Arg Val Lys Cys Gly Pro Arg Leu Ser Ala
565 570 575
Glu Ala Ala Glu Lys Leu Lys Asn Arg Tyr Ile Ile Met Arg Ser Gly
580 585 590
Ala Arg Gln His Glu Arg Asp Ser Asp Arg Arg Ser Ser Ile Pro Ile
595 600 605
Thr Val Arg Gln Leu Glu Ala Ile Val Arg Ile Ala Glu Ala Leu Ser
610 615 620
Lys Met Lys Leu Gln Pro Phe Ala Thr Glu Ala Asp Val Glu Glu Ala
625 630 635 640
Leu Arg Leu Phe Gln Val Ser Thr Leu Asp Ala Ala Leu Ser Gly Thr
645 650 655
Leu Ser Gly Val Glu Gly Phe Thr Ser Gln Glu Asp Gln Glu Met Leu
660 665 670
Ser Arg Ile Glu Lys Gln Leu Lys Arg Arg Phe Ala Ile Gly Ser Gln
675 680 685
Val Ser Glu His Ser Ile Ile Lys Asp Phe Thr Lys Gln Lys Tyr Pro
690 695 700
Glu His Ala Ile His Lys Val Leu Gln Leu Met Leu Arg Arg Gly Glu
705 710 715 720
Ile Gln His Arg Met Gln Arg Lys Val Leu Tyr Arg Leu Lys
725 730
<210> 36
<211> 2534
<212> DNA
<213> 智人
<220>
<223> Mcm5 (mRNA)
<400> 36
ggaaaaccag aggcgcagtc atgtcgggat tcgacgatcc tggcattttc tacagcgaca 60
gcttcggggg cgacgcccag gccgacgagg ggcaggcccg caaatcgcag ctgcagaggc 120
gcttcaagga gttcctgcgg cggtaccgag tgggcaccga ccgcacgggc ttcaccttca 180
aatacaggga tgaactcaag cggcattaca acctggggga gtactggatt gaggtggaga 240
tggaggatct ggccagcttt gatgaggacc tggccgacta cttgtacaag cagccagccg 300
agcacctgca gctgctggag gaagctgcca aggaggtagc tgatgaggtg acccggcccc 360
ggccttctgg ggaggaggtg ctccaggaca tccaggtcat gctcaagtcg gacgccagcc 420
cttccagcat tcgtagcctg aagtcggaca tgatgtcaca cctggtgaag atccctggca 480
tcatcatcgc ggcctctgcg gtccgtgcca aggccacccg catctctatc cagtgccgca 540
gctgccgcaa caccctcacc aacattgcca tgcgccctgg cctcgagggc tatgccctgc 600
ccaggaagtg caacacagat caggctgggc gccccaaatg cccattggac ccgtacttca 660
tcatgcccga caaatgcaaa tgcgtggact tccagaccct gaagctgcag gagctgcctg 720
atgcagtccc ccacggggag atgcccagac acatgcagct ctactgcgac aggtacctgt 780
gtgacaaggt cgtccctggg aacagggtta ccatcatggg catctactcc atcaagaagt 840
ttggcctgac taccagcagg ggccgtgaca gggtgggcgt gggcatccga agctcctaca 900
tccgtgtcct gggcatccag gtggacacag atggctctgg ccgcagcttt gctggggccg 960
tgagccccca ggaggaggag gagttccgtc gcctggctgc cctcccaaat gtctatgagg 1020
tcatctccaa gagcatcgcc ccctccatct ttgggggcac agacatgaag aaggccattg 1080
