CN113289017B - 一种共负载日蟾蜍他灵和吲哚美辛的仿生普鲁士蓝复合材料及其制备方法和应用 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种共负载日蟾蜍他灵和吲哚美辛的仿生普鲁士蓝复合材料及其制备方法和应用，所述共负载日蟾蜍他灵和吲哚美辛的仿生普鲁士蓝复合材料包括普鲁士蓝、日蟾蜍他灵、聚多巴胺、吲哚美辛和仿生膜，所述日蟾蜍他灵经由物理封装于普鲁士蓝内，所述普鲁士蓝外包覆有聚多巴胺，所述吲哚美辛经由化学修饰在所述聚多巴胺上，所述吲哚美辛外层包覆有仿生膜，用于在制备光热治疗与化疗联合的肿瘤治疗药物中的应用。本发明解决了光热治疗与化疗联合的肿瘤治疗药剂普遍存在的炎症诱导和化疗敏感性低的问题，同时又能改善药剂的血液半衰期和肿瘤靶向效果，为开发抗癌药剂及相关临床检测治疗提供新理论支持，具有重要的科学意义、实用价值和经济价值。

Description

一种共负载日蟾蜍他灵和吲哚美辛的仿生普鲁士蓝复合材料 及其制备方法和应用
技术领域
本发明是涉及生物医药技术领域，具体地说是涉及一种共负载日蟾蜍他灵和吲哚美辛的仿生普鲁士蓝复合材料及其制备方法和应用。
背景技术
尽管多年来，诸如化学疗法，放射疗法和手术治疗之类的癌症治疗手段在不断得到改进和发展。但是，由于肿瘤的异质性，单一疗法仍然无法满足高效消除肿瘤的需要。随着纳米医学技术的蓬勃发展，联合疗法在在不断的优化中开始展现更高的疗效和存活率。传统和现代新型疗法的经典结合是光热/化疗联合。光热治疗与化疗的联合能通过彼此的合作互动，弥补毒副作用较大和生物利用度低的缺陷。然而，由于光热治疗的局部高温易导致周围正常细胞直接性或继发性坏死，从而诱发炎症反应。诱发的炎症通常与多种不良反应相关，包括组织损伤、肿瘤抵抗或癌症复发。同时，长期化疗介入有可能诱发耐药性，使癌细胞对药物不敏感。但是目前为止，关于光热治疗与化疗联合用于肿瘤治疗且改善炎症和化疗增敏的有效疗法相关报道很少。因此，仍然非常需要制定有效的策略来应对当前的挑战。
普鲁士蓝是已被美国食品药品监督管理局(FDA)认证的一种以铁为中心的MOF结构纳米材料。普鲁士蓝的生物医学应用源于三种物理化学特性，具体表现在：(1)单晶中发现的大空腔使其成为能够负载小分子药物的纳米载体；(2)对近红外波段(即所谓的生物窗口)的强光学吸收，使其成为良好的光热剂；(3)由于存在大量Fe2+和Fe3+使其具备一定催化性质，在体内催化作用时易通过芬顿反应产生活性氧，发挥纳米酶一样的功用。但是，单纯的普鲁士蓝存在易被快速代谢清除和缺乏主动靶向的不足。因此，寻求血液循环期长、良好靶向肿瘤，又能缓解炎症和化疗增敏的光热治疗与化疗联合的肿瘤治疗药剂是当今研究的热点。
发明内容
为了克服现有技术中存在的缺点与不足，本发明的首要目的在于提供一种具备较长血液循环周期和良好靶向能力，且不诱发炎症的共负载日蟾蜍他灵和吲哚美辛的仿生普鲁士蓝复合材料的制备方法。并且，相应地提供了一种上述共负载日蟾蜍他灵和吲哚美辛的仿生普鲁士蓝复合材料在制备光热治疗与化疗联合的肿瘤治疗药剂的应用。
