CN113286576B

CN113286576B - Gdf-11片段的氧化衍生物

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Publication number: CN113286576B
Application number: CN201980085356.0A
Authority: CN
Inventors: J·伊德科维亚克巴尔迪斯; J·W·莱加; R·Z·罗
Original assignee: Avon Products Inc
Current assignee: Avon Products Inc
Priority date: 2019-01-04
Filing date: 2019-01-04
Publication date: 2024-05-14
Anticipated expiration: 2039-01-04
Also published as: ES2930730T3; WO2020142103A1; TW202042784A; EP3906012B1; BR112021013164B1; PL3906012T3; US20210338557A1; CN113286576A; PT3906012T; MX2021008115A; EP3906012A1; BR112021013164A2

Abstract

本发明提供了肽(及其衍生物)、局部用组合物和减少老化迹象和/或改善人类外皮健康的方法。这些肽衍生自人生长分化因子11(GDF‑11)，并且典型地具有氨基酸残基的一个或多个化学修饰。优选的GDF‑11片段的修饰包括蛋氨酸氧化。

Description

GDF-11片段的氧化衍生物

序列表

本申请包含一个序列表，该序列表已经以ASCII格式通过电子递交并且通过引用以其全文特此结合。创建于2018年10月2日的所述ASCII副本被命名为SC195P-US_SL.txt，并且大小是462,000字节。

技术领域

本发明总体上涉及肽衍生物，特别是衍生自生长分化因子11(GDF-11)蛋白质的肽和含有这些肽的局部用配制品，以及用于改善皮肤健康和/或减少人类皮肤衰老的皮肤病学迹象的相关方法。衍生自GDF-11蛋白的肽衍生物比非衍生的GDF-11片段展现出更高的生物活性。例如，GDF-11片段的一个或多个氨基酸残基的氧化导致成纤维细胞中透明质酸产生和/或胶原产生的增加。

背景技术

生长因子是充当细胞之间的信号分子的天然存在的物质，通常是蛋白质。其主要功能是促进细胞分化和成熟。生长因子在许多功能方面起重要作用，例如刺激细胞生长、增殖和伤口愈合。相关生长因子的许多大类或超家族是已知的。

生长分化因子11(GDF-11)是一种属于转化生长因子(TGF)超家族(例如，TGF-β)的蛋白质，其包含一组结构相关的蛋白质。最近发现血源性GDF-11参与恢复小鼠衰老表型，该衰老表型包括心脏肥大(参见Loffredo等人，Cell[细胞],2013,153,828-839)，衰老相关的肌肉减少症(参见Sinha等人，Science[科学],2014,344:649-52)和认知功能下降(参见Villeda等人，Nat.Med.[自然医学]2014,20:659-63)。由于生长因子在保持健康组织方面起许多重要作用，因此引起了人们对在皮肤病学配置品中使用它们的兴趣。然而，存在与在局部用配制品中使用生长因子相关的缺点。另外，GDF-11片段已显示出可导致成纤维细胞中透明质酸和/或胶原产生的增加。然而，这些片段也受到了各种缺点的影响，包括稳定性问题。

另外，衍生肽也有其已知的缺点。例如，肽残基(例如蛋氨酸)的氧化可能会降低功效(参见Unnikrishnan等人,Agents and Actions[制剂与作用],1990,31:110-112)或可能会使肽不稳定。

因此，本发明的一个目的是提供其衍生自GDF-11的新的肽衍生物和含有这些新的肽衍生物的不受这些缺点抑制的局部用组合物。本发明的另一个目的是提供用于改进皮肤健康和/或外观、抵抗内在衰老和光衰老的迹象和/或处理皮肤障碍的方法。本发明的另一个目的是提供用于用包含有效量的本发明的肽衍生物的化妆品组合物处理、逆转、阻止和/或改善皮肤皱纹和细纹，紧致下垂皮肤，使皮肤有弹性，以及治疗色素沉着过度和不希望的色素沉着的组合物和方法。

给出上述讨论仅仅是提供对现有技术遇到的问题性质的更好理解，而不应以任何方式理解为对于现有技术的承认。

发明内容

根据上述的目的和其他目的，本发明提供包含肽衍生物的活性剂和局部用配制品。当局部应用于人类外皮(例如皮肤、嘴唇、指甲、头发等)，特别是皮肤时，活性剂被认为可用于改善一种或多种皮肤病学衰老迹象。它们也被认为在治疗各种皮肤病学疾病和改善皮肤的整体健康中是有用的。本发明的肽衍生自人生长因子GDF-11。在一些实施例中，肽衍生物是氧化的GDF-11片段(例如，其中一个或多个氨基酸残基被氧化的GDF-11的小肽序列等)。在一些实施例中，本发明的活性剂能够增加皮肤细胞的胶原蛋白和/或透明质酸(HA)的产生，并且因此将对减少皮肤衰老的外观具有有益的作用(例如减轻皱纹和/或细纹的外观、紧致下垂的皮肤、增厚变薄的皮肤、使肤色均匀、治疗色素沉着过度和不希望的色素沉着等)。

本发明涉及全长GDF-11蛋白质的较小的肽序列衍生物(例如，3-11个或3或4或5或6或7或8或9或10或11个氨基酸)，其与肽的非衍生版本相比，使成纤维细胞中的透明质酸(HA)和/或胶原增加。肽的非衍生版本可以披露于美国专利号10,034,826中，将其通过引用以其全文结合在此。这些肽，特别是与蛋白质的推定功能区类似的肽或同源的肽，被认为具有生物活性，包括会给皮肤上带来抗衰老益处。已经发现，这些较小的肽的衍生物比非衍生的肽具有更高的生物活性。例如，GDF-11蛋白质的较小序列可以通过修饰一个或多个氨基酸残基进行衍生。在某些实施例中，GDF-11蛋白质的较小序列可以通过氧化一个或多个氨基酸残基进行衍生。在一些实施例中，GDF-11的较小肽序列包含蛋氨酸和/或半胱氨酸。在一些实施例中，肽是MVV。在某些实施例中，本发明的肽衍生物包含已被氧化的硫醇或硫醚官能团。例如，肽衍生物可以包含蛋氨酸砜、蛋氨酸亚砜和/或半胱氨酸二硫化物。在一些实施例中，肽衍生物是蛋氨酸砜缬氨酸缬氨酸(M(O)₂VV)，其具有以下结构：

或其衍生物(包括但不限于氨基末端的C_1-18酰基衍生物和/或酸末端的C_1-18酯衍生物)或其盐。在一些实施例中，肽衍生物是蛋氨酸亚砜缬氨酸缬氨酸(M(O)VV)，其具有以下结构：

或其衍生物(包括但不限于氨基末端的C_1-18酰基衍生物和/或酸末端的C_1-18酯衍生物)或其盐。

每个氨基酸残基或衍生残基可以是天然对映体形式。在一些实施例中，氨基酸残基或衍生残基可以独立地呈L光学形式或D对映体形式。在一些实施例中，每个氨基酸残基和衍生残基可以具有L形式。在一些实施例中，氨基酸或衍生残基的立体化学分配可以独立地选自R或S。例如，肽衍生物可以具有以下结构：

肽衍生物也可以在氨基和/或羧酸末端与一种或多种烃独立地官能化。在一些实施例中，肽衍生物(包括M(O)VV和M(O)₂VV)可以在氨基末端乙酰化。例如，肽衍生物可以是Ac-M(O)₂VV，其具有以下结构：

或其衍生物(包括但不限于氨基末端的C_1-18酰基衍生物和/或酸末端的C_1-18酯衍生物)或其盐。在一些实施例中，肽衍生物可以是Ac-M(O)VV，其具有以下结构：

本发明的一个方面提供供局部使用的组合物，所述组合物包含活性剂，所述活性剂包含一个或多个GDF-11衍生的肽(例如，具有来自GDF-11序列的从3-11个连续氨基酸)，其包括生理上可接受载体中的本发明环肽片段，其中GDF-11衍生肽片段已被氧化。在某些实施例中，肽序列的一个或多个(例如，一、二、三、四、五、六、七个等)氨基酸残基已被衍生(例如，氧化等)。在一些实施例中，GDF-11的肽序列包含半胱氨酸或蛋氨酸。在一些实施例中，肽衍生物包含氧化蛋氨酸和/或氧化半胱氨酸。一种或多种GDF-11衍生的肽衍生物可以以按组合物重量计从约0.000001％至约10％(例如，0.0001％-1％)的量之间存在于组合物中。在本发明的实践中有用的肽包括，例如，包含GDF-11的3个氨基酸(SEQ ID NO:2-375)；4个氨基酸(SEQ ID NO:376-767)；5个氨基酸(SEQ ID NO:768-1161)；6个氨基酸(SEQ IDNO:1162-1556)；7个氨基酸(SEQ ID NO:1557-1951)；8个氨基酸(SEQ ID NO:1952-2346)；9个氨基酸(SEQ ID NO:2347-2741)；10个氨基酸(SEQ ID NO:2742-3136)；11个氨基酸(SEQID NO:3137-3531)或更大的片段的那些。肽衍生物可以衍生自其中一个或多个氨基酸残基已被氧化的GDF-11片段。在另一方面中，提供了用于改善和/或防止人类皮肤光老化和内在老化迹象(例如减轻皱纹和/或细纹的外观、紧致下垂的皮肤、增厚变薄的皮肤、使肤色均匀、治疗色素沉着过度等)的方法，该方法包括向皮肤(例如，面部皮肤)局部施用一种组合物，该组合物在局部可接受的媒介物中包含一种或多种本发明的GDF-11衍生的肽衍生物。

