CN113440509B - Ferrostatin-1在制备抗关节假体磨损颗粒诱导假体周围骨溶解药物中的应用 - Google Patents

Abstract

本发明公开了Ferrostatin‑1在制备抗人工关节假体衍生的磨损颗粒所诱发的假体松动药物中的应用，研究表明关节假体磨损颗粒能够诱导成骨细胞内活性氧(ROS)过量积累，抑制成骨细胞胱氨酸/谷氨酸反向转运体(System Xc‑)的功能，并降低谷胱甘肽过氧化物酶4(GPX4)的ROS清除能力，使得ROS生成与降解稳态失调，导致成骨细胞继发铁死亡，打破了破骨细胞与成骨细胞之间的平衡。加入铁死亡特异性抑制剂Ferrostatin‑1后，明显提高了细胞内GPX4的含量，显著抑制了磨损颗粒刺激成骨细胞内ROS的生成，减少了成骨细胞铁死亡。此外通过将CoCrMo纳米磨损颗粒植入小鼠颅骨皮下建立小鼠颅骨骨溶解模型，腹腔注射Ferrostatin‑1施加有效干预，体内实验进一步证实Ferrostatin‑1对磨损颗粒所诱导的骨溶解存在显著的抑制效应。

Description

Ferrostatin-1在制备抗关节假体磨损颗粒诱导假体周围骨 溶解药物中的应用

技术领域

本发明涉及生物医药技术领域，具体地说，涉及Ferrostatin-1在制备抗关节假体磨损颗粒诱导假体周围骨溶解药物中的应用。

背景技术

人工关节置换术是治疗晚期骨性关节炎的重要手段之一，取得了不错的近远期疗效，但人工关节置换术后假体周围骨溶解仍是困扰临床医生的一大难题。在长期使用人工关节假体的过程当中会产生磨损颗粒(如钛，聚乙烯，陶瓷等)，这些磨损颗粒会聚集在骨骼与假体之间的界膜上，刺激假体周围组织发生各种炎症反应，进而导致破骨增强而成骨减弱，致使骨吸收与骨生成失衡，不可避免地发生人工关节无菌性松动。随之而来的翻修手术更加复杂并且昂贵，大大加重社会负担。因此，针对人工关节置换术后假体周围骨溶解所导致的人工关节无菌性松动研发具体有效的治疗方法是当下亟需解决的重要难题。

铁死亡(Ferroptosis)是一种铁依赖性的，区别于细胞凋亡、细胞坏死、细胞自噬的新型的细胞程序性死亡方式。铁死亡的主要机制是，在二价铁或酯氧合酶的作用下，催化细胞膜上高表达的不饱和脂肪酸，发生脂质过氧化，从而诱导细胞死亡；此外，还表现为抗氧化体系(谷胱甘肽GSH和谷胱甘肽过氧化物酶4-GPX4)的表达量的降低。铁死亡主要特征：(1)细胞形态方面，铁死亡会导致细胞线粒体变小，膜密度增高，嵴减少。细胞核中形态变化不明显。(2)细胞成分方面，铁死亡表现为脂质过氧化增高，ROS升高。也有一些特征基因发生变化。

铁死亡主要发生机制：(1)基于GSH消耗的GPX4失活：如前所述，GPX4酶在细胞内是唯一一个用于脂质体过氧化物还原的GPX(谷胱甘肽过氧化物酶)。GPX4作用体现于，GPX4可以使得脂质过氧化的过氧键转变为羟基，失去其过氧化物的活性。基于GPX4的酶的活性，主要靶标有：System Xc-体系(负责将GSH的合成原料半胱氨酸转运至胞内)、谷氨酸-半胱氨酸连接酶、谷胱甘肽s-转移酶、ND脱氢酶、半胱氨酸消耗等等。(2)GPX4失活：如(1)所述，除了间接作用于激活GPX4酶的GSH，还可以直接消除GPX4。如GPX4抑制剂、鲨烯合酶、HMG-CoA还原酶。(3)铁离子输入与铁离子还原：向细胞中输入铁离子，并且保证铁离子以二价铁的形式大量存在，二价铁离子通过芬顿反应可启动脂质体过氧化。

