CN113208972B

CN113208972B - 面膜及其制备方法

Info

Publication number: CN113208972B
Application number: CN202110593750.4A
Authority: CN
Inventors: 曾茜垚; 廖霞; 杨华; 仇萍; 吴飞驰; 黄宇明
Original assignee: Hunan Zhengqing Pharmaceutical Group Co ltd
Current assignee: Hunan Zhengqing Pharmaceutical Group Co ltd; Hunan Zhizhu Technology Co ltd
Priority date: 2021-05-28
Filing date: 2021-05-28
Publication date: 2022-12-23
Anticipated expiration: 2041-05-28
Also published as: CN113208972A

Abstract

本申请公开了一种面膜及其制备方法。面膜包括以下配比的组分：10～20重量份的青风藤果实和青风藤果实萃取物中的其中一者、以及80～90重量份的助剂，助剂包括溶剂、保湿剂、增稠剂和pH调节剂。根据本申请实施例的面膜，青风藤果实萃取物具有较优异的抑菌能力，尤其是对表皮葡萄球菌、痤疮丙酸杆菌和金黄色葡萄球菌具有优异的抑菌效果。

Description

面膜及其制备方法

技术领域

本申请属于化妆品技术领域，尤其涉及一种面膜及其制备方法。

背景技术

痤疮是一种皮肤病，病程周期长，可引发毛囊炎，常发病于脸部、胸部和背部等。其发病机理比较复杂，与多重原因有关，除与内分泌、免疫、皮脂过度分泌和毛囊角化过度等因素有关外，微生物学上分析认为与痤疮丙酸杆菌等厌氧菌和表皮葡萄球菌、金黄色葡萄球菌等需氧细菌的混合感染密切相关。

目前，通常采用西药或中药来治疗痤疮，例如西药采用抗生素、红霉素、四环素等，但是细菌会对西药产生耐药性，导致久治不愈，并且患者容易对西药产生依赖性。而中药对痤疮的治疗效果相对较差。

发明内容

鉴于背景技术中存在的问题，本申请提供一种面膜及其制备方法，旨在中药治疗痤疮效果较差的问题。

为了达到上述目的，第一方面，本申请实施例提供一种面膜，包括以下配比的组分：10～20重量份的青风藤果实和青风藤果实萃取物中的其中一者、以及80～90重量份的助剂，助剂包括溶剂、保湿剂、增稠剂和pH调节剂。

根据本申请的一个实施例，青风藤果实为12～15重量份，助剂为85～88重量份。

根据本申请的一个实施例，青风藤果实为13重量份，助剂87重量份。

根据本申请的一个实施例，青风藤果实萃取物为12～15重量份，助剂为85～88重量份。

根据本申请的一个实施例，青风藤果实萃取物为15重量份，助剂为85重量份。

根据本申请的一个实施例，青风藤果实萃取物为乙酸乙酯提取物。

第二方面，本申请实施例提供一种面膜的制备方法，包括以下步骤：将青风藤果实和助剂进行复配，得到面膜，其中，各组分的用量如下：青风藤果实为10～20重量份，助剂为80～90重量份，助剂包括溶剂、保湿剂、增稠剂和pH调节剂。

第三方面，本申请实施例提供一种面膜的制备方法，包括以下步骤：提供新鲜的青风藤果实，加入有机溶剂提取，得到青风藤果实萃取物；将青风藤果实萃取物和助剂进行复配，得到面膜，其中，各组分的用量如下：青风藤果实萃取物为10～20重量份，助剂为80～90重量份，助剂包括溶剂、保湿剂、增稠剂和pH调节剂。

根据本申请的一个实施例，有机溶剂为乙酸乙酯。

根据本申请的一个实施例，加入有机溶剂提取的步骤，包括：采用乙酸乙酯逐级萃取青风藤果实。

根据本申请实施例的面膜，青风藤果实萃取物具有较优异的抑菌能力，尤其是对表皮葡萄球菌、痤疮丙酸杆菌和金黄色葡萄球菌具有优异的抑菌效果。

附图说明

为了更清楚地说明本发明实施例的技术方案，下面将对本发明实施例中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面所描述的附图仅仅是本发明的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据附图获得其他的附图。

图1是根据本申请实施例提供的青风藤果实萃取物碘分离物质的总离子流图；

图2是根据本申请实施例提供的保留时间为11.156min物质的EI-MS质谱图；

图3是根据本申请实施例提供的保留时间为11.580min物质的EI-MS质谱图；

图4是根据本申请实施例提供的保留时间为14.126min物质的EI-MS质谱图；

图5是根据本申请实施例提供的青风藤果实萃取物对微生物的时间动力学曲线

图6是根据本申请实施例提供的青风藤果实萃取物作用下的微生物生长曲线图；

图7是抑菌试验图。

具体实施方式

为了使本申请的发明目的、技术方案和有益技术效果更加清晰，以下结合具体实施例对本申请进行详细说明。应当理解的是，本说明书中描述的实施例仅仅是为了解释本申请，并非为了限定本申请。

为了简便，本文仅明确地公开了一些数值范围。然而，任意下限可以与任何上限组合形成未明确记载的范围；以及任意下限可以与其它下限组合形成未明确记载的范围，同样任意上限可以与任意其它上限组合形成未明确记载的范围。此外，尽管未明确记载，但是范围端点间的每个点或单个数值都包含在该范围内。因而，每个点或单个数值可以作为自身的下限或上限与任意其它点或单个数值组合或与其它下限或上限组合形成未明确记载的范围。

青风藤的根、茎、叶具有抑菌抗炎作用，主要源于其包含的青藤碱所起的作用。但是目前对青风藤果实化学成分的研究较少，而对其果实抑菌活性研究仍处于空白阶段，导致每年有大量的青风藤果实被浪费。

发明人为提高青风藤果实的利用率，专注于对青风藤果实的研究，发现青风藤果实具有优异的抑菌活性。

基于此，第一方面，本申请实施例提出了一种面膜，包括以下配比的组分：10～20重量份的青风藤果实和80～90重量份的助剂，所述助剂包括溶剂、保湿剂、增稠剂和pH调节剂。

