CN113214305A - 荧光色素及其利用 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及荧光色素及其利用。本发明以提供新型的荧光色素为课题。通过在具有将若丹明类的基本骨架中的呫吨环的氧原子替换为硅原子的骨架的荧光色素中赋予以硅原子作为螺原子的螺环结构，从而得到也可利用于超分辨率显微镜法的新型的荧光色素，解决了上述的课题。
Description
技术领域
本发明涉及荧光色素。本发明涉及荧光色素与复合化物质结合而成的标识复合化物质。本发明涉及包含荧光色素或标识复合化物质的组合物。本发明涉及采用超分辨率显微镜法取得与被检测物质有关的信息的方法。
背景技术
为了用荧光显微镜、流式细胞仪检测出细胞、生物体分子，广泛地使用了荧光色素。作为荧光色素，例如已知专利文献1中所示的、具有将若丹明类的基本骨架中的呫吨环的氧原子替换为硅原子的骨架(以下也称为Si若丹明骨架)的化合物。
现有技术文献
专利文献
专利文献1：中国专利申请公告第100361999号说明书
发明内容
发明要解决的课题
本发明的目的在于提供新型的荧光色素、标识复合化物质、组合物和与被检测物质有关的信息的取得方法。
用于解决课题的手段
在若丹明类中，已知形成了以呫吨环部位的9位的碳原子作为螺原子的分子内螺环的状态(闭环体)和使该螺环开裂的状态(开环体)处于平衡。开环体的若丹明类显示吸收和荧光，而闭环体的若丹明类为无色并且无荧光。这对于具有Si若丹明骨架的荧光色素也同样。本发明人关注于具有Si若丹明骨架的荧光色素中的分子内螺环的可逆的形成和开裂反应，尝试了新型的荧光色素的制作。其结果，本发明人通过在具有Si若丹明骨架的荧光色素中赋予以Si原子作为螺原子的螺环结构，从而完成了本发明。
本发明提供荧光色素，其由以下的式(I)所示的化合物或其互变异构体、或者其盐组成。
【化1】
式中，
A表示可具有取代基的含Si的C4～C7的杂环，
X表示羟基或-NR1R2，
Y1表示＝O或＝N+R3R4，
R1、R2、R3、R4、R5和R6独立地表示H、可具有取代基的C1～C6的烷基、或可具有取代基的C1～C6的杂烷基，R1与R2、R3与R4、R1与R5、和R3与R6的组合中的至少一个可以与它们结合的N一起来形成可具有取代基的含N的杂环，
R7、R8、R9、R10和R11独立地选自H、卤素、可具有取代基的C1～C6的烷基、可具有取代基的C1～C6的烷氧基、可具有取代基的C1～C6的烷硫基、可具有取代基的氨基、可具有取代基的芳基、可具有取代基的杂芳基、-CO2H、-CO2 -、-SO3H、-SO3 -、和-L-R；
L为具有1～16个非氢原子的、直链、分支链、环或它们的任意的组合结构的2价的连接基，其中，在连接基中存在1个以上杂原子的情况下，作为从酯、胺、酰胺、醚、硫醚、羰基中独立地选择的1个以上的基团含有该杂原子；
R为反应基团；并且
R7、R8、R9、R10和R11中相邻的2个基团中的1个以上的组合可一起形成环；
不过，不包括：R1与R5、和R3与R6的组合中的至少一个与它们结合的N一起形成可具有取代基的含N的杂环并且R2和R4为可具有取代基的C1～C6的烷基的化合物及其互变异构体以及其盐。
本发明提供上述的荧光色素与复合化物质结合而成的标识复合化物质。本发明提供包含上述的荧光色素或标识复合化物质的组合物。本发明提供使上述的荧光色素或标识复合化物质与被检测物质结合、采用超分辨率显微镜法取得与该被检测物质有关的信息的方法。
发明的效果
根据本发明，提供新型的荧光色素、标识复合化物质、组合物和与被检测物质有关的信息的取得方法。
附图说明
图1为实施例19的荧光色素的开环体和闭环体的结构式。
图2为表示实施例1、7、8、10、17、19、23、33和36的荧光色素和它们的比较例的荧光色素中的9位碳的马利肯电荷的坐标图。
图3为作为实施例19的比较例的化合物A和作为实施例1的比较例的化合物B的结构式。
图4为表示实施例19的荧光色素、化合物A、实施例1的荧光色素和化合物B的占空比的坐标图。
图5为表示实施例1～36的荧光色素的占空比的表。
图6的a为没有加入抗微管蛋白抗体(一次抗体)、只使用用实施例7的荧光色素标记的抗小鼠IgG抗体(二次抗体)来免疫染色的细胞的透射光像。b为与a同一视野中的荧光像。在a和b中，用虚线表示细胞的轮廓。c为使用一次抗体和二次抗体来免疫染色的细胞的荧光像。d为与c同一视野中的超分辨率图像。位于c和d的各图像的左上部分的短线表示对经染色的微管的图像的线轮廓进行了解析的部位。e表示对于c和d的各图像进行了解析的线轮廓和半峰全宽。
图7的f为没有加入抗微管蛋白抗体(一次抗体)、只使用用实施例36的荧光色素标记的抗小鼠IgG抗体(二次抗体)来免疫染色的细胞的透射光像。g为与f同一视野中的荧光像。在f和g中，用虚线表示细胞的轮廓。h为使用一次抗体和二次抗体来免疫染色的细胞的荧光像。i为与h同一视野中的超分辨率图像。位于h和i的各图像的左上部分的短线表示对经染色的微管的图像的线轮廓进行了解析的部位。j表示对于h和i的各图像进行了解析的线轮廓和半峰全宽。
具体实施方式
[简写符号和术语]
本说明书中所使用的简写符号为本领域技术人员公知的惯用的简写符号。在本说明书中，使用下述的简写符号。
(A-taPhos)2PdCl2：双[二-叔丁基(4-二甲基氨基苯基)膦]二氯化钯(II)
1H-NMR：质子核磁共振波谱术
Bn：苄基
Boc：叔丁氧基羰基
Bu：丁基
DAST：三氟化N，N-二乙基氨基硫
DCM：二氯甲烷
DDQ：2，3-二氯-5，6-二氰基-对-苯醌
DIPEA：N，N-二异丙基乙胺
DMAP：N，N-二甲基-4-氨基吡啶
DME：二甲氧基乙烷
DMF：N，N-二甲基甲酰胺
DMSO：二甲基亚砜
HPLC：高速液相色谱
LC-MS：液相色谱-质谱
MS：质谱
m-：间
n-：正
NBS：N-溴琥珀酰亚胺
NMP：N-甲基-2-吡咯烷酮
o-：邻
p-：对
PPTS：吡啶鎓对甲苯磺酸盐
PyBOP：六氟磷酸(苯并三唑-1-基氧基)三吡咯烷基鏻盐
sec：仲
t-：叔
tert：叔
TBAF：四正丁基氟化铵
TBS：叔丁基二甲基甲硅烷基
TEA：三乙胺
Tf：三氟甲基磺酰基
TFA：三氟醋酸
THF：四氢呋喃
XPhos：2-二环己基膦基-2’，4’，6’-三异丙基联苯
所谓术语“烷基”，是指作为直链或分支链的饱和烃链的1价的基团。在本实施方式的荧光色素中，烷基具有1～6个碳原子。在本说明书中，将具有1～6个碳原子的烷基称为“C1～C6的烷基”。作为C1～C6的烷基，例如可列举出甲基、乙基、1-丙基、2-丙基、1-丁基、2-甲基-1-丙基、2-丁基、2-甲基-2-丙基(叔丁基)、1-戊基、2-戊基、3-戊基、2-甲基-2-丁基、3-甲基-2-丁基、3-甲基-1-丁基、2-甲基-1-丁基、1-己基、2-己基、3-己基、2-甲基-2-戊基、3-甲基-2-戊基、4-甲基-2-戊基、3-甲基-3-戊基、2-甲基-3-戊基、2，3-二甲基-2-丁基、3，3-二甲基-2-丁基和己基，但并不限定于这些。
所谓术语“环烷基”，是指3～10个碳原子的饱和环式烃基。作为环烷基，例如包含环丙基、环丁基、环戊基、环辛基等单一环结构、或金刚烷基、十氢萘基等多环结构。
所谓术语“杂烷基”，是指利用选自氧、氮和硫中的杂原子将上述烷基中的结合端以外的1个以上的碳原子替换的基团。所谓术语“烷氧基”，是指烷基-O-基。所谓术语“烷硫基”，是指烷基-S-基。烷基的定义如上所述。所谓“羟基烷基”，是指被至少1个、例如1～3个羟基取代的烷基。
所谓术语“芳基”，是指具有1个以上的封闭环、其中的1个或多个环可独立地稠合和/或桥连的芳族碳环式基团。例如可列举出苯基、萘基、蒽基、菲基、联苯基和芘基，但并不限定于这些。所谓“杂芳基”，是指在环中的至少1个中含有选自氧、氮和硫中的1个以上的杂原子、这些环中的至少1个为芳族、其中的1个或多个环可独立地稠合和/或桥连的、具有1个以上的封闭环的环状基团。例如可列举出喹啉基、异喹啉基、吲哚基、呋喃基、噻吩基、吡唑基、喹喔啉基、吡咯基、吲唑基、噻吩并[2，3-c]吡唑基、苯并呋喃基、吡唑并[1，5-a]吡啶基、噻吩并吡唑基、苯并噻吩基、苯并噻唑基、噻唑基、2-苯基噻唑基、异噁唑基等，但并不限定于这些。
所谓术语“卤素”，是指氟、氯、溴或碘。所谓术语“卤代烷基”，是指用本说明书中规定的1个以上的卤素取代的本说明书中所定义的烷基。在卤代烷基中，1个以上的卤素可以相同，也可不同。
所谓术语“氨基”，是指-NH2基。
所谓术语“杂环”，是指包含1个以上的杂原子的、饱和或部分地不饱和的环系。杂环可以是单环式、二环式或三环式基团。杂环能够也包含与环结合的氧代基(＝O)或硫代基(＝S)。本说明书中，在对于式(I)中的作为杂环的A提及的情况下，记载为“杂环A”或只记载为“A”。
术语“反应基团”是指对于要用本实施方式的荧光色素标记的规定的物质具有反应性的官能团。作为本实施方式的荧光色素中的反应基团R，例如可列举出羟基、羧基、磺酸、不饱和酰亚胺、不饱和酰胺、不饱和酯、羧酸的活化酯、胺、醇、腈、硫醇、硼酸酯、亚磷酰胺、卤代烷基、卤代磺酰基、在α位具有卤素的酰胺或酯、异氰酸酯、异硫氰酸酯、叠氮化物、醛、酰基腈、可光活化的基团等，但并不限定于这些。
在本说明书中记载的化合物中存在2个以上的取代基的情况下，各取代基的定义与其他取代基的定义独立。取代基的种类和取代基的数的组合只在这样的组合带来化学上稳定的化合物的情形下是容许的。
[1.荧光色素]
本发明人发现：在具有Si若丹明骨架的荧光色素中，如果赋予以Si原子作为螺原子的螺环结构，则该荧光色素的占空比(duty cycle)降低。所谓占空比，如实验例2中所述那样，是指荧光色素的相对于明灭持续时间的发光时间的合计的比率。如果占空比小，则荧光色素更零星地发光，因此变得容易检测该荧光色素的1分子发光。因此，占空比小的荧光色素适于超分辨率显微镜法。本发明人采用降低具有这样的Si若丹明骨架的荧光色素的占空比的技术，得到了由上述的式(I)表示的化合物或其互变异构体、或者其盐构成的本实施方式的荧光色素。
在进一步的实施方式中，在R1、R2、R3、R4、R5、R6、R7、R8、R9、R10和R11中，可具有取代基的C1～C6的烷基、可具有取代基的C1～C6的杂烷基、可具有取代基的C1～C6的烷氧基、和可具有取代基的C1～C6的烷硫基的取代基均可独立地选自卤素、C1～C6的烷氧基、C1～C6的烷硫基、氨基、芳基、杂芳基、-CO2H和-SO3H。另外，在R1、R2、R3、R4、R5、R6、R7、R8、R9、R10和R11中，可具有取代基的氨基、可具有取代基的含N的杂环、可具有取代基的芳基和可具有取代基的杂芳基的取代基均可独立地选自卤素、C1～C6的烷基、C1～C6的羟基烷基、C1～C6的烷氧基、C1～C6的烷硫基、氨基、芳基、杂芳基、-CO2H和-SO3H。
在进一步的实施方式中，在式(I)中，X为-NR1R2，Y1为＝N+R3R4。这种情况下，在式(I)中，R1、R2、R3和R4优选独立地为可具有取代基的C1～C6的烷基或可具有取代基的C1～C6的含O的杂烷基。其中，在式(I)中，R1与R2、和R3与R4的组合均可与它们结合的N一起来形成可具有取代基的含N的杂环。作为该含N的杂环，可列举出氮杂环丁烷环、吡咯烷环、哌啶环、吗啉环、氧氮杂环庚烷环。进而，R1与R2、和R3与R4可在2处以上连结，这种情况下含N的杂环形成桥连环。作为该桥连环，可列举出7-氮杂双环[2.2.1]庚烷环等。在有的实施方式中，R1、R2、R3和R4中的取代基各自为未取代、或者卤素或C1～C6的烷氧基取代。
在进一步的实施方式中，在式(I)中，X为羟基，Y1为＝O。
在本实施方式中，杂环A为可具有取代基的、含Si原子作为杂原子、具有4～7个碳原子的杂环。在本说明书中，将具有4～7个碳原子的杂环称为“C4～C7的杂环”。杂环A在环中可进一步含有Si原子以外的杂原子(例如氧、氮、硫)。例如，杂环A可被从卤素、C1～C6的烷基、C1～C6的卤代烷基、C1～C6的烷氧基、C1～C6的烷硫基、氨基、芳基、杂芳基、-CO2H和-SO3H中独立地选择的1个以上的取代基取代。杂环A优选为单环式，例如可列举出以下的环，但并不限定于这些。以下所示的环可具有取代基。
【化2】
在有的实施方式中，杂环A为以下所示的C4或C5的杂环。以下所示的环可具有取代基。
【化3】
在另外的实施方式中，杂环A为未取代。
在进一步的实施方式中，在式(I)中，R8和R11为H。
在进一步的实施方式中，在式(I)中，R7为-CO2 -。这种情况下，式(I)的化合物的互变异构体为由以下的式(II)表示的化合物。在式(II)中，Y2为羟基或-NR3R4，A、X、R5、R6和R8～R11的定义与式(I)相同。
【化4】
本实施方式中，L可为饱和或部分地不饱和。在进一步的实施方式中，-L-R为-CONH-L’-R。L’为具有1～13个非氢原子的、直链、分支链、环或它们的任意的组合结构的2价的连接基。其中，在连接基中存在1个以上的杂原子的情况下，作为从酯、胺、酰胺、醚、硫醚和羰基中独立地选择的1个以上的基团含有该杂原子。L和L’中的胺为仲胺或叔胺。在有的实施方式中，L-R为-CONH-(CH2)n-R(n为1至13的整数)。在另外的实施方式中，n为1至6的整数，在进一步的实施方式中，n为1、2或3。在有的实施方式中，L为-CONH-C2H4-(C2H4O)m-R(m为1、2或3)。在有的实施方式中，R为1-马来酰亚胺。
在有的实施方式中，R9和R10中的任一个为以下所示的任一个基团。
【化5】
这种情形的R9和R10中的剩余基团为与-L-R不同的基团。在有的实施方式中，该剩余基团为氢；卤素；可被从卤素、C1～C6的烷氧基和C1～C6的烷硫基中独立地选择的1个以上的取代基取代的C1～C6的烷基；或者可被从C1～C6的烷基和C1～C6的羟基烷基中独立地选择的1个以上的取代基取代的氨基。
作为优选的式(I)的化合物或其互变异构体，例如可列举出由以下的结构式表示的化合物，但本实施方式的荧光色素并不限定于这些。
【化6】
【化7】
＜一般制造法＞
接下来，对式(I)的化合物或其盐的合成法进行说明。
式(I-2)的化合物能够由式(I)的R7为COO-并且R9或R10中的任一个为COOH的式(I-1)的化合物、采用方案1-1中所示的方法合成。
方案1-1
【化8】
式中，A、X、Y1和R5～R11与式(I)的定义相同，L’为具有1～13个非氢原子的、直链、分支链、环或它们的任意的组合结构的2价的连接基，其中，在连接基中存在1以上的杂原子的情况下，作为从酯、胺、酰胺、醚、硫醚和羰基中独立地选择的1个以上的基团含有该杂原子。R12表示选自H、卤素、可具有取代基的C1～C6的烷基、可具有取代基的C1～C6的烷氧基、可具有取代基的C1～C6的烷硫基、可具有取代基的氨基、可具有取代基的芳基、可具有取代基的杂芳基、SO3H和SO3 -中的基团。另外，式(I-1)、(a)和(I-2)可组成盐，作为盐，并无特别限定，例如可利用TFA盐。式(a)的化合物可采用已知的方法合成，或者可使用市售品。作为市售品，例如能够利用N-(2-氨基乙基)马来酰亚胺TFA盐等。步骤1中所示的反应意指一般的酰胺化反应，根据需要能够使用缩合剂。作为缩合剂，例如能够使用PyBOP等。作为反应中使用的溶剂，只要为非活性，则并无特别限制，例如能够利用THF、DME、DMF、NMP、DMSO或它们的混合物等。为了促进反应，可加入碱，作为碱，能够利用TEA、DIPEA或吡啶等，但并无特别限制。
作为另外的方法，如方案1-2中所示那样，也能够在最终阶段构筑马来酰亚胺部位。
方案1-2
【化9】
式中，A、X、Y1、L’和R5～R12与方案1-1的定义相同。P1表示保护基，并无特别限定，例如能够使用Boc基。式(I-1)、(b)、(c)、(I-3)和(I-2)可组成盐，作为盐，并无特别限定，例如可利用TFA盐。式(b)的化合物可采用已知的方法合成，另外，也能够使用市售品。步骤1意指酰胺化，与方案1-1中所示的步骤1相同。步骤2意指脱保护反应，在P1为Boc的情况下，能够利用TFA。步骤3意指马来酰亚胺基的构筑，通过在碱性条件下使2，5-二氧代-2，5-二氢-1H-吡咯-1-羧酸甲酯作用，从而能够合成式(I-2)的化合物。作为溶剂，只要为非活性，则并无限定，例如能够利用THF、1，4-二噁烷、二乙醚等。作为碱，并无特别限定，例如能够利用碳酸氢钠水溶液等。
通过对由式(I-1)、(c)、(I-3)和(I-2)表示的化合物进行适当的处理，从而能够作为方案1-3中由式(II-1)、(d)、(II-3)和(II-2)表示的螺内酯体分别离析。另外，通过使它们在适当的缓冲液中溶解，从而能够以方案1-3所示的平衡状态存在。
方案1-3
【化10】
式(I-1)、(c)、(I-3)和(I-2)与方案1-2的定义相同。式(II-1)、(d)、(II-3)和(II-2)中的A、X、Y2、R5～R11为与式(II)相同的定义，L’和R12与方案1-2的定义相同。
式(I-1)的化合物能够采用方案2-1中所示的方法由式(e)和式(f)的化合物合成。
方案2-1
【化11】
式(e)和式(f)的化合物的A、X、Y1和R5～R11与式(II)的定义相同，式(I-1)与方案1-1的定义相同。式(e)的X和Y2优选分别为NR1R2和NR3R4，R1～R4与式(II)的定义相同。式(I-1)的X和Y1优选分别为NR1R2和N+R3R4，R1～R4与式(I)的定义相同。步骤1意指接着缩合反应的氧化反应，溶剂能够使用二甲苯或醋酸等，作为氧化剂，能够使用溴化铜。通过加热来促进反应，通常在80℃至140℃下进行，根据需要也能够使用利用微波的加热。
式(I-1)中X为NR1H、Y1为N+R3H的式(I-4)的化合物能够采用方案2-2中所示的方法由式(g)和式(f)的化合物制造。
方案2-2
【化12】
由式(f)、式(h)和式(I-4)表示的化合物的R1～R12和A与方案1-1的定义相同。I式(g)的R1～R5与式(II)的定义相同，P2和P3表示相同或不同的保护基。作为保护基，并无特别限定，例如能够利用烯丙基等。步骤1为与方案2-1相同的反应，步骤2意指脱保护反应。作为脱保护反应，例如在P2和P3为烯丙基的情况下，能够在四(三苯基膦)钯(0)存在下使用1，3-二甲基巴比妥酸。作为溶剂，只要为非活性，则并无特别限定，例如能够使用DCM等。
方案2-1中使用的式(e)的化合物能够采用以下的方法合成。
方案2-3
【化13】
式中，环A、X、Y2、R5和R6与方案2-1的定义相同，hal表示卤素。通过使烷基金属试剂作用于式(i)和式(j)的化合物，接下来与由式(k)表示的环状二氯硅烷试剂反应，从而能够合成式(e)的化合物。式(i)和式(j)的化合物能够使用市售的产品，也能够采用已知的方法合成。作为卤素，能够使用溴等。作为烷基金属试剂，能够使用正丁基锂等。作为溶剂，只要为非活性，则并无特别限定，例如能够使用THF或二乙醚等。就反应温度而言，通常在室温以下实施，优选为0℃。
方案2-2中使用的式(g)的化合物能够采用以下的方法合成。
方案2-4
【化14】
式中，环A、R1、R3、R5、R6、P2和P3与方案2-2的定义相同，hal表示卤素。步骤1与方案2-3中所示的方法相同。式(l)和式(m)的化合物能够使用市售的产品，也能够采用已知的方法或制造例中记载的方法合成。
方案2-1和方案2-2中使用的式(f)的制造方法并不限定于一个，例如能够采用以下的方法合成。
方案2-5
【化15】
式中，R8～R12与方案2-1的定义相同，hal表示卤素。P4表示相同或不同的保护基。作为保护基，并无特别限定，例如能够利用叔丁基。式(n)的化合物能够使用市售的产品，也能够采用已知的方法或制造例中记载的方法合成。在保护基P4为叔丁基的情况下，式(o)的化合物能够通过将式(n)的化合物的羧基转换为酰氯后使叔丁醇钾作用而得到。作为溶剂，只要为非活性，则并无特别限定，例如能够利用二氯甲烷、THF或它们的混合溶剂等。作为反应温度，通常能够在0℃至室温下进行。作为另外的方法，通过在DMAP存在下使式(n)的化合物与二碳酸二叔丁酯反应，从而能够得到式(o)的化合物。作为溶剂，只要为非活性，则并无特别限定，例如能够利用THF、二乙醚、DMF、二氯甲烷、甲苯、1，4-二噁烷或它们的混合溶剂等。作为反应温度，通常通过进行加热而加速，能够在室温至溶剂沸点下进行。式(p)的化合物能够由式(o)的化合物和三正丁基(1-丙烯基)锡、采用右田·小杉·斯蒂尔交叉偶合反应得到。作为卤素，并无特别限定，例如能够使用溴。作为催化剂，能够使用四(三苯基膦)钯(0)。作为溶剂，能够使用NMP。作为反应温度，通常通过进行加热而加速，优选地，能够在120℃下进行。式(p)的化合物通常作为几何异构体的混合物得到，对各个异构体的存在比率并无特别限定。式(q)的化合物能够通过使式(p)的化合物的1-丙烯基氧化开裂而得到。作为氧化剂，并无特别限定，例如能够通过将式(p)的化合物在含水溶剂中溶解，加入碱、催化剂量的四氧化锇和过量的高碘酸钠而得到。作为溶剂，只要为非活性，则并无特别限定，例如能够使用1，4-二噁烷。作为碱，能够使用2，6-二甲基吡啶。式(f)的化合物能够通过使式(q)的化合物脱保护而得到。对反应条件并无特别限定，例如在保护基P4为叔丁基的情况下，能够使用TFA。
方案2-5的式(n)、式(o)和式(p)的R12为hal时，步骤3中所合成的化合物表示为方案2-6的式(r)。式(q)的化合物也能够采用方案2-6的方法、由式(r)的化合物合成。
方案2-6
【化16】
式中，R8～R11、hal和P4与方案2-5的定义相同。新引入的R12与方案1-1的定义相同，优选为可具有取代基的C1～C6的烷氧基、可具有取代基的C1～C6的烷硫基。作为卤素，并无特别限定，例如能够使用氟等。步骤1意指芳族亲核取代反应，作为由式(s)表示的化合物，能够利用甲醇钠、或甲硫醇钠等。作为溶剂，只要为非活性，则并无特别限定，例如能够使用THF、乙醚或甲醇或者它们的混合物等。
在方案2-5的式(n)的R12为hal时，式(n)能够表示为方案2-7的式(t)。也能够由式(t)的化合物、采用方案2-7中所示的方法制造式(o)的化合物。
方案2-7
【化17】
式中，R8～R11、P4与方案2-5的定义相同。hal为相同或不同的卤素，优选为溴。新转换的R12与方案1-1的定义相同，优选为可具有取代基的C1～C6的烷基。式(t)的化合物能够使用市售的产品，也能够采用已知的方法合成。式(u)的化合物能够采用与方案2-5的步骤1同样的方法得到。式(v)的化合物能够通过对式(u)的二个hal中的一个选择性地引入丙烯基而合成。具体地，能够由式(u)的化合物和三正丁基(1-丙烯基)锡、采用右田·小杉·斯蒂尔交叉偶合反应合成。作为催化剂，能够使用四(三苯基膦)钯(0)。作为溶剂，能够使用NMP。作为反应温度，通常通过加热而加速，优选地，能够在120℃下进行。式(v)的化合物通常作为几何异构体的混合物得到，对各个异构体的存在比率并无特别限定。式(w)的化合物能够采用与方案2-5的步骤3同样的方法合成。能够由式(w)的化合物的醛基，经由步骤4，采用各种方法转换为R12。步骤4可以是单一的工序，或者可以是多个工序。作为单一的工序，例如通过使DAST作用于式(w)的化合物，能够衍生为二氟甲基。作为多个工序，例如使氢化硼钠作用于式(w)的化合物后，将得到的醇通过阿佩尔反应转换为溴，进而通过用甲醇钠置换，从而能够转化为甲氧基甲基。
式(f)的化合物能够通过互变异构而取得式(x)的结构。通常，作为两化合物的混合物得到，对其存在比率并无特别限定。
方案2-8
【化18】
由式(h)表示的化合物通过进行适当的处理，从而能够作为方案2-9中由式(y)表示的螺内酯体离析。另外，通过使它们在适当的缓冲液中溶解，从而能够以方案2-9所示的平衡状态存在。
方案2-9
【化19】
式中，A、R1～R12、P2和P3与方案2-2的定义相同。
式(I-1)的化合物也能够采用方案3-1中所示的方法合成。
方案3-1
【化20】
式中，环A、X、Y1和R1～R12为与方案1-1相同的定义，hal和P4为与方案2-5相同的定义。P5表示相同或不同的保护基。作为保护基P4，并无特别限定，例如能够利用叔丁基。作为保护基P5，并无特别限定，例如能够利用TBS基等。作为卤素，能够利用溴。式(I-1)的化合物可组成盐，作为盐，并无特别限定，例如可利用TFA盐。通过使烷基金属试剂作用于式(o)的化合物，接下来加入式(z)的化合物，从而能够合成式(aa)的化合物。作为烷基金属试剂，能够利用正丁基锂。反应温度通常在室温以下进行，能够在-100℃至室温下进行。作为溶剂，只要为非活性，则并无特别限定，例如能够使用THF、正己烷和它们的混合物。作为催化剂，也能够加入路易斯酸。作为路易斯酸，能够使用三氟化硼二乙醚络合物。式(ab)的化合物能够通过对式(aa)的化合物的保护基P5进行脱保护而合成。在保护基P5为TBS基的情况下，例如能够用TBAF进行脱保护。作为溶剂，只要为非活性，则并无特别限定，例如能够使用THF。式(ac)的化合物能够通过使三氟甲磺酸酐作用于式(ab)的化合物而合成。作为碱，并无特别限定，例如能够使用吡啶。作为溶剂，只要为非活性，则并无特别限定，例如能够使用二氯甲烷等。X为NR1R2、Y1为N+R3R4时，式(ad)的化合物能够由式(ac)的化合物、通过布赫瓦尔德-哈特维希反应进行合成。作为用于反应的钯催化剂，例如能够使用四(三苯基膦)钯(0)、醋酸钯(II)、三(亚苄基丙酮)二钯(0)或(A-taPhos)2PdCl2等，根据需要能够加入XPhos等磷配体。作为碱，能够使用碳酸铯、叔丁醇钠、叔丁醇钾等。作为溶剂，能够使用1，4-二噁烷、甲苯、THF等。反应通常通过加热而促进，通常能够在封管中100℃～120℃下进行。另外，根据需要，也能够使用采用微波的加热。式(I-1)的化合物能够通过对式(ad)的保护基P4进行脱保护而合成。在P4为叔丁基时，能够使用TFA。
