CN113195495A - 含有马拉色菌属衍生的化合物和/或其化学类似物的光防护性组合物 - Google Patents

含有马拉色菌属衍生的化合物和/或其化学类似物的光防护性组合物 Download PDF

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Abstract

用于调节皮肤色素沉着以及治疗或预防受试者的UV诱导的皮肤损伤、红斑、皮肤老化、晒伤和色素沉着过度的化合物、组合物和方法。马拉色菌属(Malassezia)衍生的化合物和/或其化学类似物，包含此类化合物的组合物，和通过施用所述化合物和组合物的治疗方法，包括诱导黑素细胞凋亡，和调节芳烃受体(AhR)活性、黑素生成和黑素浓度的方法。

Description

含有马拉色菌属衍生的化合物和/或其化学类似物的光防护 性组合物
相关申请的交叉引用
本发明要求2018年10月8日提交的美国临时申请号62/742,657的权益。前述申请的全部内容以引用的方式并入。另外，2016年3月10日提交的美国临时申请号62/306,468、2018年4月12日提交的美国临时申请号62/656,769、2018年5月7日提交的美国临时申请号62/668,007、2018年6月15日提交的美国临时申请号62/685,800、2018年6月19日提交的美国临时申请号62/686,912、2018年8月24日提交的美国临时申请号62/722,412、2017年3月10日提交的美国专利申请系列号15/455,932、现在的美国专利号10,131,631、2019年4月12日提交的美国专利申请系列号16/382,891、2019年5月7日提交的美国专利申请系列号16/405,127和2019年6月14日提交的美国专利申请系列号16/441,522的全部内容以引用的方式并入本文中。
发明领域
本发明涉及具有除其他有益性能以外的光保护特性的化合物和组合物。本发明的化合物和组合物一般涉及马拉色菌属衍生的化合物和/或其化学类似物。本发明的化合物和组合物亦涵盖使用本发明的化合物和组合物的方法。
背景技术
全世界的个体都使用皮肤增白剂来实现许多美容目标，包含产生抗老化效果、矫正日光损伤和满足某些文化审美标准。许多市售皮肤增白产品虽然在不同程度上有效，但含有有害成分，其中有一些已与癌症有关。因此，对展现安全和/或功效水平比当前市场上的药剂高的新颖皮肤增白剂和配制物存在需求。
马拉色菌属是通常发现于人皮肤的正常菌群中的亲脂性酵母属。马拉色菌属造成许多皮肤病，包含花斑癣(花斑糠疹)、脂溢性皮炎和异位性皮炎。
糠秕马拉色氏霉菌(M.furfur)的天然栖息场所是上表皮。然而，暴露于紫外光摧毁了其天然栖息场所中的生物体。因此，UV过滤剂对于生物体的存活可能是必要的。已经识别出生物体所产生的两种这类UV过滤吲哚：糠疹曲素(pityriacitrin)和糠疹内酯(pityrialactone)。最初Mayser等人(2002)描述的糠疹曲素是由糠秕马拉色氏霉菌合成。它是在UVA、UVB和UVC光谱中显示广泛吸收的稳定的黄色亲脂性化合物。已经从副球菌属(Paracoccus)分离出类似化合物作为UV防护剂。(Zhang等人,2018，US2006/0067897)。
Gambichler等人(2007)使用体外和体内测试方法研究了糠疹曲素在人体内的UV防护作用。在290-400nm波长范围内，对糠疹曲素面霜和媒剂进行分光光度测定。评定不同面霜配制物的UV透射率和防晒系数(sun protection factor；“SPF”)。在照射健康受试者的受面霜防护和不受防护的皮肤之后，作者使用比色法评估红斑和色素沉着。UVB以及UVA透射率随着糠疹曲素浓度增加而减小。糠疹曲素浓度增加1.25％、2.5％和5％与SPF分别稍微增加1.4、1.5和1.7相关。体内测试证实了体外所测定的糠疹曲素5％面霜的SPF的有效性。总体而言，糠疹曲素的UV防护作用非常弱，表明在日晒之后，在白色花斑糠疹病灶的色素沉着不足的发展中，糠疹曲素可能只是一种较弱的辅因子。
另外针对人类皮肤微生物菌群进行糠疹曲素的UV过滤效应的研究。(Machowinski等人,2006)。作者测定了糠疹曲素对白色念珠菌(Candida albicans)和葡萄球菌(staphylococci)具有UV防护作用，在所测试范围内没有毒性。糠疹内酯的UV防护特性也已在酵母模型中得到证实。(Mayser等人,2003)。糠疹内酯似乎对花斑癣在伍德氏灯检(Wood's Light examination)下出现黄色荧光负责。
花斑癣是由局部改变色素沉着水平的马拉色菌属过度生长引起的非传染性皮肤病。马拉色菌属酵母具有用于合成黑素和色氨酸衍生的吲哚色素的两种代谢路径。马拉色因(Malassezin)和靛玉红(Indirubin)是马拉色菌属的色氨酸代谢物，其可促成马拉色菌属过度生长的脱色素特征。
本文公开的发明利用由马拉色菌属酵母产生或衍生的化合物(包含马拉色因、靛玉红和其化学类似物)作为安全且有效皮肤增白和皮肤暗化组合物的基础。本文还公开了包括马拉色因、靛玉红和其化学类似物的光防护性组合物。
发明内容
本发明的一个实施方案是一种用于使皮肤增白的化合物。所述化合物具有下式的结构：
Figure BDA0003105902200000031
或其化学类似物、结晶形式、水合物或药学上或化妆品上可接受的盐。
本发明的另一实施方案是一种用于诱导黑素细胞凋亡的化合物。所述化合物具有下式的结构：
Figure BDA0003105902200000032
或其化学类似物、结晶形式、水合物或药学上或化妆品上可接受的盐。
本发明的一额外实施方案是一种用于调节芳烃受体(AhR)活性的化合物。所述化合物具有下式的结构：
Figure BDA0003105902200000033
或其化学类似物、结晶形式、水合物或药学上或化妆品上可接受的盐。
本发明的另一实施方案是一种用于调节黑素生成的化合物。所述化合物具有下式的结构：
Figure BDA0003105902200000041
或其化学类似物、结晶形式、水合物或药学上或化妆品上可接受的盐。
本发明的另一实施方案是一种用于调节黑素浓度的化合物。所述化合物具有下式的结构：
Figure BDA0003105902200000042
或其化学类似物、结晶形式、水合物或药学上或化妆品上可接受的盐。
本发明的一额外实施方案是一种包含化合物的组合物。所述化合物具有下式的结构：
Figure BDA0003105902200000043
或其化学类似物、结晶形式、水合物或药学上或化妆品上可接受的盐。
本发明的另一实施方案是一种用于使受试者的皮肤增白的方法。所述方法包括使受试者与化合物接触，所述化合物具有下式的结构：
Figure BDA0003105902200000051
或其化学类似物、结晶形式、水合物或药学上或化妆品上可接受的盐。
本发明的另一实施方案是一种用于诱导受试者中的黑素细胞凋亡的方法。所述方法包括使受试者与化合物接触，所述化合物具有下式的结构：
Figure BDA0003105902200000052
或其化学类似物、结晶形式、水合物或药学上或化妆品上可接受的盐。
本发明的一额外实施方案是一种用于调节受试者中的芳烃受体(AhR)活性的方法。所述方法包括使受试者与化合物接触，所述化合物具有下式的结构：
Figure BDA0003105902200000053
或其化学类似物、结晶形式、水合物或药学上或化妆品上可接受的盐。
本发明的另一实施方案是一种用于调节受试者中的黑素生成的方法。所述方法包括使受试者与化合物接触，所述化合物具有下式的结构：
Figure BDA0003105902200000061
或其化学类似物、结晶形式、水合物或药学上或化妆品上可接受的盐。
本发明的另一实施方案是一种用于调节受试者中的黑素浓度的方法。所述方法包括使受试者与化合物接触，所述化合物具有下式的结构：
Figure BDA0003105902200000062
或其化学类似物、结晶形式、水合物或药学上或化妆品上可接受的盐。
本发明的一额外实施方案是一种组合物。所述组合物包含表1或图3中所列的一种或多种化合物，或其化学类似物、结晶形式、水合物或药学上或化妆品上可接受的盐。
本发明的另一实施方案是一种用于使受试者的皮肤增白的方法。所述方法包括使受试者与表1或图3中列出的一种或多种化合物，或其化学类似物、结晶形式、水合物或药学上或化妆品上可接受的盐接触。
本发明的另一实施方案是一种用于诱导受试者中的黑素细胞凋亡的方法。所述方法包括使受试者与表1或图3中列出的一种或多种化合物，或其化学类似物、结晶形式、水合物或药学上或化妆品上可接受的盐接触。
本发明的一额外实施方案是一种用于调节受试者中的芳烃受体(AhR)活性的方法。所述方法包括使受试者与表1或图3中列出的一种或多种化合物，或其化学类似物、结晶形式、水合物或药学上或化妆品上可接受的盐接触。
本发明的另一实施方案是一种用于调节受试者中的黑素生成的方法。所述方法包括使受试者与表1或图3中列出的一种或多种化合物，或其化学类似物、结晶形式、水合物或药学上或化妆品上可接受的盐接触。
本发明的另一实施方案是一种用于调节受试者中的黑素浓度的方法。所述方法包括使受试者与表1或图3中列出的一种或多种化合物，或其化学类似物、结晶形式、水合物或药学上或化妆品上可接受的盐接触。
本发明的一额外实施方案是一种组合物。所述组合物包括表1或图3中列出的一种或多种化合物，或其化学类似物、结晶形式、水合物或药学上或化妆品上可接受的盐。
本发明的另一实施方案是一种用于使皮肤增白的组合物。所述组合物包含表1或图3中列出的一种或多种化合物，或其化学类似物、结晶形式、水合物或药学上或化妆品上可接受的盐。
本发明的另一实施方案是一种用于诱导黑素细胞凋亡的组合物。所述组合物包含表1或图3中列出的一种或多种化合物，或其化学类似物、结晶形式、水合物或药学上或化妆品上可接受的盐。
本发明的一额外实施方案是一种用于调节芳烃受体(AhR)活性的组合物。所述组合物包含表1或图3中列出的一种或多种化合物，或其化学类似物、结晶形式、水合物或药学上或化妆品上可接受的盐。
本发明的另一实施方案是一种用于调节黑素生成的组合物。所述组合物包含表1或图3中列出的一种或多种化合物，或其化学类似物、结晶形式、水合物或药学上或化妆品上可接受的盐。
本发明的另一实施方案是一种用于调节黑素浓度的组合物。所述组合物包含表1或图3中列出的一种或多种化合物，或其化学类似物、结晶形式、水合物或药学上或化妆品上可接受的盐。
本发明的一额外实施方案是一种用于使受试者的皮肤增白的方法。所述方法包括使受试者与组合物接触，所述组合物包含表1或图3中列出的一种或多种化合物，或其化学类似物、结晶形式、水合物或药学上或化妆品上可接受的盐。
本发明的另一实施方案是一种用于诱导受试者中的黑素细胞凋亡的方法。所述方法包括使受试者与组合物接触，所述组合物包含表1或图3中列出的一种或多种化合物，或其化学类似物、结晶形式、水合物或药学上或化妆品上可接受的盐。
本发明的另一实施方案是一种用于调节受试者中的芳烃受体(AhR)活性的方法。所述方法包括使受试者与组合物接触，所述组合物包含表1或图3中列出的一种或多种化合物，或其化学类似物、结晶形式、水合物或药学上或化妆品上可接受的盐。
本发明的一额外实施方案是一种用于调节受试者中的黑素生成的方法。所述方法包括使受试者与组合物接触，所述组合物包含表1或图3中列出的一种或多种化合物，或其化学类似物、结晶形式、水合物或药学上或化妆品上可接受的盐。
本发明的另一实施方案是一种用于调节受试者中的黑素浓度的方法。所述方法包括使受试者与组合物接触，所述组合物包含表1或图3中列出的一种或多种化合物，或其化学类似物、结晶形式、水合物或药学上或化妆品上可接受的盐。
本发明的另一实施方案是一种组合物。所述组合物包含马拉色菌属酵母和化妆品上或药学上可接受的媒剂、稀释剂或载剂。
本发明的一额外实施方案是一种组合物。所述组合物包含具有下式结构的化合物：
Figure BDA0003105902200000081
其中：
X选自由NR14和O组成的组；Y是共价键、CR5R6、O或NR15；R1、R2、R3、R4、R7、R8、R9、R10和R11独立地选自下组：氢、卤素、CN、羟基、R16或OR16；R13、R14和R15独立地是氢或R16；R5和R6独立地选自下组：氢、羟基、OR16、R16和C3-6环烷基，或R5和R6组合形成氧代(＝O)基团或C3-6环烷基；R12选自由氢、-CORa和R16组成的组；每个R16独立地是C1-9烷基、C2-9烯基或C2-9炔基；且Ra选自由氢、羟基和OR16组成的组；或其结晶形式、水合物或化妆品上或药学上可接受的盐，和化妆品上或药学上可接受的媒剂、稀释剂或载剂。
本发明的另一实施方案是一种组合物。所述组合物包含具有下式结构的化合物：
Figure BDA0003105902200000091
其中：
R1、R4、R5、R6、R9和R10独立地选自下组：氢、羟基、卤素、CN、R13、OR13、OCOR13和-CHO；R2和R3独立地选自下组：氢、羟基、卤素、CN、R13、OR13、OCOR13和-CHO，或R2和R3组合形成5元或6元杂环基；R7和R8独立地选自下组：氢、羟基、卤素、CN、R13、OR13、OCOR13和-CHO，或R7和R8组合形成5元或6元杂环基；R11和R12独立地是氢或R13；且每个R13独立地是C1-9烷基、C2-9烯基或C2-9炔基；或其结晶形式、水合物或化妆品上或药学上可接受的盐，和化妆品上或药学上可接受的媒剂、稀释剂或载剂。
本发明的另一实施方案是一种组合物。所述组合物包含表1或图3中列出的化合物，或其化学类似物、结晶形式、水合物或化妆品上或药学上可接受的盐，和化妆品上或药学上可接受的媒剂、稀释剂或载剂。
本发明的一额外实施方案是一种治疗或预防受试者中的由UV诱导的皮肤损伤的方法。所述方法包括使受试者与本文公开的任一种组合物接触。
本发明的另一实施方案是一种治疗或预防受试者中的由UV诱导的红斑的方法。所述方法包括使受试者与本文公开的任一种组合物接触。
本发明的另一实施方案是一种治疗或预防受试者中的由UV诱导的皮肤老化的方法。所述方法包括使受试者与本文公开的任一种组合物接触。
本发明的一额外实施方案是一种治疗或预防受试者中的晒伤的方法。所述方法包括使受试者与本文公开的任一种组合物接触。
本发明的另一实施方案是一种治疗或预防受试者中的由UV诱导的色素过度沉着的方法。所述方法包括使受试者与本文公开的任一种组合物接触。
本发明的另一实施方案是一种用于使受试者的皮肤增白的方法。所述方法包括使受试者与本文公开的任一种组合物接触。
本发明的一额外实施方案是一种用于诱导受试者中的黑素细胞凋亡的方法。所述方法包括使受试者与本文公开的任一种组合物接触。
本发明的另一实施方案是一种用于调节受试者中的芳烃受体(AhR)活性的方法。所述方法包括使受试者与本文公开的任一种组合物接触。
本发明的另一实施方案是一种用于调节受试者中的黑素生成的方法。所述方法包括使受试者与本文公开的任一种组合物接触。
本发明的一额外实施方案是一种用于调节受试者中的黑素浓度的方法。所述方法包括使受试者与本文公开的任一种组合物接触。
附图简述
图1-2是显示由不同浓度的所示测试物处理的MelanoDermTM底物的独立实验确定的平均组织生存力和黑素浓度数据的表。
图3显示由马拉色菌属产生的化合物。
图4-5是显示由不同浓度的所示测试物/测试组合物处理的MelanoDermTM底物的独立实验确定的平均组织生存力和黑素浓度数据的表。
图6A-6B显示AB17590(图6A)以及AB17653、AB17654、AB17655、AB17656、AB17657和AB17658(图6B)的合成流程。
图7是显示皮肤类型IV患者的皮肤处理模板的示意图。数值指示给定区域的UV剂量(以mJ/cm2为单位)。
图8是显示皮肤类型I-VI的Dualight量表的表。
图9是显示在第7天照射之后，黑素和红斑在第8天的Mexameter MX 16测量值的表。
图10是显示在第14天照射之后，黑素和红斑在第15天的Mexameter MX 16测量值的表。
图11是显示与不同程度的红斑相关的红斑数值量表的表。
图12是显示根据图7中所示的皮肤处理模板，用各种水平的UV照射后24小时的受试者皮肤的照片。最小红斑剂量(minimal erythema dose；“MED”)在照射后24小时为120mJUVB。
图13是显示在第7天受试者皮肤上的测试部位的照片。
图14是显示在第8天(用120mJ UVB照射后的24小时)时的受试者皮肤上的测试部位的照片。
图15是显示在额外一周的马拉色因疗法之后，在第14天受试者皮肤上的测试部位的照片。处理区域给予120mJ UVB。
