CN113316589A - 抗lag3抗体的给药方案以及与抗pd-1抗体组合用于治疗癌症的组合疗法 - Google Patents

抗lag3抗体的给药方案以及与抗pd-1抗体组合用于治疗癌症的组合疗法 Download PDF

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Abstract

本发明涉及可用于治疗癌症的抗LAG3抗体的给药方案。具体而言，本发明涉及组合疗法中的给药方案，其包括施用程序性死亡1蛋白(PD‑1)或程序性死亡配体1(PD‑L1)的抗体和淋巴细胞‑活化基因3(LAG3)的抗体。本发明还提供了用于治疗患者中的癌症的方法，其包括向所述患者施用抗LAG3抗体和抗PD‑1抗体，其中所述患者的肿瘤组织切片是PD‑L1表达阳性的和任选地LAG3表达阳性的。

Description

抗LAG3抗体的给药方案以及与抗PD-1抗体组合用于治疗癌症 的组合疗法
发明领域
本发明涉及可用于治疗癌症的抗LAG3抗体的给药方案。具体而言，本发明涉及组合疗法中的给药方案，其包括施用程序性死亡1蛋白(PD-1)或程序性死亡配体1(PD-L1)的抗体和淋巴细胞-活化基因3(LAG3)的抗体。本发明还提供了用于治疗患者中的癌症的方法，其包括向所述患者施用抗LAG3抗体和抗PD-1抗体，其中所述患者的肿瘤组织切片是PD-L1表达阳性的，任选地是LAG3表达阳性的。
发明背景
PD-1被认为是在免疫调节和外周耐受性的维持中重要的分子。PD-1适度表达于幼稚T、B和NKT细胞上并通过在淋巴细胞、单核细胞和骨髓细胞上的T/B细胞受体信号传导而上调(1)。
两种PD-1的已知配体，PD-L1 (B7-H1)和PD-L2 (B7-DC)，在各种组织中产生的人类癌症中表达。在例如卵巢癌、肾癌、结肠直肠癌、胰腺癌、肝癌和黑色素瘤的大样品集合中，显示PD-L1表达与预后不良和总体存活减少相关，而不管后续的治疗(2-13)。类似地，在肿瘤浸润淋巴细胞上的PD-1表达被发现标记在乳腺癌和黑色素瘤中的功能障碍性T细胞(4-15)并与肾癌的预后不良相关(16)。因此，已提出表达PD-L1的肿瘤细胞与表达PD-1的T细胞相互作用，以减轻T细胞活化并逃避免疫监视，由此造成针对肿瘤的免疫应答受损。
抑制PD-1及其配体PD-L1和PD-L2中的一种或两种之间的相互作用的几种单克隆抗体已被批准用于治疗癌症。派姆单抗是一种有效的人源化免疫球蛋白G4 (IgG4) mAb，其具有结合程序性细胞死亡1 (PD-1)受体的高特异性，因此抑制其与程序性细胞死亡配体1(PD-L1)和程序性细胞死亡配体2 (PD-L2)的相互作用。基于临床前体外数据，派姆单抗对PD-1具有高亲和力和有效的受体阻断活性。Keytruda® (派姆单抗)被指示用于治疗患者的多种适应症。
淋巴细胞-活化基因3 (LAG3)是一种抑制性免疫调节受体，其调节效应T细胞内稳态、增殖和活化，并在调节性T细胞(Treg)的抑制活性中具有作用。LAG3在活化的CD8+和CD4+ T细胞、Treg和Tr1调节性T-细胞群体以及自然杀伤细胞和耐受原性浆细胞样树突状细胞的子集上表达。由于提出的其对效应T细胞和Treg两者的作用，LAG3是几种免疫检查点分子之一，其中两个细胞群体的同时阻断具有增强抗肿瘤免疫力的潜力。
LAG3在结构上与分化簇(CD) 4和免疫球蛋白(Ig)超家族的成员相关。像CD4一样，其配体是主要组织相容性复合体(MHC) II类分子。与其配体的相互作用导致二聚化和信号转导，导致T-细胞活化改变。T-细胞活化后，LAG3在细胞表面上瞬时表达。大比例的LAG3分子在细胞内储存物中发现，并且可以在T-细胞活化后迅速易位至细胞膜。LAG3表达通过细胞外切割在细胞表面调节，以得到LAG3的可溶形式(sLAG 3)，其可以在血清中检测到。LAG3的表达受到严格调节，并且代表了一种抵抗不受控制的T-细胞活性的自我限制机制。抗LAG3抗体已经描述于WO2016/028672中。
选择抗LAG3抗体单一疗法或与抗PD-1或抗PD-L1疗法的组合疗法的剂量方案取决于几个因素，包括实体的血清或组织周转率，症状水平，实体的免疫原性，抗药物抗体终点，以及所治疗个体中的靶标细胞、组织或器官的可及性以及安全性。抗药物抗体的形成可以潜在地混淆治疗剂量下的药物暴露，并为随后的输注相关毒性做好准备。此外，抗LAG3和/或抗PD-1/抗PD-L1治疗可以导致免疫刺激和细胞因子释放的可能性，这影响安全性。
发明概述
本发明提供了用于治疗患者中的癌症的方法，其包括施用7-1200 mg的抗LAG3抗体Ab6。在一个实施方案中，施用200-800 mg的抗LAG3抗体Ab6。在另一个实施方案中，施用800 mg的抗LAG3抗体Ab6。在一个实施方案中，所述方法任选地包括与抗PD-1或抗PD-L1抗体共同施用。在一个实施方案中，所述抗LAG3抗体和抗PD-1抗体是共配制的。在另一个实施方案中，所述患者的肿瘤组织切片是PD-L1表达阳性的。在一个进一步实施方案中，所述患者的肿瘤细胞是PD-L1表达阳性的。在一个实施方案中，所述抗PD-1抗体阻断PD-1与PD-L1和PD-L2的结合。本发明还提供了药物组合物，其包含7-1200 mg抗LAG3抗体Ab6或Ab6变体和200 mg派姆单抗或派姆单抗变体。在一个实施方案中，所述药物组合物包含800 mg抗LAG3抗体Ab6或Ab6变体和200 mg派姆单抗或派姆单抗变体。
本发明还提供了用于治疗患者中的非-MSI-H结肠直肠癌、胃癌或头颈鳞状细胞癌的方法，其包括向所述患者施用抗LAG3抗体和抗PD-1抗体，其中所述患者的肿瘤组织切片是PD-L1表达阳性的和任选地LAG3表达阳性的。
附图简述
图1 用21 mg抗LAG3抗体Ab6和派姆单抗治疗之前(左)和之后(右)的具有非-MSI-H结肠直肠癌的患者的CT扫描。该患者接受先前5线化疗，没有接受先前的抗PD-1或抗PD-L1疗法。该患者具有部分应答，其中肿瘤体积减少45%。肺部病灶和淋巴结中的肿瘤体积也减小，并且骶前质量稳定。应答持续13.5个月。
图2 用7 mg抗LAG3抗体Ab6和派姆单抗治疗之前(左)和之后(右)的具有肾细胞癌和至肺和骨的癌转移的60岁男性的CT扫描。该患者接受先前的3线疗法，包括先前的抗PD-1疗法。该患者在9周时具有部分应答，其中肿瘤体积减小49%。在所有可见的疾病部位(包括肺和多个淋巴结)处观察到肿瘤体积减小。应答在疾病进展之前持续15个月。
图3 基于结肠直肠癌扩展群组(部分B)中的每个RECIST 1.1 FAS群体使用PD-L1IHC组合阳性评分(CPS)的研究者评价，具有与基线相比的最佳靶病灶变化的受试者的瀑布图。
每个条代表一个个体受试者。与基线(Y-轴)相比肿瘤大小减小大于30%被认为是应答；30%减小和20%增加之间的变化被认为是稳定疾病；大于20%增加的变化被认为是进展性疾病。指示CPS>= 1或<1的肿瘤样品。不能解释具有少于100个肿瘤细胞的肿瘤样品。
图4 基于结肠直肠癌扩展群组(部分B)中的每个RECIST 1.1 FAS群体使用LAG3IHC CPS-样% LAG3阳性细胞评分系统的研究者评价，具有与基线相比的最佳靶病灶变化的受试者的瀑布图。
每个条代表一个个体受试者。与基线(Y-轴)相比肿瘤大小减小大于30%被认为是应答；30%减小和20%增加之间的变化被认为是稳定疾病；大于20%增加的变化被认为是进展性疾病。指示CPS>=1或<1的肿瘤样品。不能解释具有少于100个肿瘤细胞的肿瘤样品。
图5 在I期研究的周期1、部分A中7 mg至700 mg的静脉内剂量后的Ab6的血清浓度。在标称时间绘制每个剂量的算术平均血清浓度。
图6 在I期研究的周期1、部分A中7 mg至700 mg的静脉内剂量后的总可溶性LAG-3的血清浓度。在标称时间绘制的总可溶性LAG-3的算术平均值。
图7A-B显示，对于400 mg Q6W的稳态下的派姆单抗Cmax位于2 mg/kg和200 mgQ3W至10 mg/kg Q2W的范围内。7A：对于2 mg/kg和200 mg Q3W，在稳态的派姆单抗Cmax。7B：对于400 mg Q6W和10 mg/kg Q2W，在稳态的派姆单抗Cmax。
图8显示，相对于2 mg/kg Q3W和200 mg Q3W，对于400 mg Q6W的稳态下的派姆单抗暴露(Cavg和Cmin)是相似的。
图9A-B显示与Q3W, 200 mg平坦给药方案(上)和Q3W, 2 mg/kg基于重量的给药方案(下)相比，400 mg Q6W给药方案的稳态下的派姆单抗药代动力学概况。9A显示对数标尺浓度，且9B显示线性标尺浓度。
图10 在线性标度上在周期1中7 mg至700 mg的静脉内剂量后的Ab6的血清浓度，其中与图5相比进行额外患者取样。在标称时间绘制Ab6血清浓度的算术平均值。
图11 在对数标度上在周期1中7 mg至700 mg的静脉内剂量后的Ab6的血清浓度，其中与图5相比进行额外患者取样。在标称时间绘制Ab6血清浓度的算术平均值。
图12 周期1中7 mg至700 mg的静脉内剂量后的总可溶性LAG3的血清浓度，其中与图6相比进行额外患者取样。在标称时间绘制总可溶性LAG3血清浓度的算术平均值。
图13 周期1中对应于800 mg剂量的预测Ab6血清浓度-时间概况，其与对于700 mg剂量观察到的浓度重叠。实心标记代表来自I期研究的在700 mg观察到的Ab6血清浓度。阴影区域代表800 mg剂量的预测浓度的第2.5百分位数和第97.5百分位数。预期来自周期1的Ab6暴露代表随后的治疗周期。
图14 作为剂量的函数的预测的Ab6暴露(AUC，C谷，Cmax)，其显示700 mg和800 mg剂量之间的大量重叠的暴露。直线：中值；方框：第25百分位数和第75百分位数，须线：第5百分位数和第95百分位数。
图15 在第21天的Ab6血清C谷的方框形图，其显示PK变异性。
图16 基于胃癌扩展群组(部分B)中的每个RECIST 1.1 FAS群体使用PD-L1 IHC组合阳性评分(CPS)的研究者评价，具有与基线相比的最佳靶病灶变化的受试者的瀑布图。
每个条代表一个个体受试者。与基线(Y-轴)相比肿瘤大小减小大于30%被认为是应答；30%减小和20%增加之间的变化被认为是稳定疾病；大于20%增加的变化被认为是进展性疾病。指示CPS>=1或<1的肿瘤样品。不能解释具有少于100个肿瘤细胞的肿瘤样品。
图17 基于胃癌扩展群组(部分B)中的每个RECIST 1.1 FAS群体使用LAG3 IHCCPS-样% LAG3阳性细胞评分方法的研究者评价，具有与基线相比的最佳靶病灶变化的受试者的瀑布图。
每个条代表一个个体受试者。与基线(Y-轴)相比肿瘤大小减小大于30%被认为是应答；30%减小和20%增加之间的变化被认为是稳定疾病；大于20%增加的变化被认为是进展性疾病。指示CPS>=1或<1的肿瘤样品。不能解释具有少于100个肿瘤细胞的肿瘤样品。
图18 基于HSNCC PD-L1未治疗癌症扩展群组(部分B)中的每个RECIST 1.1 FAS群体使用PD-L1 IHC TPS+MIDS评分系统的研究者评价，具有与基线相比的最佳靶病灶变化的受试者的瀑布图。
每个条代表一个个体受试者。与基线(Y-轴)相比肿瘤大小减小大于30%被认为是应答；30%减小和20%增加之间的变化被认为是稳定疾病；大于20%增加的变化被认为是进展性疾病。指示CPS>=1或<1的肿瘤样品。不能解释具有少于100个肿瘤细胞的肿瘤样品。
图19 基于HSNCC PD-L1未治疗癌症扩展群组(部分B)中的每个RECIST 1.1 FAS群体使用LAG3 IHC %LAG3阳性细胞评分系统的研究者评价，具有与基线相比的最佳靶病灶变化的受试者的瀑布图。
每个条代表一个个体受试者。与基线(Y-轴)相比肿瘤大小减小大于30%被认为是应答；30%减小和20%增加之间的变化被认为是稳定疾病；大于20%增加的变化被认为是进展性疾病。指示CPS>=1或<1的肿瘤样品。不能解释具有少于100个肿瘤细胞的肿瘤样品。
发明详述
缩写. 贯穿本发明的详述和实施例，将使用以下缩写：
BOR 最佳总应答
BID 每天2次各一剂
CBR 临床受益率
CDR 互补决定区
CHO 中国仓鼠卵巢
CR 完全应答
DCR 疾病控制率
DFS 无疾病存活
DLT 剂量限制毒性
DOR 应答的持续时间
DSDR 持久的稳定疾病率
FFPE 福尔马林固定石蜡包埋的
FR 框架区
IgG 免疫球蛋白G
IHC 免疫组织化学或免疫组织化学的
irRC 免疫相关的应答标准
IV 静脉内
MTD 最大耐受剂量
NCBI 美国国家生物技术信息中心
NCI 美国国家癌症研究所
ORR 客观应答率
OS 总体存活
PD 进展性疾病
PD-1 程序性死亡1
PD-L1 程序性细胞死亡1配体1
PD-L2 程序性细胞死亡1配体2
PFS 无进展存活
PR 部分应答
Q2W 每两周一剂
Q3W 每三周一剂
QD 每天一剂
RECIST 在实体瘤中的应答评估标准
SD 稳定疾病
VH 免疫球蛋白重链可变区
VK 免疫球蛋白κ轻链可变区。
I. 定义
为了可以更容易地理解本发明，下文具体定义了某些技术和科学术语。除非在本文件中别处特别地定义，否则本文使用的所有其他的技术和科学术语具有本发明所属领域普通技术人员通常理解的意义。
如本文(包括随附权利要求)所用，除非上下文以其他方式清楚地指示，否则词语的单数形式(诸如“一个/种(a)”、“一个/种(an)”和“该/所述(the)”)包括其相应多个指示物。
如本文所用，“Ab6变体”意指这样的单克隆抗体：除了具有在位于轻链CDR之外的位置处的3、2或1个保守氨基酸取代和在位于重链CDR之外的6、5、4、3、2或1个保守氨基酸取代(例如，所述变体位置位于FR区域或恒定区中，且任选地具有重链的C-末端赖氨酸残基的缺失)以外，所述单克隆抗体包含与Ab6 (如下和WO2016028672(其以其整体通过引用并入)中所述)中的那些基本上相同的重链和轻链序列。换而言之，Ab6和Ab6变体包含相同的CDR序列，但是由于具有分别在它们的全长轻链和重链序列中的不超过3个或6个其他位置处的保守氨基酸取代而彼此不同。Ab6变体就以下特性而言与Ab6基本上相同：对人LAG3的结合亲和力和阻断人LAG3与人II类MHC的结合的能力。
“施用”在其应用至动物、人、实验受试者、细胞、组织、器官或生物流体时，是指外源性药物、治疗剂、诊断剂或组合物与动物、人、受试者、细胞、组织、器官或生物流体的接触。细胞的处理包括试剂与细胞的接触，以及试剂与流体的接触，其中所述流体与细胞发生接触。术语“受试者”包括任何生物体，优选动物，更优选哺乳动物(例如，大鼠、小鼠、狗、猫、兔)，且最优选人。
如本文所用，术语"抗体"是指表现出期望的生物或结合活性的任何形式的抗体。因此，它在最广泛意义上使用并特别地覆盖，但不限于，单克隆抗体(包括全长单克隆抗体)、多克隆抗体、多特异性抗体(例如双特异性抗体)、人源化、完全人抗体、嵌合抗体和骆驼化单一结构域抗体。"亲本抗体"是在用于预期用途的抗体的修饰，诸如用作人治疗剂的抗体的人源化之前，通过使免疫系统暴露于抗原而获得的抗体。
通常，基本的抗体结构单元包含四聚体。每个四聚体包括两个相同的多肽链对，每对具有一条"轻"链(约25 kDa)和一条"重"链(约50-70 kDa)。每条链的氨基-末端部分包括主要负责抗原识别的约100-110或更多个氨基酸的可变区。重链的羧基-末端部分可限定主要地负责效应子功能的恒定区。通常，人轻链被分类为κ和λ轻链。此外，人重链通常被分类为μ、δ、γ、α或ε，且将抗体的同种型分别定义为IgM、IgD、IgG、IgA和IgE。在轻链和重链内，可变区和恒定区由约12或更多个氨基酸的"J"区连接，其中重链也包括约10个以上的氨基酸的"D"区。通常参见，Fundamental Immunology Ch. 7 (Paul, W., 编辑, 第2版. RavenPress, N.Y. (1989)。
每个轻/重链对的可变区形成抗体结合位点。因此，通常，完整的抗体具有两个结合位点。除了双功能或双特异性抗体中，两个结合位点通常是相同的。
通常，重链和轻链二者的可变结构域均包含3个高变区，也称为互补决定区(CDRs)，其位于相对保守的框架区(FR)内。CDR通常由框架区对齐，使得能够结合特定表位。通常，从N-末端至C-末端，轻链和重链可变结构域二者均包含FR1、CDR1、FR2、CDR2、FR3、CDR3和FR4。氨基酸分配到每个结构域通常根据以下的定义：Sequences of Proteins of Immunological Interest, Kabat,等人；National Institutes of Health, Bethesda,Md.；第5版；NIH Publ. No. 91-3242 (1991)；Kabat (1978) Adv. Prot. Chem. 32:1-75；Kabat,等人, (1977) J. Biol. Chem. 252:6609-6616；Chothia,等人, (1987) J Mol. Biol. 196:901-917或Chothia,等人, (1989) Nature 342:878-883。
如本文所用，除非另外指明，否则"抗体片段"或"抗原结合片段"是指抗体的抗原结合片段，即保留特异性结合由全长抗体结合的抗原的能力的抗体片段，例如，保留一个或多个CDR区的片段。抗体结合片段的实例包括，但不限于，Fab、Fab'、F(ab')2和Fv片段；双抗体；线性抗体；单链抗体分子，例如sc-Fv；纳米抗体和由抗体片段形成的多特异性抗体。
"特异性结合”特定靶蛋白的抗体是，与其他蛋白相比，表现出优先结合该靶标的抗体，但这种特异性不需要绝对结合特异性。如果抗体结合确定靶蛋白在样品中的存在，例如，不产生不期望的结果诸如假阳性，则该抗体被认为对其意欲靶标是"特异性的"。可用于本发明中的抗体或其结合片段，将以结合非-靶蛋白的亲和力的至少两倍，优选地至少10倍，更优选至少20-倍，和最优选至少100-倍的亲和力结合靶蛋白。如本文所用，据说抗体特异性结合包含给定氨基酸序列，例如成熟人PD-1或人PD-L1分子的氨基酸序列的多肽，如果它结合包含该序列的多肽、但不结合缺乏该序列的蛋白的话。
"嵌合抗体"是指这样的抗体，其中重链和/或轻链的部分与源自特定物种(例如人)或属于特定抗体类或亚类的抗体中的对应序列相同或同源，而所述链的其余部分与源自另一个物种(例如小鼠)或属于另一个抗体类或亚类的抗体中的对应序列相同或同源；以及此类抗体的片段，只要它们表现出期望的生物活性。
如本文所用，药剂诸如PD-1拮抗剂或LAG3拮抗剂的“共同施用”意指施用所述药剂以使其具有重叠的治疗活性，而不必意指将所述药剂同时施用于受试者。所述药剂在施用前可以物理组合也可以不物理组合。在一个实施方案中，将所述药剂同时或约同时施用于受试者。例如，包含在分开的小瓶中的抗PD-1抗体和抗LAG3药物产品，当在液体溶液中时，可以混合至相同的静脉内输注袋或注射装置中，并同时施用于患者。
如本文所用，"共配制的(Co-formulated)"或"共制剂(co-formulation)"或"共制剂(coformulation)"或"共配制的(coformulated)"是指至少两种不同的抗体或其抗原结合片段，其配制在一起并作为组合产品储存在单个小瓶或容器(例如注射装置)中，而不是单独配制和储存，且然后在施用前混合或分开施用。在一个实施方案中，所述共制剂含有两种不同的抗体或其抗原结合片段。
药代动力学的“稳态”是由于多个剂量而使药物浓度的任何积累已最大化，并且在施用的每次后续剂量后全身性药物暴露被认为是均匀的时间段；在派姆单抗的特定情况下，在施用~16周时和之后达到稳态。
AUCss、Cavg,ss和Cmin,ss是其施用后人中对药物(例如派姆单抗)的全身性暴露的药代动力学量度，并且通常被认为是药物效力的驱动力。AUCss和Cavg,ss代表给药间隔内的平均暴露量，但在单位方面不同。“Cmin,ss”代表在给药间隔结束时，即将在施用下一剂量之前观察到的最小或最低(谷值)药物浓度。
“Cmax,ss”是在其施用后不久观察到的最大或最高(峰值)药物浓度。在派姆单抗(其作为静脉内输注施用)的特定情况下，峰值浓度在输注结束后立即出现。Cmax,ss是通常被认为是安全的驱动力的度量。
“人抗体”是指仅包含人免疫球蛋白蛋白序列的抗体。人抗体可含有鼠碳水化合物链，如果在小鼠中，在小鼠细胞中，或在源自小鼠细胞的杂交瘤中产生的话。类似地，“小鼠抗体”或“大鼠抗体”是指仅分别包含小鼠或大鼠免疫球蛋白序列的抗体。
"人源化抗体"是指含有来自非-人(例如鼠)抗体以及人抗体的序列的抗体形式。此类抗体含有源自非-人免疫球蛋白的最小序列。通常，人源化抗体将基本上包含至少一个、且通常两个可变结构域中的全部，其中所有或基本上所有的高变环对应于非-人免疫球蛋白的那些，并且所有或基本上所有的FR区是人免疫球蛋白序列的那些。人源化抗体任选地还将包含至少一部分免疫球蛋白恒定区(Fc)，通常为人免疫球蛋白的恒定区。当有必要区分人源化抗体与亲本啮齿动物抗体时，在抗体克隆名称中添加前缀“hum”、“hu”或“h”。啮齿动物抗体的人源化形式将通常包含亲本啮齿动物抗体的相同的CDR序列，尽管可包括某些氨基酸取代，以增加亲和力，增加人源化抗体的稳定性，或为了其他原因。
“抗肿瘤应答”当指用治疗方案、诸如本文所述的组合疗法治疗的癌症患者时意指至少一种阳性治疗效果，诸如例如，减少癌细胞数量，减小肿瘤大小，降低癌细胞浸润至外周器官中的速率，降低肿瘤转移或肿瘤生长的速率，或无进展存活。可以许多方式测量癌症的阳性治疗效果(参见W. A. Weber, J. Null. Med. 50:1S-10S (2009); Eisenhauer等人, 同上)。在一些实施方案中，使用RECIST 1.1标准、二维irRC或单维irRC，评价对本文描述的组合疗法的抗肿瘤应答。在一些实施方案中，抗肿瘤应答是SD、PR、CR、PFS或DFS中的任一种。
“二维irRC”是指在Wolchok JD, 等人. Guidelines for the evaluation ofimmune therapy activity in solid tumors: immune-related response criteria.Clin Cancer Res. 2009;15(23):7412-7420中描述的标准集合。这些标准利用靶病灶的二维肿瘤测量值，它们通过将每个病灶的最长直径乘以最长垂直直径(cm2)而获得。
“生物治疗剂”意指一种生物分子，诸如抗体或融合蛋白，其阻断任何生物途径中的配体/受体信号传导，所述信号传导支持肿瘤维持和/或生长或抑制抗肿瘤免疫应答。生物治疗剂的类别包括、但不限于针对VEGF、EGFR、Her2/neu、其他生长因子受体、CD20、CD40、CD-40L、CTLA-4、OX-40、4-1BB和ICOS的抗体。
“CBR”或“临床受益率”意指CR + PR + 持久的SD。
如本文所用的“CDR”或“CDRs”意指使用Kabat编号系统定义的免疫球蛋白可变区中的互补性决定区，除非另外指明。
“化疗剂”是可用于治疗癌症的化学化合物。化疗剂的类别包括，但不限于：烷基化剂、抗代谢药、激酶抑制剂、纺锤体毒剂植物生物碱、细胞毒性/抗肿瘤抗生素、拓扑异构酶抑制剂、光敏化剂、抗雌激素和选择性雌激素受体调节剂(SERM)、抗孕酮剂、雌激素受体下调剂(ERD)、雌激素受体拮抗剂、促黄体激素释放激素激动剂、抗雄激素剂、芳香酶抑制剂、EGFR抑制剂、VEGF抑制剂和抑制参与异常细胞增殖或肿瘤生长的基因表达的反义寡核苷酸。可用于本发明的治疗方法中的化疗剂包括细胞生长抑制剂和/或细胞毒性剂。
如本文所用的“Chothia”意指Al-Lazikani等人, JMB 273:927-948 (1997)中所述的抗体编号系统。
“包含(Comprising)”或变型诸如“包含(comprise)”、“包含(comprises)”或“由...构成”在整个说明书和权利要求中以包括性意义使用，即指定所述特征的存在，但不排除可以实质性增强本发明的任何实施方案的操作或效用的进一步特征的存在或添加，除非上下文由于明确的语言或必要的含义而另有要求。