在阅读了包括说明性实施例和实例的本发明的以下详细描述之后，本发明的这些和其他方面对于本领域技术人员而言将变得显而易见。

附图说明

图1A显示在对照(DMSO)中以按重量计0.001％(10ppm)在体外测定中各种肽或肽衍生物的施用结果。图1B显示在对照(DMSO)中以按重量计0.0005％(5ppm)在体外测定中各种肽或肽衍生物的施用结果。图1C显示在对照(DMSO)中以按重量计0.0001％(1ppm)在体外测定中各种肽或肽衍生物的施用结果。图1D显示在对照(DMSO)中以按重量计0.00001％(0.1ppm)在体外测定中各种肽或肽衍生物的施用结果。

图2显示在以按组合物重量计0.0005％、0.001％或0.01％，施用M(O)₂VV或Ac-M(O)₂VV后所测量的离体测定的HA得分值。标有“**”的列对于未处理的样品和单独施用媒介物(DMSO)的样品是高度显著(p<0.05)的。

图3显示在以按组合物重量计0.0005％、0.001％或0.01％，施用M(O)₂VV或Ac-M(O)₂VV后所测量的离体测定的胶原得分值。标有“**”的列对于未处理的样品和单独施用媒介物的样品是高度显著(p<0.05)的。

具体实施方式

此处披露了本发明的详细实施例；然而，应当理解，所披露的实施例仅仅是能以各种形式实施的本发明的说明。此外，结合本发明的不同实施例给出的每个实例旨在是说明性并且不是限制性的。因此，本文披露的特定结构和功能细节不应被解释为限制性的，而是仅作为教导本领域技术人员以不同方式应用本发明的代表性基础。

本文给出的所有百分数均是指特定组分相对于整个组合物(包括媒介物)的重量百分数，除非另有说明。应当理解，组合物中各组分的所有重量％的总和不超过100％。如果未另行规定成分的量，该成分可以以按重量计0.00001％-90％的量存在。

除非另有规定，本文中使用的所有术语旨在具有其普通含义。短语“生理学上可接受的”、“局部可接受的”和“皮肤病学可接受的”可互换使用，并且旨在指特定组分以所使用的水平施用于人体被(例如皮肤)时通常被认为是安全和无毒的。如在此所使用的术语“预防”包括延缓、减缓或阻止特定皮肤衰老迹象的发生或进展。短语“对其有需要的个体”是指可以从改进的皮肤外观或健康中获益的人(包括男性或女性)。在一些实施例中，对其有需要的个体是女性。术语“皮肤”包括但不限于嘴唇、脸部、手、手臂、颈部、头皮和胸部的皮肤。术语“薄”皮肤包括，但不限于，过早变薄的皮肤，并且可以由皮肤科医生作出如此诊断。在一些实施例中，薄皮肤是60岁以下女性的皮肤；50岁以下女性的皮肤；40岁以下女性的皮肤；和/或绝经前、围绝经期或绝经后女性的皮肤。

如本文所使用的，如从本说明书的阅读可以理解的，术语“基本上由……组成”旨在将本发明限制在指定的材料或步骤以及不会实质上影响要求保护的发明的基本和新特征的那些。

如本文所使用的，烃、烷基、烯基、炔基、芳基、芳基-烷基、烷基-芳基、杂芳基、或任意那些的组合将具有从1至30个碳原子，任选地被O、N、S取代(除非另有说明)。本文所披露的烷基、烯基、和炔基基团中的任一者(除非另有说明)可以是直链的、支链的、和/或环状的。

术语“氨基酸”旨在包括天然存在的氨基酸和非蛋白来源的氨基酸以及非天然存在的氨基酸，并且包括具有能够形成肽键的至少一个羧基基团和至少一个伯胺或仲胺基团的任何小分子(MW<1,000道尔顿)。术语“肽”旨在包括包含通过肽键连接的至少两个氨基酸的任何分子，并且因此包括二肽、三肽、寡肽、和具有由肽键连接的多达约20个连续氨基酸残基的多肽。术语“肽”还包括具有一个或多个不是氨基酸的接头、间隔子或末端基团的结构。其还包括环肽。

术语肽的“衍生物”是指已被化学修饰的化学修饰肽(例如，多肽)，例如，通过例如加工和其他翻译后修饰等自然过程和/或通过例如添加一个或多个聚乙二醇分子、糖类和磷酸盐等化学修饰技术进行化学修饰。该修饰可以发生在肽中的任何位置以产生肽衍生物，所述肽衍生物包括肽主链、氨基酸侧链和氨基和/或羧基末端。在大多数实施例中，本文所述的肽衍生物包含一个或多个经化学修饰的氨基酸残基。该肽衍生物可以在两个或更多个位置具有相同修饰或在两个或更多个位置具有不同修饰。在一些实施例中，除了在氨基或羧基末端的一个或多个修饰之外该肽衍生物还包含一个或多个已被化学修饰的氨基酸残基。修饰包括，例如，乙酰化、酰化、酰胺化、脂质的共价附接、脂肪酸酰基残基的共价附接、交联、环化、二硫键形成、脱甲基、共价交联的形成、羟基化、碘化、甲基化、肉豆蔻酰化、氧化、磷酸化、异戊二烯基化、外消旋化、糖基化、硒酰化或硫酸化。合适的修饰可以发现于，例如Proteins—Structure and Molecular Properties[蛋白质结构和分子性质]第2版,T.E.Crieghton,W.H.Freeman和Company,纽约(1993)，将其通过引用以其全文结合在此。在某些实施例中，该肽衍生物包含经氧化修饰的一个或多个(例如，两个、三个、四个、五个等)氨基酸残基(例如，蛋氨酸、半胱氨酸)。在一些实施方式中，该肽衍生物包含一个或多个(例如，两个、三个、四个、五个等)在氨基和/或羧酸末端通过氧化和乙酰化修饰的氨基酸残基。

肽

该组合物包含一个或多个已衍生化的GDF-11的肽片段。在大多数实施例中，该肽衍生物包含通过氧化修饰的一个或多个氨基酸残基。所述肽包含衍生自生长分化因子11(GDF-11)蛋白质的氨基酸序列、基本上由其组成或由其组成。如在此所使用的，基本上由……组成，旨在指另外的氨基酸可以存在于任一末端，条件是它们不会实质上损害肽的活性。例如，在“基本上由SEQ ID NO 2-3531组成”的肽的实施例中，如果它们的内含物产生对有益活性的可度量的改善(例如，大于50％的减少)，任何额外的氨基酸可以从该肽中排除，这些有益活性包括但不限于，前胶原、胶原、弹性蛋白、纤连蛋白和/或透明质酸的上调。

在一个实施例中，该肽包含衍生自生长分化因子11(GDF-11)前体[智人]的序列的3-11(例如，3、4、5、6、7、8、9、10或11)个连续氨基酸，NCBI参考序列登录号：NP_005802.1，显示于表1(SEQ ID NO:1)。

表1.GDF-11前体[智人]的序列

在一些实施例中，该肽包含表2中列出的3-mer氨基酸序列(SEQ ID NO:2-375)中的任何一个或多个、基本上由其组成、或由其组成。

表2

在一些实施例中，该肽包含表3中列出的4-mer氨基酸序列(SEQ ID NO:376-767)中的任何一个或多个、基本上由其组成、或由其组成。

表3

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在一些实施例中，该活性剂包含肽，该肽包含表4中列出的5-mer氨基酸序列(SEQID NO:768-1161)中的任何一个或多个、基本上由其组成、或由其组成。

表4

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在一些实施例中，该活性剂包含肽，该肽包含表5中列出的6-mer氨基酸序列(SEQID NO:1162-1556)中的任何一个或多个、基本上由其组成、或由其组成。

表5

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在一些实施例中，该活性剂包含肽，该肽包含表6中列出的7-mer氨基酸序列(SEQID NO:1557-1951)中的任何一个或多个、基本上由其组成、或由其组成。

表6

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在一些实施例中，该活性剂包含肽，该肽包含表7中列出的8-mer氨基酸序列(SEQID NO:1952-2346)中的任何一个或多个、基本上由其组成、或由其组成。

表7

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在一些实施例中，该活性剂包含肽，该肽包含表8中列出的9-mer氨基酸序列(SEQID NO:2347-2741)中的任何一个或多个、基本上由其组成、或由其组成。

表8

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在一些实施例中，该活性剂包含肽，该肽包含表9中列出的10-mer氨基酸序列(SEQID NO:2742-3136)中的任何一个或多个、基本上由其组成、或由其组成。

表9

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在一些实施例中，该活性剂包含肽，该肽包含表10中列出的11-mer氨基酸序列(SEQ ID NO:3137-3531)中的任何一个或多个、基本上由其组成、或由其组成。

表10

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在一些实施例中，肽可以包含一个、两个、三个或更多个氨基酸保守取代。如本文所使用的，“保守取代”是其中一个氨基酸取代另一个氨基酸但不损害该肽的功能的取代，包括具有某种特性(例如，酸性、碱性、芳香族、脂肪族不带电荷的、非极性不带电荷的、亲水性不带电荷的)的侧链的氨基酸被具有相同特性的侧链的另一种氨基酸取代。保守取代的实例显示在表11中。在一些实施例中，保守取代通过氧化修饰。例如，在一些实施例中，SEQID NO 2-3531中的脯氨酸残基可以由氧化蛋氨酸(例如，蛋氨酸砜、蛋氨酸亚砜等)或氧化半胱氨酸取代。