为解决上述技术问题，本发明提供了一种共负载日蟾蜍他灵和吲哚美辛的仿生普鲁士蓝复合材料及其制备方法和应用，包括共负载日蟾蜍他灵和吲哚美辛的仿生普鲁士蓝复合材料，所述共负载日蟾蜍他灵和吲哚美辛的仿生普鲁士蓝复合材料包括普鲁士蓝、日蟾蜍他灵、聚多巴胺、吲哚美辛和仿生膜，所述日蟾蜍他灵经由物理封装于普鲁士蓝内，所述普鲁士蓝外包覆有聚多巴胺，所述吲哚美辛经由化学修饰在所述聚多巴胺上，所述吲哚美辛外层包覆有仿生膜。
优选地，所述共负载日蟾蜍他灵和吲哚美辛的仿生普鲁士蓝复合材料的制备方法包括以下步骤：
S1、将收集的红细胞膜与宫颈癌细胞膜超声破碎，通过在PBS中搅拌反应制得仿生膜；
S2、将吲哚美辛和双羟基二硫化物溶解在四氢呋喃中，在催化剂条件下无氧搅拌反应，减压蒸发得到产物后，加入NH2-PEG-COOH的乙醇/水溶液中真空减压搅拌，再经冷冻干燥得到含有二硫键的吲哚美辛化合物；
S3、将铁氰化钾和聚乙烯吡咯烷酮溶解于HCl溶液中，经加热反应后，离心、水洗，得到普鲁士蓝分散液；
S4、将日蟾蜍他灵加入普鲁士蓝分散液中混合搅拌，经离心分散后，得到负载日蟾蜍他灵的普鲁士蓝分散液；
S5、将负载日蟾蜍他灵的普鲁士蓝分散液加入Tris-HCl溶液中，还加入多巴胺，先超声分散，然后搅拌反应，再离心、分散，得到聚多巴胺包裹的载药普鲁士蓝的分散液；
S6、将含有二硫键的吲哚美辛化合物加入聚多巴胺包裹载药普鲁士蓝的分散液中并搅拌进行反应，然后进行离心、水洗，得到得到共负载日蟾蜍他灵和吲哚美辛的普鲁士蓝复合材料；
S7、将共负载日蟾蜍他灵和吲哚美辛的普鲁士蓝复合材料和仿生膜的PBS溶液在合适温度进行混合搅拌，经离心分散后得到共负载日蟾蜍他灵和吲哚美辛的仿生普鲁士蓝复合材料。
优选地，在S1中，所述红细胞膜和宫颈癌细胞膜的质量比为1:0.5～1；在S2中，所述吲哚美辛和双羟基二硫化物、催化剂的摩尔比为1:1:1；在S3中，所述铁氰化钾与聚乙烯吡咯烷酮的质量比为1:11～23；在S4中，所述日蟾蜍他灵和普鲁士蓝的质量比为1:5～10；在S5中，所述多巴胺与所述载药普鲁士蓝的质量比为0.5～1:1；在S6中，所述吲哚美辛和所述聚多巴胺包裹的载药普鲁士蓝的质量比为0.5～1:1；在S7中，所述仿生膜和所述共负载日蟾蜍他灵和吲哚美辛的普鲁士蓝复合材料的质量比为1:5～10。
优选地，在S1中，超声功率为80W～100W，超声时间为1min～2min，反应温度为30℃～35℃，搅拌反应的转速为500rpm～600rpm，搅拌反应的时间为2h～3h。
优选地，在S2中，使用的催化剂为二环己基碳二亚胺和4-二甲胺基吡啶，两种催化剂的质量比为10:1，搅拌反应的转速为400rpm～600rpm，搅拌反应的时间为12h～15h，离心的转速为10000rpm～12000rpm。
优选地，在S3中，加热反应的温度为75℃～85℃，加热反应的时间为18h～22h，加热反应采用油浴或水浴方式进行，离心的转速为10000rpm～13000rpm；在S4中，搅拌反应的转速为500rpm～800rpm，所述搅拌反应的时间为10h～12h，离心的转速为10000rpm～13000rpm。