cctgcctgct ctttgggggc tcccgaaaga ggctccctga tggacttact cgccgaggag 1140
acatcaacct gctgatgcta ggggaccctg ggacagccaa gtcccagctt ctgaagtttg 1200
tggagaagtg ttctcccatt ggggtataca cgtctgggaa aggcagcagc gcagctggac 1260
tgacagcctc ggtgatgagg gacccttcgt cccggaattt catcatggag ggcggagcca 1320
tggtcctggc cgatggtggg gtcgtctgta ttgacgagtt tgacaagatg cgagaagatg 1380
accgtgtggc aatccacgaa gccatggagc agcagaccat ctctatcgcc aaggctggga 1440
tcaccaccac cctgaactcc cgctgctccg tcctggctgc tgccaactca gtgttcggcc 1500
gctgggatga gacgaagggg gaggacaaca ttgacttcat gcccaccatc ttgtcgcgct 1560
tcgacatgat cttcatcgtc aaggatgagc acaatgagga gagggatgtg atgctggcca 1620
agcatgtcat cactctgcac gtgagcgcac tgacacagac acaggctgtg gagggcgaga 1680
ttgacctggc caagctgaag aagtttattg cctactgccg agtgaagtgt ggcccccggc 1740
tgtcagcaga ggctgcagag aaactgaaga accgctacat catcatgcgg agcggggccc 1800
gtcagcacga gagggacagt gaccgccgct ccagcatccc catcactgtg cggcagctgg 1860
aggccattgt gcgcatcgcg gaagccctca gcaagatgaa gctgcagccc ttcgccacag 1920
aggcagatgt ggaggaggcc ctgcggctct tccaagtgtc cacgttggat gctgccttgt 1980
ccggtaccct gtcaggggtg gagggcttca ccagccagga ggaccaggag atgctgagcc 2040
gcatcgagaa gcagctcaag cgccgctttg ccattggctc ccaggtgtct gagcacagca 2100
tcatcaagga cttcaccaag cagaaatacc cggagcacgc catccacaag gtgctgcagc 2160
tcatgctgcg gcgcggcgag atccagcatc gcatgcagcg caaggttctc taccgcctca 2220
agtgagtcgc gccgcctcac tggactcatg gactcgccca cgcctcgccc ctcctgccgc 2280
tgcctgccat tgacaatgtt gctgggacct ctgcctcccc actgcagccc tcgaacttcc 2340
caggcaccct cctttctgcc ccagaggaag gagctgtagt gtcctgctgc ctctgggcgc 2400
ccgcctctag cgcggttctg ggaagtgtgc ttttggcatc cgttaataat aaagccacgg 2460
tgtgttcagg taaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa 2520
aaaaaaaaaa aaaa 2534

Claims (33)

1.一种用于检测受试者存在或不存在妇科癌症的方法，所述方法包括以下步骤：
获取从所述受试者分离的非侵入性样本；和
检测至少一种生物标记物或确定至少一种生物标记物的浓度。
2.根据权利要求1所述的方法，其中，所述非侵入性样本选自由尿液样本、卫生棉条样本和阴道拭子样本组成的组。
3.根据权利要求1或2所述的方法，还包括以下步骤：
将确定的至少一种生物标记物的浓度与参照进行比较，优选地，其中所述参照是针对从一个或多个健康个体制备的一个或多个样本确定的所述至少一种生物标记物的平均浓度，任选地，其中：
(i)如果所述至少一种生物标记物的浓度与所述参照相比异常，则可能存在妇科癌症；和/或
(ii)如果所述至少一种生物标记物的浓度高于所述参照，则可能存在妇科癌症。