式(o)的R12为hal时，式(o)也能够表示为方案3-2的式(u)。式(aa)的化合物也能够由式(u)的化合物、采用方案3-2中所示的方法合成。
方案3-2
【化21】
式中，环A、P4、P5、R5～R12与方案3-1的定义相同，hal为相同或不同的卤素。作为式(ae)的化合物的hal，并无特别限定，例如能够利用氯。步骤1为与方案3-1的步骤1同样的反应，能够通过在式u的二个卤素中选择性地只对一个进行金属交换而实现。步骤2中新引入的R12与方案1-1的定义相同，优选为可具有取代基的C1～C6的烷基。作为步骤2中引入R12的方法，并无特别限定，例如能够使用铃木-宫浦交叉偶合或右田·小杉·斯蒂尔交叉偶合反应。作为钯催化剂，例如能够使用四(三苯基膦)钯(0)、三(亚苄基丙酮)二钯(0)或(A-taPhos)2PdCl2等，根据需要能够加入XPhos等磷配体。在铃木-宫浦交叉偶合的情况下，通过加入无机碱水溶液，从而促进反应，作为碱，能够使用碳酸钾。作为溶剂，能够使用1，4-二噁烷或DMF等。作为R12，并无特别限定，例如能够使用三甲基环三硼氧烷或四甲基锡。反应通过加热而促进，通常在100℃至180℃下进行，根据需要，也能够使用采用微波的加热。
方案3-1的式(o)、式(aa)、式(ab)和式(ac)的R12为hal时，式(ac)能够表示为方案3-3的式(af)。式(I-1)的化合物也能够由式(af)的化合物、采用方案3-3中所示的方法合成。
方案3-3
【化22】
式中，环A、X、Y1、hal、P4和R1～R11与方案3-1的定义相同。作为hal，并无特别限定，例如能够利用氯。R12与方案1-1的定义相同，优选为可具有取代基的氨基。式(I-1)的化合物可组成盐，作为盐，并无特别限定，例如可利用TFA盐。步骤1为与方案3-1的步骤4相同的反应，不仅是OTf，hal也能够同时置换。步骤2为与方案3-1的步骤5相同的反应，不仅是保护基P4的脱保护，也能够进行从X到R12的转换。作为X，只要能够实现上述工序，则并无特别限定，例如能够利用氮杂环丁烷-1-基。另外，作为此时转换得到的R12，能够利用3-羟基丙基氨基。
方案3-4
方案3-1和方案3-2中使用的式(z)的化合物能够采用以下的方法合成。
【化23】
式中，环A、hal、P5和R5～R6与方案3-1的定义相同。作为卤素，例如能够使用溴。作为保护基P5，并无特别限定，例如能够使用TBS基。通过使烷基金属试剂作用于采用已知的方法合成的式(ah)的化合物，接下来与由式(k)表示的环状二氯硅烷试剂反应，从而能够合成式(ai)的化合物。作为烷基金属试剂，能够使用仲丁基锂。作为溶剂，只要为非活性，则并无特别限定，例如能够使用THF等。就反应温度而言，能够在-78℃至室温下进行。式(z)的化合物能够通过使氧化剂作用于式(ai)的化合物而合成。作为氧化剂，能够使用高锰酸钾、DDQ、四氯对苯醌等。作为溶剂，只要为非活性，则并无特别限定，例如能够使用二氯甲烷、甲醇、1，4-二噁烷、丙酮、水和它们的混合溶剂等。
通过对式(z)的保护基P5进行脱保护，从而能够合成式(aj)的化合物。
方案3-5
【化24】
式中，环A、P5、R5～R6与方案3-1的定义相同。作为P5，例如能够利用TBS。在P5为TBS的情况下，在步骤1中能够利用TBAF。
在方案3-4的步骤2中，通过在反应中或后处理的过程中将保护基P5移除，从而也能够由式(ai)的化合物直接合成式(aj)。通过用任意的保护基P5保护式(aj)的羟基，从而也能够合成式(z)的化合物。
方案3-6
【化25】
式中，环A、R5～R6与方案3-1的定义相同。P5意指彼此相同或不同的保护基。作为式(ai)的P5，只要能够容易地脱保护，则并无特别限定，例如能够使用TBS基。步骤1为与方案3-4的步骤2同样的工序，在同时发生的脱保护反应不充分的情况下，根据需要，也能够对粗产物进行脱保护反应。例如在保护基P5为TBS基的情况下，通过使TBAF作用于得到的粗产物，从而能够得到式(aj)的化合物。作为步骤2中引入的保护基P5，并无特别限定，例如能够使用TBS基。在式(z)的P5为TBS的情况下，在步骤2中能够利用TBSCl。作为溶剂，只要为非活性，则并无特别限定，例如能够使用DMF、二氯甲烷或它们的混合物。作为碱，能够使用咪唑。
通过对由式(ad)和(ag)表示的化合物进行适当的处理，从而能够作为方案3-7的式(ak)和(al)所示的螺内酯体离析。另外，通过使它们在适当的缓冲液中溶解，从而能够以方案3-7所示的平衡状态存在。式(ad)与方案3-1的定义相同，式(ag)与方案3-3的定义相同。式(ak)和(al)的A、X、Y1、R5～R11为与式(II)相同的定义，P4和R12与方案3-1的定义相同。
方案3-7
【化26】
式(I-1)中X为OH、Y1为O的式(I-5)的化合物也能够采用方案3-8中所示的方法合成。
方案3-8
【化27】
式中，环A和R1～R12为与方案1-1相同的定义，hal和P4为与方案2-5相同的定义。P5表示相同或不同的保护基。作为保护基P4，并无特别限定，例如能够使用叔丁基。作为保护基P5，并无特别限定，例如能够利用TBS基等。作为卤素，并无特别限定，例如能够使用溴。式(I-5)的化合物可组成盐，作为盐，并无特别限定，例如可利用TFA盐。通过使烷基金属试剂作用于式(o)的化合物，接下来加入式(z)的化合物，从而能够合成式(aa)的化合物。作为烷基金属试剂，例如能够利用正丁基锂。就反应温度而言，通常在室温以下进行，能够在-100℃至室温下进行。作为溶剂，只要为非活性，则并无特别限定，例如能够使用THF、正己烷和它们的混合物。作为催化剂，也能够加入路易斯酸。作为路易斯酸，能够使用三氟化硼二乙醚络合物。式(ab)的化合物能够通过对式(aa)的化合物的保护基P5进行脱保护而合成。在保护基P5为TBS基的情况下，例如能够用TBAF进行脱保护。作为溶剂，只要为非活性，则并无特别限定，例如能够使用THF。式(I-5)的化合物能够通过对式(ab)的保护基P4进行脱保护而合成。在P4为叔丁基时，能够使用TFA。
式(I-1)中X为NR1R2、Y1为N+R3R4的式(I-6)的化合物也能够采用方案4-1中所示的方法合成。
方案4-1
【化28】
式中，X和Y1分别为NR1R2和N+R3R4，A和R1～R12与方案1-1的定义相同。hal意指卤素，优选为溴。式(ao)的化合物也能够在与式(ap)的化合物的平衡状态下存在，也能够作为混合物得到。另外，式(an)和式(ao)的化合物也能够作为盐得到。通过在使烷基金属试剂作用于式(an)的化合物后加入式(am)的化合物，从而能够得到式(ao)的化合物。烷基金属试剂能够使用叔丁基锂。作为溶剂，只要为非活性，则并无特别限定，例如能够使用THF等。就反应温度而言，能够在-78℃至室温下进行。通常式(ao)的化合物在没有离析的情况下就能够进入下一工序。通过将式(ao)的化合物的4，4-二甲基-4，5-二氢噁唑基变换为羧基，从而能够合成式(I-6)的化合物。作为反应条件，并无特别限定，通常能够利用酸水解反应。作为酸，并无特别限定，例如能够使用5N盐酸。反应通常通过加热而加速，能够在80℃至溶剂沸点下进行。
方案4-1中使用的式(am)的化合物能够采用以下的方法合成。
方案4-2
【化29】
式中，环A和R1～R6与方案4-1的定义相同，hal表示卤素。式(aq)和式(ar)的化合物能够使用市售的产品，也能够采用已知的方法或制造例中记载的方法合成。作为卤素，并无特别限定，能够使用溴。式(as)的化合物能够通过在酸性条件下使式(aq)和式(ar)的化合物的混合物与甲醛反应而合成。作为溶剂，能够使用醋酸。作为反应温度，通常通过加热来促进反应，能够在50℃至120℃下进行。式(at)的化合物能够通过使烷基金属试剂作用于式(as)的化合物，接下来与由式(k)表示的环状二氯硅烷试剂反应而合成。作为烷基金属试剂，能够使用仲丁基锂。作为溶剂，只要为非活性，则并无特别限定，例如能够使用THF等。作为反应温度，能够在-78℃至室温下进行。式(am)的化合物能够通过使氧化剂作用于式(at)的化合物而合成。作为氧化剂，能够使用高锰酸钾、DDQ、四氯对苯醌等。作为溶剂，只要为非活性，则并无特别限定，例如能够使用二氯甲烷、甲醇、1，4-二噁烷、丙酮、水和它们的混合溶剂等。
式(am)的化合物也能够采用方案4-3的方法合成。
方案4-3
【化30】
式中，环A和R1～R6与方案4-1的定义相同。式(au)的化合物能够通过使式(aj)的化合物与三氟甲磺酸酐反应而合成。作为碱，能够使用吡啶。作为溶剂，只要为非活性，则并无特别限定，例如能够使用二氯甲烷等。式(am)的化合物能够由式(au)的化合物、通过布赫瓦尔德-哈特维希反应合成。作为用于反应的钯催化剂，例如能够使用四(三苯基膦)钯(0)、醋酸钯(II)、三(亚苄基丙酮)二钯(0)或(A-taPhos)2PdCl2等，根据需要能够加入XPhos等磷配体。作为碱，能够使用碳酸铯、叔丁醇钠、叔丁醇钾等。作为溶剂，能够使用1，4-二噁烷、甲苯、THF等。通过加热来促进反应，通常能够在封管中100℃～120℃下进行。另外，根据需要，也能够使用采用微波的加热。式(av)和式(aw)的化合物能够利用市售的产品，也能够采用已知的方法或制造例中记载的方法合成。
[2.标识复合化物质]
在本发明的范围中，也包含本实施方式的荧光色素与复合化物质结合而成的标识复合化物质。其中，所谓复合化物质，是指能够与本实施方式的荧光色素通过共价键结合的物质。作为复合化物质，例如为表面(例如珠粒、固体载体、树脂、粒子或酶联板)、生物学的分子或生物体分子(例如蛋白质、核苷酸、多核苷酸、包含DNA和RNA的核酸、酶底物、抗体、纳米抗体、多肽、多肽系毒素、氨基酸、脂质、碳水化合物、半抗原、金属螯合剂等离子络合物化剂、微粒、合成聚合物或天然聚合物、细胞、病毒、其他荧光分子或表面)、小分子(例如药剂、药剂化合物)、或者例如氯烷烃或氰基苯并噻唑等其他感兴趣的部分。在其他的适合的复合化物质中，包含镧系元素络合物化基团(group)；镍络合物化基团；钴络合物化基团；乙二胺四乙酸；次氮基三乙酸；核苷酸；酶底物；酶的抑制剂，优选地与酶形成共价键的不可逆性的酶的抑制剂；受体激动剂；以10μM以上的KD与核酸结合的配体；以10μM以上的KD与蛋白质结合的配体；SNAP-标签的底物；CLIP-标签的底物；Halo-标签的底物，与二氢叶酸还原酶结合的配体；甲氨蝶呤；曲美普林；生物素连接酶的底物；磷酸肽转移酶的底物；硫辛酸连接酶的底物；生物素；与链霉亲和素、亲和素或中性亲和素结合的配体；酶的辅助因子；激素；毒素；荧光团；核酸聚合物；半抗原；抗原；药剂；脂质；脂质装配体；非生物有机聚合物；聚合物微粒；动物细胞、植物细胞；细菌、酵母；病毒；和原生生物，但并不限定于这些。在优选的实施方式中，复合化物质为蛋白质或核酸。
对本实施方式的荧光色素中的与复合化物质的结合部位并无特别限定，优选为R7、R8、R9、R10和R11中的至少1个，更优选为R8、R9和R10中的至少1个。特别优选地，本实施方式的荧光色素中的与复合化物质的结合部位为作为-L-R的R8、R9或R10的反应基团R。
[3.组合物]
在本发明的范围中也包括包含本实施方式的荧光色素或标识复合化物质的组合物(以下也简称为组合物)。本实施方式的组合物可以是用于超分辨率显微镜法的试剂组合物。所谓超分辨率显微镜法，是使用了作为具有超过光的衍射限度的分辨能力的显微镜的超分辨率显微镜的成像技术，在该技术领域中是公知的。
本实施方式的荧光色素具有互变异构性，形成了分子内螺环的状态(闭环体)与该螺环开裂了的状态(开环体)处于平衡。因此，本实施方式的荧光色素具有自发地明灭的性质。因此，本实施方式的组合物优选为在作为超分辨率显微镜法的一种的定位显微镜法中使用的试剂组合物。其中，所谓定位显微镜法(Localization microscopy)，是以光活化定位显微镜法(Photoactivated localization microscopy；PALM)、明灭辅助型定位显微镜法(Blinking assisted localization microscopy；BALM)、PAINT法(Pointsaccumulation for imaging in nanoscale topography)为代表的基于荧光体的一分子发光的检测的超分辨率显微镜法。在定位显微镜法中，首先，使被检测物质与可进行发光状态和消光状态的切换的荧光体结合，以使与被检测物质结合的该荧光体在空间上不重叠的方式错开时间使其发光来摄影。然后，检测发光的荧光体的每一分子，以数十纳米的精度确定检测出的一分子的荧光体的位置。通过将这样的摄影和检测重复数千至数万次，使一分子的荧光体的位置信息重合，从而构筑被检测物质的超分辨率图像。此外，并不否定能够在作为定位显微镜法以外的超分辨率显微镜法已知的受激发射损耗显微镜法(Stimulatedemission depletion microscopy；STED)、结构化照明显微镜(Structured illuminationmicroscopy；SIM)、SOFI法(Super-resolution optical fluctuation imaging)、MINFLUX法(Minimal emission fluxes)等中使用的可能性。
本实施方式的组合物根据需要可包含试剂的制备中通常使用的添加剂。作为这样的添加剂，例如可列举出溶解辅助剂、pH调节剂、缓冲剂、等渗剂等。就添加剂的配合量而言，本领域技术人员能够适当地确定。对本实施方式的组合物的形态并无特别限定，可以是固体(粉末、结晶、颗粒、锭剂、冻结干燥品等)，也可以是液体(溶液、悬浮液、乳浊液等)。
[4.取得与被检测物质有关的信息的方法]
在本发明的范围中也包含使本实施方式的荧光色素或标识复合化物质与被检测物质结合、采用超分辨率显微镜法取得与该被检测物质有关的信息的方法(以下也称为信息取得方法)。在该方法中，能够使用公知的超分辨率显微镜。例如可列举出HM-1000(シスメックス株式会社)等。如上所述，本实施方式的荧光色素具有自发地明灭的性质，因此本实施方式的信息取得方法在超分辨率显微镜法中适于定位显微镜法。
对本实施方式的荧光色素或标识复合化物质与被检测物质的结合的方式并无特别限定，能够根据被检测物质的种类适当地确定。在被检测物质为组织、细胞、细胞小器官或生物体分子(蛋白质、核酸等)的情况下，采用生物学领域中公知的染色法，能够使本实施方式的荧光色素或标识复合化物质与被检测物质结合。作为这样的染色法，例如可列举出免疫组织化学、荧光抗体法等。
在本实施方式的信息取得方法中，由采用超分辨率显微镜法得到的被检测物质的图像能够获得与被检测物质有关的信息。与被检测物质有关的信息可以是与被检测物质的结构有关的信息，也可以是与被检测物质的量有关的信息。作为与被检测物质的结构有关的信息，例如可列举出被检测物质的大小、形态、凝集度等。作为与被检测物质的量有关的信息，例如可列举出被检测物质的存在与否、或者、被检测物质的浓度、含量(重量)和表示它们的测定值自身等。在与被检测物质的量有关的信息中，也包含如“少量”、“中等程度”、“大量”等那样阶段性地表示被检测物质的量的信息。在优选的实施方式中，与被检测物质有关的信息为与被检测物质的结构有关的信息。
以下通过实施例对本发明详细地说明，但本发明并不限定于这些实施例。
实施例
以下的实施例、参考例和制造例中的“室温”通常表示约10℃至约35℃。只要无特别说明，％表示重量％。
质子核磁共振波谱的化学位移用相对于四甲基硅烷的δ单位(ppm)记录，耦合常数用赫兹(Hz)记录。分裂模式的简写符号如下所述。
s：单重态，d：双重态，t：三重态，q：四重态，quin：五重态，m：多重态，br.s.：宽单重态。
在制造例和实施例中使用了微波反应装置的反应使用了Biotage公司制initiator(商标)。
关于硅胶柱色谱，硅胶使用了默克公司制Silica Gel60(70-230目)、富士シリシア化学公司制PSQ60B、或市售预装柱。作为预装柱，使用了YAMAZEN公司制Hi-Flash(商标)Column(Silicagel)；尺寸S(16×60mm)、M(20×75mm)、L(26×100mm)、2L(26×150mm)、3L(46×130mm)中的任一个、或者Biotage公司制Biotage(商标)SNAP Ultra SilicaCartridge；尺寸10g、25g、50g中的任一个。
关于反相色谱，使用YMC公司制YMC＊GEL ODS-A 12nm S-50μm，或者使用了市售的预装柱。作为预装柱，使用了YMC-DispoPack AT ODS-25(40g或120g)、或者Biotage公司制Biotage(商标)SNAP Ultra C18 12g。
关于薄层色谱，在记载为硅胶的情况下，使用默克公司制TLC Silica gel 60F254，在记载为NH硅胶的情况下，使用了富士シリシア化学公司制CHROMATOREX TLC Plates NH或和光纯药工业制NH2硅胶60F254板-和光(层厚0.75mm)。
关于相分离器，使用了Biotage制ISOLUTE(注册商标)Phase Separator。
以下所示的化合物的命名除了一般使用的试剂以外，使用了《E-笔记本》第12和13版(PerkinElmer公司)、或《ChemDraw Professional》第17.1版(PerkinElmer公司)中表示的命名。
以下所示的化合物的物质量使用了《E-笔记本》第12和13版(PerkinElmer公司)、或《ACD/ChemSketch 2017.2》(ACD公司)中表示的物质量。
制造例1
2-溴-5-氯对苯二甲酸二叔丁酯的合成
【化31】
在2-溴-5-氯对苯二甲酸(500mg，1.79mmol，CAS No.500550-60-7)、DCM(10.0mL)、THF(5.00mL)和DMF(1滴)的混合物中滴入草酰氯(626μL，7.16mmol)，在室温下搅拌了1小时。将溶剂减压馏除，得到了对应的酰氯。在得到的酰氯的THF(5.00mL)溶液中在冰浴下缓慢地加入叔丁醇钾(803mg，7.16mmol)，在室温下搅拌了一晚。加入冰和饱和氯化铵水溶液，使反应停止，用醋酸乙酯萃取水层。将有机层用水和饱和食盐水洗净，用无水硫酸镁干燥。将溶剂减压馏除，通过用硅胶柱色谱(正庚烷/醋酸乙酯)对得到的残渣进行精制，从而得到了标记化合物(408mg，1.04mmol)。
1H-NMR(400MHz，CDCl3)δ(ppm)：1.61(s，9H)，1.61(s，9H)，7.70(s，1H)，7.94(s，1H).
制造例2
2-溴-5-(三氟甲基)对苯二甲酸二叔丁酯的合成
【化32】
(1)5-溴-4-甲基-2-(三氟甲基)苯甲酸的合成
在4-甲基-2-(三氟甲基)苯甲酸(1.36g，6.66mmol，CAS No.120985-64-0)的硫酸(7.10mL，133mmol)溶液中加入NBS(1.19g，6.66mmol)，在室温下搅拌了一晚。在冰浴下在反应混合物中加入冰，使反应停止。通过将产生的固体回收，得到了标记化合物的粗产物(2.49g)。
1H-NMR(400MHz，DMSO-d6)δ(ppm)：2.47(s，3H)，7.86(s，1H)，8.02(s，1H).
(2)2-溴-5-(三氟甲基)对苯二甲酸的合成
在制造例2-(1)中得到的化合物(2.29g)、吡啶(13.7mL，170mmol)和水(45.8mL)的混合物中加入高锰酸钾(3.84g，24.3mmol)，在50℃下搅拌了2.3小时。进而，加入水(100mL)，在50℃下搅拌了4.2小时。进而加入高锰酸钾(10.8g，68.4mmol)，在50℃下搅拌了4.5小时。冷却到室温后，将不溶物过滤。将不溶物用稀吡啶水溶液洗净，在溶出物中加入了二甲基硫醚。将新产生的不溶物过滤，将溶出物在减压下在50℃下浓缩。将得到的残渣溶解于水(10.0mL)中，在冰浴下加入了浓盐酸。通过将产生的固体回收，从而得到了标记化合物的粗产物(2.74g)。
1H-NMR(400MHz，DMSO-d6)δ(ppm)：8.12(s，1H)，8.15(s，1H).
(3)2-溴-5-(三氟甲基)对苯二甲酸二叔丁酯的合成
将制造例2-(2)中得到的化合物(2.74g)、二碳酸二叔丁酯(7.64g，35.0mmol)、DMAP(214mg，1.75mmol)、甲苯(28.0mL)和DMF(2.80mL)的混合物在80℃下搅拌了2小时。进而，加入DMAP(214mg，1.75mmol)和二碳酸二叔丁酯(7.64g，35.0mmol)，在80℃下搅拌了3.5小时。进而，加入二碳酸二叔丁酯(3.00g，13.8mmol)，在80℃下搅拌了1.5小时。冷却到室温后，将溶剂减压馏除。通过将得到的残渣用硅胶柱色谱(正庚烷/醋酸乙酯)进行精制，从而得到了标记化合物(1.66g，3.90mmol)。
1H-NMR(400MHz，CDCl3)δ(ppm)：1.58(s，9H)，1.62(s，9H)，7.95(s，1H)，7.98(s，1H).
制造例3
2-溴-5-氟对苯二甲酸二叔丁酯的合成
将2-溴-5-氟对苯二甲酸(200mg，760μmol，CAS No.1245807-64-0)、二碳酸二叔丁酯(664mg，3.04mmol)、DMAP(18.6mg，152μmol)、甲苯(5.00mL)和DMF(500μL)的混合物在80℃下搅拌了5小时。冷却到室温后，用醋酸乙酯稀释。将有机层用水清洗2次，将溶剂减压馏除。用硅胶柱色谱(正庚烷/醋酸乙酯)对残渣进行精制，得到了标记化合物(70.0mg，187μmol)。
1H-NMR(400MHz，CDCl3)δ(ppm)：1.59(s，9H)，1.61(s，9H)，7.42(d，J＝10.54Hz，1H)，8.07(d，J＝6.64Hz，1H).
制造例4
3，7-双((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)-10H-螺[二苯并[b，e]硅宾-5，1’-硅杂环
己烷]-10-酮的合成
【化34】
(1)3，7-双((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)-10H-螺[二苯并[b，e]硅宾-5，1’-硅 杂环己烷]的合成
在双(2-溴-4-((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)苯基)甲烷(4.95g，8.44mmol，CASNo.1383118-97-5)的THF(49.8mL，608mmol)溶液中，在-78℃下历时20分钟滴入仲丁基锂(1.05M环己烷-己烷溶液，22.9mL，24.1mmol)。在相同温度下搅拌了1小时后，历时10分钟滴入了环五亚甲基二氯硅烷(2.71g，16.0mmol，CAS No.2406-34-0)的THF(19.5mL)溶液。在室温下搅拌了1小时30分钟后，加入冰和饱和氯化铵水溶液，使反应停止。用醋酸乙酯萃取水层，用水和饱和食盐水将有机层洗净。用无水硫酸镁使混合物干燥，将溶剂减压馏除。通过用硅胶柱色谱(正庚烷/醋酸乙酯)对得到的残渣进行精制，从而得到了标记化合物(3.68g，7.01mmol)。
1H-NMR(400MHz，CDCl3)δ(ppm)：0.22(s，12H)，1.01(s，18H)，1.02-1.06(m，4H)，1.66(br.s.，2H)，1.92-2.03(m，4H)，3.95(s，2H)，6.79(dd，J＝8.40，2.54Hz，2H)，7.15-7.20(m，4H).
(2)3，7-二羟基-10H-螺[二苯并[b，e]硅宾-5，1’-硅杂环己烷]-10-酮的合成
将采用制造例4-(1)的方法得到的化合物(10.1g，19.2mmol)的丙酮(505mL)溶液分注于101支13mm试验管。在冰浴下在各试验管中加入了高锰酸钾(81.3mg，514μmol、合计8.21g，51.9mmol)。在室温下搅拌了一晚后，在各试验管中加入了DCM。将生成的不溶物过滤，将溶出物收集到一个茄形烧瓶中。将溶剂减压馏除，通过将残渣用硅胶柱色谱(正庚烷/醋酸乙酯)精制，从而得到了标记化合物(1.97g，6.35mmol)。
ESI-MS m/z 311[M+H]+
(3)3，7-双((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)-10H-螺[二苯并[b，e]硅宾-5，1’-硅 杂环己烷]-10-酮的合成
在制造例4-(2)中得到的化合物(590mg，1.90mmol)的DMF(10.0mL)溶液中加入了咪唑(776mg，11.4mmol)和叔丁基二甲基氯硅烷(859mg，5.70mmol)。在室温下搅拌了一晚后，加入冰，使反应停止。将水层用醋酸乙酯萃取，将有机层用水清洗3次。将溶剂减压馏除，通过将残渣用硅胶柱色谱(正庚烷/醋酸乙酯)精制，从而得到了标记化合物(954mg，1.77mmol)。
1H-NMR(400MHz，CDCl3)δ(ppm)：0.27(s，12H)，1.02(s，18H)，0.99-1.05(m，4H)，1.71(br.s.，2H)，1.96-2.07(m，4H)，6.99(dd，J＝8.59，2.73Hz，2H)，7.22(d，J＝2.73Hz，2H)，8.36(d，J＝8.59Hz，2H).
