CN113348962A - 一种提高蝉花虫草子实体中虫草酸含量的人工栽培方法 - Google Patents

一种提高蝉花虫草子实体中虫草酸含量的人工栽培方法 Download PDF

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Abstract

本发明属于食用菌的人工栽培技术领域，具体涉及一种提高蝉花虫草子实体中虫草酸含量的人工栽培方法。本发明所述提高蝉花虫草子实体中虫草酸的栽培方法，在常规蝉花虫草子实体栽培工艺的基础上，利用自行养殖多肉植物中产生的枯叶和修剪的徒长叶片，通过将其加入至优化的蝉花虫草的固体培养基质中，惊喜的发现，在蝉花虫草的固体发酵过程中，添加的多肉植物的枯叶和叶片与优化筛选的固体基质和营养液相复配，会对虫草酸的积累产生有效的诱导，提高了蝉花虫草子实体中虫草酸的含量。

Description

一种提高蝉花虫草子实体中虫草酸含量的人工栽培方法
技术领域
本发明属于食用菌的人工栽培技术领域，具体涉及一种提高蝉花虫草子实体中虫草酸含量的人工栽培方法。
背景技术
蝉花是我国传统的名贵中药材之一，又名金蝉花、蝉花虫草，由麦角菌科虫草属真菌蝉拟青霉寄生于蝉类若虫的干燥复合体，与冬虫夏草和蛹虫草是我国虫草行业公认的商业化虫草菌。现有研究结果表明，蝉花与多种虫草中的主要成分氨基酸种类相似，具有不同程度的补益作用。目前已报道的蝉花虫草中含有的生物活性物质包括氨基酸、多糖、生物碱、麦角甾醇、腺苷、虫草素、虫草酸等，具有抗肿瘤、抑制免疫、增强免疫、抗氧化、抗衰老、护肝、降血压等药理作用。
虫草酸是蛹虫草的主要活性成分之一，虫草酸含量的高低被认为是衡量虫草质量的主要标准之一，一般认为虫草酸含量高的虫草的药用价值高。药理学研究表明，虫草酸具有促进人体新陈代谢、改善人体微循环系统、明显降低血脂、抑制细菌、增强对疾病的抵抗力等作用，以及镇咳、祛痰、平喘的功效；虫草酸可用于预防与治疗脑血栓、脑出血、心肌梗塞、长期衰竭、抗肝组织纤维化、抗脂质过氧化等症，同时由于虫草的增强免疫功能使肝脏的解毒作用增强，从而能够有效保护肝细胞。但是，通过化学合成其活性成分的途径工艺复杂且产量极低，虫草酸依然多从天然产物中提取制备。但是，目前从蝉花虫草中提取的虫草酸含量较低，这主要是因为人工栽培的蝉花虫草中虫草酸的含量不理想。因此，亟需开发一种可有效提高蝉花虫草中虫草酸含量的人工栽培方法。
多肉植物是指植物营养器官肥大的高等植物，通常具根、茎、叶三种营养器官和花、果实、种子三种繁殖器官。多肉植物作为盆栽在世界各地广受欢迎，成为年轻人最喜爱的植物而走入千家万户。多肉植物在养殖过程中，随着植物的新陈代谢产生了一定量的枯叶需要定时处理，同时也会因为徒长而修剪叶片。这些枯叶或叶片纵然单株量并不大，但对于大量养殖多肉植物的用户而言，依然造成了处理的困扰。
发明内容
为此，本发明所要解决的技术问题在于提供一种提高蝉花虫草子实体中虫草酸含量的人工栽培方法，以解决现有技术中蝉花虫草中虫草酸含量不理想的问题；
本发明所要解决的第二个技术问题在于提供一种虫草酸含量较高的蝉花虫草。
为解决上述技术问题，本发明所述的一种提高蝉花虫草子实体中虫草酸含量的人工栽培方法，包括在液体培养基中进行液体菌种培养以及在固体培养基中进行子实体培养的步骤；
所述固体培养基包括质量比为1：0.8-1.2的固体基质和营养液；
所述固体基质包括如下重量份的组分：大米20-30重量份、甘蔗渣10-20重量份、麸皮10-20重量份、山楂碎粒10-15重量份、萝卜碎粒10-15重量份、蝉蛹粉10-20重量份、姬胧月植物枯叶5-12重量份、姬胧月植物叶片碎粒5-12重量份、EM菌粉0.5-2重量份；
所述营养液包括如下质量含量的组分：碳源20-30g/L、氮源8-15g/L、无机盐3-8/L，自然pH。
其中，所述姬胧月植物枯叶为多肉养殖过程中修剪下的枯叶经自然晾干即可，而所述姬胧月植物叶片碎粒则是采用多肉养殖过程中由于植株徒长而修剪下的叶片，经自然晾干并粉碎至颗粒状即可。
其中，所述山楂碎粒和萝卜碎粒分别为取山楂和萝卜经切块/片且自然晾晒至粉碎可不成糊状后，经粉碎至颗粒状即可。
具体的，所述提高蝉花虫草子实体中虫草酸含量的人工栽培方法：
所述碳源包括葡萄糖；