4.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中检测所述至少一种生物标记物或确定所述至少一种生物标记物的浓度的步骤包括：
进行ELISA测定以检测所述至少一种生物标记物或确定所述至少一种生物标记物的浓度，任选地，其中：
(a)如果确定所述至少一种生物标记物的浓度高于高于5pg/mL、6pg/mL、7pg/mL、8pg/mL、9pg/mL、10pg/mL、11pg/mL、12pg/mL、13pg/mL、14pg/mL、15pg/mL、16pg/mL、17pg/mL、18pg/mL、19pg/mL、20pg/mL、21pg/mL、22pg/mL、23pg/mL、24pg/mL、25pg/mL、26pg/mL、27pg/mL、28pg/mL、29pg/mL、30pg/mL、35pg/mL、45pg/mL、50pg/mL、55pg/mL、60pg/mL、65pg/mL或70pg/mL，则可能存在所述妇科癌症；
(b)如果确定所述至少一种生物标记物的浓度高于(i)约12pg/mL；(ii)约17pg/mL；或(iii)约70pg/mL；优选约12pg/mL，则可能存在所述妇科癌症；和/或
(c)应用12pg/mL、17pg/mL或70pg/mL，优选约12pg/mL的截止值。
5.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述方法是用于诊断受试者妇科癌症的方法，任选地，其中所述方法还包括以下步骤：
如果可能存在妇科癌症，则诊断所述受试者患有妇科癌症。
6.一种用于诊断受试者患有妇科癌症或良性妇科病症的方法，所述方法包括以下步骤：
提供先前从所述受试者分离的非侵入性样本；
确定在所述非侵入性样本中的至少一种生物标记物的浓度；
将所述非侵入性样本中的所述至少一种生物标记物的浓度与参照进行比较；
如果所述非侵入性样本中的所述至少一种生物标记物的浓度高于所述参照，则诊断所述受试者患有妇科癌症；或者，如果所述非侵入性样本中的所述至少一种生物标记物的浓度低于所述参照，则诊断所述受试者患有良性妇科病症。
7.一种用于区分与妇科癌症相关的非侵入性样本和与良性妇科癌症相关的非侵入性样本的方法，所述方法包括以下步骤：
提供先前从受试者分离的非侵入性样本；
确定所述非侵入性样本中至少一种生物标记物的浓度；
将所述非侵入性样本中的所述至少一种生物标记物的浓度与参照进行比较；
如果所述非侵入性样本中的所述至少一种生物标记物的浓度高于所述参照，则确定所述非侵入性样本与妇科癌症有关，或者如果所述非侵入性样本中的所述至少一种生物标记物的浓度低于所述参照，则确定所述非侵入性样本与良性妇科病症相关。
8.一种用于将受试者分层为第一或第二治疗组的方法，所述方法包括以下步骤：
提供先前从受试者分离的非侵入性样本；
确定所述非侵入性样本中的至少一种生物标记物的浓度；
基于所述非侵入性样本中的所述至少一种生物标记物的浓度，将所述受试者分配到两个治疗组中的一个，其中第一治疗组接受对于妇科癌症的治疗，第二治疗组不接受治疗或接受对于良性妇科病症的治疗。
9.根据权利要求8所述的方法，其中如果所述非侵入性样本中的所述至少一种生物标记物的浓度高于参照，则将所述受试者分配到所述第一治疗组，或者如果所述非侵入性样本中的所述至少一种生物标记物的浓度低于所述参照，则将所述受试者分配到所述第二治疗组。
10.根据权利要求5-9中任一项所述的方法，其中：
(i)所述良性妇科病症选自停经后出血(PMB)、子宫内膜异位、纤维瘤和多囊卵巢综合征(PCOS)；
(ii)所述非侵入性样本是尿液样本；
(iii)所述至少一种生物标记物是MCM蛋白，任选地MCM5；
(iv)确定所述至少一种生物标记物的浓度的步骤包括进行ELISA测定以检测所述至少一种生物标记物或确定所述至少一种生物标记物的浓度，任选地，进行MCM5 ELISA测定；和/或
(v)所述参照为约12pg/mL。
11.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述非侵入性样本是尿液样本。
12.根据前述权利要求中任一项所述的方法，所述方法是体外方法。
13.根据前述权利要求中任一项所述的方法，还包括以下步骤：
对所述非侵入性样本进行处理以从所述非侵入性样本的细胞中释放所述至少一种生物标记物。
14.根据权利要求13所述的方法，其中处理所述非侵入性样本以释放所述至少一种生物标记物的步骤包括将所述非侵入性样本暴露于能够从所述非侵入性样本的细胞中释放所述至少一种生物标记物的裂解缓冲液，任选地其中处理所述非侵入性样本以释放所述至少一种生物标记物的步骤包括：
使所述非侵入性样本通过用于捕获细胞的过滤器，使得细胞被捕获在所述过滤器中；
使裂解缓冲液通过所述过滤器，使得捕获的细胞暴露于所述裂解缓冲液；和/或
将所述过滤器孵育一段时间，使得所述裂解缓冲液使所述细胞释放至少一种生物标记物。