“保守修饰变体”或“保守取代”是指用具有类似特征(例如电荷、侧链大小、疏水性/亲水性、主链构象和刚度等)的其他氨基酸取代蛋白中的氨基酸，使得所述变化可以经常做出，而不改变蛋白的生物活性或其他期望的特性，诸如抗原亲和力和/或特异性。本领域技术人员认识到，通常，在多肽的非必需区域中的单个氨基酸取代不会实质上改变生物活性(参见，例如，Watson等人(1987) Molecular Biology of the Gene, The Benjamin/Cummings Pub. Co., 第224页(第4版))。另外，在结构上或在功能上类似的氨基酸的取代不太可能破坏生物活性。示例性的保守取代阐述在下表1中。
表1. 示例性保守氨基酸取代
Figure 29980DEST_PATH_IMAGE001
。
如整个说明书和权利要求中所用，“基本上由…组成(consists essentiallyof)”和变型诸如“基本上由…组成(consist essentially of)”或“基本上由…组成(consisting essentially of)”指示包括任何所述的要素或要素组，且任选包括具有与所述要素类似或不同的性质且不会实质性改变指定剂量方案、方法或组合物的基本或新型特性的其他要素。作为非限制性实例，基本上由所述氨基酸序列组成的PD-1拮抗剂还可以包括一个或多个氨基酸，包括一个或多个氨基酸残基的取代，其不会实质性影响结合化合物的特性。
“DCR”或“疾病控制率”意指CR + PR + SD。
“诊断性抗PD-L单克隆抗体”意指特异性结合在某些哺乳动物细胞的表面上表达的指定PD-L (PD-L1或PDL2)的成熟形式的mAb。成熟的PD-L缺乏分泌前前导序列，也被称为前导肽。术语“PD-L”和“成熟的PD-L”在本文中可互换地使用，并且应当被理解为意指相同的分子，除非另外指出或从上下文容易明白。
如本文所用，诊断性抗人PD-L1 mAb或抗hPD-L1 mAb是指特异性结合成熟的人PD-L1的单克隆抗体。成熟的人PD-L1分子由以下序列的氨基酸19-290组成：
Figure 353645DEST_PATH_IMAGE002
Figure 507284DEST_PATH_IMAGE003
。
可用作诊断性mAb用于免疫组织化学(IHC)检测在福尔马林固定的、石蜡包埋的(FFPE)肿瘤组织切片中的PD-L1表达的诊断性抗人PD-L1 mAb的具体实例是抗体20C3和抗体22C3，其描述于WO2014/100079中。已经报道可用于IHC检测FFPE组织切片中的PD-L1表达的另一种抗人PD-L1 mAb(Chen, B.J. 等人, Clin Cancer Res 19: 3462-3473 (2013))是可从Sino Biological, Inc. (Beijing, P.R. China；目录号10084-R015)公开获得的兔抗人PD-L1 mAb。
Figure 902493DEST_PATH_IMAGE004
如本文所用的“PD-L1”或“PD-L2”表达意指在细胞表面上指定PD-L蛋白或在细胞或组织内指定PD-L mRNA的任何可检测表达水平。可在肿瘤组织切片的IHC测定中或通过流式细胞术用诊断性PD-L抗体检测PD-L蛋白表达。或者，可使用特异性结合期望PD-L靶标(例如，PD-L1或PD-L2)的结合剂(例如，抗体片段、亲和体等)通过PET成像检测肿瘤细胞的PD-L蛋白表达。用于检测和测量PD-L mRNA表达的技术包括RT-PCR、实时定量RT-PCR、RNAseq和Nanostring平台(J. Clin. Invest. 2017;127(8):2930–2940)。
已描述用于在肿瘤组织切片的IHC测定中对PD-L1蛋白表达进行定量的几种方法。参见例如Thompson, R. H., 等人, PNAS 101 (49); 17174-17179 (2004); Thompson,R. H. 等人, Cancer Res. 66:3381-3385 (2006); Gadiot, J., 等人, Cancer 117:2192-2201 (2011); Taube, J. M. 等人, Sci Transl Med 4, 127ra37 (2012); 和Toplian, S. L.等人, New Eng. J Med. 366 (26): 2443-2454 (2012)。参见US20170285037，其描述由病理学家使用的苏木精和伊红染色。
一种方法采用PD-L1表达阳性或阴性的简单二元终点，其中阳性结果在表现出细胞-表面膜染色的组织学证据的肿瘤细胞的百分比方面进行定义。如果PD-L1表达为总肿瘤细胞的至少1%，则将肿瘤组织切片计数为PD-L1表达阳性。
在另一种方法中，在肿瘤细胞中以及在主要包含淋巴细胞的浸润免疫细胞中对肿瘤组织切片中的PD-L1表达进行定量。表现出膜染色的肿瘤细胞和浸润免疫细胞的百分比分别定量为<5%、5%至9%，且然后以10%增量至最多100%。免疫浸润物中的PD-L1表达被报告为被称为调节的炎症评分(AIS)的半定量测量值，其通过膜染色细胞的百分比乘以浸润物强度来确定，其被分级为无(0)、轻度(1的评分，淋巴细胞稀疏)、中等(2的评分，通过淋巴细胞组织细胞聚集物对肿瘤的病灶浸润)或严重(3的评分，弥漫浸润)。如果AIS≥5，则将肿瘤组织切片计数为免疫浸润物的PD-L1表达阳性。
可将PD-L mRNA表达水平与经常用于定量RT-PCR中的一种或多种参考基因的mRNA表达水平进行比较。
在一些实施方案中，基于与适当对照的PD-L1表达(蛋白和/或mRNA)的水平的比较，将恶性细胞和/或肿瘤内浸润免疫细胞的PD-L1表达(蛋白和/或mRNA)的水平确定为“过表达”或“升高”。例如，对照PD-L1蛋白或mRNA表达水平可以是在相同类型的非恶性细胞中或在来自匹配正常组织的切片中进行定量的水平。在一些优选实施方案中，如果肿瘤样品中的PD-L1蛋白(和/或PD-L1 mRNA)比对照中多至少10%、20%或30%，则确定该样品中的PD-L1表达升高。
“肿瘤比例评分(TPS)”是指以任何强度(弱、中或强)在细胞膜上表达PD-L1的肿瘤细胞的百分比。线性的部分或完全细胞膜染色被理解为PD-L1阳性。
“单核炎性密度评分(MIDS)”是指浸润肿瘤或邻近肿瘤的表达PD-L1的单核炎性细胞(MIC)(肿瘤巢内和邻近支持性基质内的小和大淋巴细胞、单核细胞和巨噬细胞)的数目与肿瘤细胞的总数相比的比率。MIDS以0至4的标度记录，其中0=无；1=存在，但每100个肿瘤细胞少于一个MIC (<1%)；2=每100个肿瘤细胞至少1个MIC，但每10个肿瘤细胞少于1个MIC(1-9%)；3=每10个肿瘤细胞至少3个MIC，但MIC少于肿瘤细胞(10-99%)；4=MIC至少与肿瘤细胞一样多(≥100%)。
“组合阳性评分(CPS)”是指肿瘤巢和邻近支持性基质内的PD-L1阳性肿瘤细胞和PD-L1阳性单核炎性细胞(MIC)的数目(分子)与肿瘤细胞的总数(分母；即PD-L1阳性和PD-L1阴性肿瘤细胞的数目)的比率。任何强度的PD-L1表达都被认为是阳性的，即弱(1+)、中(2+)或强(3+)。
“PD-L1表达阳性”是指至少1%的肿瘤比例评分、单核炎性密度评分或组合阳性评分；AIS为≥5；或与适当的对照相比，恶性细胞和/或肿瘤内的浸润免疫细胞的PD-L1表达(蛋白和/或mRNA)的水平升高。
可以在肿瘤组织切片的IHC测定中或通过流式细胞术用诊断性抗LAG3抗体检测LAG3蛋白表达。在一个实施方案中，诊断性抗LAG3抗体是来自LSBio的克隆17B4。或者，可以使用特异性结合LAG3的结合剂(例如，抗体片段、亲和体等)通过PET成像来检测肿瘤细胞的LAG3蛋白表达。用于检测和测量LAG3 mRNA表达的技术包括RT-PCR，实时定量RT-PCR，RNAseq，和Nanostring平台(J. Clin. Invest. 2017;127(8):2930–2940)。
“% LAG3阳性细胞”是指肿瘤区域中的LAG3阳性细胞/所有细胞x100。在IHC测定中的线性的部分或完全免疫细胞膜染色被解释为LAG3阳性。
“CPS-样% LAG3阳性细胞”是指肿瘤区域中的LAG3阳性细胞/肿瘤细胞x100。在IHC测定中的线性的部分或完全免疫细胞膜染色被解释为LAG3阳性。
“LAG3表达阳性”是指%LAG3阳性细胞或CPS-样%LAG3阳性细胞≥1%。
“DSDR”或“持久的稳定疾病率”意指≥23周的SD。
如本文所用的“框架区”或“FR”意指不包括CDR区的免疫球蛋白可变区。
如本文所用的“Kabat”意指由Elvin A. Kabat首创的免疫球蛋白比对和编号系统((1991) Sequences of Proteins of Immunological Interest, 第5版. Public HealthService, National Institutes of Health, Bethesda, Md.)。
“抗LAG3抗体”意指阻断免疫细胞(T细胞、Treg或NK细胞等)上表达的LAG3与MHCII类分子的结合的单克隆抗体。人LAG3包含以下氨基酸序列：
Figure 513603DEST_PATH_IMAGE005
(SEQ ID NO:33) ；还参见Uniprot登录号P18627。
“微卫星不稳定性(MSI)”是指与肿瘤中的缺陷的DNA错配修复相关的基因组不稳定性的形式。参见Boland等人, Cancer Research 58, 5258-5257, 1998。在一个实施方案中，可以使用五种美国国家癌症研究所(NCI)推荐的微卫星标记BAT25 (GenBank登录号9834508)、BAT26 (GenBank登录号9834505)、D5S346 (GenBank登录号181171)、D2S123(GenBank登录号187953)、D17S250 (GenBank登录号177030)实施MSI分析。可以使用额外的标记，例如BAT40、BAT34C4、TGF-β-RII和ACTC。用于MSI分析的市售试剂盒包括，例如Promega MSI多重PCR测定。
“高频微卫星不稳定性”或“微卫星不稳定性-高(MSI-H)”是指如果五种NCI标记中的两种或更多种显示不稳定性或总标记的≥30-40%表明不稳定性(即具有插入/缺失突变)。
“低频微卫星不稳定性”或“微卫星不稳定性-低”(MSI-L)是指如果五种NCI标记之一显示不稳定性或者总标记的<30-40%表现出不稳定性(即具有插入/缺失突变)。
如本文所用的“非-MSI-H结肠直肠癌”是指微卫星稳定(MSS)和低频MSI (MSI-L)结肠直肠癌。
“微卫星稳定(MSS)”是指五种NCI标记无一显示不稳定性(即具有插入/缺失突变)的情况。
“熟练错配修复(pMMR)结肠直肠癌”是指通过IHC的CRC肿瘤样本中的MMR蛋白(MLH1、PMS2、MSH2和MSH6)的正常表达。用于MMR分析的市售试剂盒包括Ventana MMR IHC测定。
“错配修复缺陷(dMMR)结肠直肠癌”是指通过IHC的CRC肿瘤样本中的一种或多种MMR蛋白(MLH1、PMS2、MSH2和MSH6)的低表达。
如本文所用的"单克隆抗体"或“mAb”或“Mab”，是指基本上同质的抗体群体，即构成群体的抗体分子在氨基酸序列中是相同的，除了可以少量存在的可能天然存在的突变。相比之下，常规的(多克隆)抗体制备物通常包括许多不同的抗体，所述抗体在它们的可变结构域，特别是它们的CDR(其对不同的表位经常是特异性的)中具有不同的氨基酸序列。修饰词"单克隆的"表明如从基本上同质的抗体群体获得的抗体的特征，并且不应被解释为需要通过任何具体方法生产抗体。例如，待根据本发明使用的单克隆抗体可通过由Kohler等人 (1975) Nature 256: 495首次描述的杂交瘤方法制得，或可通过重组DNA方法(参见，例如美国专利号4,816,567)制得。"单克隆抗体"也可使用在例如Clackson等人 (1991)Nature 352: 624-628和Marks等人 (1991) J. Mol. Biol. 222: 581-597中描述的技术，分离自噬菌体抗体文库。也参见Presta (2005) J. Allergy Clin. Immunol. 116:731。
当提及对用本文描述的组合疗法的治疗的特异性抗肿瘤应答时，“非应答者患者”意指，所述患者没有表现出抗肿瘤应答。
“ORR”或“目标应答率”在一些实施方案中是指CR + PR，且ORR(第24周)是指抗癌治疗24周之后使用irRECIST在群组中的每个患者中测量的CR和PR。
“患者”或”受试者”是指期望疗法或正在参与临床试验、流行病学研究或用作对照的任何单个受试者，包括人类和哺乳动物兽医学患者诸如牛、马、狗和猫。
“PD-1拮抗剂”意指阻断在癌细胞上表达的PD-L1与在免疫细胞(T细胞、B细胞或NKT细胞)上表达的PD-1的结合并且还优选地阻断在癌细胞上表达的PD-L2与免疫-细胞表达的PD-1的结合的任何化学化合物或生物学分子。PD-1及其配体的替代名称或同义词包括：对于PD-1，PDCD1、PD1、CD279和SLEB2；对于PD-L1，PDCD1L1、PDL1、B7H1、B7-4、CD274和B7-H；和对于PD-L2，PDCD1L2、PDL2、B7-DC、Btdc和CD273。在其中正在治疗人个体的本发明的任何治疗方法、药物和用途中，PD-1拮抗剂阻断人PD-L1与人PD-1的结合，且优选阻断人PD-L1和PD-L2两者与人PD-1的结合。可以在NCBI基因座编号:NP_005009中发现人PD-1氨基酸序列。可以分别在NCBI基因座编号:NP_054862和NP_079515中发现人PD-L1和PD-L2氨基酸序列。
如本文所用，“派姆单抗变体”意指这样的单克隆抗体：除了具有在位于轻链CDR之外的位置处的3、2、或1个保守氨基酸取代和位于重链CDR之外的6、5、4、3、2或1个保守氨基酸取代(例如，变体位置位于FR区或恒定区中，且任选地具有重链的C-末端赖氨酸残基的缺失)以外，所述单克隆抗体包含与派姆单抗中的那些基本上相同的重链和轻链序列。换而言之，派姆单抗和派姆单抗变体包含相同的CDR序列，但是由于分别在它们的全长轻链和重链序列中的不超过3个或6个其他位置处具有保守氨基酸取代而彼此不同。派姆单抗变体就以下特性而言基本上与派姆单抗相同：对PD-1的结合亲和力，和阻断PD-L1和PD-L2中的每一种与PD-1的结合的能力。
如本文所用的“RECIST 1.1应答标准”意指在Eisenhauer等人, E.A. 等人, Eur. J. Cancer 45: 228-247 (2009)中关于靶病灶或非靶病灶阐述的定义，适当时基于在其中测量应答的上下文。
当提及对用本文描述的组合疗法的治疗的具体抗肿瘤应答时，“应答者患者”意指表现出抗肿瘤应答的患者。
“持久应答”意指用治疗剂或本文描述的组合疗法的治疗停止以后的持久治疗效果。在一些实施方案中，所述持久应答的持续时间与治疗持续时间至少相同，或是治疗持续时间的至少1.5、2.0、2.5或3倍。
“组织切片”是指组织样品的单一部分或单片，例如，从正常组织或肿瘤的样品切下的组织薄片。
如本文所用的“治疗(treat)”或“治疗(treating)”癌症意指向具有癌症或诊断具有癌症的受试者施用本发明的治疗剂，以实现至少一种阳性治疗效果，诸如例如，减少癌细胞数量，减小肿瘤大小，降低癌细胞浸润至外周器官中的速率，或降低肿瘤转移或肿瘤生长的速率。可以许多方式测量癌症的阳性治疗效果(参见W. A. Weber, J. Nucl. Med. 50:1S-10S (2009))。例如，关于肿瘤生长抑制，根据NCI标准，≦42%的T/C是抗肿瘤活性的最低水平。< 10%的T/C被视为高抗肿瘤活性水平，其中T/C (%)=治疗的中值肿瘤体积/对照的中值肿瘤体积×100。在一些实施方案中，使用RECIST 1.1标准或irRC (二维或单维)评价对本文描述的组合疗法的应答，并且通过本发明的组合实现的治疗是PR、CR、OR、PFS、DFS和OS中的任一种。PFS(也称为“至肿瘤进展的时间”)指示在治疗期间和之后癌症不生长的时间长度，且包括患者已经历CR或PR的时间量，以及患者已经历SD的时间量。DFS是指在治疗期间和之后患者保持无疾病的时间长度。OS是指与未经治疗(naive)或未治疗的个体或患者相比预期寿命的延长。在一些实施方案中，对本发明的组合的应答是使用RECIST 1.1应答标准评价的PR、CR、PFS、DFS、OR和OS中的任一种。有效地治疗癌症患者的本发明的组合的治疗方案可以根据诸如以下的因素而变化：患者的疾病状态、年龄和重量，所述疗法在受试者中引起抗癌应答的能力。尽管本发明的任何方面的一个实施方案可能不会在每一受试者中有效实现阳性治疗效果，但应当在统计显著量的受试者中实现，如通过本领域已知的任一统计检验(诸如Student氏t检验、卡方检验、根据Mann和Whitney的U-检验、Kruskal-Wallis检验(H检验)、Jonckheere-Terpstra检验和Wilcoxon检验)来确定。
术语“治疗方案”、“给药方案(dosing protocol)”和“给药方案(dosingregimen)”互换使用以指代本发明的组合中的每种治疗剂的施用的剂量和时机。
“肿瘤”在其应用至被诊断具有或怀疑具有癌症的受试者时是指具有任一大小的恶性或潜在恶性赘生物或组织块，且包括原发性肿瘤和继发性赘生物。实体瘤是通常不含囊肿或液体区域的组织的异常生长或块。不同类型的实体瘤针对形成其的细胞类型来命名。实体瘤的实例是肉瘤、癌和淋巴瘤。白血病(血液癌)通常不形成实体瘤(NationalCancer Institute, Dictionary of Cancer Terms)。
“肿瘤负荷”也被称作“肿瘤负载”，是指遍布于体内的肿瘤物质的总量。肿瘤负荷是指整个体内(包括淋巴结和骨髓)的癌细胞的总数或肿瘤的总大小。通过本领域已知的多种方法，诸如例如，通过在从受试者取出后测量肿瘤的尺寸(例如，使用测径器)，或当在体内时使用成像技术，例如，超声、骨扫描、计算机体层摄影术(CT)或磁共振成像(MRI)扫描，可以确定肿瘤负荷。
术语“肿瘤大小”是指可以测量为肿瘤的长度和宽度的肿瘤的总大小。通过本领域已知的多种方法，诸如例如，通过在从受试者取出后测量肿瘤的尺寸(例如，使用测径器)，或当在体内时使用成像技术，例如，骨扫描、超声、CT或MRI扫描，可以确定肿瘤大小。
“单维irRC”是指在Nishino M, Giobbie-Hurder A, Gargano M, Suda M,Ramaiya NH, Hodi FS. Developing a Common Language for Tumor Response toImmunotherapy: Immune-related Response Criteria using Unidimensionalmeasurements. Clin Cancer Res. 2013; 19(14): 3936-3943)中描述的标准集合。这些标准利用每个病灶的最长直径(cm)。
如本文所用的“可变区”或“V区”意指在不同的抗体之间的序列中是可变的IgG链的区段。通常，其延伸到轻链中的Kabat残基109和重链中的Kabat残基113。
PD-1拮抗剂和抗LAG3抗体
在本发明的治疗方法、药物和用途中有用的PD-1拮抗剂包括单克隆抗体(mAb)或其抗原结合片段，其特异性结合PD-1或PD-L1，并且优选地特异性结合人PD-1或人PD-L1。mAb可以是人抗体、人源化抗体或嵌合抗体，并且可包括人恒定区。在一些实施方案中，恒定区选自IgG1、IgG2、IgG3和IgG4恒定区，且在优选的实施方案中，人恒定区是IgG1或IgG4恒定区。在一些实施方案中，抗原结合片段选自Fab、Fab'-SH、F(ab')2、scFv和Fv片段。所述抗PD-1或抗PD-L1抗体可以使用常规细胞培养和回收/纯化技术在CHO细胞中产生。
结合人PD-1且可用于本发明的治疗方法、药物和用途中的mAb的实例描述于US7488802、US7521051、US8008449、US8354509、US8168757、WO2004/004771、WO2004/072286、WO2004/056875和US2011/0271358中。可用作本发明的治疗方法、药物和用途中的PD-1拮抗剂的具体抗人PD-1 mAb包括：
派姆单抗(也称为MK-3475)、人源化的IgG4 mAb(其具有在WHO Drug Information, 第27卷, 第2期, 第161-162页(2013)中描述的结构，且其包含表3中所示的重链和轻链氨基酸序列；纳武单抗(BMS-936558)、人IgG4 mAb(其具有在WHO Drug Information, 第27卷, 第1期, 第68-69页(2013)中描述的结构，且其包含表3中所示的重链和轻链氨基酸序列)；人源化抗体h409A11、h409A16和h409A17(其描述于WO2008/156712中)，和由MedImmune开发的AMP-514。
结合人PD-L1且可用于本发明的治疗方法、药物和用途中的mAb的实例描述在WO2013/019906、W02010/077634 A1和US8383796中。可用作本发明的治疗方法、药物和用途中的PD-1拮抗剂的具体抗人PD-L1 mAb包括MPDL3280A、BMS-936559、MEDI4736、MSB0010718C和分别包含WO2013/019906的SEQ ID NO:24和SEQ ID NO:21的重链和轻链可变区的抗体。
可用在本发明的治疗方法、药物和用途中的其他PD-1拮抗剂包括特异性结合PD-1或PD-L1、且优选地特异性结合人PD-1或人PD-L1的免疫粘附素，例如，含有与恒定区(诸如免疫球蛋白分子的Fc区)融合的PD-L1或PD-L2的细胞外或PD-1结合部分的融合蛋白。特异性结合PD-1的免疫粘附分子的实例描述在WO2010/027827和WO2011/066342中。可用作本发明的治疗方法、药物和用途中的PD-1拮抗剂的具体融合蛋白包括AMP-224 (也被称作B7-DCIg)，其为PD-L2-FC融合蛋白且结合人PD-1。
在本发明的治疗方法、药物和用途的一些优选实施方案中，所述PD-1拮抗剂是单克隆抗体或其抗原结合片段，其包含：(a)轻链CDR SEQ ID NO:1、2和3和(b)重链CDR SEQID NO:6、7和8。
在本发明的治疗方法、药物和用途的其他优选实施方案中，所述PD-1拮抗剂是单克隆抗体或其抗原结合片段，其特异性结合人PD-1且包含：(a)包含SEQ ID NO:9或其变体的重链可变区，和(b)包含SEQ ID NO:4或其变体的轻链可变区。重链可变区序列的变体与参考序列相同，除了在框架区中(即，在CDR之外)具有最多达17个保守氨基酸取代，且优选在框架区中具有少于十、九、八、七、六或五个保守氨基酸取代。轻链可变区序列的变体与参考序列相同，除了在框架区中(即，在CDR之外)具有最多达五个保守氨基酸取代，且优选在框架区中具有少于四、三或两个保守氨基酸取代。
在本发明的治疗方法、药物和用途的另一个优选实施方案中，所述PD-1拮抗剂是单克隆抗体，其特异性结合人PD-1且包含：(a)包含SEQ ID NO:10的重链，和(b)包含SEQ IDNO:5的轻链。
在本发明的治疗方法、药物和用途的又另一个优选实施方案中，所述PD-1拮抗剂是单克隆抗体，其特异性结合人PD-1且包含：(a)包含SEQ ID NO:12的重链和(b)包含SEQID NO:11的轻链。
在所有以上治疗方法、药物和用途中，所述PD-1拮抗剂抑制PD-L1与PD-1的结合，且优选地也抑制PD-L2与PD-1的结合。在以上治疗方法、药物和用途的一些实施方案中，所述PD-1拮抗剂是单克隆抗体或其抗原结合片段，其特异性结合PD-1或PD-L1并阻断PD-L1与PD-1的结合。在一个实施方案中，所述PD-1拮抗剂是包含重链和轻链的抗-PD-1抗体，且其中所述重链和轻链分别包含SEQ ID NO:10和SEQ ID NO:5中的氨基酸序列。
下面表3提供了用于本发明的治疗方法、药物和用途中的示例性抗PD-1 mAb的氨基酸序列的列表。