制造例5
3-氧代-3’，7’-双(((三氟甲基)磺酰基)氧基)-3H-二螺[异苯并呋喃-1，10’-二苯
并[b，e]硅宾-5’，1’’-硅杂环己烷]-6-羧酸叔丁酯和10-氧代-10H-螺[二苯并[b，e]硅宾-
5，1’-硅杂环己烷]-3，7-二基双(三氟甲磺酸酯)的合成
【化35】
(1)3’，7’-二羟基-3-氧代-3H-二螺[异苯并呋喃-1，10’-二苯并[b，e]硅宾-5’， 1’’-硅杂环己烷]-6-羧酸叔丁酯的合成
在氮气氛下在2-溴对苯二甲酸二叔丁酯(1.54g，4.31mmol，CAS No.1456885-46-3)的THF(20.0mL)/正己烷(10.0mL)混合溶液中在内温-95℃以下滴入正丁基锂(2.65M己烷溶液、1.62mL，4.31mmol)。在相同温度下搅拌了10分钟后，在内温-95℃以下滴入制造例4-(3)中得到的3，7-双((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)-10H-螺[二苯并[b，e]硅宾-5，1’-硅杂环己烷]-10-酮(580mg，1.08mmol)的THF(10.0mL)溶液。在相同温度下搅拌了5分钟后，滴入三氟化硼二乙醚络合物(273μL，2.15mmol)。使反应混合物缓慢地升温到室温，在室温下搅拌了6小时。通过在冰浴下加入饱和氯化铵水溶液，从而使反应停止。将水层用醋酸乙酯萃取，将有机层用水和饱和食盐水清洗。将混合物用无水硫酸镁干燥，通过将溶剂馏除，从而得到了包含加成体的混合物。在得到的混合物中加入THF(10.0mL)和四丁基氟化铵(1.00M THF溶液，5.38mL，5.38mmol)，在室温下搅拌了7小时。通过在冰浴下加入饱和氯化铵水溶液，从而使反应停止。将水层用醋酸乙酯萃取，将有机层在减压下浓缩。通过将得到的残渣用硅胶柱色谱(正庚烷/醋酸乙酯)精制，从而作为与3，7-二羟基-10H-螺[二苯并[b，e]硅宾-5，1’-硅杂环己烷]-10-酮的混合物(670mg)得到了标记化合物。
ESI-MS m/z 515[M+H]+(保持时间1.48分钟)
ESI-MS m/z 311[M+H]+(保持时间1.18分钟)
(2)3-氧代-3’，7’-双(((三氟甲基)磺酰基)氧基)-3H-二螺[异苯并呋喃-1，10’- 二苯并[b，e]硅宾-5’，1’’-硅杂环己烷]-6-羧酸叔丁酯和10-氧代-10H-螺[二苯并[b，e]硅 宾-5，1’-硅杂环己烷]-3，7-二基双(三氟甲磺酸酯)的合成
在制造例5-(1)中得到的混合物(670mg)的DCM(10.0mL)溶液中，在冰浴下加入了吡啶(1.05mL，13.0mmol)和三氟甲磺酸酐(1.09mL，6.51mmol)。在室温下搅拌了一晚后，加入冰水，使反应停止。将水层用DCM萃取，将有机层用1N盐酸和水清洗。将溶剂减压馏除，通过将残渣用硅胶柱色谱(正庚烷/醋酸乙酯)精制，从而得到了3-氧代-3’，7’-双(((三氟甲基)磺酰基)氧基)-3H-二螺[异苯并呋喃-1，10’-二苯并[b，e]硅宾-5’，1”-硅杂环己烷]-6-羧酸叔丁酯(472mg，606μmol)和10-氧代-10H-螺[二苯并[b，e]硅宾-5，1’-硅杂环己烷]-3，7-二基双(三氟甲磺酸酯)(197mg，343μmol)。
3-氧代-3’，7’-双(((三氟甲基)磺酰基)氧基)-3H-二螺[异苯并呋喃-1，10’-二苯
并[b，e]硅宾-5’，1’’-硅杂环己烷]-6-羧酸叔丁酯
1H-NMR(400MHz，CDCl3)δ(ppm)：1.27-1.31(m，2H)，1.32-1.39(m，2H)，1.58(s，9H).1.79(br.s.，2H)，2.05-2.18(m，4H)，7.19-7.24(m，2H)，7.28-7.35(m，2H)，7.73(d，J＝2.73Hz，2H)，7.92(s，1H)，8.03(d，J＝7.42Hz，1H)，8.21(dd，J＝8.20，1.17Hz，1H).
10-氧代-10H-螺[二苯并[b，e]硅宾-5，1’-硅杂环己烷]-3，7-二基双(三氟甲磺酸
酯)
1H-NMR(400MHz，CDCl3)δ(ppm)：1.06-1.17(m，4H)，1.76(br.s.，2H)，2.04(br.s.，4H)，7.48(dd，J＝8.79，2.54Hz，2H)，7.70(d，J＝2.73Hz，2H)，8.53(d，J＝8.59Hz，2H).
制造例6
3-氧代-3’，7’-双(((三氟甲基)磺酰基)氧基)-3H-二螺[异苯并呋喃-1，10’-二苯
并[b，e]硅宾-5’，1’’-硅杂环己烷]-5-羧酸叔丁酯的合成
【化36】
(1)3’，7’-二羟基-3-氧代-3H-二螺[异苯并呋喃-1，10’-二苯并[b，e]硅宾-5’， 1’’-硅杂环己烷]-5-羧酸叔丁酯的合成
在氮气氛下在4-溴间苯二甲酸二叔丁酯(374mg，1.05mmol，CAS No.1431377-56-8)的THF(10.0mL)/正己烷(5.00mL)混合溶液中，在内温-95℃以下滴入正丁基锂(2.65M己烷溶液、395μL，1.05mmol)。在相同温度下搅拌了10分钟后，在内温-95℃以下滴入制造例4-(3)中得到的3，7-双((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)-10H-螺[二苯并[b，e]硅宾-5，1’-硅杂环己烷]-10-酮(94.0mg，174μmol)的THF(5.00mL)溶液。在相同温度下搅拌了10分钟后，滴入三氟化硼二乙醚络合物(44.0μL，349μmol)。使反应混合物升温至-78℃，在相同温度下搅拌了2小时。使反应混合物升温至-45℃，在相同温度下搅拌了1小时20分钟。使反应混合物升温至-20℃，在相同温度下搅拌了30分钟。使反应混合物升温至0℃，在相同温度下搅拌了30分钟。确认了原料的消失后，加入冰水和饱和氯化铵水溶液，使反应停止。将水层用醋酸乙酯萃取，将有机层用水清洗。通过将溶剂馏除，从而得到了包含加成体的混合物。将得到的混合物溶解于THF(5.00mL)，在冰浴下加入了四丁基氟化铵(1.00M THF溶液，872μL，872μmol)。将反应混合物在室温下搅拌了4小时。通过在冰浴下加入饱和氯化铵水溶液，从而使反应停止。将水层用醋酸乙酯萃取，将有机层用饱和氯化铵水溶液、水和饱和食盐水清洗。将混合物用无水硫酸镁干燥，将溶剂减压馏除。通过将得到的残渣用硅胶柱色谱(正庚烷/醋酸乙酯)精制，从而得到了标记化合物(62.0mg，120μmol)。
ESI-MS m/z 515[M+H]+
(2)3-氧代-3’，7’-双(((三氟甲基)磺酰基)氧基)-3H-二螺[异苯并呋喃-1，10’- 二苯并[b，e]硅宾-5’，1’’-硅杂环己烷]-5-羧酸叔丁酯的合成
按照制造例5-(2)，由制造例6-(1)中得到的化合物(62.0mg，120μmol)得到了标记化合物(31.0mg，40.0μmol)。
1H-NMR(400MHz，CDCl3)δ(ppm)：1.26-1.33(m，4H)，1.63(s，9H)，1.78(br.s.，2H)，2.02(br.s.，2H)，2.16(br.s.，2H)，7.16-7.20(m，4H)，7.42-7.47(m，1H)，7.73(d，J＝2.34Hz，2H)，8.40(dd，J＝8.20，1.56Hz，1H)，8.59-8.64(m，1H).
制造例7
5-氯-3-氧代-3’，7’-双(((三氟甲基)磺酰基)氧基)-3H-二螺[异苯并呋喃-1，
10’-二苯并[b，e]硅宾-5’，1’’-硅杂环己烷]-6-羧酸叔丁酯的合成
【化37】
(1)5-氯-3’，7’-二羟基-3-氧代-3H-二螺[异苯并呋喃-1，10’-二苯并[b，e]硅宾- 5’，1’’-硅杂环己烷]-6-羧酸叔丁酯的合成
在氮气氛下在制造例1中得到的2-溴-5-氯对苯二甲酸二叔丁酯(945mg，2.41mmol)的THF(20.0mL)/正己烷(10.0mL)混合溶液中，在内温-95℃以下滴入正丁基锂(2.65M己烷溶液、910μL，2.41mmol)。在相同温度下搅拌了10分钟后，在内温-95℃以下滴入了制造例4-(3)中得到的3，7-双((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)-10H-螺[二苯并[b，e]硅宾-5，1’-硅杂环己烷]-10-酮(130mg，241μmol)的THF(10.0mL)溶液。在相同温度下搅拌了5分钟后，滴入三氟化硼二乙醚络合物(61.0μL，482μmol)。缓慢地使反应混合物升温到室温，在室温下搅拌了一晚。加入冰，使反应停止，将水层用醋酸乙酯萃取。将有机层用饱和食盐水清洗，用无水硫酸镁干燥。通过将溶剂馏除，从而得到了包含加成体的混合物。在得到的混合物中加入THF(10.0mL)和四丁基氟化铵(1.00M THF溶液，1.21mL，1.21mmol)，在室温下搅拌了一晚。通过加入冰和饱和氯化铵水溶液，从而使反应停止。将水层用醋酸乙酯萃取，将有机层用水清洗。将溶剂减压馏除，通过将得到的残渣用硅胶柱色谱(正庚烷/醋酸乙酯)精制，从而得到了标记化合物(119mg，217μmol)。
ESI-MS m/z 549[M+H]+
(2)5-氯-3-氧代-3’，7’-双(((三氟甲基)磺酰基)氧基)-3H-二螺[异苯并呋喃-1， 10’-二苯并[b，e]硅宾-5’，1’’-硅杂环己烷]-6-羧酸叔丁酯的合成
在制造例7-(1)中得到的化合物(119mg，217μmol)、DCM(5.00mL)和吡啶(140μL，1.73mmol)的混合物中，在冰浴下滴入三氟甲磺酸酐(142μL，867μmol)。升温到室温，搅拌了2.5小时。加入冰以使反应停止，将水层用DCM萃取。将有机层用稀盐酸和水清洗，将溶剂减压馏除。通过将得到的残渣用硅胶柱色谱(正庚烷/醋酸乙酯)精制，从而得到了标记化合物(128mg，157μmol)。
1H-NMR(400MHz，CDCl3)δ(ppm)：1.22-1.33(m，4H)，1.60(s，9H)，1.78(br.s.，2H)，2.03(br.s.，2H)，2.08-2.19(m，2H)，7.22-7.25(m，4H)，7.64(s，1H)，7.73(d，J＝2.34Hz，2H)，8.04(s，1H).
制造例8
5-甲基-3-氧代-3’，7’-双(((三氟甲基)磺酰基)氧基)-3H-二螺[异苯并呋喃-1，
10’-二苯并[b，e]硅宾-5’，1’’-硅杂环己烷]-6-羧酸叔丁酯的合成
【化38】
(1)3’，7’-双((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)-5-氯-3-氧代-3H-二螺[异苯并呋 喃-1，10’-二苯并[b，e]硅宾-5’，1’’-硅杂环己烷]-6-羧酸叔丁酯的合成
在氮气氛下在采用制造例1的方法得到的2-溴-5-氯对苯二甲酸二叔丁酯(4.27g，10.9mmol)的THF(50.0mL)/正己烷(25.0mL)混合溶液中，在内温-95℃以下滴入正丁基锂(2.65M己烷溶液、4.11mL，10.9mmol)。在相同温度下搅拌了10分钟后，在内温-95℃以下滴入了制造例4-(3)中得到的3，7-双((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)-10H-螺[二苯并[b，e]硅宾-5，1’-硅杂环己烷]-10-酮(587mg，1.09mmol)的THF(25.0mL)溶液。在相同温度下搅拌了5分钟后，滴入三氟化硼二乙醚络合物(276μL，2.18mmol)。缓慢地使反应混合物升温到室温，在室温下搅拌了5.5小时。加入冰和饱和氯化铵水溶液以使反应停止。将水层用醋酸乙酯萃取，将有机层用水清洗。将溶剂馏除，通过将得到的残渣用硅胶柱色谱(正庚烷/醋酸乙酯)精制，从而得到了标记化合物(纯度53％，1.58g，1.08mmol)。
1H-NMR(400MHz，CDCl3)δ(ppm)：0.21(s，12H)，0.98(s，18H)，1.16-1.23(m，4H)，1.61(s，9H)，1.73(br.s.，2H)，2.00(br.s.，2H)，2.07-2.18(m，2H)，6.72(dd，J＝8.59，2.73Hz，2H)，6.90(d，J＝8.59Hz，2H)，7.29(d，J＝2.73Hz，2H)，7.57(s，1H)，7.98(s，1H).
(2)3’，7’-二羟基-5-甲基-3-氧代-3H-二螺[异苯并呋喃-1，10’-二苯并[b，e]硅 宾-5’，1’’-硅杂环己烷]-6-羧酸叔丁酯的合成
在氮气氛下将制造例8-(1)中得到的化合物(纯度53％，100mg，68.0μmol)、三甲基环三硼氧烷(48.0μL，341μmol)、(A-taPhos)2PdCl2(19.3mg，27.0μmol)、1N碳酸钾水溶液(341μL，341μmol)和1，4-二噁烷(3.00mL)的混合物采用微波照射装置在180℃下搅拌了10分钟。冷却到室温，用醋酸乙酯稀释。将有机层用水和饱和食盐水清洗，用无水硫酸镁干燥。通过将溶剂减压馏除，从而得到了中间体。将该中间体溶解于THF(5.00mL)，加入了四丁基氟化铵(1M THF溶液、341μL，341μmol)。将反应混合物在室温下搅拌了1.5小时后，通过加入饱和氯化铵水溶液，使反应停止。将水层用醋酸乙酯萃取，将有机层用水洗涤二次。将溶剂减压馏除，通过将残渣用硅胶柱色谱(正庚烷/醋酸乙酯)精制，从而得到了标记化合物(19.0mg，36.0μmol)。
ESI-MS m/z 529[M+H]+
(3)5-甲基-3-氧代-3’，7’-双(((三氟甲基)磺酰基)氧基)-3H-二螺[异苯并呋喃- 1，10’-二苯并[b，e]硅宾-5’，1’’-硅杂环己烷]-6-羧酸叔丁酯的合成
按照制造例5-(2)，由采用制造例8-(2)的方法得到的化合物(97.0mg，183μmol)得到了标记化合物(80.0mg，101μmol)。
1H-NMR(400MHz，CDCl3)δ(ppm)：1.28-1.34(m，4H)，1.58(s，9H)，1.78(br.s.，2H)，2.04(br.s.，2H)，2.13(br.s.，2H)，2.67(s，3H)，7.18-7.23(m，2H)，7.27-7.31(m，2H)，7.72(d，J＝2.73Hz，2H)，7.73(s，1H)，7.85(s，1H).
制造例9
3，7-二吗啉代-10H-螺[二苯并[b，e]硅宾-5，1’-硅杂环己烷]-10-酮的合成
【化39】
将制造例5-(2)中得到的10-氧代-10H-螺[二苯并[b，e]硅宾-5，1’-硅杂环己烷]-3，7-二基双(三氟甲磺酸酯)(122mg，212μmol)、吗啉(51.8mg，595μmol)、三(二亚苄基丙酮)二钯(0)(19.4mg，21.0μmol)、XPhos(30.4mg，64.0μmol)、碳酸铯(194mg，595μmol)和1，4-二噁烷(2.00mL)的混合液在氮气氛下、封管中在110℃下搅拌了4小时。冷却到室温后，用DCM稀释。将不溶物过滤，将滤液浓缩。通过将残渣用硅胶柱色谱(正庚烷/醋酸乙酯)精制，从而得到了标记化合物的粗产物(103mg)。
ESI-MS m/z 449[M+H]+
制造例10
3，7-双(二甲基氨基)-10H-螺[二苯并[b，e]硅宾-5，1’-硅杂环己烷]-10-酮的合
成
【化40】
(1)N3，N3，N7，N7-四甲基-10H-螺[二苯并[b，e]硅宾-5，1’-硅杂环己烷]-3，7-二 胺的合成
在4，4’-亚甲基双(3-溴-N，N-二甲基苯胺)(500mg，1.21mmol，CAS No.63594-70-7)的THF(15.0mL)溶液中，在-78℃下历时20分钟滴入了仲丁基锂(1.00M环己烷-己烷溶液，3.46mL，3.46mmol)。在相同温度下搅拌了30分钟后，滴入环五亚甲基二氯硅烷(390mg，2.31mmol)的THF溶液。在室温下搅拌了3.5小时后，加入冰和饱和氯化铵水溶液以使反应停止。将水层用DCM萃取，将有机层用硫酸镁干燥。将溶剂减压馏除，通过将得到的残渣用硅胶柱色谱(正庚烷/醋酸乙酯)精制，从而得到了标记化合物(292mg，833μmol)。
ESI-MS m/z 351[M+H]+
(2)3，7-双(二甲基氨基)-10H-螺[二苯并[b，e]硅宾-5，1’-硅杂环己烷]-10-酮的 合成
在制造例10-(1)中得到的化合物(232mg，662μmol)的丙酮(20.0mL)溶液中，在冰浴下历时30分钟加入了高锰酸钾(282mg，1.79mmol)。在相同温度下搅拌了1小时后，用DCM稀释。通过Celite过滤将生成的不溶物除去。将溶出物在室温以下在减压下浓缩，通过将得到的残渣用硅胶柱色谱(正庚烷/醋酸乙酯)精制，从而得到了标记化合物(82.0mg，225μmol)。
1H-NMR(400MHz，CDCl3)δ(ppm)：0.98-1.10(m，4H)，1.72(br.s.，2H)，2.00-2.10(m，4H)，3.11(s，12H)，6.85(dd，J＝9.18，2.93Hz，2H)，6.98(d，J＝2.73，2H)，8.40(d，J＝9.37Hz，2H).
ESI-MS m/z 365[M+H]+
制造例11
3，7-双(二甲基氨基)-10H-螺[二苯并[b，e]硅宾-5，1’-硅杂环戊烷]-10-酮的合
成
【化41】
(1)N3，N3，N7，N7-四甲基-10H-螺[二苯并[b，e]硅宾-5，1’-硅杂环戊烷]-3，7-二 胺的合成
按照制造例10-(1)，由4，4’-亚甲基双(3-溴-N，N-二甲基苯胺)(500mg，1.21mmol)和环四亚甲基二氯硅烷(357mg，2.31mmol，CAS No.2406-33-9)得到了标记化合物(286mg，850μmol)。
ESI-MS m/z 337[M+H]+
(2)3，7-双(二甲基氨基)-10H-螺[二苯并[b，e]硅宾-5，1’-硅杂环戊烷]-10-酮的 合成
按照制造例10-(2)，由制造例11-(1)中得到的化合物(276mg，820μmol)得到了标记化合物(115mg，328μmol)。
1H-NMR(400MHz，CDCl3)δ(ppm)：1.04-1.11(m，4H)，1.91-2.00(m，4H)，3.09(s，12H)，6.75(d，J＝3.12Hz，2H)，6.85(dd，J＝8.98，2.73Hz，2H)，8.40(d，J＝8.98Hz，2H).
ESI-MS m/z 351[M+H]+
制造例12
3，3’-(硅杂环己烷-1，1-二基)双(N，N-二乙基苯胺)的合成
【化42】
在氮气氛下在3-溴-N，N-二乙基苯胺(6.16g，27.0mmol，CAS No.53142-19-1)的二乙醚(70.0mL)溶液中，在冰浴下缓慢地滴入正丁基锂(2.67M正己烷溶液，10.6mL，28.4mmol)。在相同温度下搅拌了3小时后，滴入环五亚甲基二氯硅烷(2.74g，16.2mmol)的二乙醚(10.0mL)溶液。升温到室温，搅拌了18小时。加入水以使反应停止，将水层用醋酸乙酯萃取。将有机层用饱和食盐水清洗，用无水硫酸镁干燥。将溶剂减压馏除，通过将残渣用硅胶柱色谱(正庚烷/醋酸乙酯)精制，从而得到了标记化合物(3.52g，8.92mmol)。
1H-NMR(400MHz，CDCl3)δ(ppm)：1.06-1.21(m，16H)，1.46-1.58(m，2H)，1.74-1.85(m，4H)，3.32(q，J＝7.03Hz，8H)，6.69(ddd，J＝8.30，2.83，0.98Hz，2H)，6.81-6.91(m，4H)，7.20(dd，J＝8.40，7.22Hz，2H).
ESI-MS m/z 395[M+H]+
制造例13
1，1’-(硅杂环己烷-1，1-二基双(3，1-亚苯基))二吡咯烷的合成
【化43】
按照制造例12，由1-(3-溴苯基)吡咯烷(882mg，3.90mmol，CAS No.219928-13-9)得到了标记化合物(365mg，934μmol)。
1H-NMR(400MHz，CDCl3)δ(ppm)：1.13-1.23(m，4H)，1.46-1.56(m，2H)，1.74-1.85(m，4H)，1.94-2.04(m，8H)，3.22-3.32(m，8H)，6.54-6.62(m，2H)，6.78(d，J＝2.34Hz，2H)，6.85(d，J＝7.03Hz，2H)，7.21(dd，J＝8.20，7.03Hz，2H).
制造例14
7，7’-(硅杂环己烷-1，1-二基)双(1-烯丙基-1，2，3，4-四氢喹啉)的合成
【化44】
(1)1-烯丙基-7-溴-1，2，3，4-四氢喹啉的合成
将7-溴-1，2，3，4-四氢喹啉(10.6g，50.0mmol，CAS No.114744-51-3)、碳酸钾(27.6g，200mmol)、烯丙基溴(12.1g，100mmol)和DMF(20.0mL)的混合物在室温下搅拌了24小时。在反应混合物中加入水，使反应停止，加入了醋酸乙酯和饱和食盐水。将分取的有机层合在一起，用水和饱和食盐水洗净。用无水硫酸镁将混合物干燥，将溶剂减压馏除。用硅胶柱色谱(正庚烷/醋酸乙酯)对残渣进行精制，得到了标记化合物(12.4g，49.2mmol)。
1H-NMR(400MHz，CDCl3)δ(ppm)：1.89-1.98(m，2H)，2.69(t，J＝6.25Hz，2H)，3.24-3.29(m，2H)，3.83(dt，J＝4.88，1.66Hz，2H)，5.15(t，J＝1.56Hz，1H)，5.17-5.21(m，1H)，5.74-5.89(m，1H)，6.60-6.68(m，2H)，6.77(d，J＝7.81Hz，1H).
(2)7，7’-(硅杂环己烷-1，1-二基)双(1-烯丙基-1，2，3，4-四氢喹啉)的合成
按照制造例12，由制造例14-(1)中得到的化合物(5.04g，20.0mmol)得到了标记化合物(2.30g，5.20mmol)。
1H-NMR(400MHz，CDCl3)δ(ppm)：1.03-1.14(m，4H)，1.43-1.53(m，2H)，1.67-1.84(m，4H)，1.88-2.01(m，4H)，2.75(t，J＝6.44Hz，4H)，3.19-3.31(m，4H)，3.84(dt，J＝5.47，1.56Hz，4H)，5.06-5.21(m，4H)，5.81(ddt，J＝17.13，10.30，5.22Hz，2H)，6.70-6.81(m，4H)，6.92(d，J＝7.42Hz，2H).
制造例15
3-羟基-1-氧代-1，3-二氢异苯并呋喃-5-羧酸的合成
【化45】
(1)2-甲酰基对苯二甲酸二叔丁酯的合成
将2-溴对苯二甲酸二叔丁酯(3.57g，10.0mmol)、四(三苯基膦)钯(0)(1.16g，1.00mmol)、三正丁基(1-丙烯基)锡(4.30g，13.0mmol)和NMP(10.0mL)的混合物在120℃下搅拌了4小时。冷却到室温后，将反应混合物直接用硅胶柱色谱(正庚烷/醋酸乙酯)精制，作为几何异构体的混合物得到了2-(丙-1-烯-1-基)对苯二甲酸二叔丁酯(2.90g，9.11mmol)。
在2-(丙-1-烯-1-基)对苯二甲酸二叔丁酯(2.87g，9.00mmol)、1，4-二噁烷(80.0mL)、水(20.0mL)、2，6-二甲基吡啶(2.09mL，18.0mmol)和四氧化锇(4％水溶液、1.43mL，225μmol)的混合物中加入高碘酸钠(5.78g，27.0mmol)，在室温下搅拌了18小时。在反应混合物中加入水合DCM，在室温下搅拌了5分钟。用相分离器分取有机层，将溶剂减压馏除。将得到的残渣用硅胶柱色谱(正庚烷/醋酸乙酯)精制，得到了标记化合物(1.45g，4.73mmol)。
1H-NMR(400MHz，CDCl3)δ(ppm)：1.62(s，9H)，1.62(s，9H)，7.91(d，J＝8.59Hz，1H)，8.17-8.25(m，1H)，8.43(d，J＝1.17Hz，1H)，10.56(s，1H).
(2)3-羟基-1-氧代-1，3-二氢异苯并呋喃-5-羧酸的合成在制造例15-(1)中得到的化合物(1.38g，4.50mmol)的DCM(20.0mL)溶液中加入TFA(3.47mL)，在室温下搅拌了18小时。通过将溶剂减压馏除，从而得到了标记化合物(874mg，4.50mmol)。
1H-NMR(400MHz，DMSO-d6)δ(ppm)：6.67(s，1H)，7.96(d，J＝8.20Hz，1H)，8.12-8.16(m，1H)，8.19(dd，J＝8.01，1.37Hz，1H).
ESI-MS m/z 193[M-H]-
制造例16
1-羟基-3-氧代-1，3-二氢异苯并呋喃-5-羧酸的合成
【化46】
(1)4-甲酰基间苯二甲酸二叔丁酯的合成
按照制造例15-(1)，由4-溴间苯二甲酸二叔丁酯(1.18g，3.30mmol)作为几何异构体的混合物得到了4-(丙-1-烯-1-基)间苯二甲酸二叔丁酯(1.05g，3.30mmol)。按照制造例15-(1)，由4-(丙-1-烯-1-基)间苯二甲酸二叔丁酯(955mg，3.00mmol)得到了标记化合物(610mg，1.99mmol)。
1H-NMR(400MHz，CDCl3)δ(ppm)：1.62(s，9H)，1.64(s，9H)，7.90(d，J＝8.20Hz，1H)，8.16-8.21(m，1H)，8.49(d，J＝1.17Hz，1H)，10.63(d，J＝0.78Hz，1H).
(2)1-羟基-3-氧代-1，3-二氢异苯并呋喃-5-羧酸的合成
按照制造例15-(2)，由制造例16-(1)中得到的化合物(582mg，1.90mmol)得到了标记化合物(369mg，1.90mmol)。
1H-NMR(400MHz，DMSO-d6)δ(ppm)：6.68-6.77(m，1H)，7.76-7.86(m，1H)，8.20-8.27(m，1H)，8.29-8.37(m，2H)，13.53(br.s.，1H).
ESI-MS m/z 193[M-H]-
制造例17
6-氟-3-羟基-1-氧代-1，3-二氢异苯并呋喃-5-羧酸的合成
【化47】
(1)2-氟-5-甲酰基对苯二甲酸二叔丁酯的合成
按照制造例15-(1)，由采用制造例3的方法得到的2-溴-5-氟对苯二甲酸二叔丁酯(2.26g，6.02mmol)得到了标记化合物(935mg，2.88mmol)。
1H-NMR(400MHz，CDCl3)δ(ppm)：1.63(s，9H)，1.65(s，9H)，7.60(d，J＝10.54Hz，1H)，8.40(d，J＝7.03Hz，1H)，10.53(s，1H).
(2)6-氟-3-羟基-1-氧代-1，3-二氢异苯并呋喃-5-羧酸的合成
按照制造例15-(2)，由采用制造例17-(1)的方法得到的化合物(163mg，503μmol)得到了标记化合物的粗产物(119mg)。
ESI-MS m/z 211[M-H]-
制造例18
6-氯-3-羟基-1-氧代-1，3-二氢异苯并呋喃-5-羧酸的合成
【化48】
(1)2-氯-5-甲酰基对苯二甲酸二叔丁酯的合成
按照制造例15-(1)，由采用制造例1的方法得到的2-溴-5-氯对苯二甲酸二叔丁酯(568mg，1.45mmol)作为几何异构体的混合物得到了2-氯-5-(丙-1-烯-1-基)对苯二甲酸二叔丁酯(405mg，1.15mmol)。
按照制造例15-(1)，由2-氯-5-(丙-1-烯-1-基)对苯二甲酸酯(388mg，1.10mmol)得到了标记化合物(330mg，968μmol)。
1H-NMR(400MHz，CDCl3)δ(ppm)：1.61(s，9H)，1.63(s，9H)，7.91(s，1H)，8.18(s，1H)，10.54(s，1H).
(2)6-氯-3-羟基-1-氧代-1，3-二氢异苯并呋喃-5-羧酸的合成
按照制造例15-(2)，由制造例18-(1)中得到的化合物(324mg，950μmol)得到了标记化合物(217mg，949μmol)。
1H-NMR(400MHz，DMSO-d6)δ(ppm)：6.66(br.s.，1H)，7.94(s，1H)，8.31(br.s.，1H).