表11.保守性取代

在一些实施例中，肽可以包含一个、两个、三个或多个(例如，一个、两个、三个等)非天然和/或非蛋白来源的氨基酸，其被取代或在适当的地方具有SEQ ID NO2-3531中可比较数量的氨基酸。在一些实施例中，本发明的肽可以包含SEQ ID NO 2-3531的修饰变体，其中这些氨基酸中的至少一个被在SEQ ID No 2-3531中发现的天然的“L”光学异构体的“D”(右旋的)类似物取代。在另一个实施例中，根据下文详细描述的式(III)或(IV)，用非天然存在和/或非蛋白来源的氨基酸取代SEQ ID No.2-2531中发现的氨基酸中的至少一种(例如，一种、两种、三种等)。

本发明的肽可以被修饰以改进亲脂性、稳定性、或增强通过角质层的渗透性。在一些实施例中，用脂肪酸链(例如，C_6-22)(例如棕榈酰)修饰肽。在一些实施例中，邻近氨基酸之间的酰胺键中的至少一个氮原子可以被甲基化以改进代谢稳定性。该肽还可以被磷酸化，例如通过形成一个或多个磷酸丝氨酸、磷酸苏氨酸、和/或磷酸酪氨酸残基。

在一些实施例中，经修饰的肽将具有根据式(I)的结构：

R₁-Ω-R₂ (I)

其中Ω表示包含经化学修饰的氨基酸残基(例如，其中一个或多个氨基酸残基已被氧化的SEQ ID 2-3531的肽)的肽且R₁和R₂独立地不存在或选自氢或C_1-26(C_1-6或C_6-12或C_12-18或C_18-22)烃，任选地被基团X₁或1-20个(或1-10或1-6或1-3个)杂原子取代，所述杂原子选自卤素(例如，氟)、氧、氮、磷、硫、硅及其组合(更典型地，氧和氮)。在一些实施例中，R₁和R₂中的一个是C_1-26烃。在一些实施例中，R₁和R₂中只有一个是C_1-26烃。在一些实施例中，R₁和R₂中的一个是C_1-26烃，其选自由以下组成的组：烷基、烯基、炔基、芳基、烷基-芳基(例如，苄基)、和芳基-烷基，其任选地被卤素(例如，氟)、氧、氮、磷、硫及其组合取代，在包含杂原子的各种实施例中(在包含1-10或1-6或1-3个杂原子的各种实施例中)，这些杂原子选自卤素(例如，氟)、氧、氮、磷、硫、及其组合。在一些实施例中，R₁和/或R₂可以包含形式为R-(C＝O)-的基团，其中R是如上所述的C_1-25烃。在某些实施例中，该肽衍生物被N-乙酰化。在一个实施例中，R₁和/或R₂可以包含酰基基团，例如，N-酰化或具有CH₃-(CH₃)n-(C＝O)-形式的酰基基团，其中“n”是从0-25(例如，0或从0-17或7-17)的整数。在某些实施例中，R₁和/或R₂可以包含CH₃-(C＝O)-形式的乙酰基基团。在一些实施例中，该肽衍生物在氨基末端包含乙酰基基团。在一些实施例中，该肽衍生物在羧酸末端包含乙酰基基团。在一个实施例中，R₁和/或R₂可以包含CH₃-(CH₃)₁₄-(C＝O)-形式的棕榈酰基团。R₁和/或R₂可以附接至肽上的氮原子上，以便从而形成Ω-NH-(C＝O)-R形式的酰胺键，该酰胺键例如通过R-(C＝O)-OH形式的酸(或该酸的活化的衍生物)与该肽的N-末端氨基基团上的氮原子或该肽的侧链(例如，赖氨酸)上的氮原子反应来形成。在一些实施例中，R₁和/或R₂可以通过Ω-(C＝O)-NH-R形式的酰胺键附接至肽，该酰胺键例如通过R-NH形式的胺与肽或在包含羧基的侧链上(例如，天冬氨酸或谷氨酸)的羧基末端反应来形成。在一些实施例中，R₁和/或R₂可以通过Ω-(C＝O)-O-R形式的酯键附接至肽，该酯键例如通过R-OH形式的醇与肽或羧基侧链(例如，天冬氨酸或谷氨酸)的羧基末端反应来形成。在一些实施例中，R₁和/或R₂可以通过Ω-O-(C＝O)-R形式的酯键附接至肽，该酯键例如通过R-(C＝O)-OH形式的酸与氨基酸侧链(例如，丝氨酸或苏氨酸)上的羟基基团反应来形成。在酸发生反应的任何情况下，可以首先根据常规实践将酸活化，首先将其转化为酸酐、酰卤化物或活化酯，例如N-羟基琥珀酰亚胺酯等。还预期R₁和/或R₂可以通过Ω-S-(C＝O)-R形式的硫酯键、Ω-S-R形式的硫醚键、Ω-O-R形式的醚键、和Ω-NR^N-R形式的胺(这些仅仅是一些非限制性实例)附接至肽。在各种实施例中，R可以是支链的(例如，乙基己基)、环状的、或直链的。R和R^N可以是但不限于甲基、乙基、丙基、丁基、戊基、己基、庚基、辛基、壬基、癸基、十一烷基、十二烷基、或C₁₃、或C₁₄、或C₁₅、或C₁₆、或C₁₇、或C₁₈、或C₁₉、或C₂₀、或C₂₁、或C₂₂、或C₂₃、或C₂₄、或C₂₅、或C₂₆烷基、烯基或炔基等，在包含从1-10或1-6或1-3个杂原子的各种实施例中，任选地被基团X₁或选自卤素(例如，氟)、氧、氮、磷、硫、硅及其组合的杂原子取代。基团R、R₁、R₂和R^N中的任一者可以进一步被1-3个基团X₁取代，其中X₁在每次出现时独立地选自氢，-F；-Cl；-Br；-I；-OH，-OR*；-NH₂；-NHR*；-N(R*)₂；-N(R*)₃ ⁺；-N(R*)-OH；-N(→O)(R*)₂；-O-N(R*)₂；-N(R*)-O-R*；-N(R*)-N(R*)₂；-C＝N-R*；-N＝C(R*)₂；-C＝N-N(R*)₂；-C(＝NR*)-N(R*)₂；-SH；-SR*；-CN；-NC；-(C＝O)-R*；-CHO；-CO₂H；-CO₂-；-CO₂R*；-(C＝O)-S-R*；-O-(C＝O)-H；-O-(C＝O)-R*；-S-(C＝O)-R*；-(C＝O)-NH₂；-(C＝O)-N(R*)₂；-(C＝O)-NHNH₂；-O-(C＝O)-NHNH₂；-(C＝S)-NH₂；-(C＝S)-N(R*)₂；-N(R*)-CHO；-N(R*)-(C＝O)-R*；-(C＝NR)-O-R*；-O-(C＝NR*)-R*，-SCN；-NCS；-NSO；-SSR*；-N(R*)-C(＝O)-N(R*)₂；-N(R*)-C(＝S)-N(R*)₂；-SO₂-R*；-O-S(＝O)₂-R*；-S(＝O)₂-OR*；-N(R*)-SO₂-R*；-SO₂-N(R*)₂；-O-SO₃-R*；-O-S(＝O)₂-OR*；-O-S(＝O)-OR*；-O-S(＝O)-R*；-S(＝O)-OR*；-S(＝O)-R*；-NO；-NO₂；-NO₃；-O-NO；-O-NO₂；-N₃；-N₂-R*；-N(C₂H₄)；-Si(R*)₃；-CF₃；-O-CF₃；-PR*₂；-O-P(＝O)(OR*)₂；-P(＝O)(OR*)₂；C₁-C₈全氟烷基；脂肪族C₁-C₈烃基团；C₁-C₈芳香族烃基团；或C₁-C₈杂芳基基团。R*是C_1-10烃，例如甲基、乙基、丙基、丁基、戊基、己基、苄基、苯基等。R、R*、R^N、R₁和R₂中任意两个可以一起形成3-8元的，任选地杂环。

在一些实施例中，R₁或R₂共价附接至末端羧基基团。在一些实施例中，R₁和/或R₂附接至末端氨基基团。在一些实施例中，R₁和/或R₂附接至具有氮、氧、或硫原子的侧链。

在一些实施例中，R₁和/或R₂促进与体被的粘附或体被的。在一些实施例中，R₁和/或R₂包含生物素、β-酮酸酯或聚精氨酸序列(例如，具有3-15个精氨酸)。

肽可以被聚乙二醇化以增强水溶解性。在一些实施例中，R₁和/或R₂具有-(OCH₂CH₂)y-Z或-(CH₂CH₂O)y-Z形式，其中“y”是从1-20(或从1-10或呈1-6或从1-3)的整数，并且Z是H、R₃、X₁、或R₄-X₁，其中R₃和R₄独立地是支链的、直链的、或环状的C_1-6烃(例如，甲基、乙基、丙基、亚甲基、-(CH₂)_n-(n＝1-6)等)。在一些实施例中，R₁和/或R₂包含微小-PEG(即，11-氨基-3,6,9-三氧杂十一烷酸)。

在一些实施例中，该修饰肽可以包含单个修饰氨基酸残基。例如，该修饰肽可以具有式(Ia)的结构：

R₁-(Ω₁)_x-Ω_m-(Ω₂)_y-R₂ (Ia)