15.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述至少一种生物标记物包含MCM蛋白或由MCM蛋白组成，任选地其中所述MCM蛋白是MCM5。
16.根据权利要求14或15所述的方法，其中所述至少一种生物标记物为MCM蛋白，任选地MCM5，并且所述裂解缓冲液能够从所述非侵入性样本的细胞中释放MCM蛋白，任选地MCM5。
17.根据权利要求14至16中任一项所述的方法，其中所述裂解缓冲液能够从所述非侵入性样本的细胞中释放MCM5并且基本上不使MCM5蛋白变性，任选地其中所述裂解缓冲液不使抗体变性。
18.根据权利要求14至17中任一项所述的方法，其中
(a)所述裂解缓冲液包含去垢剂；
(b)所述裂解缓冲液包含去垢剂，其包含Triton X-100；
(c)所述裂解缓冲液包含去垢剂，其包含浓度在0.01％和25％之间、在0.01％和10％之间、在0.05％和5％之间、在0.1％和2％之间、在0.5％和2％之间、在0.75％和1.25％之间、或约1％的Triton X-100；
(d)所述裂解缓冲液包含去垢剂，其包含脱氧胆酸钠或由脱氧胆酸钠组成；
(e)所裂解缓冲液包含去垢剂，其包含浓度在0.1％和20％之间、在0.1％和10％之间、在0.1％和5％之间、在0.5％和5％之间、在0.5％和2.5％之间、在0.75％和2.5％之间、在0.75％和1.25％之间、或约1％的脱氧胆酸钠，或由浓度在0.1％和20％之间、在0.1％和10％之间、在0.1％和5％之间、在0.5％和5％之间、在0.5％和2.5％之间、在0.75％和2.5％之间、在0.75％和1.25％之间、或约1％的脱氧胆酸钠组成；
(f)所述裂解缓冲液包含去垢剂，其包含十二烷基硫酸钠(SDS)或由十二烷基硫酸钠(SDS)组成；
(g)所述裂解缓冲液包含去垢剂，其包含浓度在0.001％和10％之间、在0.01％和5％之间、在0.05％和5％之间、在0.01％和1％之间、在0.05％和1％之间、在0.05％和0.5％之间、在0.075％和0.25％之间、或约0.1％的十二烷基硫酸钠(SDS)，或由浓度在0.001％和10％之间、在0.01％和5％之间、在0.05％和5％之间、在0.01％和1％之间、在0.05％和1％之间、在0.05％和0.5％之间、在0.075％和0.25％之间、或约0.1％的十二烷基硫酸钠(SDS)组成；
(h)所述裂解缓冲液包括去垢剂，其由Triton X-100、脱氧胆酸钠和十二烷基硫酸钠(SDS)组成；
(i)所述裂解缓冲液包含去垢剂，其由在0.5％和2％之间的Triton X-100、在0.5％和2％之间的脱氧胆酸钠和在0.05％和0.5％之间的十二烷基硫酸钠(SDS)组成；
(j)所述裂解缓冲液包含缓冲剂成分；
(k)所述裂解缓冲液包含缓冲剂组分，其pH在pH 4和pH 9之间、在pH 5和pH 8.5之间、在pH 6和pH 8之间、在pH 6.5和pH 8之间、在pH 7和pH 8之间、在pH 7.3和pH 7.9之间、在pH 7.4和pH 7.8之间、pH 7.5和pH 7.7之间、或约pH 7.6；和/或将所述裂解缓冲液的pH维持在pH 4和pH 9之间、pH 5和pH 8.5之间、pH 6和pH 8之间、pH 6.5和pH 8之间、pH 7和pH8之间、pH 7.3和pH 7.9之间、pH 7.4和pH 7.8之间、pH 7.5和pH 7.7之间、或约pH 7.6；
(l)所述裂解缓冲液包含缓冲剂组分，其包含Tris或由Tris组成；
(m)所述裂解缓冲液包含缓冲剂组分，其包含浓度大于1mM、在1mM和350mM之间、在5mM和200mM之间、在5mM和100mM、在5mM和50mM、在5mM和40mM之间、在5mM和35mM之间、在10mM和35mM之间、15mM和35mM之间、在15mM和30mM之间、在20mM和30mM之间、或约25mM的Tris；或由浓度大于1mM、在1mM和350mM之间、在5mM和200mM之间、在5mM和100mM、在5mM和50mM、在5mM和40mM之间、在5mM和35mM之间、在10mM和35mM之间、15mM和35mM之间、在15mM和30mM之间、在20mM和30mM之间、或约25mM的Tris组成；
(n)所述裂解缓冲液包含缓冲剂组分，其由浓度在15mM和35mM之间的Tris组成；
(o)所述裂解缓冲液包含盐；
(p)所述裂解缓冲液包括氯化钠；
(q)所述裂解缓冲液包含浓度在10mM和350mM之间、在20mM和300mM之间、在50mM和250mM之间、在100mM和250mM之间、在100mM和200mM之间、在125mM和175mM之间、或约150mM的氯化钠；
(r)所述裂解缓冲液包含浓度在100mM和200mM之间的氯化钠；
(s)所述裂解缓冲液包括：
(i)在1mM和100mM之间的Tris；
(ii)在50mM和300mM之间的氯化钠；