胱氨酸/谷氨酸反向转运体(System Xc-)是由轻链亚基(SLC7A11)和重链亚基(SLC3A2)以二硫键连接而成的异二聚体，是细胞重要的抗氧化系统，它可以按1:1的比例摄取胱氨酸和排出谷氨酸。进入细胞内的胱氨酸被还原成半胱氨酸，参与谷胱甘肽(GSH)的合成。在GPX4的催化作用下，GSH可将有毒性的脂质过氧化物还原为无毒性的脂肪醇，故而GSH在细胞抗氧化防御中起着重要作用。此过程中以GSH为还原剂，GPX4为关键酶，介导脂质过氧化物的还原反应，负性调控铁死亡。然而，GSH合成过程的效率受到底物半胱氨酸浓度的限制，故System Xc-是一关键调控因素。GPX4作为还原毒性过氧化物的关键酶，是另一关键调控因素，通过其酶活性可防止脂质过氧化物的毒性，并保持膜脂双层的稳态。当细胞受到一定刺激，GPX4活性下降，从而导致GSH合成减少，毒性过氧化物的积聚、蛋白质和细胞膜损伤，随后细胞铁死亡。本研究立足于探明关节假体对假体周围骨组织中成骨细胞状态的影响，并给出相应干预措施，以填补该领域的空白。

Ferrostatin-1(Ferr-1)是一种选择性铁死亡抑制剂，其通过还原机制防止膜脂质损伤，抑制细胞内活性氧的产生，维持细胞内环境稳定，从而抑制细胞死亡。公开号为CN110755420A的发明专利公开了铁死亡抑制剂Ferrostatin-1在治疗骨髓型急性放射病和放疗诱导血细胞降低症具有良好的效果，但其在关节假体磨损颗粒诱导假体周围骨溶解中的作用机制尚不明确，因而本研究有望拓展Ferrostatin-1新的临床应用。

中国专利文献CN110755420A公开了铁死亡抑制剂Ferrostatin-1及其衍生物在制备药物中的应用，提供了Ferrostatin-1及其衍生物在制备治疗骨髓型急性放射病和放疗诱导血细胞降低症药物中的应用的新用途。中国专利文献CN112870361A公开了铁死亡抑制剂在制备预防或治疗铁过载导致的骨质疏松或骨丢失的药物中的应用，首次发现并证实了铁过载抑制成骨分化的细胞机制主要是铁死亡、而非目前研究者发现的凋亡或者其他死亡方式，发现了铁死亡降低Wnt信号抑制成骨分化的分子机制，并提供了四种通过降低铁死亡或者激活Wnt信号来高效低风险的治疗、预防或者降低铁过载导致骨质疏松或骨丢失的方案。但是关于本发明Ferrostatin-1在制备抗关节假体磨损颗粒诱导假体周围骨溶解药物中的应用目前还未见报道。Ferrostatin-1的结构式如下：

发明内容

本发明的目的是针对现有技术中的不足，提供Ferroatstin-1在制备抗关节假体磨损颗粒诱导假体周围骨溶解药物中的应用。

为了实现上述目的，本发明采取的技术方案是：

第一方面，提供了铁死亡抑制剂在制备抗关节假体磨损颗粒诱导假体周围骨溶解药物中的应用。

在本发明的另一方面，提供了铁死亡抑制剂在制备改善关节假体磨损颗粒诱导成骨细胞胱氨酸/谷氨酸反向转运能力药物中的应用。

在本发明的另一方面，提供了铁死亡抑制剂在制备改善关节假体磨损颗粒诱导谷胱甘肽过氧化物酶4(GPX4)清除能力药物中的应用。

在本发明的另一方面，提供了铁死亡抑制剂在制备改善关节假体磨损颗粒刺激成骨细胞内谷胱甘肽药物中的应用。

在本发明的另一方面，提供了铁死亡抑制剂在制备抑制关节假体磨损颗粒诱导成骨细胞过氧化物的药物中的应用。

优选地，所述的过氧化物为活性氧簇ROS。

如上任一所述的铁死亡抑制剂为Ferrostatin-1。

在本发明的另一方面，提供一种抗关节假体磨损颗粒诱导假体周围骨溶解的药物组合物，其特征在于，所述的药物组合物以铁死亡抑制剂Ferrostatin-1为活性成分，并进一步包含药学上可接受的载体。

在本发明的另一方面，提供一种改善关节假体磨损颗粒诱导成骨细胞胱氨酸/谷氨酸反向转运能力的药物组合物，其特征在于，所述的药物组合物以铁死亡抑制剂Ferrostatin-1为活性成分，并进一步包含药学上可接受的载体。

