CN113295860A - 用于消除免疫检测内源性干扰的试剂盒及其应用 - Google Patents
用于消除免疫检测内源性干扰的试剂盒及其应用 Download PDFInfo
- Publication number
- CN113295860A CN113295860A CN202110558183.9A CN202110558183A CN113295860A CN 113295860 A CN113295860 A CN 113295860A CN 202110558183 A CN202110558183 A CN 202110558183A CN 113295860 A CN113295860 A CN 113295860A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- interference
- magnetic particles
- kit
- human
- sample
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
Classifications
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
- G01N33/543—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor with an insoluble carrier for immobilising immunochemicals
- G01N33/54313—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor with an insoluble carrier for immobilising immunochemicals the carrier being characterised by its particulate form
- G01N33/54326—Magnetic particles
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/68—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving proteins, peptides or amino acids
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/68—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving proteins, peptides or amino acids
- G01N33/6854—Immunoglobulins
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Immunology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Urology & Nephrology (AREA)
- Hematology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Pathology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
Abstract
本发明具体公开了一种用于消除免疫检测内源性干扰的试剂盒及其应用,所述试剂盒包括磁微粒及偶联在磁微粒上的去干扰蛋白,去干扰蛋白包括抗人IgM,抗人IgG,抗人IgA、抗人IgE、抗人IgD、抗异嗜性抗体及抗类风湿因子抗体中的一种或多种,用于消除内源性干扰。本发明提供的试剂盒相比于市面上的去除内源性干扰的阻断剂,去干扰更加全面,去干扰更加彻底;此外不会降低正常样本抗原检测的信号值,对样本检测不会有不良影响。
Description
技术领域
本发明涉及免疫检测技术领域,特别涉及一种用于消除免疫检测内源性干扰的试剂盒及其应用。
背景技术
临床上,出现检验结果和患者临床不符的情况时有发现,导致检验结果与临床不符合的原因是多样性的,包括患者检查前是否用药,是否处于窗口期,检验方法的局限性等等,甚至可能是患者自身某些固有干扰导致的。其中患者自身固有的内源性干扰就是最容易被忽视的影响因素。内源性干扰是由于检测试剂中的抗体和患者样本中的内源性物质发生交叉反应所致,这类干扰统称为内源性干扰。其中内源性干扰主要分为以下几类:
1.类风湿因子:类风湿因子是存在于血清中的一类以自身变性IgG为靶抗原的自身抗体,与天然IgG结合能力较差,易与人和动物的变性IgG或免疫复合物中的IgG结合。
2.异嗜性抗体(HA):异嗜性抗体可以与许多动物免疫球蛋白的Fc和Fab等部位上的表位结合,模拟被测抗原的免疫活性,同时结合捕获抗体、标记抗体干扰实验。
3.人抗动物抗体(HAAA):人抗动物抗体是具有抗动物活性的抗体。
去除这些内源性干扰,目前市面上最主流的做法是加入各种类型的阻断剂。阻断剂类型多种多样,根据阻断剂作用机制分类有被动阻断剂和主动阻断剂。被动阻断剂一般为正常动物血清或正常动物IgG,其工作原理为通过高浓度添加,使干扰抗体优先与阻断剂结合而不与检测抗体或捕获抗体结合,从而降低干扰;主动阻断剂,一类对干扰抗体具有高亲和力的试剂。与干扰抗体结合后,可以通过位阻效应阻断干扰抗体与检测抗体或捕获抗体的结合。
