CN113244455A - 一种3d打印亚麻籽水凝胶支架及制备方法和应用 - Google Patents

一种3d打印亚麻籽水凝胶支架及制备方法和应用 Download PDF

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Abstract

本发明为一种3D打印亚麻籽胶水凝胶支架的制备方法，其步骤分为：亚麻籽胶原料溶于超纯水中；缓慢加入改性剂，持续50℃搅拌1小时；滴加氢氧化钠使反应体系的pH维持在7.0，持续反应5h；将产物用3500‑4000D滤膜透析冻干，获得多孔的海绵状改性亚麻籽胶干粉；用含浓度为0.1％w/v的光引发剂的细胞培养液完全溶解改性亚麻籽胶干粉制备成甲基丙烯酸酐改性亚麻籽水凝胶；将所得甲基丙烯酸酐改性亚麻籽水凝胶与细胞室温下充分混匀，通过3D‑Bioplotter system进行挤压式打印，通过喷出的纤维丝逐层堆积形成支架；打印后的支架进行紫外光交联，得到负载活性细胞的3D打印支架。本发明克服了现有水凝胶材料缺点，展现了支架材料自身的优良性能，可应用于软组织修复。

Description

一种3D打印亚麻籽水凝胶支架及制备方法和应用
技术领域
本发明涉及一种3D打印亚麻籽水凝胶支架，具体地说是3D打印亚麻籽胶水凝胶支架及制备方法。
背景技术
组织工程为人体组织器官的再生修复提供了一种新的治疗方法，组织工程技术包括了静电纺丝和3D打印技术，前者主要为细胞提供一种二维的微环境，这远不能满足仿生组织器官的三维微环境，而后者却可以达到。3D生物打印技术能在微米级精确度下堆积生物材料，调控活细胞和功能分子的空间分布，进而重塑3D组织和器官复杂生理微环境。然而，生物材料缺乏个体化的生化性和力学性能仍是限制3D打印技术应用的障碍。
目前，水凝胶是常用的一种生物墨水，因其水分含量高和纤维状的网络结构类似于组织的细胞外基质的结构。它包括合成水凝胶和天然水凝胶。合成材料如PEGDA、PCL等，由于其生物相容性差、生化性能欠佳及降解产物会引起大型动物炎症等而使其应用受限。天然水凝胶具有良好的生物相容性和低免疫原性，因而常作为生物墨水，如透明质酸、海藻酸钠、壳聚糖、明胶、丝胶蛋白等。但这些天然水凝胶缺乏剪切稀化性，在使用常规挤压式打印时，致使复合的细胞受到压力过高，影响细胞的活性，进而影响组织的再生修复。此外这些墨水的前驱溶液表现出低黏性，致使打印后的支架很难保持所需形状，因而不满足简单的挤压式打印需求；即使能打印，也对打印机及打印技术有更高的要求，如明胶需要低温协助打印。此外，蛋白类的墨水，还存在一定的免疫原性，可能会引起动物炎症，如丝胶蛋白。所以，寻求一种同时满足生物相容性和打印性的墨水仍非常必要。
如中国专利CN110478529A公开了一种3D打印魔芋胶水凝胶支架及制备方法和应用，制备方法包括以下步骤：甲基丙烯酸酐改性魔芋胶水凝胶原料，透析、冻干，获得甲基丙烯酸酯化魔芋胶粉末；接着用含光引发剂的PBS/中性培养液进行溶解得水凝胶；将所得水凝胶或与软骨细胞复合经3D–Bioplotter system打印，后进行紫外光交联，即得所述魔芋胶水凝胶支架产物。其针对的是甲基丙烯酸酯化魔芋胶水凝胶。然而魔芋胶粘度大，溶胀性高，且细胞活性较低。
因此，如何设计一种3D打印亚麻籽水凝胶支架及制备方法和应用，能克服现有水凝胶材料缺点，展现支架材料自身的优良性能，且能保证最后细胞存活率较高水平是一件亟待解决的事情，具有十分重要的意义。
发明内容
有鉴于此，本申请的目的在于提供一种3D打印亚麻籽胶水凝胶支架及制备方法。
为了达到上述目的，本申请提供如下技术方案。
