CN113425708A - 大黄游离蒽醌组合物在减肥瘦身中的应用 - Google Patents
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Abstract
本发明提供大黄游离蒽醌组合物在制备治疗肥胖、预防肥胖、减肥瘦身、辅助减肥瘦身的药物、功能食品或保健食品中的应用;所述大黄游离蒽醌组合物中含有芦荟大黄素、大黄酸、大黄素、大黄酚和大黄素甲醚。大黄游离蒽醌组合物具有显著地降低大鼠体重、Lee’s指数、脂体比的作用;同时大鼠的腰围、颈围也有了显著减小的现象;给药后可有效防止大鼠的肥胖,且基本上没有出现腹泻的现象。H&E染色表明大黄游离蒽醌组合物可显著减少肝脏细胞中的脂肪滴并使脂肪细胞有所减少,表明大黄游离蒽醌组合物能促进油脂的代谢或阻止肝细胞对油脂的摄取。糖耐量实验表明大黄游离蒽醌组合物对肥胖大鼠的糖代谢能力有所改善。
Description
技术领域
本发明健康、美容技术领域,具体涉及大黄游离蒽醌组合物在减肥瘦身中的应用。
背景技术
改革开放以来,我国的经济飞速发展,在经济全球化的潮流下,人们工作的生活节奏不断加快、饮食结构也发生了改变,肥胖症逐渐成为一种常见的疾病,其患病率呈逐渐上升趋势。肥胖症是机体能量摄入长期超过消耗量的结果,常与高血压、糖尿病血脂异常、心脏病等集中出现,是一种代谢异常性的疾病。尽管减肥药物或保健品屡见不鲜,但减肥药物的毒副作用大大降低了患者服药的依从性;各种保健品因功效成分不详、功效不稳定也逐渐失去了患者的信任。因此近年来,成分明确的天然源减肥药物越来越被健康美容领域的研究者重视。
中药大黄蓼科植物掌叶大黄(Rheumpalmatum L.)、唐古特大黄(Rheumtanguticum Maxim.ex Balf.)或药用大黄(Rheum officinale Baill.)的干燥根和根茎,作为中医药古籍中的“将军”,是当今中医界用来美容、减肥及防治代谢性疾病的高频使用植物药。譬如文献报道大黄对治疗青春痘、面疱、疮疡痈肿、疔疮、丹毒、痤疮、酒渣鼻等有很好的疗效。大黄减肥汤可促进脂肪动员和利用,调节脂代谢从而降低体重和血脂水平;大黄减肥合剂能延长胃排空时间、抑制大鼠食欲,增加排便次数,并影响肠内容物的吸收;大黄减肥复方能显著降低家兔腹腔脂肪湿重;大黄醇或水提取物有调节脂质代谢的作用,大黄有效成分黄酮、二苯乙烯苷具有减少胆固醇吸收,降低LDLC,升高HDLC的作用。
相关的大黄减肥文献报道并未明确指出大黄发挥减肥作用的活性组分。因此,有必要对大黄提取物进行分离,进而明确发挥减肥作用的活性组分,以达到增效减毒的效果。
发明内容
为了解决现有技术中存在的问题,本发明提供了大黄游离蒽醌的提取方法及其在减肥瘦身中的应用。
为了实现本发明的发明目的,本发明的技术方案为:
本发明提供大黄游离蒽醌组合物在制备治疗肥胖、预防肥胖、减肥瘦身、辅助减肥瘦身的药物、功能食品或保健食品中的应用;所述大黄游离蒽醌组合物中含有芦荟大黄素、大黄酸、大黄素、大黄酚和大黄素甲醚。
作为优选,所述大黄游离蒽醌组合物中含以下重量百分比的各成分:5-15%的芦荟大黄素、8-25%的大黄酸、10-28%的大黄素、20-38%的大黄酚和5-15%的大黄素甲醚。