表3. 示例性PD-1抗体序列
Figure 742590DEST_PATH_IMAGE006
。
请求保护的发明中使用的抗LAG3抗体可以是人抗体、人源化抗体或嵌合抗体，并且可包括人恒定区。在一些实施方案中，所述人恒定区选自IgG1、IgG2、IgG3和IgG4恒定区，且在优选的实施方案中，所述人恒定区是IgG1或IgG4恒定区。
在一个实施方案中，所述LAG3抗体是Ab6。
Ab6：包含以下氨基酸序列的轻链免疫球蛋白：
Figure 9623DEST_PATH_IMAGE007
包含以下氨基酸序列的重链免疫球蛋白：
Figure 880627DEST_PATH_IMAGE008
包含以下氨基酸序列的轻链免疫球蛋白可变结构域：
Figure 80664DEST_PATH_IMAGE009
包含以下氨基酸序列的重链免疫球蛋白可变结构域：
Figure 74028DEST_PATH_IMAGE010
；或包含以下CDR：
Figure 998997DEST_PATH_IMAGE011
在本发明的治疗方法、药物和用途的一些优选实施方案中，所述抗LAG3抗体包含：(a)轻链CDR SEQ ID NO:26、27和28，和(b)重链CDR SEQ ID NO:29、30和31。
在本发明的治疗方法、药物和用途的其他优选实施方案中，所述抗LAG3抗体包含：(a)包含SEQ ID NO:25或其变体的重链可变区，和(b)包含SEQ ID NO:24或其变体的轻链可变区。重链可变区序列的变体与参考序列相同，除了在框架区中(即，在CDR之外)具有最多达17个保守氨基酸取代，且优选在框架区中具有少于十、九、八、七、六或五个保守氨基酸取代。轻链可变区序列的变体与参考序列相同，除了在框架区中(即，在CDR之外)具有最多达五个保守氨基酸取代，且优选在框架区中具有少于四、三或两个保守氨基酸取代。
在本发明的治疗方法、药物和用途的另一个优选实施方案中，所述抗LAG3抗体包含：(a)包含SEQ ID NO:23的重链，和(b)包含SEQ ID NO:22的轻链。在本发明的治疗方法、药物和用途的另一个优选实施方案中，所述抗LAG3抗体包含：(a)包含SEQ ID NO:25的重链可变区，和(b)包含SEQ ID NO:24的轻链可变区。
在一个实施方案中，所述抗PD-1或抗LAG3抗体或抗原结合片段包含重链恒定区，例如，人恒定区，诸如γ1、γ2、γ3或γ4人重链恒定区或其变体。在另一个实施方案中，所述抗PD-1或抗LAG3抗体或抗原结合片段包含轻链恒定区，例如人轻链恒定区，诸如λ或κ人轻链区或其变体。举例来说，但不限于，人重链恒定区可以是γ4，并且人轻链恒定区可以是κ。在一个替代实施方案中，抗体的Fc区是具有Ser228Pro突变的γ4(Schuurman, J等人,Mol. Immunol. 38: 1-8, 2001)。
在一些实施方案中，可以将不同的恒定结构域附加至衍生自本文提供的CDR的人源化的VL和VH区。例如，如果本发明的抗体(或片段)的特定预期用途是要求改变效应子功能，则可以使用除了人IgG1以外的重链恒定结构域，或者可以利用杂合IgG1/IgG4。例如，可以使用例如人IgG4恒定结构域。本发明包括使用包含IgG4恒定结构域的抗PD-1抗体或抗LAG3抗体及其抗原结合片段。在一个实施方案中，所述IgG4恒定结构域可以在对应于EU系统中的位置228和KABAT系统中的位置241的位置处与天然人IgG4恒定结构域(Swiss-Prot登录号P01861.1)不同，其中天然Ser108被Pro替代，以便防止Cys106和Cys109(对应于EU系统中的位置Cys 226和Cys 229以及KABAT系统中的位置Cys 239和Cys 242)之间的潜在链间二硫键，所述潜在链间二硫键可能干扰适当的链内二硫键形成。参见Angal等人(1993)Mol. Imunol. 30:105。
方法、用途和药物
在一个方面，本发明提供了治疗患者中的癌症的方法，其包括经由静脉内输注施用7-1200 mg的抗LAG3抗体，其中所述抗LAG3抗体包含：(a) SEQ ID NO:26、27和28的轻链CDR，和(b) SEQ ID NO:29、30和31的重链CDR。在另一个方面，本发明提供了治疗患者中的癌症的方法，其包括经由静脉内输注与抗PD-1或抗PD-L1抗体共同施用7-1200 mg的抗LAG3抗体，其中所述抗LAG3抗体包含：(a) SEQ ID NO:26、27和28的轻链CDR，和(b) SEQ ID NO:29、30和31的重链CDR。在一个实施方案中，所述抗PD-1抗体阻断PD-1与PD-L1和PD-L2的结合。在一个实施方案中，施用7-800 mg的抗LAG3抗体。在另一个实施方案中，施用100-800mg的抗LAG3抗体。在另一个实施方案中，施用200 mg的抗LAG3抗体。在另一个实施方案中，施用700 mg的抗LAG3抗体。在另一个实施方案中，施用800 mg的抗LAG3抗体。在另一个实施方案中，施用200-800 mg的抗LAG3抗体。在另一个实施方案中，施用200-700 mg的抗LAG3抗体。在另一个实施方案中，施用200-700 mg的抗LAG3抗体。在一个进一步实施方案中，施用200-900 mg的抗LAG3抗体。在一个进一步实施方案中，施用200-1000 mg的抗LAG3抗体。
在一个进一步方面，本发明提供了用于治疗患者中的癌症的方法，其包括经由静脉内输注向所述个体施用包含200 mg的派姆单抗或派姆单抗变体和200 mg的抗LAG3抗体Ab6或Ab6变体的组合物。在另一个方面，本发明提供了用于治疗患者中的癌症的方法，其包括经由静脉内输注向所述个体施用包含200 mg的派姆单抗或派姆单抗变体和800 mg的抗LAG3抗体Ab6或Ab6变体的组合物。
在一个实施方案中，所述组合物包含200 mg的派姆单抗或派姆单抗变体和200-800 mg的抗LAG3抗体Ab6或Ab6变体。在一个实施方案中，所述组合物包含200 mg的派姆单抗或派姆单抗变体和200-700 mg的抗LAG3抗体Ab6或Ab6变体。在一个实施方案中，所述组合物包含200 mg的派姆单抗或派姆单抗变体和100-800 mg的抗LAG3抗体Ab6或Ab6变体。在一个实施方案中，所述组合物包含200 mg的派姆单抗或派姆单抗变体和200-900 mg的抗LAG3抗体Ab6或Ab6变体。
在一个实施方案中，所述组合物包含200 mg的派姆单抗或派姆单抗变体和200-600 mg的抗LAG3抗体Ab6或Ab6变体。在一个实施方案中，所述组合物包含200 mg的派姆单抗或派姆单抗变体和200-1000 mg的抗LAG3抗体Ab6或Ab6变体。
在另一个实施方案中，本发明提供了包含抗LAG3抗体的药物，所述抗LAG3抗体用于与抗PD-1或抗PD-L1抗体组合用于治疗癌症，其中所述抗LAG3抗体经由静脉内输注以7-1200 mg施用。在另一个实施方案中，本发明提供了包含抗LAG3抗体和抗PD-1抗体的药物，其用于治疗癌症。在一个实施方案中，所述药物包含200 mg的派姆单抗或派姆单抗变体和200 mg的抗LAG3抗体Ab6或Ab6变体。在另一个实施方案中，所述药物包含200 mg的派姆单抗或派姆单抗变体和800 mg的Ab6或Ab6变体。在另一个实施方案中，所述药物包含400 mg的派姆单抗或派姆单抗变体和800 mg的Ab6或Ab6变体。
在又进一步实施方案中，本发明提供了抗LAG3抗体和抗PD-1或抗PD-L1抗体在制备用于治疗个体中的癌症的药物中的用途。在一个实施方案中，所述药物包含200 mg的派姆单抗或派姆单抗变体和200 mg的抗LAG3抗体Ab6或Ab6变体。在另一个方面，所述药物包含200 mg的派姆单抗或派姆单抗变体和800 mg的Ab6或Ab6变体。在另一个实施方案中，本发明提供了抗LAG3抗体在制备用于治疗个体中的癌症的药物中的用途，其中经由静脉内输注的7-1200 mg的抗LAG3抗体与经由静脉内输注的200 mg的抗PD-1抗体共同施用。在又另一个实施方案中，本发明提供了抗LAG3抗体在制备用于治疗个体中的癌症的药物中的用途，其中经由静脉内输注的200 mg的抗LAG3抗体与经由静脉内输注的200 mg的抗PD-1抗体共同施用。在又另一个实施方案中，本发明提供了抗LAG3抗体在制备用于治疗个体中的癌症的药物中的用途，其中经由静脉内输注的800 mg的抗LAG3抗体与经由静脉内输注的200mg的抗PD-1抗体共同施用。在又一个进一步实施方案中，本发明提供了抗LAG3抗体在制备用于治疗个体中的癌症的药物中的用途，其中经由静脉内输注的7-1200 mg的抗LAG3抗体与经由静脉内输注的400 mg的抗PD-1抗体共同施用。在又一个进一步实施方案中，本发明提供了抗LAG3抗体在制备用于治疗个体中的癌症的药物中的用途，其中经由静脉内输注的800 mg的抗LAG3抗体与经由静脉内输注的400 mg的抗PD-1抗体共同施用。在又一个进一步实施方案中，本发明提供了抗LAG3抗体在制备用于治疗个体中的癌症的药物中的用途，其中经由静脉内输注的200 mg的抗LAG3抗体与经由静脉内输注的400 mg的抗PD-1抗体共同施用。
在一个实施方案中，在前述方法、药物和用途中，所述抗PD-1抗体和抗LAG3抗体是共配制的。在一个实施方案中，用200 mg派姆单抗或派姆单抗变体和200 mg Ab6或Ab6变体共配制的产品用于静脉内输注。在一个实施方案中，用200 mg派姆单抗或派姆单抗变体和300 mg Ab6或Ab6变体共配制的产品用于静脉内输注。在一个实施方案中，用200 mg派姆单抗或派姆单抗变体和400 mg Ab6或Ab6变体共配制的产品用于静脉内输注。在另一个实施方案中，用200 mg派姆单抗或派姆单抗变体和500 mg Ab6或Ab6变体共配制的产品用于静脉内输注。在另一个实施方案中，用200 mg派姆单抗或派姆单抗变体和600 mg Ab6或Ab6变体共配制的产品用于静脉内输注。在另一个实施方案中，用200 mg派姆单抗或派姆单抗变体和700 mg Ab6或Ab6变体共配制的产品用于静脉内输注。在一个进一步实施方案中，用200 mg派姆单抗或派姆单抗变体和800 mg Ab6或Ab6变体共配制的产品用于静脉内输注。在一个进一步实施方案中，用200 mg派姆单抗或派姆单抗变体和900 mg Ab6或Ab6变体共配制的产品用于静脉内输注。在又一个进一步实施方案中，用200 mg派姆单抗或派姆单抗变体和1000 mg Ab6或Ab6变体共配制的产品用于静脉内输注。在又一个进一步实施方案中，用200 mg派姆单抗或派姆单抗变体和1100 mg Ab6或Ab6变体共配制的产品用于静脉内输注。在又一个进一步实施方案中，用200 mg派姆单抗或派姆单抗变体和1200 mg Ab6或Ab6变体共配制的产品用于静脉内输注。
本发明还提供了包含200 mg派姆单抗或派姆单抗变体和200 mg Ab6或Ab6变体以及药学上可接受的赋形剂的药物组合物。在一个实施方案中，所述药物组合物包含200 mg派姆单抗或派姆单抗变体和300 mg Ab6或Ab6变体以及药学上可接受的赋形剂。在一个实施方案中，所述药物组合物包含200 mg派姆单抗或派姆单抗变体和400 mg Ab6或Ab6变体以及药学上可接受的赋形剂。在另一个实施方案中，所述药物组合物包含200 mg派姆单抗或派姆单抗变体和500 mg Ab6或Ab6变体以及药学上可接受的赋形剂。在一个进一步实施方案中，所述药物组合物包含200 mg派姆单抗或派姆单抗变体和600 mg Ab6或Ab6变体以及药学上可接受的赋形剂。在一个进一步实施方案中，所述药物组合物包含200 mg派姆单抗或派姆单抗变体和700 mg Ab6或Ab6变体以及药学上可接受的赋形剂。在一个进一步实施方案中，所述药物组合物包含200 mg派姆单抗或派姆单抗变体和800 mg Ab6或Ab6变体以及药学上可接受的赋形剂。在一个进一步实施方案中，所述药物组合物包含200 mg派姆单抗或派姆单抗变体和900 mg Ab6或Ab6变体以及药学上可接受的赋形剂。在又一个进一步实施方案中，所述药物组合物包含200 mg派姆单抗或派姆单抗变体和1000 mg Ab6或Ab6变体以及药学上可接受的赋形剂。在又一个进一步实施方案中，所述药物组合物包含200mg派姆单抗或派姆单抗变体和1100 mg Ab6或Ab6变体以及药学上可接受的赋形剂。在又一个进一步实施方案中，所述药物组合物包含200 mg派姆单抗或派姆单抗变体和1200 mgAb6或Ab6变体以及药学上可接受的赋形剂。
在另一个实施方案中，在前述方法、药物和用途中，所述抗PD-1或抗PD-L1抗体和抗LAG3抗体是共同施用的。在一个实施方案中，对于静脉内输注，每三周在第1天共同施用200 mg派姆单抗或派姆单抗变体和200 mg Ab6或Ab6变体。在一个实施方案中，对于静脉内输注，每三周在第1天共同施用200 mg派姆单抗或派姆单抗变体和300 mg Ab6或Ab6变体。在一个实施方案中，对于静脉内输注，每三周在第1天共同施用200 mg派姆单抗或派姆单抗变体和400 mg Ab6或Ab6变体。在另一个实施方案中，对于静脉内输注，每三周在第1天共同施用200 mg派姆单抗或派姆单抗变体和500 mg Ab6或Ab6变体。在另一个实施方案中，对于静脉内输注，每三周在第1天共同施用200 mg派姆单抗或派姆单抗变体和600 mg Ab6或Ab6变体。在一个进一步实施方案中，对于静脉内输注，每三周在第1天共同施用200 mg派姆单抗或派姆单抗变体和700 mg Ab6或Ab6变体。在一个进一步实施方案中，对于静脉内输注，每三周在第1天共同施用200 mg派姆单抗或派姆单抗变体和800 mg Ab6或Ab6变体。在一个进一步实施方案中，对于静脉内输注，每三周在第1天共同施用200 mg派姆单抗或派姆单抗变体和900 mg Ab6或Ab6变体。在一个进一步实施方案中，对于静脉内输注，每三周在第1天共同施用200 mg派姆单抗或派姆单抗变体和1000 mg Ab6或Ab6变体。在又一个进一步实施方案中，对于静脉内输注，每三周在第1天共同施用200 mg派姆单抗或派姆单抗变体和1100mg Ab6或Ab6变体。在又一个进一步实施方案中，对于静脉内输注，每三周在第1天共同施用200 mg派姆单抗或派姆单抗变体和1200 mg Ab6或Ab6变体。
在一个实施方案中，在前述方法、药物和用途中，对于静脉内输注，每六周在第1天施用400 mg 派姆单抗或派姆单抗变体，且每三周在第1天施用200 mg Ab6或Ab6变体。在一个实施方案中，对于静脉内输注，每六周在第1天施用400 mg 派姆单抗或派姆单抗变体，且每三周在第1天施用300 mg Ab6或Ab6变体。在一个实施方案中，对于静脉内输注，每六周在第1天施用400 mg 派姆单抗或派姆单抗变体，且每三周在第1天施用400 mg Ab6或Ab6变体。在另一个实施方案中，对于静脉内输注，每六周在第1天施用400 mg 派姆单抗或派姆单抗变体，且每三周在第1天施用500 mg Ab6或Ab6变体。在另一个实施方案中，对于静脉内输注，每六周在第1天施用400 mg 派姆单抗或派姆单抗变体，且每三周在第1天施用600 mgAb6或Ab6变体。在另一个实施方案中，对于静脉内输注，每六周在第1天施用400 mg 派姆单抗或派姆单抗变体，且每三周在第1天施用700 mg Ab6或Ab6变体。在一个进一步实施方案中，对于静脉内输注，每六周在第1天施用400 mg 派姆单抗或派姆单抗变体，且每三周在第1天施用800 mg Ab6或Ab6变体。在一个进一步实施方案中，对于静脉内输注，每六周在第1天施用400 mg 派姆单抗或派姆单抗变体，且每三周在第1天施用900 mg Ab6或Ab6变体。在一个进一步实施方案中，对于静脉内输注，每六周在第1天施用400 mg 派姆单抗或派姆单抗变体，且每三周在第1天施用1000 mg Ab6或Ab6变体。在一个进一步实施方案中，对于静脉内输注，每六周在第1天施用400 mg 派姆单抗或派姆单抗变体，且每三周在第1天施用1200 mg Ab6或Ab6变体。
在一个实施方案中，在前述方法、药物和用途中，所述癌症是结肠直肠癌。所述治疗可以进一步包括在结肠直肠癌的治疗中施用mFOLFOX7 (甲酰四氢叶酸(亚叶酸钙)、氟尿嘧啶、奥沙利铂)或FOLFIRI (甲酰四氢叶酸(亚叶酸钙)、氟尿嘧啶、盐酸伊立替康)。在一个实施方案中，所述结肠直肠癌是非-微卫星不稳定性-高(非-MSI-H)或熟练错配修复(pMMR)结肠直肠癌。
在一个方面，静脉内施用mFOLFOX7：每2周(Q2W)，以65或85 mg/m2施用奥沙利铂，以400 mg/m2施用甲酰四氢叶酸(亚叶酸钙)，以2000或2400 mg/m2施用氟尿嘧啶(5 FU)。在一个实施方案中，甲酰四氢叶酸可以用以200 mg/m2施用的左旋亚叶酸钙取代。在一个实施方案中，在每个21天周期的第1天以200 mg静脉内施用派姆单抗或派姆单抗变体，在每个21天周期的第1天以200 mg静脉内施用Ab6或Ab6变体，静脉内施用mFOLFOX7：每两周在第1天或第8天，以65或85 mg/m2施用奥沙利铂，以400 mg/m2施用甲酰四氢叶酸(亚叶酸钙)，以2000或2400 mg/m2施用氟尿嘧啶(5 FU)。在一个实施方案中，在每个21天周期的第1天以200 mg静脉内施用派姆单抗或派姆单抗变体，在每个21天周期的第1天以700 mg静脉内施用Ab6或Ab6变体，静脉内施用mFOLFOX7：每两周在第1天或第8天，以65或85 mg/m2施用奥沙利铂，以400 mg/m2施用甲酰四氢叶酸(亚叶酸钙)，以2000或2400 mg/m2施用氟尿嘧啶(5FU)。在另一个实施方案中，在每个21天周期的第1天静脉内施用包含200 mg派姆单抗或派姆单抗变体和200 mg Ab6或Ab6变体的药物组合物，静脉内施用mFOLFOX7：每两周在第1天或第8天，以65或85 mg/m2施用奥沙利铂，以400 mg/m2施用甲酰四氢叶酸(亚叶酸钙)，以2000或2400 mg/m2施用氟尿嘧啶(5 FU)。在另一个实施方案中，在每个21天周期的第1天静脉内施用包含200 mg派姆单抗或派姆单抗变体和800 mg Ab6或Ab6变体的药物组合物，静脉内施用mFOLFOX7：每两周在第1天或第8天，以65或85 mg/m2施用奥沙利铂，以400 mg/m2施用甲酰四氢叶酸(亚叶酸钙)，以2000或2400 mg/m2施用氟尿嘧啶(5 FU)。
在一个实施方案中，每六周在第1天以400 mg静脉内施用派姆单抗或派姆单抗变体，在每个21天周期的第1天以200 mg静脉内施用Ab6或Ab6变体，静脉内施用mFOLFOX7：每两周在第1天或第8天，以65或85 mg/m2施用奥沙利铂，以400 mg/m2施用甲酰四氢叶酸(亚叶酸钙)，以2000或2400 mg/m2施用氟尿嘧啶(5 FU)。在一个实施方案中，每六周在第1天以400 mg静脉内施用派姆单抗或派姆单抗变体，在每个21天周期的第1天以700 mg静脉内施用Ab6或Ab6变体，静脉内施用mFOLFOX7：每两周在第1天或第8天，以65或85 mg/m2施用奥沙利铂，以400 mg/m2施用甲酰四氢叶酸(亚叶酸钙)，以2000或2400 mg/m2施用氟尿嘧啶(5FU)。
在另一个方面，静脉内施用FOLFIRI：每2周(Q2W)，以150或180 mg/m2施用伊立替康，以400 mg/m2施用甲酰四氢叶酸(亚叶酸钙)，以2000或2400 mg/m2施用氟尿嘧啶(5 FU)。在一个实施方案中，在每个21天周期的第1天以200 mg静脉内施用派姆单抗或派姆单抗变体，在每个21天周期的第1天以200 mg静脉内施用Ab6或Ab6变体，静脉内施用FOLFIRI：每两周在第1天或第8天，以150或180 mg/m2施用伊立替康，以400 mg/m2施用甲酰四氢叶酸(亚叶酸钙)，以2000或2400 mg/m2施用氟尿嘧啶(5 FU)。在一个实施方案中，在每个21天周期的第1天以200 mg静脉内施用派姆单抗或派姆单抗变体，在每个21天周期的第1天以700 mg静脉内施用Ab6或Ab6变体，静脉内施用FOLFIRI：每两周在第1天或第8天，以150或180 mg/m2施用伊立替康，以400 mg/m2施用甲酰四氢叶酸(亚叶酸钙)，以2000或2400 mg/m2施用氟尿嘧啶(5 FU)。在另一个实施方案中，在每个21天周期的第1天以200 mg静脉内施用派姆单抗或派姆单抗变体，在每个21天周期的第1天以800 mg静脉内施用Ab6或Ab6变体，静脉内施用FOLFIRI：每两周在第1天或第8天，以150或180 mg/m2施用伊立替康，以400 mg/m2施用甲酰四氢叶酸(亚叶酸钙)，以2000或2400 mg/m2施用氟尿嘧啶(5 FU)。在另一个实施方案中，在每个21天周期的第1天静脉内施用包含200 mg派姆单抗或派姆单抗变体和200 mg Ab6或Ab6变体的药物组合物，静脉内施用FOLFIRI：每两周在第1天或第8天，以150或180 mg/m2施用伊立替康，以400 mg/m2施用甲酰四氢叶酸(亚叶酸钙)，以2000或2400 mg/m2施用氟尿嘧啶(5 FU)。在另一个实施方案中，在每个21天周期的第1天静脉内施用包含200 mg派姆单抗或派姆单抗变体和800 mg Ab6或Ab6变体的药物组合物，静脉内施用FOLFIRI：每两周在第1天或第8天，以150或180 mg/m2施用伊立替康，以400 mg/m2施用甲酰四氢叶酸(亚叶酸钙)，以2000或2400 mg/m2施用氟尿嘧啶(5 FU)。
在一个实施方案中，每六周在第1天以400 mg静脉内施用派姆单抗或派姆单抗变体，在每个21天周期的第1天以200 mg静脉内施用Ab6或Ab6变体，静脉内施用FOLFIRI：每两周在第1天或第8天，以150或180 mg/m2施用伊立替康，以400 mg/m2施用甲酰四氢叶酸(亚叶酸钙)，以2000或2400 mg/m2施用氟尿嘧啶(5 FU)。在一个实施方案中，每六周在第1天以400 mg静脉内施用派姆单抗或派姆单抗变体，在每个21天周期的第1天以700 mg静脉内施用Ab6或Ab6变体，静脉内施用FOLFIRI：每两周在第1天或第8天，以150或180 mg/m2施用伊立替康，以400 mg/m2施用甲酰四氢叶酸(亚叶酸钙)，以2000或2400 mg/m2施用氟尿嘧啶(5FU)。在另一个实施方案中，每六周在第1天以400 mg静脉内施用派姆单抗或派姆单抗变体，在每个21天周期的第1天以800 mg静脉内施用Ab6或Ab6变体，静脉内施用FOLFIRI：每两周在第1天或第8天，以150或180 mg/m2施用伊立替康，以400 mg/m2施用甲酰四氢叶酸(亚叶酸钙)，以2000或2400 mg/m2施用氟尿嘧啶(5 FU)。