(iii)在0.1％和5％之间的脱氧胆酸钠；
(iv)在0.01％和1％之间的十二烷基硫酸钠；和/或
(v)在0.1％和5％之间的Triton-X100；
(t)所述裂解缓冲液包含：
(i)在10mM和40mM之间的Tris；
(ii)在100mM和200mM之间的氯化钠；
(iii)在0.5％和2％之间的脱氧胆酸钠；
(iv)在0.05％和0.5％之间的十二烷基硫酸钠；和/或
(v)在0.5％和2％之间的Triton-X100；和/或
(u)所述缓冲液包含：
(i)约25mM的Tris；
(ii)约150mM的氯化钠；
(iii)约1％的脱氧胆酸钠；
(iv)约0.1％的十二烷基硫酸钠；和/或
(v)约1％的Triton-X100。
19.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中检测所述至少一种生物标记物或确定所述至少一种生物标记物的浓度的步骤包括：
将所述非侵入性样本暴露于第一单克隆抗体和/或第二单克隆抗体；和
检测与所述第一单克隆抗体和/或所述第二单克隆抗体结合的所述至少一种生物标记物或确定与所述第一单克隆抗体和/或所述第二单克隆抗体结合的所述至少一种生物标记物的浓度。
20.根据权利要求19所述的方法，其中所述第一单克隆抗体和第二单克隆抗体结合至MCM5，任选地其中所述第一单克隆抗体是这样的抗体：
(i)结合至具有SEQ ID NO:1的氨基酸序列的多肽；
(ii)包含至少一个选自由以下组成的组的互补决定区(CDR)：
(a)12A7 CDRH1，其具有SEQ ID NO:9的序列或与SEQ ID NO:9不同之处在于单个氨基酸取代的序列；
(b)12A7 CDRH2，其具有SEQ ID NO:11的序列或与SEQ ID NO:11不同之处在于单个氨基酸取代的序列；
(c)12A7 CDRH3，其具有SEQ ID NO:13的序列或与SEQ ID NO:13不同之处在于单个氨基酸取代的序列；
(d)12A7 CDRL1，其具有SEQ ID NO:3的序列或与SEQ ID NO:3不同之处在于单个氨基酸取代的序列；
(e)12A7 CDRL2，其具有SEQ ID NO:5的序列或与SEQ ID NO:5不同之处在于单个氨基酸取代的序列；和
(f)12A7 CDRL3，其具有SEQ ID NO:7的序列或与SEQ ID NO:7不同之处在于单个氨基酸取代的序列；
(iii)包含具有与SEQ ID NO:29至少85％、90％、95％、98％、99％或100％同一性的序列的重链可变区；
(iv)包含具有与SEQ ID NO:27至少85％、90％、95％、98％、99％或100％同一性的序列的轻链可变区序列；或者
(v)与(i)、(ii)、(iii)或(iv)的抗体竞争；和/或
所述第二个单克隆抗体是这样的抗体：
(i)结合至具有SEQ ID NO:2的氨基酸序列的多肽；
(ii)包含至少一个选自由以下组成的组的互补决定区(CDR)：
(a)4B4 CDRH1，其具有SEQ ID NO:21的序列或与SEQ ID NO:21不同之处在于单个氨基酸取代的序列；
(b)4B4 CDRH2，其具有SEQ ID NO:23的序列或与SEQ ID NO:23不同之处在于单个氨基酸取代的序列；
(c)4B4 CDRH3，其具有SEQ ID NO:25的序列或与SEQ ID NO:25不同之处在于单个氨基酸取代的序列；
(d)4B4 CDRL1，其具有SEQ ID NO:15的序列或与SEQ ID NO:15不同之处在于单个氨基酸取代的序列；
(e)4B4 CDRL2，其具有SEQ ID NO:17的序列或与SEQ ID NO:17不同之处在于单个氨基酸取代的序列；和
(f)4B4 CDRL3，其具有SEQ ID NO:19的序列或与SEQ ID NO:19不同之处在于单个氨基酸取代的序列；
(iii)包含具有与SEQ ID NO:33至少85％、90％、95％、98％、99％或100％同一性的序列的重链可变区；
(iv)包含具有与SEQ ID NO:31至少85％、90％、95％、98％、99％或100％同一性的序列的轻链可变区序列；或者
(v)与(i)、(ii)、(iii)或(iv)的抗体竞争。
21.根据权利要求19或20所述的方法，其中：
(a)所述第一单克隆抗体和/或第二单克隆抗体对MCM5的亲和力在0.001-1nM的范围内；
(b)所述第一单克隆抗体和/或第二单克隆抗体是Fab'2、F'(ab)2、Fv、单链抗体或双抗体；
(c)所述第一单克隆抗体包含12A7 CDRH1、12A7 CDRH2和12A7 CDRH3；
(d)所述第一单克隆抗体包含12A7 CDRL1、12A7 CDRL2和12A7 CDRL3；
(e)所述第一单克隆抗体包含具有SEQ ID NO:9的序列的12A7 CDRH1、具有SEQ ID NO:11的序列的12A7 CDRH2和具有SEQ ID NO:13的序列的12A7 CDRH3；