作为优选,所述大黄游离蒽醌组合物的提取方法为:将粉碎后大黄与70%乙醇溶液按照1g:8ml比例进行加热回流提取,过滤收集滤液后,将滤渣再与70%乙醇溶液按照1g:5ml进行加热回流提取,过滤收集滤液并合并,除去乙醇,残留水混悬液用有机溶剂萃取,过滤萃取液,将滤液真空干燥得大黄游离蒽醌组合物。
作为进一步优选,所述大黄游离蒽醌组合物的提取方法为:将粉碎后大黄与70%乙醇溶液按照1g:8ml比例混合浸泡2h,70-80℃加热回流2h,过滤两遍,收集滤液,滤渣再与70%乙醇溶液按照1g:5ml加热回流2h,过滤两遍,收集滤液;合并两次滤液,旋蒸除去乙醇,残留水混悬液用有机溶剂萃取,过滤萃取液,将滤液真空干燥得大黄游离蒽醌组合物。
作为进一步优选,所述有机溶剂为:二氯甲烷、三氯甲烷或乙酸乙酯。
作为优选,所述大黄为掌叶大黄、唐古特大黄或药用大黄。
本发明提供大黄游离蒽醌颗粒,所述大黄游离蒽醌颗粒由以下重量份数的各组分组成:大黄游离蒽醌组合物20份,淀粉45-50份,滑石粉0.5-1份,枸橼酸0.25-0.5份,淀粉浆适量;所述淀粉浆的加入量具体为:将各组分混合后,能够制备成捏之成团、触之即散的软材。
本发明所指大黄游离蒽醌组合物的减肥作用是经预防肥胖模型大鼠的减肥试验确认。SPF级SD大鼠,正常对照组喂食普通维持饲料,模型组(高脂对照组和给药组)连续喂食一个月左右的高脂饲料。在造模同时,每天灌胃给药,给药组灌胃给予本发明制备的大黄游离蒽醌颗粒用水冲调制成的混悬液,高脂对照组灌胃等体积辅料混悬液。当高脂对照组体重显著高于正常对照组,造模成功;给药组体重显著低于正常对照组时,停止给药,考查各组大鼠此时各项指标。
试验结果显示,大黄游离蒽醌组合物制成的颗粒具有显著地降低大鼠体重、Lee’s指数、脂体比的作用;同时大鼠的腰围、颈围也有了显著减小的现象;给药后可有效防止大鼠的肥胖,且基本上没有出现腹泻的现象。H&E染色表明大黄游离蒽醌组合物可显著减少肝脏细胞中的脂肪滴并使脂肪细胞有所减少,表明大黄游离蒽醌组合物能促进油脂的代谢或阻止肝细胞对油脂的摄取。糖耐量实验表明大黄游离蒽醌组合物对肥胖大鼠的糖代谢能力有所改善。
本发明的有益效果是具有减肥作用的大黄游离蒽醌组合物的主要化学组成是明确的,因而其质量也是可控的;其减肥作用是经动物实验验证的,从而值得信赖。
附图说明
附图用来提供对本发明的进一步理解,并且构成说明书的一部分,与本发明的实施例一起用于解释本发明,并不构成对本发明的限制。在附图中:
图1为实施例1制备的大黄游离蒽醌组合物高效液相色谱图。其中,
A:芦荟大黄素;
B:大黄酸;
C:大黄素;
D:大黄酚;
E:大黄素甲醚。
图2为各组大鼠体重百分比变化曲线图(含适应性培养7天,图中的A处表示适应性培养的日期)。其中,*,p<0.05,与正常对照比较;#,p<0.05,与高脂对照比较。
图3为给药末期正常对照组、高脂对照组、大黄游离蒽醌给药组大鼠血脂水平。其中,*,p<0.05,与正常对照比较;#,p<0.05,与高脂对照比较。
A:血清总胆固醇(TC);
B:血清甘油三酯(TG);
C:低密度脂蛋白胆固醇(LDLC);
D:高密度脂蛋白胆固醇(HDLC)。
图4为给药末期正常对照组、阴性对照组、阳性药物组和大黄游离蒽醌组大鼠糖代谢曲线图。
图5为给药末期正常对照组、高脂对照组和大黄游离蒽醌给药组大鼠脂肪组织和肝脏组织H&E染色结果。其中,
A:正常对照组脂肪组织H&E染色结果;
B:高脂对照组脂肪组织H&E染色结果;