可以通过本发明的抗体、组合物和方法治疗的癌症包括、但不限于：心脏：肉瘤(血管肉瘤、纤维肉瘤、横纹肌肉瘤、脂肪肉瘤)、粘液瘤、横纹肌肉瘤、纤维瘤、脂肪瘤和畸胎瘤；肺：支气管原癌(鳞状细胞、未分化的小细胞、未分化的大细胞、腺癌)、肺泡(细支气管)癌、支气管腺瘤、肉瘤、淋巴瘤、软骨错构瘤、间皮瘤；胃肠：食管(鳞状细胞癌、腺癌、平滑肌肉瘤、淋巴瘤)、胃(癌、淋巴瘤、平滑肌肉瘤)、胰腺(导管腺癌、胰岛素瘤、胰高血糖素瘤、胃泌素瘤、类癌瘤、血管活性肠多肽瘤)、小肠(腺癌、淋巴瘤、类癌瘤、卡波西肉瘤、平滑肌瘤、血管瘤、脂肪瘤、神经纤维瘤、纤维瘤)、大肠(腺癌、管状腺瘤、绒毛状腺瘤、错构瘤、平滑肌瘤)结肠直肠；泌尿生殖道：肾(腺癌、威尔曼瘤[肾母细胞瘤]、淋巴瘤、白血病)、膀胱和尿道(鳞状细胞癌、移行细胞癌、腺癌)、前列腺(腺癌、肉瘤)、睾丸(精原细胞瘤、畸胎瘤、胚胎性癌、畸胎癌、绒毛膜癌、肉瘤、间质细胞癌、纤维瘤、纤维腺瘤、腺瘤样肿瘤、脂肪瘤)；肝：肝细胞瘤(肝细胞癌)、胆管上皮癌、肝胚细胞瘤、血管肉瘤、肝细胞腺瘤、血管瘤；骨：成骨性肉瘤(骨肉瘤)、纤维肉瘤、恶性纤维组织细胞瘤、软骨肉瘤、尤因肉瘤、恶性淋巴瘤(网状细胞肉瘤)、多发性骨髓瘤、恶性巨细胞瘤脊索瘤、骨软骨瘤(骨软骨性外生骨疣)、良性软骨瘤、软骨母细胞瘤、软骨粘液纤维瘤、骨样骨瘤和巨细胞瘤；神经系统：头盖骨(骨瘤、血管瘤、肉芽肿、黄色瘤、变形性骨炎)、脑膜(脑膜瘤、脑膜肉瘤、神经胶质瘤病)、脑(星形细胞瘤、髓母细胞瘤、神经胶质瘤、室管膜瘤、生殖细胞瘤[松果体瘤]、多形性胶质母细胞瘤、少突神经胶质瘤、许旺细胞瘤、视网膜母细胞瘤、先天性肿瘤)、脊髓神经纤维瘤、脑膜瘤、神经胶质瘤、肉瘤)；妇科：子宫(子宫内膜癌)、子宫颈(宫颈癌、肿瘤前宫颈发育不良)、卵巢(卵巢癌[浆液囊腺癌、粘液囊腺癌、未分类的癌]、粒膜膜细胞肿瘤、塞尔托利-莱迪希细胞肿瘤、无性细胞瘤、恶性畸胎瘤)、外阴(鳞状细胞癌、上皮内癌、腺癌、纤维肉瘤、黑色素瘤)、阴道(透明细胞癌、鳞状细胞癌、葡萄状肉瘤(胚胎型横纹肌肉瘤)、输卵管(癌)、乳房；血液学：血液(髓样白血病[急性和慢性]、急性成淋巴细胞性白血病、慢性淋巴细胞白血病、骨髓增生性疾病、多发性骨髓瘤、骨髓增生异常综合征)；淋巴谱系的造血肿瘤，包括白血病、急性淋巴细胞性白血病、慢性淋巴细胞性白血病、急性淋巴母细胞白血病、B-细胞淋巴瘤、T-细胞淋巴瘤、霍奇金淋巴瘤、非霍奇金淋巴瘤、毛细胞淋巴瘤、套细胞淋巴瘤、骨髓瘤和伯克特氏淋巴瘤；骨髓谱系的造血肿瘤，包括急性和慢性骨髓性白血病、骨髓增生异常综合症和早幼粒细胞白血病；间充质起源的肿瘤，包括纤维肉瘤和横纹肌肉瘤；中枢和周围神经系统的肿瘤，包括星形细胞瘤、神经母细胞瘤、神经胶质瘤和神经鞘瘤；以及其他肿瘤，包括黑色素瘤、皮肤(非黑色素瘤)癌、间皮瘤(细胞)、精原细胞瘤、畸胎瘤、骨肉瘤、着色性干皮病(xenoderomapigmentosum)、角化棘皮瘤、甲状腺滤泡癌和卡波西肉瘤。在一个实施方案中，上述癌症是晚期、不可切除或转移性的。在一个实施方案中，所述患者是抗PD-1或抗PD-L1疗法难治的。
在一个实施方案中，可以通过本发明的抗体、组合物和方法治疗的癌症包括但不限于：肺癌、胰腺癌、结肠癌、结肠直肠癌、髓样白血病、急性骨髓性白血病、慢性骨髓性白血病、慢性髓单核细胞白血病、甲状腺癌、骨髓增生异常综合症、膀胱癌、表皮癌、黑色素瘤、乳腺癌、前列腺癌、头颈癌、卵巢癌、脑癌、间充质起源癌、肉瘤、畸胎癌、神经母细胞瘤、肾癌、肝癌、非霍奇金淋巴瘤、多发性骨髓瘤和间变性甲状腺癌。
在另一个实施方案中，可以通过本发明的抗体、组合物和方法治疗的癌症包括但不限于：头颈鳞状细胞癌、胃癌、胃和/或胃-食管连接部的腺癌、肾细胞癌、输卵管癌、子宫内膜癌和结肠直肠癌。在一个实施方案中，所述结肠直肠癌、胃癌、胃和/或胃-食管连接部(GEJ)的腺癌或子宫内膜癌是非-微卫星不稳定性-高(非-MSI-H)或熟练的错配修复(pMMR)。在一个实施方案中，所述癌症是胃癌、胃和/或胃-食管连接部的腺癌。在一个实施方案中，所述癌症是肾细胞癌。在一个实施方案中，具有头颈鳞状细胞癌的患者是抗PD-1或抗PD-L1治疗难治性的。在一个实施方案中，具有头颈鳞状细胞癌的患者没有接受先前的抗PD-1或抗PD-L1治疗。在一个实施方案中，所述结肠直肠癌是不可切除的或转移性的(IV期)。在一个实施方案中，所述癌症是非小细胞肺癌。
在另一个实施方案中，可以通过本发明的抗体、组合物和方法治疗的癌症包括血液系统恶性肿瘤，但不限于：经典霍奇金淋巴瘤(cHL)、弥漫性大B-细胞淋巴瘤(DLBCL)、转化的DLBCL、灰区淋巴瘤、双击淋巴瘤、原发性纵隔B细胞淋巴瘤(PMBCL)或惰性非霍奇金淋巴瘤(iNHL)(例如，滤泡性淋巴瘤、边缘区淋巴瘤、粘膜相关的淋巴样组织淋巴瘤或小淋巴细胞淋巴瘤)。在一个实施方案中，具有霍奇金淋巴瘤的患者是抗PD-1或抗PD-L1治疗难治性的。
在一个进一步实施方案中，可以通过本发明的抗体、组合物和方法治疗的癌症包括选自以下的癌症：肾细胞癌，肾盂、输尿管、膀胱或尿道的尿路上皮癌，黑色素瘤，胃癌，GEJ腺癌，非小细胞肺癌和膀胱癌。在一个进一步实施方案中，可以治疗的癌症选自：肾细胞癌、胃癌、GEJ腺癌、非小细胞肺癌、头颈鳞状细胞癌、输卵管癌、子宫内膜癌和结肠直肠癌。在一个实施方案中，所述结肠直肠癌是非-微卫星不稳定性-高(非-MSI-H)或熟练的错配修复(pMMR)。在一个实施方案中，上述癌症是晚期、不可切除或转移性的。在一个实施方案中，所述非小细胞肺癌是晚期或IV期。在另一个实施方案中，所述黑色素瘤是晚期或III期。在一个实施方案中，所述患者是抗PD-1或抗PD-L1疗法难治性的。
在一个实施方案中，使用用200 mg派姆单抗或派姆单抗变体和200 mg Ab6或Ab6变体共配制的产品。在另一个实施方案中，使用用200 mg派姆单抗或派姆单抗变体和600mg Ab6或Ab6变体共配制的产品。在一个实施方案中，使用用200 mg派姆单抗或派姆单抗变体和700 mg Ab6或Ab6变体共配制的产品。在另一个实施方案中，使用用200 mg派姆单抗或派姆单抗变体和800 mg Ab6或Ab6变体共配制的产品。在另一个实施方案中，使用用200 mg派姆单抗或派姆单抗变体和1000 mg Ab6或Ab6变体共配制的产品。
在一个进一步实施方案中，所述癌症是非小细胞肺癌，且所述患者缺乏肿瘤活化表皮生长因子受体(EGFR)或快速加速的纤维肉瘤(B-Raf)突变的B同种型并且缺乏间变性淋巴瘤激酶(ALK)或c-ros癌基因1 (ROS1)基因重排。在一个进一步实施方案中，所述癌症是非小细胞肺癌，且所述肿瘤具有鳞状组织学。
所述组合疗法还可以包含一种或多种额外的治疗剂。所述额外的治疗剂可以是，例如，化疗剂、生物治疗剂、免疫原性剂(例如，减弱的癌细胞、肿瘤抗原、抗原呈递细胞诸如用肿瘤衍生的抗原或核酸脉冲的树突细胞、免疫刺激细胞因子(例如，IL-2、IFNα2、GM-CSF)，和用编码免疫刺激细胞因子(诸如但不限于GM-CSF)的基因转染的细胞。所述额外的治疗剂的具体剂量和剂量时间表可以进一步变化，且最佳剂量、给药时间表和施用途径将基于正在使用的具体治疗剂而确定。
化疗剂的实例包括烷化剂诸如噻替派和环磷酰胺；烷基磺酸酯诸如白消安、英丙舒凡(improsulfan)和哌泊舒凡；氮杂环丙烷类诸如苯佐替派(benzodopa)、卡波醌、美妥替哌(meturedopa)和乌瑞替派(uredopa)；乙撑亚胺类和甲基蜜胺类包括六甲蜜胺(altretamine)、三亚乙基蜜胺(triethlenemelamine)、三亚乙基磷酰胺、三亚乙基硫代磷酰胺和三甲基蜜胺(trimethylolomelamine)；多聚乙酰类(acetogenins) (特别是布拉它辛(bullatacin)和布拉它辛酮(bullatacinone))；喜树碱(包括合成的类似物托泊替康)；苔藓抑素(bryostatin)；callystatin；CC-1065 (包括其阿多来新(adozelesin)、卡折来新(carzelesin)和比折来新(bizelesin)合成类似物)；隐藻素(cryptophycin) (特别是隐藻素1和隐藻素8)；多拉司他汀(dolastatin)；多卡米星(duocarmycin) (包括合成类似物，KW-2189和CBI-TMI)；软珊瑚醇(eleutherobin)；水鬼蕉碱(pancratistatin)；珊瑚类二萜(sarcodictyin)；海绵素(spongistatin)；氮芥类诸如苯丁酸氮芥、萘氮芥(chlornaphazine)、胆磷酰胺(cholophosphamide)、雌莫司汀、异环磷酰胺、二氯甲基二乙胺、氧化二氯甲基二乙胺盐酸盐、美法仑、新恩比兴(novembichin)、苯乙酸氮芥胆甾醇酯(phenesterine)、泼尼氮芥、曲磷胺、尿嘧啶氮芥；亚硝基脲类，诸如卡莫司汀、氯脲菌素(chlorozotocin)、福莫司汀、洛莫司汀、尼莫司汀、雷莫司汀(ranimustine)；抗生素，诸如烯二炔抗生素类(例如，加利车霉素(calicheamicin)，特别是加利车霉素γ1I和加利车霉素phiI1，参见例如Agnew, Chem. Intl. Ed. Engl., 33:183-186 (1994)；达内霉素(dynemicin)，包括达内霉素A；双磷酸盐类，诸如氯膦酸(clodronate)；埃斯波霉素(esperamicin)；以及新制癌菌素发色团和相关色蛋白烯二炔类抗生素发色团)、阿克莱诺霉素(aclacinomysin)、放线菌素D、奥瑟霉素(authramycin)、偶氮丝氨酸(azaserine)、博莱霉素(bleomycin)、放线菌素C、carabicin、洋红霉素(caminomycin)、嗜癌霉素(carzinophilin)、色霉素(chromomycinis)、更生霉素、道诺霉素、地托比星(detorubicin)、6-二氮杂-5-氧代-L-正亮氨酸、多柔比星(包括吗啉代-多柔比星、氰基吗啉代-多柔比星、2-吡咯啉子基(pyrrolino)-多柔比星和脱氧多柔比星)、表柔比星、依索比星、伊达比星、麻西罗霉素、丝裂霉素类诸如丝裂霉素C、麦考酚酸、诺加霉素、橄榄霉素、培洛霉素(peplomycin)、泊非霉素(potfiromycin)、嘌呤霉素、三铁阿霉素(quelamycin)、罗多比星(rodorubicin)、链霉黑素、链脲菌素、杀结核菌素、乌苯美司(ubenimex)、净司他丁(zinostatin)、佐柔比星(zorubicin)；抗代谢药，诸如甲氨蝶呤和5-氟尿嘧啶(5-FU)；叶酸类似物，诸如二甲叶酸、甲氨蝶呤、蝶罗呤(pteropterin)、三甲曲沙；嘌呤类似物，诸如氟达拉滨、6-巯基嘌呤、硫咪嘌呤(thiamiprine)、硫鸟嘌呤；嘧啶类似物，诸如安西他滨、阿扎胞苷(6-azacitidine)、6-氮尿苷、卡莫氟、阿糖胞苷、双脱氧尿苷、去氧氟尿苷(doxifluridine)、依诺他滨(enocitabine)、氟尿苷(floxuridine)；雄激素类，诸如二甲睾酮、屈他雄酮丙酸盐、环硫雄醇(epitiostanol)、美雄烷(mepitiostane)、睾内酯；抗肾上腺药，诸如氨基格鲁米特、米托坦、曲洛司坦(trilostane)；叶酸补充剂，诸如亚叶酸；醋葡醛内酯(aceglatone)；醛磷酰胺糖苷；氨基乙酰丙酸；恩尿嘧啶(eniluracil)；安吖啶(amsacrine)；贝塔布辛(bestrabucil)；比生群(bisantrene)；伊达曲仙(edatraxate)；德弗法明(defofamine)；秋水仙胺(demecolcine)；地吖醌(diaziquone)；伊弗尼辛(elfornithine)；依利醋铵；埃博霉素(epothilone)；依托格鲁(etoglucid)；硝酸镓；羟基脲；香菇多糖；氯尼达明(lonidamine)；美登素生物碱类(maytansinoids)，诸如美坦辛(maytansine)和安丝菌素(ansamitocins)；米托胍腙(mitoguazone)；米托蒽醌(mitoxantrone)；莫哌达醇(mopidamol)；二胺硝吖啶(nitracrine)；喷司他丁；蛋氨氮芥(phenamet)；吡柔比星；洛索蒽醌(losoxantrone)；鬼臼酸(podophyllinic acid)；2-乙基酰肼；丙卡巴肼(procarbazine)；雷佐生(razoxane)；根霉素；西左非兰(sizofuran)；锗螺胺(spirogermanium)；细交链孢菌酮酸(tenuazonic acid)；三亚胺醌(triaziquone)；2,2′,2″-三氯代三乙胺；单端孢霉烯类毒素(trichothecenes) (特别是T-2毒素、verracurinA、杆孢菌素(roridin) A和蛇形菌素(anguidine))；乌拉坦(urethan)；长春地辛(vindesine)；达卡巴嗪(dacarbazine)；甘露醇氮芥(mannomustine)；二溴甘露醇(mitobronitol)；二溴卫矛醇(mitolactol)；哌泊溴烷(pipobroman)；gacytosine；阿糖胞苷(“Ara-C”)；环磷酰胺；噻替派(thiotepa)；紫杉烷(taxoid)，例如紫杉醇和多西他赛；苯丁酸氮芥；吉西他滨；6-硫鸟嘌呤；巯基嘌呤；甲氨蝶呤；铂类似物，诸如顺铂和卡铂；长春碱；铂；依托泊苷(VP-16)；异环磷酰胺；米托蒽醌；长春新碱；长春瑞滨；二盐酸米托蒽醌注射液(novantrone)；替尼泊苷；依达曲沙；道诺霉素；氨基蝶呤；卡培他滨(xeloda)；伊班膦酸盐(ibandronate)；CPT-11；拓扑异构酶抑制剂RFS 2000；二氟甲基鸟氨酸(DMFO)；维A酸类，诸如维A酸；卡培他滨；以及上述任何药物的药学上可接受的盐、酸和衍生物。也包括用来调节或抑制作用于肿瘤的激素的抗-激素剂，诸如抗-雌激素和选择性雌激素受体调节剂(SERMs)，包括例如他莫昔芬、雷洛昔芬、屈洛昔芬、4-羟基他莫昔芬、曲沃昔芬(trioxifene)、那洛昔芬(keoxifene)、LY117018、奥那司酮(onapristone)和托瑞米芬(toremifene) (Fareston)；抑制芳香酶的芳香酶抑制剂，其调节肾上腺中雌激素的产生，诸如例如4(5)-咪唑类、氨基格鲁米特、醋酸甲地孕酮、依西美坦(exemestane)、福美坦(formestane)、法倔唑(fadrozole)、伏氯唑(vorozole)、来曲唑和阿那曲唑(anastrozole)；和抗-雄激素类，诸如氟他胺(flutamide)、尼鲁米特(nilutamide)、比卡鲁胺(bicalutamide)、亮丙瑞林和戈舍瑞林；以及上述任何药物的药学上可接受的盐、酸或衍生物。
根据标准药学实践，在本发明的组合疗法中的每种治疗剂可以单独施用，或在包含所述治疗剂和一种或多种药学上可接受的载体、赋形剂和稀释剂的药物(在本文中也被称作药物组合物)中施用。
在本发明的组合疗法中的每种治疗剂可以同时地(即，在相同药物中)、并行地(即，在分开的药物中，以任何顺序施用一种以后马上施用另一种)或以任何顺序依次地施用。当所述组合疗法中的治疗剂呈不同剂型(一种药剂是片剂或胶囊且另一种药剂是无菌液体)和/或按不同给药时间表施用(例如，至少每天施用化疗剂，以更低的频率施用生物治疗剂，诸如每周1次、每2周1次或每3周1次)时，依次施用是特别有用的。
在一些实施方案中，在施用抗PD-1抗体或抗PD-L1抗体之前施用抗LAG3抗体，而在其他实施方案中，在施用抗PD-1抗体或抗PD-L1抗体之后施用抗LAG3抗体。在另一个实施方案中，与抗PD-1抗体或抗PD-L1抗体并行地施用抗LAG3抗体。
在一些实施方案中，使用当将所述组合疗法中的治疗剂中的至少一种用作单一疗法用于治疗相同癌症时常用的相同剂量方案(剂量、频率和治疗持续时间)施用所述药剂。在其他实施方案中，与当将所述组合疗法中的治疗剂中的至少一种用作单一疗法时相比，所述患者接受更低总量的该药剂，例如，更小的剂量、更低频率的给药和/或更短的治疗持续时间。
可以口服地或胃肠外地(包括静脉内、肌肉内、腹膜内、皮下、直肠、局部和经皮施用途径)施用本发明的组合疗法中的每种小分子治疗剂。本发明的组合疗法可以在除去肿瘤的外科手术之前或之后使用，且可以在辐射疗法之前、期间或之后使用。
在一些实施方案中，将本发明的组合疗法施用于先前没有用生物治疗剂或化疗剂治疗的患者，即，未经治疗的患者。在其他实施方案中，将所述组合疗法施用于在用生物治疗剂或化疗剂的先前疗法之后没有实现持久应答的患者，即，经历治疗的患者。
本发明的组合疗法通常用于治疗这样的肿瘤：其足够大、足以通过触诊或通过本领域中众所周知的成像技术(诸如MRI、超声或CAT扫描)发现。
优选地将本发明的组合疗法施用于具有PD-L1和PD-L2中的一种或两种测试阳性且优选地PD-L1表达测试阳性的癌症的人患者。在一些优选实施方案中，在取自患者的肿瘤样品的FFPE或冷冻组织切片上在IHC测定中使用诊断性抗人PD-L1抗体或其抗原结合片段检测PD-L1表达。通常，在用抗PD-1抗体或抗PD-L1抗体和抗LAG3抗体的治疗开始之前，患者的医师会安排诊断测试来确定取自患者的肿瘤组织样品中的PD-L1表达，但设想，所述医师可以在治疗开始之后的任何时间(诸如例如在治疗周期完成后)安排对肿瘤组织切片的第一个或后续诊断测试。在一个实施方案中，通过PD-L1 IHC 22C3 pharmDx测定法测量PD-L1表达。在另一个实施方案中，所述患者具有PD-L1表达≥2的单核炎性密度评分。在另一个实施方案中，所述患者具有PD-L1表达≥3的单核炎性密度评分。在另一个实施方案中，所述患者具有PD-L1表达≥4的单核炎性密度评分。在另一个实施方案中，所述患者具有PD-L1表达≥1%的肿瘤比例评分。在另一个实施方案中，所述患者具有PD-L1表达≥10%的肿瘤比例评分。在另一个实施方案中，所述患者具有PD-L1表达≥20%的肿瘤比例评分。在另一个实施方案中，所述患者具有PD-L1表达≥30%的肿瘤比例评分。在另一个实施方案中，所述患者具有PD-L1表达≥50%的肿瘤比例评分。在一个进一步实施方案中，所述患者具有PD-L1表达≥1%的组合阳性评分。在另一个实施方案中，所述患者具有PD-L1表达≥2的单核炎性密度评分或PD-L1表达≥1%的组合阳性评分。在一个进一步实施方案中，所述患者具有PD-L1表达为1至20 %的组合阳性评分。在一个进一步实施方案中，所述患者具有PD-L1表达≥2%的组合阳性评分。在一个进一步实施方案中，所述患者具有PD-L1表达≥5%的组合阳性评分。在又一个进一步实施方案中，所述患者具有PD-L1表达≥10%的组合阳性评分。在一个进一步实施方案中，所述患者具有PD-L1表达≥15%的组合阳性评分。在又一个进一步实施方案中，所述患者具有PD-L1表达≥20%的组合阳性评分。在另一个实施方案中，所述患者具有非小细胞肺癌和PD-L1表达≥50%的肿瘤比例评分。
此外，可以将本发明的组合疗法施用于具有LAG3表达测试阳性的癌症的人患者。在一些优选实施方案中，在取自患者的肿瘤样品的FFPE或冷冻组织切片上在IHC测定中使用诊断性抗人LAG3抗体或其抗原结合片段检测LAG3表达。通常，在用抗PD-1抗体或抗PD-L1抗体和抗LAG3抗体的治疗开始之前，患者的医师会安排诊断测试来确定取自患者的肿瘤组织样品中的LAG3表达，但设想，所述医师可以在治疗开始之后的任何时间(诸如例如在治疗周期完成后)安排第一个或后续诊断测试。在一个实施方案中，所述患者具有≥1%的CPS-样LAG3%阳性细胞。在一个实施方案中，所述患者具有≥2%的CPS-样LAG3%阳性细胞。在一个实施方案中，所述患者具有≥5%的CPS-样LAG3%阳性细胞。在一个实施方案中，所述患者具有≥10%的CPS-样LAG3%阳性细胞。在一个实施方案中，所述患者具有≥1%的LAG3%阳性细胞。在一个实施方案中，所述患者具有≥2%的LAG3%阳性细胞。在一个实施方案中，所述患者具有≥5%的LAG3%阳性细胞。在一个实施方案中，所述患者具有≥10%的LAG3%阳性细胞。
在本发明的一个优选实施方案中，所述组合疗法中的抗PD-1抗体是纳武单抗，其以选自以下的剂量静脉内施用：1 mg/kg Q2W、2 mg/kg Q2W、3 mg/kg Q2W、5 mg/kg Q2W、10mg Q2W、1 mg/kg Q3W、2 mg/kg Q3W、3 mg/kg Q3W、5 mg/kg Q3W和10 mg/kg Q3W。
在本发明的另一个优选的实施方案中，所述组合疗法中的抗PD-1抗体是派姆单抗或派姆单抗变体，其以选自以下的剂量在液体药物中施用：1 mg/kg Q2W、2 mg/kg Q2W、3mg/kg Q2W、5 mg/kg Q2W、10 mg/kg Q2W、1 mg/kg Q3W、2 mg/kg Q3W、3 mg/kg Q3W、5 mg/kg Q3W、10 mg/kg Q3W，和这些剂量中的任一种的平坦剂量(flat-dose)当量，即，诸如200mg Q3W。在一些实施方案中，派姆单抗作为液体药物提供，所述液体药物包含在10 mM组氨酸缓冲液pH 5.5中的25 mg/ml派姆单抗、7%(w/v)蔗糖、0.02%(w/v)聚山梨酯80。在其他实施方案中，派姆单抗作为液体药物提供，所述液体药物包含：约125至约200 mg/mL的派姆单抗或其抗原结合片段；约10 mM组氨酸缓冲剂；约10 mM L-甲硫氨酸或其药学上可接受的盐；约7% w/v蔗糖；和约0.02% w/v聚山梨酯80。
在本发明的一些实施方案中，每四或六周一次向所述患者施用所述抗PD-1抗体或其抗原结合片段，持续12周或更多周。在其他实施方案中，每六周一次向所述患者施用所述抗PD-1抗体或其抗原结合片段，持续16周或更多周，18周或更多周，20周或更多周，24周或更多周，28周或更多周，30周或更多周，32周或更多周，36周或更多周，40周或更多周，42周或更多周，44周或更多周，48周或更多周，52周或更多周，54周或更多周，56周或更多周，60周或更多周，64周或更多周，66周或更多周，68周或更多周，72周或更多周，76周或更多周，78周或更多周，80周或更多周，84周或更多周，88周或更多周，或90周或更多周。在其他实施方案中，每六周以400 mg施用所述抗PD-1抗体或其抗原结合片段。
在一些实施方案中，通过静脉内输注施用选定剂量的派姆单抗。在一个实施方案中，在25和40分钟之间或约30分钟的时间段内通过静脉内输注施用选定剂量的派姆单抗。
在一些实施方案中，将所述患者用组合疗法治疗至少24周，例如，8个3-周周期。在一些实施方案中，使用组合疗法的治疗持续直到患者表现出PD或CR的迹象。
本公开的药学上可接受的赋形剂包括例如，溶剂、填充剂、缓冲剂、张度调节剂和防腐剂(参见，例如，Pramanick等人, Pharma Times, 45:65-77, 2013)。在一些实施方案中，所述药物组合物可以包含作为溶剂、填充剂、缓冲剂和张度调节剂中的一种或多种发挥功能的赋形剂(例如，盐水中的氯化钠可以充当水性媒介物和张度调节剂两者)。本公开的药物组合物适合用于胃肠外施用。
在一些实施方案中，所述药物组合物包含水性媒介物作为溶剂。合适的媒介物包括例如无菌水、盐水溶液、磷酸盐缓冲盐水和林格氏溶液。在一些实施方案中，所述组合物是等渗的。
所述药物组合物可以包含填充剂。当所述药物组合物待在施用之前冻干时，填充剂是特别有用的。在一些实施方案中，所述填充剂是在冷冻或喷雾干燥期间和/或在储存期间辅助稳定活性剂和阻止活性剂降解的保护剂。合适的填充剂是糖(单糖、二糖和多糖)诸如蔗糖、乳糖、海藻糖、甘露醇、山梨醇、葡萄糖和棉子糖。
所述药物组合物可以包含缓冲剂。缓冲剂在加工、储存和任选的重构期间控制pH以抑制活性剂的降解。合适的缓冲剂包括例如盐，包括乙酸盐、柠檬酸盐、磷酸盐或硫酸盐。其他合适的缓冲剂包括例如氨基酸诸如精氨酸、甘氨酸、组氨酸和赖氨酸。所述缓冲剂还可以包含盐酸或氢氧化钠。在一些实施方案中，所述缓冲剂将所述组合物的pH维持在4-9的范围内。在一些实施方案中，所述pH是大于(下限) 4、5、6、7或8。在一些实施方案中，所述pH是小于(上限) 9、8、7、6或5。也就是说，所述pH是在约4-9的范围内，其中下限小于上限。
所述药物组合物可以包含张度调节剂。合适的张度调节剂包括例如右旋糖、甘油、氯化钠、甘油和甘露醇。
所述药物组合物可以包含防腐剂。合适的防腐剂包括例如抗氧化剂和抗微生物剂。然而，在优选的实施方案中，所述药物组合物在无菌条件下制备且是在一次性使用容器中，且因此不必需包括防腐剂。
在一些实施方案中，包含抗PD-1抗体作为PD-1拮抗剂的药物可作为液体制剂提供或通过在使用之前用无菌注射用水重构冻干粉末而制备。WO 2012/135408描述了适合用于本发明中的包含派姆单抗的液体和冻干药物的制备。在一些实施方案中，将包含派姆单抗的药物提供在玻璃小瓶中，所述玻璃小瓶含有在4 ml溶液中的约100 mg派姆单抗。每1 mL溶液含有25 mg派姆单抗且在L-组氨酸(1.55 mg)、聚山梨酯80 (0.2 mg)、蔗糖(70 mg)和注射用水USP中配制。所述溶液需要稀释才能静脉内输注。
在一些实施方案中，包含抗LAG3抗体的药物可作为液体制剂提供或通过在使用之前用无菌注射用水重构冻干粉末而制备。在一个实施方案中，所述液体制剂包含约25 mg/mL的抗LAG3抗体；约50 mg/mL的蔗糖；约0.2 mg/mL的聚山梨酯80；pH约5.8-6.0的约10 mM的L-组氨酸缓冲剂；约70 mM的其L-精氨酸-HCl；和任选地约10mM的L-甲硫氨酸。