(f)所述第一单克隆抗体包含具有SEQ ID NO:3的序列的12A7 CDRL1、具有SEQ ID NO:5的序列的12A7 CDRL2和具有SEQ ID NO:7的序列的12A7 CDRL3；
(g)所述第二单克隆抗体包含4B4 CDRH1、4B4 CDRH2和4B4 CDRH3；
(h)所述第二单克隆抗体包含4B4 CDRL1、4B4 CDRL2和4B4 CDRL3；
(i)所述第二单克隆抗体包含具有SEQ ID NO：21的序列的4B4 CDRH1、具有SEQ ID NO：23的序列的4B4 CDRH2和具有SEQ ID NO：25的序列的4B4 CDRH3；
(j)所述第二单克隆抗体具有：具有SEQ ID NO:15的序列的4B4 CDRL1、具有SEQ IDNO:17的序列的4B4 CDRL2和具有SEQ ID NO:19的序列的4B4 CDRL3；
(k)所述第一单克隆抗体包含具有与SEQ ID NO:29至少95％同一性的序列的重链可变区；
(l)所述第一单克隆抗体包含具有与SEQ ID NO:29至少98％同一性的序列的重链可变区；
(m)所述第一单克隆抗体包含具有与SEQ ID NO:27至少95％同一性的序列的轻链可变区；
(n)所述第一单克隆抗体包含具有与SEQ ID NO:27至少98％同一性的序列的轻链可变区；
(o)所述第二单克隆抗体包含具有与SEQ ID NO:33至少95％同一性的序列的重链可变区；
(p)所述第二单克隆抗体包含具有与SEQ ID NO:33至少98％同一性的序列的重链可变区；
(q)所述第二单克隆抗体包含具有与SEQ ID NO:31至少95％同一性的序列的轻链可变区；和/或
(r)所述第二单克隆抗体包含具有与SEQ ID NO:31至少98％同一性的序列的轻链可变区。
22.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中：
(i)所述非侵入性样本是尿液样本，并且所述方法比使用拭子样本进行的等效方法和/或使用卫生棉条样本进行的等效方法具有更高的敏感度；和/或
(ii)所述非侵入性样本是尿液样本，并且所述方法比使用拭子样本进行的等效方法和/或使用卫生棉条样本进行的等效方法具有更高的特异性。
23.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中：
(a)所述方法对所述妇科癌症的敏感度为至少约20％、22％、24％、26％、28％、30％、32％、34％、36％、38％、40％、42％、44％、46％、48％或50％；
(b)所述方法对所述妇科癌症的敏感度为至少约50％、52％、54％、55％、56％、57％、58％、59％、60％或61％；
(c)所述方法对所述妇科癌症的敏感度为至少约75％、76％、77％、78％、79％、80％或81％；
(d)所述方法对所述妇科癌症的敏感度为至少约90％、92％、93％、94％、95％或96％；
(e)所述方法对所述妇科癌症的特异性为至少约20％、22％、24％、26％、28％、30％、32％、34％、36％、38％或40％；
(f)所述方法对所述妇科癌症的特异性为至少约50％、52％、54％、55％、56％、57％、58％、59％或60％；
(g)所述方法对所述妇科癌症的特异性为至少约60％、62％、64％、66％、68％、70％、71％、72％、73％、74％或75％；和/或
(h)所述方法对所述妇科癌症的特异性为至少约80％、82％、83％、84％、85％或86％。
24.根据权利要求1-22中任一项所述的方法，其中：
(a)所述非侵入性样本是尿液样本，并且所述方法对所述妇科癌症的敏感度为至少约75％且对所述妇科癌症的特异性为至少约55％；
(b)所述非侵入性样本是阴道拭子样本，并且所述方法对所述妇科癌症的敏感度为至少约55％且对所述妇科癌症的特异性为至少约70％；
(c)所述非侵入性样本是卫生棉条样本，并且所述方法对所述妇科癌症的敏感度为至少约90％且对所述妇科癌症的特异性为至少约35％；
(d)所述非侵入性样本是卫生棉条样本，并且所述方法对所述妇科癌症的敏感度为至少约45％且对所述妇科癌症的特异性为至少约80％；或者
(e)所述非侵入性样本是卫生棉条样本，并且所述方法对所述妇科癌症的敏感度为至少约90％且对所述妇科癌症的特异性为至少约80％。
25.根据前述权利要求中任一项所述的裂解缓冲液在检测受试者存在或不存在妇科癌症的方法中的用途。
26.根据前述权利要求中任一项所述的第一单克隆抗体和/或前述权利要求中任一项所述的第二单克隆抗体在检测受试者存在或不存在妇科癌症的方法中的用途。
27.一种试剂盒在检测受试者存在或不存在妇科癌症的方法中的用途，其中所述试剂盒包括：
(a)前述权利要求中任一项所定义的裂解缓冲液；
(b)前述权利要求中任一项所定义的第一单克隆抗体；和/或