ESI-MS m/z 227[M-H]-
制造例19
6-溴-3-羟基-1-氧代-1，3-二氢异苯并呋喃-5-羧酸的合成
(1)2-溴-5-甲酰基对苯二甲酸二叔丁酯的合成
将2，5-二溴对苯二甲酸二叔丁酯(872mg，2.00mmol，CAS#868158-34-3)、三正丁基(1-丙烯基)锡(728mg，2.20mmol)、四(三苯基膦)钯(0)(231mg，200μmol)和NMP(4.00mL)的混合物在120℃下搅拌了3小时。冷却到室温后，通过将反应混合物直接用硅胶柱色谱(正庚烷/醋酸乙酯)精制，从而作为几何异构体的混合物得到了2-溴-5-(丙-1-烯-1-基)对苯二甲酸二叔丁酯(710mg，1.79mmol)。
按照制造例15-(1)，由2-溴-5-(丙-1-烯-1-基)对苯二甲酸二叔丁酯(695mg，1.75mmol)得到了标记化合物(220mg，571μmol)。
1H-NMR(400MHz，CDCl3)δ(ppm)：1.62(s，9H)，1.63(s，9H)，8.12(s，2H)，10.54(s，1H).
(2)6-溴-3-羟基-1-氧代-1，3-二氢异苯并呋喃-5-羧酸的合成
按照制造例15-(2)，由制造例19-(1)中得到的化合物(212mg，550μmol)得到了标记化合物(150mg，549μmol)。
1H-NMR(400MHz，DMSO-d6)δ(ppm)：6.68(br.s，1H)，7.92(br.s.，1H)，8.13(s，1H)，8.35(br.s.，1H).
ESI-MS m/z 271[M-H]-
制造例20
6-(二氟甲基)-3-羟基-1-氧代-1，3-二氢异苯并呋喃-5-羧酸的合成
【化50】
(1)2-溴-5-(二氟甲基)对苯二甲酸二叔丁酯的合成
在制造例19-(1)中得到的2-溴-5-甲酰基对苯二甲酸二叔丁酯(308mg，800μmol)的DCM(3.00mL)溶液中，在冰浴下滴入DAST(262μL，2.00mmol)。将反应混合物在室温下搅拌了12小时后，通过在冰浴下加入饱和碳酸氢钠水溶液，从而使反应停止。在混合物中加入二氯甲烷和饱和碳酸氢钠水溶液，在室温下搅拌了5分钟。用相分离器分取有机层，将溶出物在减压下浓缩。通过将残渣用硅胶柱色谱(正庚烷/醋酸乙酯)精制，从而得到了标记化合物(301mg，739μmol)。
1H-NMR(400MHz，CDCl3)δ(ppm)：1.61(s，9H)，1.62(s，9H)，7.39(t，J＝55.45Hz，1H)，8.00(s，1H)，8.15(s，1H).
(2)2-(二氟甲基)-5-甲酰基对苯二甲酸二叔丁酯的合成
按照制造例15-(1)，由采用制造例20-(1)的方法得到的化合物(326mg，800μmol)得到了标记化合物(132mg，370μmol)。
1H-NMR(400MHz，CDCl3)δ(ppm)：1.52(s，9H)，1.55(s，9H)，7.38(t，J＝55.06Hz，1H)，8.17(s，1H)，8.26(s，1H)，10.50(s，1H).
(3)6-(二氟甲基)-3-羟基-1-氧代-1，3-二氢异苯并呋喃-5-羧酸的合成
按照制造例15-(2)，由制造例20-(2)中得到的化合物(128mg，360μmol)得到了标记化合物(88.0mg，360μmol)。
1H-NMR(400MHz，DMSO-d6)δ(ppm)：6.78(d，J＝8.20Hz，1H)，7.62(t，J＝54.87Hz，1H)，8.07(s，1H)，8.17(s，1H)，8.43(d，J＝8.20Hz，1H).
制造例21
3-羟基-6-(甲氧基甲基)-1-氧代-1，3-二氢异苯并呋喃-5-羧酸的合成
【化51】
(1)2-溴-5-(羟基甲基)对苯二甲酸二叔丁酯的合成
在制造例19-(1)中得到的2-溴-5-甲酰基对苯二甲酸二叔丁酯(385mg，1.00mmol)的THF(5.00mL)溶液中在冰浴下加入了氢化硼钠(37.8mg，1.00mmol)。将反应混合物在相同温度下搅拌了1小时后，加入饱和氯化铵水溶液和二氯甲烷，搅拌了5分钟。用相分离器分取有机层，将溶剂减压馏除。通过将残渣用硅胶柱色谱(正庚烷/醋酸乙酯)精制，从而得到了标记化合物(287mg，741μmol)。
1H-NMR(400MHz，CDCl3)δ(ppm)：1.61(s，9H)，1.61(s，9H)，3.62(t，J＝7.22Hz，1H)，4.73(d，J＝7.42Hz，2H)，7.72(s，1H)，8.10(s，1H).
(2)2-溴-5-(溴甲基)对苯二甲酸二叔丁酯的合成
在制造例21-(1)中得到的化合物(271mg，700μmol)的DCM(5.00mL)溶液中，在冰浴下加入了三苯基膦(275mg，1.05mmol)和四溴化碳(464mg，1.40mmol)。在相同温度下搅拌了2小时后，将反应混合物直接用硅胶柱色谱(正庚烷/醋酸乙酯)精制，得到了标记化合物(230mg，511μmol)。
1H-NMR(400MHz，CDCl3)δ(ppm)：1.62(s，9H)，1.63(s，9H)，4.85(s，2H)，7.68(s，1H)，8.08(s，1H).
(3)2-溴-5-(甲氧基甲基)对苯二甲酸二叔丁酯的合成在制造例21-(2)中得到的化合物(221mg，490μmol)的二氯甲烷(3.00mL)溶液中，在冰浴下滴入甲醇钠(28％甲醇溶液、177μL，735μmol)。在相同温度下搅拌了2小时后，在反应混合物中加入THF(3.00mL)，在相同温度下进一步搅拌了3小时。通过将反应混合物直接用硅胶柱色谱(正庚烷/醋酸乙酯)精制，从而得到了标记化合物(46.0mg，115μmol)。
1H-NMR(400MHz，CDCl3)δ(ppm)：1.59(s，9H)，1.61(s，9H)，3.46(s，3H)，4.74(s，2H)，7.86(s，1H)，8.04(s，1H).
(4)2-甲酰基-5-(甲氧基甲基)对苯二甲酸二叔丁酯的合成
按照制造例15-(1)，由制造例21-(3)中得到的化合物(45.0mg，112μmol)作为几何异构体的混合物得到了2-(甲氧基甲基)-5-(丙-1-烯-1-基)对苯二甲酸二叔丁酯(32.0mg，88.0μmol)。
按照制造例15-(1)，由2-(甲氧基甲基)-5-(丙-1-烯-1-基)对苯二甲酸二叔丁酯(30.0mg，83.0μmol)得到了标记化合物(28.0mg，80.0μmol)。
1H-NMR(400MHz，CDCl3)δ(ppm)：1.61(s，9H)，1.63(s，9H)，3.51(s，3H)，4.87(s，2H)，8.12(s，1H)，8.32(s，1H)，10.53(s，1H).
(5)3-羟基-6-(甲氧基甲基)-1-氧代-1，3-二氢异苯并呋喃-5-羧酸的合成
按照制造例15-(2)，由制造例21-(4)中得到的化合物(27.0mg，77.0μmol)作为互变异构体的混合物得到了标记化合物(18.0mg，76.0μmol)。
1H-NMR(400MHz，DMSO-d6)δ(ppm)：3.37(s，3H)，4.78(s，2H)，6.70(d，J＝8.20Hz，1H)，7.93(s，1H)，7.99(s，1H)，8.27(d，J＝8.20Hz，1H)，13.59(br.s.，1H).
1H-NMR(400MHz，DMSO-d6)δ(ppm)：3.40(s，3H)，4.83(s，2H)，8.10(s，1H)，8.22(s，1H)，10.45(s，1H)，13.59(br.s.，1H).
制造例22
3-羟基-1-氧代-6-(三氟甲基)-1，3-二氢异苯并呋喃-5-羧酸的合成
【化52】
(1)2-甲酰基-5-(三氟甲基)对苯二甲酸二叔丁酯的合成
按照制造例15-(1)，由采用制造例2-(3)的方法得到的2-溴-5-(三氟甲基)对苯二甲酸二叔丁酯(205mg，482μmol)得到了标记化合物(165mg，441μmol)。
1H-NMR(400MHz，CDCl3)δ(ppm)：1.55(s，9H)，1.59(s，9H)，8.13(s，1H)，8.23(s，1H)，10.63(s，1H).
(2)3-甲氧基-1-氧代-6-(三氟甲基)-1，3-二氢异苯并呋喃-5-羧酸的合成
按照制造例15-(2)，由制造例22-(1)中得到的化合物(165mg，441μmol)得到了标记化合物(125mg，453μmol)。
1H-NMR(400MHz，DMSO-d6)δ(ppm)：3.59(s，3H)，6.67(s，1H)，8.13(s，1H)，8.26(s，1H).
ESI-MS m/z 275[M-H]-
(3)3-羟基-1-氧代-6-(三氟甲基)-1，3-二氢异苯并呋喃-5-羧酸的合成
在制造例22-(2)中得到的化合物(125mg，453μmol)的甲醇(1.00mL)溶液中加入5N盐酸(10.0mL，50.0mmol)，在110℃下搅拌了2.5小时。恢复到室温后，通过将溶剂减压馏除，从而得到了标记化合物(103mg，393μmol)。
1H-NMR(400MHz，DMSO-d6)δ(ppm)：6.81(br.s.，1H)，8.06(s，1H)，8.21(s，1H).
ESI-MS m/z 261[M-H]-
制造例23
3-羟基-6-甲氧基-1-氧代-1，3-二氢异苯并呋喃-5-羧酸的合成
【化53】
(1)3，6-二甲氧基-1-氧代-1，3-二氢异苯并呋喃-5-羧酸叔丁酯的合成
在制造例17-(1)中得到的2-氟-5-甲酰基对苯二甲酸二叔丁酯(120mg，370μmol)的THF(3.00mL)溶液中，在冰浴下加入了甲醇钠(5.4M甲醇溶液、72.0μL，388μmol)。在相同温度下搅拌了2小时后，在室温下搅拌了1小时。加入少量的醋酸，使反应停止，用醋酸乙酯稀释。将混合物用水洗净，将溶剂减压馏除。通过将得到的残渣用硅胶柱色谱(正庚烷/醋酸乙酯)精制，从而得到了标记化合物(27.0mg，92.0μmol)。
1H-NMR(400MHz，CDCl3)δ(ppm)：1.59(s，9H)，3.63(s，3H)，3.95(s，3H)，6.26(s，1H)，7.38(s，1H)，7.78(s，1H).
(2)3-羟基-6-甲氧基-1-氧代-1，3-二氢异苯并呋喃-5-羧酸的合成
按照制造例22-(3)，由制造例23-(1)中得到的化合物(27.0mg，92.0μmol)得到了包含标记化合物的混合物(19.0mg)。
ESI-MS m/z 225[M+H]+
制造例24
3-羟基-6-(甲硫基)-1-氧代-1，3-二氢异苯并呋喃-5-羧酸的合成
【化54】
(1)2-甲酰基-5-(甲硫基)对苯二甲酸二叔丁酯的合成
在制造例17-(1)中得到的2-氟-5-甲酰基对苯二甲酸二叔丁酯(120mg，370μmol)的THF(5.00mL)溶液中加入甲硫醇钠(31.3mg，444μmol)，在室温下搅拌了一晚。将反应混合物用醋酸乙酯稀释，将有机层用水和饱和食盐水洗净。将混合物用无水硫酸镁干燥，通过将溶剂减压馏除，从而得到了标记化合物的粗产物(139mg)。
1H-NMR(400MHz，CDCl3)δ(ppm)：1.62(s，9H)，1.63(s，9H)，2.53(s，3H)，7.68(s，1H)，8.42(s，1H)，10.47(s，1H).
(2)3-羟基-6-(甲硫基)-1-氧代-1，3-二氢异苯并呋喃-5-羧酸的合成
按照制造例15-(2)，由制造例24-(1)中得到的化合物(137mg)作为互变异构体的混合物得到了标记化合物的粗产物(132mg)。
1H-NMR(400MHz，DMSO-d6)δ(ppm)：2.51(s，3H)，6.67(s，1H)，7.72(s，1H)，8.03(s，1H).
1H-NMR(400MHz，DMSO-d6)δ(ppm)：2.50(s，3H)，7.65(s，1H)，8.31(s，1H)，10.35(s，1H).
ESI-MS m/z 239[M-H]-
实施例1
3’，7’-二(氮杂环丁烷-1-基)-N-(2-(2，5-二氧代-2，5-二氢-1H-吡咯-1-基)乙
基)-3-氧代-3H-二螺[异苯并呋喃-1，10’-二苯并[b，e]硅宾-5’，1’’-硅杂环己烷]-6-甲酰
胺的合成
【化55】
(1)3’，7’-二(氮杂环丁烷-1-基)-3-氧代-3H-二螺[异苯并呋喃-1，10’-二苯并 [b，e]硅宾-5’，1’’-硅杂环己烷]-6-羧酸叔丁酯的合成
将制造例5-(2)中得到的3-氧代-3’，7’-双(((三氟甲基)磺酰基)氧基)-3H-二螺[异苯并呋喃-1，10’-二苯并[b，e]硅宾-5’，1”-硅杂环己烷]-6-羧酸叔丁酯(100mg，128μmol)、氮杂环丁烷(20.5mg，360μmol)、三(二亚苄基丙酮)二钯(0)(11.8mg，13.0μmol)、XPhos(18.4mg，39.0μmol)、碳酸铯(117mg，360μmol)和1，4-二噁烷(5.00mL)的混合液在氮气氛下、封管中在110℃下搅拌了4.5小时。将不溶物过滤，将滤液浓缩。通过将残渣用硅胶柱色谱(正庚烷/醋酸乙酯)精制，从而得到了标记化合物(62.0mg，105μmol)。
ESI-MS m/z 593[M+H]+
(2)2-(3-(氮杂环丁烷-1-鎓-1-亚基)-7-(氮杂环丁烷-1-基)-3H-螺[二苯并[b， e]硅宾-5，1’-硅杂环己烷]-10-基)-4-羧基苯甲酸盐TFA盐的合成
在实施例1-(1)中得到的化合物(62.0mg，105μmol)的DCM(2.00mL)溶液中加入TFA(200μL)，在室温下搅拌了一晚。将溶剂减压馏除，通过用甲醇将残存的TFA共沸除去，从而得到了标记化合物的粗产物(70.0mg)。
ESI-MS m/z 537[M+H]+
(3)3’，7’-二(氮杂环丁烷-1-基)-N-(2-(2，5-二氧代-2，5-二氢-1H-吡咯-1-基) 乙基)-3-氧代-3H-二螺[异苯并呋喃-1，10’-二苯并[b，e]硅宾-5’，1’’-硅杂环己烷]-6-甲 酰胺的合成
在采用实施例1-(2)的方法得到的化合物(15.0mg)的DMF(1.00mL)溶液中加入了TEA(19.0μL，138μmol)、N-(2-氨基乙基)马来酰亚胺TFA盐(13.5mg，53.0μmol)和PyBOP(18.0mg，35.0μmol)。将反应混合物在室温下搅拌了2小时后，将混合物直接用反相硅胶柱色谱(水/乙腈、0.1％甲酸)精制。将包含目标物的级分回收，将剩余的乙腈减压馏除。将残渣的水层用饱和碳酸氢钠水溶液中和，用醋酸乙酯将水层萃取。将有机层用饱和食盐水洗净，用无水硫酸镁干燥。将溶剂减压馏除，通过用硅胶薄层色谱(正庚烷/醋酸乙酯)将得到的残渣精制，从而得到了标记化合物(10.3mg，16.0μmol)。
1H-NMR(400MHz，CDCl3)δ(ppm)：1.16-1.26(m，4H)，1.71(br.s.，2H)，1.98(br.s.，2H)，2.10(br.s.，2H)，2.31-2.44(m，4H)，3.61-3.69(m，2H)，3.76-3.84(m，2H)，3.90(t，J＝7.42Hz，8H)，6.25(dd，J＝8.79，2.54Hz，2H)，6.72(s，2H)，6.75-6.80(m，1H)，6.77(d，J＝8.59Hz，2H)，6.84(d，J＝2.73Hz，2H)，7.74(s，1H)，7.84(dd，J＝8.01，1.37Hz，1H)，7.97-8.02(m，1H).
ESI-MS m/z 659[M+H]+
实施例2
N-(2-(2，5-二氧代-2，5-二氢-1H-吡咯-1-基)乙基)-3’，7’-双(3-氟氮杂环丁烷-
1-基)-3-氧代-3H-二螺[异苯并呋喃-1，10’-二苯并[b，e]硅宾-5’，1’’-硅杂环己烷]-6-甲
酰胺的合成
【化56】
(1)3’，7’-双(3-氟氮杂环丁烷-1-基)-3-氧代-3H-二螺[异苯并呋喃-1，10’-二苯 并[b，e]硅宾-5’，1’’-硅杂环己烷]-6-羧酸叔丁酯的合成
在氮气氛下将制造例5-(2)中得到的3-氧代-3’，7’-双(((三氟甲基)磺酰基)氧基)-3H-二螺[异苯并呋喃-1，10’-二苯并[b，e]硅宾-5’，1”-硅杂环己烷]-6-羧酸叔丁酯(19.0mg，24.0μmol)、3-氟氮杂环丁烷盐酸盐(7.62mg，68.0μmol，CAS No.617718-46-4)、碳酸铯(47.7mg，146μmol)、三(二亚苄基丙酮)二钯(0)(2.23mg，2.44μmol)、XPhos(3.49mg，7.32μmol)和1，4-二噁烷(3.00mL)的混合物在封管中在100℃下搅拌了4小时。冷却到室温后，用DCM稀释。将不溶物过滤，将溶出物浓缩。将残渣用硅胶薄层色谱(正庚烷/醋酸乙酯)精制，得到了标记化合物(7.00mg，11.0μmol)。
ESI-MS m/z 629[M+H]+
(2)4-羧基-2-(3-(3-氟氮杂环丁烷-1-鎓-1-亚基)-7-(3-氟氮杂环丁烷-1-基)- 3H-螺[二苯并[b，e]硅宾-5，1’-硅杂环己烷]-10-基)苯甲酸盐TFA盐的合成
按照实施例1-(2)，由实施例2-(1)中得到的化合物(7.00mg，11.0μmol)得到了标记化合物的粗产物(8.00mg)。
ESI-MS m/z 573[M+H]+
(3)N-(2-(2，5-二氧代-2，5-二氢-1H-吡咯-1-基)乙基)-3’，7’-双(3-氟氮杂环丁 烷-1-基)-3-氧代-3H-二螺[异苯并呋喃-1，10’-二苯并[b，e]硅宾-5’，1’’-硅杂环己烷]- 6-甲酰胺的合成
在实施例2-(2)中得到的化合物(8.00mg)的DMF(1.00mL)溶液中加入了N-(2-氨基乙基)马来酰亚胺TFA盐(6.81mg，27.0μmol)、TEA(9.74μL，70.0μmol)和PyBOP(9.09mg，17.0μmol)。将反应混合物在室温下搅拌了一晚后，直接使用反相硅胶柱色谱(水/乙腈、0.1％甲酸)精制。通过将得到的粗产物用硅胶薄层色谱(正庚烷/醋酸乙酯)精制，从而得到了标记化合物(2.40mg，3.45μmol)。
1H-NMR(400MHz，CDCl3)δ(ppm)：1.14-1.24(m，4H)，1.73(br.s.，2H)，1.99(br.s.，2H)，2.11(br.s.，2H)，3.60-3.68(m，2H)，3.77-3.86(m，2H)，3.92-4.06(m，4H)，4.15-4.27(m，4H)，5.31-5.54(m，2H)，6.30(dd，J＝8.79，2.54Hz，2H)，6.72(s，2H)，6.81-6.83(m，1H)，6.82(d，J＝8.59Hz，2H)，6.87(d，J＝2.73Hz，2H)，7.75(d，J＝0.78Hz，1H)，7.82-7.88(m，1H)，8.01(d，J＝8.20Hz，1H).
ESI-MS m/z 695[M+H]+
实施例3
3’，7’-双(3，3-二氟氮杂环丁烷-1-基)-N-(2-(2，5-二氧代-2，5-二氢-1H-吡咯-
1-基)乙基)-3-氧代-3H-二螺[异苯并呋喃-1，10’-二苯并[b，e]硅宾-5’，1’’-硅杂环己
烷]-6-甲酰胺的合成
【化57】
(1)3’，7’-双(3，3-二氟氮杂环丁烷-1-基)-3-氧代-3H-二螺[异苯并呋喃-1，10’- 二苯并[b，e]硅宾-5’，1’’-硅杂环己烷]-6-羧酸叔丁酯的合成
按照实施例1-(1)，由制造例5-(2)中得到的3-氧代-3’，7’-双(((三氟甲基)磺酰基)氧基)-3H-二螺[异苯并呋喃-1，10’-二苯并[b，e]硅宾-5’，1”-硅杂环己烷]-6-羧酸叔丁酯(19.0mg，24.0μmol)和3，3-二氟氮杂环丁烷盐酸盐(8.85mg，68.0μmol，CASNo.288315-03-7)得到了标记化合物(14.0mg，21.0μmol)。
ESI-MS m/z 665[M+H]+
(2)4-羧基-2-(3-(3，3-二氟氮杂环丁烷-1-鎓-1-亚基)-7-(3，3-二氟氮杂环丁 烷-1-基)-3H-螺[二苯并[b，e]硅宾-5，1’-硅杂环己烷]-10-基)苯甲酸盐TFA盐的合成
按照实施例1-(2)，由实施例3-(1)中得到的化合物(14.0mg，21.0μmol)得到了标记化合物的粗产物(16.0mg)。
ESI-MS m/z 609[M+H]+
(3)3’，7’-双(3，3-二氟氮杂环丁烷-1-基)-N-(2-(2，5-二氧代-2，5-二氢-1H-吡 咯-1-基)乙基)-3-氧代-3H-二螺[异苯并呋喃-1，10’-二苯并[b，e]硅宾-5’，1’’-硅杂环己 烷]-6-甲酰胺的合成按照实施例1-(3)，由实施例3-(2)中得到的化合物(16.0mg)得到了标记化合物的粗产物。进而，通过用硅胶薄层色谱(DCM/二乙醚)精制，从而得到了标记化合物(6.20mg，8.48μmol)。
1H-NMR(400MHz，CDCl3)δ(ppm)：1.17-1.25(m，4H)，1.74(br.s.，2H)，1.99(br.s.，2H)，2.12(br.s.，2H)，3.61-3.67(m，2H)，3.80-3.85(m，2H)，4.25(t，J＝11.7Hz，8H)，6.34(dd，J＝8.59，2.73Hz，2H)，6.73(s，2H)，6.80-6.86(m，1H)，6.87(d，J＝8.59Hz，2H)，6.90(d，J＝2.73Hz，2H)，7.77(s，1H)，7.84(dd，J＝8.01，1.37Hz，1H)，8.00-8.04(m，1H).
ESI-MS m/z 731[M+H]+
实施例4
N-(2-(2，5-二氧代-2，5-二氢-1H-吡咯-1-基)乙基)-3’，7’-双(3-甲氧基氮杂环
丁烷-1-基)-3-氧代-3H-二螺[异苯并呋喃-1，10’-二苯并[b，e]硅宾-5’，1’’-硅杂环己
烷]-6-甲酰胺的合成
【化58】
(1)3’，7’-双(3-甲氧基氮杂环丁烷-1-基)-3-氧代-3H-二螺[异苯并呋喃-1，10’- 二苯并[b，e]硅宾-5’，1’’-硅杂环己烷]-6-羧酸叔丁酯的合成
按照实施例1-(1)，由制造例5-(2)中得到的3-氧代-3’，7’-双(((三氟甲基)磺酰基)氧基)-3H-二螺[异苯并呋喃-1，10’-二苯并[b，e]硅宾-5’，1”-硅杂环己烷]-6-羧酸叔丁酯(19.0mg，24.0μmol)和3-甲氧基氮杂环丁烷盐酸盐(8.44mg，68.0μmol，CASNo.148644-09-1)得到了标记化合物的粗产物(18.0mg)。
ESI-MS m/z 653[M+H]+
(2)4-羧基-2-(3-(3-甲氧基氮杂环丁烷-1-鎓-1-亚基)-7-(3-甲氧基氮杂环丁 烷-1-基)-3H-螺[二苯并[b，e]硅宾-5，1’-硅杂环己烷]-10-基)苯甲酸盐TFA盐的合成
按照实施例1-(2)，由实施例4-(1)中得到的化合物(18.0mg)得到了标记化合物的粗产物(20.0mg)。
ESI-MS m/z 597[M+H]+
(3)N-(2-(2，5-二氧代-2，5-二氢-1H-吡咯-1-基)乙基)-3’，7’-双(3-甲氧基氮杂 环丁烷-1-基)-3-氧代-3H-二螺[异苯并呋喃-1，10’-二苯并[b，e]硅宾-5’，1’’-硅杂环己 烷]-6-甲酰胺的合成
按照实施例1-(3)，由实施例4-(2)中得到的化合物(20.0mg)得到了标记化合物(8.40mg，12.0μmol)。
1H-NMR(400MHz，CDCl3)δ(ppm)：1.15-1.26(m，4H)，1.72(br.s.，2H)，1.98(br.s.，2H)，2.12(br.s.，2H)，3.33(s，6H)，3.61-3.67(m，2H)，3.69-3.78(m，4H)，3.78-3.84(m，2H)，4.11(t，J＝7.42Hz，4H)，4.30-4.37(m，2H)，6.28(dd，J＝8.79，2.54Hz，2H)，6.71(s，2H)，6.75-6.81(m，1H)，6.78(d，J＝8.59Hz，2H)，6.86(d，J＝2.73Hz，2H)，7.73(s，1H)，7.84(dd，J＝8.01，1.37Hz，1H)，7.99(d，J＝8.59Hz，1H).
ESI-MS m/z 719[M+H]+
实施例5
N-(2-(2，5-二氧代-2，5-二氢-1H-吡咯-1-基)乙基)-3’，7’-双(3-甲基氮杂环丁
烷-1-基)-3-氧代-3H-二螺[异苯并呋喃-1，10’-二苯并[b，e]硅宾-5’，1’’-硅杂环己烷]-
6-甲酰胺的合成
【化59】
(1)3’，7’-双(3-甲基氮杂环丁烷-1-基)-3-氧代-3H-二螺[异苯并呋喃-1，10’-二 苯并[b，e]硅宾-5’，1’’-硅杂环己烷]-6-羧酸叔丁酯的合成
按照实施例1-(1)，由制造例5-(2)中得到的3-氧代-3’，7’-双(((三氟甲基)磺酰基)氧基)-3H-二螺[异苯并呋喃-1，10’-二苯并[b，e]硅宾-5’，1”-硅杂环己烷]-6-羧酸叔丁酯(19.0mg，24.0μmol)和3-甲基氮杂环丁烷盐酸盐(7.35mg，68.0μmol，CAS No.935669-28-6)得到了标记化合物(10.0mg，16.0μmol)。
ESI-MS m/z 621[M+H]+
(2)4-羧基-2-(3-(3-甲基氮杂环丁烷-1-鎓-1-亚基)-7-(3-甲基氮杂环丁烷-1- 基)-3H-螺[二苯并[b，e]硅宾-5，1’-硅杂环己烷]-10-基)苯甲酸盐TFA盐的合成
按照实施例1-(2)，由实施例5-(1)中得到的化合物(10.0mg，16.0μmol)得到了标记化合物的粗产物(11.0mg)。
ESI-MS m/z 565[M+H]+
(3)N-(2-(2，5-二氧代-2，5-二氢-1H-吡咯-1-基)乙基)-3’，7’-双(3-甲基氮杂环 丁烷-1-基)-3-氧代-3H-二螺[异苯并呋喃-1，10’-二苯并[b，e]硅宾-5’，1’’-硅杂环己 烷]-6-甲酰胺的合成
按照实施例3-(3)，由实施例5-(2)中得到的化合物(11.0mg)得到了标记化合物的粗产物。通过用硅胶薄层色谱(正庚烷/醋酸乙酯)将得到的粗产物精制，从而得到了标记化合物(2.00mg，2.91μmol)。
1H-NMR(400MHz，CDCl3)δ(ppm)：1.17-1.23(m，4H)，1.26(s，3H)，1.28(s，3H)，1.71(br.s.，2H)，1.98(br.s.，2H)，2.10(br.s.，2H)，2.76-2.91(m，2H)，3.40-3.52(m，4H)，3.59-3.69(m，2H)，3.76-3.85(m，2H)，3.98-4.07(m，4H)，6.24(dd，J＝8.59，2.73Hz，2H)，6.72(s，2H)，6.72-6.77(m，1H)，6.76(d，J＝8.59Hz，2H)，6.82(d，J＝2.73Hz，2H)，7.73(s，1H)，7.83(dd，J＝8.01，1.37Hz，1H)，7.99(d，J＝7.42Hz，1H).