本文描述的药物可以作为试剂盒提供，所述试剂盒包含第一容器和第二容器和包装插页。所述第一容器含有至少一剂包含PD-1拮抗剂的药物，所述第二容器含有7-1200 mg的包含抗LAG3抗体的药物，且所述包装插页或标签包含关于使用所述药物治疗患者的癌症的指导。所述第一和第二容器可以由相同的或不同的形状(例如，小瓶、注射器和瓶子)和/或材料(例如，塑料或玻璃)构成。所述试剂盒可以进一步包含在药物施用中可能有用的其他材料，诸如稀释剂、过滤器、IV袋和管线、针头和注射器。在所述试剂盒的一些优选实施方案中，所述PD-1拮抗剂是抗-PD-1抗体，并且所述指导阐明，所述药物意图用于治疗具有通过IHC测定法测试为PD-L1表达阳性的癌症的患者。
在其他方面，所述药物是抗LAG3抗体或抗原结合片段和抗PD-1抗体或抗原结合片段与总浓度为10-1000mM的精氨酸或其药学上可接受的盐和pH约5-8的缓冲剂以及任选地3-100 mM的甲硫氨酸的共制剂。在一个实施方案中，所述共制剂包含：约10至120 mg/mL的抗LAG3抗体；约10至120 mg/mL的抗PD-1抗体；约30至120 mg/mL蔗糖或海藻糖；约0.05至2mg/mL聚山梨酯80；约3至30 mM的pH约5.0-6.5的L-组氨酸缓冲剂；约40至150 mM L-精氨酸或其药学上可接受的盐；和任选地，约5至70 mM L-甲硫氨酸。WO 2018/204374描述了适用于本发明中的包含Ab6或与派姆单抗共配制的Ab6的液体和冻干药物的制备。
从本文所含的教导，本发明的这些和其他方面(包括下面列出的示例性具体实施方案)将是显而易见的。
本发明的示例性具体实施方案
1. 用于治疗患者中的癌症的抗LAG3抗体，其中所述抗LAG3抗体包含：(a) SEQ IDNO:26、27和28的轻链CDR，和(b) SEQ ID NO:29、30和31的重链CDR，且经由静脉内输注以7-1200 mg施用。
2. 实施方案1所用的抗LAG3抗体，其中向所述患者施用100 mg的抗LAG3抗体。
3. 实施方案1所用的抗LAG3抗体，其中向所述患者施用200 mg的抗LAG3抗体。
4. 实施方案1所用的抗LAG3抗体，其中向所述患者施用700 mg的抗LAG3抗体。
5. 实施方案1所用的抗LAG3抗体，其中向所述患者施用800 mg的抗LAG3抗体。
6. 实施方案1至5所用的抗LAG3抗体，其中每三周一次在第1天向所述患者施用所述抗LAG3抗体。
7. 实施方案1至6中任一项所用的抗LAG3抗体，其中所述抗LAG3抗体包含重链和轻链，且其中所述重链含有包含SEQ ID NO:25的重链可变区，且所述轻链含有包含SEQ IDNO:24的轻链可变区。
8. 实施方案1至6中任一项所用的抗LAG3抗体，其中所述抗LAG3抗体包含重链和轻链，且其中所述重链包含SEQ ID NO:23且所述轻链包含SEQ ID NO:22。
9. 实施方案1至6中任一项所用的抗LAG3抗体，其中所述抗LAG3抗体是Ab6变体。
10. 实施方案1至9中任一项所用的抗LAG3抗体，其中所述抗LAG3抗体与抗PD-1抗体或抗PD-L1抗体或其抗原结合片段共同施用。
11. 实施方案1至9所用的抗LAG3抗体，其中所述抗LAG3抗体与抗PD-1抗体或抗PD-L1抗体或其抗原结合片段共配制。
12. 实施方案10或11所用的抗LAG3抗体，其中所述抗PD-1抗体或其抗原结合片段特异性结合人PD-1并阻断人PD-L1与人PD-1的结合。
13. 实施方案12所用的抗LAG3抗体，其中所述抗PD-1抗体或其抗原结合片段也阻断人PD-L2与人PD-1的结合。
14. 实施方案13所用的抗LAG3抗体，其中所述抗PD-1抗体或其抗原结合片段包含：(a) SEQ ID NO:1、2和3的轻链CDR，和(b) SEQ ID NO:6、7和8的重链CDR。
15. 实施方案13所用的抗LAG3抗体，其中所述抗PD-1抗体包含重链和轻链，且其中所述重链含有包含SEQ ID NO:9的重链可变区，且所述轻链含有包含SEQ ID NO:4的轻链可变区。
16. 实施方案13所用的抗LAG3抗体，其中所述抗PD-1抗体包含重链和轻链，且其中所述重链包含SEQ ID NO:10且所述轻链包含SEQ ID NO:5。
17. 实施方案13所用的抗LAG3抗体，其中所述抗PD-1抗体是派姆单抗。
18. 实施方案13所用的抗LAG3抗体，其中所述抗PD-1抗体是派姆单抗变体。
19. 实施方案10所用的抗LAG3抗体，其中所述抗PD-1抗体是纳武单抗。
20. 实施方案10所用的抗LAG3抗体，其中所述抗PD-L1抗体是阿特朱单抗、德瓦鲁单抗或阿维鲁单抗。
21. 实施方案14-18中任一项所用的抗LAG3抗体，其中所述抗PD-1抗体经由静脉内输注每三周一次在第1天以200 mg施用。
22. 实施方案14-18中任一项所用的抗LAG3抗体，其中所述抗PD-1抗体经由静脉内输注每六周一次在第1天以400 mg施用。
23. 实施方案10或11所用的抗LAG3抗体，其中所述抗PD-1抗体是包含重链和轻链的人源化抗PD-1抗体，且其中所述重链含有包含SEQ ID NO:6、7和8的重链CDR的重链可变区，且所述轻链含有包含SEQ ID NO:1、2和3的轻链CDR的轻链可变区；且所述抗LAG3抗体是包含重链和轻链的人源化抗LAG3抗体，且其中所述重链含有包含SEQ ID NO:29、30和31的重链CDR的重链可变区，且所述轻链含有包含SEQ ID NO:26、27和28的轻链CDR的轻链可变区。
24. 实施方案10或11所用的抗LAG3抗体，其中所述抗PD-1抗体包含重链和轻链，且其中所述重链含有包含SEQ ID NO:9的重链可变区，且所述轻链含有包含SEQ ID NO:4的轻链可变区；且所述抗LAG3抗体包含重链和轻链，且其中所述重链含有包含SEQ ID NO:25的重链可变区，且所述轻链含有包含SEQ ID NO:24的轻链可变区。
25. 实施方案10或11所用的抗LAG3抗体，其中所述抗PD-1抗体包含重链和轻链，且其中所述重链包含SEQ ID NO:10且所述轻链包含SEQ ID NO:5；且所述抗LAG3抗体包含重链和轻链，且其中所述重链包含SEQ ID NO:23且所述轻链包含SEQ ID NO:22。
26. 实施方案23-25中任一项所用的抗LAG3抗体，其中所述抗PD-1抗体经由静脉内输注每三周一次在第1天以200 mg施用，且所述抗LAG3抗体经由静脉内输注每三周一次在第1天以200 mg施用。
27. 实施方案23-25中任一项所用的抗LAG3抗体，其中所述抗PD-1抗体经由静脉内输注每六周一次在第1天以400 mg施用，且所述抗LAG3抗体经由静脉内输注每三周一次在第1天以200 mg施用。
28. 实施方案23-25中任一项所用的抗LAG3抗体，其中所述抗PD-1抗体经由静脉内输注每三周一次在第1天以200 mg施用，且所述抗LAG3抗体经由静脉内输注每三周一次在第1天以700或800 mg施用。
29. 实施方案23-25中任一项所用的抗LAG3抗体，其中所述抗PD-1抗体经由静脉内输注每六周一次在第1天以400 mg施用，且所述抗LAG3抗体经由静脉内输注每三周一次在第1天以700或800 mg施用。
30. 实施方案23-25中任一项所用的抗LAG3抗体，其中200 mg的抗PD-1抗体与200mg抗LAG3抗体共配制。
31. 实施方案23-25中任一项所用的抗LAG3抗体，其中200 mg的抗PD-1抗体与800mg抗LAG3抗体共配制。
32. 实施方案1至31中任一项所用的抗LAG3抗体，其中所述癌症选自：头颈鳞状细胞癌、胃癌、胃和/或胃-食管连接部的腺癌、肾细胞癌、输卵管癌、子宫内膜癌和非-微卫星不稳定性-高(非-MSI-H)或熟练错配修复(pMMR)结肠直肠癌。
33. 实施方案1至31中任一项所用的抗LAG3抗体，其中所述癌症选自：肾细胞癌，肾盂、输尿管、膀胱或尿道的尿路上皮癌，黑色素瘤，胃癌，非小细胞肺癌和膀胱癌。
34. 实施方案1至31中任一项所用的抗LAG3抗体，其中所述癌症是经典霍奇金淋巴瘤(cHL)、弥漫性大B-细胞淋巴瘤(DLBCL)或惰性非霍奇金淋巴瘤(iNHL)。
35. 实施方案1至34中任一项所用的抗LAG3抗体，其中所述个体先前未用抗PD-1或抗PD-L1疗法治疗或在接受先前的抗PD-1或抗PD-L1疗法的同时被证实为进展性的。
36. 实施方案1至35中任一项所用的抗LAG3抗体，其中所述个体的肿瘤细胞是PD-L1表达阳性的。
37. 实施方案1至36中任一项所用的抗LAG3抗体，其中所述个体具有PD-L1表达≥2的单核炎性密度评分。
38. 实施方案1至37中任一项所用的抗LAG3抗体，其中所述个体具有PD-L1表达≥1%的组合阳性评分。
39. 实施方案1至37中任一项所用的抗LAG3抗体，其中所述个体具有PD-L1表达≥10%的组合阳性评分。
40. 实施方案37-39中任一项所用的抗LAG3抗体，其中通过PD-L1 IHC 22C3pharmDx测定法测量PD-L1表达。
41. 药物组合物，其包含200 mg派姆单抗或派姆单抗变体和200 mg Ab6或Ab6变体以及药学上可接受的赋形剂。
42. 药物组合物，其包含200 mg派姆单抗或派姆单抗变体和800 mg Ab6或Ab6变体以及药学上可接受的赋形剂。
43. 抗LAG3抗体，其用于与抗PD-1抗体组合使用以治疗患者中的胃癌，其中所述患者的肿瘤组织切片是PD-L1表达阳性的。
44. 实施方案43所用的抗LAG3抗体，其中所述胃癌是胃腺癌和/或胃-食管连接部腺癌。
45. 抗LAG3抗体，其用于与抗PD-1抗体组合使用以治疗患者中的头颈鳞状细胞癌，其中所述患者的肿瘤组织切片是PD-L1表达阳性的。
46. 抗LAG3抗体，其用于与抗PD-1抗体组合使用以治疗患者中的非-微卫星不稳定性-高(非-MSI-H)或熟练错配修复(pMMR)结肠直肠癌，其中所述患者的肿瘤组织切片是PD-L1表达阳性的，且% LAG3阳性细胞或CPS-样% LAG3阳性细胞为≥1%。
47. 实施方案43-46所用的抗LAG3抗体，其中所述患者先前未接受用抗PD-1抗体或抗PD-L1抗体的疗法。
48. 实施方案43-47所用的抗LAG3抗体，其中所述患者的肿瘤组织切片具有PD-L1表达≥1%的组合阳性评分(CPS)。
49. 实施方案43-47所用的抗LAG3抗体，其中所述患者的肿瘤组织切片具有PD-L1表达≥5%的组合阳性评分。
50. 实施方案43-47所用的抗LAG3抗体，其中所述患者的肿瘤组织切片具有PD-L1表达≥10%的组合阳性评分。
51. 实施方案43-47所用的抗LAG3抗体，其中所述患者的肿瘤组织切片具有PD-L1表达≥20%的组合阳性评分。
52. 实施方案43-47所用的抗LAG3抗体，其中所述患者的肿瘤组织切片具有肿瘤比例评分(TPS) ≥1%或单核炎性密度评分(MIDS) ≥2%。
53. 实施方案43-52所用的抗LAG3抗体，其中通过PD-L1 IHC 22C3 pharmDx测定法测量PD-L1表达。
54. 实施方案43-53所用的抗LAG3抗体，其中所述肿瘤组织切片的% LAG3阳性细胞为≥1%。
55. 实施方案43-53所用的抗LAG3抗体，其中所述肿瘤组织切片的CPS-样% LAG3阳性细胞为≥1%。
56. 实施方案43-55所用的抗LAG3抗体，其中所述抗PD-1抗体或其抗原结合片段特异性结合人PD-1并阻断人PD-L1与人PD-1的结合。
57. 实施方案56所用的抗LAG3抗体，其中所述抗PD-1抗体或其抗原结合片段也阻断人PD-L2与人PD-1的结合。
58. 实施方案57所用的抗LAG3抗体，其中所述抗PD-1抗体或其抗原结合片段包含：(a) SEQ ID NO:1、2和3的轻链CDR，和(b) SEQ ID NO:6、7和8的重链CDR。
59. 实施方案57所用的抗LAG3抗体，其中所述抗PD-1抗体包含重链和轻链，且其中所述重链含有包含SEQ ID NO:9的重链可变区，且所述轻链含有包含SEQ ID NO:4的轻链可变区。
60. 实施方案57所用的抗LAG3抗体，其中所述抗PD-1抗体包含重链和轻链，且其中所述重链包含SEQ ID NO:10且所述轻链包含SEQ ID NO:5。
61. 实施方案57所用的抗LAG3抗体，其中所述抗PD-1抗体是派姆单抗。
62. 实施方案57所用的抗LAG3抗体，其中所述抗PD-1抗体是派姆单抗变体。
63. 实施方案57所用的抗LAG3抗体，其中所述抗PD-1抗体是纳武单抗。
64. 实施方案43-63中任一项所用的抗LAG3抗体，其中所述抗LAG3抗体包含重链和轻链，且其中所述重链含有包含SEQ ID NO:25的重链可变区，且所述轻链含有包含SEQID NO:24的轻链可变区。
65. 实施方案43-63中任一项所用的抗LAG3抗体，其中所述抗LAG3抗体包含重链和轻链，且其中所述重链包含SEQ ID NO:23且所述轻链包含SEQ ID NO:22。
66. 实施方案43-63中任一项所用的抗LAG3抗体，其中所述抗LAG3抗体是Ab6变体。
67. 实施方案43-66中任一项所用的抗LAG3抗体，其中所述抗LAG3抗体与抗PD-1抗体或其抗原结合片段共同施用。
68. 实施方案43-66中任一项所用的抗LAG3抗体，其中所述抗LAG3抗体与抗PD-1抗体或其抗原结合片段共配制。
一般方法
分子生物学中的标准方法描述于：Sambrook, Fritsch和Maniatis (1982 & 1989第2版，2001第3版) Molecular Cloning, A Laboratory Manual, Cold Spring HarborLaboratory Press, Cold Spring Harbor, NY；Sambrook和Russell (2001) Molecular Cloning, 第3版, Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, NY；Wu (1993) Recombinant DNA, 第217卷, Academic Press, San Diego, CA)。标准方法还出现于Ausbel, 等人(2001) Current Protocols in Molecular Biology, 第1-4卷,John Wiley and Sons, Inc. New York, NY，其描述细菌细胞中的克隆和DNA诱变(第1卷)、哺乳动物细胞和酵母中的克隆(第2卷)、糖缀合物和蛋白表达(第3卷)和生物信息学(第4卷)。
描述了用于蛋白纯化的方法，包括免疫沉淀、色谱法、电泳、离心和结晶(Coligan等人(2000) Current Protocols in Protein Science,第1卷, John Wiley and Sons,Inc., New York)。描述了化学分析、化学修饰、翻译后修饰、融合蛋白的产生、蛋白的糖基化(参见例如Coligan等人(2000) Current Protocols in ProteinScience，第2卷 ，JohnWiley and Sons, Inc., New York；Ausubel等人(2001) Current Protocols in Molecular Biology，第3卷 ，John Wiley and Sons,Inc., NY, NY，第16.0.5-16.22.17页；Sigma-Aldrich, Co. (2001) Products for Life Science Research, St. Louis,MO；第45-89页；Amersham Pharmacia Biotech(2001) BioDirectory, Piscataway, N.J.，第384-391页)。描述了多克隆和单克隆抗体的产生、纯化和片段化(Coligan等人(2001)Current Protcols in Immunology，第1卷，John Wiley and Sons, Inc., New York；Harlow和Lane(1999) Using Antibodies, Cold Spring Harbor Laboratory Press,Cold Spring Harbor, NY；Harlow和Lane，同上)。用于表征配体/受体相互作用的标准技术是可得的(参见例如Coligan等人(2001) Current Protocols in Immunology，第4卷 ，John Wiley, Inc., New York)。
可制备单克隆、多克隆和人源化抗体(参见例如Sheperd和Dean(编辑) (2000)Monoclonal Antibodies, Oxford Univ. Press, New York, NY；Kontermann和Dubel(编辑) (2001) Antibody Engineering, Springer-Verlag, New York；Harlow和Lane(1988)Antibodies A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory Press, ColdSpring Harbor, NY，第139-243页；Carpenter等人(2000) J. Immunol. 165：6205；He等人(1998) J. Immunol. 160：1029；Tang等人(1999) J. Biol. Chem. 274: 27371-27378；Baca等人(1997) J. Biol. Chem. 272: 10678-10684；Chothia等人(1989) Nature 342:877-883；Foote和Winter (1992) J. Mol. Biol. 224: 487-499；美国专利号6,329,511)。
人源化的一种替代方案是使用在噬菌体上展示的人类抗体文库或在转基因小鼠中人类抗体文库(Vaughan等人(1996) Nature Biotechnol. 14: 309-314；Barbas (1995)Nature Medicine 1: 837-839；Mendez等人(1997) Nature Genetics 15: 146-156；Hoogenboom和Chames (2000) Immunol. Today 21: 371-377；Barbas等人(2001) Phage Display: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory Press, ColdSpring Harbor, New York；Kay等人(1996) Phage Display of Peptides and Proteins: A Laboratory Manual, Academic Press, San Diego, CA；de Bruin等人(1999) Nature Biotechnol. 17: 397-399)。
抗原的纯化不是抗体产生所必需的。动物可用携带目标抗原的细胞免疫。然后可以从免疫的动物分离脾细胞，且脾细胞可与骨髓瘤细胞系融合以产生杂交瘤(参见例如Meyaard等人(1997)Immunity 7: 283-290；Wright等人(2000) Immunity13: 233-242；Preston等人，同上；Kaithamana等人(1999) J. Immunol. 163: 5157-5164)。
抗体可缀合至例如小药物分子、酶、脂质体、聚乙二醇(PEG)。抗体可用于治疗、诊断、试剂盒或其他目的，且包括偶联至例如染料、放射性同位素、酶或金属(例如胶态金)的抗体(参见例如Le Doussal等人(1991) J. Immunol. 146: 169-175；Gibellini等人(1998) J. Immunol. 160: 3891-3898；Hsing和Bishop (1999) J. Immunol. 162: 2804-2811；Everts等人(2002) J. Immunol. 168: 883-889)。
用于流式细胞术的方法，包括荧光活化的细胞分选(FACS)，是可得的(参见例如Owens, 等人 (1994) Flow Cytometry Principles for Clinical Laboratory Practice, John Wiley and Sons, Hoboken, NJ; Givan (2001) Flow Cytometry, 第2版 ；Wiley-Liss, Hoboken, NJ; Shapiro (2003) Practical Flow Cytometry, JohnWiley and Sons, Hoboken, NJ)。适用于修饰核酸(包括核酸引物和探针、多肽和抗体)以用作例如诊断试剂的荧光试剂是可得的(Molecular Probes (2003) Catalogue,Molecular Probesy, Inc., Eugene, OR; Sigma-Aldrich (2003) Catalogue, St.Louis, MO)。
描述了免疫系统的组织学的标准方法(参见例如Muller-Harmelink (编辑)(1986) Human Thymus: Histopathology and Pathology, Springer Verlag, New York,NY；Hiatt等人(2000) Color Atlas of Histology, Lippincott, Williams, andWilkins, Phila, PA；Louis等人(2002) Basic Histology: Text and Atlas, McGraw-Hill, New York, NY)。
用于测定例如抗原片段、前导序列、蛋白折叠、功能结构域、糖基化位点和序列比对的软件包和数据库是可得的(参见例如GenBank, Vector NTI® Suite (Informax,Inc, Bethesda, MD)；GCG Wisconsin Package (Accelrys, Inc., San Diego, CA)；DeCypher® (TimeLogic Corp., Crystal Bay, Nevada)；Menne, 等人(2000)Bioinformatics 16: 741-742；Menne, 等人(2000) Bioinformatics Applications Note16: 741-742；Wren, 等人 (2002) Comput. Methods Programs Biomed. 68: 177-181；von Heijne (1983) Eur. J. Biochem. 133: 17-21；von Heijne (1986) Nucleic Acids Res. 14: 4683-4690)。
实施例
实施例1：抗LAG3抗体在晚期实体瘤中的临床研究
这是一项在具有晚期实体瘤的组织学或细胞学证实的诊断的受试者中的抗LAG3抗体Ab6单一疗法(部分A，组1)和Ab6与派姆单抗的组合(部分A，组2)的多站点、开放标签、剂量递增研究，随后为Ab6与派姆单抗的组合的非随机和随机的剂量证实，连同作为单一疗法以及与派姆单抗的组合(部分B)的Ab6的效力评估。
在该研究的部分A期间，通过非随机指定至2个治疗组中的1个来分配受试者：
组1：Ab6，作为单一疗法，经由静脉内输注(IV)每3周(Q3W)递增剂量7、21、70、210或700 mg。
组2：Ab6，每3周(Q3W) IV递增剂量7、21、70、210或700 mg，其与派姆单抗(200 mgQ3W) IV组合
部分B是与派姆单抗组合的Ab6的剂量证实。此外，扩展群组评价作为单一疗法和与派姆单抗组合的Ab6的抗肿瘤效力。部分B由5个治疗组组成：
表4 试验治疗