(c)前述权利要求中任一项所定义的第二单克隆抗体。
28.一种试剂盒，包括：
(a)前述权利要求中任一项所定义的裂解缓冲液；
(b)前述权利要求中任一项所定义的第一单克隆抗体；和/或
(c)前述权利要求中任一项所定义的第二单克隆抗体；
和
(d)在检测受试者存在或不存在妇科癌症的方法中使用所述裂解缓冲液和/或所述第一单克隆抗体和/或第二单克隆抗体的使用说明书。
29.根据权利要求1-24中任一项所述的方法、权利要求25-27任一项所述的用途或权利要求28所述的试剂盒，其中：
(a)所述妇科癌症是妇科恶性肿瘤；
(b)所述妇科癌症选自由以下组成的组：卵巢癌、子宫内膜癌症、子宫癌、宫颈癌、外阴癌、阴道癌、输卵管肿瘤、上皮性卵巢肿瘤、卵巢畸胎瘤、未成熟卵巢畸胎瘤、间质瘤、生殖细胞卵巢肿瘤、未分化肿瘤、交界性卵巢肿瘤、子宫内膜癌、子宫内膜腺癌、子宫内膜样腺癌、子宫内膜鳞状细胞癌、浆液性癌、浆液性子宫内膜上皮内癌、子宫内膜癌肉瘤、透明细胞癌、粘液癌、未分化子宫内膜癌、混合性子宫内膜癌、粘液性肿瘤、恶性苗勒氏管混合瘤、子宫内膜透明细胞肉瘤、颗粒细胞瘤、浆液性输卵管上皮内癌、未成熟囊性畸胎瘤、浆液性卵巢肿瘤和小细胞癌；
(c)所述妇科癌症是卵巢癌或子宫内膜癌症；
(d)所述妇科癌症是卵巢癌，任选地其中所述卵巢癌选自由以下组成的组：上皮性卵巢肿瘤、卵巢畸胎瘤、未成熟卵巢畸胎瘤、间质瘤、生殖细胞卵巢肿瘤、未分化肿瘤、交界性卵巢肿瘤、粘液性肿瘤、颗粒细胞瘤、未成熟囊性畸胎瘤、浆液性卵巢肿瘤和小细胞癌；
(e)所述妇科癌症是子宫内膜癌症，任选地其中所述子宫内膜癌症选自由以下组成的组：子宫内膜癌、子宫内膜腺癌、子宫内膜样腺癌、子宫内膜鳞状细胞癌、浆液性癌、浆液性子宫内膜上皮内癌、子宫内膜癌肉瘤、透明细胞癌、粘液癌、未分化子宫内膜癌、混合性子宫内膜癌、恶性苗勒氏管混合瘤和子宫内膜透明细胞肉瘤；和/或
(f)所述妇科癌症是：
(i)低级别癌症，任选地G1癌症；或
(ii)高级别癌症，任选地G2或更高级别的癌症；和/或
(g)所述妇科癌症是：
(i)早期癌症，任选地S1癌症；或
(ii)晚期癌症，任选地S2或更晚期的癌症。
30.根据前述权利要求中任一项所述的方法、用途或试剂盒，其中：
(a)所述妇科癌症是卵巢癌并且所述方法对所述卵巢癌的特异性为至少约25％；
(b)所述妇科癌症是卵巢癌并且所述方法对所述卵巢癌的敏感度为至少约50％；
(c)所述妇科癌症是卵巢癌并且所述方法对所述卵巢癌的特异性为至少约25％且对所述卵巢癌的敏感度为至少约50％；
(d)所述妇科癌症是子宫内膜癌症并且所述方法对所述子宫内膜癌症的特异性为至少约40％；
(e)所述妇科癌症是子宫内膜癌症并且所述方法对所述子宫内膜癌症的敏感度为至少约80％；和/或
(f)所述妇科癌症是子宫内膜癌症并且所述方法对所述子宫内膜癌症的特异性为至少约40％且对所述子宫内膜癌症的敏感度为至少约80％。
31.根据权利要求1至29中任一项所述的方法、用途或试剂盒，其中：
(a)所述非侵入性样本是尿液样本，所述妇科癌症是卵巢癌，并且所述方法对所述卵巢癌的敏感度为至少约60％且对所述卵巢癌的特异性为至少约70％，任选地其中应用约12pg/ml的MCM5浓度参照；或者
(b)所述非侵入性样本是尿液样本，所述妇科癌症是子宫内膜癌症，并且所述方法对所述子宫内膜癌症的敏感度为至少约80％且对所述子宫内膜癌症的特异性为至少约70％，任选地其中应用约12pg/ml的MCMS浓度参照。
32.根据权利要求1至29中任一项所述的方法、用途或试剂盒，其中：
(a)所述非侵入性样本是尿液样本，所述妇科癌症是低级别卵巢癌，并且所述方法对所述低级别卵巢癌的敏感度为至少约70％，任选地其中应用约12pg/ml的MCM5浓度参照；
(b)所述非侵入性样本是尿液样本，所述妇科癌症是早期卵巢癌，并且所述方法对所述早期卵巢癌的敏感度为至少约70％，任选地其中应用约12pg/ml的MCM5浓度参照；
(c)所述非侵入性样本是尿液样本，所述妇科癌症是低级别子宫内膜癌症，并且所述方法对所述低级别子宫内膜癌症的敏感度为至少约80％，任选地其中应用约12pg/ml的MCM5浓度参照；或
(d)其中所述非侵入性样本是尿液样本，所述妇科癌症是早期子宫内膜癌症，并且所述方法对所述早期子宫内膜癌症的敏感度为至少约85％，任选地其中应用约12pg/ml的MCM5浓度参照。
33.根据前述权利要求中任一项所述的试剂盒的方法用途，其中所述受试者患有良性妇科病症，任选地其中所述良性妇科病症选自停经后出血(PMB)、子宫内膜异位、纤维瘤和多囊卵巢综合征(PCOS)。
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Families Citing this family (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP3442706A4 (en) 2016-04-13 2020-02-19 NextGen Jane, Inc. SAMPLE COLLECTION AND PRESERVATION DEVICES, SYSTEMS AND METHODS
