CN113311165A - 与唐氏综合征相关的母血标志物及应用 - Google Patents

与唐氏综合征相关的母血标志物及应用 Download PDF

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郭辉
李武县
叶健忠
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Abstract

本发明提供了唐氏综合征相关的母血标志物及应用，属于生物医学技术领域。本发明所公开的与唐氏综合征相关的母血标志物为Tβ10蛋白、ERO1L蛋白、NAP1L1蛋白和OGDHL蛋白。实验证明，本发明所提供的母血标志物可用于无创性产前筛查诊断唐氏综合征，以解决目前唐筛使用的非特异性母血标志物筛查效率低的状况，具有重要的应用价值。

Description

与唐氏综合征相关的母血标志物及应用
本申请为2017年06月20日提交中国专利局、申请号为CN201710470069.4、发明名称为“与唐氏综合征相关的母血标志物及应用”的中国专利申请的分案申请，其全部内容通过引用结合在本申请中。
技术领域
本发明涉及生物医学技术领域，具体涉及与唐氏综合征相关的母血标志物及应用。
背景技术
出生前诊断干预是降低唐氏综合征(Down’s syndrome，DS)出生缺陷的重要手段，因此探索新的特异性无创性产前诊断指标具有非常重要的意义。唐氏综合征额外的1条21号染色体可导致某些基因增强表达和某些正常基因过表达，造成一些重要的生化代谢不平衡，这些表达差异的特异性蛋白质可以通过胎盘屏障进入母体血液。
同位素标记相对和绝对定量(isobaric tags for relative and absolutequantitation，iTRAQ)技术是由AB SCIEX公司研发的一种体外同种同位素标记的相对与绝对定量技术。iTRAQ技术利用多种同位素试剂标记蛋白多肽N末端或赖氨酸侧链基团，经高精度质谱仪串联分析，可同时比较多达8种样品之间的蛋白表达量，是近年来定量蛋白质组学常用的高通量筛选技术。iTRAQ技术在差异蛋白质种类和数量方面以及实验结果的可靠性和重复性方面，比传统的蛋白质组学方法更具优势，它不仅可以发现胞浆蛋白、膜蛋白、核蛋白、胞外蛋白，还可检测出低丰度蛋白、弱碱性蛋白、分子量小于10KD或大于200KD的蛋白，能实现对任何类型蛋白质的准确鉴定，尤其适用于血清或血浆生化标志物的筛选。
发明内容
本发明所要解决的技术问题是如何辅助诊断胎儿唐氏综合征。
为解决上述技术问题，本发明首先提供了用于检测Tβ10蛋白的物质、和/或用于检测ERO1L蛋白的物质、和/或用于检测NAP1L1蛋白的物质、和/或用于检测OGDHL蛋白的物质在制备辅助诊断胎儿唐氏综合征的产品中的应用。所述产品可为试剂盒。
用于检测Tβ10蛋白的物质、和/或用于检测ERO1L蛋白的物质、和/或用于检测NAP1L1蛋白的物质、和/或用于检测OGDHL蛋白的物质在辅助诊断胎儿唐氏综合征中的应用也属于本发明的保护范围。
上述应用中，所述“用于检测OGDHL蛋白的物质”可为检测所述OGDHL蛋白的浓度的物质。所述“用于检测NAP1L1蛋白的物质”可为检测所述NAP1L1蛋白的浓度的物质。所述“用于检测Tβ10蛋白的物质”可为检测所述Tβ10蛋白的浓度的物质。所述“用于检测ERO1L蛋白的物质”可为检测所述ERO1L蛋白的浓度的物质。
上述应用中，所述OGDHL蛋白可为a1)或a2)或a3)：
a1)氨基酸序列是序列表中序列1所示的蛋白质；
a2)在a1)的N端或/和C端连接标签得到的融合蛋白质；
a3)将a1)或a2)所示的蛋白质经过一个或几个氨基酸残基的取代和/或缺失和/或添加得到的具有相同功能的蛋白质。
上述应用中，所述NAP1L1蛋白可为b1)或b2)或b3)：
b1)氨基酸序列是序列表中序列2所示的蛋白质；
b2)在b1)的N端或/和C端连接标签得到的融合蛋白质；
b3)将b1)或b2)所示的蛋白质经过一个或几个氨基酸残基的取代和/或缺失和/或添加得到的具有相同功能的蛋白质。
上述应用中，所述Tβ10蛋白可为c1)或c2)或c3)：
c1)氨基酸序列是序列表中序列3所示的蛋白质；
c2)在c1)的N端或/和C端连接标签得到的融合蛋白质；
c3)将c1)或c2)所示的蛋白质经过一个或几个氨基酸残基的取代和/或缺失和/或添加得到的具有相同功能的蛋白质。
上述应用中，所述ERO1L蛋白可为d1)或d2)或d3)：
d1)氨基酸序列是序列表中序列4所示的蛋白质；
d2)在d1)的N端或/和C端连接标签得到的融合蛋白质；
d3)将d1)或d2)所示的蛋白质经过一个或几个氨基酸残基的取代和/或缺失和/或添加得到的具有相同功能的蛋白质。
为解决上述技术问题，本发明还提供了一种辅助诊断腹胎儿唐氏综合征的产品。
本发明所提供的辅助诊断腹胎儿唐氏综合征的产品，包括用于检测Tβ10蛋白的物质、和/或、用于检测ERO1L蛋白的物质、和/或、用于检测NAP1L1蛋白的物质、和/或、用于检测OGDHL蛋白的物质。所述产品可为试剂盒。