Figure 736008DEST_PATH_IMAGE012
Figure 790552DEST_PATH_IMAGE013
Figure 220396DEST_PATH_IMAGE015
该试验使用基于预先指定的剂量限制毒性(DLT)的标准的适应性设计。对于剂量递增(部分A，组1和组2)，利用3+3剂量递增设计。对于剂量证实(部分B)，利用毒性概率间隔(TPI)设计来完善来自部分A、组2的初步推荐的2期剂量(RPTD)的估计值。此外，部分B比较2剂Ab6与派姆单抗的组合的安全性和抗肿瘤效力。
在部分A、组1(Ab6单一疗法)中，研究从3+3设计开始，以鉴定初步的最大耐受剂量(MTD)或最大施用剂量(MAD)。在部分A的两组中的3+3剂量递增期间，将3个受试者的初始群组登记至剂量水平。如果3个受试者无一在第一个21天周期期间经历DLT，则递增至下一剂量。如果3个受试者中的1个经历DLT，则另外3个受试者登记在该剂量水平。如果在6个受试者中观察到1例DLT，则继续剂量递增。如果3个受试者中超过1个或6个受试者中超过1个在剂量水平发展DLT，则终止剂量递增，并在先前的剂量水平进行研究。
部分A、组2中的治疗(Ab6与派姆单抗的组合)从3+3设计开始，以鉴定部分B的初步RPTD。Ab6的起始剂量比部分A、组1中所测试的剂量低至少1个剂量水平。在部分A、组2中使用固定剂量的200 mg派姆单抗。
与派姆单抗组合的Ab6的剂量比单一疗法剂量低至少1个剂量水平，并且不会超过部分A、组1的MTD或MAD。然而，一旦建立部分A、组1的MTD或MAD，则部分A、组2中的Ab6的剂量继续递增直至该剂量。为了登记至组2的最后2个剂量水平，第二高剂量水平的所有3(或6)个受试者在最高剂量水平开始登记之前完成了1个治疗周期和DLT评估。
在部分B中，在未经PD-1治疗的头颈鳞状细胞癌(HNSCC)、非-MSI-H或pMMR结肠直肠癌(CRC)、PD-1治疗失败的HNSCC和未经PD-1/PDL-1治疗的胃癌中评价剂量证实和初步抗肿瘤效力。部分B还评价与派姆单抗和mFOLFOX7(最多达20个受试者)或FOLFIRI(最多达20个受试者)组合施用的Ab6(在初步RP2D)在已经接受≤1线先前疗法的具有微卫星稳定(MSS)的未经PD-1-治疗的CRC的受试者中的安全性和抗肿瘤效力。
群组A登记具有非-MSI-H或pMMR CRC的受试者，其未经先前的PD-1/PD-L1疗法治疗，并且已经在所有可用的标准护理疗法后进展。测试作为单一疗法(组1)、与派姆单抗的组合(组2A和2C)以及作为共制剂(Ab6A，组5)的Ab6的抗肿瘤效力。在最多达20个受试者中以800 mg的剂量施用单一疗法Ab6 (组1)。在组2中，最多达100个受试者用200 mg Ab6加派姆单抗的组合治疗(组2A)，并且近似40个受试者用800 mg Ab6加派姆单抗的组合治疗(组2C)。登记群组A中的40个受试者，以评价Ab6A、800 mg Ab6和派姆单抗的共配制产品的安全性、PK和初步效力(组5)。
群组B登记在≤1线先前疗法后已经进展的未经先前PD-1/PD-L1疗法治疗的具有非-MSI-H或pMMR CRC的受试者。群组B测试与派姆单抗和mFOLFOX7(最多达20个受试者，组3)或FOLFIRI (最多达20个受试者，组4)组合施用的Ab6 (800 mg)的抗肿瘤效力。
群组C登记未经先前PD-1/PD-L1疗法治疗且在≤1线先前化疗后已经进展的具有HNSCC的受试者。受试者接受200 mg Ab6与派姆单抗的组合(组2A)以评估抗肿瘤效力。
群组D登记在先前抗PD-1/PD-L1疗法后已经进展的具有HNSCC的受试者。受试者接受200 mg Ab6与派姆单抗的组合(组2A)以评估抗肿瘤效力。
群组E登记未经先前PD-1/PD-L1疗法治疗且在≤1线先前化疗后已经进展的具有胃腺癌的受试者。群组E采用2剂与固定剂量的派姆单抗组合的Ab6 (200 mg [组2A]和700mg [组2B])的随机比较。此外，如果在群组E的组2中观察到抗肿瘤活性(40个受试者中的≥8个具有客观应答，与剂量无关)，则登记额外20个具有胃癌的受试者以接受Ab6 (800 mg)单一疗法(组1)。
受试者纳入标准
1. 部分A - 具有组织学或细胞学证实的转移性实体瘤，对于所述转移性实体瘤，没有可以传达临床益处的疗法可用。
部分B – 具有以下组织学或细胞学证实的肿瘤类型之一：
a. 群组A – 组1、组2A、组2C和组5的CRC：起源于结肠或直肠的CRC，其为局部晚期不可切除或转移性的(即，IV期)，并且已经接受所有可用的标准护理疗法(包括氟嘧啶、奥沙利铂和伊立替康)且在所有可用的标准护理疗法(包括氟嘧啶、奥沙利铂和伊立替康)后进展、但尚未用先前的抗PD-1/PD-L1疗法治疗。
b. 群组B – 组3和组4的CRC：起源于结肠或直肠的CRC，其为局部晚期不可切除或转移性的(即，IV期)，且已经用≤1线全身疗法治疗，但未用先前的抗PD-1/PD-L1疗法治疗。有资格接受EGFR-靶向疗法的受试者必须先前已经接受该治疗，以便有资格参加研究。
c. 群组C和群组D - 被视为通过局部疗法无法治愈的HNSCC。接受含铂全身疗法后，受试者应当已经进展。允许作为局部晚期疾病的多模式治疗的一部分给予的全身疗法。有资格的原发性肿瘤位置是口咽、口腔、下咽和喉。受试者可能没有鼻咽的原发性肿瘤部位(任何组织学)。在未经PD-1治疗的HNSCC群组(群组C)中登记的受试者可能没有用先前的抗PD-1/PD-L1疗法治疗。
PD-1治疗失败的HNSCC群组(群组D)中登记的受试者必须是作为单一疗法或与其他批准的检查点抑制剂或其他疗法(根据其标签)组合的FDA批准的抗PD-1/PD-L1单克隆抗体(mAb)难治的，其被定义为(受试者必须满足所有以下条件)：
i. 已经接受至少2剂抗PD-1/PD-L1 mAb。
ii. 在根据RECIST 1.1定义的抗PD-1/PD-L1 mAb后具有进展性疾病。在没有快速临床进展的情况下，PD的初步证据应当通过第二次评价进行证实，从首次记录PD之日起不少于4周。
iii. 在最后一剂抗PD-1/PD-L1 mAb的24周内已经记录PD。只要在最后治疗日期(用抗PD-1/PD-L1 mAb)的24周内记录到PD，则将允许用抗PD-1/PD-L1 mAb再次治疗的患者和用抗PD-1/PD-L1 mAb维持的患者进入试验。
d. 群组E-胃和/或胃-食管连接部(GEJ)的腺癌，其被认为无法手术，并且已接受至少1线先前的化疗方案或HER2/neu-靶向的批准疗法(如果HER2/neu-阳性)并且在其后进展。在两种情况下，受试者必须没有用先前的抗PD-1/PD-L1疗法治疗。具有通过irRECIST1.1标准可测量的疾病。
在研究的部分A中，作为单一疗法和与200 mg派姆单抗组合的Ab6被良好耐受，并且在所有测试剂量下都具有可管控的安全性概况。没有任何DLT的情况下，剂量递增进行至700 mg的最大剂量。
对于该研究的部分A中治疗的受试者，包括18个用Ab6单一疗法治疗的受试者和15个用组合疗法治疗的受试者，可得到效力数据。在部分A中，受试者接受单独或与200 mg固定剂量的派姆单抗组合的7 mg和700 mg之间的5种预先选择的Ab6剂量之一。在所有剂量的单一疗法组1上治疗的受试者中，ORR为5.5%，其中1个具有子宫内膜癌(微卫星稳定)的受试者经历部分应答。该受试者接受210 mg Ab6剂量。在组1中，在具有平滑肌肉瘤的患者和具有阑尾癌的患者中也观察到稳定的疾病。
在所有Ab6剂量的组合组2上治疗的受试者中，客观应答率(ORR)为26%，其中15个受试者中的4个经历部分应答，其中3个已经用随访CT扫描放射照相证实。应答者在2个受试者中被诊断为具有结肠直肠癌(微卫星熟练的)，剂量为21 mg(图1)和70 mg Ab6，在1个受试者中被诊断为具有肾细胞癌，剂量为7 mg Ab6 (图2)，并且在1个受试者中被诊断为具有输卵管癌(BRCA阴性)，剂量为70 mg Ab6。在部分A中的组合治疗组上治疗的6个结肠直肠癌受试者中，ORR为33%。具有GE连接部的腺癌的患者接受70 mg Ab6与派姆单抗的组合，并且与基线相比经历靶病灶大小的28%减小。另一个具有Amupllary癌症的患者经历稳定的疾病。
部分B受试者中的应答率在许多群组中已经表明有希望的活性。在部分B非-MSI-H/pMMR CRC群组中，39个受试者中的4个经历客观应答(ORR和DCR分别为10.2%和25.6%)。相比之下，非-MSI-H/pMMR CRC中的派姆单抗单一疗法活性差至不存在(O’Neil BH等人 PLoS One. 2017; 12(12)，并且瑞戈非尼和TAS-102 (3L CRC中批准的药剂)具有2个月的OS益处，且ORR为~1-2%。在胃群组中，46个受试者中的6个经历客观应答(ORR和DCR分别为13%和39%)。3例应答在700 mg Ab6剂量，3例应答在200 mg Ab6剂量。与之相比，在用派姆单抗单一疗法治疗的三线胃受试者中，ORR为11.2% (Fuchs, 等人 Journal of ClinicalOncology 35, no. 15_suppl (May 20 2017) 4003-4003)。在PD-1未治疗的HNSCC群组中，23个受试者中的6个经历客观应答(ORR和DCR分别为26.1%和69.5%)。来自Keynote-055派姆单抗单一疗法的结果表明在至少2线先前疗法后已经进展的PD-1未治疗的HNSCC患者中的客观应答率为18% (Baumi J. 等人 Journal of Clinical Oncology 34 no.15 suppl_(May 20 2016) 6011-6011)。
在上述用200 mg Q3W Ab6和200 mg Q3W 派姆单抗的组合的I期研究的部分B中已经治疗了59个具有头颈鳞状细胞癌(HNSCC)的受试者：39个具有未经PD-1治疗的HNSCC的受试者和20个具有PD-1治疗失败的HNSCC的受试者。具有未经PD-1治疗的HNSCC的受试者中的ORR(经证实)为12.8%(39个中的5个，95% CI：4.3，27.4)且DCR为53.8% (39个中的21个，95%CI：37.2，69.9)。具有未经PD-1治疗的HNSCC的受试者中的ORR(未经证实)为23.1%(39个中的9个，95% CI：11.1，39.3)且DCR为56.4% (39个中的22个，95% CI：39.6，72.2)。具有PD-1治疗失败的HNSCC的受试者中的ORR(经证实)为0%(20个中的0个)且DCR为20.0% (20个中的4个，95% CI：5.7，43.7)。具有PD-1治疗失败的HNSCC的患者中的ORR(未经证实)为5%(20个的1个，95% CI：0.1，24.9)且DCR为25%(20个中的5个，95% CI：8.7，49.1)。
在用Ab6与200 mg Q3W 派姆单抗的组合的部分B中，已经治疗了78个具有胃癌的患者：39个为200 mg剂量水平的Ab6，且39个为700 mg剂量水平的Ab6。200 mg剂量水平的ORR(经证实)为7.7%(39个中的3个，95% CI：1.6，20.9)且DCR为23.1%(39个中的9个，95%CI：11.1，39.3)。200 mg剂量水平的ORR(未经证实)为7.7%(39个中的3个，95% CI：1.6，20.9)且DCR为25.6%(39个中的10个，95% CI：13.0，42.1)。700 mg剂量水平的ORR(经证实)为10.3%(39个中的4个，95% CI：2.9，24.2)，且DCR为33.3%(39个中的13个，95% CI：19.1，50.2)。700 mg剂量水平的ORR(未经证实)为15.4%(39个中的6个，95% CI：5.9，30.5)且DCR为35.9% (39个中的14个，95% CI：21.2，52.8)。
实施例2：Ab6的药代动力学(PK)研究
来自在Ab6(单独和与派姆单抗组合的Ab6)的部分A期间以7 mg至700 mg的剂量治疗的受试者的PK数据显示，血清Ab6暴露以剂量依赖性方式增加(图5)。在Ab6施用的第1、2、8、15和21天收集来自患者的血液样品用于PK分析。Ab6暴露的PK概况表明，在210 mg和700mg剂量下，靶标受体介导的Ab6的清除是饱和的(图6)。
可溶性(sLAG3)是在免疫细胞上表达的膜结合的LAG3的切割产物。LAG3的切割是最佳的T-细胞功能所需的(Goldberg和Drake, LAG-3 in Cancer Immunotherapy;Dranoff G. (编) Cancer Immunology and Immunotherapy (2010); Current Topics inMicrobiology and Immunology, vol 344. Springer, Berlin, Heidelberg)。sLAG在健康患者中的血清中可检测到，并且在更大程度上，在具有癌症和慢性炎性病症的患者中可检测到。在临床前模型中，观察到sLAG3在Ab6施用后在血清中以剂量依赖性方式增加。Ab6结合sLAG3和膜LAG3两者。如果sLAG3饱和度高，则预期膜LAG3饱和度也高。因此，sLAG3被选为靶标接合药效动力学标志物。
来自在Ab6(单独和与派姆单抗组合的Ab6)的部分A期间以7 mg至700 mg的剂量治疗的受试者的靶标接合药效动力学标志物sLAG3的数据也显示，血清中总可溶性LAG-3的剂量依赖性增加，通常在210 mg和700 mg剂量接近饱和(图6)。
与基于食蟹猴PK参数预测的抗体半衰期相比，Ab6出乎意料地具有较短的半衰期，这是由于其清除率为从食蟹猴预测的清除率的近似三倍快(预测的CL人 = 0.168 L/天)，或者与典型的单克隆抗体相比比预测的清除率更快(Ryman, J. T., & Meibohm, B.(2017). Pharmacokinetics of Monoclonal Antibodies. CPT: pharmacometrics & systems pharmacology, 6(9), 576–588)。上述I期研究暴露的初步PK分析表明，考虑到研究受试者中观察到的PK(几何CV> 100%)C谷变异性，Ab6的靶标受体介导的清除率(反映膜LAG-3的靶标接合)更可能在≥700 mg剂量下保持饱和(图10、11和15)。
来自在上述I期研究的部分A和部分B期间治疗的受试者的靶标接合药效动力学标志物的数据表明，血清中的总sLAG-3的剂量依赖性增加(反映sLAG-3的靶标接合)(图12)。在Ab6的临床700 mg剂量，[sLAG3]在整个给药间隔中处于平台期，表明与较低剂量相比，整个给药间隔中均维持Ab6的作用。
此外，在200 mg，13%的患者中的Ab6 PK暴露(第21天C谷)处于定量下限(BLQ)，并且在700 mg，0%的患者的PK暴露(第21天C谷)处于BLQ (参见表6)。BLQ根据J Pharm BiomedAnal. 2019 Jul 15;171:204-211建立。Ab6的高PK变异性加快速清除率导致患者在较低的200 mg水平下达到BLQ。通常，700 mg剂量的C谷高于200 mg剂量(参见图15)。
表5 在第21天的Ab6血清C谷和变异性
Figure 134126DEST_PATH_IMAGE016
表6 在第21天的Ab6血清C谷的百分比BLQ
Figure 815774DEST_PATH_IMAGE017
来自部分B中的胃癌中的剂量比较群组(群组E)的初步效力数据也表明，在700 mgAb6(最高测试剂量)下朝向更好效力的趋势。进行群组E (Ab6 200 mg vs 700 mg加固定的200 mg剂量的派姆单抗)中的随机剂量比较的中期分析。在分析时，每组39个胃癌受试者(总共78个)已经用Ab6治疗。中值随访时间为98天。尽管不是统计学显著的，但这些数据表明在更高剂量下朝向疾病控制提高的趋势，包括分别地，对于200 mg和700 mg Ab6，ORR为5.3% (95% CI：0.6，17.7)相比于8.3% (95% CI：1.8，22.5)，以及靶病灶大小的平均变化为29.9 cm (95% CI：10.2，49.7)相比于6.4 cm (95% CI：9.3，22.1)。另外，在胃癌中，在随机剂量比较群组中，与700 mg剂量相比，在200 mg剂量下没有观察到安全性的显著差异。
基于初步群体PK分析，在800 mg的预期中值Ab6血清暴露高于700 mg。然而，预期在700 mg和800 mg剂量的Ab6血清浓度的分布是相似的，导致在这2种剂量的暴露之间有实质性的重叠(图13和14)。由于基于Ab6药物浓度的700 mg和800 mg剂量之间的预测暴露重叠，预期700 mg和800 mg剂量的相似的安全性概况。
实施例3：PD-L1和LAG3表达水平的测量
治疗前分析来自部分B的非-MSI-H结肠直肠癌、胃癌和HNSCC患者的样本。用于分析的样本是福尔马林固定和石蜡包埋(FFPE)的组织切片。使用Dako Autostainer Link 48平台(Dako AS480)和对于PD-L1 IHC 22C3 pharmDx测定验证的自动染色方案(根据US2017/0285037 (其通过引用以其整体并入))进行针对PD-L1表达的IHC染色。使用0.05 ug/ml来自LSBio的克隆17B4开发LAG-3 IHCAssay(LSBio，克隆17B4)，并根据制造商的方案在Dako Autostainer Link 48平台上进行验证。福尔马林固定、石蜡包埋的4-微米切片用于测定。在Dako PT link上用Envision FLEX Target Retrieval Solution, High pH(Agilent K800221-2)进行抗原修复。对于检测系统，应用Agilent EnVision FLEX+, HighpH (Link) (Agilent, K800221-2)。将染色的载片用苏木精(Agilent, K8008)复染，并盖上盖片。
对于PD-L1表达和LAG3表达，对于部分B的整个CRC群组收集IHC数据。图3显示，使用CPS评分系统的该集合中54%的CRC肿瘤是PD-L1阳性的。在PD-L1+肿瘤(CPS>=1%)中，46个中的4个是应答者(9%)。3位应答者具有CPS = 1%，并且1个应答者具有7%的CPS。在PD-L1-肿瘤(CPS <1%)中，35个中的1个是应答者(3%)。使用至少2的MIDS评分系统，在PD-L1 +肿瘤中，14个中的4个是应答者(28%)。在具有小于2的MIDS评分的PD-L1-肿瘤中，11个中的0个是应答者(0%)。使用单独的TPS、单独的MIDS或TPS+MIDS的评估方法的PDL1 IHC的初步分析表明，仅用单独的MIDS和TPS+MIDS方法看到应答者群体的富集。使用至少2的MIDS评分系统，在PD-L1+肿瘤中，14个中的4个是应答者(28%)。在具有小于2的MIDS评分的PD-L1-肿瘤中，11个中的0个是应答者(0%)。这表明炎性细胞中的PDL-1表达是预测对抗LAG3抗体和抗PD-1抗体治疗的应答的重要组分。
图4显示CRC肿瘤中的LAG3 IHC结果。使用CPS-样% LAG3阳性细胞对LAG 3 IHC进行评分。该集合中20%的CRC肿瘤是LAG-3阳性的。如表7中所示，75% LAG3阳性CRC肿瘤是PD-L1阳性的，而29% PD-L1阳性CRC肿瘤是LAG3阳性的。换言之，大多数表达LAG3的CRC肿瘤也表达PD-L1，但仅少量表达PD-L1的肿瘤也表达LAG3。
表7：CRC肿瘤的PD-L1表达和LAG3表达评分
Figure 459245DEST_PATH_IMAGE018
。
对于用700 mg Ab6和200 mg派姆单抗施用的胃癌扩展群组，收集PD-L1和LAG3IHC数据。图16显示，使用CPS评分系统的该集合中65%的胃肿瘤是PD-L1阳性的。在PD-L1+肿瘤(CPS>= 1%)中，22个中的7个是应答者(32%)。在PD-L1-肿瘤(CPS<1%)中，无一是应答者。PD-L1 IHC CPS具有0.90 (0.75，1)的AUROC (95%CI)。接收者操作特征下面积(AUROC)是二元分类任务中的预测者的良好性的通用概述统计量。通过在各种阈值设置下针对假阳性率(FPR)绘制真阳性率(TPR)来创建ROC曲线。ROC是概率曲线，并且AUC代表可分离性的程度或量度。优秀的模型具有接近于1的AUC。
图17显示，使用CPS-样评分系统的该集合中42%的胃癌是LAG3阳性的。在LAG3+肿瘤(CPS-样>= 1%)中，14个中的6个是应答者(43%)。在LAG3-肿瘤(CPS-样<1%)中，19个中的1个是应答者(5%)。LAG3 IHC具有0.79 (0.62，0.96)的AUROC (95% CI)。93% LAG3阳性肿瘤是PD-L1阳性的，且65% PD-L1阳性肿瘤是LAG3阳性的(参见表8)。换言之，几乎所有LAG3阳性肿瘤也表达PD-L1，而仅三分之二的PD-L1阳性肿瘤也表达LAG3。
表8：胃肿瘤的PD-L1表达和LAG3表达评分
Figure 591149DEST_PATH_IMAGE019
。
表9显示该胃群组中的应答者间的PD-L1和LAG3 IHC评分的分布。7个应答者中的6个表达高水平的PD-L1，表明患者选择的截止值更高(CPS≥10%)。类似地，对于LAG3 IHC，数据表明CPS≥1%的截止值提供了应答率的富集。
表9：胃肿瘤中所有应答者的PD-L1表达和LAG3表达评分
Figure 320071DEST_PATH_IMAGE020
。
表10显示胃群组中在不同CPS切点的PD-L1 IHC测定的临床效用概况，其中PPV是阳性预测值(作为应答者的根据选择的CPS切点被称为“阳性”的患者样品的百分比)，并且NPV是负预测值(作为无应答者的根据选择的CPS切点被称为“阳性”的患者样品的百分比)。灵敏度被定义为根据选择的CPS切点为阳性的应答者的百分比，且特异性被定义为根据选择的CPS切点为阴性的无应答者的百分比。随着CPS切点增加，流行率(prevalence)降低，但PPV增加且NPV降低。在所有切点都维持灵敏度，其中CPS≥1%，并且特异性增加。表10的临床效用概况还支持CPS≥10%截止值。
表10
Figure 70989DEST_PATH_IMAGE021
。
在用200 mg Ab6和200 mg 派姆单抗施用的未经PD-1治疗的HNSCC患者中收集PD-L1和LAG3 IHC数据。图18显示，使用探索性TPS+MIDS评分系统的该集合中86%的HNSCC肿瘤是PD-L1阳性的。在该评分系统中，如果TPS评分> 1或MIDS评分> 2，则肿瘤被认为是阳性的。在PD-L1+肿瘤中，30个的6个是应答者(20%)。在PD-L1肿瘤中，5个中的2个是应答者(40%)(表11)。
图19显示以上HNSCC患者中的49%的肿瘤(使用% LAG3阳性细胞评分系统)是LAG3阳性的。在LAG3+肿瘤中，17个中的5个是应答者(29%)。在LAG3-肿瘤中，14个中的4个是应答者(22%)。100% LAG3阳性肿瘤是PD-L1阳性的，且59% PD-L1阳性肿瘤是LAG3阳性的(参见表11)。换言之，所有LAG3阳性肿瘤也表达PD-L1，而仅三分之二的PD-L1阳性肿瘤也表达LAG3。
表11：未经PD-1治疗的HNSCC肿瘤的PD-L1表达和LAG3表达评分
Figure 474026DEST_PATH_IMAGE022
。
实施例4：抗LAG3抗体在晚期NSCLC中的临床研究
这是一项具有晚期NSCLC的研究参与者中的200 mg Q3W IV输注的派姆单抗(MK3475)与200 mg Q3W IV输注的Ab6的组合的组依次、适应性随机、多站点、开放标签研究，所述研究参与者没有接受先前的晚期疾病的全身疗法，并且对于所述研究参与者，基于定义的致癌突变(仅非鳞状NSCLC)，FDA批准的靶向疗法(例如，厄洛替尼、克唑替尼等)没有指示作为第一线(1L)疗法。
只有适用所有以下标准，参与者才有资格被纳入研究：