C:大黄游离蒽醌给药组脂肪组织H&E染色结果;
D:正常对照组肝脏组织H&E染色结果;
E:高脂对照组肝脏组织H&E染色结果;
F:大黄游离蒽醌给药组肝脏组织H&E染色结果。
具体实施方式
下面结合具体实施例,进一步详细阐明本发明。实施例中未注明具体条件的实验方法,通常按照常规条件以及手册中所述的条件,或按照制造厂商所建议的条件;所用的通用设备、材料、试剂等,如无特殊说明,均可从商业途径得到。
大黄游离蒽醌组分的提取方法如下:
粉碎大黄根及根茎,得到粗粉。将粗粉与70%乙醇溶液按照1:8(g/ml)比例混合浸泡2h,70-80℃加热回流2h,过滤两遍,收集滤液,滤渣再与70%乙醇溶液按照1:5(g/ml)在70-80℃下加热回流2h,过滤两遍,收集滤液。合并两次滤液,旋蒸除去乙醇,残留水混悬液用有机溶剂萃取,过滤萃取液,将滤液真空干燥得大黄游离蒽醌组合物。
过滤两遍是因为:一遍过滤不充分,有细小残渣,萃取时容易加剧乳化现象。
萃取时,通过极性不同来萃取不同的组分,大黄游离蒽醌会被萃取到有机溶剂层中,有机溶剂可以为:二氯甲烷、三氯甲烷和乙酸乙酯。
上述大黄包括掌叶大黄(Rheum palmatum L.)、唐古特大黄(Rheum tanguticumMaxim.ex Balf.)或药用大黄(Rheum officinale Baill.)。
以大黄游离蒽醌五种单体标准品作为参照,反相高效液相色谱外标一点法定量分析,色谱柱为Diamonsil-C18柱(250mm×4.6mm,5μm),流动相为甲醇-0.1%磷酸(75:25,v/v),流速1mL/min,紫外检测波长254nm,柱温40℃,进样体积:20μL。测定大黄游离蒽醌组合物中的各组分含量,测定结果为:大黄游离蒽醌组合物中的含5-15%(w/w)的芦荟大黄素、8-25%(w/w)的大黄酸、10-28%(w/w)的大黄素、20-38%(w/w)的大黄酚和5-15%(w/w)的大黄素甲醚。
在上述范围内提取得到的大黄游离蒽醌组合物均能对减肥瘦身有一定的效果。其中,以实施例3的组合物中大黄游离蒽醌的含量最高。
大黄游离蒽醌颗粒的制备方法如下:
大黄游离蒽醌颗粒由下列处方组成:上述提取得到的大黄游离蒽醌组合物,20重量份;淀粉,45-50重量份;滑石粉,0.5-1重量份;枸橼酸,0.25-0.5重量份;10%的淀粉浆,适量。
将原料按处方中的比例混合制成捏之成团、触之即散的软材,过筛制粒,烘干,整粒,即得大黄游离蒽醌颗粒。
实施例1大黄游离蒽醌组分的提取和精制
粉碎掌叶大黄的大黄根及根茎,得到粗粉。将粗粉与70%乙醇溶液按照1:8(w/v)比例混合浸泡2h,75℃加热回流2h,过滤两遍,收集滤液,滤渣再与70%乙醇溶液按照1:5(w/v)在75℃加热回流2小时,过滤两遍,收集滤液。合并两次滤液,旋蒸除去乙醇,残留水混悬液用二氯甲烷萃取,过滤萃取液,将滤液真空干燥得大黄游离蒽醌组合物。
以大黄游离蒽醌五种单体标准品作为参照,反相高效液相色谱外标一点法定量分析,色谱柱为Diamonsil-C18柱(250mm×4.6mm,5μm),流动相为甲醇-0.1%磷酸(75:25,v/v),流速1mL/min,紫外检测波长254nm,柱温40℃,进样体积:20μL。大黄游离蒽醌提取物高效液相色谱(HPLC)图见图1。按面积归一化法计算,大黄游离蒽醌的总含量达到93.84%;按各单体标准曲线计算,各游离蒽醌质量百分比如表1。