根据本申请实施例的面膜，以青风藤果实为原料，充分利用了资源，减少浪费，并且其来源较为广泛。并且面膜无刺激，安全性高并且具有抑菌作用；面膜经过安全性评价，理化检测，不仅具有色泽良好，质地均匀的特点，由于青风藤果实具有优异的抑菌活性，在将其和其他助剂作为面膜的主要成分时，可以起到抗菌消炎的作用，可有效的治疗痤疮。

本申请实施例的面膜中各组分比例可以在上述范围内进行任意调整，举例如下：

面膜包括以下配比的组分：11～18重量份的青风藤果实和82～89重量份的助剂。

面膜包括以下配比的组分：12～15重量份的青风藤果实和85～88重量份的助剂。

面膜包括以下配比的组分：13～15重量份的青风藤果实和85～87重量份的助剂。

根据本申请实施例的面膜，对助剂的选择主要如下：溶剂主要选用水，保湿剂可选自于甘油、丙二醇、透明质酸钠、赤藓醇、黄原胶、芦芭油和烟酰胺中的至少一种。增稠剂可选自卡波姆和黄原胶中的至少一种。pH调节剂可选自三乙醇胺和乙二胺四乙酸二钠EDTA～2NA中的至少一种。同一种助剂可以起到单一功效，也可同时起到多种功效。并且上述助剂种类的选择仅为示例，可以根据实际应用进行调整。

作为示例，面膜包括以下配比的组分：甘油4～6份，丙二醇1～5份，透明质酸钠0.1～0.2份，卡波姆0.1～0.3份，赤鲜醇1～3份，乙二胺四乙酸二钠0.1～0.3份，黄原胶0.05～0.2份，对羟基苯乙酮0.05～0.2份，三乙醇胺1～2份，芦芭油0.5～0.2份，1,2～己二醇0.5～0.2份，烟酰胺0.001～0.1份，青风藤果实提取物10～20份，加水至面膜的总重为100。

根据本申请实施例的面膜，以甘油，丙二醇，赤藓醇，透明质酸钠，芦芭油，纯水形成了一个补水体系，可以深层滋养肌肤，改善中间代谢，增加皮肤弹性。透明质酸的活性成分能够改善皮肤的锁水屏障，刺激上皮细胞的生长，促进伤口复原。并且对羟基苯乙酮和青风藤果实萃取物形成一个天然的防腐体系，避免化学防腐剂对皮肤造成的伤害。烟酰胺作为人体必须的营养物质，对人体皮肤有抗炎、美白、保湿等多种功效。

第二方面，本申请实施例提供了一种面膜的制备方法，包括以下步骤：按照本申请第一方面提供的面膜的组分和组分重量份数称取各组分；将青风藤果实和助剂进行复配，得到面膜。

第三方面，本申请实施例提出了一种面膜，包括以下配比的组分：10～20重量份的青风藤果实萃取物和80～90重量份的助剂，所述助剂包括溶剂、保湿剂、增稠剂和pH调节剂。

根据本申请实施例的面膜，由于青风藤果实具有优异的抑菌活性，提取青风藤果实中的有效活性物质作为青风藤果实萃取物，在将其和其他助剂作为面膜的主要成分时，可以起到抗菌消炎的作用，可有效的治疗痤疮。

在一些实施例中，青风藤果实萃取物可以为采用溶媒进行提取处理获得的，溶媒为中药组分可接受的溶媒。具体地，可采用有机溶剂作为溶媒进行提取，示例性地，有机溶剂可优选为乙酸乙酯。青风藤果实中的有效活性物质主要为有机物，采用乙酸乙酯可以将青风藤果实中的有效活性物质较大程度的进行提取。

本申请实施例的面膜中各组分比例可以在上述范围内进行任意调整，示例如下：

面膜包括以下配比的组分：11～18重量份的青风藤果实萃取物和82～89重量份的助剂。

面膜包括以下配比的组分：12～15重量份的青风藤果实萃取物和85～88重量份的助剂。

面膜包括以下配比的组分：13～15重量份的青风藤果实萃取物和85～87重量份的助剂。

根据本申请实施例的面膜，对助剂的选择与本申请第一方面的实施例相同，在此不再赘述。

第四方面，本申请实施例提供了一种面膜的制备方法，包括以下步骤：按照本申请第三方面提供的面膜的组分和组分重量份数称取各组分；将新鲜的青风藤果实加入有机溶剂提取，得到青风藤果实萃取物；将青风藤果实萃取物和助剂复配，得到面膜。

根据本申请实施例提供的制备方法，有机溶剂可以有效地提取出青风藤果实中的有效活性物质。并且制备方法操作简单，安全，成本低，有利于推广。

在一些实施例中，青风藤果实萃取物的制备方法，包括以下步骤：

S100，提供新鲜的青风藤果实；

S200，将所述青风藤果实进行粉碎处理后，将其过滤并保留清液，得到青风藤果实粗提液；

S300，采用有机溶剂萃取所述青风藤果实粗提液，并回收萃取溶剂，得到青风藤果实萃取物。

根据本申请实施例的制备方法，萃取得到的青风藤果实萃取物具有较优异的抑菌能力，尤其是对表皮葡萄球菌、痤疮丙酸杆菌和金黄色葡萄球菌具有优异的抑菌效果。

步骤S100中，青风藤的来源有两种，一种是防己科植物中的青风藤，另一种是陕西产防己科植物青风藤的变种毛青藤果实。青风藤果实形似蓝莓呈串状，浆汁丰富，果汁为紫红色。

步骤S200中，将青风藤果实进行预处理，为萃取步骤做准备。预处理过程包括：采集成熟新鲜的青风藤果实后，去除其果梗，将青风藤果实粉粹处理，然后过滤并保留清液。其中，过滤可采用常压过滤和/或减压过滤等。减压过滤可提高过滤效率，并可避免有效活性成分被破坏。

步骤S300中，可采用有机溶剂对青风藤果实粗提液进行萃取。例如有机溶剂可选自乙酸乙酯和正丁醇中的至少一种。青风藤果实中的有效活性物质多为有机物质，采用有机溶剂进行萃取可提高有效活性物质的提取率。