其中Ω₁和Ω₂独立地不存在(即，其为键)或在每次出现时独立地选自氨基酸残基，并且x和y独立地是从0-10或从1-10的整数(优选地从1-3或1-2)，条件是x和y的和不大于10、不大于6、不大于4或不大于2；以及

Ω_m是修饰的氨基酸残基(例如具有氧化侧链的氨基酸残基)。在某些实施例中，x和y的和是2、3、4、5、6、7、8、9或10。在一些实施例中，Ω₁和Ω₂可以，例如，在每次出现时独立地选自丙氨酸、半胱氨酸、天冬氨酸、谷氨酸、苯丙氨酸、甘氨酸、组氨酸、异亮氨酸、赖氨酸、亮氨酸、甲硫氨酸、天冬酰胺、吡咯赖氨酸、脯氨酸、谷氨酰胺、精氨酸、丝氨酸、苏氨酸、硒代半胱氨酸、缬氨酸、色氨酸、和酪氨酸；并且Ω_m优选地，但不一定为氨基酸的亚砜或砜衍生物。

经修饰的氨基酸残基(例如，Ω_m)可以具有以下结构：

或

其中R_L是氨基酸的修饰的(例如，氧化)侧链。该侧链典型地为C_1-12烃，任选地包含选自O、N和S的从1-4或1-3或1-2或1个杂原子。待氧化氨基酸的侧链可以是丙氨酸、半胱氨酸、天冬氨酸、谷氨酸、苯丙氨酸、甘氨酸、组氨酸、异亮氨酸、赖氨酸、亮氨酸、甲硫氨酸、天冬酰胺、吡咯赖氨酸、脯氨酸、谷氨酰胺、精氨酸、丝氨酸、苏氨酸、硒代半胱氨酸、缬氨酸、色氨酸、或酪氨酸的侧链。例如，该侧链可以是表12中的任何侧链。

表12

/>

应当理解，在表12中所描述的侧链与所指示的氨基酸的侧链之间存在任何不一致的情况下，在修饰之前的可能的侧链的范围内，二者均将被考虑。在一些实施例中，该侧链是Cys、Met、Phe、Tyr、Trp、Asp、Glu、Asn、Gln、His、或Lys的侧链。该化学修饰可以产生一次或多次被基团X₁取代的侧链，所述基团X₁在每次出现时独立地选自氢，-F；-Cl；-Br；-I；-OH，-OR*；-NH₂；-NHR*；-N(R*)₂；-N(R*)₃ ⁺；-N(R*)-OH；-N(→O)(R*)₂；-O-N(R*)₂；-N(R*)-O-R*；-N(R*)-N(R*)₂；-C＝N-R*；-N＝C(R*)₂；-C＝N-N(R*)₂；-C(＝NR*)-N(R*)₂；-SH；-SR*；-CN；-NC；-(C＝O)-R*；-CHO；-CO₂H；-CO₂-；-CO₂R*；-(C＝O)-S-R*；-O-(C＝O)-H；-O-(C＝O)-R*；-S-(C＝O)-R*；-(C＝O)-NH₂；-(C＝O)-N(R*)₂；-(C＝O)-NHNH₂；-O-(C＝O)-NHNH₂；-(C＝S)-NH₂；-(C＝S)-N(R*)₂；-N(R*)-CHO；-N(R*)-(C＝O)-R*；-(C＝NR)-O-R*；-O-(C＝NR*)-R*，-SCN；-NCS；-NSO；-SSR*；-N(R*)-C(＝O)-N(R*)₂；-N(R*)-C(＝S)-N(R*)₂；-SO₂-R*；-O-S(＝O)₂-R*；-S(＝O)₂-OR*；-N(R*)-SO₂-R*；-SO₂-N(R*)₂；-O-SO₃-R*；-O-S(＝O)₂-OR*；-O-S(＝O)-OR*；-O-S(＝O)-R*；-S(＝O)-OR*；-S(＝O)-R*；-NO；-NO₂；-NO₃；-O-NO；-O-NO₂；-N₃；-N₂-R*；-N(C₂H₄)；-Si(R*)₃；-CF₃；-O-CF₃；-PR*₂；-O-P(＝O)(OR*)₂；-P(＝O)(OR*)₂；C₁-C₈全氟烷基；脂肪族C₁-C₈烃基团；C₁-C₈芳香族烃基团；或C₁-C₈杂芳基基团；

其中R*是C_1-10烃。在一些实施例中，该侧链被一个或多个氧原子取代，例如，＝O、-OH、或→O。由此产生的氧化侧链可以包含例如砜、亚砜、硝基、亚硝基和/或氧代基团等。例如，该侧链可以是氧化蛋氨酸侧链，其中R_L可以选自：

化学修饰肽Ω可以通过根据式(II)将一种或多种附加氨基酸并入SEQ ID NO:2-3531的一端或两端来进行修饰以改善稳定性或功能：

Ψ₁-Φ-Ψ₂ (II)

其中Φ表示本发明的肽衍生物(例如，包含SEQ ID NO:2-3531中任一者的氨基酸序列的衍生物)并且Ψ₁和Ψ₂独立地不存在或选自氢、氨基酸、非天然的氨基酸、非蛋白来源的氨基酸、二肽或三肽或其组合。合适的氨基酸包括但不限于丙氨酸、半胱氨酸、天冬氨酸、谷氨酸、苯丙氨酸、甘氨酸、组氨酸、异亮氨酸、赖氨酸、亮氨酸、甲硫氨酸、天冬酰胺、吡咯赖氨酸、脯氨酸、谷氨酰胺、精氨酸、丝氨酸、苏氨酸、硒代半胱氨酸、缬氨酸、色氨酸、和酪氨酸。上述的每一种(甘氨酸除外)可以呈“L”或“D”光学异构体构型。非天然的氨基酸或非蛋白来源的氨基酸可以是，例如，天然存在的L-氨基酸的右旋“D”光学异构体。非天然的氨基酸或非蛋白来源的氨基酸可以，例如，具有式(III)或(IV)的结构：

其中X选自X₁、C_1-26(C_1-6或C_6-12或C_12-18或C_18-22)烃，任选地被基团X₁或被从1-20个(或1-10或1-6或1-3个)杂原子取代，这些杂原子选自卤素(例如，氟、氯、溴、碘)、氧、氮、磷、硫、硅、及其组合。在一些实施例中，X是乙基、丙基、丁基、戊基、己基、庚基、辛基、壬基、癸基、十一烷基、十二烷基。在一些实施例中，X是C_1-12或C₂₆烷基、烯基、炔基、芳基、芳基-烷基、烷基-芳基、烷基-芳基-烷基、杂芳基、烷基-杂芳基、杂芳基-烷基、烷基-杂芳基-烷基等，任选地被X₁或被1-20个(或1-10或1-6或1-3个)杂原子取代，这些杂原子选自卤素(例如，氟)、氧、氮、磷、硫、及其组合。在一些实施例中，X包含具有两个、三个、或更多个5-或6-元环的稠环系统。L₁是包含从1-20个碳原子的烃间隔子，并且任选地被基团X₁或被从1-20个(或1-10或1-6或1-3个)杂原子取代，这些杂原子选自卤素(例如，氟、氯、溴、碘)、氧、氮、磷、硫、硅、及其组合。在一些实施例中，L₁将具有-(CH₃)p-形式，其中“p”是从1-20或从1-10或从1-6的整数。在一些实施例中，L₁将包含从1个至6个氧代或氧杂基团。在一个实施例中，具有式(IV)的氨基酸是氨基乙酸、氨基丙酸、氨基丁酸、氨基戊酸、氨基己酸、氨基庚酸、氨基辛酸、氨基壬酸、或氨基癸酸。在一个实施例中，Ψ₁和/或Ψ₂包含赖氨酰-氨基戊酸或氨基戊酸-赖氨酰。在一些实施例中，任一末端可以用H₂N-(CH₂)_q-CO₂H形式的氨基酸官能化，其中“q”是从1-10的整数，包括氨基戊酸。在一些实施例中，通过肽键在任一末端添加赖氨酸-氨基戊酸基团。在一些实施例中，Ψ₁和/或Ψ₂包含具有2-16或2-8或2-6或2-4个氨基酸的低聚物，例如，天然存在的氨基酸。肽衍生物也可以被环化。

式(II)的肽可以根据式(I)进一步修饰，使其具有式(V)的形式：

R₁-Ψ₁-Φ-Ψ₂-R₂ (V)

其中，R₁、R₂、Ψ₁和Ψ₂中的任一者可以不存在，但如上另有定义。

衍生肽可以具有通过肽键连接到氨基和/或羧基末端的一个或多个另外的氨基酸。例如，聚精氨酸(n＝2-15)可以有益地用于增强肽渗透进皮肤。在一些实施例中，肽将在氨基和/或羧基末端包括烃链，包括但不限于可以是直链或支链或环状的C_1-24、或C_6-18、或C_12-18脂肪烃。在一些实施例中，肽包括肽与脂肪酸或脂肪醇的反应产物。如本文所使用的，脂肪酸或醇包含6-26个碳原子。例如，N末端可以与C_6-24脂肪酸(例如棕榈酸)反应以形成酰胺键。羧基末端可与C_6-24脂肪醇(例如鲸蜡醇)反应以形成酯。这些脂肪衍生物可以改进肽的亲油性。

