CN113308511A - 玻璃表面抗菌性快速检测方法 - Google Patents
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Abstract
本发明提供了一种玻璃表面抗菌性快速检测方法。该方法是在抗菌玻璃表面接种大肠杆菌检测液，然后再在其表面覆盖一片抗菌玻璃，等待10～100min检测时间；接着取下覆盖的抗菌玻璃，将荧光检测拭子的棉签吸取抗菌玻璃表面接种的大肠杆菌检测液；然后掰断密封杆，充分摇匀至出现气泡，使得荧光液把检测液中的大肠杆菌染色；接着放置预设时间后，把荧光检测拭子放入ATP检测仪中测量抗菌玻璃的ATP含量，从而判断抗菌玻璃的抗菌性。本发明检测速度快、操作简单，能够相对定性地快速判断出玻璃的抗菌性，还能定量的计算出玻璃的抗菌率。
Description
技术领域
本发明涉及细菌检测方法技术领域，尤其涉及一种玻璃表面抗菌性快速检测方法。
背景技术
随着玻璃抗菌(AM)技术的发展，具有抗菌性能的消费电子类产品蓄势待发，特别是电子设备的触摸屏应具有抗菌性能的盖板保护玻璃。所述触摸屏包括移动电话、智能电话、平板电脑、笔记本电脑、PDA、ATM机上使用的触摸屏，以及在工业或医疗设备上使用的触摸屏。
在抗菌消费电子类产品的推广阶段，消费者希望能够证实所购买的电子产品具有名副其实的抗菌功能，而销售商也非常希望能够向目标消费者快速证实所销售产品具有抗菌功能。因此，当前迫切需求快速证实抗菌效果的方法。
然而，事实上，证实抗菌功能是一项非常复杂而且专业的技术，需要专业技术人员借助于专门的设备，通过标准步骤和方法才能实现。例如，现有玻璃产品抗菌率的其中一种标准测量方法，首先将抗菌玻璃和其参照样品切割成50×50mm的尺寸，在清洗和杀菌之后，在两个样品表面接种0.4ml的有效菌液。在接种后，用无菌PE膜覆盖所述样品，并将其置于培养箱中，在37℃的温度和100％的湿度下培养24小时。之后，小心地清洗这两个样品的表面，并收集在所述玻璃表面上的所有大肠杆菌。然后将收集的菌液按一定的比例和操作规范在盛有LB培养基的培养皿中再次进行接种，再培养24小时。最后，对两个培养皿中的大肠杆菌菌落进行计数，从该计数计算出所测样品的抗菌率。显然，只有专业人士在实验室中才能实施这种标准方法，而且需要至少三天的时间。因此，该方法不能用于非专业人士快速证实产品抗菌效果的场合。
市场上的手持式ATP(三磷酸腺苷)荧光检测装置可用于快速检测产品表面的微生物含量。ATP，即三磷酸腺苷，是生物细胞光合作用、有氧呼吸和无氧呼吸过程的最终产物之一，并在细胞的许多生命过程中被各类酶和结构蛋白所利用，所述细胞生命过程包括细胞的物质合成、运动和细胞分裂等。事实上，ATP是细胞中主要的能量传输分子，在细胞内产生能量和消耗能量的各种反应之间传递能量，以使细胞能够进行新陈代谢。由于所有的活细胞，包括微生物的细胞，都含有ATP，并且其含量相当稳定，因此能通过测量ATP的量，为评估所采集到的微生物的数量提供了一种间接但非常快捷的方法。因此，ATP检测已经成为一种被推荐的方法，被广泛用于餐饮和食品行业的卫生监管中。当前的手持式ATP荧光检测装置主要为此目的所设计，然而，这种测量装置并不适用于快速证实玻璃表面抗菌效果的目的。