WO2024048514A1 (ja) * 2022-08-29 2024-03-07 学校法人藤田学園 子宮頸がんおよび／または子宮頸部上皮内腫瘍の検査方法

Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP1025444A1 (en) * 1997-10-21 2000-08-09 Cancer Research Campaign Technology Limited Determination of cellular growth abnormality
CN101044247A (zh) * 2002-08-20 2007-09-26 千年药品公司 用于鉴定,评估,预防和治疗子宫颈癌的组合物,试剂盒及方法
CN101896819A (zh) * 2007-10-15 2010-11-24 剑桥癌症诊断有限公司 对癌症的诊断测试、预测测试和预后测试
US20180186892A1 (en) * 2015-06-08 2018-07-05 Arquer Diagnostics Limited Monoclonal antibodies binding mcm5

Family Cites Families (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US6303323B1 (en) * 1997-10-21 2001-10-16 Cancer Research Campaign Technology Limited Detection of dysplastic or neoplastic cells using anti-MCM5 antibodies

Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP1025444A1 (en) * 1997-10-21 2000-08-09 Cancer Research Campaign Technology Limited Determination of cellular growth abnormality
CN101044247A (zh) * 2002-08-20 2007-09-26 千年药品公司 用于鉴定,评估,预防和治疗子宫颈癌的组合物,试剂盒及方法
CN101896819A (zh) * 2007-10-15 2010-11-24 剑桥癌症诊断有限公司 对癌症的诊断测试、预测测试和预后测试
US20180186892A1 (en) * 2015-06-08 2018-07-05 Arquer Diagnostics Limited Monoclonal antibodies binding mcm5

Non-Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
CANCER RESEARCH UK: "Anonymous: "A study looking at the MCM5 test to diagnose gynaecological cancers"", pages 1 - 4, Retrieved from the Internet <URL:URL:https:/www.cancerresearchuk.org/about-cancer/find-a-clinical-trial/a-study-looking-at-the -mcm5-test-to-diagnose-gynaecological-cancers> *
HEALTH RESEARCH AUTHORITY: "Anonymous: "EVALUATION OF MCM5 ELISA IN THE DIAGNOSIS OF GYNAECOLOGICAL MALIGNANCY"", pages 1 - 5, Retrieved from the Internet <URL:URL:https://www.hra.nhs.uk/planning- and-improving-research/application-summaries/research-summaries/evaluation-of-mcm5-elisa-in-the-diagnosis-of-gynaecological-malignancy/> *
吕晓梅等: "血清HE4、CA125、CA199、CA724联合检测对卵巢癌早期诊断的临床价值探讨", 《国际检验医学杂志》, no. 09, pages 119 - 121 *

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