一种3D打印亚麻籽胶水凝胶支架，亚麻籽胶水凝胶支架的主体由亚麻籽胶纤维网络构成，且纤维网络中负载有活性生物细胞。
所述支架的制备包括以下步骤：
步骤1：FG(亚麻籽胶)原料溶于超纯水中，在60℃充分搅拌溶解得到亚麻籽胶水溶液；
步骤2：在50℃下按100uL/min的速度缓慢加入改性剂，持续50℃搅拌1小时；
步骤3：滴加氢氧化钠使反应体系的pH维持在7.0，持续反应5h；
步骤4：根据加入改性剂的量不同得到不同接枝度的甲基丙烯酸酯化亚麻籽胶衍生物，所得产物用3500-4000D滤膜透析、冻干，获得多孔的海绵状改性亚麻籽胶干粉；
步骤5：用含浓度为0.1％w/v的光引发剂的细胞培养液完全溶解所述改性亚麻籽胶干粉制备成甲基丙烯酸酐改性亚麻籽水凝胶。
步骤6：将所得甲基丙烯酸酐改性亚麻籽水凝胶与细胞室温下充分混匀，通过3D-Bioplotter system进行挤压式打印，通过喷出的纤维丝逐层堆积，形成甲基丙烯酸酯化亚麻籽胶支架；
步骤7：打印后的支架进行紫外光交联，得到负载活性细胞的3D打印支架。
优选地，步骤1中，所述亚麻籽胶原料的水溶液浓度为1％w/v-2％w/v。
优选地，步骤2中，所述改性剂为MA(甲基丙烯酸酐)，改性剂与亚麻籽胶原料配比范围为0.4mL/g-2.5mL/g，优选为1mL/g-2.5mL/g。
优选地，步骤5中，细胞培养液的组成成分包括8g/L NaCl、0.2g/L KCl、1.44g/LNa2H2PO4、0.24g/L KH2PO4以及1000g/L H2O。
优选地，步骤6中，所述甲基丙烯酸酯化亚麻籽胶水凝胶打印的浓度范围为3.5％-6％。
优选地，步骤7中，所述亚麻籽胶水凝胶支架进行紫外光交联的时长为60s-150s。
优选地，步骤7中，所负载活性细胞种类为骨髓间充质干细胞、脐带干细胞、脂肪干细胞以及软骨细胞中的一种，负载活性细胞浓度范围为1×107cell/mL-4×107cell/mL。
一种3D打印亚麻籽胶水凝胶支架，采用上述的方法制备而成。
3D打印亚麻籽胶水凝胶支架在人体组织工程中的应用。
相比于现有技术，本发明技术方案具有以下有益效果：
1.本发明制备方法中使用的亚麻籽胶是一种天然水溶性多糖，无毒，低免疫原性，具有非常高的生物相容性与生物安全性材料，具备优良的性能，材料设计简单。
2.本发明制备方法中亚麻籽胶的分子结构中含有羟基，能发生酯化反应，可接枝甲基丙烯酸酐，进行紫外光交联，对支架紫外光交联能维持打印支架的形状，所以能较好的实现打印支架的保真性，可用于软骨修复。
3.本发明制备方法操作简单，反应条件温和，所需条件要求不苛刻，有利于室温下进行细胞接种。
4.本发明步骤3之后都尽量保持在ph中性的环境下完成，在pH6.0～9.0的范围内，水凝胶表观粘度达到最大。
5.本发明步骤5中使用细胞培养液，进一步提高了之后步骤中与细胞混合后细胞的存活率。
6.本发明步骤6在室温下完成，在低温环境下溶解，有助于水凝胶与细胞的溶解混合。
7.本发明中的3D打印亚麻籽胶水凝胶支架，克服了现有水凝胶材料缺点，同时充分展现了支架材料自身的优良性能，材料设计简单，支架外形和微结构可控，力学性能可调整，成本低，来源广，可符合骨髓间充质干细胞、脐带干细胞、脂肪干细胞以及软骨细胞，应用于软组织修复，为开发新的组织工程支架提供初步的研究基础。
附图说明
为了更清楚地说明本申请实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图是本申请的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。在所有附图中，类似的元件或部分一般由类似的附图标记标识。附图中，各元件或部分并不一定按照实际的比例绘制。