肽衍生物的局部可接受的盐和前药也是合适的。盐典型地是通过肽衍生物与无机或有机酸反应形成的酸加成盐。无机酸包括矿物酸如HCl和H₂SO₄等。有机酸包括柠檬酸、苯甲酸、酒石酸、苹果酸、马来酸、琥珀酸、乙酸、和丙酸。肽可以呈两性离子形式存在。前药包括在体内水解产生肽的任何酯或酰胺。合适的前药的实例可以在威利出版公司(WILEY-VCHVerlag&Co)出版的标题为“Prodrugs and Targeted Delivery:Towards Better ADMEProperties,[前药和靶向递送：达到更好的ADME特性]”的书的第47卷(2011)中找到，将该文献以其全文通过引用结合在此。在一个实施例中，前药通过使肽与乙醛酸反应而形成，以产生具有改进的稳定性的肽基-α-羟基甘氨酸衍生物。在其他实施例中，前药可以包括其N-末端和/或侧链的末端N-乙酰基衍生物、侧链N-乙酰基衍生物、N-羟基甲基化或N-苯酞化。

该活性剂可以包含具有氨基酸序列SEQ ID NO:2-3531的肽或其衍生物，其中所述序列的一个或多个氨基酸残基被氧化。在一些实施例中，该活性剂可以具有以下结构：

其中n是1或2；

R₁是氢或基团R*-(C＝O)-；

R₂是氢或R*；以及

R*在每次出现时独立地选自任选地含有1-8个杂原子的C_1-20烃。在一些实施例中，该肽衍生物可以具有以下结构：

其中R₁和R₂如上所定义。在一些实施例中，R₂是氢。在一些实施例中，R₁是酰基(例如，C₁-C₂₀酰基，例如乙酰基、乙酰乙基、棕榈酰、油酰基、肉豆蔻基等)。

使用例如常规保护和活化化学来制备和衍生肽是在本领域的技术之内。典型地，用可除去的氨基保护基团保护第一氨基酸的氨基官能度，并用可除去的羧基保护基团保护第二氨基酸的羧基官能度。合适的胺保护基团包括但不限于苯甲酰氧基羰基(Cbz)、叔丁氧基羰基(t-Boc)和9-芴基甲氧基羰基(FMOC)。可以通过形成酸或碱不稳定酯如甲基、乙基、苄基或三甲基甲硅烷基酯来保护羧基基团。保护后，第一和第二氨基酸在合适的溶剂如水或DMF中，在原位活化剂如N,N′-二环己基碳二亚胺(DCCI)、二异丙基碳二亚胺(DIPCDI)或1-乙基-3-(3′-二甲基氨基丙基)碳二亚胺(EDCI)的存在下发生反应，以实现肽键形成。将任一氨基酸的侧链上的反应性部分用保护基团保护，这些保护基团是例如针对OH和SH的叔丁基或苄基；针对羧基基团的甲基、乙基、叔丁基或苄基，以及针对Arg的—NHC(NH₂)═NH官能度的2,2,5,7,8-五甲基色满-6-磺酰基。偶联反应后，在不除去第二氨基酸的羧基保护基团的条件下通过酸水解实现第一氨基酸的氨基基团的选择性脱保护。用另外的氨基保护的氨基酸重复该过程。固相合成，如众所周知的梅里菲尔德(Merrifield)方法，对于合成本发明的肽是特别有用的。赖氨酸-氨基戊酸(K-Ava)衍生物描述于美国专利号8,551,956中，其披露内容通过引用结合在此。

局部用组合物

本发明的局部用组合物可以包含活性剂，所述活性剂包含具有氨基酸序列SEQ IDNO:2-3531的肽或其衍生物，其中所述序列的一个或多个氨基酸残基被氧化。在一些实施例中，该活性剂可以具有以下结构：

其中n是1或2；

R₁是氢或基团R*-(C＝O)-；

R₂是氢或R*；以及

其中R₁和R₂如上所定义。在一些实施例中，R₂是氢。在一些实施例中，R₁是酰基(例如，C₁-C₂₀酰基，例如乙酰基、乙酰乙基、棕榈酰、油酰基、肉豆蔻基等)。该活性剂可以以有效量为，例如0.00001％-20％存在。

根据本发明的组合物可以以多种形式配制用于局部施用，并且典型地包括按重量计约0.000001％至按重量计约20％的肽衍生物。更典型地，该组合物将包含组合物的按重量计从约0.00001％的肽衍生物至按重量计约10％的肽衍生物，并且更优选地从按重量计约0.00001％至按重量计约5％的肽衍生物。在一个实施例中，活性肽或其片段或衍生物将包含组合物的按重量计从约0.001％至按重量计约1％，或按重量计从约0.001％或至按重量计约0.1％。在一些实施例中，该组合物将包含按组合物重量计约0.000001％-0.1％(例如，约0.00001％-0.1％、0.00001％-0.01％等)的肽衍生物。该组合物可以包含有效量的肽衍生物，其是指足以刺激皮肤中胶原和/或透明质酸的产生的量(例如，按重量计从约0.000001％至约20％的肽衍生物)。在其他实施例中，当每天局部施用于给定的皮肤区域持续至少八周的时间时，肽或其衍生物的量足以减轻给定皮肤区域的皮肤病学的衰老迹象的外观。

该肽衍生物(例如，包含SEQ ID NO:2-3531中的任一者，其中一个或多个氨基酸残基被氧化)可以在生理上可接受的媒介物或载体中提供。该媒介物可以是疏水性的或亲水性的。合适的疏水性载体包括例如通常用于化妆品中的蜡状非离子物质，如脂肪醇和脂肪酸的酯和醚，其中碳链长度为从C₄至C₂₂，典型地从C₈至C₁₈，或从C₁₂至C₁₈。

脂肪疏水性载体的实例包括肉豆蔻酸异丙酯、棕榈酸异丙酯、棕榈酸辛酯、羊毛酸异丙酯、乙酰化羊毛醇、C₁₂-C₁₅醇的苯甲酸酯、辛酸鲸蜡硬脂酸酯、棕榈酸鲸蜡酯、肉豆蔻酸肉豆蔻酯、乳酸肉豆蔻酯、乙酸鲸蜡醇酯、丙二醇二辛酸酯/癸酸酯、油酸癸酯、乙酰化羊毛脂、硬脂醇庚酸酯、苹果酸二异硬脂醇酯、羟基硬脂酸辛酯、羟基硬脂酸辛酯、异硬脂酸异丙酯等。

合适的亲水性载体可以包括例如水、低级醇(C_1-6)(例如乙醇、乙醇和水的混合物)、经常用于化妆品的二醇和烷氧基化二醇，这些二醇和烷氧基化二醇包括乙二醇、二乙二醇、三乙二醇、丙二醇、二丙二醇等。

局部可接受的媒介物可以处于乳液的形式。合适的乳液的非限制性实例包括油包水乳液，水包油乳液，水包硅酮乳液，硅酮包水乳液，水包蜡乳液，水-油-水三重乳液或具有奶油、凝胶或微乳液的外观的类似物。如在此所用的，术语“油”包括硅酮，除非另有说明。乳液可以包括乳化剂，如非离子、阴离子或两性表面活性剂，或胶凝剂，典型地以按重量计从约0.001％至约5％的量。

局部可接受的媒介物可以包括水；植物油；矿物油；酯类油；醚如二辛醚和二甲基异山梨醇；醇如乙醇和异丙醇；脂肪醇如鲸蜡醇、鲸蜡硬脂醇、硬脂醇和山嵛醇；异链烷烃如异辛烷、异十二烷(IDD)和异十六烷；硅油如环甲聚硅氧烷、二甲聚硅氧烷、二甲聚硅氧烷交联聚合物、聚硅氧烷及其衍生物，包括PDMS、二甲聚硅氧烷聚多元醇、二甲聚硅氧烷醇和氨基二甲基聚硅氧烷醇；烃油如矿物油、凡士林、异二十烷和聚烯烃，例如(氢化)聚异丁烯；多元醇如丙二醇，甘油，丁二醇，戊二醇，己二醇，辛乙二醇；蜡如蜂蜡、棕榈蜡、地蜡、微晶蜡、聚乙烯蜡和植物蜡；或上述的任何组合或混合物。水性媒介物可以包括与水混溶的一种或多种溶剂，包括低级醇，如乙醇、异丙醇等。该媒介物可以包括按组合物重量计从约50％至约99％。在一些实施例中，这些组合物是无水的。

在本发明的一个实施例中，组合物可以包括一种或多种另外的皮肤活性物质，包括但不限于类视黄醇、植物成分、角质层分离剂、脱屑剂、角质形成细胞增殖增强剂、胶原酶抑制剂、弹性蛋白酶抑制剂、脱色剂、抗炎剂、类固醇、抗痤疮剂、抗氧化剂和高级糖基化终产物(AGE)抑制剂，仅举几例。这些各种成分的量是化妆品领域中常规使用以达到其预期目的的那些，并且范围典型地为(单独地或总体地)按组合物重量计从约0.001wt％至约20wt％。这些成分的性质及其量必须与本披露的组合物的生产和功能相一致。

示例性的抗衰老组分包括但不限于：植物成分(例如，胶虫树(Butea frondosa)提取物、三药香料藤(Tiliacora triandra)提取物、马齿苋、Melicope elleryana等)；植醇；植酸；类视黄醇；羟基酸(包括α-羟基酸和β-羟基酸)，水杨酸和水杨酸烷基酯；去角质剂(例如，乙醇酸、3,6,9-三噁十一烷二酸等)，雌激素合成酶刺激化合物(例如，咖啡因和衍生物)；能够抑制5α-还原酶活性的化合物(例如，亚麻酸、亚油酸、非那雄胺、及其混合物)；和阻隔功能增强剂(例如，神经酰胺、甘油酯、胆固醇及其酯、α-羟基和ω-羟基脂肪酸及其酯等)，仅举几例。