上述产品中，所述“用于检测OGDHL蛋白的物质”可为检测所述OGDHL蛋白的浓度的物质。所述“用于检测NAP1L1蛋白的物质”可为检测所述NAP1L1蛋白的浓度的物质。所述“用于检测Tβ10蛋白的物质”可为检测所述Tβ10蛋白的浓度的物质。所述“用于检测ERO1L蛋白的物质”可为检测所述ERO1L蛋白的浓度的物质。
上述产品中，所述产品还可包括记载有判断标准甲的载体和/或记载有判断标准乙的载体和/或记载有判断标准丙的载体和/或记载有判断标准丁的载体；
所述判断标准丙可为：如果待测母体血浆中所述Tβ10蛋白的浓度大于对照血浆中所述Tβ10蛋白的浓度，则所述待测母体的胎儿为或疑似为唐氏综合征；如果待测母体血浆中所述Tβ10蛋白的浓度在对照血浆中所述Tβ10蛋白的浓度以下，则所述待测母体的胎儿不为或疑似不为唐氏综合征；
所述判断标准丁可为：如果待测母体血浆中所述ERO1L蛋白的浓度大于对照血浆中所述ERO1L蛋白的浓度，则所述待测母体的胎儿为或疑似为唐氏综合征；如果待测母体血浆中所述ERO1L蛋白的浓度在对照血浆中所述ERO1L蛋白的浓度以下，则所述待测母体的胎儿不为或疑似不为唐氏综合征；
所述判断标准乙可为：如果待测母体血浆中所述NAP1L1蛋白的浓度大于对照血浆中所述NAP1L1蛋白的浓度，则所述待测母体的胎儿为或疑似为唐氏综合征；如果待测母体血浆中所述NAP1L1蛋白的浓度在对照血浆中所述NAP1L1蛋白的浓度以下，则所述待测母体的胎儿不为或疑似不为唐氏综合征；
所述判断标准甲可为：如果待测母体血浆中所述OGDHL蛋白的浓度大于对照血浆中所述OGDHL蛋白的浓度，则所述待测母体的胎儿为或疑似为唐氏综合征；如果待测母体血浆中所述OGDHL蛋白的浓度在对照血浆中所述OGDHL蛋白的浓度以下，则所述待测母体的胎儿不为或疑似不为唐氏综合征；
所述对照血浆可为健康胎儿母体和/或非唐氏综合征胎儿母体的血浆。
上述产品中，所述OGDHL蛋白可为a1)或a2)或a3)：
a1)氨基酸序列是序列表中序列1所示的蛋白质；
a2)在a1)的N端或/和C端连接标签得到的融合蛋白质；
a3)将a1)或a2)所示的蛋白质经过一个或几个氨基酸残基的取代和/或缺失和/或添加得到的具有相同功能的蛋白质。
上述产品中，所述NAP1L1蛋白可为b1)或b2)或b3)：
b1)氨基酸序列是序列表中序列2所示的蛋白质；
b2)在b1)的N端或/和C端连接标签得到的融合蛋白质；
b3)将b1)或b2)所示的蛋白质经过一个或几个氨基酸残基的取代和/或缺失和/或添加得到的具有相同功能的蛋白质。
上述产品中，所述Tβ10蛋白可为c1)或c2)或c3)：
c1)氨基酸序列是序列表中序列3所示的蛋白质；
c2)在c1)的N端或/和C端连接标签得到的融合蛋白质；
c3)将c1)或c2)所示的蛋白质经过一个或几个氨基酸残基的取代和/或缺失和/或添加得到的具有相同功能的蛋白质。
上述产品中，所述ERO1L蛋白可为d1)或d2)或d3)：
d1)氨基酸序列是序列表中序列4所示的蛋白质；
d2)在d1)的N端或/和C端连接标签得到的融合蛋白质；
d3)将d1)或d2)所示的蛋白质经过一个或几个氨基酸残基的取代和/或缺失和/或添加得到的具有相同功能的蛋白质。
所述Tβ10蛋白和/或所述ERO1L蛋白和/或所述NAP1L1蛋白和/或所述OGDHL蛋白作为母血标志物在开发诊断唐氏综合征的试剂中的应用也属于本发明的保护范围。
上文中，所述OGDHL蛋白的Gene ID号为55753。所述NAP1L1蛋白的Gene ID号为4673。所述Tβ10蛋白Gene ID号为9168。所述ERO1L蛋白Gene ID号为30001。
上文中，所述检测OGDHL蛋白的浓度具体可为检测母体外周血的血浆中的OGDHL蛋白的浓度。所述检测NAP1L1蛋白的浓度具体可为检测母体外周血的血浆中的NAP1L1蛋白的浓度。所述检测Tβ10蛋白的浓度具体可为检测母体外周血的血浆中的Tβ10蛋白的浓度。所述检测ERO1L蛋白的浓度具体可为检测母体外周血的血浆中的ERO1L蛋白的浓度。
实验证明，本发明的发明人通过从胎儿蛋白整体水平筛选的唐氏综合征母血标志物，即Tβ10蛋白和/或ERO1L蛋白和/或NAP1L1蛋白和/或OGDHL蛋白，可用于无创性产前筛查诊断唐氏综合征，以解决目前唐筛使用的非特异性母血标志物筛查效率低的状况，具有重要的应用价值。
附图说明
图1为8例孕DS胎儿的孕妇外周血的western blot验证结果；
图2为8例孕健康胎儿的孕妇外周血的western blot验证结果。
具体实施方式
以下的实施例便于更好地理解本发明，但并不限定本发明。下述实施例中的实验方法，如无特殊说明，均为常规方法。下述实施例中所用的试验材料，如无特殊说明，均为自常规生化试剂商店购买得到的。以下实施例中的定量试验，均设置三次重复实验，结果取平均值。
下述实施例中的各个实验均是在患者的知情同意的前提下进行的，且均签署知情同意书，并经深圳市人民医院伦理委员会批准后进行实验。
实施例1DS胎儿的候选特异性标记蛋白的获得
