CN113332438A - 跨膜蛋白及内质网脂筏蛋白或其编码基因的拮抗剂或抑制剂的用途 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种跨膜蛋白及内质网脂筏蛋白或其编码基因的拮抗剂或抑制剂的用途，我们运用多步亲和纯化方法结合质谱分析，发现内质网脂筏蛋白1和2(ERLIN1，ERLIN2)能与TM6SF2及载脂蛋白B(apolipoprotein B，APOB)相作用。ERLINs与TM6SF2相互稳定对方，同时TM6SF2通过两个内质网腔区段与APOB结合。ERLINs虽然并不直接结合APOB，但能通过稳定TM6SF2间接稳定APOB。E167K突变通过降低TM6SF2蛋白水平从而影响APOB稳定性。在小鼠中利用腺病毒相关病毒降低Tm6sf2或ERLINs蛋白表达均能降低肝脏APOB蛋白量，从而造成血液中脂质水平的降低。本发明提供新的治疗血脂异常的靶点和策略。

Description

跨膜蛋白及内质网脂筏蛋白或其编码基因的拮抗剂或抑制剂 的用途

技术领域

本发明涉及生物技术领域，具体地说涉及跨膜蛋白6家族成员2(TM6SF2) 蛋白、内质网脂筏蛋白1和2(ERLIN1，ERLIN2)的用途。

背景技术

TM6SF2与血液中脂质的关系

TM6SF2是位于19号染色体上的一个编码351个氨基酸的多次跨膜蛋白的基因。在2000年它作为TM6SF1的平行同源基因被克隆出来，被L. Carim-Todd第一次报道(L.Carim-Todd,2000)。直到2014年，数个研究团队几乎同时通过全基因组关联研究(genome-wideassociation study，GWAS) 这一研究手段发现了除PNPLA3基因外，另一个与非酒精性脂肪肝显著相关的单碱基突变位点rs58542926，这一突变位点就位于TM6SF2基因上，它导致了多次跨膜蛋白TM6SF2的E167K突变，这一突变会导致蛋白在167位发生由谷氨酸变为赖氨酸的非同义突变(E167K)(Holmen et al.,2014；Kozlitina et al., 2014)。

TM6SF2蛋白主要在肝脏，小肠和肾脏三个组织中高表达。它的亚细胞定位主要定位于内质网(ER)，内质网高尔基(ER-Golgi)中间体以及肝细胞和肠细胞的高尔基体上(Mahdessian et al.,2014；Smagris et al.,2016)。近年来，许多研究集中于脂质代谢中的TM6SF2的作用，这些研究证实了TM6SF2与非酒精性脂肪肝疾病(NAFLD)以及心血管疾病(cardiovascular disease，CVD)之间的关联性(Holmen et al.,2014；Pirola andSookoian,2015)。Oddgeir等人通过对5643位挪威人的血脂指标的全基因组关联研究分析发现TM6SF2的 rs58542926突变会降低血液中总胆固醇含量并且降低人群冠状动脉疾病风险 (Holmen et al.,2014)。同样Pirola等人发现rs58542926突变在调节脂质水平中有着重要作用，它降低了血液内总胆固醇、低密度脂蛋白胆固醇以及甘油三酯水平，而这些指标是心血管疾病的重要影响因素，这些血脂含量的降低使贻患心血管疾病的风险降低(Pirola and Sookoian,2015)。

几项全基因组关联研究表明，TM6SF2作为19p12基因座的功能基因与血浆脂质密切相关，多数研究集中在rs58542926突变对血浆脂质的影响(Daly et al., 2014；Dongiovanni et al.,2014；Holmen et al.,2014；Kozlitina et al., 2014；Liu et al.，2014；Zhou et al.,2014)。rs58542926突变是在TM6SF2 基因的编码核苷酸499位中用腺嘌呤取代鸟嘌呤，造成在氨基酸残基167位置用赖氨酸替代谷氨酸(rs58542926c.499C>T，p.Glu167Lys，E167K)(Kozlitina et al.,2014)。E167K变异导致蛋白折叠错误，细胞内降解加速(Kozlitina et al.,2014)，蛋白质更新率增加(Ehrhardt et al.,2017)，造成TM6SF2蛋白质水平和基因功能的降低。总的来说，非同义变体的等位基因可降低血浆脂蛋白浓度 (Holmen et al.,2014；Kozlitina et al.,2014；O’Hare et al.,2017；Pirolaand Sookoian,2015)。