示例性类视黄醇包括但不限于：视黄酸(例如，全反式、或9-顺式、或13-顺式)，及其衍生物(视黄醛、视黄醇(维生素A)及其酯(如棕榈酸视黄酯、乙酸视黄酯、和丙酸视黄酯)、及其盐)。可具体提及的是视黄醇。当存在时，典型地以如下量包括类视黄醇：按重量计从约0.0001％至约5％、更典型地按重量计从约0.01％至约2.5％、或按重量计从约0.1％至约1.0％。根据该实施例的组合物典型地将包括有效稳定类视黄醇的量(例如，0.0001％-5％)的抗氧化剂，如抗坏血酸和/或BHT和/或螯合剂(如EDTA或其盐(例如，EDTA二钠))。组合物可以包括按重量计从0.001％-10％的植醇。

在另一个实施例中，本发明的局部用组合物还可以包括以下各项中的一种或多种：皮肤渗透增强剂；柔润剂，如肉豆蔻酸异丙酯、凡士林、挥发性或非挥发性硅油(例如，甲基聚硅氧烷、二甲聚硅氧烷)、酯油、矿物油和脂肪酸酯；保湿剂，如甘油、己二醇或辛乙二醇；皮肤丰满剂，如棕榈酰寡肽、胶原、胶原和/或糖胺聚糖(GAG)增强剂；去角质剂；和抗氧化剂。

合适的去角质剂包括例如α-羟基酸，β-羟基酸，氧杂酸，氧杂二酸及其衍生物，如其酯、酸酐及盐。合适的羟基酸包括例如乙醇酸、乳酸、苹果酸、酒石酸、柠檬酸、2-羟基链烷酸、扁桃酸、水杨酸及其衍生物。一种示例性的去角质剂是乙醇酸。当存在时，可以包含按组合物重量计从约0.001％至约20％的去角质剂。

可用于本发明组合物中的抗氧化剂的实例包括具有酚羟基官能团的化合物，如抗坏血酸及其衍生物/酯；β-胡萝卜素；儿茶素；姜黄素；阿魏酸衍生物(例如，阿魏酸乙酯，阿魏酸钠)；没食子酸衍生物(例如，没食子酸丙酯)；番茄红素；还原酸；迷迭香酸；丹宁酸；四氢姜黄素；生育酚及其衍生物，包括生育酚乙酸酯；尿酸；或其任何混合物。其他合适的抗氧化剂是具有还原或非还原形式的一种或多种硫醇官能团(-SH)的那些，如谷胱甘肽、硫辛酸、巯基乙酸和其他巯基化合物。抗氧化剂可以是无机的，如亚硫酸氢盐、偏亚硫酸氢盐、亚硫酸盐或其他包含硫的无机盐和酸。在一个实施例中，组合物包括硫代二丙酸或者其单酯或二酯(例如二月桂基硫代二丙酸)。抗氧化剂可以单独地或总体地构成组合物的总重量的从约0.001％至约10％(w/w)，或从约0.01％至约5％(w/w)。

其他添加剂包括：维生素，例如生育酚和抗坏血酸；维生素衍生物例如抗坏血酸单棕榈酸酯、生育酚乙酸酯和维生素E棕榈酸酯；增稠剂，如羟烷基纤维素、羧甲基纤维素、卡波姆(carbomber)和植物树胶，如黄原胶；胶凝剂，如酯-终止的聚酯酰胺；结构化剂；金属螯合剂如EDTA或其盐；填料和粉末、着色剂、pH调节剂(柠檬酸、乙醇胺、氢氧化钠等)；成膜剂、保湿剂、矿物质、粘度和/或流变调节剂、抗痤疮剂、抗发炎剂、脱色剂、药物试剂、表面活性剂、植物性治疗剂、防晒剂、驱虫剂、皮肤清凉化合物、皮肤保护剂、调节剂、润滑剂、芳香剂、赋形剂、防腐剂、稳定剂、乳化剂、及其混合物。上述物质可以单独地或总体地构成按组合物重量计从约0.0001％至约20％。

关于这些和其他合适的化妆品成分的细节可以在以下文献中找到：“International Cosmetic Ingredient Dictionary and Handbook[国际化妆品成分词典和手册]”，第10版(2004)，由Cosmetic,Toiletry,and Fragrance Association(CTFA)[化妆品、化妆用具和香料协会]出版，在第2177-2299页，将其以其全文通过引用结合在此。这些不同底物的量是常规用于化妆品或医药领域的那些量，例如，它们可以单独地或集合地构成组合物的总重量的从约0.01％至约20％。

可以包括防晒剂以保护皮肤免受紫外线的损害。防晒剂可以通过使用单一防晒剂或防晒剂的组合来提供UVA和UVB两者的保护。可以用于本发明组合物中的防晒剂是阿伏苯宗、肉桂酸衍生物(如辛基甲氧基肉桂酸酯)、辛基水杨酸酯、胡莫柳酯、氧苯酮、氰双苯丙烯酸辛酯、二氧化钛、氧化锌、或其任何混合物。防晒剂可以按组合物总重量的从约1wt％至约30wt％存在。

在一个实施例中，局部用组合物具有从1至13的pH范围，其中在从2至12范围内的pH是典型的。在一些实施例中，该组合物具有范围从3.5至7或从7-10.5的pH。在一些实施例中，pH将在3-4、或4-5、或5-6、或6-7、或7-8、或8-9、或9-10、或10-11、或11-12的范围内。可以添加适合的pH调节剂(如氢氧化钠、柠檬酸和三乙醇胺)以使pH在所期望的范围内。

本披露的另一个实施例涉及通过使用靶向递送系统，例如脂质体、微球体(参见Unger等人的美国专利号5,770,222)等递送所描述的组合物，这样使得组分和/或活性成分可以更容易地达到并影响施用区域的皮下层，例如面部或颈部、或皮肤的其他区域。

可以将组合物配制成各种产品形式，例如像洗剂、面霜、精华液、喷雾剂、气雾剂、饼状产品、软膏、精华、凝胶、膏状产品、贴片、笔状产品、小湿纸巾、面膜、棒状产品、泡沫、全效精华(elixir)，浓缩精华(concentrate)等，特别用于局部给予。典型地将组合物配制成洗剂、霜剂、软膏剂、浆液或凝胶。

处理方法

本发明还提供了一种用于改善和/或预防人皮肤光衰老和内在衰老迹象的方法，该方法包括局部施用本发明的组合物。本发明的组合物优选每天一次或两次施用于受影响的皮肤区域，持续必要长的时间，以实现所希望的抗衰老结果的时间。在一个实施例中，将本发明的组合物以从约0.001至约100mg/cm²、更典型地从约0.01至约20mg/cm²或从约0.1至约10mg/cm²的量施用于皮肤。

在一些实施例中，提供了用于增强人皮肤中前胶原、胶原和/或HA的产生的方法，所述方法包括向对其有需要的皮肤区域(例如，下垂的皮肤、变薄的皮肤、具有皱纹和细纹的皮肤等)局部施用局部用组合物，所述局部用组合物包含局部可接受的媒介物和有效量的肽衍生物(例如，包含SEQ ID NO:2-3531中任一者的肽，其中SEQ ID NO 2-3531的一个或多个氨基酸残基例如通过氧化以进行化学修饰)，持续足以增加真皮中的前胶原、胶原和/或HA水平的时间。处理可以是每天至少一次或两次，并且可以持续至少四周，典型地至少八周、十二周或更长时间。

在本发明的另一个方面，将组合物局部施用以改进人皮肤的美学外观。该方法包括向对其有需要的皮肤区域局部施用包含有效量的肽衍生物(例如，包含SEQ ID NO:2-3531中任一者的肽，其中SEQ ID NO 2-3531的一个或多个氨基酸残基例如通过氧化以进行化学修饰)的组合物，持续足以改进所述人皮肤美学外观的时间。组合物可以任选地进一步包含类视黄醇(例如，从0.0001％-5％)和/或α-羟基酸(例如，乙醇酸)(例如，从0.0001％-25％)和/或β-羟基酸(例如，水杨酸或衍生物)(例如，从0.0001％-15％)。