以确诊为唐氏综合征的胎儿(以下简称DS胎儿)6例作为DS组，同时以健康胎儿6例作为对照组。先运用iTRAQ技术和串联质谱分析对DS胎儿和健康胎儿脐带血的血浆全基因组蛋白进行鉴定、比较和相对定量分析，得到胎儿“全蛋白质组信息”；然后运用在线工具WEGO(Web Gene Ontology Annotation Plot，网址为http://wego.genomics.org.cn)分析，将所有的蛋白质划分为分子功能、生物过程和细胞组成；最后对所有蛋白进行GO富集分析，通过比较DS胎儿和健康胎儿脐带血血浆中蛋白表达的差异，结合蛋白的临床意义，得到DS胎儿的候选特异性标记蛋白。具体步骤如下：
1、分别取6例DS胎儿(发育至18-22周)的脐带血2mL，置于肝素抗凝管中，然后2000×g离心15min，收集血浆。
2、完成步骤1后，分别提取血浆中的总蛋白并检测总蛋白的浓度。
3、完成步骤2后，取各个样本的血浆(均含100μg总蛋白)，混合；然后使用ProteoMiner蛋白富集试剂盒(Bio-Rad公司的产品)去除高丰度蛋白；最后加入适量胰蛋白酶消化，得到消化液。
4、完成步骤3后，取消化液，使用iTRAQ试剂盒(ABI公司的产品)进行iTRAQ116同位素标记，得到标记样本甲。
5、按照上述步骤1-4，将“DS胎儿(发育至18-22周)”替换为“健康胎儿(发育至18-22周)”，将“iTRAQ116同位素标记”替换为“iTRAQ114同位素标记”，其它步骤均不变，得到标记样本乙。
6、完成步骤4和5后，将标记样本甲和标记样本乙混合，先进行多维液相色谱分离，然后MALDI-TOF/TOF质谱鉴定，计算蛋白质相对定量按平均报告离子比值(iTRAQ116/iTRAQ114)。
7、完成步骤6后，通过在线工具WEGO的数据库查询，建立唐氏综合征蛋白组数据库；通过Scaffold定量分析，获得唐氏综合征疾病差异的蛋白组图谱。
以多肽大于1和95％可信区间作为阈值，有506种蛋白质表达上调或者下调，排除高丰度蛋白，平均报告离子比值(iTRAQ116/iTRAQ114)差异在1.5倍以上显著差异的蛋白质有18种(表1)。其中11种蛋白质与健康胎儿比较表达上调，7种蛋白质与健康胎儿比较表达下调。这18种蛋白质即为DS胎儿的候选特异性标记蛋白。
表1平均报告离子比值(iTRAQ116/iTRAQ114)差异在1.5倍以上显著差异的蛋白质
Figure BDA0002939854370000061
Figure BDA0002939854370000071
实施例2DS胎儿的候选特异性标记蛋白在母体外周血中的western blot验证
兔抗人OGDHL抗体、兔抗人NAP1L1抗体、兔抗人Tβ10抗体和兔抗人ERO1L抗体均为ABCAM公司的产品，产品目录号分别为ab100928、ab178687、ab14338和ab81959。
以8例孕DS胎儿的孕妇作为DS组，同时以8例孕健康胎儿的孕妇作为对照组。
1、分别取8例孕DS胎儿的孕妇外周血5mL和8例孕健康胎儿的孕妇外周血5mL，置于肝素抗凝管中，然后2000×g离心15min，收集血浆。
2、完成步骤1后，分别提取血浆中的总蛋白。
3、将步骤1得到的总蛋白分别进行Western blot，采用兔抗人OGDHL抗体作为一抗检测OGDHL，采用兔抗人NAP1L1抗体作为一抗检测NAP1L1，采用兔抗人Tβ10抗体作为一抗检测Tβ10，采用兔抗人ERO1L抗体作为一抗检测ERO1L。采用图像分析软件Image-pro plus对各个蛋白的条带进行光密度测定，比较DS组与对照组的IOD(Integrate Optical Density)值。
8例孕DS胎儿的孕妇外周血的westernblot验证结果见图1。
8例孕健康胎儿的孕妇外周血的westernblot验证结果见图2。
结果表明，OGDHL、NAP1L1、Tβ10和ERO1L在孕DS胎儿的孕妇外周血中的表达量均显著高于孕健康胎儿的孕妇外周血，即OGDHL、NAP1L1、Tβ10和ERO1L在孕DS胎儿的孕妇外周血中的表达量分别为孕健康胎儿的孕妇外周血中的表达量的1.527倍、2.188倍、14.776倍和11.100倍。这一实验结果与OGDHL、NAP1L1、Tβ10和ERO1L在DS胎儿脐带血中的表达量显著高于健康胎儿脐带血中的表达量完全一致。
结果表明，母体外周血中OGDHL、NAP1L1、Tβ10和ERO1L的浓度均与胎儿唐氏综合征与否有密切联系，可辅助诊断胎儿是否患有唐氏综合征。因此，OGDHL、NAP1L1、Tβ10和ERO1L均为与唐氏综合征相关的母血标志物。
以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。
序列表
<110> 深圳市人民医院
<120> 与唐氏综合征相关的母血标志物及应用
<160> 4
<170> SIPOSequenceListing 1.0
<210> 1
<211> 38
<212> PRT
<213> Homo
<400> 1
Met Gly Glu Ile Ala Ser Phe Asp Lys Ala Lys Leu Lys Lys Thr Glu
1 5 10 15
Thr Gln Glu Lys Asn Thr Leu Pro Thr Lys Glu Thr Ile Glu Gln Glu
20 25 30
Lys Arg Ser Glu Ile Ser
35
<210> 2
<211> 1010
<212> PRT
<213> Homo
<400> 2