通过总结分析关于rs58542926突变的多个数据库之后，Carlos等人的研究提示rs58542926突变在增大样品数量的情况下与低水平的总胆固醇、低密度脂蛋白胆固醇以及甘油三酯含量相关，但不影响高密度脂蛋白胆固醇(Pirola and Sookoian,2015)，此外，通过对达拉斯心脏研究(Dallas Heart Study，)达拉斯生物库(Dallas Biobank)和哥本哈根研究(Copenhagen Study)的人群数据分析，研究者观察到TM6SF2的E167K变异与血浆TG和LDL-C浓度降低之间存在关联性(Kozlitina et al.,2014)。

人源TM6SF2长度为377个氨基酸，分子量为42,554Da。，其蛋白序列如下：

MDIPPLAGKIAALSLSALPVSYALNHVSALSHPLWVALMSALILGLLFVAVYSLSHGEVSYDPLYAVFAVFAFTSVVDLIIALQEDSYVVGFMEFYTKEGEPYLRTAHGVFICYWDGTVHYLLYLAMAGAICRRKRYR NFGLYWLGSFAMSILVFLTGNILGKYSSEIRPAFFLTIPYLLVPCWAGMKVFSQPRALTRCTANMVQEE QRKGLLQRPADLALVIYLILAGFFTLFRGLVVLDCPTDACFVYIYQYEPYLRDPVAYPKVQMLMYMFYV LPFCGLAAYALTFPGCSWLPDWALVFAGGIGQAQFSHMGASMHLRTPFTYRVPEDTWGCFFVCNLLYAL GPHLLAYRCLQWPAFFHQPPPSDPLALHKKQH

人源TM6SF2基因在NCBI的gene ID为53345，编码区序列如下：

atggacatcccgccgctggccggcaagatcgcggcgctgtcgctgagcgccctcccggtgtcctacgcgctcaaccacgtctcggcgctctcgcaccccctgtgggtggcattgatgagcgccctaatcctgggtctg cttttcgtggcggtctacagcttgtcccatggcgaggtctcctatgacccactctatgctgtcttcgct gtcttcgccttcacctcggttgtggacctcatcatcgctcttcaggaagacagctatgtggtgggcttc atggagttctacaccaaggagggagagccatacctgcgcacagcgcacggagtcttcatctgctactgg gatggcactgttcactacctcctctacctggccatggccggcgccatctgcagaaggaagagataccgg aattttggactctactggctgggttccttcgccatgagcatcctggtgttccttacaggaaacattctt ggcaaatacagctccgagatcaggcctgccttcttcctcaccatcccctacctgctggtgccatgctgg gctggcatgaaggtcttcagccagccccgggcgctaacccgctgcaccgccaacatggtgcaagaggaa caaagaaagggactcctgcagcgtccggctgacctggcccttgtcatatatctcatccttgctggcttc ttcactctgttccggggcctggtggtgcttgattgccccacagatgcctgctttgtctatatctaccag tatgagccatacctgcgggaccctgtggcctaccctaaggtgcagatgctgatgtacatgttttatgtc ctgcctttctgcggcctggctgcctatgctctcaccttccctggttgctcctggcttccagactgggcc ttggtgtttgctggaggcatcggccaggcacagttctcgcacatgggggcttccatgcacctgcgcaca cccttcacctaccgtgtgcctgaggacacctggggctgcttcttcgtgtgcaatctgctgtatgcgctg ggcccccacctgctggcctaccgttgccttcagtggcccgcattcttccaccagccaccaccctccgaccccctagccctccacaagaagcagcattga