优选地，在S5中，超声分散的时间为20min～40min，搅拌反应的转速为500rpm～800rpm，搅拌反应的时间为3h～4h，离心的转速为10000rpm～13000rpm；在S6中，搅拌反应的转速为500rpm～800rpm，搅拌反应的时间为18h～20h，离心的转速为10000rpm～13000rpm。
优选地，在S7中，反应温度为30℃～35℃，搅拌反应的转速为500rpm～800rpm，搅拌反应的时间为2h～4h，离心的转速为10000rpm～13000rpm。
优选地，所述共负载日蟾蜍他灵和吲哚美辛的仿生普鲁士蓝复合材料的粒径为100nm～130nm。
优选地，一种共负载日蟾蜍他灵和吲哚美辛的仿生普鲁士蓝复合材料及其制备方法在制备光热治疗与化疗联合的肿瘤治疗药物中的应用。
与现有技术相比，本发明具有如下有益效果：
(1)本发明本发明的复合纳米材料由普鲁士蓝对化疗药物日蟾蜍他灵进行物理装封，聚多巴胺包裹在负载日蟾蜍他灵的普鲁士蓝表面后，通过化学修饰将抗炎药物吲哚美辛结合在聚多巴胺上，仿生膜生物伪装在纳米复合材料的最外层，彼此的结合顺序有助于纳米复合材料发挥最大功效，最外层的仿生膜通过同源癌细胞的归巢效应主动靶向肿瘤病灶，红细胞膜的引入增强纳米复合材料的血液循环周期，进入肿瘤部位后，内源性高含量的谷胱甘肽断裂二硫键释放抗炎药物，有助于对炎症环境进行调节和癌细胞对化疗的增敏。外源性近红外光的刺激通过产热使聚多巴胺涂层降解，释放最里层的化疗药物日蟾蜍他灵，以上述结构设计制备的一种共负载日蟾蜍他灵和吲哚美辛的仿生普鲁士蓝复合材料，协同日蟾蜍他灵和普鲁士蓝两种不同机理的抗肿瘤效应，辅助以吲哚美辛对光热可能触发的炎症缓解和化疗增敏，实现光热治疗与化疗联合治理宫颈癌的疗效更大化；
(2)在本发明中，解决了光热治疗与化疗联合的肿瘤治疗药剂普遍存在的炎症诱导和化疗敏感性低的问题，同时又能改善药剂的血液半衰期和肿瘤靶向效果，为开发抗癌药剂及相关临床检测治疗提供新理论支持，具有重要的科学意义、实用价值和经济价值。
附图说明
图1为仿生膜囊泡的透射电镜图。
图2为含二硫键吲哚美辛化合物的核磁氢谱。
图3为普鲁士蓝(PB)、共负载日蟾蜍他灵和吲哚美辛的普鲁士蓝纳米复合材料(PCDI)、共负载日蟾蜍他灵和吲哚美辛的仿生普鲁士蓝纳米复合材料(PCDI@M)的透射电镜图。
图4为普鲁士蓝(PB)、共负载日蟾蜍他灵和吲哚美辛的普鲁士蓝纳米复合材料(PCDI)、共负载日蟾蜍他灵和吲哚美辛的仿生普鲁士蓝纳米复合材料(PCDI@M)的紫外可见光谱。
图5为普鲁士蓝(PB)、共负载日蟾蜍他灵和吲哚美辛的普鲁士蓝纳米复合材料(PCDI)、共负载日蟾蜍他灵和吲哚美辛的仿生普鲁士蓝纳米复合材料(PCDI@M)的升温曲线(808nm近红外激发，1W/cm2)。
图6为普鲁士蓝(PB)和共负载日蟾蜍他灵和吲哚美辛的仿生普鲁士蓝纳米复合材料(PCDI@M)在有/无近红外激光刺激下对炎性因子的影响。