ESI-MS m/z 687[M+H]+
实施例6
3’，7’-双(3，3-二甲基氮杂环丁烷-1-基)-N-(2-(2，5-二氧代-2，5-二氢-1H-吡
咯-1-基)乙基)-3-氧代-3H-二螺[异苯并呋喃-1，10’-二苯并[b，e]硅宾-5’，1’’-硅杂环己
烷]-6-甲酰胺的合成
【化60】
(1)3’，7’-双(3，3-二甲基氮杂环丁烷-1-基)-3-氧代-3H-二螺[异苯并呋喃-1， 10’-二苯并[b，e]硅宾-5’，1’’-硅杂环己烷]-6-羧酸叔丁酯的合成
按照实施例1-(1)，由制造例5-(2)中得到的3-氧代-3’，7’-双(((三氟甲基)磺酰基)氧基)-3H-二螺[异苯并呋喃-1，10’-二苯并[b，e]硅宾-5’，1”-硅杂环己烷]-6-羧酸叔丁酯(20.0mg，26.0μmol)和3，3-二甲基氮杂环丁烷盐酸盐(8.74mg，72.0μmol，CASNo.89381-03-3)得到了标记化合物(14.0mg，22.0μmol)。
1H-NMR(400MHz，CDCl3)δ(ppm)：1.17-1.25(m，4H)，1.31(s，12H)，1.55(s，9H)，1.72(br.s.，2H)，1.97-2.18(m，4H)，3.60(s，8H)，6.29(dd，J＝8.79，2.54Hz，2H)，6.82(d，J＝2.73Hz，2H)，6.86(d，J＝8.59Hz，2H)，7.83(s，1H)，7.94(d，J＝7.81Hz，1H)，8.10(dd，J＝8.20，1.17Hz，1H).
(2)4-羧基-2-(3-(3，3-二甲基氮杂环丁烷-1-鎓-1-亚基)-7-(3，3-二甲基氮杂环 丁烷-1-基)-3H-螺[二苯并[b，e]硅宾-5，1’-硅杂环己烷]-10-基)苯甲酸盐TFA盐的合成
按照实施例1-(2)，由实施例6-(1)中得到的化合物(14.0mg，22.0μmol)得到了标记化合物的粗产物(16.0mg)。
ESI-MS m/z 593[M+H]+
(3)3’，7’-双(3，3-二甲基氮杂环丁烷-1-基)-N-(2-(2，5-二氧代-2，5-二氢-1H- 吡咯-1-基)乙基)-3-氧代-3H-二螺[异苯并呋喃-1，10’-二苯并[b，e]硅宾-5’，1’’-硅杂环 己烷]-6-甲酰胺的合成
按照实施例2-(3)，由实施例6-(2)中得到的化合物(16.0mg)得到了标记化合物的粗产物。进而，通过用硅胶薄层色谱(乙醚)进行精制，从而得到了标记化合物(5.00mg，6.99μmol)。
1H-NMR(400MHz，CDCl3)δ(ppm)：1.16-1.25(m，4H)，1.31(s，12H)，1.71(br.s.，2H)，1.98(br.s.，2H)，2.10(br.s.，2H)，3.59(s，8H)，3.61-3.67(m，2H)，3.78-3.84(m，2H)，6.24(dd，J＝8.79，2.54Hz，2H)，6.72(s，2H)，6.73-6.78(m，3H)，6.82(d，J＝2.73Hz，2H)，7.71(s，1H)，7.82(dd，J＝8.01，1.37Hz，1H)，7.99(d，J＝7.81Hz，1H).
ESI-MS m/z 715[M+H]+
实施例7
3’，7’-二(7-氮杂双环[2.2.1]庚烷-7-基)-N-(2-(2，5-二氧代-2，5-二氢-1H-吡
咯-1-基)乙基)-3-氧代-3H-二螺[异苯并呋喃-1，10’-二苯并[b，e]硅宾-5’，1’’-硅杂环己
烷]-6-甲酰胺的合成
【化61】
(1)3’，7’-二(7-氮杂双环[2.2.1]庚烷-7-基)-3-氧代-3H-二螺[异苯并呋喃-1， 10’-二苯并[b，e]硅宾-5’，1’’-硅杂环己烷]-6-羧酸叔丁酯的合成
在氮气氛下将制造例5-(2)中得到的3-氧代-3’，7’-双(((三氟甲基)磺酰基)氧基)-3H-二螺[异苯并呋喃-1，10’-二苯并[b，e]硅宾-5’，1”-硅杂环己烷]-6-羧酸叔丁酯(12.0mg，15.0μmol)、7-氮杂双环[2.2.1]庚烷(4.19mg，43.0μmol，CAS No.279-40-3)、碳酸铯(14.1mg，43.0μmol)、三(二亚苄基丙酮)二钯(0)(1.41mg，1.54μmol)、XPhos(2.20mg，4.62μmol)和1，4-二噁烷(2.00mL)的混合物在封管中100℃下搅拌了2小时。冷却到室温后，用DCM稀释。将不溶物过滤，将溶出物浓缩。将残渣用NH硅胶薄层色谱(正庚烷/醋酸乙酯)精制，得到了标记化合物的粗产物(13.0mg)。
1H-NMR(400MHz，CDCl3)δ(ppm)：1.15-1.23(m，4H)，1.56(s，9H)，1.57-1.63(m，8H)，1.74-1.82(m，10H)，2.03(br.s.，2H)，2.12(br.s.，2H)，4.20(br.s.，4H)，6.72(dd，J＝8.59，2.73Hz，2H)，6.83(d，J＝8.98Hz，2H)，7.31(d，J＝2.73Hz，2H)，7.84(d，J＝0.78Hz，1H)，7.93-7.97(m，1H)，8.12(dd，J＝8.01，1.37Hz，1H).
(2)2-(3-(7-氮杂双环[2.2.1]庚烷-7-鎓-7-亚基)-7-(7-氮杂双环[2.2.1]庚烷- 7-基)-3H-螺[二苯并[b，e]硅宾-5，1’-硅杂环己烷]-10-基)-4-羧基苯甲酸盐TFA盐的合成
按照实施例1-(2)，由实施例7-(1)中得到的化合物(13.0mg)得到了标记化合物的粗产物(15.0mg)。
ESI-MS m/z 617[M+H]+
(3)3’，7’-二(7-氮杂双环[2.2.1]庚烷-7-基)-N-(2-(2，5-二氧代-2，5-二氢-1H- 吡咯-1-基)乙基)-3-氧代-3H-二螺[异苯并呋喃-1，10’-二苯并[b，e]硅宾-5’，1’’-硅杂环 己烷]-6-甲酰胺的合成按照实施例1-(3)，由实施例7-(2)中得到的化合物(15.0mg)得到了标记化合物(2.10mg，2.84μmol)。
1H-NMR(400MHz，CDCl3)δ(ppm)：1.14-1.25(m，4H)，1.39-1.47(m，8H)，1.73-1.81(m，10H)，1.99(br.s.，2H)，2.14(br.s.，2H)，3.61-3.67(m，2H)，3.78-3.85(m，2H)，4.19(br.s.，4H)，6.64-6.70(m，2H)，6.72(s，2H)，6.72-6.75(m，2H)，6.80(t，J＝5.27Hz，1H)，7.31(d，J＝2.73Hz，2H)，7.74(d，J＝0.78Hz，1H)，7.85(dd，J＝8.20，1.56Hz，1H)，7.98-8.03(m，1H).
ESI-MS m/z 739[M+H]+
实施例8
N-(2-(2，5-二氧代-2，5-二氢-1H-吡咯-1-基)乙基)-3-氧代-3’，7’-二(哌啶-1-
基)-3H-二螺[异苯并呋喃-1，10’-二苯并[b，e]硅宾-5’，1’’-硅杂环己烷]-6-甲酰胺的合
成
【化62】
(1)3-氧代-3’，7’-二(哌啶-1-基)-3H-二螺[异苯并呋喃-1，10’-二苯并[b，e]硅
宾-5’，1’’-硅杂环己烷]-6-羧酸的合成
在氮气氛下将制造例5-(2)中得到的3-氧代-3’，7’-双(((三氟甲基)磺酰基)氧基)-3H-二螺[异苯并呋喃-1，10’-二苯并[b，e]硅宾-5’，1”-硅杂环己烷]-6-羧酸叔丁酯(25.0mg，32.0μmol)、哌啶(13.7mg，161μmol)、三(二亚苄基丙酮)二钯(0)(5.88mg，6.42μmol)、XPhos(6.12mg，13.0μmol)、碳酸铯(29.3mg，90.0μmol)和1，4-二噁烷(2.00mL)的混合物在封管中110℃下搅拌了3小时。冷却到室温后，用DCM稀释。将不溶物过滤，将滤液浓缩。通过将残渣用硅胶柱色谱(正庚烷/醋酸乙酯)精制，从而得到了中间体。使得到的中间体在DCM(4.00mL)中溶解，加入了TFA(1.00mL)。将反应混合物在室温下搅拌了一晚后，将溶剂减压馏除。将残渣用饱和碳酸氢钠水溶液中和，用醋酸乙酯将水层萃取。将有机层用水洗净，将溶剂减压馏除。通过将得到的残渣用硅胶柱色谱(正庚烷/醋酸乙酯)精制，从而得到了标记化合物(7.20mg，12.0μmol)。
ESI-MS m/z 593[M+H]+
(2)N-(2-(2，5-二氧代-2，5-二氢-1H-吡咯-1-基)乙基)-3-氧代-3’，7’-二(哌啶- 1-基)-3H-二螺[异苯并呋喃-1，10’-二苯并[b，e]硅宾-5’，1’’-硅杂环己烷]-6-甲酰胺的 合成
将实施例8-(1)中得到的化合物(7.00mg，12.0μmol)、PyBOP(7.37mg，14.0μmol)、N-(2-氨基乙基)马来酰亚胺TFA盐(3.60mg，14.0μmol)、三乙胺(9.88μL，71.0μmol)和DMF(1.00mL)的混合物在室温下搅拌了2小时。加入冰，使反应停止，用醋酸乙酯将水层萃取。将有机层用饱和食盐水清洗3次，用无水硫酸镁干燥。将溶剂减压馏除，将得到的残渣用硅胶薄层色谱(正庚烷/醋酸乙酯)精制，得到了粗精制物。通过将得到的粗精制物用硅胶薄层色谱(DCM/MeOH)精制，从而得到了标记化合物(2.20mg，3.08μmol)。
1H-NMR(400MHz，CDCl3)δ(ppm)：1.23-1.30(m，4H)，1.56-1.63(m，4H)，1.65-1.78(m，10H)，1.95-2.05(m，2H)，2.08-2.21(m，2H)，3.14-3.24(m，8H)，3.59-3.69(m，2H)，3.77-3.86(m，2H)，6.72(s，2H)，6.72-6.77(m，3H)，6.80-6.86(m，2H)，7.36(d，J＝2.73Hz，2H)，7.72(s，1H)，7.82(dd，J＝8.01，1.37Hz，1H)，7.97-8.02(m，1H).
ESI-MS m/z 715[M+H]+
实施例9
N-(2-(2，5-二氧代-2，5-二氢-1H-吡咯-1-基)乙基)-3’，7’-二(1，4-氧氮杂环庚
烷-4-基)-3-氧代-3H-二螺[异苯并呋喃-1，10’-二苯并[b，e]硅宾-5’，1’’-硅杂环己烷]-
6-甲酰胺的合成
【化63】
(1)3’，7’-二(1，4-氧氮杂环庚烷-4-基)-3-氧代-3H-二螺[异苯并呋喃-1，10’-二 苯并[b，e]硅宾-5’，1’’-硅杂环己烷]-6-羧酸叔丁酯的合成
按照实施例1-(1)，由制造例5-(2)中得到的3-氧代-3’，7’-双(((三氟甲基)磺酰基)氧基)-3H-二螺[异苯并呋喃-1，10’-二苯并[b，e]硅宾-5’，1”-硅杂环己烷]-6-羧酸叔丁酯(20.0mg，26.0μmol)和1，4-氧氮杂环庚烷(7.27mg，72.0μmol)得到了标记化合物(9.00mg，13.0μmol)。
1H-NMR(400MHz，CDCl3)δ(ppm)：1.20-1.31(m，4H)，1.57(s，9H)，1.74(br.s.，2H)，1.97-2.06(m，6H)，2.11(br.s.，2H)，3.59-3.72(m，12H)，3.80-3.86(m，4H)，6.57(dd，J＝8.98，3.12Hz，2H)，6.84(d，J＝8.59Hz，2H)，7.14(d，J＝2.73Hz，2H)，7.90(d，J＝1.17Hz，1H)，7.97(dd，J＝7.81，0.78Hz，1H)，8.14(dd，J＝8.01，1.37Hz，1H).
ESI-MS m/z 681[M+H]+
(2)2-(3-(1，4-氧氮杂环庚烷-4-鎓-4-亚基)-7-(1，4-氧氮杂环庚烷-4-基)-3H- 螺[二苯并[b，e]硅宾-5，1’-硅杂环己烷]-10-基)-4-羧基苯甲酸盐TFA盐的合成
按照实施例1-(2)，由实施例9-(1)中得到的化合物(9.00mg，13.0μmol)得到了标记化合物的粗产物(10.0mg)。
ESI-MS m/z 625[M+H]+
(3)N-(2-(2，5-二氧代-2，5-二氢-1H-吡咯-1-基)乙基)-3’，7’-二(1，4-氧氮杂环 庚烷-4-基)-3-氧代-3H-二螺[异苯并呋喃-1，10’-二苯并[b，e]硅宾-5’，1’’-硅杂环己 烷]-6-甲酰胺的合成
在实施例9-(2)中得到的化合物(10.0mg)的DMF(2.00mL)溶液中加入了TEA(11.0μL，81.0μmol)、N-(2-氨基乙基)马来酰亚胺TFA盐(4.13mg，16.0μmol)和PyBOP(8.45mg，16.0μmol)。将反应混合物在室温下搅拌了3小时后，加入冰，使反应停止。将水层用醋酸乙酯萃取，将有机层用饱和食盐水清洗3次。将有机层用无水硫酸镁干燥，将溶剂减压馏除。通过用硅胶薄层色谱(正庚烷/醋酸乙酯)将得到的残渣精制，从而得到了粗产物。进而，通过将粗产物用硅胶薄层色谱(DCM/MeOH)精制，从而得到了标记化合物(4.05mg，5.42μmol)。
1H-NMR(400MHz，CDCl3)δ(ppm)：1.15-1.30(m，4H)，1.73(br.s.，2H)，1.91-2.07(m，6H)，2.11(br.s.，2H)，3.56-3.72(m，14H)，3.77-3.88(m，6H)，6.53(dd，J＝8.79，2.93Hz，2H)，6.72(s，2H)，6.76(d，J＝8.98Hz，2H)，6.79-6.85(m，1H)，7.14(d，J＝3.12Hz，2H)，7.77(s，1H)，7.85(dd，J＝8.01，1.37Hz，1H)，8.01(d，J＝7.81Hz，1H).
ESI-MS m/z 747[M+H]+
实施例10
N-(2-(2，5-二氧代-2，5-二氢-1H-吡咯-1-基)乙基)-3’，7’-双(二丙基氨基)-3-
氧代-3H-二螺[异苯并呋喃-1，10’-二苯并[b，e]硅宾-5’，1’’-硅杂环己烷]-6-甲酰胺的合
成
【化64】
(1)3’，7’-双(二丙基氨基)-3-氧代-3H-二螺[异苯并呋喃-1，10’-二苯并[b，e]硅 宾-5’，1’’-硅杂环己烷]-6-羧酸叔丁酯的合成按照实施例1-(1)，由制造例5-(2)中得到的3-氧代-3’，7’-双(((三氟甲基)磺酰基)氧基)-3H-二螺[异苯并呋喃-1，10’-二苯并[b，e]硅宾-5’，1”-硅杂环己烷]-6-羧酸叔丁酯(20.0mg，26.0μmol)和二丙胺(7.28mg，72.0μmol)得到了标记化合物(3.00mg，4.41μmol)。
ESI-MS m/z 681[M+H]+
(2)4-羧基-2-(7-(二丙基氨基)-3-(二丙基亚氨基)-3H-螺[二苯并[b，e]硅宾-5， 1’-硅杂环己烷]-10-基)苯甲酸盐TFA盐的合成
按照实施例1-(2)，由实施例10-(1)中得到的化合物(3.00mg，4.41μmol)得到了标记化合物的粗产物(7.00mg)。
ESI-MS m/z 625[M+H]+
(3)N-(2-(2，5-二氧代-2，5-二氢-1H-吡咯-1-基)乙基)-3’，7’-双(二丙基氨基)-
3-氧代-3H-二螺[异苯并呋喃-1，10’-二苯并[b，e]硅宾-5’，1’’-硅杂环己烷]-6-甲酰胺的
合成
在实施例10-(2)中得到的化合物(7.00mg)的DMF(2.00mL)溶液中加入了TEA(7.92μL，57.0μmol)、N-(2-氨基乙基)马来酰亚胺TFA盐(2.89mg，11.0μmol)和PyBOP(5.92mg，11.0μmol)。将反应混合物在室温下搅拌了4.5小时后，加入冰，使反应停止。将水层用醋酸乙酯萃取，将有机层用水清洗3次。将溶剂减压馏除，通过将得到的残渣用硅胶薄层色谱(乙醚)精制，得到了标记化合物(2.36mg，3.16μmol)。
1H-NMR(400MHz，CDCl3)δ(ppm)：0.92(t，J＝7.42Hz，12H)，1.17-1.24(m，4H)，1.56-1.66(m，8H)，1.72(br.s.，2H)，1.99(br.s.，2H)，2.14(br.s.，2H)，3.21-3.29(m，8H)，3.62-3.69(m，2H)，3.79-3.84(m，2H)，6.43(dd，J＝8.98，3.12Hz，2H)，6.70(d，J＝8.98Hz，2H)，6.71(s，2H)，6.73(br.s.，1H)，7.05(d，J＝2.73Hz，2H)，7.75(s，1H)，7.84(dd，J＝7.81，1.56Hz，1H)，7.99(d，J＝7.81Hz，1H).
ESI-MS m/z 747[M+H]+
实施例11
3’，7’-二(氮杂环丁烷-1-基)-N-(2-(2-(2-(2-(2，5-二氧代-2，5-二氢-1H-吡咯-
1-基)乙氧基)乙氧基)乙氧基)乙基)-3-氧代-3H-二螺[异苯并呋喃-1，10’-二苯并[b，e]硅
宾-5’，1’’-硅杂环己烷]-6-甲酰胺的合成
【化65】
(1)(1-(3’，7’-二(氮杂环丁烷-1-基)-3-氧代-3H-二螺[异苯并呋喃-1，10’-二苯 并[b，e]硅宾-5’，1’’-硅杂环己烷]-6-基)-1-氧代-5，8，11-三氧杂-2-氮杂十三烷-13-基) 氨基甲酸叔丁酯的合成
将实施例1-(2)中得到的化合物(70.0mg)、13-氨基-5，8，11-三氧杂-2-氮杂十三酸1，1-二甲基乙酯(37.7mg，129μmol，CAS No.101187-40-0)、PyBop(84.0mg，161μmol)、TEA(90.0μL，645μmol)和DMF(2.00mL)的混合物在室温下搅拌了一晚。在反应混合物中加入冰，使反应停止。将水层用醋酸乙酯萃取，将有机层用饱和食盐水清洗3次。将混合物用无水硫酸镁干燥，将溶剂减压馏除。通过将残渣用硅胶柱色谱(正庚烷/醋酸乙酯)精制，从而得到了标记化合物(67.0mg，83.0μmol)。
ESI-MS m/z 811[M+H]+
(2)4-((2-(2-(2-(2-氨基乙氧基)乙氧基)乙氧基)乙基)氨基甲酰基)-2-(3-(氮 杂环丁烷-1-鎓-1-亚基)-7-(氮杂环丁烷-1-基)-3H-螺[二苯并[b，e]硅宾-5，1’-硅杂环己 烷]-10-基)苯甲酸盐2TFA盐的合成
在实施例11-(1)中得到的化合物(67.0mg，83.0μmol)的DCM(4.00mL)溶液中加入TFA(800μL)，在室温下搅拌了1小时。通过将溶剂减压馏除，从而得到了标记化合物的粗产物(80.0mg)。
ESI-MS m/z 711[M+H]+
(3)3’，7’-二(氮杂环丁烷-1-基)-N-(2-(2-(2-(2-(2，5-二氧代-2，5-二氢-1H-吡 咯-1-基)乙氧基)乙氧基)乙氧基)乙基)-3-氧代-3H-二螺[异苯并呋喃-1，10’-二苯并[b， e]硅宾-5’，1’’-硅杂环己烷]-6-甲酰胺的合成
在实施例11-(2)中得到的化合物(80.0mg)、THF(3.03mL)和饱和碳酸氢钠水溶液(3.03mL)的混合物中加入了2，5-二氧代-2，5-二氢-1H-吡咯-1-羧酸甲酯(79.0mg，511μmol，CAS No.55750-48-6)。将反应混合物在室温下搅拌了一晚后，用醋酸乙酯稀释。将水层用醋酸乙酯萃取，将有机层用水和饱和食盐水清洗。将混合物用无水硫酸镁干燥，将溶剂减压馏除。通过将残渣用硅胶薄层色谱(醋酸乙酯)精制，从而得到了标记化合物(23.0mg，29.0μmol)。
1H-NMR(400MHz，CDCl3)δ(ppm)：1.15-1.29(m，4H)，1.71(br.s.，2H)，1.97(br.s.，2H)，2.11(br.s.，2H)，2.37(quin，J＝7.22Hz，4H)，3.45-3.54(m，6H)，3.55-3.63(m，6H)，3.63-3.68(m，4H)，3.90(t，J＝7.22Hz，8H)，6.24(dd，J＝8.59，2.73Hz，2H)，6.60(s，2H)，6.75(d，J＝8.59Hz，2H)，6.82(d，J＝2.73Hz，2H)，7.03-7.09(m，1H)，7.75-7.80(m，1H)，7.96-8.00(m，2H).
ESI-MS m/z 791[M+H]+
实施例12
3’，7’-二(氮杂环丁烷-1-基)-N-(2-(2，5-二氧代-2，5-二氢-1H-吡咯-1-基)乙
基)-3-氧代-3H-二螺[异苯并呋喃-1，10’-二苯并[b，e]硅宾-5’，1’’-硅杂环己烷]-5-甲酰
胺的合成
【化66】
(1)3’，7’-二(氮杂环丁烷-1-基)-3-氧代-3H-二螺[异苯并呋喃-1，10’-二苯并 [b，e]硅宾-5’，1’’-硅杂环己烷]-5-羧酸叔丁酯的合成
按照实施例2-(1)，由制造例6-(2)中得到的3-氧代-3’，7’-双(((三氟甲基)磺酰基)氧基)-3H-二螺[异苯并呋喃-1，10’-二苯并[b，e]硅宾-5’，1”-硅杂环己烷]-5-羧酸叔丁酯(31.0mg，40.0μmol)得到了标记化合物(6.00mg，10.1μmol)。
ESI-MS m/z 593[M+H]+
(2)2-(3-(氮杂环丁烷-1-鎓-1-亚基)-7-(氮杂环丁烷-1-基)-3H-螺[二苯并[b， e]硅宾-5，1’-硅杂环己烷]-10-基)-5-羧基苯甲酸盐TFA盐的合成
按照实施例1-(2)，由采用实施例12-(1)的方法得到的化合物(15.0mg，25.0μmol)得到了标记化合物的粗产物(17.0mg)。
ESI-MS m/z 537[M+H]+
(3)3’，7’-二(氮杂环丁烷-1-基)-N-(2-(2，5-二氧代-2，5-二氢-1H-吡咯-1-基) 乙基)-3-氧代-3H-二螺[异苯并呋喃-1，10’-二苯并[b，e]硅宾-5’，1’’-硅杂环己烷]-5-甲 酰胺的合成
按照实施例3-(3)，由实施例12-(2)中得到的化合物(17.0mg)得到了标记化合物(1.50mg，2.28μmol)。
1H-NMR(400MHz，CDCl3)δ(ppm)：1.17-1.26(m，4H)，1.72(br.s.，2H)，1.98(br.s.，2H)，2.12(br.s.，2H)，2.32-2.43(m，4H)，3.68-3.75(m，2H)，3.83-3.88(m，2H)，3.90(t，J＝7.22Hz，8H)，6.24(dd，J＝8.59，2.34Hz，2H)，6.74(d，J＝8.59Hz，2H)，6.76(s，2H)，6.78-6.84(m，1H)，6.84(d，J＝2.73Hz，2H)，7.39(d，J＝8.20Hz，1H)，8.11(dd，J＝8.01，1.76Hz，1H)，8.25(s，1H).
ESI-MS m/z 659[M+H]+
实施例13
3’，7’-二(氮杂环丁烷-1-基)-5-氯-N-(2-(2，5-二氧代-2，5-二氢-1H-吡咯-1-
基)乙基)-3-氧代-3H-二螺[异苯并呋喃-1，10’-二苯并[b，e]硅宾-5’，1’’-硅杂环己烷]-
6-甲酰胺的合成
【化67】
(1)3’，7’-二(氮杂环丁烷-1-基)-5-氯-3-氧代-3H-二螺[异苯并呋喃-1，10’-二 苯并[b，e]硅宾-5’，1’’-硅杂环己烷]-6-羧酸叔丁酯和3’，5，7’-三(氮杂环丁烷-1-基)-3- 氧代-3H-二螺[异苯并呋喃-1，10’-二苯并[b，e]硅宾-5’，1’’-硅杂环己烷]-6-羧酸叔丁酯 的合成
在氮气氛下将制造例7-(2)中得到的5-氯-3-氧代-3’，7’-双(((三氟甲基)磺酰基)氧基)-3H-二螺[异苯并呋喃-1，10’-二苯并[b，e]硅宾-5’，1”-硅杂环己烷]-6-羧酸叔丁酯(128mg，157μmol)、氮杂环丁烷(25.2mg，441μmol)、碳酸铯(144mg，441μmol)、三(二亚苄基丙酮)二钯(0)(14.4mg，16.0μmol)、XPhos(22.5mg，47.0μmol)和甲苯(2.00mL)的混合物在封管中110℃下搅拌了4.5小时。冷却到室温后，将不溶物过滤。将溶出物浓缩，通过将得到的残渣用硅胶柱色谱(正庚烷/醋酸乙酯)精制，从而得到了3’，7’-二(氮杂环丁烷-1-基)-5-氯-3-氧代-3H-二螺[异苯并呋喃-1，10’-二苯并[b，e]硅宾-5’，1”-硅杂环己烷]-6-羧酸叔丁酯。
ESI-MS m/z 627[M+H]+
另外，作为副产物，得到了3’，5，7’-三(氮杂环丁烷-1-基)-3-氧代-3H-二螺[异苯并呋喃-1，10’-二苯并[b，e]硅宾-5’，1”-硅杂环己烷]-6-羧酸叔丁酯。
ESI-MS m/z 648[M+H]+
(2)2-(3-(氮杂环丁烷-1-鎓-1-亚基)-7-(氮杂环丁烷-1-基)-3H-螺[二苯并[b， e]硅宾-5，1’-硅杂环己烷]-10-基)-4-羧基-5-氯苯甲酸盐TFA盐的合成
按照实施例1-(2)，由实施例13-(1)中得到的3’，7’-二(氮杂环丁烷-1-基)-5-氯-3-氧代-3H-二螺[异苯并呋喃-1，10’-二苯并[b，e]硅宾-5’，1”-硅杂环己烷]-6-羧酸叔丁酯得到了标记化合物的粗产物(15.0mg)。
ESI-MS m/z 571[M+H]+
(3)3’，7’-二(氮杂环丁烷-1-基)-5-氯-N-(2-(2，5-二氧代-2，5-二氢-1H-吡咯- 1-基)乙基)-3-氧代-3H-二螺[异苯并呋喃-1，10’-二苯并[b，e]硅宾-5’，1’’-硅杂环己 烷]-6-甲酰胺的合成
按照实施例10-(3)，由实施例13-(2)中得到的化合物(15.0mg)得到了标记化合物的粗产物。进而，通过用硅胶薄层色谱(DCM/MeOH)精制，从而得到了标记化合物(1.10mg，1.59μmol)。
1H-NMR(400MHz，CDCl3)δ(ppm)：1.13-1.21(m，4H)，1.71(br.s.，2H)，1.97(br.s.，2H)，2.10(br.s.，2H)，2.32-2.43(m，4H)，3.64-3.72(m，2H)，3.76-3.83(m，2H)，3.91(t，J＝7.22Hz，8H)，6.28(dd，J＝8.79，2.54Hz，2H)，6.44(br.s.，1H)，6.68(s，2H)，6.76(d，J＝8.59Hz，2H)，6.83(d，J＝2.34Hz，2H)，7.45(s，1H)，7.95(s，1H).