专利CN201410567406.8公开了一种测定玻璃抗菌性的方法和装置及其用途。该方法首先采用干棉球吸取样品表面菌液，并与ATP荧光检测试剂混合，待菌液中原有的ATP被ATP荧光检测试剂充分消耗后，再用手捏装有细胞裂解液的盖管，使活细胞裂解，最终根据ATP结果反映出表面菌液的活细菌总数。该方法需要特定的ATP检测装置，而且检测步骤繁杂、检测时间长。
有鉴于此，有必要设计一种改进的玻璃表面抗菌性快速检测方法，以解决上述问题。
发明内容
为了克服上述现有技术的不足，本发明的目的在于提供一种玻璃表面抗菌性快速检测方法。该方法在抗菌玻璃表面接种大肠杆菌检测液，然后再覆盖一片抗菌玻璃，只需等待较短检测时间，就可通过ATP荧光检测装置测出抗菌玻璃的ATP含量，从而判断抗菌玻璃的抗菌性。
为实现上述发明目的，本发明提供了一种玻璃表面抗菌性快速检测方法，包括以下步骤：
S1.配制预设浓度的大肠杆菌检测液；
S2.在一片抗菌玻璃表面接种所述大肠杆菌检测液，然后在所述抗菌玻璃表面覆盖另一片抗菌玻璃；
S3.将经步骤S2处理的所述抗菌玻璃放置培养环境下，等待10～100min检测时间；
S4.取下覆盖的抗菌玻璃，将荧光检测拭子的棉签吸取所述抗菌玻璃表面接种的所述大肠杆菌检测液；然后掰断密封杆，充分摇匀至出现气泡，使得荧光液把检测液中的大肠杆菌染色；接着放置预设时间后，把所述荧光检测拭子放入ATP检测仪中测量所述抗菌玻璃的ATP含量，以判断所述抗菌玻璃的抗菌性。
作为本发明的进一步改进，测试步骤S2中接种的大肠杆菌检测液的ATP含量，并根据下式计算抗菌玻璃的抗菌率：
作为本发明的进一步改进，在步骤S1中，所述大肠杆菌检测液的浓度为10～105CFU/mL。
作为本发明的进一步改进，在步骤S1中，所述大肠杆菌检测液的配制方法为：将冷藏的大肠杆菌在25～37℃下放置24～48h，然后配制103～107CFU/mL大肠杆菌溶液，采用纯净水将其按体积比1:100进行稀释，搅拌至呈现偏黄色的透明液体，通过ATP荧光检测仪检测并记录大肠杆菌检测液中的大肠杆菌数值。
作为本发明的进一步改进，在步骤S2中，两片所述抗菌玻璃为同一规格的经相同抗菌处理方法处理得到的抗菌玻璃。
作为本发明的进一步改进，在步骤S2中，在一片抗菌玻璃表面接种0.02mL所述大肠杆菌检测液，然后在所述抗菌玻璃表面覆盖另一片抗菌玻璃后，用手轻轻按压使得所述大肠杆菌检测液均匀的扩散开。
作为本发明的进一步改进，在步骤S3中，所述检测时间为10～60min。
作为本发明的进一步改进，所述检测时间为30min。
作为本发明的进一步改进，在步骤S4中，所述放置预设时间为1～5min，以使大肠杆菌减缓运动。
作为本发明的进一步改进，所述放置预设时间为1min。
本发明的有益效果是：
1.本发明提供的玻璃表面抗菌性快速检测方法，在抗菌玻璃表面接种大肠杆菌检测液后，在其表面覆盖一层同等规格的抗菌玻璃，大肠杆菌在两片抗菌玻璃构造的环境下，抗菌效率更高，因此大肠杆菌死亡速率加快，从而显著缩短检测时间，只需等待10～100min，就可通过ATP荧光检测仪准确的测出抗菌后大肠杆菌液的ATP含量，从而根据ATP含量大小，快速的判断出玻璃的抗菌性。如此操作，一方面缩短检测时间，一方面减小由于检测时间过长而导致其他随机影响因素对检测结果的影响，从而提高抗菌性判断准确率。