在一些实施例中，有机溶剂可以为乙酸乙酯，乙酸乙酯对青风藤果实粗提液进行萃取。具体地，可采用乙酸乙酯逐级萃取3～5次青风藤果实粗提液，逐级萃取出青风藤果实粗提液中的不同有效活性物质，将逐级萃取后得到的萃取相溶液合并，合并后回收萃取相溶液中的乙酸乙酯。

并且，青风藤果实粉碎处理为浆料后，其颜色为紫色。而乙酸乙酯对青风藤果实粗提液进行萃取时，萃取层为淡黄色，并未萃取出浆料中的呈现紫色的物质。

作为对比示例，有机溶剂采用石油醚，采用石油醚脱色萃取层无色，未能萃取出活性物质。

在一些实施例中，回收萃取溶剂包括：

S310，将萃取后的青风藤果实粗提液减压旋干，以回收部分萃取溶剂，并得到青风藤果实萃取浓缩液。减压旋干过程将回收大部分萃取溶剂。

S320，将所述青风藤果实萃取浓缩液水浴加热，以回收剩余的萃取溶剂。

以有机溶剂为乙酸乙酯进行举例说明，于60℃左右，将乙酸乙酯萃取后的萃取相溶液于旋转蒸发仪内；例如在55℃～65℃之间的任一温度数值时，回收乙酸乙酯。此温度，既可以防止乙酸乙酯沸腾，又可以提高回收效率。其旋蒸时转速可以选取45～55r/min，配合旋蒸转速，相应地，选取旋蒸时间为18～22min。例如，于60℃旋蒸时，将转速调整为50r/min，在此转速下，旋蒸20min，即可回收乙酸乙酯。

在步骤S200之后，还可以包括步骤S400，浓缩处理所述青风藤果实粗提液。例如，于52℃～68℃下，将所述青风藤果实粗提液于45～65r/min下真空旋蒸1.8～2.2h。在52℃～68℃下，既不会温度过高破坏青风藤果实中的有效活性物质，又可提高旋蒸效率。在45～65r/min，既提高了成热速率，又可搅拌均匀；相应地，配合转速，将适应选择旋蒸时间。例如，于60℃旋蒸时，将转速调整为50r/min，在此转速下，旋蒸2h，即可回收青风藤果实中的大部分水分。

发明人通过对青风藤果实进行萃取，提取有效成分，可以增加青风藤果实的利用。本申请采用乙酸乙酯对青风藤果实的有效活性物质进行萃取，分析其活性成分的结构，发现有效活性物质主要包括：对羟基苯乙醇、2～羟基苯乙腈和5～氨基苯并咪唑酮。此三种物质协同作用，可以对表皮葡萄球菌、痤疮丙酸杆菌和金黄色葡萄球菌起到优异的抑菌效果。

以下通过具体实施例对本申请作进一步说明。

实施例1

青风藤果实萃取物及其制备方法

S101，采集新鲜成熟的青风藤果实4192.9g；

S201，压榨粉碎为浆料2000mL，将此浆料纱布过滤后抽滤，得到青风藤果实粗提液；

S401，取250mL青风藤果实粗提液，于60℃下，在旋转蒸发仪内以50r/min真空旋蒸2h，得到100mL青风藤果实浓缩液；

S301，取100mL乙酸乙酯萃取青风藤果实浓缩液，吸取上层淡黄色萃取层，逐级萃取3～5次，直至有机层无色透明，合并萃取相溶剂后，于60℃下，在旋转蒸发仪内减压旋干，回收大部分挥发出来的乙酸乙酯，并得到青风藤果实萃取浓缩液；

于60℃下，将青风藤果实萃取浓缩液水浴加热，回收乙酸乙酯，并得到青风藤果实萃取物。

实施例2

青风藤果实浓缩液

S102，采集新鲜成熟的青风藤果实4192.9g；

S202，压榨粉碎为浆料2000mL，将此浆料纱布过滤后抽滤，得到青风藤果实粗提液；

S402，取250mL青风藤果实粗提液，于60℃下，在旋转蒸发仪内以50r/min真空旋蒸2h，得到100mL青风藤果实浓缩液。

实施例3

面膜及其制备方法

面膜包括以下配比的组分：甘油4份，丙二醇2.5份，透明质酸钠0.01份，卡波姆0.15份，赤鲜醇2份，乙二胺四乙酸二钠0.03份，黄原胶0.05份，对羟基苯乙酮0.5份，三乙醇胺1份，芦芭油1份，1,2-己二醇0.5份，烟酰胺0.003份，纯水73.257份和青风藤果实萃取物15份。

制备方法如下：

将纯水，甘油，丙二醇，透明质酸钠，卡波姆，赤鲜醇，乙二胺四乙酸二钠，黄原胶和对羟基苯乙酮加入水剂锅中，升温至85℃，搅拌均质至料体无颗粒后保温搅拌20min；

温度降至50℃，加入三乙醇胺，继续搅拌降温；

温度降至45℃，加入芦芭油，1,2-己二醇，烟酰胺和实施例1的青风藤果实萃取物，继续搅拌降温；

温度降至38℃，检验合格后经滤布过滤出料；

将面膜无纺布浸润于面膜液中，然后真空包装，得到面膜。

实施例4

面膜及其制备方法

面膜包括以下配比的组分：甘油5份，丙二醇2份，透明质酸钠0.02份，卡波姆0.15份，赤鲜醇2份，乙二胺四乙酸二钠0.03份，黄原胶0.05份，对羟基苯乙酮0.5份，三乙醇胺1.5份，芦芭油0.5份，1,2-己二醇1份，烟酰胺0.005份，纯水74.7份和青风藤果实萃取物12.5份。