在本发明的另一方面，提供一种改善关节假体磨损颗粒诱导谷胱甘肽过氧化物酶4(GPX4)清除能力的药物组合物，其特征在于，所述的药物组合物以铁死亡抑制剂Ferrostatin-1为活性成分，并进一步包含药学上可接受的载体。

在本发明的另一方面，提供一种改善关节假体磨损颗粒刺激成骨细胞内谷胱甘肽的药物组合物，其特征在于，所述的药物组合物以铁死亡抑制剂Ferrostatin-1为活性成分，并进一步包含药学上可接受的载体。

在本发明的另一方面，提供一种抑制关节假体磨损颗粒诱导成骨细胞过氧化物的药物组合物，其特征在于，所述的药物组合物以铁死亡抑制剂Ferrostatin-1为活性成分，并进一步包含药学上可接受的载体。

优选地，如上任一所述药物组合物的剂型为外用剂型或内用剂型。

更优选地，所述药物组合物的剂型为贴剂、糊剂、软膏剂、凝胶剂、涂膜剂、巴布剂、喷雾剂、胶囊剂、颗粒剂、片剂、丸剂、口服液或注射液。

在本发明的另一方面，提供铁死亡抑制剂Ferrostatin-1作为靶点在筛选抗关节假体磨损颗粒诱导的假体周围骨溶解药物、改善关节假体磨损颗粒诱导成骨细胞胱氨酸/谷氨酸反向转运能力药物、改善关节假体磨损颗粒诱导谷胱甘肽过氧化物酶4(GPX4)清除能力药物、改善关节假体磨损颗粒刺激成骨细胞内谷胱甘肽药物或抑制关节假体磨损颗粒诱导成骨细胞过氧化物的药物中的应用。

本发明优点在于：

1、本发明实验结果表明：CoCrMo纳米磨损颗粒(CoNPs)能够诱导成骨细胞内活性氧(ROS)过量积累，抑制成骨细胞胱氨酸/谷氨酸反向转运体(System Xc-)，导致谷胱甘肽过氧化物酶4(GPX4)的清除能力减弱，使得ROS生成与降解稳态失调，导致成骨细胞继发铁死亡，打破了破骨细胞与成骨细胞之间的平衡。铁死亡特异性抑制剂Ferrostatin-1的预处理，显著抑制上述病理过程，即抑制磨损颗粒诱导的成骨细胞铁死亡，抑制细胞内活性氧的过量积累。此外，在体内水平施加Ferrostatin-1的有效干预，可以显著减缓磨损颗粒所诱导的颅骨骨溶解效应。

2、本发明实验结果表明：(1)Ferrostatin-1能够抑制关节假体磨损颗粒诱导假体周围成骨细胞铁死亡过程；(2)Ferrostatin-1能够改善CoCrMo磨损颗粒诱导的谷胱甘肽过氧化物酶4清除能力下降，改善胱氨酸/谷氨酸反向转运能力下降，抑制细胞内活性氧的产生；(3)在体内水平Ferrostatin-1干预后，能够有效延缓CoCrMo磨损颗粒诱导的小鼠颅骨骨溶解程度，进一步证实Ferrostatin-1在延缓磨损颗粒诱导的骨溶解疾病中的有效性，为关节假体磨损颗粒诱导假体周围骨溶解所导致的无菌性松动提供了新的治疗策略，实用性强，应用前景广。

附图说明

图1.透射电镜检测磨损颗粒诱导的成骨细胞线粒体形态的改变。

图2.Western Blot检测提纯后的成骨细胞总蛋白中铁死亡相关蛋白的表达情况。

图3.流式细胞术检测磨损颗粒诱导的成骨细胞内活性氧含量以及分光光度仪检测GSH的变化情况。(*示意p＜0.05，**示意p＜0.01，均与Ctrl组比较)

图4.荧光显微镜检测不同处理组成骨细胞形态的改变。

图5.Western Blot检测提纯后的不同处理组中铁死亡相关蛋白的表达情况。

图6.荧光显微镜检测不同处理组中谷胱甘肽过氧化物酶4的表达情况。

图7.流式细胞术检测不同处理组中成骨细胞内活性氧以及分光光度仪检测GSH的变化情况。(*示意p＜0.05，**示意p＜0.01，与Ctrl组比较；#示意p＜0.05，##示意p＜0.01，与CoNPs组比较)