2.本发明提供的玻璃表面抗菌性快速检测方法，通过与接种的大肠杆菌ATP含量进行对比，能够直接反映抗菌玻璃的抗菌性优劣，还能通过计算公式，定量的得出抗菌玻璃的抗菌率。在实际应用中，还可将不同抗菌玻璃的测试结果进行对比，从而判断其抗菌率。还可将检测时间与抗菌率结合，判断抗菌玻璃的杀菌速率；通过制作抗菌率与检测时间的关系曲线，并与标准抗菌率检测方法进行对比，得出本发明检测方法的最优检测时间。
具体实施方式
为了使本发明的目的、技术方案和优点更加清楚，下面结合具体实施例对本发明进行详细描述。
在此，还需要说明的是，为了避免因不必要的细节而模糊了本发明，在具体实施例中仅仅示出了与本发明的方案密切相关的结构和/或处理步骤，而省略了与本发明关系不大的其他细节。
另外，还需要说明的是，术语“包括”、“包含”或者其任何其他变体意在涵盖非排他性的包含，从而使得包括一系列要素的过程、方法、物品或者设备不仅包括那些要素，而且还包括没有明确列出的其他要素，或者是还包括为这种过程、方法、物品或者设备所固有的要素。
本发明提供了一种玻璃表面抗菌性快速检测方法，包括以下步骤：
S1.配制预设浓度的大肠杆菌检测液；
其中，所述大肠杆菌检测液的浓度为10～105CFU/mL，优选为10～102CFU/mL。本发明采用极稀浓度的大肠杆菌溶液，搭配下述步骤S2中采用两片抗菌玻璃检测，能够实现抗菌玻璃的快速检测。
所述大肠杆菌检测液的配制方法为：将冷藏的大肠杆菌在25～37℃下放置24～48h，使其苏醒激活，然后配制103～107CFU/mL大肠杆菌溶液，采用纯净水将其按体积比1:100进行稀释，搅拌至呈现偏黄色的透明液体，检测并记录大肠杆菌检测液中的大肠杆菌数值。
S2.在一片抗菌玻璃表面接种所述大肠杆菌检测液，然后在所述抗菌玻璃表面覆盖另一片抗菌玻璃；
两片所述抗菌玻璃为同一规格的经相同抗菌处理方法处理得到的抗菌玻璃，在一片抗菌玻璃表面接种0.02mL所述大肠杆菌检测液，然后在所述抗菌玻璃表面覆盖另一片抗菌玻璃后，用手轻轻按压使得所述大肠杆菌检测液均匀的扩散开。
S3.将经步骤S2处理的所述抗菌玻璃放置培养环境下，等待10～100min检测时间；所述检测时间优选为10～60min，更优选为30min。
S4.取下覆盖的抗菌玻璃，将荧光检测拭子的棉签吸取所述抗菌玻璃表面接种的所述大肠杆菌检测液；然后掰断密封杆，充分摇匀至出现气泡，使得荧光液把检测液中的大肠杆菌染色；接着放置预设时间后，把所述荧光检测拭子放入ATP检测仪中测量所述抗菌玻璃的ATP含量，以判断所述抗菌玻璃的抗菌性。
在步骤S4中，所述放置预设时间为1～5min，优选为1min，以使大肠杆菌减缓运动。
通过采用上述技术方案，在抗菌玻璃表面接种大肠杆菌检测液后，在其表面覆盖一层同等规格的抗菌玻璃，大肠杆菌在两片抗菌玻璃构造的环境下，抗菌效率更高，因此大肠杆菌死亡速率加快，从而显著缩短检测时间，只需等待10～100min，就可通过ATP荧光检测仪准确的测出抗菌后大肠杆菌液的ATP含量，从而根据ATP含量大小，快速的判断出玻璃的抗菌性。如此操作，一方面缩短检测时间，一方面减小由于检测时间过长而导致其他随机影响因素对检测结果的影响，从而提高抗菌性判断准确率。此外，本发明在采用荧光检测拭子的棉签吸取所述抗菌玻璃表面接种的所述大肠杆菌检测液后，将荧光检测液与大肠杆菌检测液充分摇匀至出现气泡，反应的大肠杆菌混合液体体积明显增大，然后再放置1min，待溶液内大肠杆菌减缓运动后放入ATP检测仪中检测。如此操作，能够使得大肠杆菌中的ATP充分释放染色，从而更准确的测出其含量。