1. 具有IV期(美国癌症联合委员会[AJCC] v. 8) NSCLC的组织学或细胞学证实的诊断，并且研究参与者不应具有先前的针对晚期疾病的全身疗法。
2. 已经证实表皮生长因子受体-(EGFR)、间变性淋巴瘤激酶-(ALK)、c-ros癌基因1 (ROS1)或快速加速纤维肉瘤(B-Raf) 的B同种型定向疗法不被指示作为主要疗法(记录不存在活化肿瘤的EGFR或B-Raf突变以及不存在ALK或ROS1基因重排)。如果已知参与者的肿瘤具有主要鳞状组织学，则将不需要针对EGFR突变以及ALK和ROS1易位的分子检测，因为这不是当前诊断指南的一部分。
3. 根据RECIST 1.1，如通过当地研究人员/放射学所评价，具有可测量的疾病。如果已经在此类病灶中表明进展，则位于先前辐射区域中的病灶被认为是可测量的。
实施例5：抗LAG3抗体在血液学癌症中的临床研究
这是一项剂量为100、200或700 mg Q3W IV输注的抗LAG3抗体Ab6与派姆单抗(MK-3475) 200 mg Q3W IV输注的组合在具有未经PD-1/L1-治疗的复发或难治性(R/R)经典霍奇金淋巴瘤(cHL)(群组1)、PD-1/L1-难治性R/R cHL(群组2)、R/R弥漫性大B-细胞淋巴瘤(DLBCL)(群组3)和R/R-惰性非霍奇金淋巴瘤(iNHL)的参与者中的非随机、多站点、开放标签研究，其中R/R-iNHL组中至少10个参与者具有滤泡性淋巴瘤。
患者纳入标准
只有适用所有以下标准，参与者才有资格被纳入研究：
1. 必须具有可测量的疾病，定义为至少1个病灶，所述病灶可以用诊断质量横截面解剖成像(CT或MRI)在2个维度中准确测量。最长直径的最小测量值必须是>15 mm，且短轴的最小测量值必须是>10 mm。
2. 能够在筛选时从档案或新获得的活检(3个月内)提供核心或切除性肿瘤活检，用于生物标志物分析。
未经PD-1/L1治疗的R/R cHL(群组1)
1. 必须具有组织学证实的经典霍奇金淋巴瘤。
2. 具有复发(定义为最近疗法后的疾病进展)或难治性(定义为未能实现对最近疗法的CR或PR) cHL，并且符合以下纳入标准中的至少1项：
a. 自体-SCT后未能实现应答或者进展。在自体-SCT后，参与者必须在用本妥昔单抗治疗后已经复发或未能对本妥昔单抗应答。
b. 无法实现对挽救化疗的CR或PR，并且没有接受自体-SCT。参与者必须在用本妥昔单抗治疗后已经复发或未能对本妥昔单抗应答。
c. 对于本妥昔单抗没有资格、由于毒性而中止本妥昔单抗或居住在本妥昔单抗未被批准或不可用的地区的参与者有资格参加研究。
3. 先前没有用抗PD-1或抗PD-L1疗法治疗。
PD-1/L1-难治性R/R cHL(群组2)
1. 必须具有组织学证实的经典霍奇金淋巴瘤。
2. 具有复发(定义为最近疗法后的疾病进展)或难治性(定义为未能实现对最近疗法的CR或PR) cHL，并且符合以下纳入标准中的1项：
a. 自体-SCT后未能实现应答或者进展。在自体-SCT后，参与者必须在用本妥昔单抗治疗后已经复发或未能对本妥昔单抗应答。
b. 无法实现对挽救化疗的CR或PR，并且没有接受自体-SCT。参与者必须在用本妥昔单抗治疗后已经复发或未能对本妥昔单抗应答。
c. 对于本妥昔单抗没有资格、由于毒性而中止本妥昔单抗或居住在本妥昔单抗未被批准或不可用的地区的参与者有资格参加研究。
3. 在用抗PD-1/L1 mAb治疗后已经进展，所述抗PD-1/L1 mAb作为单一疗法或与其他检查点抑制剂或其他疗法组合施用。通过符合所有以下标准来定义PD-1治疗进展：
a. 已经接受至少2剂霍奇金淋巴瘤中已经批准的抗PD-1 mAb，其中药剂按批准的剂量和时间表施用。
b. 如通过淋巴瘤疾病应答标准所定义，已经表明在PD-1/L1后的疾病进展(Cheson等人Revised Response Criteria for Malignant Lymphoma. J Clin Oncol.2007; 25:579-586.)。
c. 从最后一剂抗PD-1/L1 mAb起12周内已经记录到进展性疾病。
4. 已经提交试验前成像。
R/R DLBCL(群组3)
1. 具有DLBCL的组织学证实的诊断。允许转化的DLBCL、灰色区淋巴瘤、双击淋巴瘤和原发性纵隔B细胞淋巴瘤(PMBCL)。
2. 必须在至少2线先前疗法后已经进展，包括自体SCT后的进展，已经拒绝SCT或不是自体SCT的候选者(根据机构标准)。不符合标准治疗资格或由于毒性不可接受(其要求中止该治疗并排除用相同药剂再次治疗)而在疾病进展前已经退出标准治疗的参与者将也是有资格的。
R/R-iNHL (群组4)
1. 具有惰性(低级) B-细胞淋巴瘤(定义为FL)、边缘区淋巴瘤、粘膜相关的淋巴样组织淋巴瘤或小淋巴细胞性淋巴瘤的组织学证实的诊断。淋巴浆细胞性淋巴瘤、华氏巨球蛋白血症、慢性淋巴细胞性白血病(与小淋巴细胞性淋巴瘤无关)和T-细胞淋巴瘤不是有资格的。至少10个参与者必须具有FL。
2. 参与者必须在至少2线先前疗法(其可能包括自体SCT)后进展。不符合标准治疗资格或由于毒性不可接受(其要求中止该治疗并排除用相同药剂再次治疗)而在疾病进展前已经退出标准治疗的参与者也是有资格的。
安全性导入期
a. 在安全性导入期中登记至少14个参与者(至少3个/群组)。参与者将接受派姆单抗(固定剂量为200 mg)与Ab6(起始剂量为200 mg)的组合Q3W。
b. 改良的毒性概率间隔(mTPI)设计[Ji, Y.和Wang, S.-J. 2013]用于建立Ab6与派姆单抗的组合的推荐2期剂量(RP2D)。从第一周期开始并且此后连续，针对DLT的存在监测来自参与者的数据。以6个月间隔评价聚集数据。根据在每个剂量水平可得的组合的安全性、PK和药效动力学数据，探索Ab6的更低和/或更高剂量。
c. 如果mTPI设计要求，则将Ab6的剂量降低至100 mg，并评估在该剂量水平的最多达额外14个参与者。可以根据用于确定剂量的数据总体探索其他较低的Ab6剂量。
d. 基于这些安全性导入期参与者的效力/PK和安全性数据的总体，可以探索最高达700 mg的更高Ab6剂量。如果需要评价效力，可以登记额外参与者。
e. 安全性导入期在14个参与者已经以任何选择剂量(其可能包括任选剂量)治疗之后结束。合并物邻近-违反者算法(pool adjacent-violators algorithm)[Ji, Y.和Wang, S.-J. [2013]用于估计在DLT率和剂量水平之间单调性的假设下各组中剂量间的DLT率。估计DLT率最接近于30%的剂量作为初步RP2D处理。
f. 对于在安全性导入期中以初步RPTD剂量治疗的参与者，将效力和安全性数据与相应的效力扩展群组的效力和安全性数据组合。对于以不同于证实剂量的剂量治疗的参与者，其数据不应与相应的效力扩展期群组组合。
效力扩展期
a. 效力扩展期总共登记近似120个参与者，其中4个群组中的每个中具有近似30个参与者(这些样品大小包括安全性导入期中的参与者)。在效力扩展期中，R/R-iNHL群组(群组4)中的至少10个参与者必须具有FL。
b. 在效力扩展期中，在已经登记12个参与者(计数特定群组中来自安全性导入期的那些参与者)并且最后一个参与者已经完成第一应答评价或以其他方式中止研究干预后，对每个群组进行安全性的中期分析和无效性的效力中期分析。
c. 在建立RP2D之后，开放效力扩展期中的群组1和群组2用于进行首先登记(参见上面的安全性导入期)。在各自群组中登记前12个参与者后，在该群组中进行效力评价。在此评价期间，群组1和2中的登记继续。如果在群组1中实现≥50% ORR(12个参与者中的≥6个；群组1效力目标)，或对于群组2实现≥8.3% ORR (12个参与者中的≥1个；群组2效力目标)，则将登记扩展至各自群组中的近似30个参与者。如果群组1或2达到其效力目标，则开放群组3和4以进行登记。
d. 在群组3或群组4中登记前12个参与者之后，在该各自群组中进行效力分析。在该评价期间继续登记。如果任一群组实现≥16.7% ORR(12个参与者中的≥2个)，则在该群组中将登记扩展至近似30个参与者。
实施例6 基于使用建模和模拟的评估，跨多种肿瘤类型的派姆单抗的每周六次(Q6W)给药时间表
派姆单抗(目前被批准用于多种癌症适应症中的抗PD-1检查点抑制剂)，已经证明当以200 mg或2 mg/kg Q3W的剂量施用时的安全性和有效性。替代的延长给药方案将为患者和处方者两者提供便利和灵活性的益处。针对效力和安全性两者的派姆单抗药代动力学(PK)和暴露(浓度)-应答(E-R)关系的稳健表征允许使用基于模型的方法来支持派姆单抗的替代给药方案。
在达到PK稳态后，通过将暴露与批准的Q3W (200 mg和2 mg/kg)方案相匹配，选择派姆单抗的Q6W时间表的剂量；基于E-R的知识，对方案之间的效力和安全性建立桥梁。使用建立的派姆单抗的群体PK模型(具有时间依赖性的消除)(其充分描述了跨多种肿瘤类型的PK)，模拟了给药最长达24周的PK暴露，以确保所有受试者中的稳态。使用稳态下的暴露度量、AUCss或时间-平均的浓度(Cavg,ss)和谷值浓度(Cmin,ss)(其在方案之间进行比较)来对效力建立桥梁。通过确保稳态下的预测峰值浓度(Cmax,ss)低于10 mg/kg Q2W的最大临床施用和良好耐受的剂量的那些，来对派姆单抗在Q6W时间表的安全性概况建立桥梁。
预期在施用400 mg Q6W后派姆单抗的PK与批准的200 mg Q3W和2 mg/kg Q3W给药方案下的PK遵循相似的概况(参见图8)。如方案之间所比较的暴露度量概述于表12中。基于与在 200 mg Q3W达到的那些相比类似的预测暴露(Cavg,ss或AUCss，几何平均值(GM)高~1%)，选择派姆单抗的400 mg Q6W给药方案(参见图7)。预测少于1%的受试者具有的Cmin,ss与在200 mg Q3W和2 mg/kg Q3W的那些相比更低(图8)。400 mg Q6W的预测Cmax,ss远远低于(GM低~65%)用10 mg/kg Q2W(这已显示具有跨多种肿瘤类型的可接受的安全性)所实现的预测Cmax,ss(参见图7)。鉴于在临床测试的剂量下派姆单抗的相似暴露概况和建立的平坦的E-R关系，预期跨肿瘤类型用400 mg Q6W实现的临床结果与用200 mg Q3W的那些相似。
基于本文使用的建模和模拟方法，预期派姆单抗的400 mg Q6W给药方案会导致PK暴露类似于批准的200 mg Q3W和2 mg/kg给药方案。PK模拟表明，在派姆单抗暴露的方面–在400 mg Q6W的给药间隔内的平均浓度(Cavg)(或曲线下面积[AUC])类似于在批准的200mg Q3W剂量下的给药间隔内的平均浓度(Cavg)(或曲线下面积[AUC])，因此在给药方案之间对效力建立桥梁。在大多数(> 99%)的患者中，在400 mg Q6W的谷值浓度(Cmin)通常在用2 mg/kg或200 mg Q3W实现的那些的范围内。在400 mg Q6W的峰值浓度(Cmax)远远低于10mg/kg Q2W的最高临床测试剂量的Cmax，支持400 mg Q6W的安全性概况应当与确立的派姆单抗的安全性概况相当。表明派姆单抗的暴露-应答(ER)跨适应症是平坦的，并且在黑色素瘤和NSCLC中的OS预测表明，鉴于类似的暴露，预期在400 mg Q6W的效力类似于在200 mg或2 mg/kg Q3W的暴露；因此，预期400 mg Q6W跨适应症是有效的。
表12. 基于模拟的400 mg Q6W给药方案的派姆单抗PK暴露度量的概述
Figure 245673DEST_PATH_IMAGE023
实施例7：评估具有晚期黑色素瘤的参与者中静脉内输注400 mg 派姆单抗 Q6W的安全性和耐受性的派姆单抗的1期随机临床研究
设计该研究以评价当每6周(Q6W)施用时派姆单抗的药代动力学(PK)、安全性和耐受性。向100个参与者的群组给予400 mg 派姆单抗 Q6W。从该参与者群组收集PK、效力和安全性数据。在该研究中登记具有晚期黑色素瘤的至少18岁的男性/女性参与者。该研究中未使用基于年龄、性别或其他特征的分层。
从第1至第18个周期，参与者接受400 mg 派姆单抗 Q6W的IV输注。从这些参与者收集PK、效力和安全性数据。结果提供了当Q6W施用时派姆单抗的初步PK、效力和安全性数据。基于对派姆单抗临床药理学及其充分建立的E-R概况的稳健理解，预期在其中批准200mg Q3W 派姆单抗(包括单一疗法以及与其他药剂组合)的所有治疗环境中，这种给药时间表变化产生类似的效力和安全性。因此，400 mg Q6W方案会具有与200 mg Q3W(基于建模和模拟分析的派姆单抗的临床使用中频率较低的给药方案)类似的益处-风险概况。
研究设计
根据良好临床实践(GCP)进行该研究，所述研究是派姆单抗在具有晚期黑色素瘤的参与者中的一项随机化、交叉、多中心、开放标签的安全性研究。该1期研究在具有不可切除或转移性黑色素瘤的参与者中进行。治疗期每42天继续最长达18个周期(近似2年)。只要参与者正从治疗受益并且没有疾病进展或不符合研究退出的任何标准，治疗就将继续。更详细地，该研究由以下组成：(1)最长达28天持续时间的筛选期，以确保参与者有资格参与该研究；以及(2)用派姆单抗治疗的近似104周的干预期。参与者以Q6W经30分钟经由IV输注接受派姆单抗，持续最长达18个周期，和(3)随访期，在此期间监测参与者的AE持续30天，和监测参与者的严重不良事件(SAE)持续90天(如果参与者开始新的抗癌疗法，则为30天)。追踪在治疗中止时具有进行性AE的参与者，直至解决，稳定，以其他方式解释该事件，或参与者失去随访。
由于除了放射线照相疾病进展以外的原因而中止的参与者进行疾病状态的治疗后随访成像，直至根据RECIST 1.1放射线照相记录到疾病进展，并且当临床上适当时，根据iRECIST现场证实，开始非研究癌症治疗，撤回同意，变得失去随访或研究结束。在存活随访期中，针对总体存活通过电话跟踪所有参与者，直到死亡，参与者撤回同意，变得失去随访或研究结束。在研究完成后，可以将参与者登记入派姆单抗延伸研究(如果可用的话)中。
登记入该研究的所有参与者都将具有晚期黑色素瘤的诊断。该研究的结果将有助于理解当在Q6W给药方案中施用时的派姆单抗的PK特征。包括通常用于评估研究性全身性抗癌治疗的安全性参数作为安全性终点，包括但不限于不良事件(AE)/严重不良事件(SAE)的发生率、因果关系和结果；以及生命体征和实验室值的变化。将评价AE，如通过美国国家癌症研究所不良事件通用术语标准[NCI CTCAE] 4.0版所定义。
该试验的目标是表征作为IV输注Q6W施用后派姆单抗的PK概况。在所有参与者完成第5周期后分析PK数据。PK参数包括AUC、Cmax和Cmin。抗药物抗体(ADA)的形成可能会混淆治疗剂量下的药物暴露，并且引发随后的输注-相关毒性。确定在第1、2、4和5周期各自的开始时对派姆单抗的抗药物抗体应答。探索ADAs的存在对派姆单抗的暴露的任何影响。
该研究使用基于RECIST 1.1标准的ORR，如通过不知情的独立中央审查(BICR)评价为主要终点。客观应答率是晚期研究的临床益处的可接受的量度，所述晚期研究证明新的抗肿瘤疗法的优越性，尤其是如果这种作用的量级大且该疗法具有可接受的风险/益处概况。BICR和RECIST 1.1用于评价ORR的用途通常被法规机构认为可接受的。图像被提交至成像CRO (iCRO)，并由对治疗分配不知情的独立中央审查读取，以使应答评价中的偏差最小化。
总体存活(OS)是次要终点，并且已被认为是在随机化临床研究中证明新的抗肿瘤疗法的优越性的金标准。RECIST 1.1在评价效力量度的图像时由BICR使用，并且在确定资格时由局部位点使用。RECIST工作组已经开发和公开了基于免疫的治疗剂的改良RECIST1.1 (iRECIST)评价，并得到来自行业和学术界的领先专家的意见，以及来自美国食品药品管理局和欧洲药品管理局的参与。靶病灶的一维测量，非靶病灶的定性评价以及应答类别与RECIST 1.1相同，直至通过RECIST 1.1看到进展。然而，如果参与者临床上稳定，则可以进行额外的成像以证实放射线照相进展。研究者使用iRECIST以评价肿瘤应答和进展，并且制定治疗决策以及用于探索性效力分析(在指定的情况下)。
纳入标准
只有适用所有以下标准，参与者才有资格被纳入研究：
• 参与者具有晚期黑色素瘤的组织学或细胞学证实的诊断
• 根据美国癌症联合委员会(AJCC)分期系统，参与者具有不可切除的III期或IV期黑色素瘤，不适合局部疗法。
• 参与者未针对晚期或转移性疾病进行治疗，除了以下情况：BRAF V600突变型黑色素瘤可能已经接受护理标准靶向疗法(例如，BRAF/MEK抑制剂，单独或组合)，并且有资格参与该研究
• 如果其在随机化之前至少4周完成并且所有相关的AE都已经回复至基线或稳定(最近的先前疗法的毒性作用解决至1级或更低[除了脱发])，则允许先前的辅助或新辅助黑色素瘤疗法。如果受试者接受主要手术或>30 Gy的放射疗法，则他们必须已从由干预引起的毒性和/或并发症恢复。
如果女性参与者没有怀孕，没有母乳喂养并且同意在治疗期期间并且持续至少120天遵循特定的避孕指导或提供知情同意，则她有资格参与。
参与者应当具有东部合作肿瘤组(ECOG)表现状态0(完全活跃，能够不受限制地进行所有疾病前表现)或1(身体剧烈活动受限制，但能走动并能够进行轻度或久坐性质的工作，例如，灯塔工作，办公室工作)，并且应当具有如表13中所定义的足够的器官功能。在开始研究干预之前的72小时内收集样本。
表13. 足够的器官功能实验室值
Figure 993049DEST_PATH_IMAGE024
排除标准
如果适用以下任何标准，则从研究排除参与者：
• 参与者是有生育能力的妇女(WOCBP)，其在随机化或治疗分配前72小时内尿液妊娠测试呈阳性。如果尿液测试呈阳性或不能被证实为阴性，则需要血清妊娠测试。
• 参与者已经接受针对不可切除或转移性黑色素瘤的先前全身治疗(除了上述纳入标准中所示)。
• 参与者已经接受用抗PD-1、抗PD-L1或抗PD-L2或针对另一种刺激性或共抑制性T-细胞受体(例如，OX-40和CD137)的药剂或在辅助环境中允许的除了抗CTLA-4以外的特异性靶向检查点途径的任何其他抗体或药物的先前疗法。
• 参与者在研究治疗开始的2周内已经接受先前的放射疗法。参与者必须已经从所有放射相关的毒性恢复，不需要皮质类固醇，并且没有放射性肺炎。
• 参与者在第一剂的研究药物前30天内已经接受活疫苗。活疫苗的实例包括，但不限于，以下：麻疹、腮腺炎、风疹、水痘/带状疱疹(鸡痘)、黄热病、狂犬病、卡介苗(BCG)和伤寒疫苗。用于注射的季节性流感疫苗通常是杀灭病毒疫苗，并且是允许的；然而，鼻内流感疫苗(例如，FluMist®)是减毒活疫苗，并且是不允许的。
• 参与者当前正在参与或已经参与研究性药剂的研究，或者在第一剂研究干预前的4周内已经使用研究性装置。
• 参与者在第一剂的研究药物前7天内被诊断为免疫缺陷或者正在接受慢性全身性类固醇疗法(给药超过每天10 mg的泼尼松当量)或任何其他形式的免疫抑制疗法。
• 参与者具有已知的额外恶性肿瘤，其在过去2年内正在进展或已经需要主动治疗。注意：不排除已经经历潜在治愈性疗法的具有皮肤基底细胞癌、皮肤鳞状细胞癌或原位癌(例如，乳腺癌、原位宫颈癌)的参与者。
• 参与者具有已知的活跃CNS转移和/或癌性脑膜炎。具有先前治疗的脑转移的参与者可以参与，条件是他们通过重复成像(注意重复成像应当在研究筛选期间进行)是放射线照相稳定(即，没有进展的证据)至少4周，临床上稳定并且在第一剂治疗干预前至少14天不需要类固醇治疗。
• 参与者对派姆单抗和/或其任何赋形剂具有严重的超敏反应(≥3级)。
• 参与者具有眼部黑色素瘤。
• 参与者具有活动性自身免疫性疾病，其在过去2年中已经需要全身治疗(即，使用疾病改良剂、皮质类固醇或免疫抑制药物)。替代疗法(例如，针对肾上腺或垂体功能不全的甲状腺素、胰岛素或生理性皮质类固醇替代疗法)不被视为全身治疗的形式，并且是允许的。
• 参与者具有(非感染性)肺炎病史，其需要类固醇或具有目前的肺炎。
• 参与者具有活动性感染，其需要全身疗法。
• 参与者具有人免疫缺陷病毒(HIV)感染的已知病史。
• 参与者具有乙型肝炎的已知病史(定义为乙型肝炎表面抗原[HBsAg]反应性)或已知的活动性丙型肝炎病毒(定义为检测到HCV RNA [定性])感染。
• 参与者具有任何病况、疗法或实验室异常的历史或当前证据(其可能混淆研究的结果，在整个研究持续时间中干扰参与者的参与)，或根据治疗研究者的意见不符合参与者参与的最佳利益。
• 参与者具有已知的精神病或药物滥用障碍，其会干扰与研究要求的合作。
• 从筛选随访开始到研究干预的最后一次剂量后的120天，受试者在预计的研究持续时间内怀孕，哺乳或预期怀孕或生下孩子。
研究干预的中止和参与者退出
研究干预的中止不代表从研究退出。由于关于研究干预中止后的临床事件的某些数据可能对研究是重要的，因此它们必须通过参与者的最后安排的随访来收集，即使参与者已经中止研究干预。因此，在方案指定的治疗期完成前中止研究干预的所有参与者仍将继续参与研究。
参与者可以出于任何原因在任何时间中止研究干预，或者在发生任何不利影响时由研究者酌情决定退出研究干预。此外，如果研究干预不适当，违反研究计划或出于行政和/或其他安全性原因，研究者可能使参与者中止研究干预。
出于以下任何原因，参与者必须中止研究干预，但继续在研究中进行监测：
• 参与者或参与者的合法可接受的代表要求中止研究干预。
• 参与者持续连续超过12周中断研究干预施用，或累积3次错过剂量。
• 研究者认为参与者的医疗状况或个人情况使参与者处于由于继续施用研究干预而导致的不必要的风险中。
• 参与者具有证实的阳性血清妊娠测试。
• 参与者具有证实的放射照相疾病进展
• 参与者具有任何恶性肿瘤的任何进展或复发，或需要积极治疗的另一恶性肿瘤的任何发生
• 参与者具有不可接受的不良经历。
• 参与者具有除了上述另一恶性肿瘤以外的并发疾病，这阻止进一步的治疗施用。
• 研究者决定中止治疗。
• 参与者具有复发性2级肺炎
• 参与者已经完成用派姆单抗的35次治疗(近似2年)
如果参与者或参与者的合法可接受的代表从研究撤回同意，则该参与者退出研究。如果参与者退出研究，则他们将不再接受研究治疗或在安排的方案随访中进行跟踪。
效力/评价
肿瘤评价包括所有已知或疑似的疾病部位。在基线以及当怀疑疾病进展或脑转移时，成像可以包括胸部、腹部和骨盆计算机断层扫描(CT)或磁共振成像(MRI)。强烈优选通过CT获取肿瘤成像。对于胸部、腹部和骨盆，当禁忌使用用含碘对比剂的CT或当当地实践要求时，可以使用对比剂增强MRI。对于脑部，MRI是强烈优选的成像方式。
在整个研究中，在参与者中使用相同的成像方式技术(理想地，相同的扫描仪，并且一致使用对比剂)。一致使用成像技术将有助于优化现有和新肿瘤负荷的评价的可重复性，并提高对应答或进展的评价的准确性。所有研究参与者的所有安排的图像都由研究者审查疾病进展。此外，在非安排时间点获得以确定疾病进展的图像(包括经由其他方式获得的那些)(以及由于其他原因获得、但基于研究者评价捕获放射学进展的图像)也在研究地点提交。
筛选时由BICR基于RECIST 1.1的可测量疾病的证实将用于确定参与者的资格。在参与者分配之前，需要BICR证实参与者的图像显示至少1个病灶适合根据RECIST 1.1选择作为靶病灶。
初始肿瘤成像
在第一剂当天之前的28天内进行筛选时的初始肿瘤成像。在筛选评价中不包括在治疗的第1周期第1天后获得的任何图像。现场研究小组审查筛选图像，以证实参与者具有根据RECIST 1.1可测量的疾病。如果进行脑成像以记录现有转移的稳定性，则尽可能使用MRI。如果MRI在医学上是禁忌的，则用对比剂的CT是可接受的替代方案。
研究期间的肿瘤成像
在第一剂当天起12周(84天 ±7 天])进行第一次研究时成像评价。随后每9周(63天±7天)或更频繁地(如果在临床上适用)进行肿瘤成像。在52周(365天±7天)后，仍然进行治疗的参与者将每12周(84天±7天)进行成像。
通过重复成像评价证实客观应答。在观察到应答的第一指标后至少4周进行肿瘤成像以证实PR或CR。然后，参与者将返回至定期安排的成像，以下一个安排的成像时间点开始。如果其晚少于4周，则接受额外成像用于证实的参与者无需经历下一次安排的肿瘤成像；肿瘤成像可以在随后安排的成像时间点继续。
