CN113302200A - 酶促核酸分子 - Google Patents
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Abstract
本发明的某些方面涉及用于治疗前列腺癌的方法和试剂。本发明还包括酶促核酸分子(“DNA酶”),其包含催化核心和两个与雄激素受体mRNA分子中包含的核酸序列互补的特异性结合臂。还包括包含酶促核酸分子的组合物以及治疗疾病例如前列腺癌的方法,所述方法包括使用这样的核酸分子。
Description
技术领域
本发明的某些方面涉及用于治疗前列腺癌的方法和试剂。本发明还包括酶促核酸(enzymatic nucleic acid)分子(“DNA酶”),其包含催化核心和两个与雄激素受体mRNA分子中包含的核酸序列互补的特异性结合臂。还包括包含酶促核酸分子的组合物以及治疗疾病例如前列腺癌的方法,其包括使用这样的核酸分子。
背景技术
前列腺癌是男性中最常见的癌症诊断,并且仍然是男性死亡的第三大主要原因。在英国,每天有平均130例新诊断的前列腺癌病例,使其成为第二大最常见的癌症。到2035年,英国的前列腺癌发病率预计将上升12%。当前的治疗方法包括外科手术,其通常与放射治疗并且在晚期癌症阶段与激素治疗和化学治疗相结合。激素治疗的更多细节在下文提供。
雄激素和雄激素受体(AR)在雄性表型的表达中起着关键作用。雄激素与雄激素受体缔合,雄激素受体是配体依赖性的转录因子。在与细胞质中的雄激素缔合后,就会发生雄激素受体易位进入细胞核和二聚化。在细胞核内,激活的雄激素受体与称为激素响应元件的特定的DNA序列结合。雄激素受体信号传导途径最终导致特定基因的上调或下调。
前列腺癌与雄激素受体功能的改变有关。雄激素受体信号传导途径是许多癌症,尤其是前列腺癌的生长中的基本过程。当前治疗前列腺癌的方法利用这种雄激素依赖性通过破坏信号传导途径来抑制肿瘤生长。
由于雄激素受体可能会经历选择性剪接事件或发生有利于癌症生长的突变,因此仍可能发生对这些治疗的抗性。因此,设计新的治疗策略以下调多种形式的雄激素受体并破坏信号传导途径是最重要的。已经设计了最近的治疗策略来使用核酶和反义分子下调雄激素受体。
激素治疗也可以单独用于不适合手术的局部前列腺癌患者。激素治疗被用来阻止雄激素的产生或作用。当前用于前列腺癌的治疗方案导致多种副作用,例如降低的骨矿物质密度、增加的骨质疏松性脆性骨折的风险、体重增加和疲劳,从而导致患者的生活质量大幅降低。
用于前列腺癌的激素治疗,特别是雄激素剥夺治疗(deprivation therapy),在大多数病例中最初是有效的。但是,患者随后复发并发展出更具侵袭性的去势抗性形式的前列腺癌并不少见,这使得进一步的激素治疗无效。因此,非常需要针对治疗抗性疾病的新治疗策略以及前线治疗。
还认为雄激素受体(AR)介导的雄激素作用也可能在雌性生殖生理中起作用。提出雄激素受体的剪接变体在多囊卵巢综合征(PCOS)中具有病因学作用。
酶促核酸分子(也称为脱氧核酶、DNA酶或DNAzyme)是由单链脱氧核糖核酸聚合物构成的合成催化剂,其可分类为10-23或8-17酶促核酸。酶促核酸由侧翼是两个特异性序列的催化核心组成,并且具有折叠成复杂二级结构的能力。催化核心通常需要二价阳离子(例如Mg2+、Ca2+、Pb2+)作为催化活性的辅助因子。目前,DNA酶具有广泛的催化功能,一种最常见的是核糖核酸酶活性。酶促核酸的核糖核酸酶活性由通过酸碱催化机制发生的酯基转移反应进行。酶促核酸分子的催化活性可能需要辅因子(即在酯基转移反应中充当碱的二价阳离子)的存在。二价阳离子介导靶标RNA的相邻磷酸二酯键处的2’-羟基的亲核攻击。
具有核糖核酸酶活性的酶促核酸分子通过侧翼序列与靶标mRNA的Watson和Crick碱基配对识别其靶标。侧翼序列对靶标的碱基互补性识别允许选择和设计针对特定靶标的酶促核酸,并且因此对特定mRNA进行催化。可以使用酶促核酸分子的特异性来通过其转录物的降解来调节特定基因的表达,并且因此控制某些细胞途径,特别是在疾病状态下被破坏的那些。
酶促核酸分子相对于其他基因表达治疗剂具有优势,因为它们独立于细胞机制发挥功能,对靶标mRNA具有特异性并且具有较高的化学稳定性和酶促稳定性。与其他治疗方法相比,DNA聚合物的低成本和易于合成也是优势。
用于治疗用途的酶促核酸分子的当前缺点是它们依赖于相对较高浓度的二价阳离子来实现催化活性。通常,酶促核酸分子在细胞内可用的游离二价阳离子浓度下几乎没有催化活性或者没有催化活性。需要开发可在二价阳离子的生理浓度内经历期望的催化速率以诱导治疗阳性结果的酶促核酸分子。
已经开发出许多酶促核酸分子来对抗多种疾病。其中一些正在进行治疗结节性基底细胞癌、鼻咽癌、重度过敏性支气管哮喘、特应性皮炎和溃疡性结肠炎的临床试验。
目前,还没有设计用于靶向雄激素受体的mRNA并因此治疗雄激素受体相关疾病(例如前列腺癌)的酶促核酸。在例如前列腺癌的治疗中部署雄激素受体特异性酶促核酸分子可导致肿瘤的生长停止并且还具有治疗晚期抗性形式的能力。因此,雄激素受体的当前突变体和剪接位点变体形式将易受特定酶促核酸分子的催化降解的影响。
本发明某些实施方案的目的是至少部分减轻与现有技术相关的上述问题。
本发明某些实施方案的目的是抑制前列腺癌的生长。
本发明某些实施方案的目的是提供对由雄激素受体信号传导引起的和/或与雄激素受体信号传导相关的疾病的基于核酸的治疗。
本发明某些实施方案的目的是提供对前列腺癌和其他癌症的基于核酸的治疗。
本发明某些实施方案的概述
在最广泛的方面,本发明提供了用于调节雄激素受体活性和用于治疗涉及雄激素受体信号传导的疾病的方法和组合物。适当地,本发明的方面提供了用于治疗前列腺癌的方法和组合物。适当地,本发明的方面提供了用于治疗多囊卵巢综合征的方法和组合物。
在另一方面,本发明提供了酶促核酸,所述酶促核酸包含被设计成与雄激素受体基因中的靶标序列特异性结合的RNA结合成分,以及介导对靶标RNA的切割并因此降低所述靶标的表达的催化核心。
适当地,酶促核酸分子配置为与人雄激素受体基因产物杂交并切割人雄激素受体基因产物。特别地,酶促核酸分子配置为切割人雄激素受体mRNA。
在本发明的第一方面,提供了调节人雄激素受体基因表达的酶促核酸分子。
在一些实施方案中,酶促核酸分子包含长度通常约15个核苷酸的催化区域,尽管可以理解,催化核心的长度可以为11、12、13、14、16、17、18或19个残基。在某些实施方案中,催化区域的长度为15个核苷酸。
在一个实施方案中,酶促核酸分子包含至少一个区域,其中所述区域包含与雄激素受体mRNA分子中包含的核酸序列互补的序列。
在另一个实施方案中,酶促核酸分子包含两个区域,每个区域包含与雄激素受体mRNA分子中包含的核酸序列互补的序列。
在某些实施方案中,酶促核酸分子包含在催化区域的5’端的包含与雄激素受体mRNA分子中包含的核酸序列互补的序列的第一区域,以及在催化核心的3’端的包含与雄激素受体mRNA分子中包含的核酸序列互补的序列的第二区域。
在一个实施方案中,酶促核酸分子包含一个或多个修饰的核酸残基和/或一个或多个非天然核酸残基。
在某些实施方案中,酶促核酸分子包含至少一个锁核酸残基。