图7为日蟾蜍他灵(CS-6)、普鲁士蓝(PB)和共负载日蟾蜍他灵和吲哚美辛的仿生普鲁士蓝纳米复合材料(PCDI@M)在有/无近红外激光刺激下对宫颈癌细胞(Hela)的细胞毒性。
图8为Cy5.5标记的共负载日蟾蜍他灵和吲哚美辛的普鲁士蓝纳米复合材料(PCDI)和共负载日蟾蜍他灵和吲哚美辛的仿生普鲁士蓝纳米复合材料(PCDI@M)在小鼠体内的血液半衰期。
图9为Cy5.5标记的共负载日蟾蜍他灵和吲哚美辛的普鲁士蓝纳米复合材料(PCDI)和共负载日蟾蜍他灵和吲哚美辛的仿生普鲁士蓝纳米复合材料(PCDI@M)在小鼠体内的生物分布及其定量。
图10为不同处理治疗体内皮下宫颈癌模型的肿瘤相对大小，且在治疗期结束的实体瘤照片。
具体实施方式
下面将结合本发明实施例中的附图，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。
实施例1：
共负载日蟾蜍他灵和吲哚美辛的仿生普鲁士蓝复合材料的合成：
a.制备仿生膜分散液：BALB/c小鼠的新鲜血液在4℃，2000rpm转速下离心10min，用PBS多次洗涤沉淀。然后，将0.25×PBS与沉淀混合置于冰上2h。以12000rpm，4℃离心5min，取第二层溶液得到红细胞膜(RBC M)。采用膜蛋白提取试剂盒制备Hela细胞膜。将Hela细胞重悬在膜提取试剂A(含1％PMSF)中。冰上放置1h后，在-80℃与37℃环境中反复冻融5次，每次各30min。以12000rpm，4℃离心30min得到Hela细胞膜。将两者(按照重量比1：1)的混合物冰上超声2min，在37℃，600rpm转速下混合搅拌2h以得到仿生膜分散液(记作：RBC-Hela M)；
b.制备含二硫键的吲哚美辛化合物：吲哚美辛(1.31g、3.67mM)、双(2-羟乙基)二硫化物(0.8mL、3.33mM)和四氢呋喃(20mL)在无氧条件下，600rpm转速冰浴搅拌15min。在10min内边搅拌边缓慢滴加入6mL二环己基碳二亚胺(0.7g)和4-二甲胺基吡啶(0.08g)的四氢呋喃溶液。混合溶液继续冰浴搅拌1h后，换至室温下搅拌18h。所得溶液用柱色谱法纯化和真空减压过滤后，得到黄色粉末，最后，将2mg粉末和NH2-PEG2000-COOH(20mg)在20mL乙醇/水体系中真空减压搅拌，待乙醇完全去除以后，溶液经过冷冻干燥得到含有二硫键的吲哚美辛化合物；
c.制备普鲁士蓝分散液：将264mg铁氰化钾和3g聚乙烯吡咯烷酮溶解在40mL浓度为0.01M的HCl溶液中，HCl溶液的pH值为2，然后将所得黄色混合液于80℃的油浴中加热反应20h，再将反应所得产物溶液在12000rpm的转速下离心15min，沉淀物重悬分散在去离子水中，继续水洗3次，用去离子水分散，制得普鲁士蓝分散液(记作：PB)；
d.制备负载日蟾蜍他灵的普鲁士蓝分散液：向5mL普鲁士蓝分散液(2mg/mL)加入10μL日蟾蜍他灵(5mg/mL)的二甲亚砜溶液，在4℃，800rpm转速下搅拌12h，所得溶液高速离心(30min，12000rpm)，沉淀分散在去离子水中，制得负载日蟾蜍他灵的普鲁士蓝分散液(记作：PC)；