ERLIN1以及ERLIN2(ERLINs)的研究背景

内质网脂筏蛋白(ERLIN1，又名stomatin-prohibitin-flotillin-HflC/Kdomain-containing protein)1，以及它的同源蛋白ERLIN2是定位在内质网上的单次跨膜糖蛋白，它们共同组成面向内质网腔的异源多聚体，同时这一异源多聚体还介导着内质网关联的1,4,5-三磷酸受体(inositol 1,4,5triphosphate receptors， IP3)和3-羟基-3-甲基戊二酰辅酶A还原酶 (3-hydroxy-3-methylglutaryl-coenzymeA，HMG-CoA)的降解，而这两个蛋白是胆固醇合成通路的限速酶(Duncan T.Browman,2006；Jo et al.，2011；Pearce et al.,2009)。ERLIN1和ERLIN2还抑制脂质调控元件结合蛋白(sterolregulatory element-binding proteins，SREBP)的激活，在内质网高胆固醇条件下结合并将SREBP滞留在内质网上抑制其向高尔基体的转运，封闭蛋白复合体的激活来抑制胆固醇的生成(Huber et al.，2013)。值得注意的是， ERLIN1(re2862954)被认为可以保护人们免于脂肪肝和肝脏炎症(Edelman et al., 2015；Feitosa et al.,2013)。但是ERLINs对血脂代谢的影响仍然是未知的。

人源ERLIN1长度为348个氨基酸，分子量为39，171Da。，其蛋白序列如下：

MNMTQARVLVAAVVGLVAVLLYASIHKIEEGHLAVYYRGGALLTSPSGPGYHIMLPFITTFRSVQTTLQTDEVKNVPCGTSGGVMIYIDRIEVVNMLAPYAVFDIVRNYTADYDKTLIFNKIHHELNQFCSAHTLQEV YIELFDQIDENLKQALQKDLNLMAPGLTIQAVRVTKPKIPEAIRRNFELMEAEKTKLLIAAQKQKVVEK EAETERKKAVIEAEKIAQVAKIRFQQKVMEKETEKRISEIEDAAFLAREKAKADAEYYAAHKYATSNKH KLTPEYLELKKYQAIASNSKIYFGSNIPNMFVDSSCALKYSDIRTGRESSLPSKEALEPSGENVIQNKE STG

人源ERLIN1基因在NCBI的gene ID为10613，编码区序列如下：

atgaatatgactcaagcccgggttctggtggctgcagtggtggggttggtggctgtcctgctctacgcctccatccacaagattgaggagggccatctggctgtgtactacaggggaggagctttactaactagcccc agtggaccaggctatcatatcatgttgcctttcattactacgttcagatctgtgcagacaacactacaa actgatgaagttaaaaatgtgccttgtggaacaagtggtggggtcatgatctatattgaccgaatagaa gtggttaatatgttggctccttatgcagtgtttgatatcgtgaggaactatactgcagattatgacaag accttaatcttcaataaaatccaccatgagctgaaccagttctgcagtgcccacacacttcaggaagtt tacattgaattgtttgatcaaatagatgaaaacctgaagcaagctctgcagaaagacttaaacctcatg gccccaggtctcactatacaggctgtgcgtgttacaaaacccaaaatcccagaagccataagaagaaat tttgagttaatggaggctgagaagacaaaactccttatagctgcacagaaacaaaaggttgtggaaaaa gaagctgagacagagaggaaaaaggcagttatagaagcagagaagattgcacaagtggcaaaaattcgg tttcagcagaaagtgatggaaaaagaaactgaaaagcgcatttctgaaatcgaagatgctgcattcctg gcccgagagaaagcgaaagcagatgctgaatattatgctgcacacaaatatgccacctcaaacaagcac aagttgaccccggaatatctggagctcaaaaagtaccaggccattgcttctaacagtaagatctatttt ggcagcaacatccctaacatgttcgtggactcctcatgtgctttgaaatattcagatattaggactgga agagaaagctcactcccctctaaggaggctcttgaaccctctggagagaacgtcatccaaaacaaagagagcacaggttga

人源ERLIN2长度为339个氨基酸，分子量为37，840Da。，其蛋白序列如下：

MAQLGAVVAVASSFFCASLFSAVHKIEEGHIGVYYRGGALLTSTSGPGFHLMLPFITSYKSVQTTLQTDEVKNVPCGTSGGVMIYFDRIEVVNFLVPNAVYDIVKNYTADYDKALIFNKIHHELNQFCSVHTLQEVYI ELFDQIDENLKLALQQDLTSMAPGLVIQAVRVTKPNIPEAIRRNYELMESEKTKLLIAAQKQKVVEKEA ETERKKALIEAEKVAQVAEITYGQKVMEKETEKKISEIEDAAFLAREKAKADAECYTAMKIAEANKLKL TPEYLQLMKYKAIASNSKIYFGKDIPNMFMDSAGSVSKQFEGLADKLSFGLEDEPLETATKEN