测试步骤S2中接种的大肠杆菌检测液的ATP含量，并根据下式计算抗菌玻璃的抗菌率：
如此操作，通过与接种的大肠杆菌的ATP含量进行对比，能够直接反映抗菌玻璃的抗菌性优劣，还能通过上述计算公式，定量的得出抗菌玻璃的抗菌率。在实际应用中，还可将不同抗菌玻璃的测试结果进行对比，从而判断其抗菌率。还可将检测时间与抗菌率结合，判断抗菌玻璃的杀菌速率；通过制作抗菌率与检测时间的关系曲线，并与标准抗菌率检测方法进行对比，得出本发明检测方法的最优检测时间。
实施例1
一、检测名称：抗菌玻璃大肠杆菌活株检测
二、检测方法：ATP荧光检测
三、需要物料：ATP荧光检测仪、荧光检测拭子、大肠杆菌(又叫大肠埃希氏菌)、杀菌玻璃两片、纯净水、量杯、量筒、搅拌棒、滴管、一次性手套。
四、检测流程：
(1)检测前准备
1、提前将大肠杆菌拿出在36±1℃放置24h(培养基：营养琼脂)，使得被冷藏的大肠杆菌运动，以备配比检测所需的大肠杆菌溶液。
2、两片杀菌玻璃清洁干净放在检测台上(注意不要划伤杀菌层)。
3、清洁量筒、量杯，搅拌棒。
4、全程佩戴一次性手套。
配比1:100大肠杆菌溶液(一次配比的大肠杆菌溶液最多可以使用一周时间)
(2)配比检测溶液
1、在量筒内滴入1mL的大肠杆菌溶液。
2、把1mL的大肠杆菌溶液倒入量杯中。
3、用量筒盛取100mL纯净水倒入量杯中。
4、用搅拌棒顺时针搅动量杯中的大肠杆菌混合液体，使其充分稀释。
5、观察量杯中配比的大肠杆菌溶液，呈现偏黄色的透明液体。
6、检测配比的大肠杆菌溶液中大肠杆菌的数值。
(3)滴放
1、用滴管吸取0.02mL配比的大肠杆菌溶液滴在准备好的杀菌玻璃涂层面上。
2、再将准备好的另外一片杀菌玻璃，盖在上面，用手轻轻按压盖玻片中间区域，让大肠杆菌溶液均匀的扩散开来。
3、放置好，等待检测时间结束。
(4)检测
1、提前15min把荧光检测拭子拿出冰箱放置在室温下。
2、翻开盖玻片(覆盖的杀菌玻璃)，拔出荧光检测拭子，旋转棉签尽量多吸取杀菌玻璃表面的液体。
3、掰断荧光检测仪顶部存放荧光液中连接杆，使得荧光液流进试管中把大肠杆菌溶液中的大肠杆菌染色。
4、充分摇匀，摇晃到出现气泡，反应的大肠杆菌混合液体体积明显增大。
5、放置1min，待溶液内大肠杆菌减缓运动。
6、把拭子放在ATP检测仪中，点击检测按钮。
7、读取数值(如若读取的数值超出预期，把拭子拿出，重启ATP检测仪，再次检测读数)。
8、做好记录。
(5)清洗
把在检测中使用的物料用清水洗净，以备下次再用。
分别采用两组相同的抗菌玻璃，测试其在不同检测时间下的抗菌率，如表1所示。
表1不同检测时间及不同抗菌玻璃样品的检测结果
从表1可以看出，随着检测时间的延长，测得的抗菌率逐渐增大，逐渐接近标准实验室法测得的抗菌率。其中，检测时间为10min时，两组相同的抗菌玻璃的ATP值相差较大，且与标准抗菌率相差也较大；当检测时间为30min时，两组抗菌玻璃的ATP值差距逐渐减小，并与标准抗菌率相差不大；随着检测时间的继续增大，本发明测得的抗菌率基本与标准抗菌率一致。可见，检测时间过短时，抗菌检测结果不稳定，且与实际值相差较大。本发明仅需30min～60minh的测试时间，就能通过对比，判断出抗菌玻璃的抗菌性优劣。