图1为本发明提供的3D打印亚麻籽胶水凝胶支架的制备方法的具体步骤；
图2为本发明提供的3D打印亚麻籽胶水凝胶支架的制备方法的亚麻籽胶、低接枝度(MA:FG＝0.5mL:1g)、中接枝度(MA:FG＝1mL:1g)、高接枝度(MA:FG＝2mL:1g)甲基丙烯酸酯化亚麻籽胶的核磁共振检测的结果图；
图3为本发明提供的3D打印亚麻籽胶水凝胶支架的制备方法的3D打印甲基丙烯酸酯化亚麻籽胶支架的实物图；
图4为本发明提供的3D打印亚麻籽胶水凝胶支架的制备方法的甲基丙烯酸酯化亚麻籽胶支架和3D打印甲基丙烯酸酯化亚麻籽胶支架电镜图；
图5为本发明提供的3D打印亚麻籽胶水凝胶支架的制备方法的力学性能测试的结果图；
图6本发明提供的3D打印亚麻籽胶水凝胶支架的制备方法的不同接枝度改性甲基丙烯酸酯化亚麻籽胶复合骨髓间充质干细胞的培养7天、14天、21天的细胞活性结果图。
具体实施方式
为使本申请实施例的目的、技术方案和优点更加清楚，下面将结合本申请实施例中的附图，对本申请实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例是本申请一部分实施例，而不是全部的实施例。在下面的描述中，提供诸如具体的配置和组件的特定细节仅仅是为了帮助全面理解本申请的实施例。因此，本领域技术人员应该清楚，可以对这里描述的实施例进行各种改变和修改而不脱离本申请的范围和精神。另外，为了清楚和简洁，实施例中省略了对已知功能和构造的描述。
应该理解，说明书通篇中提到的“一个实施例”或“本实施例”意味着与实施例有关的特定特征、结构或特性包括在本申请的至少一个实施例中。因此，在整个说明书各处出现的“一个实施例”或“本实施例”未必一定指相同的实施例。此外，这些特定的特征、结构或特性可以任意适合的方式结合在一个或多个实施例中。
此外，本申请可以在不同例子中重复参考数字和/或字母。这种重复是为了简化和清楚的目的，其本身并不指示所讨论各种实施例和/或设置之间的关系。
本文中术语“和/或”，仅仅是一种描述关联对象的关联关系，表示可以存在三种关系，例如，A和/或B，可以表示：单独存在A，单独存在B，同时存在A和B三种情况，本文中术语“/和”是描述另一种关联对象关系，表示可以存在两种关系，例如，A/和B，可以表示：单独存在A，单独存在A和B两种情况，另外，本文中字符“/”，一般表示前后关联对象是一种“或”关系。
本文中术语“至少一种”，仅仅是一种描述关联对象的关联关系，表示可以存在三种关系，例如，A和B的至少一种，可以表示：单独存在A，同时存在A和B，单独存在B这三种情况。
还需要说明的是，在本文中，诸如第一和第二等之类的关系术语仅仅用来将一个实体或者操作与另一个实体或操作区分开来，而不一定要求或者暗示这些实体或操作之间存在任何这种实际的关系或者顺序。而且，术语“包括”、“包含”或者其任何其他变体意在涵盖非排他性的包含。
实施例1
本实施例介绍了一种3D打印亚麻籽水凝胶支架及制备方法和应用的流程。
图1为本发明提供的3D打印亚麻籽胶水凝胶支架的制备方法的具体步骤，其展示了一种3D打印亚麻籽水凝胶支架及制备方法和应用，其步骤分为：
步骤1：亚麻籽胶原料溶于超纯水中，在60℃充分搅拌溶解得到亚麻籽胶水溶液；
步骤2：在50℃下按100uL/min的速度缓慢加入甲基丙烯酸酐，持续50℃搅拌1小时；
步骤3：滴加氢氧化钠使反应体系的pH维持在7.0，持续反应5h；
步骤4：根据加入甲基丙烯酸酐的量不同得到不同接枝度的甲基丙烯酸酯化亚麻籽胶衍生物，所得产物用3500-4000D滤膜透析、冻干，获得多孔的海绵状改性亚麻籽胶干粉；
步骤5：用含浓度为0.1％w/v的光引发剂的PBS完全溶解所述改性亚麻籽胶干粉制备成甲基丙烯酸酐改性亚麻籽水凝胶。