人源ERLIN2基因在NCBI的gene ID为11160，编码区序列如下：

Atggctcagttgggagcagttgtggctgtggcttccagtttcttttgtgcatctctcttctcagctgtgcacaagatagaagagggacatattggggtatattacagaggcggtgccctgctgacttcgaccagcggc cctggtttccatctcatgctccctttcatcacatcatataagtctgtgcagaccacactccagacagat gaggtgaagaatgtaccttgtgggactagtggtggtgtgatgatctactttgacagaattgaagtggtg aacttcctggtcccgaacgcagtgtatgatatagtgaagaactatactgctgactatgacaaggccctc atcttcaacaagatccaccacgaactgaaccagttctgcagtgtgcacacgcttcaagaggtctacatt gagctgtttgatcagattgatgaaaatctcaaactggctttgcaacaggacctgacctccatggcccct gggctggtcattcaagctgtgcgggtaacaaagcccaacataccagaggcaatccgcagaaactacgag ttgatggaaagtgagaagacaaagcttctcattgccgcccagaaacagaaggtggtggaaaaggaagca gagacagagcggaagaaggcgctcattgaggcagaaaaagtggcccaggtggctgagatcacctacggg cagaaggtgatggagaaggagactgagaagaagatttcagaaattgaagatgctgcatttctggcccgg gagaaggcaaaggcagatgctgagtgctacactgctatgaaaatagccgaagccaataagctgaagcta acccctgaatatctgcagctgatgaagtacaaggccattgcttccaacagcaagatttactttggcaaa gacattcctaacatgttcatggactctgcgggcagtgtgagcaagcagtttgaggggctagctgacaag ctaagctttggcttagaagatgaacccttggagacggccactaaggagaattga

发明内容

针对现有技术存在的不足，本发明提供了一种跨膜蛋白6家族成员 2(TM6SF2)蛋白、内质网脂筏蛋白1和2(ERLIN1，ERLIN2)的用途。

为实现上述目的，本发明的采用以下技术方案：

一种跨膜蛋白6家族成员2，即TM6SF2蛋白，或其编码基因的拮抗剂或抑制剂的用途，其中所述拮抗剂或抑制剂用于制备降低高血脂并改善代谢综合征的药物。

优选地，其中所述拮抗剂或抑制剂选自下述物质：

降低TM6SF2蛋白的表达水平的物质；

阻断TM6SF2与APOB结合的物质；

和/或降低TM6SF2编码基因的表达的物质。

优选地，其中所述拮抗剂或抑制剂选自：针对TM6SF2蛋白编码基因的反义核酸。

优选地，其用于治疗下述疾病：降低血清甘油三酯水平、降低胆固醇和肥胖。

一种内质网脂筏蛋白1和2，即ERLIN1，ERLIN2蛋白，或其编码基因的拮抗剂或抑制剂的用途，其中所述拮抗剂或抑制剂用于制备降低高血脂并改善代谢综合征的药物。

优选地，其中所述拮抗剂或抑制剂选自下述物质：

降低ERLIN1和ERLIN2蛋白的表达水平的物质；

阻断ERLIN1和ERLIN2与APOB结合的物质；

和/或降低ERLIN1和ERLIN2编码基因的表达的物质。

优选地，其中所述拮抗剂或抑制剂选自：针对ERLIN1和ERLIN2蛋白编码基因的反义核酸。

优选地，其用于治疗下述疾病：降低血清甘油三酯水平、降低胆固醇和肥胖。

与现有技术相比，本发明具有以下优点和有益效果：

本发明能有效的促进血液中甘油三酯和胆固醇水平下降。本发明通过研究TM6SF2再脂质代谢调控中的作用，进而提供了TM6SF2、ERLIN1和ERLIN2作为降低血脂并改善代谢综合征的治疗靶点的新用途。