Met Ser Gln Leu Arg Leu Leu Pro Ser Arg Leu Gly Val Gln Ala Ala
1 5 10 15
Arg Leu Leu Ala Ala His Asp Val Pro Val Phe Gly Trp Arg Ser Arg
20 25 30
Ser Ser Gly Pro Pro Ala Thr Phe Pro Ser Ser Lys Gly Gly Gly Gly
35 40 45
Ser Ser Tyr Met Glu Glu Met Tyr Phe Ala Trp Leu Glu Asn Pro Gln
50 55 60
Ser Val His Lys Ser Trp Asp Ser Phe Phe Arg Glu Ala Ser Glu Glu
65 70 75 80
Ala Phe Ser Gly Ser Ala Gln Pro Arg Pro Pro Ser Val Val His Glu
85 90 95
Ser Arg Ser Ala Val Ser Ser Arg Thr Lys Thr Ser Lys Leu Val Glu
100 105 110
Asp His Leu Ala Val Gln Ser Leu Ile Arg Ala Tyr Gln Ile Arg Gly
115 120 125
His His Val Ala Gln Leu Asp Pro Leu Gly Ile Leu Asp Ala Asp Leu
130 135 140
Asp Ser Phe Val Pro Ser Asp Leu Ile Thr Thr Ile Asp Lys Leu Ala
145 150 155 160
Phe Tyr Asp Leu Gln Glu Ala Asp Leu Asp Lys Glu Phe Gln Leu Pro
165 170 175
Thr Thr Thr Phe Ile Gly Gly Ser Glu Asn Thr Leu Ser Leu Arg Glu
180 185 190
Ile Ile Arg Arg Leu Glu Asn Thr Tyr Cys Gln His Ile Gly Leu Glu
195 200 205
Phe Met Phe Ile Asn Asp Val Glu Gln Cys Gln Trp Ile Arg Gln Lys
210 215 220
Phe Glu Thr Pro Gly Val Met Gln Phe Ser Ser Glu Glu Lys Arg Thr
225 230 235 240
Leu Leu Ala Arg Leu Val Arg Ser Met Arg Phe Glu Asp Phe Leu Ala
245 250 255
Arg Lys Trp Ser Ser Glu Lys Arg Phe Gly Leu Glu Gly Cys Glu Val
260 265 270
Met Ile Pro Ala Leu Lys Thr Ile Ile Asp Lys Ser Ser Glu Met Gly
275 280 285
Ile Glu Asn Val Ile Leu Gly Met Pro His Arg Gly Arg Leu Asn Val
290 295 300
Leu Ala Asn Val Ile Arg Lys Asp Leu Glu Gln Ile Phe Cys Gln Phe
305 310 315 320
Asp Pro Lys Leu Glu Ala Ala Asp Glu Gly Ser Gly Asp Val Lys Tyr
325 330 335
His Leu Gly Met Tyr His Glu Arg Ile Asn Arg Val Thr Asn Arg Asn
340 345 350
Ile Thr Leu Ser Leu Val Ala Asn Pro Ser His Leu Glu Ala Val Asp
355 360 365
Pro Val Val Gln Gly Lys Thr Lys Ala Glu Gln Phe Tyr Arg Gly Asp
370 375 380
Ala Gln Gly Lys Lys Val Met Ser Ile Leu Val His Gly Asp Ala Ala
385 390 395 400
Phe Ala Gly Gln Gly Val Val Tyr Glu Thr Phe His Leu Ser Asp Leu
405 410 415
Pro Ser Tyr Thr Thr Asn Gly Thr Val His Val Val Val Asn Asn Gln
420 425 430
Ile Gly Phe Thr Thr Asp Pro Arg Met Ala Arg Ser Ser Pro Tyr Pro
435 440 445
Thr Asp Val Ala Arg Val Val Asn Ala Pro Ile Phe His Val Asn Ala
450 455 460
