CN113265327A - 一种基于藻类脂质含量的交流-介电泳微藻多级分选装置及方法 - Google Patents

Abstract

本发明提供一种基于藻类脂质含量的交流‑介电泳微藻多级分选装置及方法。本发明装置分为两层，由上到下依次为微通道层和微电极层。微通道层包括：两个进液口、微流体通道、Ag‑PDMS电极预留孔位以及三个出液口。微电极层由ITO玻璃基底层以及两对镀在其上的Ag‑PDMS电极组成。本装置按照悬浮液流动方向依次设置第一分选区域和第二分选区域。第一分选区域靠近微流控芯片的进液通道一侧，第二分选区域靠近微流控芯片出液通道的一侧，在分选区域设计不对称孔结构，产生高梯度不均匀电场，以实现微藻的多级分选。本发明所述的基于藻类脂质含量的交流‑介电泳微藻多级分选装置及方法可利用介电泳力实现不同脂质含量目标微藻的多级分选。

Description

一种基于藻类脂质含量的交流-介电泳微藻多级分选装置及 方法

技术领域

本发明涉及微藻分选技术领域，具体而言，尤其涉及一种基于藻类脂质含量的交流-介电泳微藻多级分选装置及方法。

背景技术

目前，越来越多生活废水和工业污水的排放造成了严重的环境问题。与传统的污水处理方式相比，利用微藻处理污水具有污染物去除效率高和污水处理类型广泛等诸多优势。微藻的生长繁殖快，利用较高的光合效率可以有效去除污水中的氮、磷、重金属离子(如Hg²⁺、Pb²⁺、Cd²⁺)、放射性物质(如Sr²⁺)等有害物质。微藻的种类繁多，不同种类的微藻对不同污染物的耐受性不同，导致不同藻种对不同污水的处理能力也天差地别。为了能够高效的处理污水，有必要根据不同藻类的特性，从诸多藻类中分选出所需的藻种。

微藻能够通过光合作用利用阳光和二氧化碳来产生各种生物产品，包括各种高价值的脂质燃料和色素。在联合国可持续发展目标和欧盟生物经济战略中，多次指出利用微藻产生可持续生物燃料的举措具有十分重要意义。虽然基于微藻的生物燃料目前还未表现出其应有的潜力，但随着生物技术和基因生物学的进步，转基因微藻的脂质产量和质量都要高得多。经证明，莱茵衣藻只需减少单个调节因子的表达就可以使其脂质产量翻倍。尽管取得了这些进展，但在鉴定和分选生产力更高的藻种方面仍然存在许多挑战。这些都是微藻生物技术上游技术中必须解决的一些关键问题。然而，这些开发过程往往既耗时又费力，是微生物技术发展的重大瓶颈。另外缺乏快速有效的微藻分选工具和方法，限制了这一领域的快速发展。

目前，流式细胞术是高通量单细胞分析的标准。利用荧光激活细胞进行分选，被广泛用于基于特定目标分子的荧光染色来确定细胞的特征，例如微藻细胞内脂质。除了可以对细胞进行多色荧光分析，流式细胞术还可以直接对细胞成像以确定其表型和特征，使得对细胞亚群的识别和分选更为精确。尽管上述分析方法功能强大，但大多依赖细胞标记，样品准备耗时费力，而且可能会改变细胞的自然特征。此外，基于流式细胞术的方法需要昂贵的仪器设备，这进一步限制了它的应用。

发明内容

根据上述提出的技术问题，而提供一种基于藻类脂质含量的交流-介电泳微藻多级分选装置及方法。本发明无需对目标藻种进行标记，即可实现快速、准确的分选。

本发明采用的技术手段如下：

一种基于藻类脂质含量的交流-介电泳微藻多级分选装置，包括：微通道层和微电极层；

微通道层上设置有主通道，主通道的一端连通有第一进液通道、第二进液通道，主通道的另一端连通有第一出液通道、第二出液通道；主通道的一侧壁连通有间隔设置的第一通孔和第二通孔；主通道的另一侧壁连通有间隔设置的第一电极凹槽和第二电极凹糟；第一通孔连通有第三出液通道；第三出液通道连通有第三电极凹槽，第二通孔连通有第四电极凹槽；