附图说明

图1.利用多步亲和纯化技术偶联串联质谱技术筛选TM6SF2相互作用蛋白；

图2.TM6SF2与ERLIN1，ERLIN2以及APOB48相互结合；

图3.Tm6sf2-/-小鼠的生理生化表型；

图4.肝脏特异性敲降Tm6sf2或Erlins引起肝脏脂滴的积累并且降低血液中脂质水平。

具体实施方式

为了便于本领域普通技术人员理解和实施本发明，下面结合附图对本发明作进一步的详细描述，应当理解，此处所描述的实施示例仅用于说明和解释本发明，并不用于限定本发明。

如图1所示，利用多步亲和纯化技术偶联串联质谱技术筛选TM6SF2相互作用蛋白

A.多步亲和纯化偶联质谱分析方法如图所示；

B.将实验组以及对照组多步亲和纯化(TAP)后部分浓缩液加入4-20％梯度胶，跑胶后利用考马斯亮蓝染色蛋白质，其中结合下来的TM6SF2-TAP蛋白条带如图所示；

C.将质谱分析得到的候选蛋白进行筛选，得到的进行下一步实验的蛋白基因列表，列表中蛋白名称按照丰度的由高到低排列。

如图2所示，TM6SF2与ERLIN1，ERLIN2以及APOB48相互结合

A.APOB48与TM6SF2直接结合但并不与ERLIN1或ERLIN2紧密结合.如图所示将相应质粒转染进入Huh7细胞，培养48小时后，收集并裂解细胞，将细胞裂解液离心取上清，使用交联抗FLAG抗体的琼脂糖珠子结合沉淀 APOB48，除去上清后多次清洗琼脂糖珠去除非特异性沉淀，随后将琼脂糖珠子上的蛋白95摄氏度高温温浴洗脱，含APOB48以及相互结合蛋白的洗脱液与4×loading buffer以及HMGCR蛋白促溶缓冲液混合，37摄氏度温浴后用于免疫印迹分析(WB)。

B.TM6SF2与ERLIN1(B)，ERLIN2(C)直接结合。如图所示转染Huh7细胞相应质粒，培养48小时后，收集并裂解细胞，细胞裂解液加入偶联抗MYC抗体的琼脂糖珠子沉淀TM6Sf2，弃去上清后95摄氏度高温温浴洗脱，含有 TM6SF2以及结合蛋白的洗脱液加入4×loadingbuffer以及HMGCR促溶缓冲液混合，37摄氏度温浴后进行免疫印迹分析(WB)。

C.同B。

D.TM6SF2通过两个内质网腔内区段与APOB48接触。如图所示转染Huh7细胞相应质粒，用偶联有抗FLAG抗体的琼脂糖珠子沉淀APOB48，其余步骤同A 所述。

E.ERLINs-TM6SF2-APOB蛋白复合体的示意图。

如图3所示，Tm6sf2-/-小鼠的生理生化表型

A.8周大小的Tm6sf2敲除小鼠以及同样大小的野生型小鼠在同笼中喂食8周普通饮食后，进行下一步实验。首先小鼠被饥饿4小时，灌流后的小鼠肝脏加入磁珠进行破碎，提取肝脏全蛋白，然后添加蛋白质电泳缓冲液以及HMGCR 促溶缓冲液37摄氏度温浴30分钟，处理完毕后进行免疫印迹分析。B图显示了APOB，TM6SF2、ERLIN1以及ERLIN2在Tm6sf2敲除小鼠以及野生型小鼠中肝脏内的蛋白质含量。其中网格蛋白重链蛋白作为内参蛋白显示。

B.如图所示为Tm6sf2敲除小鼠以及野生型小鼠之间的体重差异。

C.小鼠饥饿4小时后眼眶取血，血浆4摄氏度低温静置后离心得到血清，利用试剂盒法测定血清中总胆固醇以及总甘油三酯的含量。

D.通过快速高效液相色谱处理Tm6sf2敲除小鼠以及野生型小鼠的血清，我们分离了不同密度的脂蛋白(高密度脂蛋白，低密度脂蛋白以及极低密度脂蛋白)，然后利用试剂盒法我们测定了不同密度的脂蛋白中胆固醇的含量。如图所示， Tm6sf2敲除小鼠的不同密度脂蛋白中胆固醇含量均低于野生型小鼠。