在一个实施方案中,酶促核酸分子在与雄激素受体RNA分子杂交后催化切割RNA分子。在某些实施方案中,酶促核酸分子以约50%至约100%的切割效率切割雄激素受体RNA分子。例如,催化切割事件可具有至少约50%、55%、60%、65%、70%、75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%的切割效率。
在另一个实施方案中,酶促核酸分子催化切割从LNCaP细胞提取的雄激素受体RNA中的至少50%。在另一个实施方案中,酶促核酸分子催化切割从LNCaP细胞提取的雄激素受体RNA中的至少55%,例如60%、65%、70%、75%、80%、85%、90%或95%。
在一个实施方案中,酶促核酸分子包含与选自以下的核酸序列具有至少80%序列同一性的核酸序列:
a.SEQ.ID.No.1中所示的核酸序列(DZAR3);
b.SEQ.ID.No.2中所示的核酸序列(DZAR18);
c.SEQ.ID.No.3中所示的核酸序列(DZAR15);
d.SEQ.ID.No.4中所示的核酸序列(DZAR8);
e.SEQ.ID.No.5中所示的核酸序列(DZAR34);
f.SEQ.ID.No.6中所示的核酸序列(DZAR24);
g.SEQ.ID.No.7中所示的核酸序列(DZAR23);
h.SEQ.ID.No.8中所示的核酸序列(DZAR28);
i.SEQ.ID.No.9中所示的核酸序列(DZAR27);
j.SEQ.ID.No.10中所示的核酸序列(DZAR25);
k.SEQ.ID.No.11中所示的核酸序列(DZAR7);
l.SEQ.ID.No.12中所示的核酸序列(DZAR29);
m.SEQ.ID.No.13中所示的核酸序列(DZAR5);
n.SEQ.ID.No.14中所示的核酸序列(DZAR9);
o.SEQ.ID.No.15中所示的核酸序列(DZAR19);
p.SEQ.ID.No.16中所示的核酸序列(DZAR14);
q.SEQ.ID.No.17中所示的核酸序列(DZAR21);
r.SEQ.ID.No.18中所示的核酸序列(DZAR33);
s.SEQ.ID.No.19中所示的核酸序列(DZAR13);
t.SEQ.ID.No.20中所示的核酸序列(DZAR16);
u.SEQ.ID.No.21中所示的核酸序列(DZAR1);
v.SEQ.ID.No.22中所示的核酸序列(DZAR20);
w.SEQ.ID.No.23中所示的核酸序列(DZAR2);
x.SEQ.ID.No.24中所示的核酸序列(DZAR26);
y SEQ.ID.No.25中所示的核酸序列(DZAR4);
z.SEQ.ID.No.26中所示的核酸序列(DZAR10);
aa.SEQ.ID.No.27中所示的核酸序列(DZAR11);
bb.SEQ.ID.No.28中所示的核酸序列(DZAR12);
cc.SEQ.ID.No.29中所示的核酸序列(DZAR17);
dd.SEQ.ID.No.30中所示的核酸序列(DZAR22);
ee.SEQ.ID.No.31中所示的核酸序列(DZAR30);
ff.SEQ.ID.No.32中所示的核酸序列(DZAR31);和/或
gg.SEQ.ID.No.33中所示的核酸序列(DZAR32)。
在某些实施方案中,酶促核酸分子包含与选自以下的核酸序列具有至少85%,例如86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%同一性的核酸序列:
a.SEQ.ID.No.1中所示的核酸序列(DZAR3);
b.SEQ.ID.No.2中所示的核酸序列(DZAR18);
c.SEQ.ID.No.3中所示的核酸序列(DZAR15);
d.SEQ.ID.No.4中所示的核酸序列(DZAR8);
e.SEQ.ID.No.5中所示的核酸序列(DZAR34);
f.SEQ.ID.No.6中所示的核酸序列(DZAR24);
g.SEQ.ID.No.7中所示的核酸序列(DZAR23);
h.SEQ.ID.No.8中所示的核酸序列(DZAR28);
i.SEQ.ID.No.9中所示的核酸序列(DZAR27);
j.SEQ.ID.No.10中所示的核酸序列(DZAR25);
k.SEQ.ID.No.11中所示的核酸序列(DZAR7);
l.SEQ.ID.No.12中所示的核酸序列(DZAR29);
m.SEQ.ID.No.13中所示的核酸序列(DZAR5);
n.SEQ.ID.No.14中所示的核酸序列(DZAR9);
o.SEQ.ID.No.15中所示的核酸序列(DZAR19);
p.SEQ.ID.No.16中所示的核酸序列(DZAR14);
q.SEQ.ID.No.17中所示的核酸序列(DZAR21);
r.SEQ.ID.No.18中所示的核酸序列(DZAR33);
s.SEQ.ID.No.19中所示的核酸序列(DZAR13);
t.SEQ.ID.No.20中所示的核酸序列(DZAR16);
u.SEQ.ID.No.21中所示的核酸序列(DZAR1);
v.SEQ.ID.No.22中所示的核酸序列(DZAR20);
w.SEQ.ID.No.23中所示的核酸序列(DZAR2);
x.SEQ.ID.No.24中所示的核酸序列(DZAR26);
y SEQ.ID.No.25中所示的核酸序列(DZAR4);
z.SEQ.ID.No.26中所示的核酸序列(DZAR10);
aa.SEQ.ID.No.27中所示的核酸序列(DZAR11);
bb.SEQ.ID.No.28中所示的核酸序列(DZAR12);
cc.SEQ.ID.No.29中所示的核酸序列(DZAR17);
dd.SEQ.ID.No.30中所示的核酸序列(DZAR22);
ee.SEQ.ID.No.31中所示的核酸序列(DZAR30);
ff.SEQ.ID.No.32中所示的核酸序列(DZAR31);和/或
gg.SEQ.ID.No.33中所示的核酸序列(DZAR32)。
在另一个实施方案中,酶促核酸分子由与选自以下的核酸序列具有至少80%序列同一性的核酸序列组成:
a.SEQ.ID.No.1中所示的核酸序列(DZAR3);
b.SEQ.ID.No.2中所示的核酸序列(DZAR18);
c.SEQ.ID.No.3中所示的核酸序列(DZAR15);
d.SEQ.ID.No.4中所示的核酸序列(DZAR8);
e.SEQ.ID.No.5中所示的核酸序列(DZAR34);
f.SEQ.ID.No.6中所示的核酸序列(DZAR24);
g.SEQ.ID.No.7中所示的核酸序列(DZAR23);
h.SEQ.ID.No.8中所示的核酸序列(DZAR28);
i.SEQ.ID.No.9中所示的核酸序列(DZAR27);
j.SEQ.ID.No.10中所示的核酸序列(DZAR25);
k.SEQ.ID.No.11中所示的核酸序列(DZAR7);
l.SEQ.ID.No.12中所示的核酸序列(DZAR29);
m.SEQ.ID.No.13中所示的核酸序列(DZAR5);
n.SEQ.ID.No.14中所示的核酸序列(DZAR9);
o.SEQ.ID.No.15中所示的核酸序列(DZAR19);
p.SEQ.ID.No.16中所示的核酸序列(DZAR14);
q.SEQ.ID.No.17中所示的核酸序列(DZAR21);
r.SEQ.ID.No.18中所示的核酸序列(DZAR33);