微电极层由ITO玻璃基底层以及分别镀在ITO玻璃基底层上的第一Ag-PDMS电极、第二Ag-PDMS电极、第三Ag-PDMS电极以及第四Ag-PDMS电极组成；第一Ag-PDMS电极、第二Ag-PDMS电极、第三Ag-PDMS电极以及第四Ag-PDMS电极分别对应设置在第一电极凹槽、第二电极凹糟、第三电极凹槽以及第四电极凹槽内；

第一Ag-PDMS电极通过第一通孔与主通道连通并与另一侧第三Ag-PDMS电极在主通道处形成一高梯度不均匀电场；第二Ag-PDMS电极通过第二通孔与主通道连通并与另一侧第四Ag-PDMS电极在主通道处形成一高梯度不均匀电场。

进一步地，所述第一Ag-PDMS电极与第三Ag-PDMS电极正对设置且之间构成第一分选区域，所述第一通孔设置在第一分选区域内；所述第二Ag-PDMS电极与第四Ag-PDMS电极正对设置且之间构成第二分选区域，所述第二通孔设置在第二分选区域内。

进一步地，所述第一进液通道和第二进液通道之间设置有第一夹角，用于形成鞘液流使得样品挤压到第一小孔一侧的微通道壁；所述第一出液通道和第二出液通道之间设置有第二夹角，便于不同脂质含量的微藻在经过分选区域后分别进入不同的出液流道。

进一步地，所述第一夹角和第二夹角均为45°。

进一步地，所述第三出液通道的液体流出方向与所述第一出液通道和第二出液通道的液体流出方向相反。

进一步地，所述第一进液通道、第二进液通道、第一出液通道、第二出液通道以及第三出液通道均与所述主通道处于同一平面，并在所述微通道层上延伸，且各自的一端分别对应设置有第一进液口、第二进液口、第一出液口、第二出液口以及第三出液口。

进一步地，所述微通道层为PDMS材料，采用光刻浇注工艺制作而成；所述微电极层为玻璃材质，采用刻蚀法加工有Ag-PDMS复合材料电极。

进一步地，所述第一Ag-PDMS电极、第二Ag-PDMS电极、第三Ag-PDMS电极以及第四Ag-PDMS电极的长度均为6000μm，宽度均为50μm，厚度均为1μm；所述第一Ag-PDMS电极与第三Ag-PDMS电极之间的间距为1cm，所述第二Ag-PDMS电极与第四Ag-PDMS电极之间的间距为1cm。

进一步地，所述第一通孔宽度为73μm，所述第二通孔宽度为25μm。

本发明还提供了一种基于上述交流-介电泳微藻多级分选装置的交流-介电泳微藻多级分选方法，包括如下步骤：

S1、使用等离子清洗机清洗键合后的多级微藻介电泳分选装置，便于实验过程中样品悬浮液的流动；

S2、用导线连接电压信号发生器和第一Ag-PDMS电极、第二Ag-PDMS电极、第三Ag-PDMS电极以及第四Ag-PDMS电极，打开信号发生器开关，调整电压和频率，使微流控芯片处于工作状态；

S3、用注射泵注入微藻悬浮液和缓冲液，缓冲液的注入速度高于微藻悬浮液的注入速度；

S4、调整信号发生器的频率和电压，直到在显微镜下观察到不同脂质含量的微藻得到良好的分选效果；

S5、在显微镜下观察微藻的堵塞情况，调整释放频率和捕获频率在一个周期内所占的比例，避免第一通孔和第二通孔堵塞。

较现有技术相比，本发明具有以下优点：

1、本发明提供的基于藻类脂质含量的交流-介电泳微藻多级分选装置，无需对藻细胞进行标记，能够实现对目标微藻的分选。

2、本发明提供的基于藻类脂质含量的交流-介电泳微藻多级分选装置，具有较高的设备拓展性，拓展之后可利用库尔特原理实现对微藻细胞的计数功能，提高了设备的实用性。

基于上述理由本发明可在微藻分选等领域广泛推广。

附图说明

为了更清楚地说明本发明实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图做以简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图是本发明的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动性的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。

图1为本发明装置结构示意图。

图2为本发明微通道层的俯视示意图。

图3为本发明电极层的俯视示意图。

图中：10、微通道层；110、主通道；120A、第一进液通道；120B、第二进液通道；130A、第三出液通道；130B、第一出液通道；130C、第二出液通道；121A、第一进液口；121B、第二进液口；131A、第三出液口；131B、第一出液口；131C、第二出液口；140A、第一通孔；140B、第二通孔；EL1、第一Ag-PDMS电极；EL2、第二Ag-PDMS电极；EL3、第三Ag-PDMS电极；EL4、第四Ag-PDMS电极。