制备方法如下：

温度降至50℃，加入三乙醇胺，继续搅拌降温；

温度降至38℃，检验合格后经滤布过滤出料；

将面膜无纺布浸润于面膜液中，然后真空包装，得到面膜。

实施例5

面膜及其制备方法

面膜包括以下配比的组分：甘油6份，丙二醇1.5份，透明质酸钠0.03份，卡波姆0.15份，赤鲜醇2份，乙二胺四乙酸二钠0.03份，黄原胶0.05份，对羟基苯乙酮0.5份，三乙醇胺2份，芦芭油1.5份，1,2-己二醇1.5份，烟酰胺0.007份，纯水74.67份和青风藤果实萃取物10份。

制备方法如下：

温度降至50℃，加入三乙醇胺，继续搅拌降温；

温度降至38℃，检验合格后经滤布过滤出料；

将面膜无纺布浸润于面膜液中，然后真空包装，得到面膜。

青风藤果实萃取物的成分测定

检测样品：

取实施例1的青风藤果实萃取物，采用超纯水作为溶剂，配置成200mg/mL青风藤果实萃取溶液。

取1mL的200mg/mL青风藤果实萃取溶液，加2mL乙酸乙酯溶解。取两块硅胶层板，用铅笔在距离底部1cm的位置轻画出两条起始线，用毛细管蘸取少量溶液均匀的涂抹在线框内，点样两次。将点样好的硅胶层析板放入加有40mL乙酸乙酯的层析槽内，盖上盖子，静置30min，待物质分层。30min后乙酸乙酯均匀布满整个大板，用吹风机吹干，在紫外灯下显示出界限清晰的条带。将显色后的硅胶层板放置碘粉盒中，利用碘粉显示出紫外下未显色的部分，碘粉可挥发(不影响分离出来的物质)。将薄层层析板上碘液显色条带最宽的深紫色部分用刮勺刮下来，碾压成粉末，放进布氏漏斗里，用乙酸乙酯洗脱6遍，收集洗脱液，用旋转蒸发仪55℃，30r/min，回收乙酸乙酯，富集至少量溶液后，称量玻璃瓶，装于玻璃瓶中，继续旋蒸至乙酸乙酯溶液完全挥干，抽真空20min，称量重量，得到28mg青风藤果实萃取物分离纯化物质。

将青风藤果实萃取物分离纯化物质作为检测样品。

检测方法：

依据《中国药典》2020版四部通则0521和0431进行检测。气质联用仪：Aglent8890+5977BYF005。并配置100mg/mL、50mg/mL、25mg/mL、12.5mg/mL、6.25mg/mL、3.125mg/mL等浓度的青风藤果实萃取溶液，为后续试验做准备。

气相参数：载气：氦气；进样量：1uL；进样口温度：250℃；分流比：10：1；流量：1mL/min。升温程序：45℃保持2min，以15℃/min升到250℃，保持5min。

色谱柱：色谱柱编号2B～GC/MS～11；色谱柱型号：HP～5MS 30m×0.25mm×0.25μm。

质谱参数：EI模式，70eV；离子源温度：230℃；四级杆温度：150℃；溶剂延迟：1min；全扫描模式：33～500m/z。

检测结果：

1、图1是根据本申请实施例提供的青风藤果实萃取物碘分离物质的总离子流图，如图1所示，总离子流色谱图对含量较高，响应较好的化学成分的色谱峰面积较大。表1是积分峰列表。由图1和表1可以看出，共有四个相应峰，分离出四种物质，其中三个响应较好，保留时间分别为11.156min，11.58min和14.126min，其面积比分别为27.7％，62.05％和100％，保留时间为11.580min的物质响应最好，保留时间为14.126min的物质峰面积最大。

表1积分峰列表

2、图2是根据本申请实施例提供的保留时间为11.156min物质的EI-MS质谱图，如图2所示，分子离子峰为138，最大丰度为107，结构稳定，为失去[-CH₂OH]的产物；m/z 77和m/z 51可推测结构中含有苯环；含有m/z 91的离子碎片，所以含有[Ar～CH₂CH₂～]，m/z 121为m/z 138失去[H₂O]离子碎片；m/z 91为m/z 121失去[～CH₂＝OH](醇)离子碎片；因此化合物为对羟基苯乙醇，对羟基苯乙醇的结构式如下：

3、图3是根据本申请实施例提供的保留时间为11.580min物质的EI-MS质谱图，如图3所示，分子离子峰为133；最大丰度为133，结构稳定；质谱图上出现苯环系列峰m/z 51，m/z 77，说明有苯环存在；m/z 106为m/z 133失去[CN]腈)离子碎片；m/z115为m/z 133失去[H₂O]离子碎片；m/z 90为m/z 115失去[CN]腈)离子碎片；因此化合物为2～羟基苯乙腈，2～羟基苯乙腈的结构式如下：

4、图4是根据本申请实施例提供的保留时间为14.126min物质的EI-MS质谱图，如图4所示，分子离子峰为149；最大丰度为149，结构稳定；m/z 66为m/z 80失去[CH₂]离子碎片；m/z 51为m/z 66失去[NH](氨基)离子碎片；m/z 122为m/z 149失去[CO]离子碎片；m/z94为m/z 122失去[N₂]离子碎片；因此化合物为5～氨基苯并咪唑酮，5～氨基苯并咪唑酮的结构式如下：

5、对羟基苯乙醇、对2～羟基苯乙腈和5～氨基苯并咪唑酮同时做液相色谱分析。如表2所示，对羟基苯乙醇在GC～MS保留时间RT＝11.156min，LC～MS保留时间RT＝3.59min，所占面积比为27.7％；2～羟基苯乙腈在GC～MS保留时间RT＝11.580min，LC～MS中的保留时间RT＝4.509min，所占面积比为62.05％；5～氨基苯丙咪唑酮，GC～MS保留时间RT＝14.126min，LC～MS中的保留时间RT＝4.135min，所占面积比为100％。由此，也印证了本申请实施例的青风藤果实萃取物中包含此三种物质，此三种物质均为包含苯环的大分子物质，具有一定的抑菌效果。