ESI-MS m/z 693[M+H]+
实施例14
3’，7’-二(氮杂环丁烷-1-基)-N-(2-(2，5-二氧代-2，5-二氢-1H-吡咯-1-基)乙
基)-5-甲基-3-氧代-3H-二螺[异苯并呋喃-1，10’-二苯并[b，e]硅宾-5’，1’’-硅杂环己
烷]-6-甲酰胺的合成
【化68】
(1)3’，7’-二(氮杂环丁烷-1-基)-5-甲基-3-氧代-3H-二螺[异苯并呋喃-1，10’- 二苯并[b，e]硅宾-5’，1’’-硅杂环己烷]-6-羧酸叔丁酯的合成
按照实施例1-(1)，由制造例8-(3)中得到的5-甲基-3-氧代-3’，7’-双(((三氟甲基)磺酰基)氧基)-3H-二螺[异苯并呋喃-1，10’-二苯并[b，e]硅宾-5’，1”-硅杂环己烷]-6-羧酸叔丁酯(40.0mg，50.0μmol)得到了标记化合物的粗产物(35.0mg)。
ESI-MS m/z 607[M+H]+
(2)2-(3-(氮杂环丁烷-1-鎓-1-亚基)-7-(氮杂环丁烷-1-基)-3H-螺[二苯并[b， e]硅宾-5，1’-硅杂环己烷]-10-基)-4-羧基-5-甲基苯甲酸盐TFA盐的合成
按照实施例1-(2)，由实施例14-(1)中得到的化合物(35.0mg)得到了标记化合物的粗产物(42.0mg)。
ESI-MS m/z 551[M+H]+
(3)3’，7’-二(氮杂环丁烷-1-基)-N-(2-(2，5-二氧代-2，5-二氢-1H-吡咯-1-基) 乙基)-5-甲基-3-氧代-3H-二螺[异苯并呋喃-1，10’-二苯并[b，e]硅宾-5’，1’’-硅杂环己 烷]-6-甲酰胺的合成
在实施例14-(2)中得到的化合物(42.0mg)的DMF(2.00mL)溶液中加入了TEA(44.0μL，316μmol)、N-(2-氨基乙基)马来酰亚胺TFA盐(19.3mg，76.0μmol)和PyBOP(49.3mg，95.0μmol)。将反应混合物在室温下搅拌了1.5小时后，用醋酸乙酯稀释。将有机层用水清洗3次，将溶剂减压馏除。将得到的残渣用硅胶柱色谱(正庚烷/醋酸乙酯)精制。将得到的粗产物用硅胶薄层色谱(乙醚)精制。通过将得到的粗产物进一步用硅胶薄层色谱(DCM/MeOH)精制，从而得到了标记化合物(16.0mg，24.0μmol)。
1H-NMR(400MHz，CDCl3)δ(ppm)：1.18-1.25(m，4H)，1.72(br.s.，2H)，1.98(br.s.，2H)，2.12(br.s.，2H)，2.37-2.43(m，4H)，2.55(s，3H)，3.62-3.67(m，2H)，3.77-3.81(m，2H)，3.92(t，J＝7.22Hz，8H)，6.22(br.s.，1H)，6.28(dd，J＝8.59，2.73Hz，2H)，6.69(s，2H)，6.79(d，J＝8.59Hz，2H)，6.85(d，J＝2.34Hz，2H)，7.28(s，1H)，7.80(s，1H).
ESI-MS m/z 673[M+H]+
实施例15
3’，7’-二(氮杂环丁烷-1-基)-N-(2-(2，5-二氧代-2，5-二氢-1H-吡咯-1-基)乙
基)-5-((3-羟基丙基)氨基)-3-氧代-3H-二螺[异苯并呋喃-1，10’-二苯并[b，e]硅宾-5’，
1’’-硅杂环己烷]-6-甲酰胺的合成
【化69】
(1)2-(3-(氮杂环丁烷-1-鎓-1-亚基)-7-(氮杂环丁烷-1-基)-3H-螺[二苯并[b， e]硅宾-5，1’-硅杂环己烷]-10-基)-4-羧基-5-((3-羟基丙基)氨基)苯甲酸盐2TFA盐的合 成
将实施例13-(1)中作为副产物得到的3’，5，7’-三(氮杂环丁烷-1-基)-3-氧代-3H-二螺[异苯并呋喃-1，10’-二苯并[b，e]硅宾-5’，1”-硅杂环己烷]-6-羧酸叔丁酯的DCM/TFA(2：1)溶液在室温下搅拌了3小时。通过将溶剂减压馏除，从而得到了包含标记化合物的混合物(9.00mg)。将得到的混合物没有进一步精制就用于接下来的反应。
ESI-MS m/z 610[M+H]+
(2)3’，7’-二(氮杂环丁烷-1-基)-N-(2-(2，5-二氧代-2，5-二氢-1H-吡咯-1-基) 乙基)-5-((3-羟基丙基)氨基)-3-氧代-3H-二螺[异苯并呋喃-1，10’-二苯并[b，e]硅宾- 5’，1’’-硅杂环己烷]-6-甲酰胺的合成
按照实施例10-(3)，由实施例15-(1)中得到的混合物(9.00mg)得到了标记化合物(1.22mg，1.67μmol)。
1H-NMR(400MHz，CDCl3)δ(ppm)：1.17-1.25(m，4H)，1.70(br.s.，2H)，1.86-2.00(m，4H)，2.13(br.s.，2H)，2.32-2.43(m，4H)，3.33-3.41(m，2H)，3.54-3.60(m，2H)，3.77(dd，J＝6.44，4.49Hz，2H)，3.85(t，J＝5.86Hz，2H)，3.91(t，J＝7.22Hz，8H)，6.23-6.30(m，2H)，6.55(br.s.，1H)，6.67(s，2H)，6.84(d，J＝5.47Hz，2H)，6.85(s，2H)，7.17(s，1H)，7.33(s，1H).
ESI-MS m/z 732[M+H]+
实施例16
3’，7’-双(二甲基氨基)-N-(2-(2，5-二氧代-2，5-二氢-1H-吡咯-1-基)乙基)-5-
甲基-3-氧代-3H-二螺[异苯并呋喃-1，10’-二苯并[b，e]硅宾-5’，1’’-硅杂环己烷]-6-甲
酰胺的合成
【化70】
(1)3’，7’-双(二甲基氨基)-5-甲基-3-氧代-3H-二螺[异苯并呋喃-1，10’-二苯并 [b，e]硅宾-5’，1’’-硅杂环己烷]-6-羧酸叔丁酯的合成
按照实施例1-(1)，由制造例8-(3)中得到的5-甲基-3-氧代-3’，7’-双(((三氟甲基)磺酰基)氧基)-3H-二螺[异苯并呋喃-1，10’-二苯并[b，e]硅宾-5’，1”-硅杂环己烷]-6-羧酸叔丁酯(40.0mg，50.0μmol)和二甲胺(2M THF溶液、71.0μL，141μmol)得到了标记化合物(10.0mg，17.0μmol)。
ESI-MS m/z 583[M+H]+
(2)4-羧基-2-(7-(二甲基氨基)-3-(二甲基亚氨基)-3H-螺[二苯并[b，e]硅宾-5， 1’-硅杂环己烷]-10-基)-5-甲基苯甲酸盐TFA盐的合成
按照实施例1-(2)，由实施例16-(1)中得到的化合物(10.0mg，17.0μmol)得到了标记化合物的粗产物(15.0mg)。
ESI-MS m/z 527[M+H]+
(3)3’，7’-双(二甲基氨基)-N-(2-(2，5-二氧代-2，5-二氢-1H-吡咯-1-基)乙基)- 5-甲基-3-氧代-3H-二螺[异苯并呋喃-1，10’-二苯并[b，e]硅宾-5’，1’’-硅杂环己烷]-6- 甲酰胺的合成
在实施例16-(2)中得到的化合物(15.0mg)的DMF(2.00mL)溶液中加入了TEA(16.0μL，117μmol)、N-(2-氨基乙基)马来酰亚胺TFA盐(7.14mg，28.0μmol)和PyBOP(18.3mg，35.0μmol)。将反应混合物在室温下搅拌了1.5小时后，用醋酸乙酯稀释。将混合物用水清洗3次，将溶剂减压馏除。将得到的残渣用硅胶薄层色谱(正庚烷/醋酸乙酯)精制，得到了粗产物。进而，通过用硅胶薄层色谱(乙醚)精制，从而得到了标记化合物(10.0mg，15.0μmol)。
1H-NMR(400MHz，CDCl3)δ(ppm)：1.21-1.29(m，4H)，1.75(br.s.，2H)，2.02(br.s.，2H)，2.17(br.s.，2H)，2.55(s，3H)，3.00(s，12H)，3.60-3.68(m，2H)，3.75-3.83(m，2H)，6.19(br.s.，1H)，6.58(dd，J＝8.98，2.73Hz，2H)，6.69(s，2H)，6.82(d，J＝8.98Hz，2H)，7.16(d，J＝2.73Hz，2H)，7.27(s，1H)，7.81(s，1H).
ESI-MS m/z 649[M+H]+
实施例17
N-(2-(2，5-二氧代-2，5-二氢-1H-吡咯-1-基)乙基)-3’，7’-二吗啉代-3-氧代-
3H-二螺[异苯并呋喃-1，10’-二苯并[b，e]硅宾-5’，1’’-硅杂环己烷]-6-甲酰胺的合成
【化71】
(1)3’，7’-二吗啉代-3-氧代-3H-二螺[异苯并呋喃-1，10’-二苯并[b，e]硅宾-5’， 1’’-硅杂环己烷]-6-羧酸的合成
在2，2’-(2-溴-1，4-亚苯基)双(4，4-二甲基-4，5-二氢噁唑)(1.56g，4.43mmol，CAS No.115580-69-3)的THF(20.0mL)溶液中，在-78℃下历时20分钟滴入叔丁基锂(1.62M正戊烷溶液、2.74mL、4.43mmol)。在相同温度下进一步搅拌了1小时后，滴入制造例9中得到的3，7-二吗啉代-10H-螺[二苯并[b，e]硅宾-5，1’-硅杂环己烷]-10-酮(51.0mg，114μmol)的THF(2.00mL)溶液。将反应混合物升温到-40度，在相同温度下搅拌了3小时。缓慢地使反应混合物升温到室温，搅拌了3天。通过在冰浴下加入醋酸(5.00mL)，从而使反应停止。将溶剂减压馏除，在得到的残渣中加入5N盐酸(50.0mL)，在80℃下搅拌了4小时。冷却到室温后，将混合物用饱和碳酸钠水溶液中和。将水层用醋酸乙酯萃取，将有机层用无水硫酸镁干燥。将溶剂减压馏除，通过将得到的残渣用硅胶柱色谱(正庚烷/醋酸乙酯(→醋酸乙酯/甲醇))精制，从而得到了包含标记化合物的混合物(48.0mg)。
ESI-MS m/z 597[M+H]+
(2)N-(2-(2，5-二氧代-2，5-二氢-1H-吡咯-1-基)乙基)-3’，7’-二吗啉代-3-氧 代-3H-二螺[异苯并呋喃-1，10’-二苯并[b，e]硅宾-5’，1’’-硅杂环己烷]-6-甲酰胺的合成
在实施例17-(1)中得到的化合物(48.0mg)的DMF(2.00mL)溶液中加入了TEA(67.0μL，483μmol)、N-(2-氨基乙基)马来酰亚胺TFA盐(24.5mg，97.0μmol)和PyBOP(50.2mg，97.0μmol)。将反应混合物在室温下搅拌了3.5小时后，将混合物直接用反相硅胶柱色谱(水/乙腈、0.1％甲酸)精制，得到了粗产物。通过将得到的粗产物用硅胶薄层色谱(正庚烷/醋酸乙酯)精制，从而得到了标记化合物(13.6mg，19.0μmol)。
1H-NMR(400MHz，CDCl3)δ(ppm)：1.19-1.32(m，4H)，1.74(br.s.，2H)，2.01(br.s.，2H)，2.14(br.s.，2H)，3.14-3.22(m，8H)，3.61-3.67(m，2H)，3.78-3.84(m，2H)，3.84-3.89(m，8H)，6.73(s，2H)，6.73-6.76(m，2H)，6.79(s，1H)，6.90(d，J＝8.59Hz，2H)，7.34(d，J＝2.73Hz，2H)，7.74(s，1H)，7.82(dd，J＝8.01，1.37Hz，1H)，8.01(d，J＝8.20Hz，1H).
ESI-MS m/z 719[M+H]+
实施例18
N-(2-(2，5-二氧代-2，5-二氢-1H-吡咯-1-基)乙基)-3’，7’-二吗啉代-3-氧代-
3H-二螺[异苯并呋喃-1，10’-二苯并[b，e]硅宾-5’，1’’-硅杂环己烷]-5-甲酰胺的合成
【化72】
(1)3’，7’-二吗啉代-3-氧代-3H-二螺[异苯并呋喃-1，10’-二苯并[b，e]硅宾-5’， 1’’-硅杂环己烷]-5-羧酸的合成
按照实施例17-(1)，由制造例9中得到的3，7-二吗啉代-10H-螺[二苯并[b，e]硅宾-5，1’-硅杂环己烷]-10-酮(51.0mg，114μmol)和2，2’-(4-溴-1，3-亚苯基)双(4，4-二甲基-4，5-二氢噁唑)(1.56g，4.43mmol，CAS No.1426090-01-8)得到了包含标记化合物的混合物(44.0mg)。
ESI-MS m/z 597[M+H]+
(2)N-(2-(2，5-二氧代-2，5-二氢-1H-吡咯-1-基)乙基)-3’，7’-二吗啉代-3-氧 代-3H-二螺[异苯并呋喃-1，10’-二苯并[b，e]硅宾-5’，1’’-硅杂环己烷]-5-甲酰胺的合成
按照实施例17-(2)，由18-(1)中得到的化合物(44.0mg)得到了标记化合物(13.7mg，19.0μmol)。
1H-NMR(400MHz，CDCl3)δ(ppm)：1.19-1.31(m，4H)，1.76(br.s.，2H)，2.02(br.s.，2H)，2.15(br.s.，2H)，3.17-3.22(m，8H)，3.68-3.74(m，2H)，3.84-3.92(m，10H)，6.75(dd，J＝8.79，2.54Hz，2H)，6.77(s，2H)，6.84(s，1H)，6.86-6.90(m，2H)，7.35(d，J＝3.12Hz，2H)，7.38(d，J＝7.81Hz，1H)，8.12(dd，J＝8.01，1.37Hz，1H)，8.28(s，1H).
ESI-MS m/z 719[M+H]+
实施例19
3’，7’-双(二甲基氨基)-N-(2-(2，5-二氧代-2，5-二氢-1H-吡咯-1-基)乙基)-3-
氧代-3H-二螺[异苯并呋喃-1，10’-二苯并[b，e]硅宾-5’，1’’-硅杂环己烷]-6-甲酰胺的合
成
【化73】
(1)3’，7’-双(二甲基氨基)-3-氧代-3H-二螺[异苯并呋喃-1，10’-二苯并[b，e]硅 宾-5’，1’’-硅杂环己烷]-6-羧酸的合成按照实施例17-(1)，由制造例10-(2)中得到的3，7-双(二甲基氨基)-10H-螺[二苯并[b，e]硅宾-5，1’-硅杂环己烷]-10-酮(200mg，549μmol)得到了标记化合物(270mg，527μmol)。
ESI-MS m/z 513[M+H]+
(2)3’，7’-双(二甲基氨基)-N-(2-(2，5-二氧代-2，5-二氢-1H-吡咯-1-基)乙基)- 3-氧代-3H-二螺[异苯并呋喃-1，10’-二苯并[b，e]硅宾-5’，1’’-硅杂环己烷]-6-甲酰胺的 合成
在采用实施例19-(1)的方法得到的化合物(25.0mg，49.0μmol)的DMF(2.00mL)溶液中加入了N-(2-氨基乙基)马来酰亚胺TFA盐(28.5mg，112μmol)、PyBOP(38.1mg，73.0μmol)和TEA(41.0μL，293μmol)。将反应混合物在室温下搅拌了3天后，将反应混合物直接用反相色谱(水/乙腈、0.1％甲酸)精制。回收包含目标物的级分，将剩余的乙腈减压馏除后，将残渣的水层用饱和碳酸氢钠水溶液中和。将水层用DCM萃取，将有机层用无水硫酸镁干燥。将溶剂减压馏除，通过将残渣用硅胶薄层色谱(正庚烷/醋酸乙酯(→醋酸乙酯))精制，从而得到了标记化合物(2.07mg，3.26μmol)。
1H-NMR(400MHz，CDCl3)δ(ppm)：1.24-1.33(m，4H)，1.73(br.s.，2H)，2.02(br.s.，2H)，2.16(br.s.，2H)，2.97(s，12H)，3.61-3.68(m，2H)，3.77-3.85(m，2H)，6.55(dd，J＝8.79，2.93Hz，2H)，6.72(s，2H)，6.74(s，1H)，6.80(d，J＝8.98Hz，2H)，7.14(d，J＝2.73Hz，2H)，7.72(s，1H)，7.83(dd，J＝8.01，1.37Hz，1H)，8.00(d，J＝7.81Hz，1H).
ESI-MS m/z 635[M+H]+
实施例20
3’，7’-双(二甲基氨基)-N-(2-(2-(2-(2-(2，5-二氧代-2，5-二氢-1H-吡咯-1-基)
乙氧基)乙氧基)乙氧基)乙基)-3-氧代-3H-二螺[异苯并呋喃-1，10’-二苯并[b，e]硅宾-
5’，1’’-硅杂环己烷]-6-甲酰胺的合成
【化74】
(1)(1-(3’，7’-双(二甲基氨基)-3-氧代-3H-二螺[异苯并呋喃-1，10’-二苯并[b， e]硅宾-5’，1’’-硅杂环己烷]-6-基)-1-氧代-5，8，11-三氧杂-2-氮杂十三烷-13-基)氨基 甲酸叔丁酯的合成
按照实施例11-(1)，由采用实施例19-(1)的方法得到的3’，7’-双(二甲基氨基)-3-氧代-3H-二螺[异苯并呋喃-1，10’-二苯并[b，e]硅宾-5’，1”-硅杂环己烷]-6-羧酸(270mg，527μmol)得到了标记化合物(178mg，226μmol)。
ESI-MS m/z 787[M+H]+
(2)4-((2-(2-(2-(2-氨基乙氧基)乙氧基)乙氧基)乙基)氨基甲酰基)-2-(7-(二 甲基氨基)-3-(二甲基亚氨基)-3H-螺[二苯并[b，e]硅宾-5，1’-硅杂环己烷]-10-基)苯甲 酸盐2TFA盐的合成
按照实施例11-(2)，由实施例20-(1)中得到的化合物(178mg，226μmol)得到了标记化合物的粗产物(210mg)。
ESI-MS m/z 687[M+H]+
(3)3’，7’-双(二甲基氨基)-N-(2-(2-(2-(2-(2，5-二氧代-2，5-二氢-1H-吡咯-1- 基)乙氧基)乙氧基)乙氧基)乙基)-3-氧代-3H-二螺[异苯并呋喃-1，10’-二苯并[b，e]硅 宾-5’，1’’-硅杂环己烷]-6-甲酰胺的合成
将实施例20-(2)中得到的化合物(210mg)、2，5-二氧代-2，5-二氢-1H-吡咯-1-羧酸甲酯(214mg，1.38mmol)、THF(8.20mL)和饱和碳酸氢钠水溶液(8.20mL)的混合物在室温下搅拌了3.5小时。用醋酸乙酯稀释，分取有机层。将有机层用水和饱和食盐水清洗。将混合物用无水硫酸镁干燥，将溶剂减压馏除。通过将得到的残渣用硅胶柱色谱(正庚烷/醋酸乙酯)精制，从而得到了粗精制物。通过将该粗精制物用硅胶薄层色谱(醋酸乙酯)精制，从而得到了粗精制物。将该粗精制物用反相色谱(水/乙腈、0.1％甲酸)精制。回收包含目标物的级分，将剩余的乙腈减压馏除后，将残渣的水层用饱和碳酸氢钠水溶液中和。将水层用醋酸乙酯萃取，将有机层用无水硫酸镁干燥。通过将溶剂减压馏除，从而得到了标记化合物(89.0mg，116μmol)。
1H-NMR(400MHz，CDCl3)δ(ppm)：1.17-1.26(m，4H)，1.73(br.s.，2H)，2.00(br.s.，2H)，2.16(br.s.，2H)，2.97(s，12H)，3.43-3.53(m，6H)，3.54-3.62(m，6H)，3.64-3.66(m，4H)，6.54(dd，J＝8.79，2.93Hz，2H)，6.60(s，2H)，6.78(d，J＝8.59Hz，2H)，7.01-7.07(m，1H)，7.13(d，J＝2.73Hz，2H)，7.76(s，1H)，7.95-8.03(m，2H).
ESI-MS m/z 767[M+H]+
实施例21
3’，7’-双(二甲基氨基)-N-(2-(2，5-二氧代-2，5-二氢-1H-吡咯-1-基)乙基)-3-
氧代-3H-二螺[异苯并呋喃-1，10’-二苯并[b，e]硅宾-5’，1’’-硅杂环己烷]-5-甲酰胺的合
成
【化75】
(1)3’，7’-双(二甲基氨基)-3-氧代-3H-二螺[异苯并呋喃-1，10’-二苯并[b，e]硅 宾-5’，1’’-硅杂环己烷]-5-羧酸的合成按照实施例18-(1)，由制造例10-(2)中得到的3，7-双(二甲基氨基)-10H-螺[二苯并[b，e]硅宾-5，1’-硅杂环己烷]-10-酮(50.0mg，137μmol)得到了包含标记化合物的混合物(47.7mg)。
ESI-MS m/z 513[M+H]+
(2)3’，7’-双(二甲基氨基)-N-(2-(2，5-二氧代-2，5-二氢-1H-吡咯-1-基)乙基)- 3-氧代-3H-二螺[异苯并呋喃-1，10’-二苯并[b，e]硅宾-5’，1’’-硅杂环己烷]-5-甲酰胺的 合成
在实施例21-(1)中得到的化合物(47.0mg，92.0μmol)的DMF(1.00mL)溶液中加入了二异丙基乙基胺(96.0μL，550μmol)、N-(2-氨基乙基)马来酰亚胺TFA盐(53.6mg，211μmol)和PyBOP(71.6mg，138μmol)。将反应混合物在室温下搅拌了一晚后，加入水，使反应停止。将水层用醋酸乙酯萃取，将有机层用水和饱和食盐水清洗。将有机层用硫酸镁干燥，将溶剂减压馏除。将残渣用硅胶薄层色谱(正庚烷/醋酸乙酯)精制，得到了粗产物。将得到的粗产物用反相硅胶柱色谱(水/乙腈、0.1％甲酸)精制。回收包含目标物的级分，将剩余的乙腈减压馏除。将水层用碳酸氢钠水溶液中和，用醋酸乙酯萃取。将有机层用硫酸镁干燥，将溶剂减压馏除。通过将残渣用硅胶薄层色谱(乙醚)精制，从而得到了标记化合物(5.00mg，7.88μmol)。
1H-NMR(400MHz，CDCl3)δ(ppm)：1.18-1.30(m，4H)，1.74(br.s.，2H)，2.01(br.s.，2H)，2.16(br.s.，2H)，2.98(s，12H)，3.67-3.76(m，2H)、3.82-3.92(m，2H)，6.54(dd，J＝8.98，2.73Hz，2H)，6.73-6.83(m，3H)，6.76(s，2H)，7.14(d，J＝3.12Hz，2H)，7.37(d，J＝8.20Hz，1H)，8.10(dd，J＝8.01，1.76Hz，1H)，8.26(d，J＝0.78Hz，1H).
ESI-MS m/z 635[M+H]+
实施例22
3’，7’-双(二甲基氨基)-N-(2-(2，5-二氧代-2，5-二氢-1H-吡咯-1-基)乙基)-3-
氧代-3H-二螺[异苯并呋喃-1，10’-二苯并[b，e]硅宾-5’，1’’-硅杂环戊烷]-6-甲酰胺的合
成
【化76】
(1)3’，7’-双(二甲基氨基)-3-氧代-3H-二螺[异苯并呋喃-1，10’-二苯并[b，e]硅 宾-5’，1’’-硅杂环戊烷]-6-羧酸的合成按照实施例17-(1)，由制造例11-(2)中得到的3，7-双(二甲基氨基)-10H-螺[二苯并[b，e]硅宾-5，1’-硅杂环戊烷]-10-酮(40.0mg，114μmol)得到了包含标记化合物的混合物(27.0mg)。
ESI-MS m/z 499[M+H]+
(2)3’，7’-双(二甲基氨基)-N-(2-(2，5-二氧代-2，5-二氢-1H-吡咯-1-基)乙基)- 3-氧代-3H-二螺[异苯并呋喃-1，10’-二苯并[b，e]硅宾-5’，1’’-硅杂环戊烷]-6-甲酰胺的 合成
将实施例22-(1)中得到的化合物(27.0mg)、PyBOP(43.8mg，84.0μmol)、N-(2-氨基乙基)马来酰亚胺TFA盐(32.8mg，129μmol)、TEA(47.0μL，337μmol)和DMF(2.00mL)的混合物在室温下搅拌了一晚。将混合物直接用反相硅胶柱色谱(水/乙腈、0.1％甲酸)精制。回收包含目标物的级分，将剩余的乙腈在0度以下减压馏除。将残渣的水层用饱和碳酸氢钠水溶液中和，将水层用醋酸乙酯萃取。将溶剂减压馏除，通过将得到的残渣用硅胶薄层色谱(乙醚)精制，从而得到了标记化合物(3.68mg，5.93μmol)。
1H-NMR(400MHz，CDCl3)δ(ppm)：1.21(t，J＝7.03Hz，2H)，1.25-1.32(m，2H)，1.95-2.06(m，4H)，2.95(s，12H)，3.56-3.64(m，2H)，3.76-3.83(m，2H)，6.61(dd，J＝8.98，2.73Hz，2H)，6.65(br.s.，1H)，6.71(s，2H)，6.94(d，J＝3.12Hz，2H)，7.00(d，J＝8.98Hz，2H)，7.67(d，J＝0.78Hz，1H)，7.70-7.75(m，1H)，7.93-7.97(m，1H).
ESI-MS m/z 621[M+H]+
实施例23
3’，7’-双(二乙基氨基)-N-(2-(2，5-二氧代-2，5-二氢-1H-吡咯-1-基)乙基)-3-
氧代-3H-二螺[异苯并呋喃-1，10’-二苯并[b，e]硅宾-5’，1’’-硅杂环己烷]-6-甲酰胺的合
成
【化77】
(1)3’，7’-双(二乙基氨基)-3-氧代-3H-二螺[异苯并呋喃-1，10’-二苯并[b，e]硅 宾-5’，1’’-硅杂环己烷]-6-羧酸的合成
将制造例12中得到的3，3’-(硅杂环己烷-1，1-二基)双(N，N-二乙基苯胺)(99.0mg，250μmol)、制造例15-(2)中得到的3-羟基-1-氧代-1，3-二氢异苯并呋喃-5-羧酸(146mg，750μmol)、溴化铜(16.8mg，75.0μmol)和醋酸(215μL，3.75mmol)的混合物在140℃下搅拌了8小时。冷却到室温后，将混合物直接用硅胶柱色谱(正庚烷/醋酸乙酯)精制，得到了标记化合物(40.0mg，70.0μmol)。
1H-NMR(400MHz，CDCl3)δ(ppm)：1.04-1.19(m，12H)，1.20-1.32(m，4H)，1.65-1.85(m，2H)，1.95-2.06(m，2H)，2.09-2.21(m，2H)，3.25-3.42(m，8H)，6.49(dd，J＝8.98，2.73Hz，2H)，6.73(d，J＝8.98Hz，2H)，7.11(d，J＝3.12Hz，2H)，8.00-8.09(m，2H)，8.24(dd，J＝8.01，1.37Hz，1H).