E.将灌流后的Tm6sf2敲除小鼠以及野生型小鼠的肝脏，分别经过4％多聚甲醛固定，30％蔗糖溶液脱水，包裹OCT冰冻后切片，得到10μm厚度的肝脏组织冰冻切片。利用油红O标记脂滴(红色)以及苏木素标记细胞核(蓝色)，使用OLYPUS显微镜拍摄得到小鼠肝脏中脂滴情况，右边为黑色方框內视野放大后图片。主比例尺为：20μm，副比例尺为：10μm。

如图4所示，肝脏特异性敲降Tm6sf2或Erlins引起肝脏脂滴的积累并且降低血液中脂质水平

将制备好的腺病毒相关病毒，AAV8-shCtr，AAV8-shTm6sf2以及AAV-shErlins(AAV8-shErlin1以及AAV8-shErlin2)通过尾静脉注射手段注射进入8周大的 Balb/c雄性小鼠体内，病毒感染两周后处理小鼠。

A.将腺病毒相关病毒感染小鼠的肝脏利用组织破碎仪破碎后，收取全蛋白进行免疫印迹分析。图中显示了APOB，TM6SF2，ERLIN1以及ERLIN2分别在 AAV8-shCtr，AAV8-shTm6sf2以及AAV-shErlins感染小鼠的肝脏中的蛋白质含量，将网格蛋白重链蛋白作为内参蛋白对照组。

B.如图所示为腺病毒相关病毒感染两周后小鼠饥饿4小时的体重参数；

C.收取腺病毒相关病毒感染小鼠的血浆，4摄氏度低温静置后离心得到血清，如图所示为腺病毒相关病毒感染小鼠体内血清中天冬氨酸转氨酶的含量；

D.如图所示为腺病毒相关病毒感染小鼠血清中总胆固醇以及甘油三酯的含量；

E.提取腺病毒相关病毒感染小鼠的肝脏中的脂质，使用酒精溶解后测定其中胆固醇以及甘油三酯的含量，如图所示将其换算为肝脏中每克重量中脂质的含量；

F.将灌流后的腺病毒相关病毒感染小鼠的肝脏，分别经过4％多聚甲醛固定，30％蔗糖溶液脱水，包裹OCT冰冻切片后得到10微米厚度的肝脏组织冰冻切片。利用苏木素标记细胞核，伊红标记细胞质，使用OLYPUS显微镜拍摄确定肝脏的生理状态，同时照片中的微小圆形空洞为肝脏中未染上色的脂滴；利用油红O标记脂滴(红色)以及苏木素标记细胞核(蓝色)，使用OLYPUS显微镜拍摄得到小鼠肝脏脂滴情况，右边为黑色方框內视野放大后图片。比例尺为： 20μm。

我们首先通过多步亲和纯化，得到背景相对更低的TM6SF2结合蛋白溶液；然后通过串联质谱联用，我们发现了一系列与TM6SF2相互作用的候选蛋白，通过已知的基因功能以及蛋白定位等因素筛选我们选择了列表中的一部分基因进入下一步实验；将筛选后的列表中基因在Huh7细胞中分别敲除，我们发现了 ERLIN1、ERLIN2以及载脂蛋白B与TM6SF2表型上的一致性；紧接着的敲低恢复实验我们验证了三个蛋白在TM6SF2调节脂质的过程中起到一定的作用。然后我们证明了ERLIN1以及ERLIN2是TM6SF2的相互结合蛋白，同时TM6SF2也通过两个内质网腔环区段结合载脂蛋白B。ERLINs-TM6SF2-APOB复合物促进载脂蛋白 B的稳定。而缺乏TM6SF2或ERLINs可降低载脂蛋白B的蛋白量，并且降低血液中的脂质水平。载脂蛋白B的这种不稳定性可能最终导致了其他研究中报道的载脂蛋白颗粒的脂质沉积或分泌缺陷。此外，我们发现，虽然ERLINs不直接与载脂蛋白B结合，并且ERLINs的过度表达对载脂蛋白B在细胞内的蛋白含量水平没有影响，但与TM6SF2表型类似的是ERLINs的耗尽对载脂蛋白B的蛋白含量存在着显著影响。这些结果共同表明，脂蛋白分泌过程最佳的稳定活性可能需要特定比例的APOB、TM6SF2和ERLINs。