s.SEQ.ID.No.19中所示的核酸序列(DZAR13);
t.SEQ.ID.No.20中所示的核酸序列(DZAR16);
u.SEQ.ID.No.21中所示的核酸序列(DZAR1);
v.SEQ.ID.No.22中所示的核酸序列(DZAR20);
w.SEQ.ID.No.23中所示的核酸序列(DZAR2);
x.SEQ.ID.No.24中所示的核酸序列(DZAR26);
y SEQ.ID.No.25中所示的核酸序列(DZAR4);
z.SEQ.ID.No.26中所示的核酸序列(DZAR10);
aa.SEQ.ID.No.27中所示的核酸序列(DZAR11);
bb.SEQ.ID.No.28中所示的核酸序列(DZAR12);
cc.SEQ.ID.No.29中所示的核酸序列(DZAR17);
dd.SEQ.ID.No.30中所示的核酸序列(DZAR22);
ee.SEQ.ID.No.31中所示的核酸序列(DZAR30);
ff.SEQ.ID.No.32中所示的核酸序列(DZAR31);和/或
gg.SEQ.ID.No.33中所示的核酸序列(DZAR32)。
在某些实施方案中,酶促核酸分子包含与选自以下的核酸序列具有至少85%,例如86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%同一性的核酸序列:
a)SEQ.ID.No.1中所示的核酸序列(DZAR3);
b)SEQ.ID.No.2中所示的核酸序列(DZAR18);
c)SEQ.ID.No.3中所示的核酸序列(DZAR15);
d)SEQ.ID.No.4中所示的核酸序列(DZAR8);
e)SEQ.ID.No.5中所示的核酸序列(DZAR34);
f)SEQ.ID.No.6中所示的核酸序列(DZAR24);
g)SEQ.ID.No.7中所示的核酸序列(DZAR23);
h)SEQ.ID.No.8中所示的核酸序列(DZAR28);
i)SEQ.ID.No.9中所示的核酸序列(DZAR27);
j)SEQ.ID.No.10中所示的核酸序列(DZAR25);
k)SEQ.ID.No.11中所示的核酸序列(DZAR7);
l)SEQ.ID.No.12中所示的核酸序列(DZAR29);
m)SEQ.ID.No.13中所示的核酸序列(DZAR5);
n)SEQ.ID.No.14中所示的核酸序列(DZAR9);
o)SEQ.ID.No.15中所示的核酸序列(DZAR19);
p)SEQ.ID.No.16中所示的核酸序列(DZAR14);
q)SEQ.ID.No.17中所示的核酸序列(DZAR21);
r)SEQ.ID.No.18中所示的核酸序列(DZAR33);
s)SEQ.ID.No.19中所示的核酸序列(DZAR13);
t)SEQ.ID.No.20中所示的核酸序列(DZAR16);
u)SEQ.ID.No.21中所示的核酸序列(DZAR1);
v)SEQ.ID.No.22中所示的核酸序列(DZAR20);
w)SEQ.ID.No.23中所示的核酸序列(DZAR2);
x)SEQ.ID.No.24中所示的核酸序列(DZAR26);
y SEQ.ID.No.25中所示的核酸序列(DZAR4);
z)SEQ.ID.No.26中所示的核酸序列(DZAR10);
aa)SEQ.ID.No.27中所示的核酸序列(DZAR11);
bb)SEQ.ID.No.28中所示的核酸序列(DZAR12);
cc)SEQ.ID.No.29中所示的核酸序列(DZAR17);
dd)SEQ.ID.No.30中所示的核酸序列(DZAR22);
ee)SEQ.ID.No.31中所示的核酸序列(DZAR30);
ff)SEQ.ID.No.32中所示的核酸序列(DZAR31);和/或
gg)SEQ.ID.No.33中所示的核酸序列(DZAR32)。
在另一个实施方案中,酶促核酸分子包含选自以下的核酸序列:
a.SEQ.ID.No.1中所示的核酸序列(DZAR3);
b.SEQ.ID.No.2中所示的核酸序列(DZAR18);
c.SEQ.ID.No.3中所示的核酸序列(DZAR15);
d.SEQ.ID.No.4中所示的核酸序列(DZAR8);
e.SEQ.ID.No.5中所示的核酸序列(DZAR34);
f.SEQ.ID.No.6中所示的核酸序列(DZAR24);
g.SEQ.ID.No.7中所示的核酸序列(DZAR23);
h.SEQ.ID.No.8中所示的核酸序列(DZAR28);
i.SEQ.ID.No.9中所示的核酸序列(DZAR27);
j.SEQ.ID.No.10中所示的核酸序列(DZAR25);
k.SEQ.ID.No.11中所示的核酸序列(DZAR7);
l.SEQ.ID.No.12中所示的核酸序列(DZAR29);
m.SEQ.ID.No.13中所示的核酸序列(DZAR5);
n.SEQ.ID.No.14中所示的核酸序列(DZAR9);
o.SEQ.ID.No.15中所示的核酸序列(DZAR19);
p.SEQ.ID.No.16中所示的核酸序列(DZAR14);和/或
q.与SEQ.ID.No.1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15或16中所示的核酸序列相比具有至多四个(例如1、2、3或4个)修饰的核酸序列。
在一个实施方案中,酶促核酸分子基本上由选自以下的核酸序列组成:
a.SEQ.ID.No.1中所示的核酸序列(DZAR3);
b.SEQ.ID.No.2中所示的核酸序列(DZAR18);
c.SEQ.ID.No.3中所示的核酸序列(DZAR15);
d.SEQ.ID.No.4中所示的核酸序列(DZAR8);
e.SEQ.ID.No.5中所示的核酸序列(DZAR34);
f.SEQ.ID.No.6中所示的核酸序列(DZAR24);
g.SEQ.ID.No.7中所示的核酸序列(DZAR23);
h.SEQ.ID.No.8中所示的核酸序列(DZAR28);
i.SEQ.ID.No.9中所示的核酸序列(DZAR27);
j.SEQ.ID.No.10中所示的核酸序列(DZAR25);
k.SEQ.ID.No.11中所示的核酸序列(DZAR7);
l.SEQ.ID.No.12中所示的核酸序列(DZAR29);
m.SEQ.ID.No.13中所示的核酸序列(DZAR5);
n.SEQ.ID.No.14中所示的核酸序列(DZAR9);
o.SEQ.ID.No.15中所示的核酸序列(DZAR19);和/或
p.SEQ.ID.No.16中所示的核酸序列(DZAR14)。
在一个实施方案中,酶促核酸分子包含选自以下的核酸序列:
a)SEQ.ID.No.4中所示的核酸序列(DZAR8);
b)SEQ.ID.No.6中所示的核酸序列(DZAR24);
c)SEQ.ID.No.8中所示的核酸序列(DZAR28);和/或
d)SEQ.ID.No.11中所示的核酸序列(DZAR7);
e)与SEQ.ID.No.4、6、8或11中所示的核酸序列相比具有至多四个(例如1、2、3或4个)修饰的核酸序列。
在一个实施方案中,酶促核酸分子由选自以下的核酸序列组成:
a)SEQ.ID.No.4中所示的核酸序列(DZAR8);