ESI-MS m/z 569[M+H]+
(2)3’，7’-双(二乙基氨基)-N-(2-(2，5-二氧代-2，5-二氢-1H-吡咯-1-基)乙基)- 3-氧代-3H-二螺[异苯并呋喃-1，10’-二苯并[b，e]硅宾-5’，1’’-硅杂环己烷]-6-甲酰胺的 合成
在实施例23-(1)中得到的化合物(9.67mg，17.0μmol)的DMF(500μL)溶液中加入了N-(2-氨基乙基)马来酰亚胺TFA盐(9.94mg，39.0μmol)、PyBOP(13.3mg，26.0μmol)和TEA(14.0μL，102μmol)。将反应混合物在室温下搅拌了18小时后，将反应混合物直接用硅胶柱色谱(正庚烷/醋酸乙酯)精制，得到了标记化合物(2.00mg，2.89μmol)。
1H-NMR(400MHz，CDCl3)δ(ppm)：1.14-1.21(m，12H)，1.21-1.32(m，4H)，1.74(br.s.，2H)，2.02(br.s.，2H)，2.11-2.21(m，2H)，3.38(q，J＝7.03Hz，8H)，3.61-3.71(m，2H)，3.78-3.88(m，2H)，6.49(dd，J＝8.98，2.73Hz，2H)，6.69-6.80(m，3H)，6.73(s，2H)，7.11(d，J＝2.73Hz，2H)，7.76(dd，J＝1.56，0.78Hz，1H)，7.86(dd，J＝8.01，1.37Hz，1H)，8.01(dd，J＝7.81，0.78Hz，1H).
ESI-MS m/z 691[M+H]+
实施例24
3’，7’-双(二乙基氨基)-N-(2-(2，5-二氧代-2，5-二氢-1H-吡咯-1-基)乙基)-3-
氧代-3H-二螺[异苯并呋喃-1，10’-二苯并[b，e]硅宾-5’，1’’-硅杂环己烷]-5-甲酰胺的合
成
【化78】
(1)3’，7’-双(二乙基氨基)-3-氧代-3H-二螺[异苯并呋喃-1，10’-二苯并[b，e]硅 宾-5’，1’’-硅杂环己烷]-5-羧酸的合成
按照实施例23-(1)，由制造例12中得到的3，3’-(硅杂环己烷-1，1-二基)双(N，N-二乙基苯胺)(99.0mg，250μmol)和制造例16-(2)中得到的1-羟基-3-氧代-1，3-二氢异苯并呋喃-5-羧酸(146mg，750μmol)得到了标记化合物(49.0mg，86.0μmol)。
1H-NMR(400MHz，CDCl3)δ(ppm)：1.10-1.27(m，16H)，1.73(br.s.，2H)，1.96-2.07(m，2H)，2.09-2.22(m，2H)，3.37(q，J＝7.03Hz，8H)，6.49(dd，J＝8.98，3.12Hz，2H)，6.72(d，J＝8.98Hz，2H)，7.10(d，J＝2.73Hz，2H)，7.42(d，J＝8.20Hz，1H)，8.35(dd，J＝8.01，1.37Hz，1H)，8.69(d，J＝0.78Hz，1H).
ESI-MS m/z 569[M+H]+
(2)3’，7’-双(二乙基氨基)-N-(2-(2，5-二氧代-2，5-二氢-1H-吡咯-1-基)乙基)- 3-氧代-3H-二螺[异苯并呋喃-1，10’-二苯并[b，e]硅宾-5’，1’’-硅杂环己烷]-5-甲酰胺的 合成
按照实施例23-(2)，由实施例24-(1)中得到的化合物(10.2mg，18.0μmol)得到了标记化合物(3.00mg，4.34μmol)。
1H-NMR(400MHz，CDCl3)δ(ppm)：1.17(t，J＝7.03Hz，12H)，1.20-1.30(m，4H)，1.74(br.s.，2H)，1.94-2.05(m，2H)，2.11-2.21(m，2H)，3.37(q，J＝6.77Hz，8H)，3.67-3.77(m，2H)，3.82-3.90(m，2H)，6.47(dd，J＝8.98，2.73Hz，2H)，6.67-6.77(m，4H)，6.91(t，J＝5.27Hz，1H)，7.10(d，J＝2.73Hz，2H)，7.43(d，J＝8.20Hz，1H)，8.14(dd，J＝8.20，1.56Hz，1H)，8.28(d，J＝0.78Hz，1H).
ESI-MS m/z 691[M+H]+
实施例25
3’，7’-双(二乙基氨基)-N-(2-(2，5-二氧代-2，5-二氢-1H-吡咯-1-基)乙基)-5-
氟-3-氧代-3H-二螺[异苯并呋喃-1，10’-二苯并[b，e]硅宾-5’，1’’-硅杂环己烷]-6-甲酰
胺的合成
【化79】
(1)3’，7’-双(二乙基氨基)-5-氟-3-氧代-3H-二螺[异苯并呋喃-1，10’-二苯并 [b，e]硅宾-5’，1’’-硅杂环己烷]-6-羧酸的合成
将制造例12中得到的3，3’-(硅杂环己烷-1，1-二基)双(N，N-二乙基苯胺)(70.0mg，177μmol)、制造例17-(2)中得到的6-氟-3-羟基-1-氧代-1，3-二氢异苯并呋喃-5-羧酸(125mg)、溴化铜(11.9mg，53.0μmol)和醋酸(2.00mL)的混合物在140度下搅拌了4小时。将溶剂减压馏除，将残渣用饱和碳酸氢钠水溶液中和。将水层用醋酸乙酯萃取，将有机层用无水硫酸镁干燥。通过将溶剂减压馏除，从而得到了标记化合物的粗产物(96.0mg)。
ESI-MS m/z 587[M+H]+
(2)3’，7’-双(二乙基氨基)-N-(2-(2，5-二氧代-2，5-二氢-1H-吡咯-1-基)乙基)- 5-氟-3-氧代-3H-二螺[异苯并呋喃-1，10’-二苯并[b，e]硅宾-5’，1’’-硅杂环己烷]-6-甲 酰胺的合成
将实施例25-(1)中得到的化合物(76.0mg)、PyBOP(81.0mg，155μmol)、N-(2-氨基乙基)马来酰亚胺TFA盐(39.5mg，155μmol)、三乙胺(90.0μL，648μmol)和DMF(1.00mL，12.9mmol)的混合物在室温下搅拌了2.5小时。加入冰，使反应停止，将水层用醋酸乙酯萃取。将有机层用饱和食盐水清洗3次，用无水硫酸镁干燥。将溶剂减压馏除，通过将得到的残渣用硅胶柱色谱(正庚烷/醋酸乙酯)精制，从而得到了标记化合物(5.70mg，8.04μmol)。
1H-NMR(400MHz，CDCl3)δ(ppm)：1.12-1.21(t，J＝7.03Hz，12H)，1.21-1.28(m，4H)，1.74(br.s.，2H)，2.02(br.s.，2H)，2.10-2.22(m，2H)，3.38(q，J＝7.03Hz，8H)，3.67-3.74(m，2H)，3.80-3.88(m，2H)，6.49(dd，J＝8.98，2.73Hz，2H)，6.71-6.78(m，2H)，6.74(s，2H)，7.10(d，J＝2.73Hz，2H)，7.13(br.s.，1H)，7.67(d，J＝9.76Hz，1H)，8.02(d，J＝6.25Hz，1H).
ESI-MS m/z 709[M+H]+
实施例26
5-氯-3’，7’-双(二乙基氨基)-N-(2-(2，5-二氧代-2，5-二氢-1H-吡咯-1-基)乙
基)-3-氧代-3H-二螺[异苯并呋喃-1，10’-二苯并[b，e]硅宾-5’，1’’-硅杂环己烷]-6-甲酰
胺的合成
【化80】
(1)5-氯-3’，7’-双(二乙基氨基)-3-氧代-3H-二螺[异苯并呋喃-1，10’-二苯并 [b，e]硅宾-5’，1’’-硅杂环己烷]-6-羧酸的合成按照实施例23-(1)，由制造例12中得到的3，3’-(硅杂环己烷-1，1-二基)双(N，N-二乙基苯胺)(39.5mg，100μmol)和制造例18-(2)中得到的6-氯-3-羟基-1-氧代-1，3-二氢异苯并呋喃-5-羧酸(68.6mg，300μmol)得到了标记化合物(8.00mg，13.0μmol)。
1H-NMR(400MHz，CDCl3)δ(ppm)：1.03-1.35(m，16H)，1.69(br.s.，2H)，1.98(br.s.，2H)，2.02-2.15(m，2H)，3.38(q，J＝7.03Hz，8H)，6.60(dd，J＝8.59，2.73Hz，2H)，6.83(d，J＝8.98Hz，2H)，7.19(d，J＝2.73Hz，2H)，7.79(s，1H)，7.99(s，1H).
ESI-MS m/z 603[M+H]+
(2)5-氯-3’，7’-双(二乙基氨基)-N-(2-(2，5-二氧代-2，5-二氢-1H-吡咯-1-基) 乙基)-3-氧代-3H-二螺[异苯并呋喃-1，10’-二苯并[b，e]硅宾-5’，1’’-硅杂环己烷]-6-甲 酰胺的合成
按照实施例23-(2)，由实施例26-(1)中得到的化合物(7.84mg，13.0μmol)得到了标记化合物的粗精制物。将得到的粗精制物用反相硅胶柱色谱(水/乙腈、0.1％甲酸)精制，得到了标记化合物(1.60mg，2.21μmol)。
1H-NMR(400MHz，CDCl3)δ(ppm)：1.18(t，J＝7.03Hz，12H)，1.19-1.24(m，4H)，1.73(br.s.，2H)，1.99(br.s.，2H)，2.14(br.s.，2H)，3.38(q，J＝7.03Hz，8H)，3.63-3.72(m，2H)，3.75-3.84(m，2H)，6.42(br.s.，1H)，6.51(dd，J＝8.98，2.73Hz，2H)，6.68(s，2H)，6.73(d，J＝8.98Hz，2H)，7.08(d，J＝3.12Hz，2H)，7.46(s，1H)，7.96(s，1H).
ESI-MS m/z 725[M+H]+
实施例27
5-溴-3’，7’-双(二乙基氨基)-N-(2-(2，5-二氧代-2，5-二氢-1H-吡咯-1-基)乙
基)-3-氧代-3H-二螺[异苯并呋喃-1，10’-二苯并[b，e]硅宾-5’，1’’-硅杂环己烷]-6-甲酰
胺的合成
【化81】
(1)5-溴-3’，7’-双(二乙基氨基)-3-氧代-3H-二螺[异苯并呋喃-1，10’-二苯并 [b，e]硅宾-5’，1’’-硅杂环己烷]-6-羧酸的合成将制造例12中得到的3，3’-(硅杂环己烷-1，1-二基)双(N，N-二乙基苯胺)(150mg，380μmol)、制造例19-(2)中得到的6-溴-3-羟基-1-氧代-1，3-二氢异苯并呋喃-5-羧酸(208mg，760μmol)、溴化铜(25.5mg，114μmol)和醋酸(1.09mL)的混合物在140℃下搅拌了6小时。冷却到室温后，通过将反应混合物直接用反相色谱(水/乙腈、0.1％甲酸)精制，从而得到了标记化合物(105mg，162μmol)。
1H-NMR(400MHz，CDCl3)δ(ppm)：1.10-1.23(m，16H)，1.68(br.s.，2H)，1.91-2.12(m，4H)，3.40(q，J＝7.29Hz，8H)，6.67(dd，J＝8.98，2.73Hz，2H)，6.88(d，J＝8.98Hz，2H)，7.25(d，J＝2.73Hz，2H)，7.71(s，1H)，8.19(s，1H).
ESI-MS m/z 649[M+H]+
(2)5-溴-3’，7’-双(二乙基氨基)-N-(2-(2，5-二氧代-2，5-二氢-1H-吡咯-1-基) 乙基)-3-氧代-3H-二螺[异苯并呋喃-1，10’-二苯并[b，e]硅宾-5’，1’’-硅杂环己烷]-6-甲 酰胺的合成
按照实施例23-(2)，由实施例27-(1)中得到的化合物(9.72mg，15.0μmol)得到了标记化合物(4.20mg，5.46μmol)。
1H-NMR(400MHz，CDCl3)δ(ppm)：1.10-1.24(m，16H)，1.72(br.s.，2H)，1.99(br.s.，2H)，2.12(br.s.，2H)，3.37(q，J＝7.29Hz，8H)，3.62-3.72(m，2H)，3.73-3.82(m，2H)，6.31(t，J＝5.66Hz，1H)，6.51(dd，J＝8.98，3.12Hz，2H)，6.67(s，2H)，6.73(d，J＝8.98Hz，2H)，7.08(d，J＝2.73Hz，2H)，7.35(s，1H)，8.14(s，1H).
ESI-MS m/z 769，771[M+H]+
实施例28
3’，7’-双(二乙基氨基)-5-(二氟甲基)-N-(2-(2，5-二氧代-2，5-二氢-1H-吡咯-
1-基)乙基)-3-氧代-3H-二螺[异苯并呋喃-1，10’-二苯并[b，e]硅宾-5’，1’’-硅杂环己
烷]-6-甲酰胺的合成
【化82】
(1)3’，7’-双(二乙基氨基)-5-(二氟甲基)-3-氧代-3H-二螺[异苯并呋喃-1，10’- 二苯并[b，e]硅宾-5’，1’’-硅杂环己烷]-6-羧酸的合成
按照实施例27-(1)，由制造例12中得到的3，3’-(硅杂环己烷-1，1-二基)双(N，N-二乙基苯胺)(70.0mg，177μmol)和制造例20-(3)中得到的6-(二氟甲基)-3-羟基-1-氧代-1，3-二氢异苯并呋喃-5-羧酸(87.0mg，355μmol)得到了标记化合物(22.0mg，36.0μmol)。
1H-NMR(400MHz，MeOH-d4)δ(ppm)：1.11-1.23(m，16H)，1.74(br.s.，2H)，2.00(br.s.，2H)，2.10(br.s.，2H)，3.47(q，J＝7.03Hz，8H)，6.59(dd，J＝9.18，2.93Hz，2H)，6.78(d，J＝9.37Hz，2H)，7.17(d，J＝2.73Hz，2H)，7.57(t，J＝55.84Hz，1H)，7.80(s，1H)，8.32(s，1H).
ESI-MS m/z 619[M+H]+
(2)3’，7’-双(二乙基氨基)-5-(二氟甲基)-N-(2-(2，5-二氧代-2，5-二氢-1H-吡 咯-1-基)乙基)-3-氧代-3H-二螺[异苯并呋喃-1，10’-二苯并[b，e]硅宾-5’，1’’-硅杂环己 烷]-6-甲酰胺的合成
将实施例28-(1)中得到的化合物(27.8mg，45.0μmol)、N-(2-氨基乙基)马来酰亚胺TFA盐(26.3mg，104μmol)、PyBOP(35.1mg，68.0μmol)、三乙胺(38.0μL，270μmol)和DMF(500μL)的混合物在室温下搅拌了2小时。通过将反应混合物直接用反相硅胶柱色谱(水/乙腈、0.1％甲酸)精制，从而得到了标记化合物(11.8mg，16.0μmol)。
1H-NMR(400MHz，MeOH-d4)δ(ppm)：1.16(t，J＝7.03Hz，12H)，1.19-1.26(m，4H)，1.73(br.s.，2H)，1.94-2.06(m，2H)，2.11-2.17(m，2H)，3.38(q，J＝7.03Hz，8H)，3.50(dd，J＝6.44，4.49Hz，2H)，3.65-3.73(m，2H)，6.52(dd，J＝8.98，2.73Hz，2H)，6.66(s，2H)，6.68(d，J＝8.98Hz，2H)，7.09(d，J＝3.12Hz，2H)，7.12(t，J＝55.26Hz，1H)，7.38(s，1H)，7.58(s，1H)，8.22(s，1H).
ESI-MS m/z 741[M+H]+
实施例29
3’，7’-双(二乙基氨基)-N-(2-(2，5-二氧代-2，5-二氢-1H-吡咯-1-基)乙基)-5-
(甲氧基甲基)-3-氧代-3H-二螺[异苯并呋喃-1，10’-二苯并[b，e]硅宾-5’，1’’-硅杂环己
烷]-6-甲酰胺的合成
【化83】
(1)3’，7’-双(二乙基氨基)-5-(甲氧基甲基)-3-氧代-3H-二螺[异苯并呋喃-1， 10’-二苯并[b，e]硅宾-5’，1’’-硅杂环己烷]-6-羧酸的合成
根据实施例27-(1)，由制造例12中得到的3，3’-(硅杂环己烷-1，1-二基)双(N，N-二乙基苯胺)(14.6mg，37.0μmol)和制造例21-(5)中得到的3-羟基-6-(甲氧基甲基)-1-氧代-1，3-二氢异苯并呋喃-5-羧酸(17.6mg，74.0μmol)得到了标记化合物(7.00mg，11.0μmol)。
1H-NMR(400MHz，CDCl3)δ(ppm)：1.16(t，J＝7.03Hz，12H)，1.20-1.29(m，4H)，1.72(br.s.，2H)，2.00(br.s.，2H)，2.14(br.s.，2H)，3.37(q，J＝7.03Hz，8H)，3.54(s，3H)，4.89(s，2H)，6.50(dd，J＝8.98，2.73Hz，2H)，6.75(d，J＝8.98Hz，2H)，7.11(d，J＝2.73Hz，2H)，8.00(s，1H)，8.20(s，1H).
ESI-MS m/z 613[M+H]+
(2)3’，7’-双(二乙基氨基)-N-(2-(2，5-二氧代-2，5-二氢-1H-吡咯-1-基)乙基)- 5-(甲氧基甲基)-3-氧代-3H-二螺[异苯并呋喃-1，10’-二苯并[b，e]硅宾-5’，1’’-硅杂环 己烷]-6-甲酰胺的合成
按照实施例28-(2)，由实施例29-(1)中得到的化合物(6.13mg，10.0μmol)得到了标记化合物(1.00mg，1.36μmol)。
1H-NMR(400MHz，CDCl3)δ(ppm)：1.18(t，J＝7.03Hz，12H)，1.21-1.26(m，4H)，1.74(br.s.，2H)，2.02(br.s.，2H)，2.15(br.s.，2H)，3.38(q，J＝7.03Hz，8H)，3.48(s，3H)，3.60-3.71(m，2H)，3.73-3.84(m，2H)，4.64(s，2H)，6.50(dd，J＝8.98，3.12Hz，2H)，6.68(s，2H)，6.75(d，J＝8.98Hz，2H)，7.10(d，J＝2.34Hz，2H)，7.38-7.43(m，1H)，7.60(s，1H)，7.97(s，1H).
ESI-MS m/z 735[M+H]+
实施例30
3’，7’-双(二乙基氨基)-N-(2-(2，5-二氧代-2，5-二氢-1H-吡咯-1-基)乙基)-3-
氧代-5-(三氟甲基)-3H-二螺[异苯并呋喃-1，10’-二苯并[b，e]硅宾-5’，1’’-硅杂环己
烷]-6-甲酰胺的合成
【化84】
(1)3’，7’-双(二乙基氨基)-3-氧代-5-(三氟甲基)-3H-二螺[异苯并呋喃-1，10’- 二苯并[b，e]硅宾-5’，1’’-硅杂环己烷]-6-羧酸的合成
按照实施例25-(1)，由制造例12中得到的3，3’-(硅杂环己烷-1，1-二基)双(N，N-二乙基苯胺)(50.0mg，127μmol)和制造例22-(3)中得到的3-羟基-1-氧代-6-(三氟甲基)-1，3-二氢异苯并呋喃-5-羧酸(100mg，380μmol)得到了标记化合物的粗产物(61.0mg)。
ESI-MS m/z 637[M+H]+
(2)3’，7’-双(二乙基氨基)-N-(2-(2，5-二氧代-2，5-二氢-1H-吡咯-1-基)乙基)- 3-氧代-5-(三氟甲基)-3H-二螺[异苯并呋喃-1，10’-二苯并[b，e]硅宾-5’，1’’-硅杂环己 烷]-6-甲酰胺的合成
在实施例30-(1)中得到的化合物(61.0mg)的DMF(3.00mL)溶液中加入了TEA(40.0μL，287μmol)、N-(2-氨基乙基)马来酰亚胺TFA盐(29.2mg，115μmol)和PyBOP(74.8mg，144μmol)。将反应混合物在室温下搅拌了一晚后，将混合物直接用反相色谱(水/乙腈、0.1％甲酸)精制。通过将得到的粗精制物用硅胶柱色谱(正庚烷/醋酸乙酯)精制，从而得到了标记化合物(15.0mg，20.0μmol)。
1H-NMR(400MHz，CDCl3)δ(ppm)：1.18(t，J＝7.03Hz，12H)，1.21(br.s.，2H)，1.26(br.s.，2H)，1.73(br.s.，2H)，2.01(br.s.，2H)，2.09-2.19(m，2H)，3.38(q，J＝7.03Hz，8H)，3.61-3.69(m，2H)，3.73-3.80(m，2H)，6.18-6.24(m，1H)，6.53(dd，J＝8.98，3.12Hz，2H)，6.65(s，2H)，6.69(d，J＝8.98Hz，2H)，7.09(d，J＝3.12Hz，2H)，7.40(s，1H)，8.27(s，1H).
ESI-MS m/z 759[M+H]+
实施例31
3’，7’-双(二乙基氨基)-N-(2-(2，5-二氧代-2，5-二氢-1H-吡咯-1-基)乙基)-5-
甲氧基-3-氧代-3H-二螺[异苯并呋喃-1，10’-二苯并[b，e]硅宾-5’，1’’-硅杂环己烷]-6-
甲酰胺的合成
【化85】
(1)3’，7’-双(二乙基氨基)-5-甲氧基-3-氧代-3H-二螺[异苯并呋喃-1，10’-二苯 并[b，e]硅宾-5’，1’’-硅杂环己烷]-6-羧酸的合成
将制造例12中得到的3，3’-(硅杂环己烷-1，1-二基)双(N，N-二乙基苯胺)(20.0mg，51.0μmol)、制造例23-(2)中得到的3-羟基-6-甲氧基-1-氧代-1，3-二氢异苯并呋喃-5-羧酸(34.1mg，152μmol)、溴化铜(3.40mg，15.0μmol)和醋酸(2.00mL)的混合物在140℃下搅拌了20小时。将溶剂减压馏除，将残渣用饱和碳酸氢钠水溶液中和。将水层用醋酸乙酯萃取，将有机层用水洗净。将溶剂减压馏除，通过将残渣用硅胶柱色谱(正庚烷/醋酸乙酯(→醋酸乙酯/甲醇))精制，从而得到了包含标记化合物的混合物(13.0mg)。
ESI-MS m/z 599[M+H]+
(2)3’，7’-双(二乙基氨基)-N-(2-(2，5-二氧代-2，5-二氢-1H-吡咯-1-基)乙基)- 5-甲氧基-3-氧代-3H-二螺[异苯并呋喃-1，10’-二苯并[b，e]硅宾-5’，1’’-硅杂环己烷]- 6-甲酰胺的合成
按照实施例9-(2)，由实施例31-(1)中得到的化合物(13.0mg)得到了标记化合物(1.93mg，2.68μmol)。
1H-NMR(400MHz，CDCl3)δ(ppm)：1.15(t，J＝7.03Hz，12H)，1.26(br.s.，4H)，1.71(br.s.，2H)，1.98(br.s.，2H)，2.15(br.s.，2H)，3.35(q，J＝6.77Hz，8H)，3.65-3.73(m，2H)，3.80-3.87(m，2H)，4.11(s，3H)，6.44(dd，J＝8.98，2.73Hz，2H)，6.72(s，2H)，6.75(d，J＝8.59Hz，2H)，7.09(d，J＝2.73Hz，2H)，7.49(s，1H)，8.18(t，J＝5.08Hz，1H)，8.22(s，1H).
ESI-MS m/z 721[M+H]+
实施例32
3’，7’-双(二乙基氨基)-N-(2-(2，5-二氧代-2，5-二氢-1H-吡咯-1-基)乙基)-5-
(甲硫基)-3-氧代-3H-二螺[异苯并呋喃-1，10’-二苯并[b，e]硅宾-5’，1’’-硅杂环己烷]-
6-甲酰胺的合成
【化86】
(1)3’，7’-双(二乙基氨基)-5-(甲硫基)-3-氧代-3H-二螺[异苯并呋喃-1，10’-二 苯并[b，e]硅宾-5’，1’’-硅杂环己烷]-6-羧酸的合成
按照实施例31-(1)，由制造例12中得到的3，3’-(硅杂环己烷-1，1-二基)双(N，N-二乙基苯胺)(70.0mg，177μmol)和制造例24-(2)中得到的3-羟基-6-(甲硫基)-1-氧代-1，3-二氢异苯并呋喃-5-羧酸(128mg)得到了包含标记化合物的混合物(38.0mg)。
ESI-MS m/z 615[M+H]+
(2)3’，7’-双(二乙基氨基)-N-(2-(2，5-二氧代-2，5-二氢-1H-吡咯-1-基)乙基)- 5-(甲硫基)-3-氧代-3H-二螺[异苯并呋喃-1，10’-二苯并[b，e]硅宾-5’，1’’-硅杂环己 烷]-6-甲酰胺的合成
在实施例32-(1)中得到的化合物(38.0mg)的DMF(2.00mL)溶液中加入TEA(13.0μL，93.0μmol)、N-(2-氨基乙基)马来酰亚胺TFA盐(18.9mg，74.0μmol)和PyBOP(38.6mg，74.0μmol)，在室温下搅拌了1.5小时。在反应混合物中加入醋酸乙酯和水，使反应停止。将水层用醋酸乙酯萃取，将有机层用水清洗2次。将溶剂减压馏除，通过将残渣用硅胶薄层色谱(正庚烷/醋酸乙酯)精制，从而得到了标记化合物(21.5mg，29.0μmol)。
1H-NMR(400MHz，CDCl3)δ(ppm)：1.07(t，J＝7.03Hz，12H)，1.09-1.15(m，4H)，1.62(br.s.，2H)，1.87(br.s.，2H)，2.05(br.s.，2H)，2.47(s，3H)，3.27(q，J＝7.03Hz，8H)，3.54-3.61(m，2H)，3.65-3.72(m，2H)，6.38-6.41(m，1H)，6.40(dd，J＝8.98，2.73Hz，2H)，6.56(s，2H)，6.65(d，J＝8.98Hz，2H)，7.00(d，J＝3.12Hz，2H)，7.31(s，1H)，7.68(s，1H).
ESI-MS m/z 737[M+H]+
实施例33
N-(2-(2，5-二氧代-2，5-二氢-1H-吡咯-1-基)乙基)-3-氧代-3’，7’-二(吡咯烷-
1-基)-3H-二螺[异苯并呋喃-1，10’-二苯并[b，e]硅宾-5’，1’’-硅杂环己烷]-6-甲酰胺的
合成
【化87】
(1)3-氧代-3’，7’-二(吡咯烷-1-基)-3H-二螺[异苯并呋喃-1，10’-二苯并[b，e] 硅宾-5’，1’’-硅杂环己烷]-6-羧酸的合成
按照实施例23-(1)，由制造例13中得到的1，1’-(硅杂环己烷-1，1-二基双(3，1-亚苯基))二吡咯烷(98.0mg，250μmol)和制造例15-(2)中得到的3-羟基-1-氧代-1，3-二氢异苯并呋喃-5-羧酸(146mg，750μmol)得到了标记化合物(28.0mg，50.0μmol)。
1H-NMR(400MHz，CDCl3)δ(ppm)：1.15-1.31(m，4H)，1.74(br.s.，4H)，1.93-2.06(m，8H)，2.14(d，J＝17.18Hz，2H)，3.22-3.36(m，8H)，6.41(dd，J＝8.98，2.73Hz，2H)，6.79(d，J＝8.98Hz，2H)，6.99(d，J＝2.73Hz，2H)，7.97-8.06(m，2H)，8.17-8.25(m，1H).