图16是显示在第15天(用120mJ UVB照射后的24小时)时的受试者皮肤上的测试部位的照片。注意第7天和第9天在媒剂部位处的红斑。还注意在第14天、第10天和第8天时在经1％马拉色因处理的部位处的最少到轻度红斑，以及在第1天和第3天的微量红斑。
发明详述
本发明的一个实施方案是一种用于使皮肤增白的化合物。所述化合物具有下式的结构：
Figure BDA0003105902200000111
或其化学类似物、结晶形式、水合物或药学上或化妆品上可接受的盐。
本发明的另一实施方案是一种用于诱导黑素细胞凋亡的化合物。所述化合物具有下式的结构：
Figure BDA0003105902200000112
或其化学类似物、结晶形式、水合物或药学上或化妆品上可接受的盐。
本发明的一额外实施方案是一种用于调节芳烃受体(AhR)活性的化合物。所述化合物具有下式的结构：
Figure BDA0003105902200000121
或其化学类似物、结晶形式、水合物或药学上或化妆品上可接受的盐。
本发明的另一实施方案是一种用于调节黑素生成的化合物。所述化合物具有下式的结构：
Figure BDA0003105902200000122
或其化学类似物、结晶形式、水合物或药学上或化妆品上可接受的盐。
本发明的另一实施方案是一种用于调节黑素浓度的化合物。所述化合物具有下式的结构：
Figure BDA0003105902200000123
或其化学类似物、结晶形式、水合物或药学上或化妆品上可接受的盐。
本发明的一额外实施方案是一种包含化合物的组合物。所述化合物具有下式的结构：
Figure BDA0003105902200000131
或其化学类似物、结晶形式、水合物或药学上或化妆品上可接受的盐。
本发明的另一实施方案是一种用于使受试者的皮肤增白的方法。所述方法包括使受试者与化合物接触，所述化合物具有下式的结构：
Figure BDA0003105902200000132
或其化学类似物、结晶形式、水合物或药学上或化妆品上可接受的盐。
本发明的另一实施方案是一种用于诱导受试者中的黑素细胞凋亡的方法。所述方法包括使受试者与化合物接触，所述化合物具有下式的结构：
Figure BDA0003105902200000133
或其化学类似物、结晶形式、水合物或药学上或化妆品上可接受的盐。
本发明的一额外实施方案是一种用于调节受试者中的芳烃受体(AhR)活性的方法。所述方法包括使受试者与化合物接触，所述化合物具有下式的结构：
Figure BDA0003105902200000141
或其化学类似物、结晶形式、水合物或药学上或化妆品上可接受的盐。
本发明的另一实施方案是一种用于调节受试者中的黑素生成的方法。所述方法包括使受试者与化合物接触，所述化合物具有下式的结构：
Figure BDA0003105902200000142
或其化学类似物、结晶形式、水合物或药学上或化妆品上可接受的盐。
本发明的另一实施方案是一种用于调节受试者中的黑素浓度的方法。所述方法包括使受试者与化合物接触，所述化合物具有下式的结构：
Figure BDA0003105902200000143
或其化学类似物、结晶形式、水合物或药学上或化妆品上可接受的盐。
本发明的一额外实施方案是一种组合物。所述组合物包含表1或图3中所列出的一种或多种化合物，或其化学类似物、结晶形式、水合物或药学上或化妆品上可接受的盐。
在这个实施方案的一个方面中，所述组合物包含第一化合物，所述第一化合物具有下式的结构：
Figure BDA0003105902200000151
或其化学类似物、结晶形式、水合物或药学上或化妆品上可接受的盐；和第二化合物，所述第二化合物具有下式的结构：
Figure BDA0003105902200000152
或其化学类似物、结晶形式、水合物或药学上或化妆品上可接受的盐。
本发明的另一实施方案是一种用于使受试者的皮肤增白的方法。所述方法包括使受试者与表1或图3中所列出的一种或多种化合物，或其化学类似物、结晶形式、水合物或药学上或化妆品上可接受的盐接触。
在这个实施方案的一个方面中，使受试者与以下接触：第一化合物，所述第一化合物具有下式的结构：
Figure BDA0003105902200000153
或其化学类似物、结晶形式、水合物或药学上或化妆品上可接受的盐；和第二化合物，所述第二化合物具有下式的结构：
Figure BDA0003105902200000161
或其化学类似物、结晶形式、水合物或药学上或化妆品上可接受的盐。
本发明的另一实施方案是一种用于诱导受试者中的黑素细胞凋亡的方法。所述方法包括使受试者与表1或图3中所列出的一种或多种化合物，或其化学类似物、结晶形式、水合物或药学上或化妆品上可接受的盐接触。
在这个实施方案的一个方面中，使受试者与以下接触：第一化合物，所述第一化合物具有下式的结构：
Figure BDA0003105902200000162
或其化学类似物、结晶形式、水合物或药学上或化妆品上可接受的盐；和第二化合物，所述第二化合物具有下式的结构：
Figure BDA0003105902200000163
或其化学类似物、结晶形式、水合物或药学上或化妆品上可接受的盐。
本发明的一额外实施方案是一种用于调节受试者中的芳烃受体(AhR)活性的方法。所述方法包括使受试者与表1或图3中所列出的一种或多种化合物，或其化学类似物、结晶形式、水合物或药学上或化妆品上可接受的盐接触。
在这个实施方案的一个方面中，使受试者与以下接触：第一化合物，所述第一化合物具有下式的结构：
Figure BDA0003105902200000171
或其化学类似物、结晶形式、水合物或药学上或化妆品上可接受的盐；和第二化合物，所述第二化合物具有下式的结构：
Figure BDA0003105902200000172
或其化学类似物、结晶形式、水合物或药学上或化妆品上可接受的盐。
本发明的另一实施方案是一种用于调节受试者中的黑素生成的方法。所述方法包括使受试者与表1或图3中所列出的一种或多种化合物，或其化学类似物、结晶形式、水合物或药学上或化妆品上可接受的盐接触。
在这个实施方案的一个方面中，使受试者与以下接触：第一化合物，所述第一化合物具有下式的结构：
Figure BDA0003105902200000173
或其化学类似物、结晶形式、水合物或药学上或化妆品上可接受的盐；和第二化合物，所述第二化合物具有下式的结构：
Figure BDA0003105902200000181
或其化学类似物、结晶形式、水合物或药学上或化妆品上可接受的盐。
本发明的另一实施方案是一种用于调节受试者中的黑素浓度的方法。所述方法包括使受试者与表1或图3中所列出的一种或多种化合物，或其化学类似物、结晶形式、水合物或药学上或化妆品上可接受的盐接触。
在这个实施方案的一个方面中，使受试者与以下接触：第一化合物，所述第一化合物具有下式的结构：
Figure BDA0003105902200000182
或其化学类似物、结晶形式、水合物或药学上或化妆品上可接受的盐；和第二化合物，所述第二化合物具有下式的结构：
Figure BDA0003105902200000183
或其化学类似物、结晶形式、水合物或药学上或化妆品上可接受的盐。
本发明的一额外实施方案是一种组合物。所述组合物包含表1或图3中所列出的一种或多种化合物，或其化学类似物、结晶形式、水合物或药学上或化妆品上可接受的盐。
本发明的另一实施方案是一种用于使皮肤增白的组合物。所述组合物包含表1或图3中所列出的一种或多种化合物，或其化学类似物、结晶形式、水合物或药学上或化妆品上可接受的盐。
本发明的另一实施方案是一种用于诱导黑素细胞凋亡的组合物。所述组合物包含表1或图3中所列出的一种或多种化合物，或其化学类似物、结晶形式、水合物或药学上或化妆品上可接受的盐。
本发明的一额外实施方案是一种用于调节芳烃受体(AhR)活性的组合物。所述组合物包含表1或图3中所列出的一种或多种化合物，或其化学类似物、结晶形式、水合物或药学上或化妆品上可接受的盐。
本发明的另一实施方案是一种用于调节黑素生成的组合物。所述组合物包含表1或图3中所列出的一种或多种化合物，或其化学类似物、结晶形式、水合物或药学上或化妆品上可接受的盐。
本发明的另一实施方案是一种用于调节黑素浓度的组合物。所述组合物包含表1或图3中所列出的一种或多种化合物，或其化学类似物、结晶形式、水合物或药学上或化妆品上可接受的盐。
本发明的一额外实施方案是一种用于使受试者的皮肤增白的方法。所述方法包括使受试者与组合物接触，所述组合物包含表1或图3中所列出的一种或多种化合物，或其化学类似物、结晶形式、水合物或药学上或化妆品上可接受的盐。
本发明的另一实施方案是一种用于诱导受试者中的黑素细胞凋亡的方法。所述方法包括使受试者与组合物接触，所述组合物包含表1或图3中所列出的一种或多种化合物，或其化学类似物、结晶形式、水合物或药学上或化妆品上可接受的盐。
本发明的另一实施方案是一种用于调节受试者中的芳烃受体(AhR)活性的方法。所述方法包括使受试者与组合物接触，所述组合物包含表1或图3中所列出的一种或多种化合物，或其化学类似物、结晶形式、水合物或药学上或化妆品上可接受的盐。
本发明的一额外实施方案是一种用于调节受试者中的黑素生成的方法。所述方法包括使受试者与组合物接触，所述组合物包含表1或图3中所列出的一种或多种化合物，或其化学类似物、结晶形式、水合物或药学上或化妆品上可接受的盐。
本发明的另一实施方案是一种用于调节受试者中的黑素浓度的方法。所述方法包括使受试者与组合物接触，所述组合物包含表1或图3中所列出的一种或多种化合物，或其化学类似物、结晶形式、水合物或药学上或化妆品上可接受的盐。
在优选实施方案中，本发明的组合物包含表3中所列的化合物。
在其它优选实施方案中，本发明的组合物包含表4中所列的化合物。
在额外优选实施方案中，本发明的组合物包含表5中所列的化合物。
在另一优选实施方案中，本发明的组合物包含表6中所列的化合物。
在其它优选实施方案中，本发明的组合物包含表7中所列的化合物。
在额外优选实施方案中，本发明的方法包括使受试者与包含表3中列出的化合物的组合物接触。
在另一优选实施方案中，本发明的方法包括使受试者与包含表4中列出的化合物的组合物接触。
在其它优选实施方案中，本发明的方法包括使受试者与包含表5中列出的化合物的组合物接触。
在额外优选实施方案中，本发明的方法包括使受试者与包含表6中列出的化合物的组合物接触。
在另一优选实施方案中，本发明的方法包括使受试者与包含表7中列出的化合物的组合物接触。
本发明的另一实施方案是一种组合物。所述组合物包含马拉色菌属酵母和化妆品上或药学上可接受的媒剂、稀释剂或载剂。
本发明的一额外实施方案是一种组合物。所述组合物包含具有下式结构的化合物：
Figure BDA0003105902200000201
其中：
X选自由NR14和O组成的组；Y是共价键、CR5R6、O或NR15；R1、R2、R3、R4、R7、R8、R9、R10和R11独立地选自下组：氢、卤素、CN、羟基、R16或OR16；R13、R14和R15独立地是氢或R16；R5和R6独立地选自下组：氢、羟基、OR16、R16和C3-6环烷基，或R5和R6组合形成氧代(＝O)基团或C3-6环烷基；R12选自由氢、-CORa和R16组成的组；每个R16独立地是C1-9烷基、C2-9烯基或C2-9炔基；且Ra选自由氢、羟基和OR16组成的组；
或其结晶形式、水合物或化妆品上或药学上可接受的盐，
和化妆品上或药学上可接受的媒剂、稀释剂或载剂。
本发明的另一实施方案是一种组合物。所述组合物包含具有下式结构的化合物：
Figure BDA0003105902200000211
其中：
R1、R4、R5、R6、R9和R10独立地选自下组：氢、羟基、卤素、CN、R13、OR13、OCOR13和-CHO；R2和R3独立地选自下组：氢、羟基、卤素、CN、R13、OR13、OCOR13和-CHO，或R2和R3组合形成5元或6元杂环基；R7和R8独立地选自下组：氢、羟基、卤素、CN、R13、OR13、OCOR13和-CHO，或R7和R8组合形成5元或6元杂环基；R11和R12独立地是氢或R13；且每个R13独立地是C1-9烷基、C2-9烯基或C2-9炔基；
或其结晶形式、水合物或化妆品上或药学上可接受的盐，
和化妆品上或药学上可接受的媒剂、稀释剂或载剂。
本发明的另一实施方案是一种组合物。所述组合物包含表1或图3中列出的化合物，或其化学类似物、结晶形式、水合物或化妆品上或药学上可接受的盐，
和化妆品上或药学上可接受的媒剂、稀释剂或载剂。
在优选实施方案中，本发明的任一种组合物预防受试者中的由UV诱导的红斑。
在优选实施方案中，本发明的任一种组合物使受试者中的表皮黑素减少。
在优选实施方案中，本发明的任一种组合物在受试者中产生光防护性或UV防护作用。
在优选实施方案中，本发明的任一种组合物过滤、吸附或反射UV。
在优选实施方案中，本发明的任一种组合物预防色素沉着过度且/或促进色素沉着不足。
在优选实施方案中，本发明的任一种组合物是防晒剂、光防护剂和/或UV防护剂。
本发明的一额外实施方案是一种治疗或预防受试者中的由UV诱导的皮肤损伤的方法。所述方法包括使受试者与本文公开的任一种组合物接触。
本发明的另一实施方案是一种治疗或预防受试者中的由UV诱导的红斑的方法。所述方法包括使受试者与本文公开的任一种组合物接触。
本发明的另一实施方案是一种治疗或预防受试者中的由UV诱导的皮肤老化的方法。所述方法包括使受试者与本文公开的任一种组合物接触。
本发明的一额外实施方案是一种治疗或预防受试者中的晒伤的方法。所述方法包括使受试者与本文公开的任一种组合物接触。
本发明的另一实施方案是一种治疗或预防受试者中的由UV诱导的色素过度沉着的方法。所述方法包括使受试者与本文公开的任一种组合物接触。
本发明的另一实施方案是一种用于使受试者的皮肤增白的方法。所述方法包括使受试者与本文公开的任一种组合物接触。
本发明的一额外实施方案是一种用于诱导受试者中的黑素细胞凋亡的方法。所述方法包括使受试者与本文公开的任一种组合物接触。
本发明的另一实施方案是一种用于调节受试者中的芳烃受体(AhR)活性的方法。所述方法包括使受试者与本文公开的任一种组合物接触。
本发明的另一实施方案是一种用于调节受试者中的黑素生成的方法。所述方法包括使受试者与本文公开的任一种组合物接触。
本发明的一额外实施方案是一种用于调节受试者中的黑素浓度的方法。所述方法包括使受试者与本文公开的任一种组合物接触。
定义
如本文所使用，术语“化合物”是指通过一个或多个化学键连接的两个或更多个原子。在本发明中，化学键包括(但不限于)共价键、离子键、氢键和范德华相互作用(van derWaals interactions)。本发明的共价键包括单键、双键和三键。本发明的化合物包括(但不限于)有机分子。
本发明的有机化合物/分子包括具有或不具有官能团的直链、分支链和环状烃。当结合化学部分(如烷基、烯基、炔基或烷氧基)使用时，术语“Cx-y”意指包括链中含有x到y个碳的基团。举例来说，术语“Cx-y烷基”意指被取代或未被取代的饱和烃基，包括链中含有x到y个碳的直链烷基和分支链烷基，包括卤代烷基，如三氟甲基和2,2,2-三氟乙基等。术语“Cx-y烯基”和“Cx-y炔基”是指被取代或未被取代的不饱和脂族基团，其长度和可能的取代与上述烷基类似，但分别含有至少一个双键或三键。
如本文所使用，术语“脂族”意指由碳和氢原子构成的不含有芳族环的基团。因此，脂族基团包括烷基、烯基、炔基和碳环基。
如本文所使用，术语“烷基”意指非环状直链和分支链烃基，例如“C1-C20烷基”是指具有1-20个碳的烷基。烷基可以是直链或分支链。烷基的实例包括(但不限于)甲基、乙基、正丙基、异丙基、丁基、异丁基、仲丁基、叔丁基、戊基、异戊基叔戊基己基、异己基等。鉴于本公开的权益，其它烷基对于所属领域的技术人员来说将是容易显而易见的。烷基可未被取代或被一个或多个如本文所描述的取代基取代。举例来说，烷基可被以下中的一个或多个(例如，1、2、3、4、5或6个独立选择的取代基)取代：卤素、-CO2R'、-COOH、-CN、-OH、-OR'、-NH2、-NHR'、-N(R')2、-SR'或-SO2R'，其中R'的每个例子独立地是C1-C3烷基。在实施方案中，烷基未被取代。在实施方案中，烷基被取代(例如，被1、2、3、4、5或6个如本文所描述的取代基取代)。举例来说，术语“羟基烷基”是指如本文所描述的包括羟基(-OH)取代基的烷基且包括如-CH2OH的基团。