b)SEQ.ID.No.6中所示的核酸序列(DZAR24);
c)SEQ.ID.No.8中所示的核酸序列(DZAR28);和/或
d)SEQ.ID.No.11中所示的核酸序列(DZAR7);
e)与SEQ.ID.No.4、6、8或11中所示的核酸序列相比具有至多四个(例如1、2、3或4个)修饰的核酸序列。
在一个实施方案中,酶促核酸分子包含SEQ.ID.No.4中所示的核酸序列(DZAR8)或由SEQ.ID.No.4中所示的核酸序列(DZAR8)组成。
在一个实施方案中,酶促核酸分子包含SEQ.ID.No.6中所示的核酸序列(DZAR24)或由SEQ.ID.No.6中所示的核酸序列(DZAR24)组成。
在一个实施方案中,酶促核酸分子包含SEQ.ID.No.8中所示的核酸序列(DZAR28)或由SEQ.ID.No.8中所示的核酸序列(DZAR28)组成。
在一个实施方案中,酶促核酸分子包含SEQ.ID.No.11中所示的核酸序列(DZAR7)或由SEQ.ID.No.11中所示的核酸序列(DZAR7)组成。
在一个实施方案中,酶促核酸分子包含以下修饰中的至少一个:
a)取代的锁核酸分子;和/或
b)反向脱氧胸苷。
在某些实施方案中,反向脱氧胸苷位于酶促核酸分子的3’-末端。
在一个实施方案中,酶促核酸分子包含脱氧胸苷缀合物。
在某些实施方案中,酶促核酸分子在二价阳离子的存在下具有催化活性。在另一个实施方案中,酶促核酸分子在MgCl2+的存在下具有催化活性。在另一个实施方案中,酶促核酸分子在MgCl2+的生理浓度下具有催化活性,其中任选地所述生理浓度定义为1至4mMMgCl2+的MgCl2+浓度。
如本文所公开的,酶促核酸分子是DNA酶。
在某些实施方案中,酶促核酸分子下调人雄激素受体基因的表达。
在本发明的第二方面,提供了组合物,所述组合物包含本文所述的酶促核酸分子和药学上可接受的载体或稀释剂。该组合物还包含二价阳离子,其中任选地,所述二价阳离子是MgCl2+。适当地,本文公开的组合物用作药物。
在一个实施方案中,本文公开的酶促核酸分子或组合物用于治疗癌症。适当地,酶促核酸分子或组合物用于治疗选自前列腺癌和乳腺癌的癌症。适当地,酶促核酸分子或组合物用于治疗前列腺癌。
在某些实施方案中,本文公开的酶促核酸分子与二价阳离子一起使用。任选地,二价阳离子处于生理浓度,并且进一步任选地,二价阳离子是MgCl2+,并且MgCl2+的浓度在1至4mM之间。
在某些实施方案中,递送剂包含本文公开的酶促核酸分子或组合物。
在本发明的另一方面,提供了用于治疗癌症的方法,所述方法包括向有此需要的受试者施用治疗有效量的本文所公开的酶促核酸分子或组合物。适当地,所述方法用于治疗癌症,其中所述受试者患有前列腺癌或乳腺癌。
在另一个实施方案中,所述方法包括施用治疗有效量的酶促核酸分子或组合物,其中所述施用在二价阳离子的存在下进行。适当地,其中所述二价阳离子是MgCl2+。在另一个实施方案中,所述二价阳离子处于生理浓度,其中任选地所述生理浓度定义为1至4mMMgCl2+的MgCl2+浓度。
在某些实施方案中,本文公开的酶促核酸分子与递送剂联合施用。在另一个实施方案中,递送剂是脂质。适当地,脂质是阳离子脂质或磷脂或脂质体。
在某些实施方案中,递送剂是工程改造的腺相关病毒。在另一个实施方案中,所述方法中的递送剂是纳米颗粒。
在某些实施方案中,提供了包含本文公开的酶促核酸分子的表达载体。适当地,提供了包含表达载体的哺乳动物细胞。哺乳动物细胞可以是人细胞。
本发明的具体实施方式
附图简述
现在将在下文中仅通过举例的方式参考附图描述本发明的实施方案,其中:
图1示出了根据本发明某些实施方案的抗雄激素受体(AR)酶促核酸分子的示意图。人雄激素受体序列获自美国国家生物科学信息中心(NCBI)。通过引入两个固定序列的5’和3’结合臂来将每个酶促核酸分子设计为靶向体外的特定RNA分子,所述5’和3’结合臂设计成通过Watson-Crick相互作用靶向该序列的多个区域。每个酶促核酸分子都包含10-23DNA酶催化核心,其主动切割靶标AR RNA;
图2a和b示出了多种酶促核酸分子对合成的雄激素受体mRNA的切割。进行密度测定法并计算各种酶促核酸分子允许的切割百分比,一式三份进行切割效率实验;
图3示出了以下核苷酸的序列:
酶促核酸分子DZAR3(SEQ.ID.No.1);
酶促核酸分子DZAR18(SEQ.ID.No.2);
酶促核酸分子DZAR15(SEQ.ID.No.3);
酶促核酸分子DZAR8(SEQ.ID.No.4);
酶促核酸分子DZAR34(SEQ.ID.No.5);
酶促核酸分子DZAR24(SEQ.ID.No.6);
酶促核酸分子DZAR23(SEQ.ID.No.7);
酶促核酸分子DZAR28(SEQ.ID.No.8);
酶促核酸分子DZAR27(SEQ.ID.No.9);
酶促核酸分子DZAR25(SEQ.ID.No.10);
酶促核酸分子DZAR7(SEQ.ID.No.11);
酶促核酸分子DZAR29(SEQ.ID.No.12);
酶促核酸分子DZAR5(SEQ.ID.No.13);
酶促核酸分子DZAR9(SEQ.ID.No.14);
酶促核酸分子DZAR19(SEQ.ID.No.15);
酶促核酸分子DZAR14(SEQ.ID.No.16);
酶促核酸分子DZAR21(SEQ.ID.No.17);
酶促核酸分子DZAR33(SEQ.ID.No.18);
酶促核酸分子DZAR13(SEQ.ID.No.19);
酶促核酸分子DZAR16(SEQ.ID.No.20);
酶促核酸分子DZAR1(SEQ.ID.No.21);
酶促核酸分子DZAR20(SEQ.ID.No.22);
酶促核酸分子DZAR2(SEQ.ID.No.23);
酶促核酸分子DZAR26(SEQ.ID.No.24);
酶促核酸分子DZAR4(SEQ.ID.No.25);
酶促核酸分子DZAR10(SEQ.ID.No.26);
酶促核酸分子DZAR11(SEQ.ID.No.27);
酶促核酸分子DZAR12(SEQ.ID.No.28);
酶促核酸分子DZAR17(SEQ.ID.No.29);
酶促核酸分子DZAR22(SEQ.ID.No.30);
酶促核酸分子DZAR30(SEQ.ID.No.31);
酶促核酸分子DZAR31(SEQ.ID.No.32);
酶促核酸分子DZAR32(SEQ.ID.No.33)。
图3还示出了酶促核酸分子的如黑色所示的可变结合臂,以及如红色所示的具有一致序列(GGCTAGCTACAACGA(SEQ.ID.No.34))的催化核心,以及上述酶促核酸分子的从0%至100%的切割效率;
图4a)至f)示出了特别设计为靶向雄激素受体RNA的六个不同区域(a,308-352bp;b,509-548bp;c,565-604bp;d,989-1028bp;e,1304-1343bp;f,1496-1535bp)的酶促核酸分子切割FAM标记的雄激素受体RNA的效率。使用凝胶电泳使未切割和切割的RNA可视化,一式三份进行切割效率实验;