e.制备聚多巴胺包裹的载药普鲁士蓝分散液：将1mL负载日蟾蜍他灵的普鲁士蓝分散液(5mg/mL)和20mL Tris-HCl缓冲液(10mM，pH8.5)混合，同时加入5mg多巴胺先超声分散40min，然后在800rpm下搅拌反应4h，产物溶液在12000rpm的转速下离心10min，沉淀分散在去离子水中，制得聚多巴胺包裹的载药普鲁士蓝分散液(记作：PCD)；
f.制备共负载日蟾蜍他灵和吲哚美辛的普鲁士蓝复合材料：向10mL聚多巴胺包裹的载药普鲁士蓝分散液(1mg/mL)中加入100μL含二硫键的吲哚美辛化合物的二甲亚砜溶液(2mg/mL)，在600rpm下搅拌20h。然后将溶液置于200mL PBS中透析3天，每天更换等体积的PBS。最终得到共负载日蟾蜍他灵和吲哚美辛的普鲁士蓝纳米复合材料(记作：PCDI)；
g.制备共负载日蟾蜍他灵和吲哚美辛的仿生普鲁士蓝复合材料：将共负载日蟾蜍他灵和吲哚美辛的普鲁士蓝纳米复合材料(5mL，1mg/mL)和仿生膜分散液(500μL)的混合物在37℃和600rpm下搅拌2h。最终以12000rpm离心，沉淀分散在PBS中以得到共负载日蟾蜍他灵和吲哚美辛的仿生普鲁士蓝纳米复合材料(记作：PCDI@M)；
共负载日蟾蜍他灵和吲哚美辛的仿生普鲁士蓝复合材料的表征如下：
如图1所示，对本实施例制得的仿生膜进行透射电镜成像分析，其结果表明均匀分散的球状仿生膜囊泡被成功制备；
如图2所示，对本实施例制得的含二硫键的吲哚美辛化合物的结构进行核磁图谱分析，显示所合成的化合物的结构与预期相同；
如图3所示，对本实施例中制得的普鲁士蓝(PB)、共负载日蟾蜍他灵和吲哚美辛的普鲁士蓝纳米复合材料(PCDI)、共负载日蟾蜍他灵和吲哚美辛的仿生普鲁士蓝纳米复合材料(PCDI@M)进行透射电镜成像分析，其结果表明均匀分散的方形介孔普鲁士蓝被成功制备，共负载两种药物后的普鲁士蓝纳米复合材料近似成球状，仿生膜在最外层伪装后的载药仿生普鲁士蓝纳米复合材料外观出现10nm左右的膜外层；
如图4所示，用紫外可见(UV-vis)分光光度计分析本实施例制得的普鲁士蓝(PB)、共负载日蟾蜍他灵和吲哚美辛的普鲁士蓝纳米复合材料(PCDI)、共负载日蟾蜍他灵和吲哚美辛的仿生普鲁士蓝纳米复合材料(PCDI@M)，得到的紫外吸收光谱曲线图，从图中可以看出，普鲁士蓝的特征吸收峰位于710nm附近，普鲁士蓝负载日蟾蜍他灵和吲哚美辛且被聚多巴胺包裹后，紫外吸收分别在310nm和260nm处出现了归属于日蟾蜍他灵和吲哚美辛的特征吸收峰，最后，经过仿生膜最外层伪装制得的共负载日蟾蜍他灵和吲哚美辛的仿生普鲁士蓝纳米复合材料在400nm处出现了归属于生物膜的紫外特征吸收峰；
共负载日蟾蜍他灵和吲哚美辛的仿生普鲁士蓝复合材料的光热性能分析如下：