由于临床样本具有特殊性,干扰类型不一,干扰千差万别,各类阻断剂针对的样本类型并非完全一致。目前并没有一种单一配方的阻断剂适用于所有的免疫检测,相关开发人员只能根据自己免疫检测系统的情况,添加一种或几种阻断剂,达到去除干扰的目的。
本发明使用磁珠与免疫球蛋白及去干扰物质连接,为一类根据血清及待检物性质特定配置的含多种抗体的磁珠液,可以用于完全去除样本中的干扰物。
发明内容
本发明的目的在于提供一种用于消除免疫检测内源性干扰的试剂盒,用以解决样本特殊性的问题,可以将免疫检测中的干扰物质全部去除。
鉴于此,本发明的技术方案如下:
一种用于消除免疫检测干扰的试剂盒,包括磁微粒、分别偶联在磁微粒上的去干扰蛋白及保存缓冲液;所述去干扰蛋白选自抗人IgM、抗人IgG、抗人IgA、抗人IgE、抗人IgD、抗异嗜性抗体及抗类风湿因子抗体中的多种。
根据本发明的实施例,所述去干扰蛋白为单克隆抗体和/或多克隆抗体。
根据本发明的实施例,所述磁微粒为羧基末端的磁性微粒。
本发明还提供以上所述的试剂盒在制备免疫检测产品中的应用。
本发明还提供以上所述试剂盒的制备方法,包括如下步骤:
1)取磁微粒,磁性分离去上清,加入溶解在偶联缓冲液的去干扰蛋白,置于空气振荡器中反应,磁性分离后去上清;
2)封闭未偶联的磁珠,磁性分离,去上清;
3)将分别偶联的不同种类去干扰蛋白的磁珠均匀地混合,磁性分离去上清;使用保存缓冲液保存。
本发明还提供一种消除免疫检测中样本内源性干扰的方法,将以上所述试剂盒与待检血清样本混合,反应后进行磁性分离,取上清样本;所述试剂盒中的磁微粒在血清样本中含量为20-200μg/ml。
相对于现有技术,本发明的有益效果为:
1.本发明提出的消除方法去除干扰类型全面,所示方法中磁微粒上含有针对各种类型干扰的相对应的抗体,对于IgM类,IgG类或者IgA类的干扰,均有特定的相对应的抗体进行去除。相比于市面上的去除内源性干扰的阻断剂,其去干扰更加全面,去干扰更加彻底。
2.本发明提供的消除方法不影响现有检测信号值,选用的抗体及将磁珠偶联后,不会对原有的检测系统产生影响,不会降低正常样本检测的信号值,对样本检测不会有不良影响。
3.本发明提供的消除方法操作便捷。所述磁微粒具有极强的磁响应性,且磁微粒作为抗体的载体具有较高的比表面积,能够充分的和样本进行反应,加之外加磁场的灵活运用,较之前具有更便捷的操作方法。
4.去除干扰方法新型。传统内源性的干扰消除方式通过在样本稀释液中或者酶标液中添加阻断剂来去除内源性干扰,阻断剂即为一类针对内源性干扰物质的特异性抗体。由于检测抗体及包被抗体的不一致及各种检测方法、检测靶标的差异性,导致在不同项目及不同检测方法上,所添加的阻断剂千差万别,同时,由于添加在样本稀释液或者酶标夜中,部分阻断剂还会对检测系统有不小的影响。本发明的去除内源性干扰的方法,可以将各种类型的血清样本的干扰类物质去除完成,同时不受项目及检测方法的影响。同时,通过磁微粒去除干扰后,并不会影响血清的正常的检测。
具体实施方式
为了使本发明的目的、技术方案和有益技术效果更加清晰明白,以下结合具体实施方式,对本发明进行进一步详细说明。应当理解的是,本说明书中描述的具体实施方式仅仅是为了解释本发明,并不是为了限定本发明。
本发明提供一种用于消除免疫检测内源性干扰的试剂盒,包括表面偶联有去干扰蛋白的磁性微粒,每个磁性微粒偶联单一的去干扰蛋白;所述去干扰蛋白选自抗人IgM、抗人IgG、抗人IgA、抗人IgE、抗人IgD、抗异嗜性抗体及抗类风湿因子抗体中的多种;
所述磁性微粒为巯基末端的磁性微粒,本发明选择磁性微粒表面含有羧基作为功能基团,利用偶联试剂可以将内源性干扰的蛋白分子共价结合在其表面。也可以选择氨基末端的磁性微粒,偶联的原理相同。
根据上述磁性微粒偶联的机理,所述去干扰蛋白可以选择单克隆抗体和/或多克隆抗体。
制备上述试剂盒的方法包括如下步骤:
1)使用磁性微粒偶联免疫球蛋白配基:取定量磁性微粒,磁性分离去上清,加入溶解在偶联缓冲液的免疫球蛋白配基,置于空气振荡器中充分反应,磁性分离,去上清;封闭未偶联的磁珠,磁性分离,去上清;
2)按照比例将偶联的不同种类的去干扰球蛋白配基的磁珠均匀地混合,磁性分离去上清;保存缓冲液保存磁珠备用。
所述去干扰球蛋白的磁珠固定比例针对不同的样本类型,依据样本特性选择不同磁珠的配方进行调整使用。
上述试剂盒保存缓冲液为:10mM PB,0.15M NaCl。
本发明提供一种用于消除免疫检测中样本内源性干扰的方法,将临床待检血清样本处理后,按1ml血清样本加入20-200μg试剂盒中的磁珠(去除保存缓冲液后),反应5-10分钟后,磁性分离,取上清样本进行项目检测。
本发明所述消除免疫检测中样本内源性干扰的原理如下:根据磁性微粒结合抗体蛋白的特点,可以设计单一抗体偶联得到的磁性微粒;再进一步根据待检样本特性,按比例配制抗人IgM、抗人IgG、抗人IgA、抗人IgE、抗人IgD、抗异嗜性抗体及抗类风湿因子抗体(单抗或多克隆抗体)等多种磁性微粒偶联抗体的试剂盒,由于上述抗体会与样本中的内源性物质发生交叉反应,从而去除内源性干扰蛋白,达到消除干扰的作用。
实施例.磁微粒的偶联、封闭及不同类别的混合