图5示出了靶向从LNCaP细胞提取的全长雄激素受体RNA的酶促核酸分子DZAR3、DZAR7、DZAR8、DZAR10、DZAR15、DZAR24、DZAR25、DZAR27、DZAR28和DZAR34的生理相关切割能力。全长AR RNA用于建立RNA切割的生理模型,因为与雄激素受体RNA的较短片段相比,全长雄激素受体RNA可能在RNA折叠方面表现出差异。将RNA逆转录成cDNA以进行qPCR分析,其中qPCR最终量化了雄激素受体RNA转录物。反应一式三份进行。酶促核酸分子DZAR7、DZAR8、DZAR24和DZAR28显示出优异的靶向全长雄激素受体RNA的能力,并具有至少50%的切割效率。
下面提供某些实施方案的进一步细节。
在本说明书的整个描述和权利要求书中,词语“包括”和“包含”及其变体表示“包括但不限于”,并且它们不旨在(并且不)排除其他部分、添加剂、组分、整数或步骤。在本说明书的整个描述和权利要求书中,除非上下文另外要求,否则单数形式涵盖复数形式。特别地,在使用不定冠词的情况下,除非上下文另外要求,否则本说明书应理解为考虑复数以及单数。
结合本发明的特定方面、实施方案或实施例描述的特征、整数、特性或组应理解为适用于本文描述的任何其他方面、实施方案或实施例,除非与其不兼容。本说明书(包括任何所附权利要求、摘要和附图)中公开的所有特征和/或如此公开的任何方法或过程的所有步骤可以以任何组合进行组合,但其中至少一些特征和/或步骤互斥的组合除外。本发明不限于本说明书(包括任何所附权利要求、摘要和附图)中公开任何新的一个特征或新的特征组合,或如此公开的任何方法或过程的任何新的一个步骤或任何新的步骤组合。
读者的注意力指向与关于本申请的本说明书同时或在本说明书之前提交的并且关于本说明书向公众审查公开的所有论文和文件,并且所有这些论文和文件的内容均通过引用并入本文。
本公开涉及酶促核酸分子在调节人雄激素受体的表达中的用途。本发明的方面涉及通过酶促核酸分子的核酸酶活性对雄激素受体mRNA的催化切割。
术语“核酸分子”或“多核苷酸”在本文中可以互换使用,并且被认为是任何长度的核苷酸的聚合物形式,并且包含未修饰的或修饰的核苷酸的单体。如果糖是简单的核糖,则聚合物是RNA(核糖核酸),如果糖是从核糖衍生而来的脱氧核糖,则聚合物是DNA(脱氧核糖核酸)。如本文所用,术语“核苷酸”如本领域公认的那样用于指包含五碳糖、磷酸基团和含氮杂环碱基的分子。术语“核苷酸”应理解为既包括天然核苷酸,如核糖和脱氧核糖,以及化学或生物化学修饰的非天然和/或衍生的核苷酸。核苷酸可以是未修饰的或在糖、磷酸和/或碱基部分处被修饰。
如本文所用,术语“酶促核酸分子”是指长度和折叠模式不同的核酸分子,其与指定的RNA靶标具有互补性,并且还具有主动特异性切割靶标RNA的酶促活性。本发明的某些实施方案可以替代地描述为具有核酸酶或核糖核酸酶活性,并且这些术语在本文中可以互换使用。酶促核酸分子能够在分子间切割RNA,从而使靶标RNA分子失活。互补区允许酶促核酸分子与靶标RNA充分杂交,以促进通过分子间核酸酶活性切割所述RNA靶标。术语“酶促核酸分子”涵盖天然和修饰的核苷酸以及本领域中其他已知术语,例如“脱氧核酶”或“催化DNA分子”或“DNA酶”。酶促核酸分子可以合成产生或来源于生物或其他来源。
适当地,酶促核酸分子是DNA分子。
本文所述的酶促核酸分子可包含修饰的核酸。如本文所用,术语“修饰的核苷酸”和“修饰的核酸分子”是指本领域已知的天然存在的和人工的所有已知修饰的核苷酸,例如化学或生物化学修饰的非天然的或衍生的核苷酸。
修饰的核苷酸的一个实例是“锁核苷酸”。如本文所用,术语“锁核苷酸”是指包含在定义为“锁核酸分子”的聚合物中的修饰的核苷酸。锁核酸核苷酸的核糖部分被连接2’和4’碳原子的额外桥修饰。桥将核糖“锁定”在3’-内切结构构象中,这种构象通常发现于DNA或RNA的A形式中。锁核酸分子核苷酸可以与DNA或RNA或其修饰的衍生物混合形成聚合物。锁核糖构象可以增强碱基堆积和骨架预组织。这可以增加多核苷酸的热稳定性。
修饰的核酸分子的另一个实例包括引入反向脱氧胸苷(dT)。寡核苷酸可以设计成引入5’至5’或3’至3’连接。可将反向dT引入寡核苷酸的3'末端以产生3’至3’的连接,该连接产生独特的特征,包括但不限于防止DNA聚合酶进一步延伸DNA序列并保护寡核苷酸免于3’核酸外切酶切割。
在某些实施方案中,酶促核酸分子包含至少一个互补核酸区域,其可以能够(优选地在生理条件下)与编码本文所公开的全长雄激素受体多肽的核苷酸序列杂交。雄激素受体变体多肽可以是由雄激素受体变体多核苷酸,包括例如编码剪接变体(包括本文所述的那些)的多核苷酸编码的那些。如本文所用,术语“雄激素受体”是指核受体超家族的细胞内蛋白类固醇受体,其识别激素,特别是雄激素家族的激素,例如但不限于睾酮和二氢睾酮。本文所描述的酶促核酸分子与人雄激素受体杂交。
术语“雄激素受体”涵盖雄激素受体的突变体和剪接变体形式。突变体包括具有氨基酸添加、插入、截短和缺失的雄激素受体蛋白质。雄激素受体剪接变体的实例是截短,例如但不限于AR-V1、AR-V2、AR-V3、AR-V4、AR-V5、AR-V567es、AR-V6或AR-V7。另一些雄激素受体突变作为点突变存在,点突变的实例包括但不限于T877A、D879G、W741C、W741L、M749L、R629Q、G124V、P533S、T575A、H874Y或F876L。雄激素受体的突变体可能具有与更广泛范围的配体缔合的能力,通常在本领域中称为配体混杂(ligand promiscuity),因此,允许通过其他生理相关激素结合并激活雄激素受体及其随后的信号传导途径。人AR的氨基酸序列可以在登录号P10275第3版(UniProtKB)下找到。如P10275版本3指出的,多种剪接变体是已知的。
在一些实施方案中,酶促核酸阻止或减少雄激素受体的表达。如本文所用,术语“表达”是指将基因中编码的遗传信息通过基因的“转录”转化到RNA(例如,mRNA、rRNA、tRNA或snRNA)中以及对于蛋白质编码基因而言,通过mRNA的“翻译”转化到蛋白质中的过程。基因表达可以在该过程的许多阶段进行调节。“下调”或“抑制”是指减少编码蛋白质的产生的调节。在一个实施方案中,本发明涉及酶促核酸分子,所述酶促核酸分子包含含有约15个核酸残基的催化区域,其中该催化区域能够切割mRNA分子。
在另一个实施方案中,所述酶促核酸分子的催化活性可以在生理条件下发生。
在一个实施方案中,酶促核酸分子包含至少一个互补核酸区域,所述至少一个互补核酸区域可以能够(优选地在生理条件下)与获自LNCaP细胞的编码全长雄激素受体多肽的核苷酸序列杂交。如本文所公开的,LNCaP细胞是指雄激素敏感的前列腺癌细胞系。
在本发明的某些实施方案中,酶促核酸分子包含至少一个互补核酸区域,所述至少一个互补核酸区域具有与靶标核酸分子的序列互补的序列同一性。如本文所定义,酶促核酸分子的互补区域与编码全长天然多肽的全长天然核酸序列的核酸序列具有至少约80%的核酸序列同一性。
通常,酶促核酸分子包含至少一个互补核酸区域,所述至少一个互补核酸区域包含与编码全长天然序列的核酸序列具有至少80%,替代地至少约81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%的核酸序列同一性的核酸序列。