ESI-MS m/z 565[M+H]+
(2)N-(2-(2，5-二氧代-2，5-二氢-1H-吡咯-1-基)乙基)-3-氧代-3’，7’-二(吡咯 烷-1-基)-3H-二螺[异苯并呋喃-1，10’-二苯并[b，e]硅宾-5’，1’’-硅杂环己烷]-6-甲酰胺 的合成
按照实施例23-(2)，由实施例33-(1)中得到的化合物(9.60mg，17.0μmol)得到了标记化合物(4.00mg，5.82μmol)。
1H-NMR(400MHz，CDCl3)δ(ppm)：1.16-1.35(m，4H)，1.73(br.s.，2H)，1.89-2.07(m，10H)，2.09-2.23(m，2H)，3.19-3.38(m，8H)，3.57-3.70(m，2H)，3.74-3.85(m，2H)，6.38(dd，J＝8.59，2.73Hz，2H)，6.66-6.82(m，3H)，6.71(s，2H)，6.97(d，J＝2.73Hz，2H)，7.70(s，1H)，7.83(dd，J＝8.01，1.37Hz，1H)，7.99(d，J＝7.81Hz，1H).
ESI-MS m/z 687[M+H]+
实施例34
N-(2-(2，5-二氧代-2，5-二氢-1H-吡咯-1-基)乙基)-3-氧代-1’，2’，3’，4’，8’，
9’，10’，11’-八氢-3H-二螺[异苯并呋喃-1，6’-硅宾并[3，2-g：5，6-g’]二喹啉-13’，1’’-硅
杂环己烷]-6-甲酰胺的合成
【化88】
(1)1’，11’-二烯丙基-3-氧代-1’，2’，3’，4’，8’，9’，10’，11’-八氢-3H-二螺[异苯 并呋喃-1，6’-硅宾并[3，2-g：5，6-g’]二喹啉-13’，1’’-硅杂环己烷]-6-羧酸的合成
按照实施例23-(1)，由制造例14-(2)中得到的7，7’-(硅杂环己烷-1，1-二基)双(1-烯丙基-1，2，3，4-四氢喹啉)(885mg，2.00mmol)和制造例15-(2)中得到的3-羟基-1-氧代-1，3-二氢异苯并呋喃-5-羧酸(1.17g，6.00mmol)得到了粗产物。进而，通过用硅胶柱色谱(正庚烷/醋酸乙酯)进行精制，从而得到了标记化合物(98.0mg，159μmol)。
1H-NMR(400MHz，CDCl3)δ(ppm)：1.04-1.21(m，4H)，1.69(br.s.，2H)，1.80-1.93(m，4H)，1.93-2.13(m，4H)，2.43-2.66(m，4H)，3.18-3.34(m，4H)，3.85-4.02(m，4H)，5.14-5.28(m，4H)，5.81-5.96(m，2H)，6.50(s，2H)，6.93(s，2H)，7.90(d，J＝0.78Hz，1H)，8.00(dd，J＝7.81，0.78Hz，1H)，8.18(dd，J＝8.01，1.37Hz，1H).
ESI-MS m/z 617[M+H]+
(2)3-氧代-1’，2’，3’，4’，8’，9’，10’，11’-八氢-3H-二螺[异苯并呋喃-1，6’-硅宾 并[3，2-g：5，6-g’]二喹啉-13’，1’’-硅杂环己烷]-6-羧酸的合成
将实施例34-(1)中得到的化合物(30.8mg，50.0μmol)、四(三苯基膦)钯(0)(11.6mg，10.0μmol)、1，3-二甲基巴比妥酸(46.8mg，300μmol)和DCM(5.00mL)的混合物在室温下搅拌了10小时。通过将反应混合物直接用反相色谱(水/乙腈、0.1％甲酸)精制，从而得到了标记化合物(15.0mg，28.0μmol)。
1H-NMR(400MHz，MeOH-d4)δ(ppm)：1.03-1.10(m，2H)，1.10-1.17(m，2H)，1.67(br.s.，2H)，1.75-1.87(m，4H)，1.92-2.01(m，2H)，2.07(br.s.，2H)，2.50(t，J＝6.05Hz，4H)，3.22-3.30(m，4H)，6.47(s，2H)，6.97(s，2H)，7.88(s，1H)，8.00(d，J＝8.20Hz，1H)，8.18(d，J＝8.20Hz，1H).
ESI-MS m/z 537[M+H]+
(3)N-(2-(2，5-二氧代-2，5-二氢-1H-吡咯-1-基)乙基)-3-氧代-1’，2’，3’，4’， 8’，9’，10’，11’-八氢-3H-二螺[异苯并呋喃-1，6’-硅宾并[3，2-g：5，6-g’]二喹啉-13’， 1’’-硅杂环己烷]-6-甲酰胺的合成
按照实施例28-(2)，由实施例34-(2)中得到的化合物(13.4mg，25.0μmol)得到了标记化合物(2.60mg，3.95μmol)。
1H-NMR(400MHz，MeOH-d4)δ(ppm)：1.11(dt，J＝18.35，6.83Hz，4H)，1.73(br.s.，2H)，1.79-1.91(m，4H)，1.95-2.08(m，2H)，2.13(br.s.，2H)，2.52(t，J＝6.25Hz，4H)，3.31-3.37(m，4H)，3.51-3.59(m，2H)，3.73(dd，J＝6.25，4.69Hz，2H)，6.51(s，2H)，6.75(s，2H)，7.06(s，2H)，7.56(d，J＝1.17Hz，1H)，7.93(dd，J＝7.81，1.56Hz，1H)，8.04(d，J＝7.81Hz，1H)，8.28(br.s.，1H).
ESI-MS m/z 659[M+H]+
实施例35
N-(2-(2，5-二氧代-2，5-二氢-1H-吡咯-1-基)乙基)-3-氧代-1’，2’，3’，4’，8’，
9’，10’，11’-八氢-3H-二螺[异苯并呋喃-1，6’-硅宾并[3，2-g：5，6-g’]二喹啉-13’，1’’-硅
杂环己烷]-5-甲酰胺的合成
【化89】
(1)1’，11’-二烯丙基-3-氧代-1’，2’，3’，4’，8’，9’，10’，11’-八氢-3H-二螺[异苯 并呋喃-1，6’-硅宾并[3，2-g：5，6-g’]二喹啉-13’，1’’-硅杂环己烷]-5-羧酸的合成
按照实施例27-(1)，由制造例14-(2)中得到的7，7’-(硅杂环己烷-1，1-二基)双(1-烯丙基-1，2，3，4-四氢喹啉)(102mg，230μmol)和制造例16-(2)中得到的1-羟基-3-氧代-1，3-二氢异苯并呋喃-5-羧酸(134mg，690μmol)得到了标记化合物(42.0mg，68.0μmol)。
1H-NMR(400MHz，CDCl3)δ(ppm)：1.05-1.17(m，4H)，1.69(br.s.，2H)，1.79-1.93(m，4H)，1.94-2.12(m，4H)，2.45-2.67(m，4H)，3.18-3.34(m，4H)，3.88-3.98(m，4H)，5.14-5.30(m，4H)，5.88(ddt，J＝16.99，10.35，4.88，4.88Hz，2H)，6.48(s，2H)，6.94(s，2H)，7.30(d，J＝7.81Hz，1H)，8.28(dd，J＝8.01，1.37Hz，1H)，8.68(d，J＝0.78Hz，1H).
ESI-MS m/z 617[M+H]+
(2)3-氧代-1’，2’，3’，4’，8’，9’，10’，11’-八氢-3H-二螺[异苯并呋喃-1，6’-硅宾 并[3，2-g：5，6-g’]二喹啉-13’，1’’-硅杂环己烷]-5-羧酸的合成
按照实施例34-(2)，由实施例35-(1)中得到的化合物(40.1mg，65.0μmol)得到了标记化合物(21.0mg，39.0μmol)。
1H-NMR(400MHz，MeOH-d4)δ(ppm)：1.00-1.15(m，4H)，1.66(br.s.，2H)，1.81(quin，J＝5.86Hz，4H)，1.95(br.s.，2H)，2.07(br.s.，2H)，2.49(t，J＝6.05Hz，4H)，3.22-3.30(m，4H)，6.43(s，2H)，6.96(s，2H)，7.33(d，J＝7.81Hz，1H)，8.30(d，J＝7.81Hz，1H)，8.62(s，1H).
ESI-MS m/z 537[M+H]+
(3)N-(2-(2，5-二氧代-2，5-二氢-1H-吡咯-1-基)乙基)-3-氧代-1’，2’，3’，4’， 8’，9’，10’，11’-八氢-3H-二螺[异苯并呋喃-1，6’-硅宾并[3，2-g：5，6-g’]二喹啉-13’， 1’’-硅杂环己烷]-5-甲酰胺的合成
按照实施例28-(2)，由实施例35-(2)中得到的化合物(19.0mg，35.0μmol)得到了粗产物。进而，通过用反相硅胶柱色谱(水/乙腈、0.1％甲酸)精制，从而得到了标记化合物(2.60mg，3.95μmol)。
1H-NMR(400MHz，CDCl3)δ(ppm)：1.06-1.20(m，4H)，1.67(br.s.，2H)，1.78-1.89(m，4H)，1.95(br.s.，2H)，2.09(br.s.，2H)，2.48-2.63(m，4H)，3.21-3.34(m，4H)，3.64-3.76(m，2H)，3.81-3.89(m，2H)，6.48(s，2H)，6.76(s，2H)，6.87(s，2H)，7.32-7.36(m，1H)，8.02(br.s.，1H)，8.07(dd，J＝8.20，1.56Hz，1H)，8.26(d，J＝1.17Hz，1H).
ESI-MS m/z 659[M+H]+
实施例36
N-(2-(2，5-二氧代-2，5-二氢-1H-吡咯-1-基)乙基)-3’，7’-二羟基-3-氧代-3H-
二螺[异苯并呋喃-1，10’-二苯并[b，e]硅宾-5’，1’’-硅杂环己烷]-6-甲酰胺的合成
【化90】
(1)3’，7’-二羟基-3-氧代-3H-二螺[异苯并呋喃-1，10’-二苯并[b，e]硅宾-5’， 1’’-硅杂环己烷]-6-羧酸叔丁酯的合成
在氮气氛下在2-溴对苯二甲酸二叔丁酯(1.00g，2.80mmol)的THF(14.0mL)/正己烷(7mL)混合溶液中，在内温-95℃以下滴入正丁基锂(2.76M己烷溶液、1.014mL，2.80mmol)。在相同温度下搅拌了10分钟后，将制造例4-(3)中得到的3，7-双((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)-10H-螺[二苯并[b，e]硅宾-5，1’-硅杂环己烷]-10-酮(377mg，0.70mmol)的THF(7mL)溶液在内温-95℃以下滴入。在相同温度下搅拌了5分钟后，滴入三氟化硼二乙基醚络合物(178μL，1.40mmol)。将反应混合物缓慢地升温到室温，在室温下搅拌了12小时。通过在冰浴下加入饱和氯化铵水溶液，从而使反应停止。将水层用醋酸乙酯萃取，将有机层用水和饱和食盐水洗净。将混合物用无水硫酸镁干燥，通过将溶剂馏除，从而得到了包含加成体的混合物。在得到的混合物中加入THF(7.0mL)和四丁基氟化铵(1.00MTHF溶液，3.5mL，3.5mmol)，在室温下搅拌了7小时。通过在冰浴下加入饱和氯化铵水溶液，从而使反应停止。将水层用醋酸乙酯萃取，将有机层在减压下浓缩。通过将得到的残渣用硅胶柱色谱(正庚烷/醋酸乙酯)精制，从而作为与3，7-二羟基-10H-螺[二苯并[b，e]硅宾-5，1’-硅杂环己烷]-10-酮的混合物(300mg)得到了标记化合物。
(2)3’，7’-二羟基-3-氧代-3H-二螺[异苯并呋喃-1，10’-二苯并[b，e]硅宾-5’， 1’’-硅杂环己烷]-6-羧酸的合成
在实施例36-(1)中得到的化合物(104.9mg，0.20mmol)的DCM(4.00mL)溶液中加入TFA(400μL)，在室温下搅拌了一晚。将溶剂减压馏除，通过用甲醇将残存的TFA共沸除去，从而得到了标记化合物的粗产物。
(3)N-(2-(2，5-二氧代-2，5-二氢-1H-吡咯-1-基)乙基)-3’，7’-二羟基-3-氧代- 3H-二螺[异苯并呋喃-1，10’-二苯并[b，e]硅宾-5’，1’’-硅杂环己烷]-6-甲酰胺的合成
在采用实施例36-(2)的方法得到的化合物的DMF(10.0mL)溶液中加入了TEA(170μL，1.22mmol)、N-(2-氨基乙基)马来酰亚胺TFA盐(118.7mg，0.47mmol)和PyBOP(158.7mg，0.30mmol)。将反应混合物在室温下搅拌了2小时后，通过将混合物用硅胶柱色谱(己烷/醋酸乙酯)精制，从而得到了标记化合物(15.7mg，27.0μmol)。
1H-NMR(500MHz，MeOH-d4)δ(ppm)：1.16-1.19(m，2H)，1.25-1.28(m，2H)，1.73-1.78(m，2H)，2.00-.2.08(m，2H)，2.13-2.23(m，2H)，3.50-3.58(m，2H)，3.68-3.73(m，2H)，6.68(dd，J＝8.80，2.75Hz，2H)，6.72(s，2H)，6.76-6.79(m，2H)，7.32(d，J＝2.70Hz，2H)，7.65(br.s.，1H)，7.93(dd，J＝8.05，1.35Hz，1H)，7.98-8.01(m，1H).
ESI-MS m/z 581[M+H]+
实验例1
使用量子化学计算软件Gaussian09(Gaussian公司)，实施各实施例的化合物的开环体的结构最优化，采用马利肯电荷法算出了9位碳(参照图1。应予说明，在图1中，作为一例，示出实施例19)的原子电荷。(计算条件：APFD/6-311G+(2d,p)、IEFPCM/乙醇)
比较实验例1
作为与各实施例的化合物对应的比较例，除了代替含有Si原子的螺环结构(以下称为Si螺环部位)而使其为具有2个甲基作为取代基的Si原子以外，对于具有相同结构的化合物也采用与实验例1同样的操作算出了9位碳的马利肯电荷。
实验例1和比较实验例1的结果
如图2中所示那样，在具有Si螺环部位的化合物中马利肯电荷上升。认为通过马利肯电荷上升，从而平衡容易从开环体向闭环体移动，占空比降低。
实验例2
＜用化合物的抗体的标识＞
[采用2-巯基乙胺(MEA)的抗体的还原]
首先，将乙二胺四乙酸二钠盐(EDTA·2Na)在超纯水中混合，制备了乙二胺四乙酸(EDTA)0.10M、pH6.0的溶液(以下记为EDTA溶液)。其次，将NaH2PO4·2H2O、EDTA·2Na在超纯水中混合，制备了0.10M NaH2PO4、1.0mM EDTA、pH6.0的溶液(以下称为反应溶液)。接着，将反应溶液与MEA混合，制备了0.35M MEA的溶液(以下记为MEA溶液)。最后，将抗淀粉样蛋白β抗体6E10溶液(Biolegend公司)混合，以致用体积比表示，成为淀粉样蛋白β抗体6E10溶液：EDTA溶液：MEA溶液＝100：1：10(体积比)，使用加热块在37℃下加热了90分钟(以下称为抗体溶液1)。
[未反应MEA的除去]
使用Amicon Filters 10kDa(Merck Millipore公司)，通过以14k×g进行离心，从而得到了将未反应的MEA除去的溶液(以下称为抗体溶液2)。
[用化合物的抗体的标识反应]
基于吸光度对抗体溶液2的抗体浓度定量。其次，将抗体溶液2与实施例1和实施例19中合成的化合物混合，以致用摩尔比表示，成为抗体：化合物＝1：50，使用加热块在37℃下加热了1小时。
[未反应的化合物的除去]
使用Amicon Filters 10kDa(Merck Millipore公司)，添加标识反应后的抗体溶液，添加磷酸盐缓冲盐水(Sigama公司)(以下称为PBS)以使总量成为0.50mL，通过以14k×g进行离心，从而将未反应的化合物除去，得到了用化合物标识的抗体的溶液(以下称为抗体溶液3)。以下将用各化合物标识的抗体称为“标识抗体”。
[采用MALDI-TOF MS的标识数的评价]
首先，将乙腈和三氟醋酸在超纯水中混合，制备了调制成30％乙腈和0.10％三氟醋酸的溶液(以下称为TA30溶液)。对于芥子酸1.0mg，加入0.10mL的TA30溶液，施加了10分钟超声波。然后，进行离心分离，使用其上清液作为基质。取10μL的抗体溶液3，使用0.20％三氟醋酸的水溶液稀释2倍。在微型移液器中安装ZipTip U-C18(Merck Millipore公司)，用10μL的TA30溶液将顶端的树脂洗净后，使标识抗体吸附于树脂。然后，吸取3.0μL的芥子酸的基质，在MALDI板(Bruker公司)上使标识抗体溶出。样品在板上干燥后，使用UltraflexMALDI-TOF MS(Bruker公司)进行标识数的测定，确认了分别用1～3分子的化合物标识了抗体。
＜化合物1分子的明灭时间评价＞
[用于1分子测定的玻璃的制作]
将盖玻璃(松浪硝子工业株式会社)使用UV臭氧清洁器UV-1(Samco公司)清洗1分钟(以下称为UV臭氧清洗玻璃)。在测定中使用了清洗后经过了12小时以上的玻璃。
[标识抗体保持玻璃试样的制备]
使用将PBS在超纯水中混合而制备的pH 7.4的PBS溶液，将抗体溶液3稀释成能够在1分子发光的亮点之间不重合的情况下检测的浓度。在UV臭氧清洗玻璃上滴下100μL，在遮光-室温环境下静置了10分钟。使用超纯水1.0mL，将稀释的抗体溶液3冲洗3次，得到了将标识抗体保持在表面的玻璃试样(以下称为标识抗体保持玻璃试样)。
[观察溶液的制备]
将三(羟基甲基)氨基甲烷和NaCl在超纯水中混合，制备了50mM三(羟基甲基)氨基甲烷、10mM NaCl、pH7.4的Tris缓冲生理食盐水(以下称为TBS溶液)。使用TBS溶液，在表1的条件下制备了观察溶液(以下称为观察溶液)。
【表1】
| 葡萄糖 | 葡萄糖氧化酶 | 过氧化氢酶 | MEA | |
| 浓度 | 10％(w/v) | 0.50mg/mL | 40μg/mL | 50mM |
[使用了显微镜的化合物1分子的发光观察]
使用由荧光显微镜IX81(Olympus公司)、激光振荡器OBIS(Coherent公司、激光波长640nm)、EMCCD相机iXon(Andor公司)组成的显微镜系统，进行了观察。将标识抗体保持玻璃试样放置于载物台，滴下50μL的观察溶液。在表2的摄影条件下进行了观察。
【表2】
| 化合物 | 激光功率 | 曝光时间 | EM Gain | 物镜 |
| 实施例1～35 | 0.30kW/cm<sup>2</sup> | 30msec | 300 | ×100,NA1.4 |
| 实施例36 | 0.41kW/cm<sup>2</sup> | 50msec | - | ×100,NA1.4 |
[1分子发光的占空比的评价]
对于观察的各个亮点，解析了亮度的时间变化。作为荧光色素的各化合物1分子显示出发光状态与消光状态反复的明灭现象。将从激发光的照射开始时直至最后从发光状态变化为消光状态的时间定义为明灭持续时间，算出了各化合物1分子的明灭时间。进而，在算出了发光时间的累计(ON时间)后，作为“ON时间/明灭持续时间”算出了占空比。然后，将各化合物1分子的占空比的平均计算值设为各化合物的占空比(参照Tynan C.J.等,PLoSone,2012,Vol.7,e36265)。一般地，占空比越小，越容易检测出荧光色素的1分子发光。因此，认为占空比小的荧光色素适于超分辨率成像。
比较实验例2
除了使用了图3中所示的化合物A(实施例19的比较例)和化合物B(实施例1的比较例)这点以外，采用与实验例2同样的操作测定了占空比。其结果，如图4中所示那样，确认了引入了Si螺环部位的实施例19和实施例1的化合物为分别比化合物A和化合物B低的占空比。
实验例3
采用与实验例2同样的操作测定了实施例1至实施例36的占空比。将其结果示于图5中。应予说明，实施例36的化合物在Si置换呫吨骨架的3位和6位具有羟基或者具有酮，吸收极大波长与实施例1至实施例35的化合物不同，因此使用研究用1分子荧光显微镜HM-1000(シスメックス株式会社)，将Prolong(商标)Live(Thermo Fisher Scientific公司)用于观察溶剂，采用表2的条件进行了评价。除了这些方面以外，采用与实验例2同样的操作测定了占空比。
实验例4
〈固定细胞中的微管的超分辨率成像〉
对于使用含有4％多聚甲醛的PBS溶液固定化的HeLa细胞，添加含有0.5％TritonX-100的PBS溶液，进行了透过处理。接着，添加含有3％BSA/0.5％Triton X-100的PBS溶液，对细胞进行了封闭处理后，准备了将作为一次抗体的抗微管蛋白抗体(T5201,ThermoFisher Scientific公司)用含有0.2％BSA/0.1％TritonX-100的PBS溶液稀释到10μg/mL而添加的情形和没有添加的情形的2种细胞。进而，作为二次抗体，分别制作介由马来酰亚胺基用实施例7和实施例36的化合物标识的抗小鼠IgG抗体(ab6708,Abcam公司)，用含有0.2％BSA/0.1％TritonX-100的PBS溶液稀释到10μg/mL而添加。最后，作为观察溶剂，添加用PBS稀释过的Prolong(商标)Live，采用HM-1000(シスメックス株式会社)拍摄了透射光像和荧光像。将荧光像的拍摄条件示于表3中。
【表3】
其结果，在没有加入一次抗体而只用二次抗体进行了荧光摄影的情况下，未能确认微管结构，只在加入了一次抗体和二次抗体时微管中特征的纤维状的结构能够可视化，因此确认了使用用实施例7或实施例36的化合物标识的二次抗体能进行微管的抗体染色(参照图6的b和c、图7的g和h)。接着，将取得的图像数据使用图像解析软件ImageJ(参照Ovesny,M等,Bioimage informatics,2014,30,2389-2390)转换为超分辨率图像(参照图6的d和图7的i)。此时，只将单一分子发光抽出，用于向超分辨率图像的转换。对于向得到的超分辨率图像的转换前和转换后的图像中的微管，取得垂直方向的线轮廓及其半峰全宽，与转换前相比，转换后的图像中半峰全宽变小，能够以比光的衍射限度(约200nm)小的分辨率使微管可视化，因此确认了使用实施例7和实施例36的化合物能够构筑超分辨率图像(参照图6的e和图7的j)。
Claims (22)
1.一种荧光色素，其包含以下的式(I)所示的化合物或其互变异构体、或者其盐：
【化1】
式中，
A表示可具有取代基的含Si的C4～C7的杂环，
X表示羟基或-NR1R2，
Y1表示＝O或＝N+R3R4，
R1、R2、R3、R4、R5和R6独立地表示H、可具有取代基的C1～C6的烷基、或可具有取代基的C1～C6的杂烷基，R1与R2、R3与R4、R1与R5、和R3与R6的组合中的至少一个可以与它们结合的N一起来形成可具有取代基的含N的杂环，
R7、R8、R9、R10和R11独立地选自H、卤素、可具有取代基的C1～C6的烷基、可具有取代基的C1～C6的烷氧基、可具有取代基的C1～C6的烷硫基、可具有取代基的氨基、可具有取代基的芳基、可具有取代基的杂芳基、-CO2H、-CO2 -、-SO3H、-SO3 -、和-L-R；
L为具有1～16个非氢原子的、直链、分支链、环或它们的任意的组合结构的2价的连接基，其中，在连接基中存在1个以上杂原子的情况下，作为从酯、胺、酰胺、醚、硫醚、羰基中独立地选择的1个以上的基团含有该杂原子；
R为反应基团；并且
R7、R8、R9、R10和R11中相邻的2个基团中的1个以上的组合可一起形成环；
不过，不包括：R1与R5、和R3与R6的组合中的至少一个与它们结合的N一起来形成可具有取代基的含N的杂环并且R2和R4为可具有取代基的C1～C6的烷基的化合物及其互变异构体以及其盐。
2.根据权利要求1所述的荧光色素，其中，X为-NR1R2，Y1为＝N+R3R4。
3.根据权利要求2所述的荧光色素，其中，R1、R2、R3和R4独立地为可具有取代基的C1～C6的烷基或可具有取代基的C1～C6的含O的杂烷基。
4.根据权利要求3所述的荧光色素，其中，R1与R2、和R3与R4的组合均与它们结合的N一起来形成可具有取代基的含N的杂环。
5.根据权利要求1所述的荧光色素，其中，X为羟基，Y1为＝O。
6.根据权利要求1～5中任一项所述的荧光色素，其中，A为可被从卤素、C1～C6的烷基、C1～C6的卤代烷基、C1～C6的烷氧基、C1～C6的烷硫基、氨基、芳基、杂芳基、-CO2H和-SO3H中独立地选择的1个以上的取代基取代的含Si的C4～C7的杂环。
7.根据权利要求1～6中任一项所述的荧光色素，其中，A为【化2】
8.根据权利要求1～7中任一项所述的荧光色素，其中，在R1、R2、R3、R4、R5、R6、R7、R8、R9、R10和R11中，可具有取代基的C1～C6的烷基、可具有取代基的C1～C6的杂烷基、可具有取代基的C1～C6的烷氧基、和可具有取代基的C1～C6的烷硫基的取代基均独立地选自卤素、C1～C6的烷氧基、C1～C6的烷硫基、氨基、芳基、杂芳基、-CO2H和-SO3H，
可具有取代基的氨基、可具有取代基的含N的杂环、可具有取代基的芳基、和可具有取代基的杂芳基的取代基均独立地选自卤素、C1～C6的烷基、C1～C6的羟基烷基、C1～C6的烷氧基、C1～C6的烷硫基、氨基、芳基、杂芳基、-CO2H和-SO3H。
9.根据权利要求1～8中任一项所述的荧光色素，其中，R8和R11为H。
10.根据权利要求1～9中任一项所述的荧光色素，其中，R7为-CO2 -，互变异构体为以下的式(II)所示的化合物，
【化3】
式中，
Y2为羟基或-NR3R4；并且
A、X、R5、R6和R8～R11的定义与式(I)相同。
11.根据权利要求1～10中任一项所述的荧光色素，其中，R选自羟基、羧基、磺酸、不饱和酰亚胺、不饱和酰胺、不饱和酯、羧酸的活化酯、胺、醇、腈、硫醇、硼酸酯、亚磷酰胺、卤代烷基、卤代磺酰基、在α位具有卤素的酰胺或酯、异氰酸酯、异硫氰酸酯、叠氮化物、醛、酰基腈和可光活化的基团。
12.根据权利要求1～11中任一项所述的荧光色素，其中，-L-R为-CONH-L’-R，其中，L’为具有1～13个非氢原子的、直链、分支链、环或它们的任意的组合结构的2价的连接基，其中，在连接基中存在1个以上杂原子的情况下，作为从酯、胺、酰胺、醚、硫醚和羰基中独立地选择的1个以上的基团含有该杂原子。
13.根据权利要求12所述的荧光色素，其中，R9和R10中的任一个为
【化4】
14.一种荧光色素，其包含从以下选择的化合物或其互变异构体、或者其盐：
【化5】
【化6】
15.一种标识复合化物质，其是权利要求1～14中任一项所述的荧光色素与复合化物质结合而成的。
16.根据权利要求15所述的标识复合化物质，其中，复合化物质为蛋白质或核酸。
17.一种组合物，其包含权利要求1～14中任一项所述的荧光色素、或者权利要求15或16所述的标识复合化物质。
18.根据权利要求17所述的组合物，其为用于超分辨率显微镜法的试剂组合物。
19.根据权利要求18所述的组合物，其中，所述超分辨率显微镜法为定位显微镜法。
20.一种信息取得方法，其中，使权利要求1～14中任一项所述的荧光色素、或者权利要求15或16所述的标识复合化物质与被检测物质结合，采用超分辨率显微镜法取得与所述被检测物质有关的信息。
21.根据权利要求20所述的方法，其中，与所述被检测物质有关的信息为与所述被检测物质的结构有关的信息。
22.根据权利要求21所述的方法，其中，与所述被检测物质的结构有关的信息为选自所述被检测物质的大小、形态和凝集度中的至少1个信息。
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