表2三种物质的离子峰表

青风藤果实萃取物的抑菌试验

1、病毒样本：

金黄色葡萄球菌湖南农业大学动物医学院动物分离纯化菌株；

表皮葡萄球菌(ATCC 12228)广东省微生物菌种保藏中心；

痤疮丙酸杆菌(ATCC 11827)广东省微生物菌种保藏中心。

2、培养基制备

分别配制硫乙醇酸盐培养基、厌氧培养基、LB培养基，将配制好的培养基置锥形瓶中密封，放入灭菌锅中于121℃下灭菌30min，待冷却后，置于4℃冰箱中保存备用。

3、菌悬液的制备

标准菌株活化后接种于液体培养基中进行增菌培养，金黄色葡萄球菌和表皮葡萄球菌置于50mL锥形瓶中，150r/min，37℃恒温摇床培养24h；痤疮丙酸杆菌置于50mL锥形瓶中，用厌氧袋封装，37℃下恒温静置培养48h。

4、抑菌圈的测定

(1)测定过程

将经过高温灭菌的各相应培养基倒入直径9cm的无菌培养皿中，使每个培养皿有20mL的培养基，冷却后备用。在培养基表面加入0.1mL相应的菌悬液，涂布均匀，用打孔器打出直径为8mm孔，拿镊子将孔中的琼脂取出。用移液枪移取100μL的青风藤果实萃取物至挖好的孔中，在平皿背面相应的孔后做好标记，勿使其外溢。

表皮葡萄球菌和金黄色葡萄球菌放置37℃恒温箱内培养24h，痤疮丙酸杆菌放置厌氧培养盒中，再放到37℃恒温箱内培养48h。最后用游标卡尺测量抑菌圈直径(精确到0.01mm)，实验重复三次，取平均值，记录实验结果。

以孔为中心，分别将200mg/mL、100mg/mL、50mg/mL、25mg/mL、12.5mg/mL、6.25mg/mL和3.125mg/mL的青风藤果浆萃取物溶液向培养基扩散，抑制周边的菌落生长，形成不长菌的圆圈，抑菌圈越大，表明青风藤果实萃取物的抑菌效果越好。标准为：直径＞20mm为高敏、直径10～20mm为中敏、直径＜10mm为耐药。

(2)结果分析

由表3可知，在200mg/mL时，表皮葡萄球菌对青风藤果实萃取物溶液最为敏感，其最大抑菌圈达到30.86(±0.59)mm，其次为痤疮丙酸杆菌，最大抑菌圈为30.16(±0.11)mm，金黄色葡萄球菌的抑菌圈为21.29(±0.88)mm，青风藤果实萃取物溶液对三种菌种的抑菌圈均达到高敏标准；随着青风藤果实萃取物溶液浓度的降低，抑菌圈逐渐减小。不同浓度青风藤果实萃取物溶液对表皮葡萄球菌均较敏感；低浓度青风藤果实萃取物溶液对金黄色葡萄球菌不敏感。高浓度的青风藤果实萃取物溶液对痤疮丙酸杆菌比较敏感，低浓度无明显反应。说明在一定浓度青风藤果实萃取物溶液的作用下，对痤疮主要菌种都有较明显的抑制作用。

表3不同浓度青风藤果实萃取物对痤疮致病菌的抑菌圈直径(n＝3)

5、青风藤果实萃取物对三种致痘菌的最低抑菌浓度实验

(1)青风藤果实萃取物对表皮葡萄球菌和金黄色葡萄球菌的最低抑菌浓度实验

取15个1mL的无菌管，标记1～15号，分别取青风藤果实萃取物溶液浓度为200、100、90、80、70、60、50、45、40、35、30、25、12.5、6.25、3.125mg/mL的青风藤果实萃取物0.2mL于15个无菌管中，用菌落计数法调整菌浓度，并稀释细菌浓度约在1×10⁷cfu/mL，在无菌管中再加入10μL 1×10⁷cfu/mL表皮葡萄球菌菌液、金黄色葡萄球菌菌液，混合均匀，取0.1mL混合液均匀涂布于LB培养基上，同时取一个无菌管加0.2mL无菌水和10μL相应菌液，做空白对照组。将LB培养基放置37℃恒温箱内培养24h。重复三组实验，数据一致则记录结果。观察结果，取无细菌生长的质量浓度为最小抑菌浓度。

(2)青风藤果实萃取物对痤疮丙酸菌的最低抑菌浓度实验

与(1)不同的是，在无菌管中再加入10μL 1×10⁷cfu/mL痤疮丙酸杆菌菌液。混合均匀，取0.1mL混合液均匀涂布于厌氧培养基上，同时取一个小瓶加0.2mL无菌水和10μL相应菌液，做空白对照组。将厌氧培养基放置厌氧培养盒中，再放入厌氧袋和指示剂，置于37℃恒温箱内培养48h。重复三组实验，数据一致则记录结果。观察结果，取无细菌生长的质量浓度为最小抑菌浓度。

(3)结果分析

由表4中数据可知，与空白组相比，加了青风藤果实萃取物溶液后，对于三种菌均体现了不同程度的抑制作用；在达到MIC浓度后，随着青风藤果实萃取物溶液浓度的降低，菌量逐渐增多，展现出一个较明显的梯度变化。其中相对于金黄色葡萄球菌的MIC为35mg/mL，表皮葡萄球菌和痤疮丙酸杆菌的MIC均为25mg/mL，说明表皮葡萄球菌和痤疮丙酸杆菌对于青风藤果实萃取物溶液较为敏感；金黄色葡萄球菌抗药性较强。

表4青风藤果实萃取物对三种致痘菌的最低杀菌浓度(MIC)(n＝3)

注：“-”表示无菌生长，“+”表示有少量菌生长，“++”表示有中等菌生长，“+++”表示有较多菌生长，“++++”表示不计其数

6、青风藤果实萃取物对三种致痘菌的时间动力学实验

(1)青风藤果实萃取物对表皮葡萄球菌的时间动力学实验

取4个2mL无菌管，编号为0、1、2、3号，0、1、2、3号无菌管中先加0.5mLLB液体培养基，再加1mL浓度为1×10⁷cfu/mL的表皮葡萄球菌菌悬液，再分别加入不同体积的100mg/mL的青风藤果实萃取物溶液，使其终浓度为1/4MIC、1/2MIC、