所述氮源包括蛋白胨；
所述无机盐包括磷酸二氢钾、磷酸氢二钾和硫酸镁的混合物。
具体的，所述子实体培养步骤包括发菌步骤、转色步骤以及子实体管理步骤。
具体的，所述发菌步骤的控制条件包括：控制培养温度15-18℃、湿度60-80％，进行避光培养。
具体的，所述转色步骤的控制条件包括：控制光照条件为200-500lux，控制光周期光暗比为L15-18：D6-9，培养温度15-18℃，湿度60-80％。
具体的，所述子实体管理步骤的控制条件包括：控制光照条件为200-500lux，控制光周期光暗比为L15-18：D6-9，培养温度20-25℃，湿度60-80％。
具体的，所述液体培养基包括如下质量含量的组分：葡萄糖0.5-1％、酵母提取物0.2-0.4％、萝卜0.8-1.5％、鸡蛋清0.5-1％、MgSO4 0.01-0.03％、KH2PO40.01-0.03％，自然pH。
具体的，所述液体菌种培养的条件包括：控制发酵温度20-25℃，搅拌转速150-180rpm。
具体的，所述提高蝉花虫草子实体中虫草酸含量的人工栽培方法，还包括在所述液体菌种培养步骤前将所述菌株进行常规活化的步骤。
本发明还公开了由所述栽培方法得到的蝉花虫草子实体。
本发明所述提高蝉花虫草子实体中虫草酸的栽培方法，在常规蝉花虫草子实体栽培工艺的基础上，利用自行养殖多肉植物中产生的枯叶和修剪的徒长叶片，通过将其加入至蝉花虫草的固体培养基质中，惊喜的发现，在蝉花虫草的固体发酵过程中，添加的多肉植物的枯叶和叶片与优化筛选的固体基质和营养液相复配，会对虫草酸的积累产生有效的诱导，提高了蝉花虫草子实体中虫草酸的含量，提高了蝉花虫草的营养价值，也为虫草酸的深入研究和利用提供了支持。
具体实施方式
在本发明下述实施例中，选用的培育蝉花虫草的菌株为现有技术常规已知菌株即可，下述实施例选用的所述蝉花虫草菌株购于上海抚生实业有限公司。
本发明下述实施中，所述蝉花虫草经液体培养获得相应的培养液(种子液)，再接种于相应的固体培养基中进行子实体的发酵。下述实施例中，所述液体培养步骤使用的液体培养基包括如下质量含量的组分：按照葡萄糖0.8％、酵母提取物0.3％、萝卜1.2％、鸡蛋清0.8％、MgSO4 0.02％、KH2PO4 0.02％的比例取上述组分；取选定量的萝卜加水进行制浆，并加入选定量的所述葡萄糖、酵母提取物、鸡蛋清、MgSO4和KH2PO4混匀，加水定容至5L，自然pH，分装于500mL三角瓶内，每瓶装液量100mL，封口后于121℃灭菌20min，取出培养基自然冷却至室温。于无菌条件下，将保存的菌株挖块接种至上述液体培养基中，控制发酵温度22℃，搅拌转速160rpm进行摇瓶培养48h，获得如下实施例中待接种进行子实体固体发酵的种子液，备用。
本发明下述实施例中，所述姬胧月植物枯叶为多肉养殖过程中修剪下的枯叶经自然晾干即可，而所述姬胧月植物叶片碎粒则是采用多肉养殖过程中由于植株徒长而修剪下的叶片，经自然晾干并粉碎至颗粒状(粒径1-3mm为宜)即可。
所述山楂碎粒和萝卜碎粒分别为取山楂和萝卜经切块/片且自然晾晒至粉碎可不成糊状后，经粉碎至颗粒状(粒径1-3mm为宜)即可。
实施例1
本实施例中将上述获得的种子液在固体培养基中进行子实体的培养。
按照如下含量配制所述固体基质：大米20重量份、甘蔗渣20重量份、麸皮10重量份、山楂碎粒15重量份、萝卜碎粒10重量份、蝉蛹粉20重量份、姬胧月植物枯叶5重量份、姬胧月植物叶片碎粒12重量份、EM菌粉0.5重量份(暂不加入)；
按照如下含量配制所述营养液：葡萄糖20g/L、蛋白胨30g/L、磷酸二氢钾2g/L、磷酸氢二钾1g/L、硫酸镁2g/L；
按照1：0.8的质量比将上述固体培养基(除EM菌粉)和营养液相混匀，将配制好的培养基封口，置于高压湿热灭菌锅中，121℃常规灭菌40min。
于室温及无菌条件下，按照10wt％的接种量将上述种子液接种入所述固体培养基中，并加入相应量的所述EM菌粉混匀，随后将接种后的培养基置于栽培室内培养，控制温度17℃，湿度70％，进行避光培养3-5天，至发菌完全。
随后调整光照条件，控制光照条件为300lux下，控制光周期光暗比为L16：D8，继续控制培养温度17℃、湿度70％，继续培养5-8天完成转色并可形成子座芽。