人皮肤美学外观的改进可以是皮肤任意特质或特征的改进，包括但不限于：

(a)处理、减轻、和/或预防细纹或皱纹；

(b)减小皮肤孔隙大小；

(c)改善皮肤厚度、饱满度、和/或紧致度；

(d)改善皮肤光滑度、柔软度和/或细嫩度；

(e)改善肤色、光泽度和/或透明度；

(f)改善前胶原蛋白、和/或胶原蛋白产生；

(g)改善弹性蛋白的维持和重塑；

(h)皮肤纹理的改善和/或促进再纹理化；

(i)改善皮肤屏障修复和/或功能；

(j)改善皮肤轮廓外观；

(k)恢复皮肤光泽和/或亮度；

(l)补充皮肤中必需营养素和/或成分；

(m)改善由衰老和/或绝经降低的皮肤外观；

(n)改善皮肤保湿；

(o)增加皮肤弹性和/或回弹性；

(p)处理、减少和/或预防皮肤下垂；

(q)改善皮肤紧致度；以及

(r)减少色斑和/或斑驳皮肤；以及

(s)改善通过光衍射或反射的皮肤的光学性质。

如本文所使用的，“美学改进”可以通过皮肤科医师小组或由本领域已知的其他客观测量对之前和之后的照片进行评价来量度。

在相关的实施方案中，提供了一种用于处理人皮肤(典型地，脸部皮肤)上的皱纹和/或细纹的方法，该方法包括向对其有需要的皮肤区域局部施用(例如，施用于皱纹或细纹)包含肽衍生物(例如，包含SEQ ID NO:2-3531中任一者的肽，其中SEQ ID NO 2-3531的一个或多个氨基酸残基例如通过氧化进行化学修饰)的组合物，持续足以减少所述皱纹和/或细纹的可见度、数量、或深度的时间。处理可以是至少每天一次或两次，并且可以持续至少四周，典型地至少八周、十二周或更长时间。组合物可以任选地进一步包含有效改进皮肤外观的量的类视黄醇(例如，视黄醇或棕榈酸视黄酯)和/或α-羟基酸(例如，乙醇酸)和/或β-羟基酸(例如，水杨酸或衍生物)。在一些实施例中，这些方法降低人皮肤上皱纹或细纹的严重性、减少皱纹或细纹的数量、或阻止或预防皱纹或细纹的出现。可以将组合物局部施用于对其有需要的皮肤区域(例如，直接地施用于有皱纹的皮肤上)，其中有效量(例如，按重量计0.000001％-1％，w/w)的肽衍生物(例如，包含SEQ ID NO:2-3531中任一者的肽，其中SEQ ID NO 2-3531的一个或多个氨基酸残基例如通过氧化进行化学修饰)与有效量(例如，按重量计0.01％-5％，w/w)的视黄醇和/或有效量(例如，按重量计0.001％-20％，w/w)的α-羟基酸(例如，乙醇酸)和/或β-羟基酸(例如，水杨酸)组合。可以定性评价组合物对细纹和皱纹的形成或外观的效果，例如通过视觉检查；或定量评价，例如通过显微镜或计算机辅助的皱纹形态测量(例如，每单位皮肤面积上的皱纹数量、深度、长度、面积、体积和/或宽度)。

将典型地处于生理学上可接受的媒介物中的包含肽衍生物(例如，包含SEQ IDNO:2-3531中任一者的肽，其中SEQ ID NO 2-3531的一个或多个氨基酸残基例如通过氧化进行化学修饰)的组合物在受影响的皮肤区域上局部施用可以缓解、逆转、减轻、改善、或预防衰老的皮肤病学迹象。通常，皮肤病症和/或外观的改进选自下组，该组由以下组成：减少时间性老化、光老化、激素性老化和/或光化性老化的皮肤病学迹象；预防和/或减少纹和/或皱纹的外观；降低面部纹和皱纹、面颊、前额上的面部皱纹、眼睛之间的垂直皱纹、眼睛上方和嘴周围的水平皱纹、木偶纹，和特别是深度皱纹或褶皱的明显性；改进眶下纹和/或眶周纹的外观；减少眼角鱼尾纹的外观；复原和/或新生皮肤，特别是衰老皮肤；降低皮肤脆性；预防和/或逆转糖胺聚糖和/或胶原蛋白的损失；改善雌激素不平衡的影响；防止皮肤萎缩；预防、减少和/或处理色素沉着过多或色素减退；使皮肤变色最小化；改进肤色、光泽度、透明度和/或紧致度；防止、减少和/或改善皮肤下垂；改进皮肤紧致度、饱满度、柔软度和/或细嫩度；改进前胶原蛋白、和/或胶原蛋白生产；改进皮肤纹理和/或促进再纹理化；改进皮肤屏障修复和/或功能；改进皮肤轮廓外观；恢复皮肤光泽和/或亮度；使疲劳和/或应激的皮肤病学迹象最小化；抵抗环境应激；补充由衰老和/或绝经降低的皮肤中的成分；改进皮肤细胞间通讯；增加细胞增殖和/或繁殖；增加由衰老和/或绝经降低的皮肤细胞代谢；延缓细胞衰老；改进皮肤保湿；增强皮肤厚度；减缓或停止皮肤变薄；增加皮肤弹性和/或回弹性；增强表皮脱落；改进微循环；减少和/或预防脂肪团形成；及其任何组合。在一些实施例中，上述每一项与女性皮肤相关。

还预期了通过将包含活性肽衍生物(例如，包含SEQ ID NO:2-3531中任一者的肽，其中SEQ ID NO 2-3531的一个或多个氨基酸残基例如通过氧化进行化学修饰)的组合物局部施用于对其有需要的个体的薄皮肤，本发明的组合物对于处理薄皮肤是有用的。“薄皮肤”旨在包括由于自然衰老、绝经或光损伤而变薄的皮肤以及过早变薄的皮肤。在一些实施例中，处理用于男性中的薄皮肤，而其他实施例处理绝经前或绝经后女性中的薄皮肤，因为据信皮肤在男性和女性(并且特别是在不同生活阶段的女性)中随着年龄不同程度地变薄。

本发明的方法可以预防性地用于阻止衰老，包括在未显现出皮肤衰老迹象的个体中，最常见在25岁以下的个体中。一旦显现出，如在25岁以上的个体中常见的，该方法还可以逆转或处理衰老迹象，或用于减缓这些个体的皮肤病衰老进展。

在一个实施例中，将包含活性肽衍生物(例如，包含SEQ ID NO:2-3531中任一者的肽，其中SEQ ID NO 2-3531的一个或多个氨基酸残基例如通过氧化进行化学修饰)的本发明的组合物施用于人皮肤以减少皮脂产生或改进受脂肪团影响的皮肤的外观和/或减少不希望的脂肪生成或增加脂肪分解。在本实施例中，本发明的肽可以在局部可接受的媒介物中配制(如本文所述)，并且可以包括一种或多种另外的试剂，如抗痤疮成分(例如，水杨酸、过氧化苯甲酰和其他过氧化物、硫、类视黄醇等)，在面部组合物的情况下，或在脂肪团处理的情况下，配置品可以包括适用于处理脂肪团的任何成分，包括但不限于紫苏油以及其他不饱和脂肪油和ω-3脂肪酸，如α-亚麻酸；咖啡因；茶碱；黄嘌呤；类视黄醇(例如，视黄醇)；等。根据本发明的脂肪团处理典型地将局部施用于患有脂肪团的皮肤(包括臀部和大腿皮肤)持续足以改善其外观的时间段，包括，例如每日处理，持续至少4周、至少8周、至少12周或更长时间。在一个实施例中，局部施用组合物以处理痤疮。

在某些实施例中，包含活性肽衍生物(例如，包含SEQ ID NO:2-3531中任一者的肽，其中SEQ ID NO 2-3531的一个或多个氨基酸残基例如通过氧化进行化学修饰)的本文所述的组合物可以用于处理和/或预防皮肤和/或毛发的色素沉着过度，例如，使皮肤或毛发增亮。在一些实施例中，将组合物局部施用于皮肤或毛发，例如施用于色素沉着过度的皮肤或毛发的区域。色素沉着过度包括个体的皮肤或毛发的任何着色，其比个体所希望的更暗，并且由黑素细胞引起。皮肤色素沉着过度区域包括分散或斑驳的色素沉着过度区域。离散的色素沉着过度区域可以是不同的、颜色较深的均匀区域，并且可能在皮肤上显示为褐斑或雀斑，包括通常称为色斑或“老年斑”的痕迹。皮肤斑驳的色素沉着过度区域可以是深色斑点，其在大小上大于分散色素沉着区域并且在形状上比分散色素沉着区域更不规则。色素沉着过度区域还包括晒黑的皮肤区域，例如因暴露于UV而晒黑的皮肤。色素沉着过度毛发包括颜色比期望的深的任意毛发色度。

处理色素沉着过度或色素沉着过度的皮肤/毛发是指根除、减轻、改善或逆转与色素沉着过度相关的不希望的一个或多个特性，如在受影响区域产生可感觉到的皮肤或毛发增亮。增亮皮肤的色素沉着过度区域在以下方面可能是有效的：减轻老年斑；增亮晒黑；使肤色均匀或优化肤色，例如，在斑驳的色素沉着过度区域中；处理黑斑和黄褐斑斑块、雀斑、烧伤后瘢痕和损伤后色素沉着过度。预防色素沉着过度或色素沉着过度的皮肤是指向尚未受色素沉着过度影响的皮肤提供使其避免、延迟、预先阻止或最小化与皮肤色素沉着过度相关的一个或多个不希望的特性的益处，如减少最终形成的色素沉着过度的区域的暗色或大小。

在一些实施例中，将本发明的组合物以轮流、交替、或顺序的处理方案使用，所述方案包括局部施用本发明的组合物持续第一时间段(例如，每天至少一次，持续至少一天)，随后进行第二时间段，在该第二时间段中将至少一种另外的处理模式在所述第一段时间后额外施用至少一天。第二种处理模式可以包括局部施用以下任何皮肤有益药剂，例如类视黄醇(例如，视黄醇)；植醇；抗氧化剂(例如，抗坏血酸或TDPA或其酯)；植物性治疗剂(例如三药香料藤(Tiliacora triandra)、烟酰胺、维生素(例如维生素E和维生素E乙酸酯)、水杨酸、水杨酸酯及其衍生物、保湿剂、润肤剂等。