步骤6：将所得甲基丙烯酸酐改性亚麻籽水凝胶与细胞室温下充分混匀，细胞与甲基丙烯酸酐改性亚麻籽水凝胶的配比为2.9×108cell/mL-6.7×108cell/mL，通过3D-Bioplotter system进行挤压式打印，通过喷出的纤维丝逐层堆积，形成甲基丙烯酸酯化亚麻籽胶支架；
步骤7：打印后的支架进行紫外光交联，得到负载活性细胞的3D打印支架。
进一步的，步骤1中，所述亚麻籽胶原料的水溶液浓度为1％w/v-2％w/v。
进一步的，步骤2中，所述改性剂为甲基丙烯酸酐，改性剂与亚麻籽胶原料配比范围为0.4mL/g-2.5mL/g，优选为1mL/g-2.5mL/g。
进一步的，步骤6中，所述甲基丙烯酸酯化亚麻籽胶水凝胶打印的浓度范围为3.5％-6％。
进一步的，步骤7中，所述亚麻籽胶水凝胶支架进行紫外光交联的时长为60s-150s。
进一步的，步骤7中，所负载细胞种类为骨髓间充质干细胞、脐带干细胞、脂肪干细胞以及软骨细胞中的一种，细胞浓度范围为1×107cell/mL-4×107cell/mL。
进一步的，一种3D打印亚麻籽胶水凝胶支架，采用上述的方法制备而成。
进一步的，3D打印甲基丙烯酸酯化亚麻籽胶水凝胶支架在人体组织工程中的应用
本发明步骤3之后都尽量保持在ph中性的环境下完成，在pH6.0～9.0的范围内，水凝胶表观粘度达到最大。
pH值对亚麻籽胶溶液的表观粘度影响很大，在酸性条件下，随着pH值的降低，表观粘度逐渐降低；在碱性条件下，随着pH值的增大，表观粘度也逐渐下降；在中性条件下，亚麻籽胶溶液的表观粘度达到最大值。
本发明步骤5中使用细胞培养液，保证了之后步骤中与细胞混合后细胞的存活率。
本发明步骤6在室温下完成，在低温环境下溶解，有助于水凝胶与细胞的溶解混合。
实施例2
基于上述实施例1，本实施例对实施例1的方案进行了探究，得到了优选的制备方法。
本发明提供了一种3D打印甲基丙烯酸酯化亚麻籽胶支架的制备方法，所述方法包括如下步骤：
步骤1：亚麻籽胶原料以1％w/v的浓度溶于超纯水中，在60℃充分搅拌溶解得到亚麻籽胶水溶液；
步骤2：在50℃温度表下分钟100uL的速度缓慢加入甲基丙烯酸酐，持续50℃搅拌1小时；
步骤3：滴加氢氧化钠使反应体系的pH维持在7.0，持续反应5h；
步骤4：根据加入甲基丙烯酸酐的量不同得到不同接枝度的甲基丙烯酸酯化亚麻籽胶衍生物，所得产物用3500-4000D透析，冻干，获得多孔的海绵状的甲基丙烯酸酯化亚麻籽胶干粉；
步骤5：用含浓度为0.1％w/v的光引发剂的中性细胞培养液完全溶解制备成4％w/v甲基丙烯酸酯化亚麻籽胶凝胶；
步骤6：将所得甲基丙烯酸酯化亚麻籽胶水凝胶与骨髓间充质干细胞室温下充分混匀，细胞与甲基丙烯酸酐改性亚麻籽水凝胶的配比为2.9×108cell/mL-6.7×108cell/mL，通过3D–Bioplotter system进行挤压式打印，通过喷出的纤维丝逐层堆积，形成亚麻籽胶水凝胶支架；
步骤7：打印后的支架进行紫外光365nm、200mW/cm2交联60s，即得到负载骨髓间充质干细胞的3D打印支架。
通过比较产物甲基丙烯酸酐的接枝度，发现pH7.0时，1％w/v亚麻籽胶原液改性产物接枝甲基丙烯酸酐的效率最高。
本实施例的制备方法使设计一种3D打印亚麻籽胶支架，克服了现有水凝胶材料缺点，同时充分展现了支架材料自身的优良性能。本发明的材料设计简单，支架外形和微结构可控，力学性能可调整，成本低，来源广，可用于复合软骨细胞，为发现新的组织工程支架提供初步的研究基础。
实施例3
基于上述实施例2，本实施例对实施例2中选用4％w/v打印浓度的3D打印亚麻籽胶水凝胶支架进行了详细描述。