如本文所使用，“烯基”意指具有一个或多个可能出现在沿着链的任何稳定点的不饱和碳-碳双键的任何直链或分支链烃链，例如“C2-C20烯基”是指具有2-20个碳的烯基。举例来说，烯基包括丙-2-烯基、丁-2-烯基、丁-3-烯基、2-甲基丙-2-烯基、己-2-烯基、己-5-烯基、2,3-二甲基丁-2-烯基等。在实施方案中，烯基包括1、2或3个碳-碳双键。在实施方案中，烯基包括单个碳-碳双键。在实施方案中，多个双键(例如，2或3个)共轭。烯基可未被取代或被一个或多个如本文所描述的取代基取代。举例来说，烯基可被以下中的一个或多个(例如，1、2、3、4、5或6个独立选择的取代基)取代：卤素、-CO2R'、-CN、-OH、-OR'、-NH2、-NHR'、-N(R')2、-SR'或-SO2R'，其中R'的每个例子独立地是C1-C3烷基。在实施方案中，烯基未被取代。在实施方案中，烯基被取代(例如，被1、2、3、4、5或6个如本文所描述的取代基取代)。
如本文所使用，“炔基”意指具有一个或多个出现在沿着链的任何稳定点的碳-碳三键的直链或分支链构型的任何烃链，例如“C2-C20炔基”是指具有2-20个碳的炔基。炔基的实例包括丙-2-炔基、丁-2-炔基、丁-3-炔基、戊-2-炔基、3-甲基戊-4-炔基、己-2-炔基、己-5-炔基等。在实施方案中，炔基包括一个碳-碳三键。炔基可未被取代或被一个或多个如本文所描述的取代基取代。举例来说，炔基可被以下中的一个或多个(例如，1、2、3、4、5或6个独立选择的取代基)取代：卤素、-CO2R'、-CN、-OH、-OR'、-NH2、-NHR'、-N(R')2、-SR'或-SO2R'，其中R'的每个例子独立地是C1-C3烷基。在实施方案中，炔基未被取代。在实施方案中，炔基被取代(例如，被1、2、3、4、5或6个如本文所描述的取代基取代)。
如本文所使用，术语“环烷基”意指非芳香族饱和环状基团，例如“C3-C10环烷基”。在实施方案中，环烷基是单环。在实施方案中，环烷基是多环(例如，双环或三环)。在多环环烷基中，个别环可以是被稠合、桥接或螺环的。环烷基的实例包括环丙基、环丁基、环戊基、环己基、降冰片烷基、双环[3.2.1]辛基、八氢-戊烯基和螺[4.5]癸基等。术语“环烷基”可与术语“碳环”互换使用。环烷基可未被取代或被一个或多个如本文所描述的取代基取代。举例来说，环烷基可被以下中的一个或多个(例如，1、2、3、4、5或6个独立选择的取代基)取代：卤素、-CO2R'、-CN、-OH、-OR'、-NH2、-NHR'、-N(R')2、-SR'或-SO2R'，其中R'的每个例子独立地是C1-C3烷基。在实施方案中，环烷基未被取代。在实施方案中，环烷基被取代(例如，被1、2、3、4、5或6个如本文所描述的取代基取代)。
如本文所使用，术语“卤素”意指氟、氯、溴或碘。
如本文所使用，“芳族化合物”、“芳族”或含有“芳族环”的化合物是芳基或杂芳基化合物。如本文所使用，术语“芳基”包括被取代或未被取代的单环芳族基团，其中环的每个原子是碳。优选地，环是3元到8元环，更优选为6元环。术语“芳基”还包括具有两个或更多个环的多环环系统，其中两个或更多个碳是两个邻接环共用的，其中至少一个环是芳族，例如，其它环可以是环烷基、环烯基、环炔基、芳基、杂芳基和/或杂环基。芳基包括苯、萘、菲、酚、苯胺等。术语“杂芳基”包括被取代或未被取代的芳族单环结构，优选为3元到8元环，更优选为5元到7元环，甚至更优选为5元到6元环，其环结构包括至少一个杂原子，优选一个到四个杂原子，更优选一个或两个杂原子。术语“杂芳基”还包括具有两个或更多个环的多环环系统，其中两个或更多个碳是两个邻接环共用的，其中至少一个环是杂芳族，例如，其它环可以是环烷基、环烯基、环炔基、芳基、杂芳基和/或杂环基。杂芳基包括例如吡咯、呋喃、噻吩、吲哚、咪唑、恶唑、噻唑、吡唑、吡啶、吡嗪、哒嗪和嘧啶等。优选地，本发明的某些化合物包括至少一个(优选两个)吲哚基团以及至少一个醛基。
术语“被取代”意指具有至少一个取代一个或多个碳的主链上的氢原子的取代基的部分。应理解，“取代”或“被取代”包括隐含的限制条件，即这类取代是根据被取代原子和取代基的允许价态，且所述取代产生稳定的化合物，例如不会如通过重排、环化、消除等自发地经历转化的化合物。对于适当的有机化合物，可容许的取代基可以是一个或多个且相同或不同。
如本文所使用，术语“杂环(heterocycle)”或“杂环的(heterocyclic)”意指含有至少一个杂原子的单环、双环或三环环系统。杂原子包括(但不限于)氧、氮和硫。
单环杂环由例如含有至少一个杂原子的3、4、5、6、7、8、9或10元环组成。单环杂环的代表性实例包括(但不限于)氮杂环丁烷基、氮杂环庚烷基、氮丙啶基、二氮杂环庚烷基、1,3-二氧杂环己烷基、1,3-二氧杂环戊烷基、1,3-二硫杂环戊烷基、1,3-二噻烷基、咪唑啉基、咪唑烷基、异噻唑啉基、异噻唑烷基、异恶唑啉基、异恶唑烷基、吗啉基、恶二唑啉基、恶二唑烷基、恶唑啉基、恶唑烷基、哌嗪基、哌啶基、吡喃基、吡唑啉基、吡唑烷基、吡咯啉基、吡咯烷基、四氢呋喃基、四氢噻吩基、噻二唑啉基、噻二唑烷基、噻唑啉基、噻唑烷基、硫代吗啉基、1,1-二氧化硫代吗啉基(硫代吗啉砜)、硫代吡喃基和三噻烷基。
作为非限制性实例，双环杂环是与远端芳基环稠合的单环杂环，或与远端环烷基环稠合的单环杂环，或与远端环烯基环稠合的单环杂环，或与远端单环杂环稠合的单环杂环，或与远端单环杂芳基环稠合的单环杂环。双环杂环的代表性实例包括(但不限于)1,3-苯并间二氧杂环戊烯基、1,3-苯并二硫杂环戊烯基、2,3-二氢-1,4-苯并间二氧杂环己烯基、2,3-二氢-1-苯并呋喃基、2,3-二氢-1-苯并噻吩基、2,3-二氢-1H-吲哚基和1,2,3,4-四氢喹啉基。
作为非限制性实例，三环杂环是与苯基稠合的双环杂环，或与环烷基稠合的双环杂环，或与环烯基稠合的双环杂环，或与另一个单环杂环稠合的双环杂环。三环杂环的代表性实例包括(但不限于)2,3,4,4a,9,9a-六氢-1H-咔唑基、5a,6,7,8,9,9a-六氢二苯并[b,d]呋喃基和5a,6,7,8,9,9a-六氢二苯并[b,d]噻吩基。
作为非限制性实例，本发明的杂环可被独立地选自以下的取代基取代：烯基、烷氧基、烷氧基烷基、烷氧基炔基、烷氧基羰基、烷氧基羰基烷基、烷氧基-NH＝C(烷基)-、烷基、烷基羰基、烷基羰基烷基、烷基羰氧基、烷基磺酰基、烷基硫基、炔基、芳基、芳基烷氧基、芳基烷基、芳基羰基、芳氧基、羧基、羧基烷基、氰基、氰基烷基、环烷基、羰基、环烷基烷基、甲酰基、卤素、卤代烷基、羟基、羟基烷基、羟基环烷基、巯基、硝基、氧代基和苯基。
如本文所使用，“皮肤色素沉着调节”和其语法变化形式一般指本发明的化合物和组合物的皮肤增白以及皮肤暗化作用。
如本文所使用，“皮肤增白”和其语法变化形式一般指皮肤色素沉着的任何实际或所感知的减少。皮肤增白方法已经用于减少由年龄、日晒或色素沉着过度病症引起的皮肤色素沉着过度区域的色素沉着。将本发明的化合物和组合物施加于例如受试者的皮肤可减少色素沉着，使得皮肤比所述施加之前显得更亮或更白。皮肤色素沉着可以许多方式评定，包括(但不限于)使用例如von Luschan色彩量表、Fitzpatrick皮肤分型测试(Fitzpatrick等人,1988)和Taylor色素沉着过度量表(Taylor等人,2005)和反射分光光度测定方法(Zonios等人,2001)进行的目测评定。举例来说，Fitzpatrick皮肤分型测试包括六种类型的皮肤(I-VI)，且变成V型或更低级的VI型皮肤已被“增白”，如同在本文中所使用的术语。如下文进一步论述，皮肤增白可由多种现象引起，包括(但不限于)调节黑素细胞活性、诱导黑素细胞凋亡，或调节芳烃受体(AhR)活性、黑素生成、黑素体生物合成、黑素体转移或黑素浓度。
同样，如本文所使用，“皮肤暗化”和其语法变化形式一般指皮肤色素沉着的任何实际或所感知的增加。皮肤暗化方法已经用于增加由例如色素沉着不足病症引起的皮肤的色素沉着不足区域的色素沉着。将本发明的化合物和组合物施加于例如受试者的皮肤可增加色素沉着，使得皮肤比所述施加之前显得更暗。
本发明的某些化合物是从马拉色菌属酵母产生的、衍生的、分离出的或可分离的。马拉色菌属酵母是马拉色菌属的酵母且包括(但不限于)球形马拉色菌(Malasseziaglobosa)、限制性马拉色菌(Malassezia restricta)、糠秕马拉色菌(Malasseziafurfur)、合轴马拉色菌(Malassezia sympodialis)、斯洛菲马拉色菌(Malasseziaslooffiae)、钝型马拉色菌(Malassezia obtusa)、厚皮马拉色菌(Malasseziapachydermatis)、皮肤马拉色菌(Malassezia dermatis)、日本马拉色菌(Malasseziajaponica)、娜娜马拉色菌(Malassezia nana)、大和马拉色菌(Malassezia yamatoensis)、马科动物马拉色菌(Malassezia equine)、山羊马拉色菌(Malassezia caprae)和兔马拉色菌(Malassezia cuniculi)。(Guého等人,1996；Gaitanis等人,2013)。马拉色菌属酵母是正常人类皮肤菌群的部分且通常不产生致病效应。然而，马拉色菌属酵母可造成许多疾病，包括(但不限于)花斑糠疹(色素沉着过度和色素沉着不足变化形式)、脂溢性皮炎、皮屑、异位性皮炎、马拉色菌滤泡炎、银屑病，以及融合和网状乳头瘤病。(Gaitanis等人,2013)。
如本文所使用，术语“化学类似物”是指在结构上与母体化合物相关且含有不同官能团或取代基的化合物。举例来说，本发明的母体化合物是靛玉红，且靛玉红的化学类似物含有与靛玉红不同的某些官能团和取代基。本发明的化学类似物可具有优于给定母体化合物的显著优点，包括适合于化妆品上或医药用途的药代动力学特征。在一些实施方案中，通过一种或多种化学反应由母体分子产生化学类似物。在其它实施方案中，不起始于母体化合物的替代合成流程可用于产生本发明的化学类似物。
如果马拉色菌属酵母在其生命周期的过程中将在适当生长条件下合成、分泌、积累或以其它方式产生本发明的化合物，那么由马拉色菌属酵母产生所述化合物。马拉色菌属酵母分泌不同化合物，这视其生长培养基补充何物而定。(Nazzaro-Porro等人,1978)。本发明包括由马拉色菌属酵母在任何生长条件下产生的任何化合物，但优选的化合物包括例如马拉色因、靛玉红和其化学类似物。
如果在酵母生命周期过程中的任何时间，本发明的化合物存在于酵母上或酵母中，那么所述化合物衍生自马拉色菌属酵母。
靛玉红是由本发明的马拉色菌属酵母产生的化合物的一个实例。靛玉红是从糠秕马拉色菌中分离出的代谢物。靛玉红是芳烃受体(AhR)(涉及细胞生长、分化和基因表达的受体)的已知激动剂。
如本文所使用，术语“黑素细胞”是指表皮的树突状细胞，其通常合成酪氨酸酶且在黑素体内合成色素黑色素。本发明的黑素细胞展现某些基因的上调，包括(但不限于)以下中的一种或多种：酪氨酸酶(眼皮肤白化病IA)、小眼球相关转录因子、α-2-巨球蛋白、酪氨酸酶相关蛋白1、溶质载体家族16、GS3955蛋白、v-kit Hardy-Zuckerman 4猫肉瘤、眼白化病1、Rag D蛋白、糖原蛋白2、G蛋白偶联受体、家族C、眼皮肤白化病II、食道癌缺失基因1、黑素-A、SRY-box 10、ATP酶、V类10C型基质金属蛋白酶1、潜在转化生长因子βb、ATP结合盒、亚家族C、羟基前列腺素脱氢酶15、跨膜7超家族成员1、谷氨酰胺酰-肽环化转移酶以及由Lee和同事鉴别出的其它基因。(Lee等人,2013)。
黑素细胞(如同许多其它细胞类型)经历程序性细胞死亡或细胞凋亡。黑素细胞的凋亡路径是所属领域的技术人员已知的(Wang等人,2014)，且细胞凋亡路径一般已由Elmore综述(Elmore,2007)。本发明的化合物或组合物通过例如在黑素细胞中引起某些促细胞凋亡信号转导路径的活化或引起某些抗细胞凋亡路径的抑制来“诱导”黑素细胞凋亡。设想本发明的化合物或组合物可通过与路径的信号传导分子直接相互作用或通过与路径的分子间接相互作用(经由与一种或多种通常在路径内不发挥作用的中间分子直接相互作用)来直接活化/抑制细胞凋亡相关路径。
黑素细胞活性可以本发明中涵盖的许多方式调节，包括(但不限于)诱导黑素细胞凋亡或改变黑素细胞基因表达、细胞活动性、细胞生长、黑素产生、黑素体生物合成或黑素体转移。
如本文所使用，术语“调节(modulate)”、“调节(modulating)”和其语法变化形式是指将生物活性或现象调整到所期望水平。设想本发明的“调节”包括增加或降低生物活性或现象的水平的调整。
如本文所使用，术语“激动剂”、“激动”和其语法变化形式是指触发(例如，引发或促进)、部分或完全地增强、刺激或活化一种或多种生物活性的分子。本发明的激动剂可与受体相互作用且活化受体，由此引发所述受体的生理学或药理学反应特征。本发明的激动剂包括天然存在的物质以及合成物质。
如本文所使用，术语“拮抗剂”、“拮抗”和其语法变化形式是指部分或完全遏制、抑制一种或多种生物活性或使一种或多种生物活性失活的分子。本发明的拮抗剂可在与激动剂相同的位点处竞争性地结合于受体，但不活化由受体的活性形式引发的细胞内反应。本发明的拮抗剂可抑制激动剂或部分激动剂的细胞内反应。
本发明的芳烃受体(AhR)是如本文所描述的天然存在于受试者中的任何芳烃受体。芳烃受体是所属领域的技术人员已知的。(Noakes,2015)。芳烃受体的激动剂包括(但不限于)色氨酸相关化合物，如犬尿氨酸、犬尿酸、朱砂精酸(cinnabarinic acid)和6-甲酰基吲哚并[3,2-b]咔唑(FICZ)。
如本文所使用，本发明的化合物、组合物和方法可用于通过例如降低色素沉着过度病症所影响的区域中的色素沉着过度水平、减缓进一步的色素沉着过度或预防进一步的色素沉着过度发生来改善由色素沉着过度病症引起的色素沉着过度。然而，由于每个受试者可能对特定给药方案、疗法或方法没有反应，因此改善由色素沉着过度病症所引起的色素沉着过度不需要在每个受试者或受试者群体中达成所期望的生理学反应或结果。因此，给定受试者或受试者群体可能对给药没有反应或反应不足，但其它受试者或受试者群体可能反应且因此经历其色素沉着过度病症的改善。
黑素是将颜色赋予皮肤和毛发的天然产生的色素。黑素是由称为黑素体的细胞器中的黑素细胞通过称为黑素生成的过程产生。本发明的化合物或组合物通过例如调节黑素体生物合成且在酶水平上直接或间接地抑制黑素合成来调节受试者中的黑素产生(又称为黑色素生成)。
黑素体生物合成通过四个阶段进行：阶段I的特征是前黑素体，其为基本上未着色的囊泡。在阶段II中，前黑素体发育成条纹，黑素在阶段III沉积在所述条纹上。阶段IV产生富含黑素内容物的成熟黑素体。本发明的化合物和组合物通过抑制或减弱通常促进这些阶段中的任一个或全部的生物过程来调节黑素体生物合成。(Wasmeier等人,2008)。
黑素合成主要涉及三种酶：酪氨酸酶、酪氨酸酶相关蛋白-1和多巴色素互变异构酶。影响这些酶的细胞内转运的额外因子包括(但不限于)BLOC-1、OA1和SLC45A2。本发明的化合物和组合物可通过例如抑制或减弱这些酶或因子中的任一种的活性来调节黑素产生。(Yamaguchi等人,2014)。
一旦黑素体已经形成且黑素已经合成，那么黑素体需要从表皮黑素细胞转移到皮肤和毛发角质细胞。黑素体在黑素细胞的核附近产生且沿着微管和肌动蛋白纤丝运输到黑素细胞的周边。本发明的化合物和组合物通过干扰导致黑素体从核周区域运输到黑素细胞周边且进入邻近角质细胞中的生物过程中的任一种来调节黑素体转移。
可通过例如增加或减少受试者的黑素生成或促进受试者的黑素降解或消除来调节黑素浓度。
如本文所使用，术语“表皮黑素”是指表皮中所产生、运输到表皮或以其它方式存在于表皮中的黑素。
如本文所使用，术语“减少”和其语法变化形式意指引起给定生物现象或物种水平的降低。举例来说，本发明的化合物和组合物减少受试者中的表皮黑素，意指本发明的化合物和组合物引发受试者中的表皮黑素水平的降低。术语“减少”和其语法变化形式可意指例如将给定现象或物种的水平降低至少5％、10％、25％、50％、75％或100％。
如本文所使用，术语“接触”和其语法变化形式是指使两种或更多种材料足够接近以便其可相互作用。因此，仅出于说明性目的，本发明的化合物可通过例如与黑素细胞表面上的受体相互作用来接触黑素细胞。类似地，本发明的组合物可通过例如直接施加于受试者的皮肤来接触人类受试者。
如本文所使用，“受试者”意指哺乳动物细胞、组织、生物体或其群体。本发明的受试者优选为人类，包括人类细胞、组织和人，但另外包括灵长类动物、农畜、家畜、实验动物等。农业动物的一些实例包括牛、猪、马、山羊等。家畜的一些实例包括狗、猫等。实验动物的一些实例包括灵长类动物、大鼠、小鼠、兔、天竺鼠等。
如本文所使用，“需要”改善由色素沉着过度病症所引起的色素沉着过度的受试者包括具有真实或感觉到的改善需求的受试者。
如本文所使用，术语“治疗(treat)”、“治疗(treating)”、“治疗(treatment)”和其语法变化形式意指对个别受试者进行方案、疗法、方法或医治，其中期望在所述受试者(例如，患者)中获得生理学反应或结果。具体来说，本发明的方法和组合物可用于减缓疾病症状的发展，或延迟疾病或病况的发作，或中断疾病发展的进程。然而，由于每个所治疗受试者可能对特定治疗方案、疗法、方法或医治没有反应，因此治疗不需要在每个受试者或受试者群体(例如，患者群体)中达成所期望的生理学反应或结果。因此，给定受试者或受试者群体(例如，患者群体)可能对治疗没有反应或反应不足。