Asp Asp Pro Glu Ala Val Ile Tyr Val Cys Ser Val Ala Ala Glu Trp
465 470 475 480
Arg Asn Thr Phe Asn Lys Asp Val Val Val Asp Leu Val Cys Tyr Arg
485 490 495
Arg Arg Gly His Asn Glu Met Asp Glu Pro Met Phe Thr Gln Pro Leu
500 505 510
Met Tyr Lys Gln Ile His Arg Gln Val Pro Val Leu Lys Lys Tyr Ala
515 520 525
Asp Lys Leu Ile Ala Glu Gly Thr Val Thr Leu Gln Glu Phe Glu Glu
530 535 540
Glu Ile Ala Lys Tyr Asp Arg Ile Cys Glu Glu Ala Tyr Gly Arg Ser
545 550 555 560
Lys Asp Lys Lys Ile Leu His Ile Lys His Trp Leu Asp Ser Pro Trp
565 570 575
Pro Gly Phe Phe Asn Val Asp Gly Glu Pro Lys Ser Met Thr Cys Pro
580 585 590
Ala Thr Gly Ile Pro Glu Asp Met Leu Thr His Ile Gly Ser Val Ala
595 600 605
Ser Ser Val Pro Leu Glu Asp Phe Lys Ile His Thr Gly Leu Ser Arg
610 615 620
Ile Leu Arg Gly Arg Ala Asp Met Thr Lys Asn Arg Thr Val Asp Trp
625 630 635 640
Ala Leu Ala Glu Tyr Met Ala Phe Gly Ser Leu Leu Lys Glu Gly Ile
645 650 655
His Val Arg Leu Ser Gly Gln Asp Val Glu Arg Gly Thr Phe Ser His
660 665 670
Arg His His Val Leu His Asp Gln Glu Val Asp Arg Arg Thr Cys Val
675 680 685
Pro Met Asn His Leu Trp Pro Asp Gln Ala Pro Tyr Thr Val Cys Asn
690 695 700
Ser Ser Leu Ser Glu Tyr Gly Val Leu Gly Phe Glu Leu Gly Tyr Ala
705 710 715 720
Met Ala Ser Pro Asn Ala Leu Val Leu Trp Glu Ala Gln Phe Gly Asp
725 730 735
Phe His Asn Thr Ala Gln Cys Ile Ile Asp Gln Phe Ile Ser Thr Gly
740 745 750
Gln Ala Lys Trp Val Arg His Asn Gly Ile Val Leu Leu Leu Pro His
755 760 765
Gly Met Glu Gly Met Gly Pro Glu His Ser Ser Ala Arg Pro Glu Arg
770 775 780
Phe Leu Gln Met Ser Asn Asp Asp Ser Asp Ala Tyr Pro Ala Phe Thr
785 790 795 800
Lys Asp Phe Glu Val Ser Gln Leu Tyr Asp Cys Asn Trp Ile Val Val
805 810 815
Asn Cys Ser Thr Pro Ala Asn Tyr Phe His Val Leu Arg Arg Gln Ile
820 825 830
Leu Leu Pro Phe Arg Lys Pro Leu Ile Ile Phe Thr Pro Lys Ser Leu
835 840 845
Leu Arg His Pro Glu Ala Lys Ser Ser Phe Asp Gln Met Val Ser Gly
850 855 860
Thr Ser Phe Gln Arg Val Ile Pro Glu Asp Gly Ala Ala Ala Arg Ala
865 870 875 880
Pro Glu Gln Val Gln Arg Leu Ile Phe Cys Thr Gly Lys Val Tyr Tyr
885 890 895
Asp Leu Val Lys Glu Arg Ser Ser Gln Asp Leu Glu Glu Lys Val Ala
900 905 910
Ile Thr Arg Leu Glu Gln Ile Ser Pro Phe Pro Phe Asp Leu Ile Lys
915 920 925