随后保持上述光照条件，继续控制光照条件为300lux下，控制光周期光暗比为L16：D8，控制培养温度22℃、湿度70％，继续培养15-20天，采收成熟的子实体，烘干，即得。
实施例2
本实施例中将上述获得的种子液在固体培养基中进行子实体的培养。
按照如下含量配制所述固体基质：大米30重量份、甘蔗渣10重量份、麸皮20重量份、山楂碎粒10重量份、萝卜碎粒15重量份、蝉蛹粉10重量份、姬胧月植物枯叶12重量份、姬胧月植物叶片碎粒5重量份、EM菌粉2重量份(暂不加入)；
按照如下含量配制所述营养液：葡萄糖30g/L、蛋白胨20g/L、磷酸二氢钾4g/L、磷酸氢二钾4g/L、硫酸镁4g/L；
按照1：1.2的质量比将上述固体培养基(除EM菌粉)和营养液相混匀，将配制好的培养基封口，置于高压湿热灭菌锅中，121℃常规灭菌40min。
于室温及无菌条件下，按照10wt％的接种量将上述种子液接种入所述固体培养基中，并加入相应量的所述EM菌粉混匀，随后将接种后的培养基置于栽培室内培养，控制温度17℃，湿度70％，进行避光培养3-5天，至发菌完全。
随后调整光照条件，控制光照条件为300lux下，控制光周期光暗比为L16：D8，继续控制培养温度17℃、湿度70％，继续培养5-8天完成转色并可形成子座芽。
随后保持上述光照条件，继续控制光照条件为300lux下，控制光周期光暗比为L16：D8，控制培养温度22℃、湿度70％，继续培养15-20天，采收成熟的子实体，烘干，即得。
实施例3
本实施例中将上述获得的种子液在固体培养基中进行子实体的培养。
按照如下含量配制所述固体基质：大米25重量份、甘蔗渣15重量份、麸皮15重量份、山楂碎粒12重量份、萝卜碎粒12重量份、蝉蛹粉15重量份、姬胧月植物枯叶8重量份、姬胧月植物叶片碎粒10重量份、EM菌粉1重量份(暂不加入)；
按照如下含量配制所述营养液：葡萄糖25g/L、蛋白胨25g/L、磷酸二氢钾3g/L、磷酸氢二钾2g/L、硫酸镁3g/L；
按照1：1的质量比将上述固体培养基(除EM菌粉)和营养液相混匀，将配制好的培养基封口，置于高压湿热灭菌锅中，121℃常规灭菌40min。
于室温及无菌条件下，按照10wt％的接种量将上述种子液接种入所述固体培养基中，并加入相应量的所述EM菌粉混匀，随后将接种后的培养基置于栽培室内培养，控制温度17℃，湿度70％，进行避光培养3-5天，至发菌完全。
随后调整光照条件，控制光照条件为300lux下，控制光周期光暗比为L16：D8，继续控制培养温度17℃、湿度70％，继续培养5-8天完成转色并可形成子座芽。
随后保持上述光照条件，继续控制光照条件为300lux下，控制光周期光暗比为L16：D8，控制培养温度22℃、湿度70％，继续培养15-20天，采收成熟的子实体，烘干，即得。
对比例1
本对比例所述蝉花虫草子实体的培养方法同实施例3，其区别仅在于，所述固体基质中不含有所述EM菌粉。
对比例2
本对比例所述蝉花虫草子实体的培养方法同实施例3，其区别仅在于，所述固体基质中不含有所述胧月植物枯叶和姬胧月植物叶片碎粒。
对比例3
本对比例所述蝉花虫草子实体的培养方法同实施例3，其区别仅在于，所述固体基质中不含有所述EM菌粉、以及所述胧月植物枯叶和姬胧月植物叶片碎粒。
实验例
分别收集上述实施例3及对比例1-3中采收所得子实体粉碎至粉末态，利用热水浸提法提取虫草酸。分别准确称取上述子实体粉末1g加入圆底烧瓶中，加入30ml水，于80℃水浴提取2h，冷却至室温，于14000rpm离心5min，取上清液定容至100ml，采用分光光度法测定虫草酸的含量(详见蝉花虫草人工培养条件的初步探究，张泽文等)，记录测定的虫草酸的含量于下表1。
表1虫草酸含量mg/g
编号 蝉花虫草含量mg/g子实体
实施例3 53.5
对比例1 48.8
对比例2 45.3
对比例3 42.6
可见，本发明所述方法通过对固体培养基的优化，可有效提高蝉花虫草子实体中虫草酸的含量。
显然，上述实施例仅仅是为清楚地说明所作的举例，而并非对实施方式的限定。对于所属领域的普通技术人员来说，在上述说明的基础上还可以做出其它不同形式的变化或变动。这里无需也无法对所有的实施方式予以穷举。而由此所引伸出的显而易见的变化或变动仍处于本发明创造的保护范围之中。