取1mg的磁性微粒置于离心管中,磁性分离去上清。加入缓冲液(0.1mol/L Tris-HCl,pH 7.4)1ml,再次磁性分离去上清。加入待偶联的去干扰蛋白300μg,补充缓冲液0.1mol/L Tris-HCl,pH 7.4)体积至1ml,使其终浓度为0.3mg/ml,置于空气振荡器中,充分反应30分钟。反应完成后,磁性分离去上清。加入清洗液(PBST)1ml,重悬后磁性分离,再次去上清。加入封闭液(Tris-HCl,pH7.4,1%BSA)置于空气振荡器中,充分反应3小时。使用缓冲液(0.1mol/L Tris-HCl,pH 7.4)清洗磁性微粒,最后补充缓冲液至1ml,备用。
分别将抗人IgM、抗人IgG、抗人IgA、抗人IgE、抗人IgD、抗异嗜性抗体及抗类风湿因子抗体按照上述方法与磁性微粒逐一进行偶联,并分别缓冲液保存。
上述去干扰蛋白与磁微粒分别偶联后,按照表1进行磁性微粒的配比。
表1:
实验例1
以HBeAg项目为例(双抗体夹心法,化学发光)测试配方1、2、3磁珠液的去干扰效果。
共选择已经确定有假阳性干扰的样本10份及正常无干扰样本5份,使用磁珠孵育时间为1min,样本处理后,对其进行测试,结果如表2所示。
表2:
如表2所示,在化学发光系统中HBeAg项目上评价上面三种磁珠的去干扰效果,其中配方1、配方2、配方3分别为使用3种配方磁珠处理好检测该血清的值;原始值为原血清样本检测值,未进行处理;某阻断剂为添加市面上常用的阻断剂使用得到的检测值;实际值为该血清样本使用市面上认可度高的产品检测的样本值。
从表2中得到结论如下:
对于第11-15份的正常无干扰样本,结果显示,该磁珠处理方法并不会增加或者降低其正常信号值,对于试剂盒的准确性和稳定性都有较好良好的加强;
对于第1-10份干扰样本,三种配方的磁珠处理以后都可以有效降低干扰,其测试值已经与实际值很接近;
比较本发明提供的磁珠法和添加阻断剂的方法,磁珠法方便操作,添加阻断剂方法需要验证。且在部分样本上,阻断剂去干扰的能力有限,本发明使用磁珠法去干扰效果明显增强。
实验例2
在CTnI项目(双抗体夹心法,化学发光)测试配方1、2、3磁珠液的去干扰效果。
共选择7个阴性样本、7个假阳性样本、4个假阴性样本,共计18个样本进行磁珠法去干扰测试效果。使用磁珠孵育时间为1min,样本处理后,对其进行如表3中的测试。
表3:
如表3所示,选择三个不同配方的磁珠液处理样本后,及对比未处理的样本测定值,较好的显示出本磁珠液处理可以增加试剂盒的稳定性及准确性。分析如下:
1.该三种磁珠液均不会对正常样本产生影响,不会降低或者增加样本的信号值;
2.对于假阳性样本,经过该磁珠液处理后,可以降低样本的信号值,处理掉样本中的干扰物质,使样本显示正确的信号值;
3.对于假阴性样本,经过该磁珠液处理后,可以升高样本的信号值,将样本检测值恢复至正常水平。
以上实验实施例结果的原因在于,采用磁珠法混合了多种不同的抗体混合物之后,对样本中内源性的物质发生交叉反应,从而去除内源性干扰蛋白,达到消除干扰的作用,让假阳性及假阴性的检测样本恢复正常数值;此外上述消除干扰的机理并不会影响到样本目标抗体的检测,因此不会降低会增加样本的信号值。此外效果方面,本发明采用的磁珠法相比现有技术使用阻断剂去干扰效果明显增强,表现出优异的性能。
本发明并不仅仅限于说明书和实施方式中所描述,因此对于熟悉领域的人员而言可容易地实现另外的优点和修改,故在不背离权利要求及等同范围所限定的一般概念的精神和范围的情况下,本发明并不限于特定的细节、代表性的方案和这里描述的示例。
Claims (6)
1.一种用于消除免疫检测干扰的试剂盒,其特征在于,包括磁微粒、分别偶联在磁微粒上的去干扰蛋白及保存缓冲液;所述去干扰蛋白选自抗人IgM、抗人IgG、抗人IgA、抗人IgE、抗人IgD、抗异嗜性抗体及抗类风湿因子抗体中的多种。
2.根据权利要求1所述的试剂盒,其特征在于,所述去干扰蛋白为单克隆抗体和/或多克隆抗体。
3.根据权利要求1所述的试剂盒,其特征在于,所述磁微粒为羧基末端的磁性微粒。
4.权利要求1-3任意一项所述的试剂盒在制备免疫检测产品中的应用。
5.权利要求1所述试剂盒的制备方法,其特征在于,包括如下步骤:
1)取磁微粒,磁性分离去上清,加入溶解在偶联缓冲液的去干扰蛋白,置于空气振荡器中反应,磁性分离后去上清;
2)封闭未偶联的磁珠,磁性分离,去上清;
3)将分别偶联的不同种类去干扰蛋白的磁珠均匀地混合,磁性分离去上清;使用保存缓冲液保存。
6.一种消除免疫检测中样本内源性干扰的方法,其特征在于,将权利要求1所述试剂盒与血清样本混合,反应后进行磁性分离,取上清样本;所述试剂盒中的磁微粒在血清样本中含量为20-200μg/ml。
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
CN202110558183.9A CN113295860A (zh) | 2021-05-21 | 2021-05-21 | 用于消除免疫检测内源性干扰的试剂盒及其应用 |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
CN202110558183.9A CN113295860A (zh) | 2021-05-21 | 2021-05-21 | 用于消除免疫检测内源性干扰的试剂盒及其应用 |
Publications (1)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