Gln Glu Ala Glu Lys Tyr Pro Gly Ala Glu Leu Ala Trp Cys Gln Glu
930 935 940
Glu His Lys Asn Met Gly Tyr Tyr Asp Tyr Ile Ser Pro Arg Phe Met
945 950 955 960
Thr Ile Leu Arg Arg Ala Arg Pro Ile Trp Tyr Val Gly Arg Asp Pro
965 970 975
Ala Ala Ala Pro Ala Thr Gly Asn Arg Asn Thr His Leu Val Ser Leu
980 985 990
Lys Lys Phe Leu Asp Thr Ala Phe Asn Leu Gln Ala Phe Glu Gly Lys
995 1000 1005
Thr Phe
1010
<210> 3
<211> 391
<212> PRT
<213> Homo
<400> 3
Met Ala Asp Ile Asp Asn Lys Glu Gln Ser Glu Leu Asp Gln Asp Leu
1 5 10 15
Asp Asp Val Glu Glu Val Glu Glu Glu Glu Thr Gly Glu Glu Thr Lys
20 25 30
Leu Lys Ala Arg Gln Leu Thr Val Gln Met Met Gln Asn Pro Gln Ile
35 40 45
Leu Ala Ala Leu Gln Glu Arg Leu Asp Gly Leu Val Glu Thr Pro Thr
50 55 60
Gly Tyr Ile Glu Ser Leu Pro Arg Val Val Lys Arg Arg Val Asn Ala
65 70 75 80
Leu Lys Asn Leu Gln Val Lys Cys Ala Gln Ile Glu Ala Lys Phe Tyr
85 90 95
Glu Glu Val His Asp Leu Glu Arg Lys Tyr Ala Val Leu Tyr Gln Pro
100 105 110
Leu Phe Asp Lys Arg Phe Glu Ile Ile Asn Ala Ile Tyr Glu Pro Thr
115 120 125
Glu Glu Glu Cys Glu Trp Lys Pro Asp Glu Glu Asp Glu Ile Ser Glu
130 135 140
Glu Leu Lys Glu Lys Ala Lys Ile Glu Asp Glu Lys Lys Asp Glu Glu
145 150 155 160
Lys Glu Asp Pro Lys Gly Ile Pro Glu Phe Trp Leu Thr Val Phe Lys
165 170 175
Asn Val Asp Leu Leu Ser Asp Met Val Gln Glu His Asp Glu Pro Ile
180 185 190
Leu Lys His Leu Lys Asp Ile Lys Val Lys Phe Ser Asp Ala Gly Gln
195 200 205
Pro Met Ser Phe Val Leu Glu Phe His Phe Glu Pro Asn Glu Tyr Phe
210 215 220
Thr Asn Glu Val Leu Thr Lys Thr Tyr Arg Met Arg Ser Glu Pro Asp
225 230 235 240
Asp Ser Asp Pro Phe Ser Phe Asp Gly Pro Glu Ile Met Gly Cys Thr
245 250 255
Gly Cys Gln Ile Asp Trp Lys Lys Gly Lys Asn Val Thr Leu Lys Thr
260 265 270
Ile Lys Lys Lys Gln Lys His Lys Gly Arg Gly Thr Val Arg Thr Val
275 280 285
Thr Lys Thr Val Ser Asn Asp Ser Phe Phe Asn Phe Phe Ala Pro Pro
290 295 300
Glu Val Pro Glu Ser Gly Asp Leu Asp Asp Asp Ala Glu Ala Ile Leu
305 310 315 320
Ala Ala Asp Phe Glu Ile Gly His Phe Leu Arg Glu Arg Ile Ile Pro
325 330 335
Arg Ser Val Leu Tyr Phe Thr Gly Glu Ala Ile Glu Asp Asp Asp Asp
340 345 350
Asp Tyr Asp Glu Glu Gly Glu Glu Ala Asp Glu Glu Gly Glu Glu Glu
355 360 365
Gly Asp Glu Glu Asn Asp Pro Asp Tyr Asp Pro Lys Lys Asp Gln Asn