根据改良的iRECIST，在临床上稳定的参与者中，在疾病进展(PD)的首次放射学证据后4至8周现场证实疾病进展。具有未证实的疾病进展的参与者可以根据研究者的判断继续进行治疗，直至现场证实进展。如果其晚少于4周，则接受证实性成像的参与者无需经历下一次安排的肿瘤成像；如果在临床上稳定，则肿瘤成像可以在随后安排的成像时间点继续。如现场评价的已通过iRECIST证实疾病进展的参与者将中止研究治疗。
治疗结束和随访肿瘤成像
对于中止研究干预的参与者，在治疗中止时(±4周窗口)进行肿瘤成像。如果在中止日期之前的4周内获得先前的成像，则在治疗中止时不必进行成像。对于由于记录的疾病进展而中止研究干预的参与者，如果研究者选择不执行iRECIST，则这是最终需要的肿瘤成像。
对于中止研究干预而没有记录的疾病进展的参与者，应当作出每种努力以通过使用每12周(±7天)接受治疗的同时使用的相同成像时间表的肿瘤成像继续监测疾病状态，直至开始新的抗癌治疗，疾病进展，怀孕，死亡，撤回同意，或研究结束，以先到者为准。
疾病的RECIST 1.1评价
RECIST 1.1用作评价肿瘤应答、疾病进展日期的主要量度，并且作为与疾病状态相关的所有方案指南的基础(例如，中止研究干预)。尽管RECIST 1.1提及总共最多5个靶病灶，并且每个器官2个，但如果临床相关，该方案允许总共最多10个靶病灶，并且每个器官5个，以实现更广泛的肿瘤负荷的采样。
疾病的iRECIST评价
iRECIST基于RECIST 1.1，但适用于考虑用免疫治疗药物所见的独特肿瘤应答。研究者将使用iRECIST以评价肿瘤应答和进展，并做出治疗决策。当在临床上稳定时，参与者直到与当地放射学合作的研究者证实进展才中止。尽管有初始的放射性PD，但这种允许继续治疗考虑到以下观察：一些参与者在开始免疫疗法后的前几个月中可能具有短暂的肿瘤发作，且然后经历随后的疾病应答。
当现场评价PD的首次放射学证据时，被认为临床上不稳定的任何参与者都从研究干预中止，并且不需要具有重复的肿瘤成像用于通过iRECIST证实PD。如果研究者决定继续治疗，则参与者可以继续接受研究干预，并且应当根据研究者评价，在4至8周后重复肿瘤评价，以通过iRECIST证实PD。如果重复成像没有根据iRECIST证实PD，如研究者所评价，并且参与者继续是临床上稳定的，则研究干预继续并且遵循定期成像时间表。如果证实PD，则参与者从研究干预中止。
如果参与者具有证实的放射线照相进展(iCPD)，则中止研究干预；然而，如果参与者实现临床上有意义的益处，则考虑继续研究干预的例外。在这种情况下，如果继续研究干预，则将继续进行肿瘤成像。进展的首次放射学证据后的成像和治疗要求的概述提供于表14中。
表14 疾病进展的首次放射学证据后的成像和治疗
Figure 875555DEST_PATH_IMAGE025
安全性评价
安全性评价包括收集AE和SAE，监测生命体征和实验室评价(包括妊娠测试)，心电图(ECG)的性能和身体检查以及同时用药的验证。
不良事件
研究者或有资格的指定人员评价每个受试者，以评估潜在的新的或恶化的AE，并且如果临床适用，则更频繁地进行评价。AE的评价包括但不限于类型，发生率，严重程度(通过美国国家癌症研究所不良事件通用术语标准[NCI CTCAE] 4.0版分级)，时机，严重性和与研究药物的相关性。记录在研究期间发生的不良事件，包括基线体征和症状。
完全身体检查
研究者或有资格的指定人员在筛选时段期间进行完整的身体检查。临床上明显的异常发现被记录为病史。在第一剂研究干预后，新的临床上明显的异常发现被记录为AE。
定向身体检查
对于不需要完全身体检查的周期，研究者或有资格的指定人员在施用研究干预之前按照临床适用进行定向的身体检查。新的临床上明显的异常发现被记录为AE。
生命体征
生命体征在休息5分钟后在半仰卧位置测量，并且包括温度，收缩和舒张血压，呼吸速率，脉搏速率和重量。仅在筛选时收集高度。
心电图
使用当地标准程序进行标准的12-导联ECG。筛选时临床上明显的异常发现被记录为病史。在临床上必要时，在研究中进行额外ECG。在随访ECG上看到的临床上明显的发现被记录为AE。
临床安全性实验室评价
表15中详述的测试由当地实验室进行。如由研究者确定必要，可以在研究期间的任何时间进行额外测试。
表15 方案要求的安全性实验室评价
Figure 634563DEST_PATH_IMAGE026
用于收集AE、SAE和其他可报告的安全性事件信息的时间段和频率
如果参与者正在接受安慰剂磨合(run-in)或其他磨合治疗，如果在签署同意表格后、但在治疗分配/随机化之前发生的所有AE、SAE和其他可报告的安全事件引起从研究排除参与者，或者是方案指定的干预(包括但不限于通常疗法、饮食或程序的洗出或中止)的结果，则研究者必须报告该事件。研究者必须报告从治疗分配/随机化时间到研究干预终止后30天的所有AE。
从治疗分配/随机化时间至停止研究干预后90天或如果参与者开始新的抗癌疗法则停止研究干预后30天(以较早者为准)符合严格标准的所有AE必须由研究者报告。此外，如果在上述指定时间段以外的任何时间提请研究者注意的任何SAE被认为是药物相关的，则立即报告该事件。
效力分析的统计方法
客观应答率(ORR) – ORR被计算为：报告为已经实现通过BICR验证的证实的CR或PR的参与者的数目除以APaT群体中包括的参与者的数目的比率。没有进行ORR评价的APaT分析群体中的参与者将被计数为无应答者。对于真正的ORR，计算95%精确二项式CI(基于Clopper和Pearson,1934的方法)。
无进展存活(PFS) - 非参数Kaplan-Meier方法用于估算PFS分布。将计算自研究治疗的第一天起在不同的随访时间的中值PFS和PFS点估算值的95% CI。由于定期评价疾病进展，因此PD可以在未记录PD的最后一次评价和记录PD时的评价之间的时间间隔内的任何时间发生。PD的真实日期将近似为通过BICR基于RECIST 1.1客观记录PD的首次评价日期。死亡始终被视为PFS事件。没有经历PFS事件的参与者将在最后一次疾病评价中进行检查。对于PFS的分析，如果事件(PD或死亡)在多于一次错过疾病评价之后立即发生，则在错过随访之前的最后一次疾病评价时对数据进行检查。同样，在开始新的抗癌疗法之前，在最后一次疾病评价时对新的抗癌疗法后的数据进行检查。如果参与者符合多种检查标准，则将应用最早出现的检查标准。
总体存活(OS) - 非参数Kaplan-Meier方法用于估算OS分布。计算自研究治疗的第一天起在各个随访时间的中值OS和OS点估算值的95% CI。
应答的持续时间(DOR) - 使用非参数Kaplan-Meier方法描述性概述DOR。在该分析中仅包括显示CR或PR的参与者子集。
关键效力终点的分析策略
表16概述关键效力终点的主要分析方法。
表16. 关键效力终点的分析策略
Figure 249215DEST_PATH_IMAGE028
安全性分析的统计方法
通过对所有相关参数(包括不良经历和实验室参数)的临床检查来评价安全性和耐受性。经由点估算值与95% CI概述由以下组成的广泛AE类别：具有任何AE、药物相关的AE、严重AE、与药物相关和严重的AE以及由于AE而中止的参与者的百分比(表17)。
表17. 安全性参数的分析策略
Figure 687150DEST_PATH_IMAGE029
AE是临床研究参与者中的任何不良医学事件发生，与研究干预的使用在时间上相关，无论是否被认为与研究干预相关。因此，AE可以是与药物的使用在时间上相关的任何不利和意外的体征(包括异常的实验室发现)、症状或疾病(新的或恶化的)。包括以下作为AE：
• 任何异常的实验室测试结果(血液学、临床化学或尿液分析)或其他安全性评价(例如，ECG、放射学扫描、生命体征测量)，包括从基线恶化的那些，或在研究者的医学和科学判断中被认为临床显著的那些。
• 慢性或间歇性预先存在的病况的恶化，包括病况的频率和/或强度的增加。
• 研究干预施用后检测或诊断的新病况，即使其在研究开始之前可能已经存在。
• 怀疑的药物-药物相互作用的体征、症状或临床后遗症。
• 研究干预或伴随用药的怀疑剂量过量的体征、症状或临床后遗症。
• 研究期间的恶性肿瘤的体征和症状的恶化被报告为AE。通过放射线照相或其他方法上测量恶性病灶评价的疾病进展不被报告为AE，除非该事件导致住院或死亡。
对于该研究的目的，以下事件不符合AE定义：
• 内科或外科程序(例如，内窥镜检查，阑尾切除术)：导致该程序的病况是AE。
• 其中没有发生不良医疗事件发生的情况(社交和/或方便入院)。
• 在研究开始时存在或检测到的未恶化的先前存在的疾病或病况的预期的日与日波动。
• 在知情同意之前计划进行手术以治疗尚未恶化的预先存在的病况。
如果事件不是根据以上定义的AE，则其不是SAE，即使满足严重病况。SAE被定义为在任何剂量下发生以下情况的任何不良医学事件发生：
• 导致死亡
• 威胁生命。“严重”的定义中的术语“威胁生命”是指其中参与者在事件时处于死亡的风险中的事件。它不是指假设可能引起死亡(如果其更严重)的事件。
• 需要住院患者住院或延长现有住院。住院被定义为住院患者住院，无论停留的长度，即使住院是继续观察的预防措施。针对治疗尚未恶化的预先存在的病况的选择性程序的住院不是SAE。预先存在的病况是在使用MSD产品之前诊断出并记录在参与者的病史中的临床病况。
• 导致持续或显著的残疾/无行为能力。术语残疾意指人进行正常生活功能的能力的实质性破坏。此定义并非意欲包括具有相对较小医学意义的经历，诸如简单的头痛，恶心，呕吐，腹泻，流感和意外创伤(例如脚踝扭伤)，其可能干扰或阻止日常生活功能，但并不构成实质性破坏。
• 是服用该产品的参与者的后代中的先天性异常/出生缺陷，与诊断时间无关。
在决定SAE报告是否适于其他情况(诸如可能不会立即威胁生命或导致死亡或住院、但可危及参与者或可能需要医学或外科干预以预防以上定义中列出的其他结果之一的重要医学事件)中，做出医学或科学判断。这些事件通常被认为是严重的。此类事件的实例包括侵袭性或恶性癌症，在急诊室或家中对不导致住院的变应性支气管痉挛、血液体液不调或抽搐的强化治疗，或药物依赖或药物滥用的发展。
人口统计和基线特征
显示筛选、分配的受试者的数量和百分比，筛选失败的主要原因和中止的主要原因。对于所有登记的受试者，人口统计变量(例如，年龄、性别)、基线特征、主要和次要诊断以及先前和伴随疗法通过描述性统计数据或分类表进行概述。
亚组分析
为了确定应答率在各个亚组间是否一致，在以下分类变量的每个类别内估算主要终点的应答率的估算值(具有标称95% CI)：
• 年龄类别(<65岁 vs. ≥65岁)
• 性别(女性 vs. 男性)
• 种族(白人 vs. 非白人)
• 疾病阶段(III vs. IVM1a vs. IVM1b vs IVM1c)
• 脑转移(是 vs. 否)
• ECOG状态(0 vs. 1)
• PD-L1状态(阳性 vs. 阴性)
• BRAF野生型 vs. BRAF突变型(未先前治疗) vs. BRAF突变型(先前治疗)
产生森林图，其提供了上面列出的亚组类别间治疗效果的估算的点估算值和CI。从分析中排除了参与者少于10个的任何指定亚组。
参考文献
Figure 638925DEST_PATH_IMAGE030
Figure 783599DEST_PATH_IMAGE031
Figure 897048DEST_PATH_IMAGE032
Figure 353437DEST_PATH_IMAGE033
Figure 748384DEST_PATH_IMAGE034
Figure DEST_PATH_IMAGE035
Figure 888510DEST_PATH_IMAGE036
本文中引用的所有参考文献都通过引用并入，如同每篇单独的出版物、数据库条目(例如Genbank序列或GeneID条目)、专利申请或专利被明确地且单独地指出通过引用并入。美国临时申请62/755,756以其整体通过引用并入。申请人根据37 C.F.R. §1.57(b)(1)意图用该通过引用并入的声明来涉及每个和每篇单独的出版物、数据库条目(例如Genbank序列或GeneID条目)、专利申请或专利，它们中的每一个按照37 C.F.R. §1.57(b)(2)清楚地鉴别，即使这样的引用不紧接于通过引用并入的专门声明。如果有的话，在说明书中包含的通过引用并入的专门声明不以任何方式弱化该通过引用并入的一般声明。本文中对参考文献的引用无意承认：所述参考文献为相关的现有技术，其也不构成关于这些出版物或文件的内容或日期的任何承认。在所述参考文献提供的声明的术语的定义与在本发明的说明书中提供的定义冲突的程度上，在本发明的说明书中提供的定义应当用于解释请求保护的发明。
Figure IDA0003147846070000011
Figure IDA0003147846070000021
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Claims (68)

1.用于治疗患者中的癌症的方法，其包括经由静脉内输注向所述患者施用7-1200 mg的抗LAG3抗体，其中所述抗LAG3抗体包含：(a) SEQ ID NO:26、27和28的轻链CDR，和(b)SEQ ID NO:29、30和31的重链CDR。
2.权利要求1的方法，其中向所述患者施用100 mg的抗LAG3抗体。
3.权利要求1的方法，其中向所述患者施用200 mg的抗LAG3抗体。
4.权利要求1的方法，其中向所述患者施用700 mg的抗LAG3抗体。
5.权利要求1的方法，其中向所述患者施用800 mg的抗LAG3抗体。
6.权利要求1至5中任一项的方法，其中每三周一次在第1天向所述患者施用所述抗LAG3抗体。
7.权利要求1至6中任一项的方法，其中所述抗LAG3抗体包含重链和轻链，且其中所述重链含有包含SEQ ID NO:25的重链可变区，且所述轻链含有包含SEQ ID NO:24的轻链可变区。
8.权利要求1至6中任一项的方法，其中所述抗LAG3抗体包含重链和轻链，且其中所述重链包含SEQ ID NO:23且所述轻链包含SEQ ID NO:22。
9.权利要求1至6中任一项的方法，其中所述抗LAG3抗体是Ab6变体。
10.权利要求1至9中任一项的方法，其中所述抗LAG3抗体与抗PD-1抗体或抗PD-L1抗体或其抗原结合片段共同施用。
11.权利要求1至9中任一项的方法，其中所述抗LAG3抗体与抗PD-1抗体或抗PD-L1抗体或其抗原结合片段共配制。
12.权利要求10或11的方法，其中所述抗PD-1抗体或其抗原结合片段特异性结合人PD-1并阻断人PD-L1与人PD-1的结合。
13.权利要求12的方法，其中所述抗PD-1抗体或其抗原结合片段也阻断人PD-L2与人PD-1的结合。
14.权利要求13的方法，其中所述抗PD-1抗体或其抗原结合片段包含：(a) SEQ ID NO:1、2和3的轻链CDR，和(b) SEQ ID NO:6、7和8的重链CDR。
15.权利要求13的方法，其中所述抗PD-1抗体包含重链和轻链，且其中所述重链含有包含SEQ ID NO:9的重链可变区，且所述轻链含有包含SEQ ID NO:4的轻链可变区。
16.权利要求13的方法，其中所述抗PD-1抗体包含重链和轻链，且其中所述重链包含SEQ ID NO:10且所述轻链包含SEQ ID NO:5。
17.权利要求13的方法，其中所述抗PD-1抗体是派姆单抗。
18.权利要求13的方法，其中所述抗PD-1抗体是派姆单抗变体。
19.权利要求10的方法，其中所述抗PD-1抗体是纳武单抗。
20.权利要求10的方法，其中所述抗PD-L1抗体是阿特朱单抗、德瓦鲁单抗或阿维鲁单抗。
21.权利要求14-18中任一项的方法，其中所述抗PD-1抗体经由静脉内输注每三周一次在第1天以200 mg施用。
22.权利要求14-18中任一项的方法，其中所述抗PD-1抗体经由静脉内输注每六周一次在第1天以400 mg施用。
23.权利要求10或11的方法，其中所述抗PD-1抗体是包含重链和轻链的人源化抗PD-1抗体，且其中所述重链含有包含SEQ ID NO:6、7和8的重链CDR的重链可变区，且所述轻链含有包含SEQ ID NO:1、2和3的轻链CDR的轻链可变区；且所述抗LAG3抗体是包含重链和轻链的人源化抗LAG3抗体，且其中所述重链含有包含SEQ ID NO:29、30和31的重链CDR的重链可变区，且所述轻链含有包含SEQ ID NO:26、27和28的轻链CDR的轻链可变区。
24.权利要求10或11的方法，其中所述抗PD-1抗体包含重链和轻链，且其中所述重链含有包含SEQ ID NO:9的重链可变区，且所述轻链含有包含SEQ ID NO:4的轻链可变区；且所述抗LAG3抗体包含重链和轻链，且其中所述重链含有包含SEQ ID NO:25的重链可变区，且所述轻链含有包含SEQ ID NO:24的轻链可变区。
25.权利要求10或11的方法，其中所述抗PD-1抗体包含重链和轻链，且其中所述重链包含SEQ ID NO:10且所述轻链包含SEQ ID NO:5；且所述抗LAG3抗体包含重链和轻链，且其中所述重链包含SEQ ID NO:23且所述轻链包含SEQ ID NO:22。
26.权利要求23-25中任一项的方法，其中所述抗PD-1抗体经由静脉内输注每三周一次在第1天以200 mg施用，且所述抗LAG3抗体经由静脉内输注每三周一次在第1天以200 mg施用。
27.权利要求23-25中任一项的方法，其中所述抗PD-1抗体经由静脉内输注每六周一次在第1天以400 mg施用，且所述抗LAG3抗体经由静脉内输注每三周一次在第1天以200 mg施用。
28.权利要求23-25中任一项的方法，其中所述抗PD-1抗体经由静脉内输注每三周一次在第1天以200 mg施用，且所述抗LAG3抗体经由静脉内输注每三周一次在第1天以700或800mg施用。
29.权利要求23-25中任一项的方法，其中所述抗PD-1抗体经由静脉内输注每六周一次在第1天以400 mg施用，且所述抗LAG3抗体经由静脉内输注每三周一次在第1天以700或800mg施用。
30.权利要求23-25中任一项的方法，其中200 mg的抗PD-1抗体与200 mg抗LAG3抗体共配制。
31.权利要求23-25中任一项的方法，其中200 mg的抗PD-1抗体与800 mg抗LAG3抗体共配制。
32.权利要求1至31中任一项的方法，其中所述癌症选自：头颈鳞状细胞癌、胃癌、胃和/或胃-食管连接部的腺癌、肾细胞癌、输卵管癌、子宫内膜癌和非-微卫星不稳定性-高(非-MSI-H)或熟练错配修复(pMMR)结肠直肠癌。
33.权利要求1至31中任一项的方法，其中所述癌症选自：肾细胞癌，肾盂、输尿管、膀胱或尿道的尿路上皮癌，黑色素瘤，胃癌，非小细胞肺癌和膀胱癌。
34.权利要求1至31中任一项的方法，其中所述癌症是经典霍奇金淋巴瘤(cHL)、弥漫性大B-细胞淋巴瘤(DLBCL)或惰性非霍奇金淋巴瘤(iNHL)。
35.权利要求1至34中任一项的方法，其中所述患者先前未用抗PD-1或抗PD-L1疗法治疗或在接受先前的抗PD-1或抗PD-L1疗法的同时被证实为进展性的。
36.权利要求1至35中任一项的方法，其中所述患者的肿瘤组织切片是PD-L1表达阳性的。
37.权利要求1至36中任一项的方法，其中所述患者的肿瘤组织切片具有PD-L1表达≥2的单核炎性密度评分。
38.权利要求1至37中任一项的方法，其中所述患者的肿瘤组织切片具有PD-L1表达≥1%的组合阳性评分。
39.权利要求1至37中任一项的方法，其中所述患者的肿瘤组织切片具有PD-L1表达≥10%的组合阳性评分。
40.权利要求37-39中任一项的方法，其中通过PD-L1 IHC 22C3 pharmDx测定法测量PD-L1表达。
41.药物组合物，其包含200 mg派姆单抗或派姆单抗变体和200 mg Ab6或Ab6变体以及药学上可接受的赋形剂。
42.药物组合物，其包含200 mg派姆单抗或派姆单抗变体和800 mg Ab6或Ab6变体以及药学上可接受的赋形剂。
43.用于治疗患者中的胃癌的方法，其包括向所述患者施用抗LAG3抗体和抗PD-1抗体，其中来自所述患者的胃肿瘤的肿瘤组织切片是PD-L1表达阳性的。
44.权利要求43的方法，其中所述胃癌是胃腺癌和/或胃-食管连接部腺癌。
45.用于治疗具有头颈鳞状细胞癌的患者的方法，其包括向所述患者施用抗LAG3抗体和抗PD-1抗体，其中来自所述患者的头颈肿瘤的肿瘤组织切片是PD-L1表达阳性的。
46.用于治疗具有非-微卫星不稳定性-高(非-MSI-H)或熟练错配修复(pMMR)结肠直肠癌的患者的方法，其包括向所述患者施用抗LAG3抗体和抗PD-1抗体，其中来自所述患者的结肠直肠肿瘤的肿瘤组织切片是PD-L1表达阳性的，且% LAG3阳性细胞或CPS-样% LAG3阳性细胞为≥1%。
47.权利要求43-46中任一项的方法，其中所述患者先前未接受用抗PD-1抗体或抗PD-L1抗体的疗法。
48.权利要求43-47中任一项的方法，其中所述患者的肿瘤组织切片具有PD-L1表达≥1%的组合阳性评分(CPS)。
49.权利要求43-47中任一项的方法，其中所述患者的肿瘤组织切片具有PD-L1表达≥5%的组合阳性评分。
50.权利要求43-47中任一项的方法，其中所述患者的肿瘤组织切片具有PD-L1表达≥10%的组合阳性评分。
51.权利要求43-47中任一项的方法，其中所述患者的肿瘤组织切片具有PD-L1表达≥20%的组合阳性评分。
52.权利要求43-47中任一项的方法，其中所述患者的肿瘤组织切片具有肿瘤比例评分(TPS) ≥1%或单核炎性密度评分(MIDS) ≥2%。
53.权利要求43-52中任一项的方法，其中通过PD-L1 IHC 22C3 pharmDx测定法测量PD-L1表达。
54.权利要求43-53中任一项的方法，其中所述肿瘤组织切片的% LAG3阳性细胞为≥1%。
55.权利要求43-53中任一项的方法，其中所述肿瘤组织切片的CPS-样% LAG3阳性细胞为≥1%。
56.权利要求43-55中任一项的方法，其中所述抗PD-1抗体或其抗原结合片段特异性结合人PD-1并阻断人PD-L1与人PD-1的结合。
57.权利要求56的方法，其中所述抗PD-1抗体或其抗原结合片段也阻断人PD-L2与人PD-1的结合。
58.权利要求57的方法，其中所述抗PD-1抗体或其抗原结合片段包含：(a) SEQ ID NO:1、2和3的轻链CDR，和(b) SEQ ID NO:6、7和8的重链CDR。
59.权利要求57的方法，其中所述抗PD-1抗体包含重链和轻链，且其中所述重链含有包含SEQ ID NO:9的重链可变区，且所述轻链含有包含SEQ ID NO:4的轻链可变区。
60.权利要求57的方法，其中所述抗PD-1抗体包含重链和轻链，且其中所述重链包含SEQ ID NO:10且所述轻链包含SEQ ID NO:5。
61.权利要求57的方法，其中所述抗PD-1抗体是派姆单抗。
62.权利要求57的方法，其中所述抗PD-1抗体是派姆单抗变体。
63.权利要求57的方法，其中所述抗PD-1抗体是纳武单抗。
64.权利要求43-63中任一项的方法，其中所述抗LAG3抗体包含重链和轻链，且其中所述重链含有包含SEQ ID NO:25的重链可变区，且所述轻链含有包含SEQ ID NO:24的轻链可变区。
65.权利要求43-63中任一项的方法，其中所述抗LAG3抗体包含重链和轻链，且其中所述重链包含SEQ ID NO:23且所述轻链包含SEQ ID NO:22。
66.权利要求43-63中任一项的方法，其中所述抗LAG3抗体是Ab6变体。
67.权利要求43-66中任一项的方法，其中所述抗LAG3抗体与抗PD-1抗体或其抗原结合片段共同施用。
68.权利要求43-66中任一项的方法，其中所述抗LAG3抗体与抗PD-1抗体或其抗原结合片段共配制。
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