表1 5种大黄游离蒽醌含量百分比(n=3,mean±SD)
实施例2大黄游离蒽醌组分的提取和精制
粉碎掌叶大黄的大黄根及根茎,得到粗粉。将粗粉与70%乙醇溶液按照1:8(w/v)比例混合浸泡2h,70℃加热回流2h,过滤两遍,收集滤液,滤渣再与70%乙醇溶液按照1:5(w/v)在70℃加热回流2h,过滤两遍,收集滤液。合并两次滤液,旋蒸除去乙醇,残留水混悬液用二氯甲烷萃取,过滤萃取液,将滤液真空干燥得大黄游离蒽醌组合物。大黄游离蒽醌的总含量达到90.28%。测定大黄游离蒽醌组合物中的各组分含量,测定重量百分比结果为:大黄游离蒽醌组合物中含9.44±0.89%的芦荟大黄素、19.66±1.23%的大黄酸、21.28±1.98%的大黄素、31.09±1.77%的大黄酚和8.81±1.25%的大黄素甲醚。
实施例3大黄游离蒽醌组分的提取和精制
粉碎掌叶大黄的大黄根及根茎,得到粗粉。将粗粉与70%乙醇溶液按照1:8(w/v)比例混合浸泡2h,80℃加热回流2h,过滤两遍,收集滤液,滤渣再与70%乙醇溶液按照1:5(w/v)在80℃加热回流2h,过滤两遍,收集滤液。合并两次滤液,旋蒸除去乙醇,残留水混悬液用二氯甲烷萃取,过滤萃取液,将滤液真空干燥得大黄游离蒽醌组合物。大黄游离蒽醌的总含量达到94.31%。测定大黄游离蒽醌组合物中的各组分含量,测定重量百分比结果为:大黄游离蒽醌组合物中的含10.63±1.22%的芦荟大黄素、18.24±1.69%的大黄酸、22.23±2.14%的大黄素、33.78±2.54%的大黄酚和9.43±0.96%的大黄素甲醚。
实施例4大黄游离蒽醌组分的提取和精制
粉碎药用大黄的大黄根及根茎,得到粗粉。将粗粉与70%乙醇溶液按照1:8(w/v)比例混合浸泡2h,80℃加热回流2h,过滤两遍,收集滤液,滤渣再与70%乙醇溶液按照1:5(w/v)在80℃加热回流2h,过滤两遍,收集滤液。合并两次滤液,旋蒸除去乙醇,残留水混悬液用二氯甲烷萃取,过滤萃取液,将滤液真空干燥得大黄游离蒽醌组合物。大黄游离蒽醌的总含量达到89.64%。测定大黄游离蒽醌组合物中的各组分含量,测定重量百分比结果为:大黄游离蒽醌组合物中的含9.26±1.09%的芦荟大黄素、18.22±1.94%的大黄酸、21.75±2.41%的大黄素、31.86±2.35%的大黄酚和8.55±1.15%的大黄素甲醚。
实施例5大黄游离蒽醌组分的提取和精制
粉碎唐古特大黄的大黄根及根茎,得到粗粉。将粗粉与70%乙醇溶液按照1:8(w/v)比例混合浸泡2h,80℃加热回流2h,过滤两遍,收集滤液,滤渣再与70%乙醇溶液按照1:5(w/v)在80℃加热回流2h,过滤两遍,收集滤液。合并两次滤液,旋蒸除去乙醇,残留水混悬液用二氯甲烷萃取,过滤萃取液,将滤液真空干燥得大黄游离蒽醌组合物。大黄游离蒽醌的总含量达到93.75%。测定大黄游离蒽醌组合物中的各组分含量,测定重量百分比结果为:大黄游离蒽醌组合物中的含10.55±1.34%的芦荟大黄素、18.73±1.49%的大黄酸、21.96±1.87%的大黄素、32.26±2.01%的大黄酚和10.25±1.18%的大黄素甲醚。
实施例6大黄游离蒽醌颗粒的制备
大黄游离蒽醌颗粒由下列处方组成:实施例3制备的大黄游离蒽醌组合物,20g;淀粉,50g;滑石粉,0.5g;枸橼酸,0.25g;10%的淀粉浆,适量。