在两个或更多个核酸或多肽的情况下,术语“序列同一性”、“百分比同一性”和“序列百分比同一性”是指在不考虑将任何保守氨基酸替换作为序列同一性的一部分的情况下,在比较和比对(必要时引入缺口)以实现最大对应性时,相同或具有指定百分比的相同核苷酸或氨基酸残基的两个或更多个序列或子序列。百分比同一性可以使用序列比较软件或算法或通过目测来测量。本领域已知可用于获得氨基酸或核苷酸序列的比对的多种算法和软件。
确定百分比序列同一性的合适程序包括例如可从美国政府的国家生物技术信息中心BLAST网站(http://blast.ncbi.nlm.nih.gov/Blast.cgi)获得的BLAST程序套件。可以使用BLASTN或BLASTP算法进行两个序列之间的比较。BLASTN用于比较核酸序列,而BLASTP用于比较氨基酸序列。可从DNASTAR获得的ALIGN、ALIGN-2(Genentech,南圣弗朗西斯科,加利福利亚)或MegAlign是可用于序列比对的其他公共软件程序。本领域技术人员可以通过特定的比对软件来确定用于最大比对的适当参数。在某些实施方案中,使用比对软件的默认参数。
在本发明的某些实施方案中,酶促核酸分子的生物学活性在生理条件下得以保留。
在一些实施方案中,酶促核酸分子与二价阳离子一起使用。如本文中所用,术语“二价阳离子”用于指离子,特别是具有两个化合价的阳离子,其中化合价表示可用于化学键形成的电子。在某些实施方案中,二价阳离子是MgCl2。适当地,二价阳离子是体内内源二价阳离子。
如本文所用,术语“生理条件”是指模拟在哺乳动物生物体,特别是人的细胞内发现的条件的反应条件。在涉及生理条件的情况下,温度、阳离子的可用性和pH范围的变化可能会涵盖在内。在本领域中已知生理条件包括约35℃-40℃的温度以及约7.0-8.0的pH,并且还包括阳离子(优选二价)的可用性,其中浓度为约2-15mM的MgCl2是特别优选的。
在本发明的某些实施方案中,雄激素受体蛋白质的表达可在其mRNA降解后被抑制。
在本发明的另一方面,存在包含本文所述的酶促核酸分子的组合物。在某些实施方案中,该组合物是药物组合物并且用于向受试者施用。在某些实施方案中,受试者是哺乳动物受试者。在某些实施方案中,受试者是人。
如本文所用,术语“治疗”包括减轻病症的症状,并且可以涉及减轻这样的症状,例如降低或预防症状的发生。在本文中的降低可指降低一种或多种症状的严重性和/或发生,例如降低前列腺癌和其他雄激素受体疾病对激素治疗的抗性。用本文所述的酶促核酸分子治疗疾病可能需要本领域技术人员施用治疗有效量的组合物。在本发明的一个实施方案中,酶促核酸分子可以用于治疗雄激素受体依赖性疾病,例如但不限于乳腺癌、前列腺癌、卵巢癌、膀胱癌、胰腺癌和多囊卵巢病。
在某些实施方案中,本发明涉及用于治疗癌症的方法,所述方法包括施用本文所述的酶促核酸分子。如本文所定义,癌症是指恶性肿瘤,其可以选自由以下项组成的组:实体瘤,例如黑素瘤、皮肤癌、小细胞肺癌、非小细胞肺癌、神经胶质瘤、肝细胞(肝)癌、胆囊癌、甲状腺肿瘤、骨癌、胃(胃的)癌、前列腺癌、乳腺癌、卵巢癌、宫颈癌、子宫癌、外阴癌、子宫内膜癌、睾丸癌、膀胱癌、肺癌、胶质母细胞瘤、子宫内膜癌、肾癌、肾细胞癌、结肠癌、结直肠癌、胰腺癌、食道癌、脑/CNS癌、头颈癌、神经元癌、间皮瘤、肉瘤、胆汁性(胆管癌)、小肠腺癌、小儿恶性肿瘤、表皮样癌、肉瘤、胸膜/腹膜癌和白血病,包括急性骨髓性白血病、急性淋巴细胞性白血病和多发性骨髓瘤。
在某些实施方案中,本发明涉及用于治疗前列腺癌的方法。如本文所用,术语“前列腺癌”是指前列腺中腺源性的恶性肿瘤。在某些实施方案中,受试者是雄性,例如雄性人类。
在另一个实施方案中,本发明可以用于治疗晚期前列腺癌,也称为去势抗性前列腺癌。如本文所用,术语“去势抗性(castrate-resistant)”描述尽管进行了雄激素/激素耗竭治疗,但是前列腺癌疾病仍然进展,并且可以表现为血清前列腺特异性抗原水平的持续升高,既存疾病的进展和/或新转移的出现。在本发明的某些实施方案中,药物组合物包含药学上可接受的稀释剂。如本文所用,术语“药学上可接受的稀释剂”定义为包含一种或多种药学上可接受的赋形剂的水或其他药学上可接受的水溶液,以用于制备本发明某些实施方案的组合物。
在某些实施方案中,用于治疗癌症的方法包括施用治疗有效量的本文公开的酶促核酸分子。如本文所用,术语“施用”是指在合理的医学实践中将药物递送至待治疗的受试者以便有效治疗疾病的任何方法。
在某些实施方案中,本文所述的酶促核酸分子可用于治疗受试者的多囊卵巢综合征。在某些实施方案中,受试者是雌性,例如雌性人类。
药物的递送可以通过使用递送剂来促进。适当地,递送剂是促进递送治疗有效量的组合物的分子。术语“递送剂”是本领域公认的术语,并且包括促进治疗剂或其他材料的细胞内递送的分子。递送剂的实例包括:脂质(例如,阳离子脂质、病毒体或脂质体)、纳米颗粒、生物材料纳米载体和/或病毒载体,例如腺相关病毒载体。在某些实施方案中,递送剂可以是由生物材料形成的适体或纳米结构。在某些实施方案中,递送剂是生物材料纳米载体。
如本文所用,术语“治疗有效量”是指足以在癌症的情况下提供治疗或健康益处的量。所施用的确切剂量将取决于治疗的目的,并且将由本领域技术人员使用已知技术来确定。在致敏细胞中,治疗有效剂量通常可以低于对非致敏细胞(例如去势抗性前列腺癌)的常规治疗有效剂量。其中“致敏细胞”定义为表达需要其激素底物才能激活的雄激素受体。
实施例
由于肿瘤微进化介导治疗抗性,因此肿瘤的发展常常对抗癌治疗提出挑战。以下实施例集中于确定本发明某些实施方案的试剂是否可用于预防肿瘤诱导的对前列腺癌治疗的抗性。
抗雄激素受体酶促核酸的设计
图2所示的切割实验中使用的雄激素受体(AR)序列获自美国国家生物科学信息中心(NCBI)。每个酶促核酸分子设计成通过引入5’和3’结合臂来靶向特定RNA分子,所述5’和3’结合臂通过Watson-Crick相互作用靶向AR RNA的多个区域。每个酶促核酸分子包含10-23DNA酶催化核心,其通过嘌呤-嘧啶二核苷酸基序之间的酯基转移反应主动切割靶标ARRNA。
实施例1-AR RNA片段的切割
通过在包含50mM Tris-HCL(pH 7.5)、10mM MgCl2、150Mm NaCl和0.01%SDS的缓冲液中最初将酶促核酸分子稀释至终浓度1μM来确定各种酶促核酸分子的切割效率的分析。将RNA稀释至0.2μM的终浓度。然后将酶促核酸分子与荧光素亚酰胺(FAM)标记的雄激素受体RNA片段孵育两个小时,然后通过添加RNA负载染料(NEB)并在干冰上速冻来终止。非靶向DNA酶用作阴性对照(-)。
实施例1的结果示于图2。在使用AR RNA的短链片段的体外切割实验中观察到,多种酶促核酸分子具有另一些更高的效率切割。特别地,DZAR3和DZAR18介导了约100%的靶标RNA切割。
凝胶电泳
然后将样品在70℃下煮沸,然后再使用尿素PAGE 15%凝胶进行分离以使二级RNA结构变性,并使片段在Fusion FX检测系统上可视化。
密度测定法
使用ImageJ分析凝胶图像,并进行密度测定法以定量未切割和切割的产物。计算酶促核酸分子允许的切割百分比。
实施例2-全长AR RNA的切割
将LNCaP细胞(ATCC)培养在洛斯维公园纪念所(Roswell Park MemorialInstitute)((RMPI)1640,补充有2mM l-谷氨酰胺、10%链霉素和酚红(PSG)、10%胎牛血清(FBS),Biosera)中。将细胞在37℃和5%的二氧化碳中培养,并在80%汇合度下传代。