制备4％w/v，5％w/v，6％w/v三种不同打印浓度的3D打印亚麻籽胶水凝胶支架：将冻干的甲基丙烯酸酯化亚麻籽胶干粉用含光引发剂(0.1％w/v)的细胞培养液完全溶解制备成水凝胶；之后将所得水凝胶或与骨髓间充质干细胞(1×107cell/ml)复合通过3D–Bioplotter system进行挤压式打印，通过喷出的纤维丝逐层堆积，形成支架，打印后的支架进行紫外光365nm、200mW/cm2交联60s，即得产物。
将三种支架和打印参数比较，发现其打印的层数均可打印20层以上。其中4％(w/v)所需打印气压较低，其对负载细胞打印的剪切力最小，负载细胞活性最好。
实施例4
基于上述实施例2，本实施例对实施例2中，不同浓度的甲基丙烯酸酐所得到的效果进行了详细描述。
本发明提供了一种3D打印亚麻籽胶水凝胶支架的制备方法，所述方法包括如下步骤：亚麻籽胶原料以1％w/v的浓度溶于超纯水中，在60℃充分搅拌溶解得到亚麻籽胶水溶液，在50℃温度表下分钟100uL/min的速度缓慢加入甲基丙烯酸酐，持续60℃搅拌1小时，接着滴加氢氧化钠使反应体系的pH维持在7.0，持续反应5h，根据加入甲基丙烯酸酐的量不同得到不同接枝度的甲基丙烯酸酯化亚麻籽胶衍生物，所得产物用3500-4000D透析，冻干，获得多空的海绵状改性亚麻籽胶；再用含浓度为0.1％w/v的光引发剂的细胞培养液完全溶解制备成甲基丙烯酸酯化亚麻籽胶水凝胶；之后将所得甲基丙烯酸酯化亚麻籽胶水凝胶或与骨髓间充质干细胞充分混匀通过3D–Bioplotter system进行挤压式打印，通过喷出的纤维丝逐层堆积，形成亚麻籽胶水凝胶支架，打印后的支架进行紫外光365nm、200mW/cm2交联60s，即得到负载骨髓间充质干细胞的3D打印支架。
其中甲基丙烯酸酐的浓度分别为0.5mL/g、1.0mL/g、2.0mL/g(纯度94％),获得的产物对应为FGMA1、FGMA2和FGMA3。通过调控加入甲基丙烯酸酐的接枝度，进而控制支架的微结构、力学性能及细胞活性。
图2为本发明提供的3D打印亚麻籽胶水凝胶支架的制备方法的亚麻籽胶、低接枝度(MA:FG＝0.5mL:1g)、中接枝度(MA:FG＝1mL:1g)、高接枝度(MA:FG＝2mL:1g)甲基丙烯酸酯化亚麻籽胶的核磁共振检测的结果图，其展示了FG分子结构上具有大量羟基可以和甲基丙烯酸酐中的羰基发生亲核加成反应，从而将-C＝C-活性基团引入到FG的分子结构中，图1为FG及甲基丙烯酸化FGMA的1H-NMR谱图，FG在4.7ppm附近的吸收峰为FG分子中羟基与-C＝C-上氢原子的吸收峰；与未枝接的FG相比，在甲基丙烯酸化FG谱图中出现两处新峰:5.2ppm及5.5ppm处的吸收峰归属于甲基丙烯酸酐基团中-C＝CH2的两个氢原子；而在1.8ppm附近出现的吸收峰归属于甲基丙烯酸酐基团中-C＝C-CH3的氢原子。随着MA量的增加，其接枝度也随之增加，每1gFG加入MA0.5mL、1.0mL及2.0mL时反应所得的FGMA的接枝度分别为2.3％、8.1％及26.8％。
图3为本发明提供的3D打印亚麻籽胶水凝胶支架的制备方法的3D打印甲基丙烯酸酯化亚麻籽胶支架的实物图，其展示了3D打印甲基丙烯酸酯化亚麻籽胶光固化交联后支架的形状保持好，打印喷嘴喷出的纤维细丝清晰可见，说明了紫外光交联能维持打印支架的形状，且具有较高的保真性。
图4为本发明提供的3D打印亚麻籽胶水凝胶支架的制备方法的甲基丙烯酸酯化亚麻籽胶支架和3D打印甲基丙烯酸酯化亚麻籽胶支架电镜图，图中显示均匀分布的孔，其展示了FGMA1、FGMA2、FGMA3的孔径逐渐变小，说明了高接枝度亚麻籽胶形成的网状结构更致密，3D打印不同接枝度甲基丙烯酸酯化亚麻籽胶孔径与未打印支架相符。