已经证明，外源性表达的TM6SF2通过激活Kandutsch-Russell途径中的最后一种酶，7-脱氢胆固醇还原酶(DHCR7)来增加胆固醇生物合成。然而，缺乏TM6SF2 的小鼠在肝脏中的胆固醇含量或胆固醇生成基因表达没有变化，但在人类的 E167K携带者中肝脏胆固醇酯含量增加。尽管在生理条件下TM6SF2在胆固醇代谢中的作用值得进一步研究，ERLINs可以通过抑制SREBP-2的加工和促进3-羟基-3-甲基戊二酰辅酶a还原酶的降解来减少胆固醇的产生。由于ERLINs在内质网中定位在脂筏区域，我们假设ERLINs将TM6SF2和相关的载脂蛋白B募集到富含固醇的ER膜微区，新合成的胆固醇酯和甘油三酯就可以添加到新生的载脂蛋白载脂蛋白B中。

综上所述，本文通过多步亲和纯化实验和质谱联用，发现ERLIN1和ERLIN2 是TM6SF2的相互作用蛋白质。TM6SF2通过结合和稳定载脂蛋白B调节载脂蛋白 B代谢；当敲除或者敲降TM6SF2、ERLIN1和ERLIN2时能有效的促进血液中甘油三酯和胆固醇水平下降。本发明通过研究TM6SF2再脂质代谢调控中的作用，进而提供了TM6SF2、ERLIN1和ERLIN2作为降低血脂并改善代谢综合征的治疗靶点的新用途。

参考文献

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应当理解的是，上述针对较佳实施例的描述较为详细，并不能因此而认为是对本发明专利保护范围的限制，本领域的普通技术人员在本发明的启示下，在不脱离本发明权利要求所保护的范围情况下，还可以做出替换或变形，均落入本发明的保护范围之内，本发明的请求保护范围应以所附权利要求为准。

Claims (8)

1.一种跨膜蛋白6家族成员2，即TM6SF2蛋白，或其编码基因的拮抗剂或抑制剂的用途，其特征在于，其中所述拮抗剂或抑制剂用于制备降低高血脂并改善代谢综合征的药物。

2.如权利要求1所述跨膜蛋白6家族成员2，即TM6SF2蛋白，或其编码基因的拮抗剂或抑制剂的用途，其特征在于，其中所述拮抗剂或抑制剂选自下述物质：

降低TM6SF2蛋白的表达水平的物质；

阻断TM6SF2与APOB结合的物质；

和/或降低TM6SF2编码基因的表达的物质。

3.如权利要求2所述跨膜蛋白6家族成员2，即TM6SF2蛋白，或其编码基因的拮抗剂或抑制剂的用途，其特征在于，其中所述拮抗剂或抑制剂选自：针对TM6SF2蛋白编码基因的反义核酸。

4.如权利要求1所述跨膜蛋白6家族成员2，即TM6SF2蛋白，或其编码基因的拮抗剂或抑制剂的用途，其特征在于，其用于治疗下述疾病：降低血清甘油三酯水平、降低胆固醇和肥胖。

5.一种内质网脂筏蛋白1和2，即ERLIN1，ERLIN2蛋白，或其编码基因的拮抗剂或抑制剂的用途，其特征在于，其中所述拮抗剂或抑制剂用于制备降低高血脂并改善代谢综合征的药物。

6.如权利要求5所述内质网脂筏蛋白1和2，即ERLIN1，ERLIN2蛋白，或其编码基因的拮抗剂或抑制剂的用途，其特征在于，其中所述拮抗剂或抑制剂选自下述物质：

降低ERLIN1和ERLIN2蛋白的表达水平的物质；

阻断ERLIN1和ERLIN2与APOB结合的物质；

和/或降低ERLIN1和ERLIN2编码基因的表达的物质。

7.如权利要求6所述内质网脂筏蛋白1和2，即ERLIN1，ERLIN2蛋白，或其编码基因的拮抗剂或抑制剂的用途，其特征在于，其中所述拮抗剂或抑制剂选自：针对ERLIN1和ERLIN2蛋白编码基因的反义核酸。

8.如权利要求5所述内质网脂筏蛋白1和2，即ERLIN1，ERLIN2蛋白，或其编码基因的拮抗剂或抑制剂的用途，其特征在于，其用于治疗下述疾病：

降低血清甘油三酯水平、降低胆固醇和肥胖。

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