如本文所使用，术语“预防(prevent)”、“预防(preventing)”、“预防(preventon)”和其语法变化形式意指本发明的化合物在向施用时尚未诊断为可能患有病症或疾病，但通常预期会发展病症或疾病或处于病症或疾病风险增加的患者施用时是有用的。本发明的化合物和组合物例如减缓病症或疾病症状的发展、延迟病症或疾病的发作或从根本上预防受试者发展病症或疾病。预防还包括向因年龄、家族性病史、基因或染色体异常且/或因存在病症或疾病的一种或多种生物标志物而被认为易患病症或疾病的那些受试者施用本发明的化合物。
如本文所使用，术语“促进”和其语法变化形式意指允许、增强、容许、有助于、促进、鼓励、诱导或以其它方式帮助产生。
如本文所使用，术语“产生”和其语法变化形式意指引起特定的结果发生、出现或存在。作为非限制性实例，本发明的化合物和组合物在受试者中产生光防护性或UV防护作用。
如本文所使用，术语“红斑”是指皮肤发红。红斑可由表层毛细血管的扩张和/或刺激引起。术语“UV诱导的红斑”是指由于UV暴露而出现的皮肤发红。如本文所使用，“晒伤”和其语法变化形式是指通过暴露于阳光或人造UV源(例如，晒黑床(tanning beds))引起的UV诱导的红斑。
如本文所使用，术语“色素沉着过度”一般指色素沉着大于邻近皮肤区域色素沉着(例如，色素斑、老年斑、痣等)的皮肤区域。本发明的色素沉着过度包括(但不限于)由黑素细胞活性过高引起的局部色素沉着过度、由良性黑素细胞活性过高和增殖引起的其它局部色素沉着过度、疾病相关的色素沉着过度，和意外的色素沉着过度，如因光过敏、基因构成、化学摄入或其它暴露(例如，UV暴露)、年龄和病变后疤痕所致的那些色素沉着过度。如本文所使用，“UV诱导的色素沉着过度”是指由暴露于天然或人造UV引起的任何色素沉着过度。
如本文所使用，术语“色素沉着不足”一般指色素沉着小于邻近皮肤区域色素沉着的皮肤区域。本发明的色素沉着不足包括(但不限于)白斑病、脱色素、白色糠疹、病灶性色素沉着不足、炎症后色素沉着不足、斑驳病、白化病、花斑癣、光过敏、白化基因病、黑素过少症、异位性皮炎、牛皮癣等。
如本文所使用，“UV诱导的皮肤损伤”意指由暴露于UV(包括UVA、UVB和UVC)引起的皮肤损伤。本发明的UV诱导的皮肤损伤包括(但不限于)皱纹、色素沉着过度、发育异常、光化性角化症和皮肤癌。
如本文所使用，“UV诱导的皮肤老化”意指由暴露于UV(包括UVA、UVB和UVC)引起的皮肤老化。本发明的UV诱导的皮肤老化本身表现为例如皱纹、细纹、老年斑、痣、干燥、薄或皮肤弹性减少、肤色不均匀，和完全或部分地由UV暴露引起的皮肤光亮度、肌理、弹性、紧实度、松垂和清晰度的其它减少。
如本文所使用，当用于描述本发明的化合物和组合物的作用时，术语“光防护性”和其语法变化形式意指本文所描述的化合物和组合物预防和/或减轻由光(尤其阳光)引起的损伤。同样，本发明的“光防护剂”是本文所描述的那些化合物和组合物，其预防和/或减轻由光(尤其阳光)引起的损伤。
如本文所使用，当用于描述本发明的化合物和组合物的作用时，术语“UV防护”和其语法变化形式意指本文所描述的化合物和组合物预防和/或减轻由紫外(“UV”)光引起的损伤。同样，本发明的“UV防护剂”是本文所描述的那些化合物和组合物，其预防和/或减轻由UV引起的损伤。本发明的紫外光包括例如UVA(320-240nm)、UVB(290-320nm)和UVC(200-290nm)。
如本文所使用，术语“过滤器”和其语法变化形式意指阻滞、反射、吸附或散射UV。本发明的“防晒剂”包括阻滞、反射、吸附或散射UV的本发明的所有化合物和组合物。
如本文所使用，术语“吸附”和其语法变化形式意指吸收UV或将UV转化成热能。作为非限制性实例，本发明的化合物和组合物可吸附UV且因此将热能辐射到其周围环境中。
如本文所使用，当在UV的上下文中使用时，术语“反射”和其语法变化形式意指在不吸附UV的情况下将UV反射或反弹回来。
如本文所使用，术语“组合物”意指包括一种或多种本发明化合物的实体，以及由一种或多种本发明化合物与其它成分的组合直接或间接产生的任何实体。本发明的组合物可用作例如体外或体内研究试剂。本发明的组合物还可直接施加于人类或非人类受试者的皮肤上以获得美容或医药效果。另外，本发明的组合物包括表1或图3中列出的一种或多种化合物，或其化学类似物、结晶形式、水合物或药学上或化妆品上可接受的盐。
对于体外和体内应用两者，本发明的组合物可以任何期望且有效的方式进行施用：口服摄取或肠胃外或以任何适当方式的其它施用，如腹膜内、皮下、体表、皮内、吸入、肺内、直肠、阴道、舌下、肌肉内、静脉内、动脉内、鞘内或淋巴管内。此外，本发明的组合物可与其它组合物结合施用。必要时，本发明的组合物可针对胃或其它分泌物加以囊封或以其它方式保护。
本发明的组合物包括一种或多种活性成分与一种或多种化妆品上或药学上可接受的载剂以及任选地一种或多种其它化合物、成分和/或材料的混合物。无论所选施用途径如何，本发明的化合物和组合物通过所属领域的技术人员已知的常规方法配制成化妆品上或药学上可接受的剂型。
化妆品上或药学上可接受的媒剂、稀释剂和载剂为所属领域中所熟知的且包括适合于与人类和非人类组织接触而无过度毒性、不兼容性、不稳定性、刺激、过敏反应等的材料。化妆品上或药学上可接受的媒剂、稀释剂和载剂包括任何大体上无毒性的物质，其常规上可用于例如体表、口服、腹膜或皮下施用化妆品或药品，其中当向人类或非人类受试者施加、摄入、注射或以其它方式施用时，本发明的化合物和组合物将保持稳定和生物可用性。适用于体表应用的化妆品上或药学上可接受的载剂是所属领域的技术人员已知的且包括化妆品上或药学上可接受的液体、面霜、油剂、洗剂、软膏、凝胶或固体，如常规化妆品晚霜、粉底霜、防晒乳、防晒剂、护手霜、粉底和隔离霜、面膜等。适用于所选剂型和既定施用途径的载剂为所属领域中所熟知的，且用于所选剂型和施用方法的可接受载剂可使用所属领域中的一般技能来确定。
本发明的组合物可含有化妆品中常见的其它成分，包括香料、雌激素、维生素A、C和E、α-羟基或α-酮酸(如丙酮酸、乳酸或乙醇酸)、羊毛脂、凡士林、芦荟、对羟基苯甲酸甲酯或对羟基苯甲酸丙酯、色素等。本发明的非限制性化妆品上或药学上可接受的媒剂、稀释剂和载剂包括糖类(例如，乳糖、蔗糖、甘露糖醇和山梨糖醇)、淀粉、纤维素制剂、磷酸钙(例如，磷酸二钙、磷酸三钙和磷酸氢钙)、柠檬酸钠、水、水溶液(例如，盐水、氯化钠注射剂、林格氏注射剂(Ringer's injection)、右旋糖注射剂、右旋糖和氯化钠注射剂、乳酸化林格氏注射剂)、醇类(例如，乙醇、丙醇和苯甲醇)、多元醇(例如，甘油、丙二醇和聚乙二醇)、有机酯(例如，油酸乙酯和甘油三酯)、可生物降解聚合物(例如，聚乳酸交酯-聚乙交酯、聚(原酸酯)和聚(酸酐))、弹性体基质、脂质体、微球体、油剂(例如，玉米油、胚芽油、橄榄油、蓖麻油、芝麻油、棉籽油和花生油)、可可脂、蜡(例如，栓剂蜡)、石蜡、硅酮、滑石、水杨酸酯等。
本发明的组合物可任选地含有化妆品组合物中常用的额外成分和/或材料。这些成分和材料为所属领域中所熟知的且包括例如(1)填充剂或增量剂，如淀粉、乳糖、蔗糖、葡萄糖、甘露糖醇和硅酸；(2)粘合剂，如羧甲基纤维素、褐藻酸盐、明胶、聚乙烯吡咯烷酮、羟丙基甲基纤维素、蔗糖和阿拉伯胶(acacia)；(3)保湿剂，如甘油；(4)崩解剂，如琼脂-琼脂、碳酸钙、马铃薯或木薯淀粉、褐藻酸、某些硅酸盐、乙醇酸淀粉钠、交联羧甲基纤维素钠和碳酸钠；(5)溶液阻滞剂，如石蜡；(6)吸收促进剂，如季铵化合物；(7)润湿剂，如鲸蜡醇和单硬脂酸甘油酯；(8)吸附剂，如高岭土和膨润土；(9)润滑剂，如滑石、硬脂酸钙、硬脂酸镁、固体聚乙二醇和月桂基硫酸钠；(10)悬浮剂，如乙氧基化异十八烷醇、聚氧化乙烯山梨糖醇和脱水山梨糖醇酯、微晶纤维素、偏氢氧化铝、膨润土、琼脂-琼脂和黄芪；(11)缓冲剂；(12)赋形剂，如乳糖、奶糖、聚乙二醇、动物和植物脂肪、油剂、蜡、石蜡、可可油、淀粉、黄芪、纤维素衍生物、聚乙二醇、硅酮、膨润土、硅酸、滑石、水杨酸盐、氧化锌、氢氧化铝、硅酸钙和聚酰胺粉末；(13)惰性稀释剂，如水或其它溶剂；(14)防腐剂；(15)表面活性剂；(16)分散剂；(17)控制释放或吸收延迟剂，如羟丙基甲基纤维素、其它聚合物基质、可生物降解聚合物、脂质体、微球体、单硬脂酸铝、明胶和蜡；(18)乳浊剂；(19)佐剂；(20)润湿剂；(21)乳化剂和悬浮剂；(22)增溶剂和乳化剂，如乙醇、异丙醇、碳酸乙酯、乙酸乙酯、苯甲醇、苯甲酸苯甲酯、丙二醇、1,3-丁二醇、油剂(具体来说棉籽油、花生油、玉米油、胚芽油、橄榄油、蓖麻油和芝麻油)、甘油、四氢呋喃醇、聚乙二醇和脱水山梨糖醇的脂肪酸酯；(23)推进剂，如氯氟烃和挥发性未被取代的烃，如丁烷和丙烷；(24)抗氧化剂；(25)使配制物与既定接收者的血液等渗的药剂，如糖类和氯化钠；(26)增稠剂；(27)包衣材料，如卵磷脂；和(28)甜味剂、调味剂、着色剂、芳香剂和防腐剂。每种这类成分或材料在与配制物的其它成分兼容且对受试者无害的意义上必须是“可接受的”。适用于所选剂型和既定施用途径的成分和材料为所属领域中所熟知的，且用于所选剂型和施用方法的可接受成分和材料可使用所属领域中的一般技能来确定。
适用于口服施用的本发明组合物可呈以下形式：胶囊、扁囊剂、丸剂、片剂、粉末、颗粒、水性或非水性液体中的溶液或悬浮液、水包油或油包水型液体乳液、酏剂或糖浆、锭剂、大丸剂、舐剂或糊剂。这些配制物可通过所属领域中已知的方法，例如借助于常规盘式包衣(pan-coating)、混合、造粒或冻干工艺来制备。
用于口服施用的固体剂型(胶囊、片剂、丸剂、糖衣药丸、粉末、颗粒等)可例如通过将活性成分与一种或多种化妆品上或药学上可接受的载剂和任选地一种或多种填充剂、增量剂、粘合剂、保湿剂、崩解剂、溶液阻滞剂、吸收促进剂、润湿剂、吸附剂、润滑剂和/或着色剂混合来制备。可使用合适的赋形剂将类似类型的固体组合物用作软填充和硬填充明胶胶囊中的填充剂。片剂可通过压缩或模制，任选地与一种或多种辅助成分一起制备。压缩片剂可使用合适的粘合剂、润滑剂、惰性稀释剂、防腐剂、崩解剂、表面活性剂或分散剂来制备。可通过在合适的机器中模制来制备模制片剂。片剂和其它固体剂型(如胶囊、丸剂和颗粒)可任选地用包衣和外壳(如肠溶包衣和化妆品配制领域中熟知的其它包衣)来刻痕或制备。其还可被配制以便提供活性成分于其中的缓慢或控制释放。其可通过例如经由细菌截留型过滤器过滤来灭菌。这些组合物还可任选地含有遮光剂，且可为使得其仅或优先在胃肠道的某一部分中任选地以延迟方式释放活性成分的组合物。活性成分还可呈微囊封形式。
用于口服施用的液体剂型包括化妆品上或药学上可接受的乳液、微乳液、溶液、悬浮液、糖浆和酏剂。液体剂型可含有所属领域中常用的合适的惰性稀释剂。除惰性稀释剂之外，口服组合物还可包括佐剂，如润湿剂、乳化剂和悬浮剂、甜味剂、调味剂、着色剂、芳香剂和防腐剂。悬浮液可含有悬浮剂。
用于直肠或阴道施用的本发明组合物可以栓剂形式提供，所述栓剂可通过将一种或多种活性成分与一种或多种合适的无刺激性的载剂混合来制备，所述载剂在室温下是固体，但在体温下是液体且因此将在直肠或阴道腔中熔融并释放活性化合物。适用于阴道施用的本发明组合物还包括含有如所属领域中已知适当的化妆品上或药学上可接受的载剂的阴道栓剂、棉塞、乳膏、凝胶、糊剂、泡沫体或喷雾配制物。
用于体表或经皮施用的剂型包括粉末、喷雾剂、软膏、糊剂、乳膏、洗剂、凝胶、溶液、贴片、滴剂、乳液、悬浮液、气雾剂和吸入剂。可将任何所期望的常规媒剂、助剂和任选地其它活性成分添加到配制物中。
优选的助剂来源于包括以下的组：防腐剂、抗氧化剂、稳定剂、增溶剂、维生素、着色剂、气味改进剂、成膜剂、增稠剂和保湿剂。
溶液和乳液可包括常规媒剂，如溶剂、增溶剂和乳化剂，例如水、乙醇、异丙醇、碳酸乙酯、乙酸乙酯、苯甲醇、苯甲酸苯甲酯、丙二醇、1,3-丁基乙二醇、油剂(具体来说，棉籽油、花生油、玉米油、橄榄油、蓖麻油和芝麻油)、甘油脂肪酸酯、聚乙二醇和脱水山梨糖醇的脂肪酸酯，或这些物质的混合物。
乳液可以各种形式存在。因此，其可以是例如油包水(W/O)型或水包油(O/W)型的乳液或微乳液，或例如水包油包水(W/O/W)型的多重乳液。
根据本发明的组合物还可呈不含乳化剂的分散制剂的形式。其可以是例如含水分散液或皮克林乳液(Pickering emulsions)。
悬浮液可包括常规媒剂，如液体稀释剂，例如水、乙醇或丙二醇；悬浮介质，例如乙氧基化异十八烷醇、聚氧化乙烯山梨糖醇酯和聚氧化乙烯脱水山梨糖醇酯；微晶纤维素、偏氢氧化铝、膨润土、琼脂-琼脂和黄芪，或这些物质的混合物。
糊剂、软膏、凝胶和乳膏可包括常规媒剂，例如动物和植物脂肪、蜡、石蜡、淀粉、黄芪、纤维素衍生物、聚乙二醇、硅酮、膨润土、硅酸、滑石和氧化锌，或这些物质的混合物。
面部和身体油剂可包括常规媒剂，如合成油剂，如脂肪酸酯、脂肪醇、硅酮油、天然油(如植物油和油性植物提取物)、石蜡油、羊毛脂油，或这些物质的混合物。
喷雾剂可包括常规推进剂，例如氯氟烃、丙烷/丁烷或二甲醚。
适用于肠胃外施用的本发明组合物包括一种或多种化合物以及一种或多种化妆品上或药学上可接受的无菌等渗水溶液或非水溶液、分散液、悬浮液或乳液或无菌粉末，所述无菌粉末可在即将使用之前重构成无菌可注射溶液或分散液，其可含有合适的抗氧化剂、缓冲剂、使配制物与既定接收者的血液等渗的溶质，或悬浮剂或增稠剂。可例如通过使用包衣材料，通过在分散液的情况下维持所需粒度和通过使用表面活性剂来维持适当的流动性。这些组合物还可含有合适的佐剂，如润湿剂、乳化剂和分散剂。还可希望包括等渗剂。另外，可通过包括吸收延迟剂来实现可注射化妆品形式的延长吸收。
在一些情况下，为延长效果，期望减缓其从皮下或肌肉内注射中的吸收。这可通过使用水溶性差的结晶或非晶形材料的液体悬浮液来实现。
活性剂/药物的吸收速率则取决于其溶解速率，而溶解速率又可取决于晶体大小和结晶形式。替代地，可通过将活性组合物溶解或悬浮于油媒剂中来实现肠胃外施用的组合物的延迟吸收。可通过在可生物降解聚合物中形成活性成分的微胶囊基质来制备可注射储库形式。视活性成分与聚合物的比率和所用特定聚合物的性质而定，可控制活性成分释放的速率。还通过将药物包覆在与身体组织兼容的脂质体或微乳液中来制备储库可注射配制物。可注射材料可例如通过细菌截留型过滤器过滤来灭菌。
本发明的组合物可存在于单位剂量或多剂量密封容器(例如安瓿和小瓶)中，且可在仅需要在使用前立即添加无菌液体载剂(例如注射用水)的冻干条件下存储。可由上述类型的无菌粉末、颗粒和片剂来制备即用型注射溶液和悬浮液。
本发明的组合物的某些实施方案包括局部组合物，如(但不限于)洗剂、霜剂、凝胶、膏剂、精华液和药膏。在各种实施方案中，本发明的组合物可为水包油乳液或油包水乳液，或油基非乳液组合物。在各种实施方案中，此类局部组合物包含(任选地与其它成分一起)马拉色因或马拉色因类似物，如本文描述的马拉色因类似物中的任一种，或包含w/w浓度为0.01％到3％，优选为0.1到2％，如0.1％、0.5％、1％、1.5％或2％，或介于任何两种此类浓度之间的范围的，表1或图3中所列的任何化合物。组合物还可包含w/w浓度为5％到30％，优选为10％到20％，如5％、10％、15％或20％，或介于任何两种此类浓度之间的范围的，任一种或两种合适溶剂，如二甲基异山梨糖醇，和w/w浓度为0.25％到2％，优选为0.5％到2％，如0.5％、1％、1.5％或2％，或介于任何两种此类浓度之间的范围的，合适皮肤穿透剂，诸如戊二醇。本发明的局部组合物任选地还包含所属领域的一般技术人员已知的其它常规成分，如药学上或化妆品上可接受的赋形剂，如(但不限于)以下中的一种或多种：乳化剂、润肤剂、保湿剂、溶剂(例如，水)、乳液稳定剂、皮肤穿透剂、防腐剂和螯合剂。在各种实施方案中，本发明的组合物任选地还包含超过一种来自这些类别中的一种或多种的物品，如两种或更多种不同润肤剂、两种或更多种乳化剂等。本发明的组合物任选地还包含保护或促进或另外增强皮肤健康和/或外观的其它成分，如(但不限于)一种或多种防晒剂(例如，二氧化钛、氧化锌、阿伏苯宗(avobenzone))，和/或一种或多种去角质剂(例如，α-羟基酸或β-羟基酸、维生素C)，如所属领域的一般技术人员已知的常规此类试剂。
在上文所描述的本发明的组合物中，可提供例如呈化合物的药学上或化妆品上可接受的盐、水合物或溶剂合物的形式的马拉色因、马拉色因类似物，或表1或图3中所列的化合物。下文进一步描述盐、水合物和溶剂合物。