图8.MicroCT检测不同处理组中颅骨骨溶解程度及HE染色检测不同处理组中颅骨骨结构的改变情况。(*示意p＜0.05，**示意p＜0.01，与Ctrl组比较；#示意p＜0.05，##示意p＜0.01，与CoNPs+Ferrostatin-1(1mg/kg)组比较)

具体实施方式

下面结合附图对本发明提供的具体实施方式作详细说明。

附图中涉及的附图标记和组成部分如下所示：

实施例1Ferrostatin-1抑制关节假体磨损颗粒诱导假体周围骨溶解的体内外研究

1 材料与方法

1.1 小鼠成骨细胞系的培养

小鼠成骨细胞系MC3T3-E1购于中科院生化细胞所，MC3T3-E1细胞为小鼠颅骨来源的成骨细胞前体细胞系，在成骨诱导培养基培养下可分化成熟为成骨细胞。MC3T3-E1细胞使用α-MEM培养基(含有10％的胎牛血清和1％的青链霉素)，置于37℃，5％CO₂的细胞培养箱内培养。

1.2关节假体磨损颗粒的制备

CoCrMo磨损颗粒由南京凯斯特金属制品有限公司研磨而成，规格直径为29.30-204.27nm。将CoCrMo颗粒在180℃下灭菌6小时，浸入75％乙醇中48小时，然后在无菌台中用无菌磷酸盐缓冲液PBS(Solarbio，中国)中冲洗4次，紫外消毒晾干。进行Li测定以确保颗粒没有内毒素(＜0.25EU/ml)。接下来，将CoCrMo颗粒与完全培养基以1mg/ml的浓度混合，保存在4℃环境中。每次使用前将CoCrMo颗粒悬浮液超声处理30分钟。

1.3CCK8检测细胞毒性

MC3T3-E1细胞以每孔8×10³个铺于96孔板内待细胞贴壁后吸掉细胞培养基上清，分别加入含有不同浓度的CoCrMo颗粒培养基(0，25，50，100，200，400μg/ml)，1μM/mlFerrostatin-1(货号：HY-100579；MF：C15H22N2O2，MW：262.35，购于上海MedChemExpress公司)和铁死亡激活剂RSL3(0.5μM/ml)，分别处理12小时，24小时，48小时后加入含10％CCK8的培养基，孵育1小时，使用紫外分光光度计于450nm波长处测定吸光度。

1.4透射电镜检测细胞线粒体超微结构

不同浓度的CoCrMo颗粒(0，50和100μg/ml)处理MC3T3-E1细胞后，用1×PBS缓冲液清洗2次，1ml 0.25％胰蛋白酶消化各组细胞，将细胞悬液收集于1.5ml EP管中，6000r/min离心1分钟使细胞样品成团，吸出上清液，将4℃预冷的戊二醛固定液缓慢加入1.5ml EP管中，避免将细胞团块冲散，进行1小时的前固定，再将细胞团块和固定液一起移入5ml EP管中继续固定1小时，1×PBS缓冲液漂洗3次，随后进行丙酮系列脱水(50％丙酮1次，70％丙酮1次，90％丙酮一次，100％丙酮一次，每次15分钟)，丙酮与包埋剂混合液室温浸透2-4小时后，用环氧树脂618进行包埋，40℃浸透24小时，60℃聚合48小时，然后用瑞典LKB超薄切片机制作细胞样品超薄切片，再用醋酸油、柠檬酸铅双染色15-30分钟，最后在透射电镜下观察细胞线粒体超微结构并拍照。

1.5Western blot

不同组间处理完成后，收集样本加入RIPA裂解液，冰上裂解10分钟，4℃12000g离心30分钟，收集上清，通过BCA对蛋白浓度进行定量。组装电泳槽，加入提前配置好的3％浓缩胶和10％分离胶。随后用5×Loading Buffer和PBS稀释待测样本，混匀后沸水浴煮沸蛋白变性，上样总蛋白为20μg，即可进行SDS-PAGE蛋白电泳实验。本研究所涉及的蛋白指标包括SLC7A11，GPX4，ACSL4，COX2及α-Tubulin等。

1.6活性氧ROS检测(BODIPY C11试剂盒)