MIC，0号作为空白对照组只加0.5mL LB液体培养基和菌，不加药，将无菌管放置

37℃下恒温培养，分别在0，2，4，8，12h取0.1mL涂布于LB平板，将LB平板置于37℃下培养24h后观察菌落生长状态。

(2)青风藤果实萃取物对金黄色葡萄球菌的时间动力学实验

与(1)不同的是，表皮葡萄球菌替换为金黄色葡萄球菌。

(3)青风藤果实萃取物对痤疮丙酸杆菌的时间动力学实验

与(1)不同的是，表皮葡萄球菌替换为痤疮丙酸杆菌，LB液体培养基替换为厌氧培养基。并将无菌管里加0.1mL的植物油用于液封以隔绝氧气，将无菌管放置37℃

下恒温培养，分别在0、4、8、16、32、48h取0.1mL涂布于固体厌氧平板，将固体厌氧平板置于厌氧袋，再加入厌氧产气袋和指示剂，置于37℃恒温培养箱种培养48h

后观察菌落生长状态。

(4)结果分析

图5是根据本申请实施例提供的青风藤果实萃取物对微生物的时间动力学曲线，其中，图5a是青风藤果实萃取物对表皮葡萄球菌的时间动力学曲线，图5b是青风藤果实萃取物对金黄色葡萄球菌的时间动力学曲线，图5c是青风藤果实萃取物对痤疮丙酸杆菌的时间动力学曲线。

由图5a可以看出，在MIC浓度下和1/2MIC浓度下，0h时，有少量菌生长，菌量在0～2h内出现骤降，在2h时，菌量降为零；在1/4MIC浓度下，有较多菌落生长，但菌量在0～4h内出现骤降，在4h时培养基上只有个别菌落生长；在空白对照组中，因组分中含有培养基，表皮葡萄球菌呈现稳定增长的趋势。三种不同条件下的抑菌动力学曲线，可以明显看出，加了青风藤果实萃取物溶液后有效抑制了表皮葡萄球菌的生长，随着青风藤果实萃取物溶液浓度的降低，抑菌能力逐渐减弱；且青风藤果实萃取物溶液对于表皮葡萄球菌比较敏感，抑菌效果更加明显。

由图5b可以看出，在高浓度2MIC浓度下，0～12h内培养基上均无菌落生长，说明2MIC浓度可有效抑制金黄色葡萄球菌的生长；在MIC下，0h时有少量菌落生长，随着时间的延长，在4h菌落全部死亡；在1/2MIC下，0h时有较多菌生长，多于MIC在0h时的菌量但小于空白组，随着时间的延长，菌量缓慢降低，在12h时菌落全部死完，菌量为零。空白组中，因组分中含有培养基，金黄色葡萄球菌呈现稳定增长的趋势。三种不同条件下的抑菌动力学曲线，可以明显看出，加了青风藤果实萃取物溶液后有效抑制了金黄色葡萄球菌的生长，随着青风藤果实萃取物溶液浓度的降低，抑菌能力逐渐减弱。

由图5c可以看出，在MIC浓度下，0h时，有少量菌生长，菌量在0～2h内出现骤降，在2h时，菌量降为零；在1/2MIC浓度下，0h时，有较多菌生长，菌量在0～4h内出现骤降，在4h时，菌量降为零；在1/4MIC浓度下，0h时，有较多菌生长，随着时间的延长，菌量下降的速度由快到缓，在48h时仍有菌落生长，说明痤疮丙酸杆菌对于1/4MIC浓度青风藤果实萃取物溶液不敏感，其抑菌效果较弱。空白组中，因组分中含有培养基，痤疮丙酸杆菌呈现稳定增长的趋势。三种不同条件下的抑菌动力学曲线，可以明显看出，加了青风藤果实萃取物溶液后有效抑制了痤疮丙酸杆菌的生长，随着青风藤果实萃取物溶液浓度的降低，抑菌能力逐渐减弱。

7、青风藤果实萃取物作用下三种致痘菌的生长曲线实验

(1)不同浓度的青风藤果实萃取物溶液作用下表皮葡萄球菌生长曲线实验

取五个50mL的灭菌过的锥形瓶，分别编号为0、1、2、3、4号，1、2、3、4号瓶加48mL LB液体培养基，1mL 1×10⁷cfu/mL表皮葡萄球菌菌悬液，再分别加入1mL浓度为200、100、50、25mg/mL的青风藤果实萃取物溶液，使其青风藤果实萃取物溶液终浓度分别为4、2、1、0.5mg/mL，混合均匀后放入150rpm，37℃的恒温摇床中，在无菌环境中，取3mL于比色皿，以水调零，在600nm处测吸光度，0为空白对照组只加菌不加药，每隔2h测一次吸光值，连续测至12h，及次日24h。

(2)不同浓度的青风藤青风藤果实萃取物溶液作用下金黄色葡萄球菌生长曲线实验

与(1)不同的是，表皮葡萄球菌替换为金黄色葡萄球菌。

(3)不同浓度的青风藤青风藤果实萃取物溶液作用下痤疮丙酸杆菌生长曲线实验

与(1)不同的是，表皮葡萄球菌替换为痤疮丙酸杆菌，LB液体培养基替换为厌氧培养基。

(4)结果分析

图6是根据本申请实施例提供的青风藤果实萃取物作用下的微生物生长曲线图，图6a是不同浓度的青风藤果实萃取物作用下的表皮葡萄球菌生长曲线图，图6b是不同浓度的青风藤果实萃取物溶液作用下的金黄色葡萄球菌生长曲线图，图6c是不同浓度的青风藤果实萃取物溶液作用下的痤疮丙酸杆菌生长曲线图。

由图6a可知，当青风藤果实萃取物溶液浓度分别为4、2、1、0.5mg/mL，在12h对于表皮葡萄球菌的杀菌率分别为100％，99.31％，99.65％，89.15％。说明在4、2、1、0.5mg/mL青风藤果实萃取物溶液作用下，杀菌率普遍较高，表皮葡萄球菌对青风藤果实萃取物溶液较为敏感。在0～24h期间，当青风藤果实萃取物添加量为4、2mg/mL时，表皮葡萄球菌几乎不增长，当青风藤果实萃取物溶液添加量为1、0.5mg/mL时，表皮葡萄球菌先增长较缓，12h后快速增长，两组间呈梯度关系。空白对照组中，表皮葡萄球菌的生长曲线呈S型，在4～12h时进入对数增长期。与表皮葡萄球菌正常生长相比，青风藤果实萃取物溶液作用下的表皮葡萄球菌的生长缓慢，说明青风藤果实萃取物对于表皮葡萄球菌有较好的抑菌作用。