本发明还提供了包括施用上文所描述的组合物的步骤的方法。本发明方法可包括多次施用组合物，如按时间表施用，如每日一次或多次，或一周一次或多次。因此，本发明提供保护或促进或另外增强皮肤健康和/或外观(如本文中其他处描述的任一个健康和外观目标)的方法。所属领域的一般技术人员可通过常规方法基于一种或多种活性成分在组合物中的浓度和治疗之受试者的病况来确定适当的剂量和施用方案。本发明因此提供例如一种减少人类受试者皮肤的细纹和皱纹的方法，其包括向人类受试者施用例如如上文所描述的本发明的组合物。本发明还提供了例如一种促进人类受试者的皮肤光滑的方法，其包括向人类受试者施用例如如上文所描述的本发明的组合物。本发明还提供了例如一种促进人类受试者的皮肤增白的方法，其包括向人类受试者施用例如如上文所描述的本发明的组合物。
本发明还提供了用于预防或治疗本文描述的病况(例如用于减少人类受试者的皮肤细纹和皱纹、促进人类受试者的皮肤光滑和促进人类受试者的皮肤增白的方法中)的组合物，其中所述方法包括向受试者施用如上文所描述的组合物，如通过将组合物施加到受试者的皮肤。
在本发明中，术语“结晶形式”意指化合物的晶体结构。化合物可以一种或多种结晶形式存在，其可具有不同结构、物理、药理学或化学特征。可使用成核、生长动力学、聚结和断裂的变化来获得不同结晶形式。成核在克服相变能量势垒时产生，由此允许颗粒由过饱和溶液形成。晶体生长是化合物在晶体的现有表面上沉积而引起的晶体颗粒的扩大。成核和生长的相对速率决定了所形成的晶体的大小分布。成核与生长两者的热力学驱动力是过饱和，其定义为偏离热力学平衡。聚结是通过两个或更多个颗粒(例如，晶体)粘在一起且形成较大结晶结构来形成较大颗粒。
如本文所使用，术语“水合物”意指分子复合物中含有水的固体或半固体形式的化合物。水相对于化合物一般以化学计算量计。
如本文所使用，“化妆品上或药学上可接受的盐”是指本文公开的化合物的衍生物，其中化合物是通过制备其酸或碱盐来改性。化妆品上或药学上可接受的盐的实例包括(但不限于)碱性残基(如胺)的矿物或有机酸盐；酸性残基(如羧酸)的碱或有机盐；等。举例来说，这类盐包括来自以下的盐：氨、L-精氨酸、甜菜碱、苄苯乙胺(benethamine)、苯乍生(benzathine)、氢氧化钙、胆碱、丹醇(deanol)、二乙醇胺(2,2'-亚氨基双(乙醇))、二乙胺、2-(二乙氨基)-乙醇、2-氨基乙醇、乙二胺、N-乙基-葡糖胺、海卓胺(hydrabamine)、1H-咪唑、赖氨酸、氢氧化镁、4-(2-羟乙基)-吗啉、哌嗪、氢氧化钾、1-(2-羟基-乙基)-吡咯烷、氢氧化钠、三乙醇胺(2,2',2"-次氮基三(乙醇))、氨丁三醇(trometh-amine)、氢氧化锌、乙酸、2.2-二氯-乙酸、己二酸、褐藻酸、抗坏血酸、L-天冬氨酸、苯磺酸、苯甲酸、2,5-二羟基苯甲酸、4-乙酰胺基-苯甲酸、(+)-樟脑酸、(+)-樟脑-10-磺酸、碳酸、肉桂酸、柠檬酸、环己胺磺酸、癸酸、十二烷基硫酸、乙烷-1,2-二磺酸、乙磺酸、2-羟基-乙磺酸、乙二氨四乙酸、甲酸、富马酸、半乳糖二酸、龙胆酸、D-葡糖庚酸、D-葡萄糖酸、D-葡糖醛酸、谷氨酸、谷酰氨酸、戊二酸、2-氧代基-戊二酸、甘油-磷酸、甘氨酸、乙醇酸、己酸、马尿酸、氢溴酸、氢氯酸异丁酸、DL-乳酸、乳糖酸、月桂酸、赖氨酸、富马酸、(-)-L-苹果酸、丙二酸、DL-杏仁酸、甲磺酸、半乳糖二酸、萘-1,5-二磺酸、萘-2-磺酸、1-羟基-2-萘甲酸、烟酸、硝酸、辛酸、油酸、乳清酸、草酸、棕榈酸、双羟萘酸(恩波酸(embonic acid))、磷酸、丙酸、(-)-L-焦谷氨酸、水杨酸、4-氨基-水杨酸、癸二酸、硬脂酸、丁二酸、硫酸、鞣酸、(+)-L-酒石酸、硫氰酸、对甲苯磺酸和十一碳烯酸。其它化妆品上或药学上可接受的盐可由来自金属(如铝、钙、锂、镁、钾、钠、锌等)的阳离子形成。
本发明的化妆品上或药学上可接受的盐可通过常规化学方法由本文公开的含有碱性或酸性部分的化合物来合成。一般来说，可通过使这些化合物的游离酸或碱形式与足量的适当碱或酸在水中或在有机稀释剂(如醚、乙酸乙酯、乙醇、异丙醇或乙腈或其混合物)中反应来制备这类盐。
设想本发明的化合物和组合物可包括在用于体外和体内两者应用的化妆品或药物组合物中。
设想可向受试者共同施用本发明的化合物和组合物(包括表1或图3中列出的一种或多种化合物，或其化学类似物、结晶形式、水合物或药学上或化妆品上可接受的盐)，以实现本发明的皮肤色素沉着调节目的。
还设想本发明的组合物可包括表1或图3中列出的一种或多种化合物，或其化学类似物、结晶形式、水合物或药学上或化妆品上可接受的盐。举例来说，本发明的组合物可包括靛玉红或其化学类似物，以及马拉色因或其化学类似物。
另外，设想本发明的化合物包括由马拉色菌属产生的化合物，或其化学类似物、结晶形式、水合物或药学上或化妆品上可接受的盐。此外，设想本发明的组合物和方法可涉及由马拉色菌属产生的一种或多种化合物，或其化学类似物、结晶形式、水合物或药学上或化妆品上可接受的盐。举例来说，由马拉色菌属产生或衍生的化合物包括(但不限于)图3中所示的化合物。
进一步设想，本发明的方法可涉及共同施用两种或更多种本发明的化合物和/或组合物以实现本文所描述的皮肤色素沉着调节目的。
共同施用的本发明的化合物和组合物可例如大体上同时或依次接触受试者。
含有一种或多种马拉色菌属衍生的化合物或其化学类似物的本发明组合物可在各种功效准则上显示优于单独的组分化合物的协同效应，包括(但不限于)平均组织生存力、黑素浓度、皮肤增白、皮肤暗化、诱导黑素细胞凋亡和调节芳烃(AhR)活性、黑素生成或黑素浓度。
本文所使用的术语仅出于描述特定实施方案的目的，且并不意图为限制性的。如在说明书和所附权利要求书中所使用，除非上下文另外明确规定，否则单数形式“一(a/an)”和“所述(the)”包括多个指示物。
为了叙述本文的数值范围，明确涵盖其间具有相同精确度的每一个插入数值。举例来说，当范围为6-9时，除了6和9外，还涵盖数字7和8；且当范围为6.0-7.0时，明确涵盖数字6.0、6.1、6.2、6.3、6.4、6.5、6.6、6.7、6.8、6,9和7.0。
提供以下实施例以进一步说明本发明的方法。这些实施例仅是说明性的，且并不打算以任何方式限制本发明的范围。
实施例
实施例1
化合物名称
下表1显示本发明化合物的结构和名称。
表1
Figure BDA0003105902200000401
Figure BDA0003105902200000411
Figure BDA0003105902200000421
Figure BDA0003105902200000431
Figure BDA0003105902200000441
Figure BDA0003105902200000451
Figure BDA0003105902200000461
Figure BDA0003105902200000471
实施例2
含有马拉色菌属衍生的化合物和/或其化学类似物的组合物的细胞凋亡诱导活性
试剂
Alexa Fluor 488膜联蛋白V/死细胞凋亡试剂盒、胎牛血清(FBS)、0.25％胰蛋白酶-EDTA(1×)、胱天蛋白酶-Glo 3/7分析、RPMI 1640培养基、达尔伯克氏改良伊格尔培养基和抗生素抗霉菌溶液(100×)。
将细胞系MeWo(
Figure BDA0003105902200000472
HTB-65TM)、WM115(
Figure BDA0003105902200000473
CRL-1675)和B16F1(
Figure BDA0003105902200000474
CRL-6323)维持在以下培养基中：用于MeWo和B16F1的培养基：补充有10％FBS的DMEM；用于WM115的培养基：补充有10％FBS的RPMI 1640。
实验方法
收集细胞且使用Countess细胞计数器测定细胞数量。将细胞用培养基稀释到所需密度。举例来说，最终细胞密度对于6小时和24小时处理来说可以是4,000个细胞/孔，且对于48小时和72小时处理来说可以是2,000个细胞/孔。对于膜联蛋白V分析，采用384孔透明底板(Corning 3712)，而胱天蛋白酶-Glo分析则使用384孔实心白底板(Corning 3570)。所有板用盖子覆盖且在37℃和5％CO2下放置过夜以用于细胞粘附。
将测试化合物溶解在DMSO中，得到30mM储备液。进行10倍稀释以产生3mM和0.3mM浓度。0.9mM星形孢菌素用作阳性对照，而DMSO用作阴性对照(NC)。使用液体处理器Echo550，将132.5nL化合物从化合物源板转移到384孔细胞培养板。在所指示的培育时间之后，将板从培育箱中移除以用于检测。
将测试组合物溶解在DMSO、EPI-100-LLMM或任何适当溶剂中且可根据下表2-7中的说明书来制备。适当溶剂为所属领域的技术人员所熟知。
对于膜联蛋白V分析，将板从培育箱中移除且去除培养基。用40μL PBS洗涤细胞两次，且每孔添加15μL预混合的膜联蛋白V-FITC和Hoechst 33342染料工作溶液。将板在室温下培育20分钟，密封且以1,000rpm离心1分钟以去除气泡。使用ImageXpress Nano读取板。
对于胱天蛋白酶-Glo分析，将板从培育箱中移除且在室温下平衡15分钟。在实验之前，还将胱天蛋白酶-Glo 3/7试剂解冻且平衡到室温。将胱天蛋白酶-Glo试剂以与培养基的1:1比率添加到所需孔中。将板在室温下培育15分钟且使用EnSpireTM板读取器读取。根据下式计算诱导倍数：诱导倍数＝Lum样品/LumNC。
膜联蛋白V分析和胱天蛋白酶3/7分析结果
预期本发明的化合物和组合物(包括1-5号组合物)将诱导细胞死亡。预期本发明的组合物展现例如比单独使用的至少一种组分化合物更强的细胞凋亡诱导活性。同样，预期本发明的组合物展现例如比单独使用的至少一种组分化合物更低的有效细胞凋亡诱导活性。这类组合物可具有比更强组合物更有利的毒性特征。
实施例3
暴露于含有马拉色菌属衍生的化合物和/或其化学类似物的组合物之后的细胞生 存力
试剂
Figure BDA0003105902200000481
2.0分析。
实验方法
对于CellTiter-Glo分析，在10mM DMSO溶液中制备测试化合物。将化合物连续稀释成12种浓度。将来自100,000个细胞/毫升悬浮液的40μL细胞分配到384孔板(Corning3570)的每个孔中。将板在37℃、5％CO2和95％湿度下培育过夜。添加测试化合物，以DMSO作为媒剂对照。将板在37℃、5％CO2和95％湿度下培育6、24或48小时，且将40μL的CellTiter-Glo试剂添加到孔中以分析细胞生存力。
将测试组合物溶解在DMSO、EPI-100-LLMM或任何适当溶剂中且可根据下表2-7中的说明书来制备。适当溶剂为所属领域的技术人员所熟知。
结果
预期本发明的化合物和组合物(包括1-5号组合物)将诱导细胞死亡。预期本发明的组合物展现例如比单独使用的至少一种组分化合物更强的细胞凋亡诱导活性。同样，预期本发明的组合物展现例如比单独使用的至少一种组分化合物更低的有效细胞凋亡诱导活性。这类组合物可具有比更强组合物更有利的毒性特征。
实施例4
含有马拉色菌属衍生的化合物和/或其化学类似物的组合物的芳烃受体活化潜力
分析程序
通过用高葡萄糖和L-谷氨酰胺以及10％FBS补充DMEM来制备用于稳定转染的HepG2细胞的培养基。
在T-75烧瓶中，在37℃、5％CO2和95％相对湿度下培养HepG2-AhR-Luc细胞。使细胞在分离和分裂之前达到80-90％汇合。
用5mL PBS冲洗培养的细胞。将PBS抽吸掉，向烧瓶中添加1.5mL胰蛋白酶，且将细胞在37℃下培育大约5分钟或直到细胞脱壁且漂浮。通过添加含有过量的血清的培养基来使胰蛋白酶失活。
将细胞悬浮液转移到锥形管中且以120g离心10分钟以使细胞沉淀。将细胞以恰当密度重悬于接种培养基中。将40μL细胞转移到384孔培养板(5×103个细胞/孔)。将板在37℃下放置在培育箱中持续24小时。
然后，制备测试化合物、测试组合物和奥美拉唑阳性对照的储备溶液。使用Echo550将化合物和组合物溶液转移到分析板中。随后将板放回到培育箱中以进行化合物/组合物处理。
随后，在24小时的处理之后，将板从培育箱中移除且使其在环境温度下冷却。在每个孔中添加30μL与培养基相同的One-Glo试剂。使细胞溶解至少3分钟，且随后用光度计测量。
在XLfit中使用非线性回归分析对剂量反应作图，且计算EC50值。
结果
预期本发明的化合物和组合物(包括1-5号组合物)将调节AhR活性。预期本发明的组合物展现例如比单独使用的至少一种组分化合物更强的AhR激动剂活性。同样，预期本发明的组合物展现例如比单独使用的至少一种组分化合物更低的有效AhR激动剂活性。还预期本发明的组合物展现例如比单独使用的至少一种组分化合物更强的AhR拮抗剂活性。同样，还预期本发明的组合物展现例如比单独使用的至少一种组分化合物更低的有效AhR拮抗剂活性。
实施例5
MelanoDermTM分析
本研究的目的是评估测试物作为皮肤黑素生成调节剂在重复暴露于测试物之后的MelanoDermTM皮肤模型中的潜在作用。其次，本研究的目的是评估在重复暴露之后，测试物对MelanoDermTM皮肤模型的潜在真皮刺激。通过测量MTT(3-[4,5-二甲基噻唑-2-基]-2,5-二苯基四唑溴化物)相较于阴性/溶剂对照处理的组织在测试物处理的组织中的相对转化率来测定毒性。通过测量由测试物处理的组织相较于阴性/溶剂对照处理的组织所产生的黑素的浓度来测定对黑素产生的潜在影响。
测试物质和分析对照的识别
表2
以稀释形式测试的测试物
Figure BDA0003105902200000501
表3
1号组合物
Figure BDA0003105902200000511
表4
2号组合物
Figure BDA0003105902200000512
Figure BDA0003105902200000521
表5
3号组合物
Figure BDA0003105902200000522
表6
4号组合物
Figure BDA0003105902200000531
表7
5号组合物
Figure BDA0003105902200000532
Figure BDA0003105902200000541
分析对照包括：阳性对照-马拉色因(CV-8684)(500μM)(17AJ41)和溶剂对照-在EPI-100-LLMM中制备的DMSO(二甲亚砜)。
另外，将测试物和对照分别施加到各组4个组织，其中2个组织用于组织生存力(MTT)终点且2个组织用于黑素终点。
测试系统
本研究中使用由马特克公司(马萨诸塞州亚什兰)提供的MelanoDermTM皮肤模型。MelanoDermTM组织由正常人源表皮角质细胞(NHEK)和黑素细胞(NHM)组成，所述细胞已经培养而形成人类表皮的多层、高度分化模型。共培养物内的NHM经历自发的黑素生成，使得组织产生不同水平的色素沉着。使培养物在细胞培养插件上在空气-液体界面处生长，从而允许局部施加皮肤调节剂。MelanoDermTM模型展现类似体内的形态和超微结构特征。位于MelanoDermTM组织的基底细胞层中的NHM呈树突状且自发地产生逐渐地填充组织的层的黑素颗粒。因此，测试系统用于筛选可以相对于阴性对照抑制或刺激黑素产生的材料。
实验设计和方法
本研究的实验设计由以下组成：如果可能那么测定纯净测试物(和/或给药溶液，适当时)的pH，以及决定性分析以测定相对组织生存力和测试物作为皮肤黑素生成调节剂对重复暴露之后的MelanoDermTM皮肤模型的潜在作用。使测试物暴露于MelanoDermTM皮肤模型持续总共7天。每48小时(在距离前一次处理的48±2小时的时间范围内)将测试物局部施加到MelanoDermTM皮肤模型上。根据对照和测试物处理的组织中发生的NAD(P)H依赖性微粒体酶对MTT的还原(且就较轻微程度来说，根据琥珀酸脱氢酶对MTT的还原)来测定测试物的毒性。数据以相对存活率的形式呈现(相对于阴性/溶剂对照的MTT转化率)。通过测定测试物处理的组织相较于阴性/溶剂对照处理的组织所产生的黑素的浓度来评估对黑素产生的潜在影响。数据以经测试物处理的组织所产生的黑素浓度的形式呈现，所述浓度使用黑素标准曲线测定。替代地，数据可相对于经阴性/溶剂对照处理的组织以黑素浓度的变化百分比呈现。
使用的方法是马特克公司提供的修改的程序。
培养基和试剂
MelanoDermTM维持培养基(EPI-100-LLMM)购自马特克公司。MelanoDermTM皮肤模型(MEL-300-A)购自马特克公司。1％曲酸(在无菌去离子水中制备)购自西格玛。MTT(3-[4,5-二甲基噻唑-2-基]-2,5-二苯基四唑溴化物)购自西格玛。含有2mM L-谷氨酰胺的达尔伯克氏改良伊格尔培养基(DMEM)(MTT添加培养基)购自优质生物。萃取溶剂(异丙醇)购自奥德里奇。无菌的不含Ca++和Mg++的达尔伯克氏磷酸盐缓冲盐水(CMF-DPBS)购自英杰公司。黑素购自西格玛。无菌去离子水购自优质生物。Solvable购自珀金埃尔默。