在另一个实施例中，该肽衍生物(例如，包含SEQ ID NO:2-3531中任一者的肽，其中SEQ ID NO 2-3531的一个或多个氨基酸残基例如通过氧化进行化学修饰)可以旨在用于口服使用，包括用于药物用途。药物配置品将包括药学上可接受的载体(即稀释剂和赋形剂)。药物组合物可以包括在固体剂型中，包括压制的片剂和胶囊剂，或处于液体或粉末形式(包括适于与水重构的肽的冻干粉末)。药物组合物还可以处于霜剂、浆液等的形式，或被配制用于注射。药物剂型典型地将包括从约0.1mg至约200mg、或从约1mg至约100mg的本发明的肽。固体剂型可以是立即释放的，在这种情况下，它们典型地将包括水溶性或可分散的载体，如微晶纤维素、甘露醇、羟丙基甲基纤维素、PVP等，或者可以是延迟、维持或改进释放的，在这种情况下，它们可以包括单独的或与水溶性或可分散聚合物组合的水不溶性聚合物如纤维素醚(例如乙基纤维素)，以调节剂型在胃中的溶解速率。

在一个实施例中，该组合物旨在用作非治疗性处理。在另一个实施例中，根据联邦食品、药品和化妆品法案(US FD&C Act)的§201(i)，该组合物是旨在擦、倒、喷洒或喷雾、引入或以其他方式施用于人体的物品，用于清洁、美化、提高吸引力或改变外观。

实例

以下实例说明了本说明书的特定方面。该实例不应被视为起限定作用，因为该实例仅提供对实施例及其不同方面的特定理解和实施。

实例1：人真皮成纤维细胞的体外测量

本发明的肽由金斯瑞公司(GenScript)(皮斯卡塔韦，新泽西州)合成。

将人真皮成纤维细胞在补充有10％胎牛血清(FBS)和L-谷氨酰胺(0.07x 10⁵个细胞/板)的DMEM培养基(可从康宁公司(Corning)，纽约获得)的96孔板中生长。在达到约75％细胞融合后，将细胞转移到不含FBS的DMEM培养基中，并孵育4-6小时。接下来，在不含FBS的DMEM培养基中以0.00001％、0.0001％、0.0005％或0.001％最终浓度，用肽或其前药(MVV、Ac-MVV)或肽衍生物或其前药(M(O)₂VV、Ac-M(O)₂VV、Ac-M(O)VV)处理细胞48h。处理后，收集该培养基，并且使用MTT测量细胞活性。胶原或透明质酸(HA)的分泌量在培养基中分别使用HTRF人前胶原I试剂盒或HTRF HABP试剂盒进行测试(每种试剂盒可从浠思生物技术有限公司(Cisbio Inc.)，贝德福德，马萨诸塞州获得)。

表13总结了施用成纤维细胞后HA的产生的结果，即相对于媒介物对照的每种活性物质的HA的产生的百分比变化。相对于媒介物对照施用或MVV施用的成纤维细胞上的HA的变化给出p值。

表13

表14总结了施用成纤维细胞后胶原的产生的结果，即相对于媒介物对照的每种活性物质的胶原的产生的百分比变化。相对于媒介物对照施用或MVV施用的成纤维细胞上的胶原的变化给出p值。

表14

如表14所示，本发明的肽衍生物有效地增加了人真皮成纤维细胞中前胶原I酸的产生，比非衍生版本更多。图1A-1D以图表形式说明了表13和14所示的每种测试衍生物浓度下的HA和胶原中的百分比增加。

实例2：全厚度皮肤模型测定

进行了一系列实验以评估肽衍生物对在厚度3D皮肤培养物上的透明质酸(HA)的产生的影响。对五种不同的处理方案进行评估：(1)媒介物中按重量计0.01％的M(O)₂VV；(2)媒介物中按重量计0.002％的M(O)₂VV；(3)媒介物中按重量计0.01％的Ac-M(O)₂VV；(4)媒介物中按重量计0.002％的Ac-M(O)₂VV；和(5)单独的媒介物(DMSO)。将DMSO中指定重量百分比的组合物连续3天每天应用于3D皮肤等效物。

遵循制造商的说明书培养人3D皮肤EFT400FT组织(MatTek公司，马萨诸塞州)。将每个处理方案局部施用于六个3D皮肤样品。将不同的3D皮肤样品分配到如上所述的处理方案(1)-(5)中的一个，其中将六个皮肤组织模型分配给每个处理方案(即，n＝6)。处理后，收集培养基，并使用HTRF HABP试剂盒(可从浠思生物技术有限公司(Cisbio Inc.)，贝德福德，马萨诸塞州获得)测量细胞分泌的透明质酸的量。

HA的产生的结果在表15中示出。相对于施用单独的媒介物对照或相对于MVV给出p值。

表15

实例3：离体分析

从一位47岁的白人女性的腹部成形术中获得了移植皮肤组织的样品。在研究期间，在潮湿的、5％CO2气氛中，样品(共33个)保存在37℃的组织培养基中。

然后将该皮肤组织移植物一式三份分成适当的对照或经处理样品。该对照只接受一种媒介物(DMSO)，并且该处理样品接受含有以按组合物重量计0.0005％、0.001％或0.01％的M(O)₂VV或Ac-M(O)₂VV的媒介物。在第0天、第1天、第2天、第5天和第7天施用媒介物或含有肽的媒介物。

使用Zeiss Mimax和Midi BF显微镜和软件系统检查染色组织切片(一式三份)在经处理样品和对照样品之间以及低功率和高功率之间的定性和半定性差异。针对HA评估，将样品用甲基噻唑基二苯-溴化四氮唑(MTT)洗涤和处理。MTT被线粒体脱氢酶转化为不溶于水的深蓝色MTT-甲瓒(MTT-formazan)。随后，该蓝色晶体被溶解，将颜色强度(其与皮肤活力成正比)用570nm波长的读板器测量。对于每个分析的皮肤样品，所获得的吸光度值已根据重量(以克为单位)进行归一化。十二例皮肤抽吸用染色酸性粘蛋白(如透明质酸)的阿西恩蓝(acian blue)染色以提高HA分值。真皮胶原也使用将胶原纤维染色成紫红色的苦杏仁红(picrosirius red)组织化学染色进行了测量。选择乳头状真皮进行分析，因为这部分的真皮响应于处理更易受到胶原变化的影响。

捕获8-比特灰度显微照片，并且从RGB转换到标准CIE L*a*b*颜色空间。使用ImageJ软件(国立卫生研究院，贝塞斯达，马里兰州)和Color Inspector 3D插件评估ROI中每个像素的L*值。根据真皮中蓝色的强度和分布，使用类似于前胶原I的成像方法，评估透明质酸的存在量。使用Cutech Srl专有的图像分析算法分配反映检测到的透明质酸的量的分值。HA分值越高表明HA含量越高。同样地，前胶原I的量是根据免疫染色的前胶原I的强度和分布来评估的，所述免疫染色的前胶原I分布在与乳头状真皮相对应的区域(就在表皮下方)。如上所述，捕获8-比特灰度显微照片，并且从RGB转换到标准CIE L*a*b*颜色空间。使用ImageJ软件(国立卫生研究院，贝塞斯达，马里兰州)和Color Inspector 3D插件评估ROI中每个像素的L*值。使用Cutech Srl专有的图像分析算法分配反映检测到的前胶原I的量的分值。

表16显示了各种样品中测量的HA分值，并且图2以图表形式表示了测量的针对HA的移植物测量结果。标有“**”的列对于未处理的样品和单独施用媒介物(DMSO)的样品是高度显著(p<0.05)的。

表16

表17显示了各种样品中测量的胶原分值，并且图3以图表形式表示了测量的针对胶原的移植物测量结果。标有“**”的列对于未处理的样品和单独施用媒介物(DMSO)的样品是高度显著(p<0.05)的。

表17

由于在不脱离本发明的范围和精神的情况下，可以对上述主题进行各种改变，所以旨在将以上述描述中包含的或所附权利要求中限定的所有主题解释为本发明的描述和说明。根据以上传授内容，本发明的很多修改和变化都是可能的。因此，本说明书旨在包含落在所附权利要求的范围内的所有这样的替代方案、修改和变化。

Claims

1.一种局部用组合物，所述局部用组合物包含活性剂，所述活性剂具有下述结构：

或者

2.根据权利要求1所述的局部用组合物，其中所述活性剂以按组合物重量计0.0001％至10％的量存在。

3.根据权利要求1或2所述的局部用组合物，其中所述局部用组合物的局部可接受的媒介物包含油包水或水包油乳液。

4.根据权利要求3所述的局部用组合物，其中所述局部可接受的媒介物进一步包含乳化剂。

5.根据权利要求1或2所述的局部用组合物，其中所述局部用组合物的局部可接受的媒介物包含水包硅酮或硅酮包水乳液。

6.根据权利要求5所述的局部用组合物，其中所述局部可接受的媒介物进一步包含乳化剂。

7.根据权利要求1-6中任一项所述的局部用组合物，所述局部用组合物进一步包含从由下列各项组成的组中选择的另外的活性成分：α-羟基酸、硫代二丙酸或其酯、水杨酸、烟酰胺、己基间苯二酚、植醇和类视黄醇。

8.一种局部用组合物，所述局部用组合物包含有效量的具有以下结构的化合物：

或者

9.根据权利要求1-8中任一项所述的局部用组合物在制备用于减少衰老的皮肤病学迹象的外观的局部用产品中的用途。

10.根据权利要求9所述的用途，其中所述衰老的皮肤病学迹象包括细纹和/或皱纹。

11.根据权利要求9或10所述的用途，其中所述活性剂或化合物增加皮肤中胶原的产生。

12.根据权利要求9-11中任一项所述的用途，其中所述活性剂或化合物增加皮肤中透明质酸的产生。