如图5所示，对本实施例中制得的普鲁士蓝(PB)、共负载日蟾蜍他灵和吲哚美辛的普鲁士蓝纳米复合材料(PCDI)、共负载日蟾蜍他灵和吲哚美辛的仿生普鲁士蓝纳米复合材料(PCDI@M)进行光热评估，结果表明，在808nm近红外光照射5min后，普鲁士蓝(PB)、共负载日蟾蜍他灵和吲哚美辛的普鲁士蓝纳米复合材料(PCDI)、共负载日蟾蜍他灵和吲哚美辛的仿生普鲁士蓝纳米复合材料(PCDI@M)的温度升高分别为22.8℃，31.2℃和29.9℃，而水的温度仅升高2.7℃，表明共负载日蟾蜍他灵和吲哚美辛的仿生普鲁士蓝纳米复合材料(PCDI@M)具有优异的光热性能，在近红外光照射下，该纳米复合材料能将光能转化为热能，表现出优异的光热效应，还可进一步触发并加速日蟾蜍他灵的释放，实现更加强烈的抗肿瘤作用。
实施例2：
采用实施例1制得的共负载日蟾蜍他灵和吲哚美辛的仿生普鲁士蓝复合材料，在制备光热治疗与化疗联合的肿瘤治疗药物中的应用：
(1)炎性因子测试：如图6所示，人源宫颈癌细胞(Hela cell)与含有30μg/mL普鲁士蓝(PB)或共负载日蟾蜍他灵和吲哚美辛的仿生普鲁士蓝纳米复合材料(PCDI@M)的培养基共孵育4h，随后用或者不用808nm近红外光照射5min；然后，将宫颈癌细胞的培养上清液作为RAW264.7细胞的培养基，以含有或不含有1μg/mL的脂多糖培养基为阳性对照和阴性对照，孵育24h后，由酶免疫分析试剂盒检测到RAW264.7细胞上清液中的TNF-α，IL-6和IL-1β浓度。结果显示，单独普鲁士蓝的光热治疗会使促炎细胞因子水平上升，表明光热触发了炎症反应。然而，共负载日蟾蜍他灵和吲哚美辛的仿生普鲁士蓝复合材料联合光热刺激并不会引起炎性因子的显著变化。由此说明，共负载日蟾蜍他灵和吲哚美辛的仿生普鲁士蓝复合材料能缓解光热治疗触发的炎症反应。
(2)细胞毒性研究：用MTT法检测共负载日蟾蜍他灵和吲哚美辛的仿生普鲁士蓝复合材料对Hela细胞的细胞毒性，所有细胞均在37℃下，5％CO2中培养；Hela细胞与含有日蟾蜍他灵(CS-6)，普鲁士蓝(PB)和共负载日蟾蜍他灵和吲哚美辛的仿生普鲁士蓝复合材料(PCDI@M)(CS-6：50nM；IND：25μM；PB：30μg/mL)的培养基孵育4h，继续孵育20h后，使用MTT试验评估各组分的细胞毒性。如图7所示，单独日蟾蜍他灵的化疗和普鲁士蓝激光刺激的光热治疗所引起的细胞毒性均很低，分别为17.6％和22.8％。然而，共负载日蟾蜍他灵和吲哚美辛的仿生普鲁士蓝复合材料的细胞毒性最高，能引起Hela细胞85.2％的死亡率。
实施例3：
采用实施例1中制得的共负载日蟾蜍他灵和吲哚美辛的仿生普鲁士蓝复合材料，将荧光分子Cy5.5和复合材料搅拌，使其堆叠在聚多巴胺上，通过检测荧光强度的半定量手段对复合材料的血液半衰期和生物分布进行测定：
尾静脉注射100uL浓度为1mg/mL的Cy5.5，PCDICy5.5或PCDI@MCy5.5后，在不同时间点采集血样进行荧光强度测定。如图8显示，计算出Cy5.5，PCDICy5.5和PCDI@MCy5.5的血液循环半衰期分别为2.1±0.1h，4.4±0.2h和10.8±0.6h。与Cy5.5和PCDICy5.5相比，PCDI@MCy5.5的血液循环周期明显延长，是PCDICy5.5的2.5倍。同时，图9的体内荧光图像显示，随着时间的推移，PCDI@MCy5.5在肿瘤组织中逐渐积累，累积量明显高于PCDICy5.5，超过其2倍的富集量。这些结果说明，共负载日蟾蜍他灵和吲哚美辛的仿生普鲁士蓝复合材料(PCDI@M)具备较长的血液半衰期和良好的靶向能力。