具体实施方式

需要说明的是，在不冲突的情况下，本发明中的实施例及实施例中的特征可以相互组合。下面将参考附图并结合实施例来详细说明本发明。

为使本发明实施例的目的、技术方案和优点更加清楚，下面将结合本发明实施例中的附图，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。以下对至少一个示例性实施例的描述实际上仅仅是说明性的，决不作为对本发明及其应用或使用的任何限制。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。

需要注意的是，这里所使用的术语仅是为了描述具体实施方式，而非意图限制根据本发明的示例性实施方式。如在这里所使用的，除非上下文另外明确指出，否则单数形式也意图包括复数形式，此外，还应当理解的是，当在本说明书中使用术语“包含”和/或“包括”时，其指明存在特征、步骤、操作、器件、组件和/或它们的组合。

除非另外具体说明，否则在这些实施例中阐述的部件和步骤的相对布置、数字表达式和数值不限制本发明的范围。同时，应当清楚，为了便于描述，附图中所示出的各个部分的尺寸并不是按照实际的比例关系绘制的。对于相关领域普通技术人员己知的技术、方法和设备可能不作详细讨论，但在适当情况下，所述技术、方法和设备应当被视为授权说明书的一部分。在这里示出和讨论的所有示例中，任向具体值应被解释为仅仅是示例性的，而不是作为限制。因此，示例性实施例的其它示例可以具有不同的值。应注意到：相似的标号和字母在下面的附图中表示类似项，因此，一旦某一项在一个附图中被定义，则在随后的附图中不需要对其进行进一步讨论。

在本发明的描述中，需要理解的是，方位词如“前、后、上、下、左、右”、“横向、竖向、垂直、水平”和“顶、底”等所指示的方位或位置关系通常是基于附图所示的方位或位置关系，仅是为了便于描述本发明和简化描述，在未作相反说明的情况下，这些方位词并不指示和暗示所指的装置或元件必须具有特定的方位或者以特定的方位构造和操作，因此不能理解为对本发明保护范围的限制：方位词“内、外”是指相对于各部件本身的轮廓的内外。

为了便于描述，在这里可以使用空间相对术语，如“在……之上”、“在……上方”、“在……上表面”、“上面的”等，用来描述如在图中所示的一个器件或特征与其他器件或特征的空间位置关系。应当理解的是，空间相对术语旨在包含除了器件在图中所描述的方位之外的在使用或操作中的不同方位。例如，如果附图中的器件被倒置，则描述为“在其他器件或构造上方”或“在其他器件或构造之上”的器件之后将被定位为“在其他器件或构造下方”或“在其位器件或构造之下”。因而，示例性术语“在……上方”可以包括“在……上方”和“在……下方”两种方位。该器件也可以其他不同方式定位(旋转90度或处于其他方位)，并且对这里所使用的空间相对描述作出相应解释。

此外，需要说明的是，使用“第一”、“第二”等词语来限定零部件，仅仅是为了便于对相应零部件进行区别，如没有另行声明，上述词语并没有特殊含义，因此不能理解为对本发明保护范围的限制。

下面，结合附图对本发明的具体实施例进行详细的描述，但不作为本发明的限定。

如图1-3所示，本发明提供了一种基于藻类脂质含量的交流-介电泳微藻多级分选装置，从上而下依次包括：微通道层10和微电极层20；

微通道层10上设置有主通道110，主通道110的一端连通有第一进液通道120A、第二进液通道120B，主通道110的另一端连通有第一出液通道130B、第二出液通道130C；主通道110的一侧壁连通有间隔设置的第一通孔140A和第二通孔140B；主通道110的另一侧壁连通有间隔设置的第一电极凹槽和第二电极凹糟；第一通孔140A连通有第三出液通道130A；第三出液通道130A连通有第三电极凹槽，第二通孔140B连通有第四电极凹槽；

微电极层20由ITO玻璃基底层以及分别镀在ITO玻璃基底层上的第一Ag-PDMS电极EL1、第二Ag-PDMS电极EL2、第三Ag-PDMS电极EL3以及第四Ag-PDMS电极EL4组成；第一Ag-PDMS电极EL1、第二Ag-PDMS电极EL2、第三Ag-PDMS电极EL3以及第四Ag-PDMS电极EL4分别对应设置在第一电极凹槽、第二电极凹糟、第三电极凹槽以及第四电极凹槽内；