370 375 380
Pro Ala Glu Cys Lys Gln Gln
385 390
<210> 4
<211> 468
<212> PRT
<213> Homo
<400> 4
Met Gly Arg Gly Trp Gly Phe Leu Phe Gly Leu Leu Gly Ala Val Trp
1 5 10 15
Leu Leu Ser Ser Gly His Gly Glu Glu Gln Pro Pro Glu Thr Ala Ala
20 25 30
Gln Arg Cys Phe Cys Gln Val Ser Gly Tyr Leu Asp Asp Cys Thr Cys
35 40 45
Asp Val Glu Thr Ile Asp Arg Phe Asn Asn Tyr Arg Leu Phe Pro Arg
50 55 60
Leu Gln Lys Leu Leu Glu Ser Asp Tyr Phe Arg Tyr Tyr Lys Val Asn
65 70 75 80
Leu Lys Arg Pro Cys Pro Phe Trp Asn Asp Ile Ser Gln Cys Gly Arg
85 90 95
Arg Asp Cys Ala Val Lys Pro Cys Gln Ser Asp Glu Val Pro Asp Gly
100 105 110
Ile Lys Ser Ala Ser Tyr Lys Tyr Ser Glu Glu Ala Asn Asn Leu Ile
115 120 125
Glu Glu Cys Glu Gln Ala Glu Arg Leu Gly Ala Val Asp Glu Ser Leu
130 135 140
Ser Glu Glu Thr Gln Lys Ala Val Leu Gln Trp Thr Lys His Asp Asp
145 150 155 160
Ser Ser Asp Asn Phe Cys Glu Ala Asp Asp Ile Gln Ser Pro Glu Ala
165 170 175
Glu Tyr Val Asp Leu Leu Leu Asn Pro Glu Arg Tyr Thr Gly Tyr Lys
180 185 190
Gly Pro Asp Ala Trp Lys Ile Trp Asn Val Ile Tyr Glu Glu Asn Cys
195 200 205
Phe Lys Pro Gln Thr Ile Lys Arg Pro Leu Asn Pro Leu Ala Ser Gly
210 215 220
Gln Gly Thr Ser Glu Glu Asn Thr Phe Tyr Ser Trp Leu Glu Gly Leu
225 230 235 240
Cys Val Glu Lys Arg Ala Phe Tyr Arg Leu Ile Ser Gly Leu His Ala
245 250 255
Ser Ile Asn Val His Leu Ser Ala Arg Tyr Leu Leu Gln Glu Thr Trp
260 265 270
Leu Glu Lys Lys Trp Gly His Asn Ile Thr Glu Phe Gln Gln Arg Phe
275 280 285
Asp Gly Ile Leu Thr Glu Gly Glu Gly Pro Arg Arg Leu Lys Asn Leu
290 295 300
Tyr Phe Leu Tyr Leu Ile Glu Leu Arg Ala Leu Ser Lys Val Leu Pro
305 310 315 320
Phe Phe Glu Arg Pro Asp Phe Gln Leu Phe Thr Gly Asn Lys Ile Gln
325 330 335
Asp Glu Glu Asn Lys Met Leu Leu Leu Glu Ile Leu His Glu Ile Lys
340 345 350
Ser Phe Pro Leu His Phe Asp Glu Asn Ser Phe Phe Ala Gly Asp Lys
355 360 365
Lys Glu Ala His Lys Leu Lys Glu Asp Phe Arg Leu His Phe Arg Asn
370 375 380
Ile Ser Arg Ile Met Asp Cys Val Gly Cys Phe Lys Cys Arg Leu Trp
385 390 395 400
Gly Lys Leu Gln Thr Gln Gly Leu Gly Thr Ala Leu Lys Ile Leu Phe
405 410 415
Ser Glu Lys Leu Ile Ala Asn Met Pro Glu Ser Gly Pro Ser Tyr Glu
420 425 430
Phe His Leu Thr Arg Gln Glu Ile Val Ser Leu Phe Asn Ala Phe Gly