由图6b可知，当青风藤果实萃取物溶液浓度为4、2、1、0.5mg/mL时，在12h对于金黄色葡萄球菌的杀菌率分别为99.63％，87.30％，15.64％，13.16％。说明在2、4mg/mL青风藤果实萃取物溶液作用下，杀菌率较高，4mg/mL浓度下，几乎无菌生长。在低浓度1、0.5mg/mL青风藤果实萃取物溶液作用下，杀菌率较低。当青风藤果实萃取物溶液浓度为4mg/mL时，生长曲线极为稳定，几乎不增长，说明4mg/mL青风藤果实萃取物浓度杀菌率极强；当青风藤果实萃取物溶液浓度为2mg/mL时，在0～12h较为稳定，12h后增长速度急剧上升；当青风藤果实萃取物溶液浓度为1、0.5mg/mL时，生长曲线与空白组接近，在4～12h进入对数生长期，12h后仍有增长趋势。说明相对于表皮葡萄球菌，金黄色葡萄球菌的耐药性较强，低浓度青风藤果实萃取物溶液抑菌效果不明显。空白对照组中，金黄色葡萄球菌的生长曲线呈S型，与金黄色葡萄球菌正常生长相比，稍高浓度的青风藤果实萃取物溶液作用下的金黄色葡萄球菌的生长缓慢，抑制了金黄色葡萄球菌进入对数增长期，说明青风藤果实萃取物溶液对于表皮葡萄球菌有抑制作用。

由图6c可知，当青风藤果实萃取物溶液浓度为4、2、1、0.5mg/mL时，在48h对痤疮丙酸杆菌的杀菌率分别为93.82％，60.10％，55.84％，45.90％。当青风藤果实萃取物溶液浓度为4mg/mL时，生长曲线有波动，但整体较稳定，在48h时只有少量菌落增长；在青风藤果实萃取物溶液浓度为2、1、0.5mg/mL三组间，其生长曲线呈现梯度增长，在12～36h间出现缓慢增长，36～48h时趋于平稳，变化趋势与空白对照组大致相同。在空白对照组中，8～36h进入对数生长期，36h后进入迟缓期。与痤疮丙酸杆菌正常生长相比，青风藤果实萃取物溶液作用下的痤疮丙酸杆菌的生长更为缓慢，明显抑制了痤疮丙酸杆菌进入对数生长期，且在对数生长期的活性较低，说明青风藤果实萃取物溶液对于痤疮丙酸杆菌有较好的抑制作用。

综上，青风藤果实萃取物对表皮葡萄球菌、痤疮丙酸杆菌和金黄色葡萄球菌均具有抑菌性。随着青风藤果实萃取物溶液浓度的升高，抑菌能力逐渐增强。

青风藤果实浓缩液的抑菌效果：

采用实施例2的青风藤果实浓缩液对表皮葡萄球菌、痤疮丙酸杆菌和金黄色葡萄球菌进行抑菌试验。抑菌试验和青风藤果实萃取物的抑菌试验过程相同。

通过试验，发现青风藤果实浓缩液对表皮葡萄球菌，金黄色葡萄球菌和痤疮丙酸杆菌的抑菌圈直径分别为17.69(±0.46)，17.04(±0.20)和23.70(±0.48)，青风藤果实浓缩液对于三种致痘菌都展现出较明显的抑菌活性，青风藤果浆中存在活性成分可有效抑菌。但是实施例1的青风藤果实萃取物的整体抑菌效果比实施例2的抑菌效果更好。

面膜稳定性测试：

(1)耐寒性实验：称取实施例3～5面膜中的液体作为面膜液各5mL，于-20℃下的冰箱中储存24h后取出，置于25℃的室温下放置20min，观察产品是否有分层或浮油现象发生，其色泽和状态是否发生变化。若面膜液保持透明、无沉淀、无浮油、无颜色气味发生改变记录为稳定，否则记录为不稳定。

(2)耐热性实验：称取实施例3～5面膜液各5mL，于45℃下的恒温电热水浴锅中水浴8h左右，观察是否有油水分离现象，色泽是否发生变化。若面膜液保持透明、无分层、无颜色气味发生改变记录为稳定，否则记录为不稳定。

(3)离心稳定性实验：称取实施例3～5面膜液各5mL，于25℃室温下，采用6000r/min转速，离心20min，观察是否出现结块或颗粒状成分析出的乳析现象。若面膜液保持透明、无结块、无颜色气味发生改变记录为稳定，否则记录为不稳定。

(4)测试结果

表5性能表征测试

由表5可知，面膜的耐寒性、耐热性、离心稳定性均稳定，其综合稳定性较佳。

面膜抑菌率测试：

1、病毒样本：

病毒样本和菌液的制备同前文所述，在此不再赘述

2、对照样

甲硝唑凝胶，规格10克/支/盒，湖北康正药业有限公司。

3、测试过程

以无菌操作，将经过高温灭菌的各相应培养基倒入直径9cm的无菌培养皿中，使每个培养皿有20mL的培养基，冷却后备用。

在培养基表面加入0.1mL相应的菌悬液，用涂布棒将培养基表面涂布均匀，用直径为8mm的牛津杯挖孔，用镊子将孔中的琼脂取出。用移液枪移取100μL的实施例3～5的面膜液至挖好的孔中，同时用0.1ml的无菌水做阴性对照，用0.1ml的甲硝唑凝胶做阳性对照。在平皿背面相应的孔后做好标记，勿使其外溢。