第一Ag-PDMS电极EL1通过第一通孔140A与主通道110连通并与另一侧第三Ag-PDMS电极EL3在主通道110处形成一高梯度不均匀电场；第二Ag-PDMS电极EL2通过第二通孔140B与主通道110连通并与另一侧第四Ag-PDMS电极EL4在主通道110处形成一高梯度不均匀电场。在一些实施例中，施加在第一Ag-PDMS电极EL1、第二Ag-PDMS电极EL2、第三Ag-PDMS电极EL3以及第四Ag-PDMS电极EL4上的正弦电压在幅值恒定的两个频率之间跳变。在本发明中，所述的多级微藻介电泳分选装置通过调整输入信号参数来工作，这些参数包括电压的幅值，捕获频率，释放频率，以及一个周期内两个频率所占的比例。两个频率的选择使得一个频率(捕获频率)提供最大的介电泳力，将某一藻种捕获在第一电场区域处的第一140A处，而另一个频率(释放频率)提供最小的介电泳力，释放捕获的藻种，使该藻种在鞘液流的驱动下流至第三出液通道130A。避免第一通孔140A处因藻种的聚集产生堵塞。跳频介电泳利用可极化粒子对非均匀电场的响应与频率相关实现了用于微藻分选的可调微流控芯片装置。

具体实施时，作为本发明优选的实施方式，所述第一Ag-PDMS电极EL1与第三Ag-PDMS电极EL3正对设置且之间构成第一分选区域，所述第一通孔140A设置在第一分选区域内；所述第二Ag-PDMS电极EL2与第四Ag-PDMS电极EL4正对设置且之间构成第二分选区域，所述第二通孔140B设置在第二分选区域内。

具体实施时，作为本发明优选的实施方式，所述第一进液通道120A和第二进液通道120B之间设置有第一夹角，用于形成鞘液流使得样品挤压到第一小孔140A一侧的微通道壁，使样品受到更强的介电泳力作用。；所述第一出液通道130B和第二出液通道130C之间设置有第二夹角，便于不同脂质含量的微藻在经过分选区域后分别进入不同的出液流道。

具体实施时，作为本发明优选的实施方式，所述第一夹角和第二夹角均为45°。

具体实施时，作为本发明优选的实施方式，所述第三出液通道的液体流出方向与所述第一出液通道和第二出液通道的液体流出方向相反。

具体实施时，作为本发明优选的实施方式，继续参见图1，所述第一进液通道120A、第二进液通道120B、第一出液通道130B、第二出液通道130C以及第三出液通道130A均与所述主通道110处于同一平面，并在所述微通道层10上延伸，且各自的一端分别对应设置有第一进液口121A、第二进液口121B、第一出液口131B、第二出液口131C以及第三出液口131A。

具体实施时，作为本发明优选的实施方式，所述微通道层10为PDMS材料，采用光刻浇注工艺制作而成；所述微电极层20为玻璃材质，采用刻蚀法加工有Ag-PDMS复合材料电极。

具体实施时，作为本发明优选的实施方式，所述第一Ag-PDMS电极EL1、第二Ag-PDMS电极EL2、第三Ag-PDMS电极EL3以及第四Ag-PDMS电极EL4的长度均为6000μm，宽度均为50μm，厚度均为1μm；所述第一Ag-PDMS电极EL1与第三Ag-PDMS电极EL3之间的间距为1cm，所述第二Ag-PDMS电极EL2与第四Ag-PDMS电极EL4之间的间距为1cm。所述第一Ag-PDMS电极EL1、第二Ag-PDMS电极EL2、第三Ag-PDMS电极EL3以及第四Ag-PDMS电极EL4施加正弦交流信号，在一个周期内信号频率由捕获频率跳转到释放频率，在整个实验过程中反复进行。

具体实施时，作为本发明优选的实施方式，所述第一通孔宽度为73μm，所述第二通孔宽度为25μm。靠近第一通孔140A和第二通孔140B处的不均匀电场强度最大，远离第一通孔140A和第二通孔140B处的不均匀电场强度最小。