将原料按处方中的比例混合制成捏之成团、触之即散的软材,过14目筛制粒,烘干,整粒,即得大黄游离蒽醌颗粒。
实施例7药理实验研究
1.肥胖模型大鼠和预防肥胖模型大鼠试验
SPF级雄性SD大鼠,体质量为160-200g,由兰州大学基础医学院医学实验动物中心提供,实验动物生产许可证SCXK(甘)2018-0002,动物实验使用许可证SYXK(甘)2018-0002。适应性喂养7天,随机分组,正常对照组给予正常维持饲料定量喂养,肥胖模型组(高脂对照组)和预防肥胖模型组(给药组)自由采食高脂饲料(购于江苏协同生物有限公司,高脂饲料配方为43.5%维持基础料、17.5%猪油、12%的蔗糖、10%的全脂奶粉、13%酪蛋白、2%实验动物预混料、2%碳酸氢钙),自由饮水。同时,预防肥胖模型组大鼠(给药组)每天按体重20mL/kg灌胃给予实施例4的大黄游离蒽醌颗粒冲调而成的混悬液(按照30mg/mL的浓度配制含大黄游离蒽醌药物混悬液),肥胖模型组大鼠(高脂对照组)灌胃等体积辅料混悬液。模型大鼠造模约一个月,预计造模成功后,肥胖模型组大鼠(高脂对照组)显著肥胖,而预防肥胖模型组大鼠(给药组)相对较瘦。
2.检测指标
定期测量大鼠体重、摄食量、颈围、腰围、自眼眶静脉丛采血,分离血清后用试剂盒检测血脂四项,血清甘油三酯TG(GPO-PAP单试剂比色法)、血清总胆固醇TC(COD-PAP单试剂比色法)、血清高密度脂蛋白胆固醇HDL-C(直接法)和血清低密度脂蛋白胆固醇LDL-C(直接法)四项指标的生化试剂盒均来自南京建成生物工程研究所,建模期约一个月,试验结束时,给大鼠腹腔注射50%葡萄糖注射液,定时断尾采血,血糖仪测量其血糖浓度变化;处死大鼠测量体长、计算Lee's指数((Lee's指数=体重(g)^(1/3)x10/体长(mm),其中体长定义为鼻到肛门的距离);解剖取睾周脂肪、肝脏,生理盐水冲洗后灭菌滤纸吸干,称重,计算脂/体比(脂/体比=膏周脂肪组织重量×100%/大鼠体重);将脂肪和肝脏用4%多聚甲醛固定,石蜡包埋切片,H&E染色观察。
3.实验结果
实验中各组大鼠的体重百分比差距逐渐增加,到实验结束时,高脂对照组体重百分比显著高于正常对照组(*,p<0.05),而给药组体重百分比显著低于高脂对照组(#,p<0.05),甚至有低于正常对照组的趋势,具体见图2,且给药组基本上没有出现腹泻的现象。
图2为各组大鼠体重百分比变化曲线图(含适应性培养7天,图中的A处表示适应性培养的日期)。其中,*,p<0.05,与正常对照比较;#,p<0.05,与高脂对照比较。
与正常对照组相比,给药结束后高脂对照组的LDL-C和TC显著升高,HDL-C显著下降(图3A、3C、3D);与高脂对照组相比,给药组的LDL-C显著下降(图3C),其余指标无统计学差异,具体见图3。
图3为给药末期正常对照组、高脂对照组、大黄游离蒽醌给药组大鼠血脂水平。其中,*,p<0.05,与正常对照比较;#,p<0.05,与高脂对照比较。
如表2,试验结束时,与正常对照组相比,高脂对照组大鼠颈围和腰围显著增加;而与高脂对照组相比,给药组大鼠颈围和腰围显著减小。
表2各组大鼠颈围和腰围(n=7,Mean±SD)
*,p<0.05,与正常对照比较;#,p<0.05,与高脂对照比较。
