CN113165989A - 增强根际特性和植物健康状况的基于酵母的组合物 - Google Patents

Abstract

本发明公开了采用有益微生物和/或其生长副产物，增强植物免疫、健康状况、生长和/或产量，并增强根际特性的组合物及方法。具体地，本发明通过将基于酵母的组合物施用于植物(例如，根部)和/或其周围环境(例如，土壤)中来增强植物健康状况、生长和/或产量。具体地，在一个实施方案中，本发明利用嗜杀酵母异常威克汉姆酵母和/或与其密切相关的物种。

Description

增强根际特性和植物健康状况的基于酵母的组合物

相关申请的交叉引用

本申请要求于2018年11月27日提交的第62/771,703号美国临时专利申请的优先权，该申请通过引用整体并入本文。

背景技术

在农业产业中，某些共性问题持续阻碍着种植者在保持低成本的情况下使产量最大化的能力。这些问题包括但不限于细菌、真菌、线虫和其他害虫和病原体引起的感染和传染；化肥和除草剂成本高，包括它们对环境和健康的影响；植物难以有效地从不同类型土壤中吸收养分和水分。

例如，在柑橘生产中，引起诸如柑橘青果病和柑橘溃疡病等的病原体会广泛感染柑橘植株，这给柑橘种植者造成了很大难处。这些细菌感染会使整株作物损失殆尽，导致全球柑橘产品产量下降、价格上涨。

柑橘青果病，又称黄龙病(HLB或yellow dragon disease)，是由革兰氏阴性菌柑橘黄龙病菌亚洲种(Candidatus Liberibacter asiaticus)所引起的无法治疗的感染。这种病已在美国和世界其他地区毁坏了数百万英亩的柑橘作物。受感染的树木所产果实绿色、畸形和苦涩，不适合出售。感染病的昆虫(亚洲柑橘木虱)会传播这种疾病，这使世界柑橘树的未来处于危险之中。

HLB存在于植物的韧皮部或维管系统中，并干扰韧皮部和维管系统的功能，这些扰韧皮部和维管系统会将糖分运输到树木各部位。因此，韧皮杆菌可以移动至并生长遍布整个树体，包括根部。在出现任何叶症状之前，感染通常已对根系造成了严重的损害，导致高达50％的须根密度损失。

随着冠层症状发展，根系密度会持续逐渐降低。这可能是由于韧皮部堵塞，限制了糖分向根系移动。根部对植物的生存和生长能力至关重要。如此大比例的根部损失会极大地降低树木的免疫健康状况，并会降低其有效吸收养分及在长期干旱期对水分胁迫抵抗的能力。因此，对于健康作物来说，最重要的特征之一是健康的根际。

根际是植物根系生长并吸收水分和养分的土壤区域。为给土壤补充某些养分，许多种植者在很大程度上依赖于使用合成化学品和化肥来提高作物产量，保护作物免受干旱和疾病的影响。然而，例如当植物的根系受到损害时，随着其吸收能力的降低，即使向土壤中添加更多的水分和/或养分可能也不会使根系吸收增加。反而，所施用的物质会流过根际，流入地下水。这些物质作为污染源，对生态和商业来说，当务之急是应负责任地使用这些物质。过度依赖和长期使用某些化肥、杀虫剂和抗生素可能会改变土壤生态系统，降低胁迫耐受性，使耐药害虫更加泛滥，阻碍植物生长和生命力。

根际对养分和水分的有效吸收不仅取决于其中存在的水分和养分的量，还取决于土壤中存在的特定微生物群。土壤含有数十亿种不同微生物，它们彼此共存，并与植物共存，形成复杂的关系网络。

基于植物类型和根际所生长的土壤类型，根际中微生物的最佳组合会有所变化。在根际中，没有两个植物物种或地区有相同的微生物网络。因此，尽管生物制剂有潜力在作物健康状况和土壤修复中发挥越来越重要的作用，但由于每种植物的最佳根际微生物群的复杂性和特异性，在许多不同地区处理广泛的植物物种仍存在困难。

现有作物生产方法的经济成本以及对健康状况和环境的不利影响，持续给基于作物消费产品的可持续性带来负担。因此，对于以低成本提高作物产量的改进、无毒和环境友好的方法，仍然存在需求。特别地，尤其是在植物免疫健康状况受损的情况下，需要补充土壤的产品来促进作物生长和提高作物产量。

发明内容

本发明提供了基于微生物的产品，以及在农业应用中使用这些基于微生物的产品。有利地，本发明的基于微生物的产品和方法对环境友好、无毒和成本效益高。

在优选实施例中，本发明提供了通过诸如增强植物根系的健康状况和/或生长，以及刺激植物的自然免疫和其他有助于植物的健康状况和生产力的代谢系统等方式来增强作物的健康状况、生长和总产量的基于微生物的土壤处理组合物及其使用方法。在某些实施例中，这些方法可改善根际的营养和/或水分保持性质。

有利地，即使在作物中的一个或多个植株受到病原体感染的情况下或作物的免疫健康状况受到其他损伤的情况下，本发明的土壤处理组合物仍可以诸如改善作物健康状况，增强作物生长，提高作物产量等。

例如，在一个实施例中，本发明可用于改善受到诸如亚洲假丝酵母(柑橘青果病)和/或地毯草黄单胞菌(Xanthomonas axonopodis)(柑橘溃疡病)等感染的柑橘植株的健康状况、生长和产量。因此，在一个实施例中，本发明可用于改善植株的免疫健康状况和/或免疫应答。