综上所述，本发明提供的玻璃表面抗菌性快速检测方法，在抗菌玻璃表面接种大肠杆菌检测液，然后再覆盖一片抗菌玻璃，只需等待较短检测时间，就可通过ATP荧光检测仪准确的测出抗菌后大肠杆菌液的ATP含量，从而根据ATP含量大小，快速的判断出玻璃的抗菌性。如此操作，一方面缩短检测时间，一方面减小由于检测时间过长而导致其他随机影响因素对检测结果的影响，从而提高抗菌性判断准确率。本发明还可通过计算公式，定量的得出抗菌玻璃的抗菌率。
以上实施例仅用以说明本发明的技术方案而非限制，尽管参照较佳实施例对本发明进行了详细说明，本领域的普通技术人员应当理解，可以对本发明的技术方案进行修改或者等同替换，而不脱离本发明技术方案的精神和范围。
Claims (10)
1.一种玻璃表面抗菌性快速检测方法，其特征在于，包括以下步骤：
S1.配制预设浓度的大肠杆菌检测液；
S2.在一片抗菌玻璃表面接种所述大肠杆菌检测液，然后在所述抗菌玻璃表面覆盖另一片抗菌玻璃；
S3.将经步骤S2处理的所述抗菌玻璃放置培养环境下，等待10～100min检测时间；
S4.取下覆盖的抗菌玻璃，将荧光检测拭子的棉签吸取所述抗菌玻璃表面接种的所述大肠杆菌检测液；然后掰断密封杆，充分摇匀至出现气泡，使得荧光液把检测液中的大肠杆菌染色；接着放置预设时间后，把所述荧光检测拭子放入ATP检测仪中测量所述抗菌玻璃的ATP含量，以判断所述抗菌玻璃的抗菌性。
2.根据权利要求1所述的玻璃表面抗菌性快速检测方法，其特征在于，测试步骤S2中接种的大肠杆菌检测液的ATP含量，并根据下式计算抗菌玻璃的抗菌率：
3.根据权利要求1所述的玻璃表面抗菌性快速检测方法，其特征在于，在步骤S1中，所述大肠杆菌检测液的浓度为10～105CFU/mL。
4.根据权利要求3所述的玻璃表面抗菌性快速检测方法，其特征在于，在步骤S1中，所述大肠杆菌检测液的配制方法为：将冷藏的大肠杆菌在25～37℃下放置24～48h，然后配制103～107CFU/mL大肠杆菌溶液，采用纯净水将其按体积比1:100进行稀释，搅拌至呈现偏黄色的透明液体，检测并记录大肠杆菌检测液中的大肠杆菌数值。
5.根据权利要求1所述的玻璃表面抗菌性快速检测方法，其特征在于，在步骤S2中，两片所述抗菌玻璃为同一规格的经相同抗菌处理方法处理得到的抗菌玻璃。
6.根据权利要求1所述的玻璃表面抗菌性快速检测方法，其特征在于，在步骤S2中，在一片抗菌玻璃表面接种0.02mL所述大肠杆菌检测液，然后在所述抗菌玻璃表面覆盖另一片抗菌玻璃后，用手轻轻按压使得所述大肠杆菌检测液均匀的扩散开。
7.根据权利要求1所述的玻璃表面抗菌性快速检测方法，其特征在于，在步骤S3中，所述检测时间为10～60min。
8.根据权利要求7所述的玻璃表面抗菌性快速检测方法，其特征在于，所述检测时间为30min。
9.根据权利要求1所述的玻璃表面抗菌性快速检测方法，其特征在于，在步骤S4中，所述放置预设时间为1～5min，以使大肠杆菌减缓运动。
10.根据权利要求9所述的玻璃表面抗菌性快速检测方法，其特征在于，所述放置预设时间为1min。
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