测试物的制备和递送
除非在这个方案内另外说明，否则将二十五微升的每种测试物直接施加于组织上以便覆盖上表面。视测试物(液体、凝胶、乳膏、泡沫等)的性质而定，可能必需使用给药装置、筛网或其它辅助手段以使测试物均匀展布在组织表面上。
施用途径
在7天试验期间，每48小时(在距离前一次处理的48+2小时的时间范围内)将测试物局部施加到MelanoDermTM组织。将二十五微升的每种测试物施加到每个组织。将二十五微升的阳性对照和阴性/溶剂对照分别施加到每个组织。
pH测定
如果可能，那么测定纯净液体测试物(和/或给药溶液，适当时)的pH。使用pH试纸(例如，用0-14的pH范围来评估，和/或用5-10的pH范围来测定更精确的值)来测定pH。较窄范围的pH试纸上的典型pH增量是大约0.3到0.5pH单位。pH试纸上的最大增量是1.0pH单位。
对照
决定性分析包括阴性对照、阳性对照和一种溶剂对照(DMSO)或阳性对照和溶剂对照(DMSO)。用25μL的无菌去离子水或DMSO处理指定为分析阴性/溶剂对照的MelanoDermTM组织。用25μL的1％曲酸、马拉色因(CV-8684)(17AJ41)500μM，或2号组合物处理指定为分析阳性对照的组织。将1％曲酸存储在覆盖有铝箔的管中直到在制备的2小时内使用。阴性/溶剂和阳性对照暴露时间与测试物所使用的暴露时间相同。未处理的组织也用作对照。
评定测试物对MTT的直接还原
需要评定每种测试物直接还原MTT的能力。在MTT添加培养基中制备1.0mg/mL MTT溶液。将大约25μL的测试物添加到1mL MTT溶液中且将混合物在黑暗中、在37±1℃下培育一到三小时。同时测试阴性对照(25μL的无菌去离子水)或溶剂对照(25μL的DMSO)。如果MTT溶液颜色变成蓝色/紫色，那么推测测试物已经将MTT还原。水不溶性测试材料可能已经显示仅在测试物与培养基之间的界面处直接还原(暗化)。
MelanoDermTM的接收
在接收MelanoDermTM皮肤试剂盒后，如制造商所指示来存储溶液。将MelanoDermTM组织存储在2-8℃下直到使用为止。
接受当天(给药的前一天)，将适当体积的MelanoDermTM维持培养基(EPI-100-LLMM)去除且升温到37±1℃。将十分之九(0.9)毫升的EPI-100-LLMM/孔等分到6孔板的适当孔中。在打开密封包装之前，检查每个MelanoDermTM组织在琼脂糖凝胶与细胞培养插件之间是否存在气泡。不使用气泡大于细胞培养插件面积50％的组织。从塑料袋中去除24孔装运容器且用70％乙醇将表面消毒。将适当数目的MelanoDermTM组织从24孔装运容器中无菌转移到6孔板中。将MelanoDermTM组织在含5±1％CO2空气的湿润气氛中于37±1℃下(标准培养条件)培育过夜(至少16小时)以使组织适应新环境。打开袋之后，在组织转移时残留在装运琼脂上的任何未使用的组织用5％CO2/95％空气的气氛短暂地鼓气，且将袋密封并存储在2-8℃下以备后续使用。
决定性分析
组织暴露：在开始培养之后的至少16小时，使用数码相机对五个MelanoDermTM组织(在第0天视为未处理)进行拍摄以帮助在分析零点时对组织的色素沉着程度进行目测评定。将两个MelanoDermTM组织用CMF-DPBS冲洗，在无菌吸附纸上吸干干燥且清除过量液体。在冲洗之后，将MelanoDermTM组织转移到含MTT的适当的孔中且在MTT分析中处理。将两个或三个MelanoDermTM组织用CMF-DPBS冲洗，在无菌吸附纸上吸干干燥且清除过量液体。使用无菌手术刀从细胞培养插件中去除MelanoDermTM组织，放置在标记的1.5mL微量离心管中且存储在<-60℃下以用于后续黑素分析。
开始培养之后的至少16小时，将组织的其余部分转移到含有0.9毫升/孔的新制、预温热的EPI-100-LLMM的新6孔板上。在7天时间范围内进行试验。在第一天对四个或五个组织进行局部处理，且每48小时(在距离前一次处理的48+2小时时间范围内)用25μL的每种测试物进行处理。每天更新培养基(在距离前一次再补充营养物质的24+2小时的时间范围内)；将组织转移到含有0.9毫升/孔的新制、预温热的EPI-100-LLMM的新6孔板中。
在第一天对四个或五个组织进行局部处理，且每48小时(在距离前一次处理的48+2小时的时间范围内)分别用25μL的阳性对照和阴性/溶剂对照进行处理。每天更新培养基(在距离前一次再补充营养物质的24+2小时的时间范围内)；将组织转移到含有0.9毫升/孔的新制、预温热的EPI-100-LLMM的新6孔板中。将组织在含5±1％CO2空气的湿润气氛中于37±1℃下(标准培养条件)培育适当的暴露时间。
在给药当天，首先使用每次冲洗约500μL的CMF-DPBS轻轻地冲洗MelanoDermTM组织三次以去除任何残余测试物。将CMF-DPBS轻轻地吸移到孔中且随后用无菌抽吸器抽出。将组织转移到含有0.9mL新制、预温热的EPI-100-LLMM的新6孔板中且给予适当的测试物、阴性/溶剂或阳性对照。将组织在含5±1％CO2空气的湿润气氛中于37±1℃下(标准培养条件)培育适当的暴露时间。
在7天试验结束时，使用数码相机对用阴性/溶剂或阳性对照处理和用每种测试物处理的MelanoDermTM组织进行拍摄以有助于在分析结束时(第7天)对组织的色素沉着程度进行目测评定。随后，通过MTT还原来测定分别用阳性和阴性对照处理和用每种测试物处理的两个组织的生存力。在7天试验结束时，测定由分别用每种测试物、阳性和阴性/溶剂对照处理的三个组织所产生的黑素。
MTT分析：将在PBS中制备的MTT的10×储备液(在分批制备时过滤)解冻且在温热的MTT添加培养基中稀释以在使用之前不超过两小时产生1.0mg/mL溶液。将三百微升的MTT溶液添加到预标记的24孔板的每个指定孔中。
在暴露时间之后，将指定用于MTT分析的每个MelanoDermTM组织用CMF-DPBS冲洗(使用这个步骤可接受的喷雾瓶)，在无菌吸附纸上吸干干燥且清除过量液体。在冲洗之后，将MelanoDermTM组织转移到含有MTT的适当的孔中。将24孔板在标准条件下培育3±0.1小时。
在3±0.1小时之后，将MelanoDermTM组织在无菌吸附纸上吸干，清除过量液体且转移到每个指定孔中含有2.0mL异丙醇的预标记24孔板中。将板用石蜡膜覆盖且存储在冰箱(2-8℃)中直到采集最后一次暴露时间为止。必要时，在萃取MTT之前，将板在冰箱中存储过夜(或直到采集最后一次暴露时间之后的24小时)。随后将板在室温下振荡至少2小时。在萃取期结束时，将细胞培养插件内的液体倾倒入孔中，从孔中取出细胞培养插件。将萃取物溶液混合且将200μL转移到96孔板的适当孔中。将两百微升的异丙醇添加到指定为空白的孔中。用Molecular Devices Vmax板读取器测量每个孔550nm下的吸光度(OD550)。
黑素分析：在适当的暴露时间结束时，使用每次冲洗约500μL的CMF-DPBS将指定用于黑素分析的MelanoDermTM组织轻轻地冲洗至少三次以从培养基中去除任何残余的测试物或过量酚红，在无菌吸附纸上吸干干燥且清除过量液体。在分析结束时，使用数码相机对MelanoDermTM组织进行拍摄。使用无菌手术刀或无菌穿刺针从细胞培养插件中去除MelanoDermTM组织，放置在标记的1.5mL微量离心管中且存储在<-60℃下以用于后续黑素分析。
在黑素提取分析的当天，将切除的组织在室温下解冻大约10分钟。将250μLSolvable添加到每个微量离心管中且将管在60+2℃下培育至少16小时。通过将黑素溶解在Solvable中来制备1mg/mL黑素标准储备溶液。由范围介于0mg/mL到0.33mg/mL的1mg/mL储备液来制备一系列黑素标准物。通过将0.6mL的1mg/mL黑素标准储备溶液添加到1.2mLSolvable中且随后制备一系列五种以上稀释液(稀释系数为3)来制备标准物系列。Solvable用作零点标准物。将黑素标准物系列和Solvable在60+2℃下培育至少16小时。
在开始黑素提取之后至少16小时，将含有样本(代表从MelanoDermTM组织中提取的黑素)和标准物的管在室温下冷却且在室温下以13,000rpm离心5分钟。将200μL的样本(单孔)或标准物(复孔)转移到96孔板的适当孔中。将两百微升的Solvable以复孔形式添加到指定为空白的孔中。用Molecular Devices Vmax板读取器(选择自动混合功能)测量每个孔490nm下的吸光度(OD490)。
用于评定残余测试物还原MTT的杀灭对照
为了证明可能的残余测试物不具有直接还原MTT的作用，在决定性分析中进行功能检查以表明测试材料不与组织结合且不产生假MTT还原信号。
为了确定残余测试物是否具有直接还原MTT的作用，使用冷冻杀灭的对照组织。通过将未处理的MelanoDermTM/EpiDermTM(不含黑素细胞的MelanodermTM)组织放置在-20℃冷冻机中至少过夜，解冻到室温，且随后再冷冻来制备冷冻杀灭的组织。组织一旦被杀灭，那么可在冷冻机中无限期地存储。可接受已由马特克公司制备的冷冻杀灭组织，且存储在-20℃冷冻机中直到使用为止。为了对残余测试物还原进行测试，以正常方式用测试物处理杀灭的组织。所有分析程序都以与活组织相同的方式进行。由于预期杀灭的组织内的残余NADH和相关酶引起少量MTT还原，因此对用无菌去离子水处理的至少一种杀灭对照(阴性杀灭对照)进行并行测试。
如果在测试物处理的杀灭对照中观察到极少或无MTT还原，那么在测试物处理的活组织中观察到的MTT还原可归因于活细胞。如果在处理的杀灭对照中存在明显的MTT还原(相对于处理的活组织中的量)，那么必须采取额外步骤来促成化学还原或可认为测试物在这个系统中是不可测试的。
数据分析
计算空白孔的平均OD550值。通过将空白孔的平均OD550值从其平均OD550值中减去来测定阴性/溶剂对照的平均OD550校正值。通过从每一者中减去空白孔的平均OD550值来测定个别测试物暴露和阳性对照暴露的OD550校正值。使用Excel电子表格进行所有计算。虽然所讨论的算法是为了计算处理组水平的最终终点分析而进行，但可将相同计算应用于个别重复实验。
校正的测试物暴露OD550＝测试物暴露OD550-空白平均OD550
如果使用杀灭对照(KC)，那么进行以下额外计算以对测试物残余物直接还原的MTT的量进行校正。从测试物处理的杀灭对照中的每一个的原始OD550值中减去阴性对照杀灭对照的原始OD550值，以测定测试物处理的杀灭对照的OD550净值。
每种测试物KC的净OD550＝测试物KC的原始OD550-阴性/溶剂对照KC的原始OD550
净OD550值表示由于测试物残余物在特定暴露时间直接还原而引起的还原的MTT的量。一般来说，如果OD550净值大于0.150，那么将从处理的活组织的OD550校正值中减去MTT还原的净量，以获得最终的OD550校正值。随后这些最终OD550校正值将用于测定对照生存力的百分比。
最终校正的OD550＝校正的测试物OD550(活的)-测试物(KC)的净OD550
最后，将产生对照计算的以下百分比：
生存力％＝[(测试物或阳性对照的最终校正的OD550)/(阴性/溶剂对照的校正的平均OD550)]×100
黑素分析：捕获原始吸光度数据，作为打印文件保存且导入到Excel电子表格中。测定每种测试样本(代表第0天从未处理的MelanoDermTM组织中、第7天从用每种测试物、阴性/溶剂或阳性对照处理的MelanoDermTM组织中提取的黑素)和黑素标准物的OD490值。通过减去空白孔的平均OD490值来测定测试样本和每种黑素标准物的OD490校正值。将标准曲线绘制为标准物浓度(以mg/mL为单位)(y轴)相对于对应的校正吸光度。从标准曲线(线性)中内插每个个别组织中的黑素的量。最后，分别计算每个测试物或对照处理组的平均黑素浓度。
结果
图1概述测试物、阳性对照和未处理组织的平均组织生存力和黑素浓度结果。初步结果表明，应用于本发明的咔唑化合物的某些配制物可独立地展现中等皮肤增白作用，其使咔唑的皮肤暗化活性减弱。
图2概述在独立实验中观察到的测试物和未处理组织的平均组织生存力和黑素浓度结果。包括例如马拉色因和靛玉红的组合处理展现了比任一化合物本身更有效的皮肤增白作用。
图4概述测试物、测试组合物、阳性对照和溶剂对照的平均组织生存力和黑素浓度结果。当以单一组合物组合时，包括1号和2号组合物的化合物展现协同效应。
图5概述测试物、测试组合物、阳性对照和溶剂对照的平均组织生存力和黑素浓度结果。当以单一组合物组合时，包括2号、3号、4号和5号组合物的化合物展现协同效应。
实施例6
含有马拉色菌属衍生的化合物和/或其化学类似物的组合物的黑素生成潜力
本研究的目的是观察且报告暴露于含有马拉色菌属衍生的化合物和/或其化学类似物的组合物的B16黑素细胞的黑素生成和生存力。
材料和试剂
铺板培养基将包括不具有L-谷氨酰胺、FBS、青霉素/链霉素和L-谷氨酰胺的DMEM。分析培养基将包括不具有酚红和L-谷氨酰胺、FBS、青霉素/链霉素、L-谷氨酰胺和aMSH的DMEM。其它试剂将包括曲酸、DMSO和MTT。测试细胞将是B16细胞(ATCC CRL-6475)。
方案
培养B16黑素细胞直到70％汇合且收集。将细胞以4000个细胞/孔的密度接种在96孔板中且允许粘附过夜。第二天，在B16分析培养基中稀释测试物、测试组合物和对照。抽吸过夜培养基且施加200μL测试物和对照。将细胞在37℃和10％CO2下培育72小时。在72小时培育之后，在540nm处读取吸光度。去除培养基且替换为100μL含有1mg/mL MTT的铺板培养基并在37℃和10％CO2下培育2小时。去除MTT培养基且替换为200μL的95％乙醇/5％异丙醇并振荡15分钟。随后在570nm处读取MTT吸光度。
结果
预期本发明的化合物和组合物(包括1-5号组合物)将抑制黑素生成。预期本发明的组合物展现例如比至少一种组分化合物更强的黑素生成抑制活性。同样，预期某些组合物展现例如比至少一种组分化合物更低的有效黑素生成抑制活性。
实施例7
体外功效
预期本发明的化合物和组合物将诱导黑素细胞凋亡且调节黑素细胞活性、黑素产生、黑素浓度、黑素体生物合成和/或黑素体转移。还考虑了本发明的某些化合物和组合物对这些生物过程的影响将不太强。这类化合物和组合物可具有比更强物种更有利的毒性特征。
实施例8
体内功效
预期本发明的化合物和组合物将调节皮肤色素沉着，包括使皮肤增白，且改善由不同病症引起的色素沉着过度/色素沉着不足。进一步预期本发明的化合物和组合物就例如半衰期和吸收来说将展现有利的药代动力学特征。某些化合物将展现较长半衰期，而其它将展现较短半衰期。类似地，某些化合物将展现不同吸收特征，其中一些化合物耗费较长时间被完全吸附，而其它耗费较少时间被完全吸附。
实施例9
马拉色因和靛玉红的化学类似物的合成
AB17590的合成
如图6A中所示，在0℃下，向化合物1a(25.0g，0.357mol，1.0当量)于四氢呋喃(250mL)中的溶液中添加乙炔基溴化镁(0.5M于THF中，1.07L，0.535mol，1.5当量)且将反应混合物升温到室温并搅拌2h。随后将混合物用饱和氯化铵水溶液淬灭且用乙酸乙酯萃取。将有机层用无水Na2SO4干燥且在减压下浓缩。通过硅胶色谱(0-10％乙酸乙酯/石油醚)来纯化残余物以得到化合物1b(9.5g，27％)。TLC：PE:EA＝20:1，254nm；Rf(化合物1a)＝0.3；Rf(化合物1b)＝0.7。
在氮气气氛下，在0℃下，向化合物1b(9.5g，98.96mmol，1.0当量)于四氢呋喃(100mL)中的混合物中添加60％氢化钠(4.7g，0.119mol，1.2当量)于二甲基甲酰胺(50mL)中的溶液。在30分钟之后，在0℃下添加硫酸二甲酯(22.4g，0.178mol，1.8当量)。在添加之后，使反应混合物升温到室温并在室温下搅拌30min，且随后缓慢添加乙酸(1ml)。从反应混合物中直接蒸馏产物。由此获得化合物1c(10.0g，91％产率)。
在室温下，在氮气气氛下，向化合物1(8.0g，24.02mmol，1.0当量)和化合物1c(2.9g，26.43mmol，1.1当量)于三乙胺(80mL)中的溶液中添加碘化亚铜(456mg，2.40mmol，0.1当量)和Pd(PPh3)2Cl2(337mg，0.480mmol，0.02当量)。将混合物在室温下搅拌2h。通过TLC监测反应混合物的进程。将反应混合物用水稀释且用乙酸乙酯萃取。将有机层用无水硫酸钠干燥且在减压下浓缩。通过硅胶色谱(0～10％乙酸乙酯/石油醚)来纯化残余物以得到化合物2(7.0g，92％)。TLC：PE:EA＝10:1，254nm；Rf(化合物1)＝0.8；Rf(化合物2)＝0.6。