如表3,试验结束时,与正常对照组相比,高脂对照组大鼠Lee’s指数和脂体比显著增加;而与高脂对照组相比,给药组大鼠Lee’s指数和脂/体比显著减小。
表3各组大鼠Lee’s指数和脂体比(n=7,Mean±SD)
*,p<0.05,与正常对照比较;#,p<0.05,与高脂对照比较。
图4中,同时间段高脂对照组的血糖浓度显著高于正常对照组;而给药组的血糖浓度相对于高脂对照组有所降低。说明高脂对照组的糖代谢能力不如正常对照组,给药组的糖代谢能力有所改善。
图5中,大鼠脂肪组织切片的H&E染色显示正常对照组脂肪细胞大小形状规律,高脂对照组脂肪大小不规律,出现巨大脂肪细胞,而给药组脂肪细胞恢复正常大小。肝组织切片的H&E染色显示高脂对照组肝脂肪空泡增多增大,而给药组脂肪空泡减少且变小。
以上实验结果表明,给药末期,高脂对照组大鼠肥胖程度明显高于正常对照组,而大黄游离蒽醌组合物给药组大鼠肥胖程度有显著改善,足以说明大黄游离蒽醌颗粒具有减肥作用。
最后应说明的是:以上所述仅为本发明的优选实施例而已,并不用于限制本发明,尽管参照前述实施例对本发明进行了详细的说明,对于本领域的技术人员来说,其依然可以对前述各实施例所记载的技术方案进行修改,或者对其中部分技术特征进行等同替换。凡在本发明的精神和原则之内,所作的任何修改、等同替换、改进等,均应包含在本发明的保护范围之内。
Claims (7)
1.大黄游离蒽醌组合物在制备治疗肥胖、预防肥胖、减肥瘦身、辅助减肥瘦身的药物、功能食品或保健食品中的应用;所述大黄游离蒽醌组合物中含有芦荟大黄素、大黄酸、大黄素、大黄酚和大黄素甲醚。
2.根据权利要求1所述的应用,其特征在于:所述大黄游离蒽醌组合物中含以下重量百分比的各成分:5-15%的芦荟大黄素、8-25%的大黄酸、10-28%的大黄素、20-38%的大黄酚和5-15%的大黄素甲醚。
3.根据权利要求1或2所述的应用,其特征在于:所述大黄游离蒽醌组合物的提取方法为:将粉碎后大黄与70%乙醇溶液按照1g:8ml比例进行加热回流提取,过滤收集滤液后,将滤渣再与70%乙醇溶液按照1g:5ml进行加热回流提取,过滤收集滤液并合并,除去乙醇,残留水混悬液用有机溶剂萃取,过滤萃取液,将滤液真空干燥得大黄游离蒽醌组合物。
4.根据权利要求3所述的应用,其特征在于:所述大黄游离蒽醌组合物的提取方法为:将粉碎后大黄与70%乙醇溶液按照1g:8ml比例混合浸泡2h,70-80℃加热回流2h,过滤两遍,收集滤液,滤渣再与70%乙醇溶液按照1g:5ml在70-80℃下加热回流2h,过滤两遍,收集滤液;合并两次滤液,旋蒸除去乙醇,残留水混悬液用有机溶剂萃取,过滤萃取液,将滤液真空干燥得大黄游离蒽醌组合物。
5.根据权利要求3或4所述的应用,其特征在于:所述有机溶剂为:二氯甲烷、三氯甲烷或乙酸乙酯。
6.根据权利要求1-5任一项所述的应用,其特征在于:所述大黄为掌叶大黄、唐古特大黄或药用大黄。
7.大黄游离蒽醌颗粒,其特征在于:所述大黄游离蒽醌颗粒由以下重量份数的各组分组成:权利要求1-6任一项中所述的大黄游离蒽醌组合物20份,淀粉45-50份,滑石粉0.5-1份,枸橼酸0.25-0.5份,淀粉浆适量;所述淀粉浆的加入量具体为:将各组分混合后,能够制备成捏之成团、触之即散的软材。
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