表皮葡萄球菌和金黄色葡萄球菌放置37℃恒温箱内培养24h，痤疮丙酸杆菌放置厌氧培养盒中，再放到37℃恒温箱内培养48h。

最后用游标尺测量抑菌圈直径(精确到0.01mm)，实验重复三次，取平均值，记录实验结果。

4、测试结果

抑菌试验结果如表6所示。

表6面膜液对痤疮丙酸杆菌、大肠杆菌、金黄色葡萄球菌抑菌率的测定结果

实施例3～5面膜液的抑菌试验表明：3种面膜液对三种痤疮的主要致病菌的抑菌圈直径均大于15mm，抑菌效果显著。

图7是抑菌试验图，其中图7a是实施例5与甲硝唑对金黄色葡萄球菌抑菌效果图，左为实施例3，右为甲硝唑。图7b是实施例5与甲硝唑对表皮葡萄球菌抑菌效果图，左为实施例5，右为甲硝唑。图7c是实施例5与甲硝唑对痤疮丙酸杆菌菌抑菌效果图，左为实施例5，右为甲硝唑。

结合图7和表6，与市面上的抑菌产品甲硝唑凝胶相比，实施例5面膜液能达到相同的杀菌效果。面膜液对表皮葡萄球菌最为敏感，抑菌效果最好，其次为金黄色葡萄球菌，痤疮丙酸杆菌。

感官理化检测

将本发明实施例3～5的面膜液按照《化妆品安全技术规范》(2015年版)进行检测，结果见下表7：

表7感官、理化、卫生指标

通过检测面膜液的感官、理化和卫生指标，实施例3～5的面膜液均符合QB/T2872-2017标准，菌落数未超标，重金属未超标，因此通过防腐挑战。

刺激性实验

将本申请实施例3～5的面膜液按照《化妆品安全技术规范》(2015年版)“刺激性实验方法”进行刺激性的测定，具体操作和结果如下：

(1)皮肤刺激性试验。试验前24h，选用8只健康大鼠，每只大鼠背部脊柱两侧各剪3.0cm×3.0cm面积毛一块。取膜液0.5mL涂于一侧剪毛区域上，另一侧作为对照，每天涂皮一次，并用温水清除残留物，连续涂皮14d。试验结果观察：涂皮期间，每天清洗后1h观察被涂皮肤反应情况，按《化妆品安全技术规范》(2015版)进行评分。

(2)急性眼刺激性试验。选用8只健康大鼠，轻轻拉开大鼠一侧眼睛的下眼睑，分别取实施例3～5的面膜液0.1mL分别滴入不同大鼠的眼结膜囊中，使上下眼睑被动闭合1s，滴入后24h不冲洗眼睛；另一侧眼睛不处理作为自身对照。试验结果观察：滴眼后，1、24、48和72h观察大鼠眼睛局部反应和第4、7、14和21d的恢复情况，按照眼损害评分标准和眼刺激性反应分级判定刺激强度。

结果：实施例3，实施例4和实施例5的面膜液中8只大鼠均未出现红斑、水肿，证明本发明产品没有皮肤刺激性。

实施例3，实施例4和实施例5的面膜液中8只大鼠眼球均未出现红肿，证明本发明产品不存在眼刺激性。

基于痤疮的发病机制，采用体外抑菌，安全性评价，理化检测三者相结合的方式，能够互相印证，全面、明确而直接地对化妆品的祛痘功效予以评价，从而更好地指导配方开发，提升产品性能和品质。

综上所述，本申请实施例的面膜及其制备方法操作简单、安全，有利于推广；面膜产品不仅具有色泽良好、质地均匀的特点，并且体外抑菌试验证明，对痤疮致病菌具有良好的抑制效果。

此外，本案发明人还参照实施例3～5的方式，以本说明书中列出的其它原料和条件等进行了试验，亦可达成相应的效果，获得对痤疮致病菌具有较好抑制效果的青风藤果实萃取物抑菌祛痘面膜。

肌肤调节试验

采用实施例3的面膜液，对十个不同肤质的人进行试验，检测其肌肤敷面膜前后的水分、油份及弹性的变化。如表8所示：

表8皮肤检测试验表

通过表8中数据可以看出，敷不同时长的面膜后，虽个人肤质存在差异，但肌肤水分均呈现增加趋势，油份呈现下降趋势，肌肤弹性增加，肤质变好，说明此款青风藤果实萃取物面膜有较好的补水控油效果；在5、10、15、20分钟敷面膜时长中，相对于5-10分钟，15-20分钟数据较为稳定，补水与控油效果更好，因此此款面膜适合敷用15-20分钟。

以上所述，仅为本申请的具体实施方式，但本申请的保护范围并不局限于此，任何熟悉本技术领域的技术人员在本申请揭露的技术范围内，可轻易想到各种等效的修改或替换，这些修改或替换都应涵盖在本申请的保护范围之内。因此，本申请的保护范围应以权利要求的保护范围为准。

Claims

1.一种面膜，其特征在于，包括以下配比的组分：10～20重量份青风藤果实萃取物以及80～90重量份的助剂，所述助剂包括溶剂、保湿剂、增稠剂和pH调节剂，所述青风藤果实萃取物为乙酸乙酯提取物；

其中，所述青风藤果实萃取物包括对羟基苯乙醇、2-羟基苯乙腈和5-氨基苯并咪唑酮，且所述青风藤果实萃取物的浓度大于或等于35mg/mL。

2.根据权利要求1所述的面膜，其特征在于，所述青风藤果实萃取物为12～15重量份，所述助剂为85～88重量份。

3.根据权利要求1所述的面膜，其特征在于，所述青风藤果实萃取物为15重量份，所述助剂为85重量份。

4.一种如权利要求1所述的面膜的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

提供新鲜的青风藤果实，加入有机溶剂提取，得到青风藤果实萃取物；所述有机溶剂为乙酸乙酯；

将所述青风藤果实萃取物和助剂进行复配，得到面膜，其中，各组分的用量如下：所述青风藤果实萃取物为10～20重量份，所述助剂为80～90重量份，助剂包括溶剂、保湿剂、增稠剂和pH调节剂。

5.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于，所述加入有机溶剂提取的步骤，包括：采用乙酸乙酯逐级萃取所述青风藤果实。