向烘干的烧瓶中添加二氯化铂(694mg，2.06mmol，0.1当量)、碳酸钠(3.3g，30.95mmol，1.5当量)、三(五氟苯基)膦(2.2g，4.13mmol，0.2当量)、6-甲基吲哚(4.8g，41.27mmol，2.0当量)和化合物2(6.5g，20.63mmol，1.0当量)于二恶烷(650mL)中的混合物。将烧瓶用氮气脱气，密封且加热到100℃持续16h。通过TLC监测反应混合物的进程。将溶剂在减压下浓缩。将残余物用乙酸乙酯稀释且用水、饱和盐水萃取。将有机层用无水硫酸钠干燥且在减压下浓缩。通过硅胶色谱(0～10％乙酸乙酯/石油醚)来纯化残余物以得到化合物3(3.0g，36％)。TLC：PE:EA＝10:1，254nm；Rf(化合物2)＝0.6；Rf(化合物3)＝0.2。
在0℃下，向化合物3(3.0g，7.50mmol，1.0当量)于四氢呋喃(30mL)中的溶液中添加甲醇钠(5M于MeOH中，6.0mL，29.98mmol，4.0当量)。使反应混合物升温到室温且搅拌2h。通过TLC监测反应混合物的进程。将反应混合物在减压下浓缩。通过硅胶色谱(0～10％乙酸乙酯/石油醚)来纯化残余物以得到化合物4(1.5g，66％)。TLC：PE:EA＝5:1，254nm；Rf(化合物3)＝0.7；Rf(化合物4)＝0.4。
在0℃下，在氩气下，向干燥的500mL三颈圆底烧瓶中添加二甲基甲酰胺(10mL)。随后，缓慢添加氧氯化磷(1.2g，7.60mmol，1.2当量)，同时在10min内维持内部温度低于5℃。在0℃下搅拌30min之后，缓慢添加化合物4(1.9g，6.33mmol，1.0当量)于二甲基甲酰胺(20mL)中的溶液，同时在10分钟内维持内部温度低于5℃。将所得混合物在室温下搅拌16h。在反应完成之后(通过TLC使用20％乙酸乙酯/己烷监测)，将反应混合物倒入饱和碳酸氢钠水溶液(50mL)中且搅拌1h。将所得混合物用乙酸乙酯(2×100mL)萃取。将合并的有机层用水、饱和盐水洗涤且用硫酸钠干燥。过滤溶剂且在减压下浓缩。通过硅胶色谱(10-50％乙酸乙酯/石油醚)来纯化残余物以获得化合物5(1.8g，89％)。TLC：PE:EA＝1:1，254nm；Rf(化合物4)＝0.8；Rf(化合物5)＝0.5。
在0℃下，向化合物5(1.8g，5.49mmol，1.0当量)在四氢呋喃(20mL)中的溶液中添加二碳酸二叔丁酯(3.0g，13.72mmol，2.5当量)和4-二甲氨基吡啶(1.4g，11.25mol，2.05当量)。将反应混合物升温到室温且搅拌3h。通过TLC监测反应混合物的进程。将反应混合物在减压下浓缩，且将残余物用乙酸乙酯稀释并用1N盐酸、饱和碳酸氢钠水溶液(300mL)和盐水(300mL)洗涤。将有机层分离且用无水硫酸钠干燥，过滤并浓缩。通过硅胶色谱(0-10％乙酸乙酯/石油醚)来纯化残余物以获得化合物6(2.4g，82％)。TLC：PE:EA＝10:1，254nm；Rf(化合物5)＝0.1；Rf(化合物6)＝0.5。
在0℃下，向化合物6(2.4g，4.55mmol，1.0当量)于叔丁醇(60mL)中的溶液中添加2-甲基-2-丁烯(30mL)，随后添加亚氯酸钠(8.2g，90.91mmol，20.0当量)、磷酸二氢钠(14.2g，90.91mmol，20.0当量)和水(60mL)。将混合物缓慢升温到室温且在室温下搅拌15h。通过TLC监测反应混合物的进程。将反应混合物用二氯甲烷(100mL)稀释且分离。将有机层用水(80mL)、盐水(80mL)洗涤，用无水硫酸钠干燥且在减压下浓缩以获得粗化合物7(2.5g，99％)。TLC：PE:EA＝2:1，254nm；Rf(化合物6)＝0.7；Rf(化合物7)＝0.3。
在0℃下，向化合物7(2.5g，4.60mmol，1.0当量)于二甲基甲酰胺(30mL)中的溶液中添加碳酸钾(952mg，6.89mmol，1.5当量)和碘甲烷(978mg，6.89mmol，1.5当量)。将反应混合物升温到室温且搅拌2h。通过TLC监测反应混合物的进程。将反应混合物用乙酸乙酯(100mL)稀释且用水(100mL)和盐水(100mL)洗涤。将有机层用无水硫酸钠干燥且在减压下浓缩。通过硅胶色谱(5-17％乙酸乙酯/石油醚)来纯化残余物以获得化合物8(2.3g，89％)。TLC：PE:EA＝5:1，254nm；Rf(化合物7)＝0.1；Rf(化合物8)＝0.6。
将化合物8(1.3g，2.33mmol，1.0当量)于盐酸(3M于EA中，30mL)中的混合物在室温下搅拌16h。通过TLC监测反应。随后将混合物在减压下浓缩。通过硅胶色谱(10-25％乙酸乙酯/石油醚)来纯化残余物以得到呈黄色固体状的化合物AB17590(502mg，61％)。TLC：PE:EA＝3:1，254nm；Rf(化合物8)＝0.8；Rf(化合物AB17590)＝0.5；LC-MS：359(M+1)+；1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.12(d,J＝19.7Hz,2H),7.94(s,1H),7.42(s,1H),7.35(d,J＝8.1Hz,1H),7.13(t,J＝7.8Hz,1H),7.04(d,J＝8.2Hz,1H),6.93(dd,J＝15.7,8.6Hz,2H),5.04(d,J＝9.1Hz,1H),3.95(s,3H),2.45(s,3H),1.42(d,J＝8.4Hz,1H),0.78-0.68(m,1H),0.62(d,J＝4.8Hz,1H),0.54-0.41(m,2H)。
AB17653的合成
如图6B中所示，在氮气气氛下，将化合物1(721mg，3.20mmol，1.0当量)、化合物1a(560mg，3.20mmol，1.0当量)和碳酸钠(866mg，8.17mmol，2.55当量)于甲醇(10mL)中的混合物在室温下搅拌3h。通过TLC监测反应混合物的进程。反应完成之后，过滤混合物且用甲醇和水洗涤滤饼以得到呈红色固体状的化合物AB17653(979mg，89％)。TLC：PE/EA＝3/1，254nm；Rf(化合物1)＝0.6；Rf(化合物AB17653)＝0.4；LC-MS：338.95(M-1)-；1H NMR(400MHz,d6-DMSO)δ11.01(d,J＝21.5Hz,2H),8.64(d,J＝8.3Hz,1H),7.62(d,J＝7.7Hz,1H),7.55(t,J＝7.6Hz,1H),7.39(d,J＝8.1Hz,1H),7.18(d,J＝8.4Hz,1H),7.00(dd,J＝8.8,4.6Hz,2H)。
AB17654的合成
如图6B中所示，在氮气气氛下，将化合物AB17653(979mg，2.88mmol，1.0当量)和盐酸羟胺(520mg，7.49mmol，2.6当量)于吡啶(30mL)中的混合物在120℃下搅拌2h。通过LCMS监测反应混合物的进程。反应完成之后，将混合物在减压下浓缩且添加1N HCl直到出现固体。过滤混合物且将滤饼溶解在1N NaOH中。随后添加3N HCl以调节pH＝5且过滤。用1N HCl洗涤滤饼以得到呈红色固体状的化合物AB17654(500mg，48％)。LC-MS：357.95(M+1)+；1HNMR(400MHz,d6-DMSO)δ13.59(s,1H),11.71(s,1H),10.82(s,1H),8.53(d,J＝8.4Hz,1H),8.19(d,J＝7.7Hz,1H),7.42-7.35(m,2H),7.11-6.96(m,3H)。
AB17655的合成
如图6B中所示，在氮气气氛下，将化合物2(637mg，3.86mmol，1.0当量)、化合物1a(676mg，3.86mmol，1.0当量)和碳酸钠(1044mg，9.84mmol，2.55当量)于甲醇(10mL)中的混合物在室温下搅拌3h。通过TLC监测反应混合物的进程。反应完成之后，过滤混合物且用甲醇和水洗涤滤饼以得到呈红色固体状的化合物AB17655(1027mg，95％)。LC-MS：281.05(M+1)+；1H NMR(400MHz,d6-DMSO)δ11.06(s,1H),10.86(s,1H),8.54(dd,J＝10.5,2.7Hz,1H),7.67-7.53(m,2H),7.41-7.38(m,1H),7.09-6.98(m,2H),6.85(dd,J＝8.5,4.8Hz,1H)。
AB17656的合成
如图6B中所示，在氮气气氛下，将化合物AB17655(1027mg，3.67mmol，1.0当量)和盐酸羟胺(663mg，9.54mmol，2.6当量)于吡啶(30mL)中的混合物在110℃下搅拌2h。通过LCMS监测反应混合物的进程。反应完成之后，将混合物在减压下浓缩且添加1N HCl直到出现固体。过滤混合物且将滤饼溶解在1N NaOH中。随后添加3N HCl以调节pH＝5且过滤。用1NHCl洗涤滤饼以得到呈红色固体状的化合物AB17656(500mg，48％)。LC-MS：296.00(M+1)+；1HNMR(400MHz,d6-DMSO)δ13.60(s,1H),11.77(s,1H),10.69(s,1H),8.43(s,1H),8.20(d,J＝7.7Hz,1H),7.39(d,J＝5.7Hz,2H),7.02(s,1H),6.91(s,1H),6.83(d,J＝4.9Hz,1H)。
AB17657的合成
如图6B中所示，在氮气气氛下，将化合物3(362mg，2.46mmol，1.0当量)、化合物1a(431mg，2.46mmol，1.0当量)和碳酸钠(666mg，6.28mmol，2.55当量)于甲醇(10mL)中的混合物在室温下搅拌3h。通过TLC监测反应混合物的进程。反应完成之后，过滤混合物且用甲醇和水洗涤滤饼以得到化合物4(606mg，93％)。TLC：PE/EA＝1/1，254nm；Rf(化合物3)＝0.7；Rf(化合物4)＝0.5。
在氮气气氛下，将化合物4(606mg，2.31mmol，1.0当量)和盐酸羟胺(418mg，6.01mmol，2.6当量)于吡啶(20mL)中的混合物在120℃下搅拌2h。通过TLC监测反应混合物的进程。反应完成之后，将混合物在减压下浓缩且添加1N HCl直到出现固体。过滤混合物且将滤饼溶解在1N NaOH中。随后添加3N HCl以调节pH＝5且过滤。用1NHCl洗涤滤饼以得到呈棕色固体状的化合物AB17657(500mg，78％)。TLC：PE/EA＝1/1，254nm；Rf(化合物4)＝0.5；Rf(化合物AB17657)＝0.4；LC-MS：278.10(M+1)+；1H NMR(400MHz,d6-DMSO)δ13.60(s,1H),11.77(s,1H),10.69(s,1H),8.43(s,1H),8.20(d,J＝7.7Hz,1H),7.39(d,J＝5.7Hz,2H),7.02(s,1H),6.91(s,1H),6.83(d,J＝4.9Hz,1H)。
AB17658的合成
如图6B中所示，在氮气气氛下，将化合物5a(337mg，1.73mmol，1.0当量)、化合物5b(554mg，1.73mmol，1.0当量)和氢氧化钾(1114mg，3.46mmol，2.0当量)于乙腈(10mL)中的混合物在35℃下搅拌1.5h。通过TLC监测反应混合物的进程。反应完成之后，将混合物在减压下浓缩且通过硅胶色谱来纯化残余物以得到化合物5c(436mg，99％)。TLC：PE/EA＝1/1，254nm；Rf(化合物5a)＝0.8；Rf(化合物5c)＝0.5。
在氮气气氛下，将化合物5(330mg，1.72mmol，1.0当量)、化合物5c(436mg，1.72mmol，1.0当量)和碳酸钠(465mg，4.38mmol，2.55当量)于甲醇(10mL)中的混合物在室温下搅拌3h。通过TLC监测反应混合物的进程。反应完成之后，过滤混合物且用甲醇和水洗涤滤饼以得到化合物6(617mg，93％)。TLC：PE/EA＝1/1，254nm；Rf(化合物5)＝0.5；Rf(化合物6)＝0.4。
在氮气气氛下，将化合物6(617mg，1.60mmol，1.0当量)和盐酸羟胺(290mg，4.17mmol，2.6当量)于吡啶(20mL)中的混合物在110℃下搅拌2h。通过TLC监测反应混合物的进程。反应完成之后，将混合物在减压下浓缩且添加1N HCl直到出现固体。过滤混合物且将滤饼溶解在1N NaOH中。随后添加3N HCl以调节pH＝5且过滤。用1NHCl洗涤滤饼以得到呈红色固体状的化合物AB17658(500mg，78％)。TLC：PE/EA＝1/1，254nm；Rf(化合物6)＝0.4；Rf(化合物AB17658)＝0.3；LC-MS：402.95(M+1)+；1H NMR(400MHz,d6-DMSO)δ11.86(s,1H),11.39(s,1H),9.40(d,J＝2.2Hz,1H),8.33(d,J＝1.8Hz,1H),8.06(dd,J＝8.6,2.4Hz,1H),7.59(dd,J＝8.4,2.0Hz,1H),7.43(d,J＝8.6Hz,1H),7.02(d,J＝8.6Hz,1H)。
实施例10
马拉色因、其它马拉色菌属衍生的化合物和其化学类似物的光防护特性的体内评 定
1％马拉色因配制物
本研究中使用的1％马拉色因配制物含有以下成分：水(aqua)-65.939％；二甲基异山梨糖醇-20.000％；橄榄油甘油聚醚-8酯-3.000％；甘油-2.991％；椰子烷烃-2.700％；丙烯酸羟乙酯/丙烯酰二甲基牛磺酸钠共聚物-1.700％；马拉色因-1.000％；戊二醇-1.000％；苯氧基乙醇-0.640％；椰油基辛酸酯/癸酸酯-0.300％；辛酰基乙二醇-0.200％；氯苯甘油醚-0.160％；脱水山梨糖醇异硬脂酸酯-0.140％；生育酚-0.100％；聚山梨醇酯60-0.080％；和EDTA二钠-0.050％。
实验设计
这个概念验证研究中包括39岁皮肤类型IV女性。
在实验的第1天，使用靶向宽带双光UVB装置评估受试者以确定最小红斑剂量(“MED”)。将6个方形模板放置在测试受试者的后背的左下方(1.5cm×1.5cm)。参见图7。
图8中列出了针对受试者的皮肤类型的MED光测试剂量，单位为mJ/cm2。在照射之后的二十四小时，受试者返回进行MED评定。如图12中所示，受试者的MED是120mJ。
随后，将1％马拉色因施加于受试者的右背的上部测试方块中，每天两次，持续7天。从第4天到第7天每天两次处理第二个右下方方块，且在第7天对第三个中间方块进行一次施药。每天两次在左背上施加产物媒剂，持续7天。参见图13。受试者在第7天返回研究中心进行照射。每个测试部位均用120mJ的UVB暴露进行照射。受试者在24小时内返回以进行光毒性/光防护评定。参见图14。
受试者继续实验，接受1％马拉色因持续总共14天。图15-16显示了暴露于以下处理的受试者皮肤的区域：在部位14上，一日两次施加1％马拉色因，持续14天；在部位10上，一日两次施加1％马拉色因，持续11天；在部位8上，一日两次施加1％马拉色因，持续8天；在部位3上，一日两次施加1％马拉色因，持续3天；在部位1上，施加1％马拉色因一次；且在媒剂部位上，一日两次施加媒剂，分别持续7天和9天。
结果
如图14中所示，在UVB暴露之后的24小时，受试者在媒剂测试部位处展现1+到2+个红斑。参见图11中的红斑量表。相比之下，在1％马拉色因7天处理部位处注意到较少红斑(轻度)。对处理3天的部位进行的评估显示最少红斑，且1天施药部位无红斑。使用Mexameter MX16获取每个部位的比色测量值且支持临床观察结果。在媒剂部位中，随后在马拉色因7天处理部位中观察到最大红斑读数。分别针对马拉色因第3天和第1天部位观察到最低值。参见图9。
受试者继续实验且在第14天返回进行重复UVB照射，其中在第15天进行解释。参见图15。第15天的临床评估揭露第7天在媒剂部位出现中度红斑，且在第9天显著减少。参见图16。在1％马拉色因处理的部位(包括第14天、第10天和第8天部位)注意到较少红斑(轻度)。第1天和第3天在1％马拉色因部位注意到最少红斑。获取每个部位的比色读数以测量红斑和黑素指数。结果支持1％马拉色因处理的部位处具有较少红斑的临床观察结果。参见图10。
第9天从媒剂部位获取活组织切片，且第1天和第3天从1％马拉色因处理的部位获取活组织切片。根据用于黑素细胞定量和昂飞(affymetrix)研究的苏木精(Hematoxylin)和曙红(Eosin)、Fontana Masson染色和MART I来分析试样。进行以下定量评估：
诊断：(A)皮肤-第1天处理(1％马拉色因)：篮式编织状角质层，正常出现的黑素细胞(通过用Mart-1进行免疫过氧化酶染色来确认)，和表皮黑素(通过用Fontana Masson进行免疫过氧化酶染色来确认)。