先用α-MEM将BODIPY脂质探针稀释1000至5μmol/ml，4℃避光保存备用。MC3T3-E1细胞在不同浓度的CoCrMo颗粒(0和50μg/ml)以及RSL3(0.5μM/ml)处理过后，弃去上层旧培养基，用无血清的α-MEM漂洗2次，吸弃干净后，加入胰蛋白酶消化细胞，用α-MEM终止消化，移入15ml离心管中1000g离心3分钟，弃去上清，用手振荡使细胞完全悬浮，然后加入BODIPY脂质探针稀释液900μl，放入培养箱中避光孵育30分钟，孵育结束后，离心弃去上清，每管中加入2mlα-MEM进行过滤，再离心弃去上清，每管中再加入500μl 1×PBS缓冲液，吹打使细胞均匀悬浮，用流式细胞仪检测ROS含量。

1.7GSH含量检测

不同处理结束后，用1×PBS缓冲液清洗2次，每个培养基中加入1ml胰蛋白酶消化2分钟，将细胞悬液移入1.5ml EP管中，3500r/min离心10分钟，收集沉淀细胞，再加入0.4ml1×PBS缓冲液悬浮细胞，超声破碎细胞后，5000r/min离心10分钟，取0.3ml上清液按照加入谷胱甘肽测量试剂，使用酶标仪在波长405nm处测定各孔吸光度值。

1.8荧光显微镜

不同处理组后，使用4％多聚甲醛室温下固定细胞20-30分钟，使用0.5％TritonX-100破膜15分钟后，加入1％BSA牛血清蛋白孵育30分钟，结束后使用相应的抗体在4℃环境下孵育过夜。使用1×PBS缓冲液洗涤三次，每次10分钟，再使用荧光二抗孵育1小时。敷完使用DAPI染色15分钟，用1×PBS缓冲液洗涤一次后在应该显微镜下拍照。

1.9CoCrMo颗粒诱导的颅骨骨溶解模型建立及相关干预操作

将C57BL/6J小鼠麻醉后，固定在固定板上，小鼠颅顶备皮，碘伏消毒，以双耳连线为参照，取颅顶部纵向切口约1cm，分离皮下及皮肤组织，暴露骨膜，将初筛的CoCrMo颗粒(40mg/ml)注射至骨膜内，然后小心缝合好皮肤。待小鼠完全苏醒后，将小鼠放回笼内饲养。术后三天进行小鼠腹腔注射给药实验。

本研究主要分为4组，每组5只，主要分组如下：第一组为空白处理组；第二组为模型组，即在小鼠颅骨建立磨损颗粒诱导的溶解模型；第三组为低浓度Ferrostatin-1干预组：在小鼠颅骨骨溶解模型建立后，每隔三天进行一次腹腔注射低浓度Ferrostatin-1(1mg/kg)；第四组为高浓度Ferrostatin-1干预组：在小鼠颅骨骨溶解模型建立后，每隔三天进行一次腹腔注射高浓度Ferrostatin-1(2mg/kg)。术后第14天取小鼠颅骨标本并清洗干净，使用4％多聚甲醛浸泡获取的小鼠颅骨24小时后进行MicroCT检测；结束后脱钙，脱水包埋，切片，进行HE染色检测颅骨破坏程度。

2 实验结果

2.1 透射电镜检测结果

透射电镜显示成骨细胞在CoCrMo颗粒刺激后线粒体的超微结构变化：不同浓度的CoCrMo颗粒(0，50和100μg/ml)处理MC3T3-E1细胞24小时后，随着CoCrMo颗粒浓度逐渐增大，成骨细胞膜断裂，线粒体变小、膜密度增改、线粒体嵴减少或消失，线粒体外膜断裂，细胞核大小正常。具体表现为细胞内线粒体变小及双层膜密度增高，证实CoCrMo颗粒刺激成骨细胞发生铁死亡，见图1。

2.2Western Blot检测提纯后的成骨细胞总蛋白中铁死亡相关蛋白的表达情况

CoCrMo颗粒诱导成骨细胞胱氨酸/谷氨酸反向转运能力以及谷胱甘肽过氧化物酶4清除能力下降：梯度浓度的CoCrMo颗粒(0，25，50，75和100μg/ml)处理MC3T3-E1细胞24小时后，成骨细胞胱氨酸/谷氨酸反向转运能力的蛋白表达量逐渐降低，谷胱甘肽过氧化物酶4的蛋白表达量逐渐降低，而铁死亡产物ACSL4以及COX2蛋白表达量逐渐增加，见图2。