图5为本发明提供的3D打印亚麻籽胶水凝胶支架的制备方法的力学性能测试的结果图，其展示了高接枝度的甲基丙烯酸酯化亚麻籽胶杨氏模量比低接枝度的亚麻籽胶高8倍多(P<0.001)，说明了甲基丙烯酸酐的接枝度可影响材料的力学强度。
图6本发明提供的3D打印亚麻籽胶水凝胶支架的制备方法的不同接枝度改性甲基丙烯酸酯化亚麻籽胶复合骨髓间充质干细胞的培养7天、14天、21天的细胞活性结果图，其展示了大多数细胞被染成绿色(活细胞)且打印后FGMA2、FGMA3组的细胞的存活力均大于90％，说明该材料非常适合进行生物打印。
以上所述仅为本发明的优选实施例而已，其并非因此限制本发明的保护范围，对于本领域的技术人员来说，本发明可以有各种更改和变化。凡在本发明的精神和原则之内，通过常规的替代或者能够实现相同的功能在不脱离本发明的原理和精神的情况下对这些实施例进行变化、修改、替换、整合和参数变更均落入本发明的保护范围内。

Claims (9)

1.一种3D打印亚麻籽水凝胶支架及制备方法和应用，其特征在于，甲基丙烯酸酯化亚麻籽胶水凝胶支架的主体由甲基丙烯酸酯化亚麻籽胶纤维网络构成，且纤维网络中负载有活性生物细胞，所述支架的制备包括以下步骤：
步骤1：亚麻籽胶原料溶于超纯水中，在60℃充分搅拌溶解得到亚麻籽胶水溶液；
步骤2：在50℃下按100uL/min的速度缓慢加入改性剂甲基丙烯酸酐，持续50℃搅拌1小时；
步骤3：滴加氢氧化钠使反应体系的pH维持在7.0，持续反应5小时；
步骤4：根据加入改性剂的量不同得到不同接枝度的甲基丙烯酸酯化亚麻籽胶衍生物，所得产物用3500-4000D滤膜透析、冻干，获得多孔的海绵状改性亚麻籽胶干粉；
步骤5：用含浓度为0.1％w/v的光引发剂的PBS或中性培养液完全溶解所述改性亚麻籽胶干粉，制备成甲基丙烯酸酐改性亚麻籽水凝胶；
步骤6：将步骤5所得甲基丙烯酸酐改性亚麻籽水凝胶与细胞室温下充分混匀，通过3D-Bioplottersystem进行挤压式打印，通过喷出的纤维丝逐层堆积，形成甲基丙烯酸酯化亚麻籽胶支架；
步骤7：打印后的支架进行紫外光交联，得到负载活性细胞的3D打印支架。
2.根据权利要求1所述的一种3D打印亚麻籽水凝胶支架及制备方法和应用，其特征在于，步骤1中，所述亚麻籽胶原料的水溶液浓度为1％w/v-2％w/v。
3.根据权利要求2所述的一种3D打印亚麻籽水凝胶支架及制备方法和应用，其特征在于，所述改性剂与亚麻籽胶原料配比范围为1mL/g-2.5mL/g。
4.根据权利要求1-3中任一项所述的一种3D打印亚麻籽水凝胶支架及制备方法和应用，其特征在于，步骤6中，所述甲基丙烯酸酯化亚麻籽胶水凝胶打印的浓度范围为3.5％-6％。
5.根据权利要求1-3中任一项所述的一种3D打印亚麻籽水凝胶支架及制备方法和应用，其特征在于，步骤7中，所述亚麻籽胶水凝胶支架进行紫外光交联的时长为60s-150s。
6.根据权利要求5所述的一种3D打印亚麻籽水凝胶支架及制备方法和应用，其特征在于，步骤7中，所负载活性细胞种类为骨髓间充质干细胞、脐带干细胞、脂肪干细胞或软骨细胞中的一种或多种。
7.根据权利要求6所述的一种3D打印亚麻籽水凝胶支架及制备方法和应用，其特征在于，所述负载活性细胞浓度范围为1×107cell/mL-4×107cell/mL。
8.一种3D打印亚麻籽胶水凝胶支架，其特征为，采用权利要求1-7任一项所述的方法所制备而成。
9.权利要求8所述的3D打印亚麻籽胶水凝胶支架，在人体组织工程中的应用。
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