确定了靶向从LNCaP细胞提取的全长雄激素受体RNA的酶促核酸分子DZAR3、DZAR7、DZAR8、DZAR10、DZAR15、DZAR24、DZAR25、DZAR27、DZAR28和DZAR34的切割能力。使用RNA提取试剂盒(RBC Bioscience)从LNCaP细胞提取总RNA。将500ng的总AR RNA用于切割反应。然后使用不含RNA酶的水稀释样品,并将RNA逆转录成cDNA以进行qPCR分析(LightCycler,罗氏公司(Roche)),其中qPCR最终定量雄激素受体RNA转录物。数据相对于内部对照(L19)进行归一化,并使用2-ΔΔCt方法计算相对表达。
实施例2的结果显示在图4中。图4示出了靶向从LNCaP细胞提取的总RNA并因此靶向全长AR RNA的酶促核酸分子的切割效率。发现多种酶促核酸分子与另一些相比具有优异的切割能力。有趣的是,DZAR7、DZAR8、DZAR24和DZAR28表现出最高的切割效率,表现出大于50%的切割。
序列表
<110> 埃塞克斯大学企业有限公司
<120> 酶促核酸分子
<130> P031344GB
<160> 34
<170> PatentIn 版本 3.5
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Claims (42)
1.调节人雄激素受体基因的表达的酶促核酸分子。
2.根据权利要求1所述的酶促核酸分子,其包含含有约15个核酸残基的催化区域,其中所述催化区域能够切割mRNA分子。
3.根据前述权利要求中任一项所述的酶促核酸分子,其包含至少一个区域,其中所述区域包含与雄激素受体mRNA分子中包含的核酸序列互补的序列。
4.根据权利要求3所述的酶促核酸分子,其包含两个区域,每个区域包含与雄激素受体mRNA分子中包含的核酸序列互补的序列。
5.根据权利要求4所述的酶促核酸分子,其包含第一区域和第二区域,所述第一区域包含在催化区域的5’端与雄激素受体mRNA分子中包含的核酸序列互补的序列,以及所述第二区域包含在催化核心的3’端与雄激素受体mRNA分子中包含的核酸序列互补的序列。
6.根据前述权利要求中任一项所述的酶促核酸分子,其包含一个或多个修饰的核酸残基和/或一个或多个非天然核酸残基。
7.根据权利要求6所述的酶促核酸分子,其包含至少一个锁核酸残基。
8.根据前述权利要求中任一项所述的酶促核酸分子,其在与雄激素受体RNA分子杂交后催化切割所述RNA分子,任选地其中催化切割事件具有至少约50%、55%、60%、65%、70%、75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%的切割效率。
9.根据前述权利要求中任一项所述的酶促核酸分子,其催化切割从LNCaP细胞提取的雄激素受体RNA中的至少50%。
10.根据前述权利要求中任一项所述的酶促核酸分子,其包含与选自以下的核酸序列具有至少80%序列同一性的核酸序列:
a.SEQ.ID.No.1中所示的核酸序列(DZAR3);
b.SEQ.ID.No.2中所示的核酸序列(DZAR18);
c.SEQ.ID.No.3中所示的核酸序列(DZAR15);
d.SEQ.ID.No.4中所示的核酸序列(DZAR8);
e.SEQ.ID.No.5中所示的核酸序列(DZAR34);
f.SEQ.ID.No.6中所示的核酸序列(DZAR24);
g.SEQ.ID.No.7中所示的核酸序列(DZAR23);
h.SEQ.ID.No.8中所示的核酸序列(DZAR28);
i.SEQ.ID.No.9中所示的核酸序列(DZAR27);
j.SEQ.ID.No.10中所示的核酸序列(DZAR25);
k.SEQ.ID.No.11中所示的核酸序列(DZAR7);
l.SEQ.ID.No.12中所示的核酸序列(DZAR29);
m.SEQ.ID.No.13中所示的核酸序列(DZAR5);
n.SEQ.ID.No.14中所示的核酸序列(DZAR9);
o.SEQ.ID.No.15中所示的核酸序列(DZAR19);
p.SEQ.ID.No.16中所示的核酸序列(DZAR14);
q.SEQ.ID.No.17中所示的核酸序列(DZAR21);
r.SEQ.ID.No.18中所示的核酸序列(DZAR33);
s.SEQ.ID.No.19中所示的核酸序列(DZAR13);
t.SEQ.ID.No.20中所示的核酸序列(DZAR16);
u.SEQ.ID.No.21中所示的核酸序列(DZAR1);
v.SEQ.ID.No.22中所示的核酸序列(DZAR20);
w.SEQ.ID.No.23中所示的核酸序列(DZAR2);
x.SEQ.ID.No.24中所示的核酸序列(DZAR26);
y SEQ.ID.No.25中所示的核酸序列(DZAR4);
z.SEQ.ID.No.26中所示的核酸序列(DZAR10);
aa.SEQ.ID.No.27中所示的核酸序列(DZAR11);
bb.SEQ.ID.No.28中所示的核酸序列(DZAR12);
cc.SEQ.ID.No.29中所示的核酸序列(DZAR17);
dd.SEQ.ID.No.30中所示的核酸序列(DZAR22);
ee.SEQ.ID.No.31中所示的核酸序列(DZAR30);
ff.SEQ.ID.No.32中所示的核酸序列(DZAR31);
gg.SEQ.ID.No.33中所示的核酸序列(DZAR32)。
11.根据权利要求10所述的酶促核酸分子,其由与选自以下的核酸序列具有至少80%的序列同一性的核酸序列组成:
a.SEQ.ID.No.1中所示的核酸序列(DZAR3);
b.SEQ.ID.No.2中所示的核酸序列(DZAR18);
c.SEQ.ID.No.3中所示的核酸序列(DZAR15);
d.SEQ.ID.No.4中所示的核酸序列(DZAR8);
e.SEQ.ID.No.5中所示的核酸序列(DZAR34);
f.SEQ.ID.No.6中所示的核酸序列(DZAR24);
g.SEQ.ID.No.7中所示的核酸序列(DZAR23);
h.SEQ.ID.No.8中所示的核酸序列(DZAR28);
i.SEQ.ID.No.9中所示的核酸序列(DZAR27);
j.SEQ.ID.No.10中所示的核酸序列(DZAR25);
k.SEQ.ID.No.11中所示的核酸序列(DZAR7);
l.SEQ.ID.No.12中所示的核酸序列(DZAR29);
m.SEQ.ID.No.13中所示的核酸序列(DZAR5);
n.SEQ.ID.No.14中所示的核酸序列(DZAR9);
o.SEQ.ID.No.15中所示的核酸序列(DZAR19);
p.SEQ.ID.No.16中所示的核酸序列(DZAR14);
q.SEQ.ID.No.17中所示的核酸序列(DZAR21);
r.SEQ.ID.No.18中所示的核酸序列(DZAR33);
s.SEQ.ID.No.19中所示的核酸序列(DZAR13);
t.SEQ.ID.No.20中所示的核酸序列(DZAR16);
u.SEQ.ID.No.21中所示的核酸序列(DZAR1);
v.SEQ.ID.No.22中所示的核酸序列(DZAR20);
w.SEQ.ID.No.23中所示的核酸序列(DZAR2);