实施例4：
采用实施例1中制得的共负载日蟾蜍他灵和吲哚美辛的仿生普鲁士蓝复合材料，用于体内皮下宫颈癌肿瘤治疗：
如图10所示，尾静脉注射100uL CS-6、PB@M或PCDI@M(CS-6：1.0mg/kg；IND：3.0mg/kg；PB：5mg/kg)用于荷瘤裸鼠的皮下宫颈癌治疗，并且对肿瘤部位进行808nm近红外辐射(1W/cm2，5min)；
在给药期内的未经治疗小鼠的肿瘤体积在16天内迅速扩大到约～1200mm3，然而，共负载日蟾蜍他灵和吲哚美辛的仿生普鲁士蓝复合材料联合光热L治疗组(PCDI@M+L)的肿瘤生长缓慢，体积最终减小至约100mm3以下，甚至能实现部分肿瘤完全消除。
需要解释的是，在本发明中，使用的各种设备仪器和制备原料均为市面上常见的能自行购买到的，非本发明的创新点，故本发明未指定特定品牌型号。
上述的实施例仅为本发明的优选实施例，不能以此来限定本发明的权利范围，因此，依本发明申请专利范围所作的修改、等同变化、改进等，仍属本发明所涵盖的范围。

Claims (9)

1.一种共负载日蟾蜍他灵和吲哚美辛的仿生普鲁士蓝复合材料，其特征在于：所述共负载日蟾蜍他灵和吲哚美辛的仿生普鲁士蓝复合材料包括普鲁士蓝、日蟾蜍他灵、聚多巴胺、吲哚美辛和仿生膜，所述日蟾蜍他灵经由物理封装于普鲁士蓝内，所述普鲁士蓝外包覆有聚多巴胺，所述吲哚美辛经由化学修饰在所述聚多巴胺上，所述吲哚美辛外层包覆有仿生膜；所述共负载日蟾蜍他灵和吲哚美辛的仿生普鲁士蓝复合材料的制备方法由以下步骤制成：
S1、将收集的红细胞膜与宫颈癌细胞膜超声破碎，通过在PBS中搅拌反应制得仿生膜；
S2、将吲哚美辛和双羟基二硫化物溶解在四氢呋喃中，在催化剂条件下无氧搅拌反应，减压蒸发得到产物后，加入NH2-PEG-COOH的乙醇/水溶液中真空减压搅拌，再经冷冻干燥得到含有二硫键的吲哚美辛化合物；
S3、将铁氰化钾和聚乙烯吡咯烷酮溶解于HCl溶液中，经加热反应后，离心、水洗，得到普鲁士蓝分散液；
S4、将日蟾蜍他灵加入普鲁士蓝分散液中混合搅拌，经离心分散后，得到负载日蟾蜍他灵的普鲁士蓝分散液；
S5、将负载日蟾蜍他灵的普鲁士蓝分散液加入Tris-HCl溶液中，还加入多巴胺，先超声分散，然后搅拌反应，再离心、分散，得到聚多巴胺包裹的载药普鲁士蓝的分散液；
S6、将含有二硫键的吲哚美辛化合物加入聚多巴胺包裹载药普鲁士蓝的分散液中并搅拌进行反应，然后进行离心、水洗，得到共负载日蟾蜍他灵和吲哚美辛的普鲁士蓝复合材料；
S7、将共负载日蟾蜍他灵和吲哚美辛的普鲁士蓝复合材料和仿生膜的PBS溶液在反应温度为30℃～35℃的条件下进行混合搅拌，经离心分散后得到共负载日蟾蜍他灵和吲哚美辛的仿生普鲁士蓝复合材料。