具体实施时，作为本发明优选的实施方式，主通道110的长度、电极数量和通孔的数量、宽度可以根据具体的分选要求进行调整，以求达到最好的分选效果。

本发明实施例还提供了一种基于藻类脂质含量的交流-介电泳微藻多级分选装置的制作方法，包括：

制作微通道层10，微通道层10选用PDMS材质，压膜之后，在衬底上对负性光刻胶(杜邦干膜)进行曝光、显影，再通过浇注PDMS加工出主通道；

制作微电极层20，电极采用Ag-PDMS复合导电材料，玻璃底片经过压膜、曝光、显影和竖膜之后在底片上产生规则的凹槽，将制备的Ag-PDMS电极涂在底片凹槽处，并去除凹槽外多余电极材料，经过后续的烘干和去膜等操作后完成微电极层20的制作。

将制作的微通道层10与电极层20的玻璃基板对准键合。

本发明还提供了一种基于上述交流-介电泳微藻多级分选装置的交流-介电泳微藻多级分选方法，包括如下步骤：

S1、使用等离子清洗机清洗键合后的多级微藻介电泳分选装置，便于实验过程中样品悬浮液的流动；

S2、用导线连接电压信号发生器和第一Ag-PDMS电极EL1、第二Ag-PDMS电极EL2、第三Ag-PDMS电极EL3以及第四Ag-PDMS电极EL4，打开信号发生器开关，调整电压和频率，使微流控芯片处于工作状态；

S3、用注射泵注入微藻悬浮液和缓冲液，缓冲液的注入速度高于微藻悬浮液的注入速度；

S4、调整信号发生器的频率和电压，直到在显微镜下观察到不同脂质含量的微藻得到良好的分选效果；

S5、在显微镜下观察微藻的堵塞情况，调整释放频率和捕获频率在一个周期内所占的比例，避免第一通孔140A和第二通孔140B堵塞。

实施例：

本实施例中，样品混合溶液包含纤细角毛藻(C.gracilis,CG)、角毛藻-1种(C.species-1,CS1)、角毛藻-2种(C.species-2,CS2)。将样品混合缺氮培养24小时后，得到样品溶液中微藻内脂质含量由高到低排序依次为：纤细角毛藻(228.87mg/g)，角毛藻-1种(178.84mg/g)，角毛藻-2种(40.54mg/g)。

具体的，经过24小时培养的样品溶液从第二进液口121B进入，缓冲溶液从第一进液口121A进入。待样品溶液进入通道后，通过施加交流电压信号，调节捕获频率和释放频率，频率的范围以及一个周期内捕获频率和释放频率的比例，需要根据目标藻种进行调节。在微流控芯片1中，角毛藻-2种会受到正介电泳力，纤细角毛藻和角毛藻-1种会受到负介电泳力。相应地，当角毛藻-2种经过第一分选区域时，在正介电泳的作用下被捕获在第一通孔140A周围，当调整捕获频率为释放频率时，被捕获的角毛藻-2种得到释放，并随缓冲液从第三出液通道130A流出，通过不断交替调节释放频率和捕获频率，该过程在所述微流控芯片1内部反复进行，既分选出角毛藻-2种又避免了因微藻在第一通孔140A处聚集而引发的堵塞。同样地，当纤细角毛藻和角毛藻-1种在微流控芯片1中经过第一分选区域和第二分选区域时，在负介电泳的作用下，被逐渐排斥远离小孔。由于藻类脂质含量越高受到的负介电泳力越大，而纤细角毛藻的脂质含量高于角毛藻-1种，因此，纤细角毛藻受到更强的负介电泳作用并产生更大的位移变化。最后，纤细角毛藻随缓冲液流至第一出液口131B，角毛藻-1种随缓冲液流至第二出液口131C，从而实现了不同脂质含量微藻的介电泳分选。

最后应说明的是：以上各实施例仅用以说明本发明的技术方案，而非对其限制；尽管参照前述各实施例对本发明进行了详细的说明，本领域的普通技术人员应当理解：其依然可以对前述各实施例所记载的技术方案进行修改，或者对其中部分或者全部技术特征进行等同替换；而这些修改或者替换，并不使相应技术方案的本质脱离本发明各实施例技术方案的范围。

Claims (10)

1.一种基于藻类脂质含量的交流-介电泳微藻多级分选装置，其特征在于，包括：微通道层和微电极层；

微通道层上设置有主通道，主通道的一端连通有第一进液通道、第二进液通道，主通道的另一端连通有第一出液通道、第二出液通道；主通道的一侧壁连通有间隔设置的第一通孔和第二通孔；主通道的另一侧壁连通有间隔设置的第一电极凹槽和第二电极凹糟；第一通孔连通有第三出液通道；第三出液通道连通有第三电极凹槽，第二通孔连通有第四电极凹槽；