Claims (10)

1.一种提高蝉花虫草子实体中虫草酸含量的人工栽培方法，其特征在于，包括在液体培养基中进行液体菌种培养以及在固体培养基中进行子实体培养的步骤；
所述固体培养基包括质量比为1：0.8-1.2的固体基质和营养液；
所述固体基质包括如下重量份的组分：大米20-30重量份、甘蔗渣10-20重量份、麸皮10-20重量份、山楂碎粒10-15重量份、萝卜碎粒10-15重量份、蝉蛹粉10-20重量份、姬胧月植物枯叶5-12重量份、姬胧月植物叶片碎粒5-12重量份、EM菌粉0.5-2重量份；
所述营养液包括如下质量含量的组分：碳源20-30g/L、氮源8-15g/L、无机盐3-8/L，自然pH。
2.根据权利要求1所述提高蝉花虫草子实体中虫草酸含量的人工栽培方法，其特征在于：
所述碳源包括葡萄糖；
所述氮源包括蛋白胨；
所述无机盐包括磷酸二氢钾、磷酸氢二钾和硫酸镁的混合物。
3.根据权利要求1或2所述提高蝉花虫草子实体中虫草酸含量的人工栽培方法，所述子实体培养步骤包括发菌步骤、转色步骤以及子实体管理步骤。
4.根据权利要求1-3任一项所述提高蝉花虫草子实体中虫草酸含量的人工栽培方法，所述发菌步骤的控制条件包括：控制培养温度15-18℃、湿度60-80％，进行避光培养。
5.根据权利要求1-4任一项所述提高蝉花虫草子实体中虫草酸含量的人工栽培方法，所述转色步骤的控制条件包括：控制光照条件为200-500lux，控制光周期光暗比为L15-18：D6-9，培养温度15-18℃，湿度60-80％。
6.根据权利要求1-5任一项所述提高蝉花虫草子实体中虫草酸含量的人工栽培方法，所述子实体管理步骤的控制条件包括：控制光照条件为200-500lux，控制光周期光暗比为L15-18：D6-9，培养温度20-25℃，湿度60-80％。
7.根据权利要求1-6任一项所述提高蝉花虫草子实体中虫草酸含量的人工栽培方法，所述液体培养基包括如下质量含量的组分：葡萄糖0.5-1％、酵母提取物0.2-0.4％、萝卜0.8-1.5％、鸡蛋清0.5-1％、MgSO4 0.01-0.03％、KH2PO40.01-0.03％，自然pH。
8.根据权利要求1-7任一项所述提高蝉花虫草子实体中虫草酸含量的人工栽培方法，所述液体菌种培养的条件包括：控制发酵温度20-25℃，搅拌转速150-180rpm。
9.根据权利要求1-8任一项所述提高蝉花虫草子实体中虫草酸含量的人工栽培方法，其特征在于，还包括在所述液体菌种培养步骤前将所述菌株进行常规活化的步骤。
10.由权利要求1-9任一项所述栽培方法得到的蝉花虫草子实体。
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