2.根据权利要求1所述的一种共负载日蟾蜍他灵和吲哚美辛的仿生普鲁士蓝复合材料的制备方法，其特征在于：在S1中，所述红细胞膜和宫颈癌细胞膜的质量比为1:0.5～1；在S2中，所述吲哚美辛和双羟基二硫化物、催化剂的摩尔比为1:1:1；在S3中，所述铁氰化钾与聚乙烯吡咯烷酮的质量比为1:11～23；在S4中，所述日蟾蜍他灵和普鲁士蓝的质量比为1:5～10；在S5中，所述多巴胺与所述载药普鲁士蓝的质量比为0.5～1:1；在S6中，所述吲哚美辛和所述聚多巴胺包裹的载药普鲁士蓝的质量比为0.5～1:1；在S7中，所述仿生膜和所述共负载日蟾蜍他灵和吲哚美辛的普鲁士蓝复合材料的质量比为1:5～10。
3.根据权利要求1所述的一种共负载日蟾蜍他灵和吲哚美辛的仿生普鲁士蓝复合材料的制备方法，其特征在于：在S1中，超声功率为80W～100W，超声时间为1min～2min，反应温度为30℃～35℃，搅拌反应的转速为500rpm～600rpm，搅拌反应的时间为2h～3h。
4.根据权利要求1所述的一种共负载日蟾蜍他灵和吲哚美辛的仿生普鲁士蓝复合材料的制备方法，其特征在于：在S2中，使用的催化剂为二环己基碳二亚胺和4-二甲胺基吡啶，两种催化剂的质量比为10:1，搅拌反应的转速为400rpm～600rpm，搅拌反应的时间为12h～15h，离心的转速为10000rpm～12000rpm。
5.根据权利要求1所述的一种共负载日蟾蜍他灵和吲哚美辛的仿生普鲁士蓝复合材料的制备方法，其特征在于：在S3中，加热反应的温度为75℃～85℃，加热反应的时间为18h～22h，加热反应采用油浴或水浴方式进行，离心的转速为10000rpm～13000rpm；在S4中，搅拌反应的转速为500rpm～800rpm，所述搅拌反应的时间为10h～12h，离心的转速为10000rpm～13000rpm。
6.根据权利要求1所述的一种共负载日蟾蜍他灵和吲哚美辛的仿生普鲁士蓝复合材料的制备方法，其特征在于：在S5中，超声分散的时间为20min～40min，搅拌反应的转速为500rpm～800rpm，搅拌反应的时间为3h～4h，离心的转速为10000rpm～13000rpm；在S6中，搅拌反应的转速为500rpm～800rpm，搅拌反应的时间为18h～20h，离心的转速为10000rpm～13000rpm。
7.根据权利要求1所述的一种共负载日蟾蜍他灵和吲哚美辛的仿生普鲁士蓝复合材料的制备方法，其特征在于：在S7中，搅拌反应的转速为500rpm～800rpm，搅拌反应的时间为2h～4h，离心的转速为10000rpm～13000rpm。
8.根据权利要求1或2所述的一种共负载日蟾蜍他灵和吲哚美辛的仿生普鲁士蓝复合材料的制备方法，其特征在于：所述共负载日蟾蜍他灵和吲哚美辛的仿生普鲁士蓝复合材料的粒径为100nm～130nm。
9.根据权利要求1-8中任意一项所述的一种共负载日蟾蜍他灵和吲哚美辛的仿生普鲁士蓝复合材料在制备光热治疗与化疗联合的肿瘤治疗药物中的应用。
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