微电极层由ITO玻璃基底层以及分别镀在ITO玻璃基底层上的第一Ag-PDMS电极、第二Ag-PDMS电极、第三Ag-PDMS电极以及第四Ag-PDMS电极组成；第一Ag-PDMS电极、第二Ag-PDMS电极、第三Ag-PDMS电极以及第四Ag-PDMS电极分别对应设置在第一电极凹槽、第二电极凹糟、第三电极凹槽以及第四电极凹槽内；

第一Ag-PDMS电极通过第一通孔与主通道连通并与另一侧第三Ag-PDMS电极在主通道处形成一高梯度不均匀电场；第二Ag-PDMS电极通过第二通孔与主通道连通并与另一侧第四Ag-PDMS电极在主通道处形成一高梯度不均匀电场。

2.根据权利要求1所述的基于藻类脂质含量的交流-介电泳微藻多级分选装置，其特征在于，所述第一Ag-PDMS电极与第三Ag-PDMS电极正对设置且之间构成第一分选区域，所述第一通孔设置在第一分选区域内；所述第二Ag-PDMS电极与第四Ag-PDMS电极正对设置且之间构成第二分选区域，所述第二通孔设置在第二分选区域内。

3.根据权利要求1所述的基于藻类脂质含量的交流-介电泳微藻多级分选装置，其特征在于，所述第一进液通道和第二进液通道之间设置有第一夹角，用于形成鞘液流使得样品挤压到第一小孔一侧的微通道壁；所述第一出液通道和第二出液通道之间设置有第二夹角，便于不同脂质含量的微藻在经过分选区域后分别进入不同的出液流道。

4.根据权利要求3所述的基于藻类脂质含量的交流-介电泳微藻多级分选装置，其特征在于，所述第一夹角和第二夹角均为45°。

5.根据权利要求1所述的基于藻类脂质含量的交流-介电泳微藻多级分选装置，其特征在于，所述第三出液通道的液体流出方向与所述第一出液通道和第二出液通道的液体流出方向相反。

6.根据权利要求1所述的基于藻类脂质含量的交流-介电泳微藻多级分选装置，其特征在于，所述第一进液通道、第二进液通道、第一出液通道、第二出液通道以及第三出液通道均与所述主通道处于同一平面，并在所述微通道层上延伸，且各自的一端分别对应设置有第一进液口、第二进液口、第一出液口、第二出液口以及第三出液口。

7.根据权利要求1所述的基于藻类脂质含量的交流-介电泳微藻多级分选装置，其特征在于，所述微通道层为PDMS材料，采用光刻浇注工艺制作而成；所述微电极层为玻璃材质，采用刻蚀法加工有Ag-PDMS复合材料电极。

8.根据权利要求1所述的基于藻类脂质含量的交流-介电泳微藻多级分选装置，其特征在于，所述第一Ag-PDMS电极、第二Ag-PDMS电极、第三Ag-PDMS电极以及第四Ag-PDMS电极的长度均为6000μm，宽度均为50μm，厚度均为1μm；所述第一Ag-PDMS电极与第三Ag-PDMS电极之间的间距为1cm，所述第二Ag-PDMS电极与第四Ag-PDMS电极之间的间距为1cm。

9.根据权利要求1所述的基于藻类脂质含量的交流-介电泳微藻多级分选装置，其特征在于，所述第一通孔的宽度为73μm，所述第二通孔的宽度为25μm。

10.一种基于上述权利要求1-9中任意一项权利要求所述交流-介电泳微藻多级分选装置的交流-介电泳微藻多级分选方法，其特征在于，包括如下步骤：

S1、使用等离子清洗机清洗键合后的多级微藻介电泳分选装置，便于实验过程中样品悬浮液的流动；

S2、用导线连接电压信号发生器和第一Ag-PDMS电极、第二Ag-PDMS电极、第三Ag-PDMS电极以及第四Ag-PDMS电极，打开信号发生器开关，调整电压和频率，使微流控芯片处于工作状态；

S3、用注射泵注入微藻悬浮液和缓冲液，缓冲液的注入速度高于微藻悬浮液的注入速度；

S4、调整信号发生器的频率和电压，直到在显微镜下观察到不同脂质含量的微藻得到良好的分选效果；

S5、在显微镜下观察微藻的堵塞情况，调整释放频率和捕获频率在一个周期内所占的比例，避免第一通孔和第二通孔堵塞。

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