x.SEQ.ID.No.24中所示的核酸序列(DZAR26);
y SEQ.ID.No.25中所示的核酸序列(DZAR4);
z.SEQ.ID.No.26中所示的核酸序列(DZAR10);
aa.SEQ.ID.No.27中所示的核酸序列(DZAR11);
bb.SEQ.ID.No.28中所示的核酸序列(DZAR12);
cc.SEQ.ID.No.29中所示的核酸序列(DZAR17);
dd.SEQ.ID.No.30中所示的核酸序列(DZAR22);
ee.SEQ.ID.No.31中所示的核酸序列(DZAR30);
ff.SEQ.ID.No.32中所示的核酸序列(DZAR31);
gg.SEQ.ID.No.33中所示的核酸序列(DZAR32)。
12.根据权利要求10或权利要求11所述的酶促核酸分子,其包含选自以下的核酸序列:
a.SEQ.ID.No.1中所示的核酸序列(DZAR3);
b.SEQ.ID.No.2中所示的核酸序列(DZAR18);
c.SEQ.ID.No.3中所示的核酸序列(DZAR15);
d.SEQ.ID.No.4中所示的核酸序列(DZAR8);
e.SEQ.ID.No.5中所示的核酸序列(DZAR34);
f.SEQ.ID.No.6中所示的核酸序列(DZAR24);
g.SEQ.ID.No.7中所示的核酸序列(DZAR23);
h.SEQ.ID.No.8中所示的核酸序列(DZAR28);
i.SEQ.ID.No.9中所示的核酸序列(DZAR27);
j.SEQ.ID.No.10中所示的核酸序列(DZAR25);
k.SEQ.ID.No.11中所示的核酸序列(DZAR7);
l.SEQ.ID.No.12中所示的核酸序列(DZAR29);
m.SEQ.ID.No.13中所示的核酸序列(DZAR5);
n.SEQ.ID.No.14中所示的核酸序列(DZAR9);
o.SEQ.ID.No.15中所示的核酸序列(DZAR19);
p.SEQ.ID.No.16中所示的核酸序列(DZAR14);
q.或与SEQ.ID.No.1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15或16中所示的核酸序列相比具有至多四个修饰的序列。
13.根据权利要求10或权利要求11所述的酶促核酸分子,其由选自以下的核酸序列组成:
a.SEQ.ID.No.1中所示的核酸序列(DZAR3);
b.SEQ.ID.No.2中所示的核酸序列(DZAR18);
c.SEQ.ID.No.3中所示的核酸序列(DZAR15);
d.SEQ.ID.No.4中所示的核酸序列(DZAR8);
e.SEQ.ID.No.5中所示的核酸序列(DZAR34);
f.SEQ.ID.No.6中所示的核酸序列(DZAR24);
g.SEQ.ID.No.7中所示的核酸序列(DZAR23);
h.SEQ.ID.No.8中所示的核酸序列(DZAR28);
i.SEQ.ID.No.9中所示的核酸序列(DZAR27);
j.SEQ.ID.No.10中所示的核酸序列(DZAR25);
k.SEQ.ID.No.11中所示的核酸序列(DZAR7);
l.SEQ.ID.No.12中所示的核酸序列(DZAR29);
m.SEQ.ID.No.13中所示的核酸序列(DZAR5);
n.SEQ.ID.No.14中所示的核酸序列(DZAR9);
o.SEQ.ID.No.15中所示的核酸序列(DZAR19);
p.SEQ.ID.No.16中所示的核酸序列(DZAR14)。
14.根据权利要求13所述的酶促核酸分子,其包含具有以下所示的核酸序列的核酸分子或者由具有以下所示的核酸序列的核酸分子组成:
SEQ.ID.No.4(DZAR8);SEQ.ID.No.6(DZAR24);SEQ.ID.No.8(DZAR28)或SEQ.ID.No.11(DZAR7)。
15.根据前述权利要求中任一项所述的酶促核酸分子,其包含以下修饰中的至少一个:
a)取代的锁核酸分子;和/或
b)位于寡核苷酸3’端的反向脱氧胸苷。
16.根据前述权利要求中任一项所述的酶促核酸分子,其包含脱氧胸苷缀合物。
17.根据前述权利要求中任一项所述的酶促核酸分子,其在二价阳离子的存在下具有催化活性。
18.根据权利要求17所述的酶促核酸分子,其在MgCl2+的存在下具有催化活性。
19.根据权利要求18所述的酶促核酸分子,其在MgCl2+的生理浓度下具有催化活性,其中任选地所述生理浓度定义为1至4mM MgCl2+的MgCl2+浓度。
20.根据前述权利要求中任一项所述的酶促核酸分子,其是DNA酶。
21.根据前述权利要求中任一项所述的酶促核酸分子,其下调人雄激素受体基因的表达。
22.组合物,其包含:
根据前述权利要求中任一项所述的酶促核酸分子和药学上可接受的载体或稀释剂。
23.根据权利要求22所述的组合物,其还包含二价阳离子,其中任选地所述二价阳离子是MgCl2+。
24.根据权利要求22或权利要求23所述的组合物,其用作药物。
25.根据权利要求1至21中任一项所述的酶促核酸分子或根据权利要求22或权利要求23所述的组合物,其用于治疗癌症。
26.根据权利要求1至21中任一项所述的酶促核酸分子或根据权利要求22或权利要求23所述的组合物,其用于治疗选自前列腺癌和乳腺癌的癌症。
27.根据权利要求1至21中任一项所述的酶促核酸分子,其用于治疗多囊卵巢综合征。
28.根据权利要求25至27中任一项所述的酶促核酸分子,其与二价阳离子一起使用,其中任选地所述二价阳离子处于生理浓度,并且进一步任选地,所述二价阳离子是MgCl2+,并且所述MgCl2+的浓度在1至4mM之间。
29.递送剂,其包含根据权利要求1至21中任一项所述的酶促核酸分子或根据权利要求22或权利要求23所述的组合物。
30.用于治疗癌症的方法,所述方法包括:
a)向有此需要的受试者施用治疗有效量的根据权利要求1至21中任一项所述的酶促核酸分子或根据权利要求22或23所述的组合物。
31.根据权利要求30所述的方法,其中所述受试者患有前列腺癌或乳腺癌。
32.根据权利要求30或权利要求31所述的方法,其中所述施用是在二价阳离子的存在下进行的。
33.根据权利要求32所述的方法,其中所述二价阳离子是MgCl2+。
34.根据权利要求33所述的方法,其中所述二价阳离子处于生理浓度,其中任选地所述生理浓度定义为1至4mM MgCl2+的MgCl2+浓度。
35.根据权利要求30至34中任一项所述的方法,其中所述酶促核酸分子与递送剂联合施用。
36.根据权利要求35所述的方法,其中所述递送剂是脂质,例如阳离子脂质。
37.根据权利要求36所述的方法,其中所述脂质是磷脂。
38.根据权利要求35所述的方法,其中所述递送剂是脂质体。
39.根据权利要求35所述的方法,其中所述递送剂是工程改造的腺相关病毒。
40.根据权利要求35所述的方法,其中所述递送剂选自由生物材料形成的纳米颗粒、适体和纳米结构,其中任选地所述递送剂为生物材料纳米载体。
41.表达载体,其包含根据权利要求1至21中任一项所述的酶促核酸分子。
42.哺乳动物细胞,其包含根据权利要求41所述的表达载体,其任选地是人细胞。
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