435 440 445
Arg Ile Ser Thr Ser Val Lys Glu Leu Glu Asn Phe Arg Asn Leu Leu
450 455 460
Gln Asn Ile His
465

Claims (6)

1.用于检测Tβ10蛋白的物质、用于检测ERO1L蛋白的物质、用于检测NAP1L1蛋白的物质和用于检测OGDHL蛋白的物质在制备辅助诊断胎儿唐氏综合征的产品中的应用；
所述OGDHL蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示；
所述NAP1L1蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示；
所述Tβ10蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO.3所示；
所述ERO1L蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO.4所示。
2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述“用于检测Tβ10蛋白的物质”为检测所述Tβ10蛋白的浓度的物质；所述“用于检测ERO1L蛋白的物质”为检测所述ERO1L蛋白的浓度的物质；所述“用于检测NAP1L1蛋白的物质”为检测所述NAP1L1蛋白的浓度的物质；所述“用于检测OGDHL蛋白的物质”为检测所述OGDHL蛋白的浓度的物质。
3.一种辅助诊断胎儿唐氏综合征的产品，包括用于检测Tβ10蛋白的物质、用于检测ERO1L蛋白的物质、用于检测NAP1L1蛋白的物质和用于检测OGDHL蛋白的物质；
所述OGDHL蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示；
所述NAP1L1蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示；
所述Tβ10蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO.3所示；
所述ERO1L蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO.4所示。
4.根据权利要求3所述的产品，其特征在于，所述“用于检测Tβ10蛋白的物质”为检测所述Tβ10蛋白的浓度的物质；所述“用于检测ERO1L蛋白的物质”为检测所述ERO1L蛋白的浓度的物质；所述“用于检测NAP1L1蛋白的物质”为检测所述NAP1L1蛋白的浓度的物质；所述“用于检测OGDHL蛋白的物质”为检测所述OGDHL蛋白的浓度的物质。
5.根据权利要求3或4所述的产品，其特征在于，所述产品还包括记载有判断标准甲的载体、记载有判断标准乙的载体、记载有判断标准丙的载体和记载有判断标准丁的载体：
所述判断标准丙为：如果待测母体血浆中所述Tβ10蛋白的浓度大于对照血浆中所述Tβ10蛋白的浓度，则所述待测母体的胎儿为或疑似为唐氏综合征；如果待测母体血浆中所述Tβ10蛋白的浓度在对照血浆中所述Tβ10蛋白的浓度以下，则所述待测母体的胎儿不为或疑似不为唐氏综合征；
所述判断标准丁为：如果待测母体血浆中所述ERO1L蛋白的浓度大于对照血浆中所述ERO1L蛋白的浓度，则所述待测母体的胎儿为或疑似为唐氏综合征；如果待测母体血浆中所述ERO1L蛋白的浓度在对照血浆中所述ERO1L蛋白的浓度以下，则所述待测母体的胎儿不为或疑似不为唐氏综合征；
所述判断标准乙为：如果待测母体血浆中所述NAP1L1蛋白的浓度大于对照血浆中所述NAP1L1蛋白的浓度，则所述待测母体的胎儿为或疑似为唐氏综合征；如果待测母体血浆中所述NAP1L1蛋白的浓度在对照血浆中所述NAP1L1蛋白的浓度以下，则所述待测母体的胎儿不为或疑似不为唐氏综合征；
所述判断标准甲为：如果待测母体血浆中所述OGDHL蛋白的浓度大于对照血浆中所述OGDHL蛋白的浓度，则所述待测母体的胎儿为或疑似为唐氏综合征；如果待测母体血浆中所述OGDHL蛋白的浓度在对照血浆中所述OGDHL蛋白的浓度以下，则所述待测母体的胎儿不为或疑似不为唐氏综合征；
所述对照血浆为健康胎儿母体和/或非唐氏综合征胎儿母体的血浆。
6.Tβ10蛋白、ERO1L蛋白、NAP1L1蛋白和OGDHL蛋白作为母血标志物在开发诊断胎儿唐氏综合征的试剂中的应用；
所述OGDHL蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示；
所述NAP1L1蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示；
所述Tβ10蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO.3所示；
所述ERO1L蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO.4所示。
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