诊断：(B)皮肤-第3天处理(1％马拉色因)：篮式编织状角质层，当相较于C和D时，树突状黑素细胞较少(通过用MART-1/Melan A进行免疫过氧化酶染色来确认)，且伴随表皮黑素稍微减少，呈跳跃区域状(通过用Fontana Masson进行免疫过氧化酶染色来确认)。
诊断：(C)皮肤-媒剂：正常出现的表皮黑素细胞(通过用Mart-1进行免疫过氧化酶染色来确认)和表皮黑素(通过用Fontana Masson进行免疫过氧化酶染色来确认)。
诊断：(D)皮肤-正常：正常出现的表皮黑素细胞(通过用Mart-1进行免疫过氧化酶染色来确认)和表皮黑素(通过用Fontana Masson进行免疫过氧化酶染色来确认)。
结论
这个概念验证研究的结果证实马拉色因的UV防护特性。
实施例11
通过基因表达分析评定马拉色因对细纹和皱纹的效果
研究马拉色因对涉及原胶原形成和弹性蛋白分解的酶的表达的影响。如下详述，与胶原蛋白增加和弹性蛋白分解减少有关的基因在用测试化合物治疗人类受试者后发生明显变化。
胶原蛋白是与弹性蛋白结合起作用以形成皮肤的胞外基质的结构蛋白的蛋白质。胶原蛋白通过成纤维细胞合成为称为原胶原的前体分子。原胶原随后通过细胞分泌，在细胞外，其形成为胶原蛋白纤丝。通过转化生长因子β(TGFβ)来控制胶原蛋白的合成。胶原蛋白通过基质金属蛋白酶(MMP)在皮肤中分解。弹性蛋白以与胶原蛋白类似的方式由前体分子弹性蛋白原形成。弹性蛋白自然地随着年龄减少且类似地通过MMP分解。
胶原蛋白水平可以两种方式减少：抑制原胶原形成和通过基质金属蛋白酶(MMP)降解。通过抑制TGFβ来实现原胶原形成的抑制。如UV和氧化应激的环境因素可活化MMP，进而增加胶原蛋白降解。胶原蛋白降解途径的调控因子(金属蛋白酶(TIMP)的组织抑制因子)抑制MMP，进而减少胶原蛋白降解。
相反地，胶原蛋白可通过皮肤以多个方式增加。首先，可增加TGFβ，从而允许合成较大数量的原胶原。其次，可通过TIMP抑制MMP，从而允许胶原蛋白分解减少。这种情况不需要一起发生以增加胶原蛋白。然而，如果其确实一起发生，那么胶原蛋白的增加更大。结果列表如下。
差异基因倍数表达分析用于分析马拉色因和化合物AB17151。在施加化合物6周之后获取来自人类受试者的活检体。两位参与者施加AB17151且一位参与者施加马拉色因。获取经处理的皮肤的活检体，且作为对照并与来自未经处理的皮肤的活检体进行比较。分析活检体中下表所指示的基因的RNA表达的变化。
表8.马拉色因对胶原蛋白形成和分解的影响
Figure BDA0003105902200000691
Figure BDA0003105902200000701
在表中，括弧中的数字指示统计学上不显著的变化。所有数字指示表达的倍数变化。负值指示活性的降低。活性的负3倍数变化例如意指值变化了负3倍，从而意指其变为其原始值的1/3。
马拉色因诱导原胶原C内肽酶增强子2(PCOLCE2)的增加，所述原胶原C内肽酶增强子2(PCOLCE2)参与原胶原(胶原蛋白的构建块)的形成。胶原蛋白基因在两个AB17151样品中增加，其中一些基因变化至多7倍。一个AB17151样品也大大地减少基质金属肽酶12(MMP12)，所述基质金属肽酶12(MMP12)参与弹性蛋白的分解。马拉色因抑制的基质金属肽酶7(MMP7)也参与弹性蛋白的分解。
这些数据指示马拉色因对细纹和皱纹的效果(在下文实施例中所论述)可由于马拉色因如上文所指示通过增强胶原/原胶原基因和/或通过利用(例如)基质金属蛋白酶7抑制弹性蛋白分解而促进原胶原形成而产生。
实施例12
体内评定马拉色因对细纹和皱纹的效果
评估马拉色因制剂对细纹和皱纹的效果。在本研究中，将含皮肤色素沉着过度区域的人类受试者随机分组到3个组中的一个中。产物使用组包括马拉色因0.05％、0.1％和1.0％。每日两次将一毫升产物(下文详述的制剂)施加到受试者的面部。在早晨施加之后五分钟，施加SPF 50防晒剂以保护经处理区域免受日晒。每位受试者在基线、2、4、8、14、18和22周处进行评定。处理在14周停止。第18周和第22周观测结果用于确定朝向基线的任何恢复。
使用测试成分的十一位受试者在第14周完成。基于此数据汇编以下分析。在评估细纹和皱纹方面具有经验的M.D.皮肤病学家对本研究中的受试者进行评估且获得列表如下的测量值。如G.Lemperle等人,A classification of facial wrinkles,Plast.Reconstr.Surg.108:1735(2001)中所描述进行皱纹评定、分类和评估，其以引用的方式全部并入本文中。获得以下数据。对于每位受试者，指示马拉色因制剂百分比。
表9.细纹/皱纹数据。
<u>受试者</u> <u>第0周</u> <u>第2周</u> <u>第4周</u> <u>第8周</u> <u>第14周</u>
VT01(0.5％) 3 2 2 2 2
VT02(0.1％) 2 3 3 3 3
VT03(0.5％) 3 3 3 3 3
VT04(1.0％) 3 3 2 2 2
VT05(0.1％) 2 0 0 0 0
VT06(0.5％) 3 2 2 2 2
VT07(1.0％) 3 2 2 2 2
VT08(0.1％) 2 1 1 1 1
VT09(0.5％) 2 0 0 0 0
VT10(1.0％) 2 1 1 1 1
VT11(0.1％) 3 3 3 3 3
平均值 2.55 1.82 1.73 1.73 1.73
P值(学生T检验(Student's T test)) 0.024 0.011 0.011 0.011
在每次问诊时完成受试者自我评定。询问总数十一(11)位受试者，使其对关于其细纹和皱纹和相关肌肤纹理、色调和坚实度的改善(如果存在)的问题作出答复。将每个回答从6到1进行评级，其中各自具有以下含义：6-强烈同意，5-同意，4-略微同意，3-略微不同意，2-不同意，和1-强烈不同意。计算回答得分为6或5的受试者的百分比且呈现在下文数据中。
表10.受试者自我评定。
数目 问题/表述 第2周 第4周 第8周 第14周
1 我的细纹和皱纹不太可见 36.36％ 54.55％ 63.64％ 90.91％
2 我具有更光滑的肌肤纹理 45.45％ 63.64％ 81.82％ 90.91％
3 我的肌肤纹理不那么粗糙 54.55％ 63.64％ 72.73％ 100.00％
4 我的皮肤具有更亮的色调 45.45％ 63.64％ 72.73％ 81.82％
5 我的皮肤坚实度得到改善 36.36％ 63.64％ 63.64％ 72.73％
6 我的皮肤看起来更年轻和健康 45.45％ 63.64％ 81.82％ 72.73％
7 总体肌肤纹理得到改善 54.55％ 63.64％ 81.82％ 90.91％
8 总体肤色得到改善 54.55％ 63.64％ 72.73％ 81.82％
表11.前述表的图例。
Figure BDA0003105902200000711
Figure BDA0003105902200000721
如上文所描述施加以下制剂且作为本发明的组合物的实例：
表12.1％马拉色因制剂
成分 百分比 用途
水(浅绿色) 65.94％ 溶剂
二甲基异山梨糖醇 20.00％ 溶剂、皮肤穿透剂
橄榄油甘油聚醚-8酯 3.00％ 乳化剂、润肤剂
甘油 2.99％ 保湿剂、溶剂
椰子烷烃 2.70％ 润肤剂、溶剂
丙烯酸羟乙酯/丙烯酰二甲基牛磺酸钠共聚物 1.70％ 乳液稳定剂
马拉色因 1.00％ 研究中的成分；皮肤增白剂
戊二醇 1.00％ 皮肤穿透剂
苯氧基乙醇 0.64％ 防腐剂
可可辛酸酯/癸酸酯 0.30％ 润肤剂
辛酰基乙二醇 0.20％ 润肤剂
氯苯甘油醚 0.16％ 防腐剂
脱水山梨糖醇异硬脂酸酯 0.14％ 乳化剂
生育酚 0.10％ 抗氧化剂
聚山梨醇酯60 0.08％ 乳化剂
EDTA二钠 0.05％ 螯合剂
总计： 100.00％
表13.0.5％马拉色因制剂
Figure BDA0003105902200000722
Figure BDA0003105902200000731
表14.0.1％马拉色因制剂
<u>成分</u> <u>百分比</u> <u>用途</u>
水(浅绿色) 66.84％ 溶剂
二甲基异山梨糖醇 20.00％ 溶剂、皮肤穿透剂
橄榄油甘油聚醚-8酯 3.00％ 乳化剂、润肤剂
甘油 2.99％ 保湿剂、溶剂
椰子烷烃 2.70％ 润肤剂、溶剂
丙烯酸羟乙酯/丙烯酰二甲基牛磺酸钠共聚物 1.70％ 乳液稳定剂
戊二醇 1.00％ 皮肤穿透剂
苯氧基乙醇 0.64％ 防腐剂
可可辛酸酯/癸酸酯 0.30％ 润肤剂
辛酰基乙二醇 0.20％ 润肤剂
氯苯甘油醚 0.16％ 防腐剂
脱水山梨糖醇异硬脂酸酯 0.14％ 乳化剂
马拉色因 0.10％ 研究中的成分；皮肤增白剂
生育酚 0.10％ 抗氧化剂
聚山梨醇酯60 0.08％ 乳化剂
EDTA二钠 0.05％ 螯合剂
100.00％
实施例13
体内评定马拉色因对皮肤增白的影响
在紧接在前的实施例的研究中，同样从经处理受试者收集与皮肤增白相关的数据。每位受试者都具有来自黑斑或来自发炎后色素沉着过度的色素沉着过度。如在下表中所使用的，“参与(involved)”的缩写“Inv”是指具有色素沉着过度的面部区域。“未参与(uninvolved)”的缩写“Uninv”是指并不具有色素沉着过度皮肤的面部区域。Inv和Uninv区域都经处理。
评估：在基线和在第2、4、8、14、18和22周使用采用Mexameter MX 18进行的比色测量。在经处理区域中进行脱色素的临床评定。在基线和在第2、4、8、14、18和22周进行评定。增白评定包括正常皮肤的增白和/或皮肤变色的严重程度(如果存在)(参见量表)。在相同时间间隔下测量总体改善。在所有问诊时，记录任何不良事件(AE)，包括瘙痒、灼烧、红斑、水肿、干燥、脱屑或皮肤剥落(参见等级量表)。没有记录到AE。在下文报道的数据中，负百分比指示色素沉著减少，其指示增白。正百分比指示色素沉著增加，其指示暗化。“浓度(Conc.)”指示向受试者施用的制剂中的马拉色因的浓度。
表15.皮肤增白数据。
<u>受试者</u> <u>浓度</u> <u>诊断</u>
VT01 0.5％ 光损伤
VT02 0.1％ 光损伤
VT03 0.5％ 光损伤
VT04 1.0％ 光损伤
VT05 0.1％ 光损伤
VT06 0.5％ 黑斑
VT07 1.0％ 黑斑
VT08 0.1％ 黑斑
VT09 0.5％ 黑斑
VT10 1.0％ 黑斑
VT11 0.1％ 光损伤
表15(续).皮肤增白数据。
Figure BDA0003105902200000741
Figure BDA0003105902200000751
表15(续).皮肤增白数据。
Figure BDA0003105902200000752
实施例14
示例性制剂
本发明的另一示例性制剂阐述于下表中。
表16.示例性制剂。
Figure BDA0003105902200000753
Figure BDA0003105902200000761
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本申请中引用的所有文献以引用的方式并入本文中，如同在本文中完整叙述一般。
虽然本文中已描述本发明的说明性实施方案，但应理解，本发明不限于所描述的那些实施方案，且在不脱离本发明的范围或精神的情况下所属领域的技术人员可作出各种其它改变或修改。

Claims (16)

1.一种治疗或预防受试者的UV诱导的皮肤损伤的方法，其包括：
使所述受试者与包含具有下式结构的化合物的组合物接触：
Figure FDA0003105902190000011
其中：
X选自由NR14和O组成的组；
Y是共价键、CR5R6、O或NR15；
R1、R2、R3、R4、R7、R8、R9、R10和R11独立地选自下组：氢、卤素、CN、羟基、R16或OR16；
R13、R14和R15独立地是氢或R16；
R5和R6独立地选自下组：氢、羟基、OR16、R16和C3-6环烷基，或R5与R6组合形成氧代(＝O)基团或C3-6环烷基；
R12选自由氢、-CORa和R16组成的组；
每个R16独立地是甲酰基、C1-9烷基、C2-9烯基，或C2-9炔基；且
Ra选自由氢、羟基和OR16组成的组；
其中：
如果Ra是氢，则Y是CR5R6，且R13与R14均为氢，
R1、R2、R3、R4、R5、R6、R7、R8、R9、R10和R11中的至少一个是R16；或
R5选自下组：羟基、OR16、R16和C3-6环烷基，或R5和R6组合形成氧代(＝O)基团或C3-6环烷基；
或其化妆品上或药学上可接受的盐，和化妆品上或药学上可接受的媒剂、稀释剂或载体。
2.根据权利要求1所述的方法，其中所述化合物具有以下结构：
Figure FDA0003105902190000021
或其化妆品上可接受的盐。
3.根据权利要求1所述的方法，其中：
Y是CR5R6；
R5是氢，且R6是氢、C1-4烷基、C3-6环烷基或O-(C1-4烷基)；或R5与R6组合形成氧代(＝O)基团。
4.根据权利要求1所述的方法，其中R1、R2、R3、R4、R7、R8、R9、R10和R11中的至少一个是C1-4烷基。
5.根据权利要求1所述的方法，其中R1、R2、R3、R4、R7、R8、R9、R10和R11中的每一个是氢。
6.根据权利要求1所述的方法，其中R12是-CORa或C1-4羟烷基；且Ra是氢或C1-4烷基。
7.根据权利要求1所述的方法，
其中：
X是NH；
Y是CR5R6；
R1、R3、R4、R7、R8、R9、R10、R11和R13中的每一个是氢；
R2是氢或C1-4烷基；
R5是氢，且R6是氢、C1-4烷基、C3-6环烷基或O-(C1-4烷基)；或R5与R6组合形成氧代(＝O)基团；
R12是-CORa或C1-4羟烷基；且
Ra是氢或C1-4烷基。
8.根据权利要求1所述的方法，其中所述化合物选自下组：
Figure FDA0003105902190000031
Figure FDA0003105902190000041
或其化妆品上或药学上可接受的盐。
9.一种治疗或预防受试者的UV诱导的皮肤老化的方法，其包括：
使所述受试者与包含具有下式结构的化合物的组合物接触：
Figure FDA0003105902190000042
其中：
X选自由NR14和O组成的组；
Y是共价键、CR5R6、O或NR15；
R1、R2、R3、R4、R7、R8、R9、R10和R11独立地选自下组：氢、卤素、CN、羟基、R16或OR16；
R13、R14和R15独立地是氢或R16；
R5和R6独立地选自下组：氢、羟基、OR16、R16和C3-6环烷基，或R5与R6组合形成氧代(＝O)基团或C3-6环烷基；
R12选自由氢、-CORa和R16组成的组；
每个R16独立地是甲酰基、C1-9烷基、C2-9烯基，或C2-9炔基；且
Ra选自由氢、羟基和OR16组成的组；
其中：
如果Ra是氢，则Y是CR5R6，且R13与R14均为氢，
R1、R2、R3、R4、R5、R6、R7、R8、R9、R10和R11中的至少一个是R16；或
R5选自下组：羟基、OR16、R16和C3-6环烷基，或R5和R6组合形成氧代(＝O)基团或C3-6环烷基；
或其化妆品上或药学上可接受的盐，和化妆品上或药学上可接受的媒剂、稀释剂或载体。
10.根据权利要求9所述的方法，其中所述化合物具有以下结构：
Figure FDA0003105902190000051
或其化妆品上可接受的盐。
11.根据权利要求9所述的方法，其中：
Y是CR5R6；
R5是氢，且R6是氢、C1-4烷基、C3-6环烷基或O-(C1-4烷基)；或R5与R6组合形成氧代(＝O)基团。
12.根据权利要求9所述的方法，其中R1、R2、R3、R4、R7、R8、R9、R10和R11中的至少一个是C1-4烷基。
13.根据权利要求9所述的方法，其中R1、R2、R3、R4、R7、R8、R9、R10和R11中的每一个是氢。
14.根据权利要求9所述的方法，其中R12是-CORa或C1-4羟烷基；且Ra是氢或C1-4烷基。
15.根据权利要求9所述的方法，
其中：
X是NH；
Y是CR5R6；
R1、R3、R4、R7、R8、R9、R10、R11和R13中的每一个是氢；
R2是氢或C1-4烷基；
R5是氢，且R6是氢、C1-4烷基、C3-6环烷基或O-(C1-4烷基)；或R5与R6组合形成氧代(＝O)基团；
R12是-CORa或C1-4羟烷基；且
Ra是氢或C1-4烷基。
16.根据权利要求9所述的方法，其中所述化合物选自下组：
Figure FDA0003105902190000061
Figure FDA0003105902190000071
Figure FDA0003105902190000081
或其化妆品上或药学上可接受的盐。
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