CN113295860A true CN113295860A (zh) | 2021-08-24 |
Family
ID=77323695
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
CN202110558183.9A Pending CN113295860A (zh) | 2021-05-21 | 2021-05-21 | 用于消除免疫检测内源性干扰的试剂盒及其应用 |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
CN (1) | CN113295860A (zh) |
Citations (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN105393119A (zh) * | 2013-07-30 | 2016-03-09 | 生物辐射实验室股份有限公司 | 用于免疫试验的多重封闭物珠 |
CN109828119A (zh) * | 2019-02-27 | 2019-05-31 | 武汉原谷生物科技有限责任公司 | 消除体外诊断试剂内源性干扰的混合型阻断试剂及其应用 |
-
2021
- 2021-05-21 CN CN202110558183.9A patent/CN113295860A/zh active Pending
Patent Citations (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN105393119A (zh) * | 2013-07-30 | 2016-03-09 | 生物辐射实验室股份有限公司 | 用于免疫试验的多重封闭物珠 |
CN109828119A (zh) * | 2019-02-27 | 2019-05-31 | 武汉原谷生物科技有限责任公司 | 消除体外诊断试剂内源性干扰的混合型阻断试剂及其应用 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
CN104977404B (zh) | 抑制类风湿因子干扰的胶乳增强免疫比浊试剂 | |
JPS6112224B2 (zh) | ||
CN107942069A (zh) | 一种ngal胶乳免疫比浊法检测试剂盒及其制备方法 | |
CN109828119A (zh) | 消除体外诊断试剂内源性干扰的混合型阻断试剂及其应用 | |
CN108828208A (zh) | 一种应用免疫磁珠技术的黄曲霉毒素前处理试剂盒 | |
CN108982842A (zh) | 一种应用免疫磁珠技术的玉米赤霉烯酮前处理试剂盒 | |
CN110007078A (zh) | 一种脱氧雪腐镰刀烯醇的样本前处理试剂盒 | |
US20040106157A1 (en) | Immunological assay reagents and assay method | |
CN113295860A (zh) | 用于消除免疫检测内源性干扰的试剂盒及其应用 | |
CN113125741A (zh) | 降钙素原的检测试剂、试剂盒、系统及检测方法 | |
CN116908443A (zh) | 一种检测pla2r抗体的化学发光试剂盒 | |
CN116990530A (zh) | 质控品基质液的制备方法及应用 | |
JPH01129163A (ja) | アポリポタンパク質bの診断試薬および測定法 | |
AU657595B2 (en) | A method for the determination of antigens or antibodies in the presence of an immune complex | |
CN102680677B (zh) | 一种检测氧氟沙星的酶联免疫试剂盒及检测方法 | |
JPH0230667B2 (zh) | ||
EP1298438A1 (en) | Insoluble carrier particle nephelometric immunoassay reagent | |
JP2649016B2 (ja) | 免疫反応干渉作用の除去方法 | |
JP2684425B2 (ja) | ラテックス試薬 | |
CA2414704A1 (en) | Tertiary amine compounds for use in immunoassays | |
JPH08327629A (ja) | 検体前処理方法 | |
JPS6229746B2 (zh) | ||
CN118191302A (zh) | 粪便样本中的目的分析物的免疫测定试剂 | |
JPH0456258B2 (zh) | ||
CN106434566B (zh) | 抗氟喹诺酮类药物簇特异性单克隆抗体杂交瘤细胞株及其产生的单抗和应用 |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
PB01 | Publication | ||
PB01 | Publication | ||
SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
SE01 | Entry into force of request for substantive examination |