2.3铁死亡ROS生成情况以及GSH含量

BODIPY脂质探针检测得，对照组中铁死亡激活剂RSL3显著增加细胞内ROS含量，降低GSH含量。相比于空白组，在CoCrMo颗粒刺激后，成骨细胞内ROS含量显著增加，GSH显著下降，CoCrMo颗粒诱导成骨细胞发生铁死亡，见图3。

2.4白光显微镜检测结果

白光显微镜检测不同处理组成骨细胞活性以及形态变化：在CoCrMo颗粒刺激成骨细胞后，成骨细胞数量明显下降，细胞膜断裂，而在CoCrMo颗粒刺激成骨细胞前用Ferrostatin-1(1μmol/ml)与成骨细胞在六孔板中共培养6小时，显著逆转CoCrMo颗粒刺激成骨细胞发生铁死亡的过程，见图4。

2.5Western blot检测不同处理组中蛋白的表达情况

在CoCrMo颗粒刺激成骨细胞前用Ferrostatin-1(1μmol/ml)与成骨细胞共培养6小时，可以显著改善CoCrMo颗粒诱导成骨细胞胱氨酸/谷氨酸反向转运能力下降，逆转谷胱甘肽过氧化物酶4的含量下降，减少铁死亡相关产物的生成，抑制CoCrMo颗粒刺激成骨细胞发生铁死亡，见图5。

2.6荧光显微镜检测结果

荧光显微镜显示谷胱甘肽过氧化物酶4的含量：荧光显微镜检测不同处理组(Ctrl、CoCrMo颗粒处理组和CoCrMo颗粒处理组+Ferrostatin-1处理组)GPX4的表达情况，Ferrostatin-1(1μmol/ml)预处理成骨细胞6小时可以显著逆转谷胱甘肽过氧化物酶4清除能力下降，见图6。

2.7不同处理组ROS生成情况以及GSH含量

Ferrostatin-1(1μmol/ml)预处理成骨细胞6小时后，可以显著抑制CoCrMo颗粒诱导成骨细胞内ROS的含量，并且可以明显改善成骨细胞内GSH含量，提升了成骨抗氧化物的能力，见图7。

2.8MicroCT检测不同处理组中颅骨溶解程度

单独CoCrMo磨损颗粒诱导组中颅骨溶解程度显著增加，该组的BV/TV、Tb.N、Tb.Th和SMI参数显著降低，而Tb.Sp显著增加，但当在颅骨溶解模型中加入梯度浓度的Ferostatin-1后，BV/TV、Tb.N、Tb.Th和SMI参数逐渐上升、Tb.Sp则逐渐降低，见图8。

对组织进行后续的脱水、包埋、切片等处理，并进一步将切片进行H&E检测不同处理组中颅骨骨结构的改变，如图8所示，单独磨损颗粒诱导组中颅骨组织结构破坏较为严重、失去了正常的骨微结构，但随着梯度浓度的Ferrostatin-1处理后，骨组织微结构被破坏程度有所减轻，进一步提示Ferrostatin-1的能够有效延缓CoCrMo磨损颗粒介导的体内颅骨骨溶解。

3结论

综上所述：CoCrMo磨损颗粒能够抑制成骨细胞胱氨酸/谷氨酸反向转运体(SystemXc-)，并且抑制谷胱甘肽过氧化物酶4(GPX4)的清除作用，进一步研究发现CoCrMo磨损颗粒能够诱导成骨细胞内活性氧(ROS)过量积累，使得ROS生成与降解的稳态失调，最终导致成骨细胞继发铁死亡，打破了破骨细胞与成骨细胞之间的平衡。但当加入铁死亡特异性抑制剂Ferrostatin-1后，显著逆转上述病理过程。此外，在体内水平施加Ferrostatin-1的有效干预，可以显著减缓CoCrMo磨损颗粒所诱导的体内颅骨骨溶解。

以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员，在不脱离本发明方法的前提下，还可以做出若干改进和补充，这些改进和补充也应视为本发明的保护范围。

Claims (1)

1.Ferrostatin-1在制备抗关节假体磨损CoCrMo颗粒诱导假体周围骨溶解药物中的应用。

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