在一个实施例中，本发明提供了土壤处理组合物，包含微生物和/或其生长副产物。还提供了培养微生物和/或生长副产物的方法。

在一个实施例中，该土壤处理组合物包含表征为非致病性酵母菌株的微生物。优选地，该组合物包含非致病性“嗜杀酵母”菌株(例如，异常威克汉姆酵母)或其他与其相关的酵母。

在一个实施例中，该组合物包含酵母的一种或多种生长副产物和/或代谢物。例如，异常威克汉姆能够产生多种代谢物，包括酶(例如，植酸酶和外切β-1,3葡聚糖酶)和生物表面活性剂(包括，磷脂和/或糖苷酶)。

在一个实施例中，组合物中可包括另外的微生物，前提是另外的微生物与酵母和/或其生长副产物兼容。可以根据(例如)被处理的植物、植物生长的土壤类型、处理时植物的健康状况以及其他因素来确定该组合物中微生物和其他成分的物种和比例。因此，该组合可以针对任何给定作物进行定制。

可以通过从小规模到大规模的培养工艺得到本发明土壤处理组合物的微生物。这些培养过程包括但不限于深层培养/发酵，固态发酵(SSF)及其改进、混杂和/或组合。在优选实施例中，使用SSF和/或其改进的形式培养微生物。

该土壤处理组合物可包含发酵残留基质和/或纯化或未纯化的生长副产物，例如，生物表面活性剂、酶和/或其他代谢物。虽然在优选实施例中，这些微生物是活的；但这些微生物可以是活的，也可以是不活跃的。

优选地将该组合物配制成施用于土壤、种子、整株植物或植物部分(包括但不限于根、块茎、茎、花和叶)。在某些实施例中，该组合物被配制成例如液体、粉尘、颗粒、微粒、丸剂、可湿性粉末、可流动性粉末、乳剂、微胶囊、油或气雾剂。

为了改善或稳定所述组合物的效果，可以将其与合适的佐剂混合，然后就这样使用或在必要时稀释后使用。在优选的实施例中，该组合物被配制成液体、浓缩液、或者可以与水和其他组分混合以形成液体产品的干燥粉末或干颗粒。在一个实施例中，该组合物包含被混合在一起并干燥形成粉末或颗粒的基质、微生物和生长副产物。

在一个实施例中，该组合物可以包含葡萄糖(如，糖蜜形式)、甘油、丙三醇和/或其他渗压物质，以在干燥产品的储存和运输过程中促进渗透压。

在一个实施例中，提供了用于增强植物健康状况、生长和/或产量的方法，其中，使包含酵母和/或其生长副产物的土壤处理组合物与植物和/或其周围环境接触。优选地，酵母是异常威克汉姆或同科和/或同属的其他物种。

在某些实施例中，使土壤处理组合物与植物部分接触。在具体实施例中，使组合物与植物的一个或多个根接触。可将该组合物(例如，通过喷洒或浸泡根)直接施用于根和/或(例如，通过将该组合物投药至植物生长的土壤(例如，根际))间接地施用。可在种植之前或种植时，将该组合物施用于植物的种子，或施用于植物的任何其他部分和/或其周围环境中。

在一个实施例中，该方法可以通过增进植物根部的健康状况和/或生长来增进植物的健康状况、生长和/或产量。这可以通过诸如改善植物根系生长的根际的整体适宜性等来实现。更具体地，在一个实施例中，这些方法可用于改善根际的营养和/或水分保持性质。在某些实施例中，本发明的组合物和方法有助于植物吸收养分和/或吸收水分。

此外，在一个实施例中，该方法可用于采用有益微生物培植植物的根际。例如，土壤处理组合物的酵母可定植于植物的根际并且通过根-土壤界面向植物提供多种益处，这些益处包括支持微生物和植物基因组之间直接相互作用的保护、营养和代谢信号。

在另一个实施例中，该方法可用于促进有益微生物在根际定植。在又一个实施例中，该方法可用于消除和/或阻止有害的或可能与有益土壤微生物竞争的土壤微生物对根际的定植。

另外，在一个实施例中，该方法可用于向植物提供营养，和/或治疗和/或防止植物营养缺乏。例如，在一个实施例中，当土壤处理组合物的酵母是非活跃时，或当它们死亡时，它们的细胞会为植物和/或其他土壤微生物群提供丰富的营养、蛋白质、维生素和矿物质以供利用。

在另一个实施例中，该方法可用于向植物提供磷酸盐形式的磷。这是因为异常威克汉姆能产生植酸酶，植酸酶是一种能使土壤中的植酸转化为植物生物可利用(例如，根系可吸收)的磷酸盐的酶。另外，该方法可用于治疗和/或防止植物缺磷。

有利地，本发明的方法可用于增强由于病原体或生物环境因子感染、或环境应激源(例如，干旱)感染而免疫健康状况受损的植物的健康状况、生长和/或产量。因此，本发明的方法还可用于改善植株的免疫健康状况或免疫应答。

在某些实施例中，该组合物的微生物与其他成分和/或可选的额外微生物协同作用以增强植物的健康状况、生长和/或产量。

本发明的组合物和方法可以单独使用或与其他化合物和/或方法组合使用，以有效地增进植物健康、生长和/或产量和/或补充第一和第二微生物的生长。例如，在一个实施例中，该组合物可包含和/或可同时与营养物质和/或微量营养物质一起施用，以增强植物和/或微生物生长，例如，镁、磷酸盐、氮、钾、硒、钙、硫、铁、铜和锌；一种或多种纳米肥料，例如，Aqua-Yield、NanoGro^TM；以及/或一种或多种益生元，例如，昆布提取物、富里酸、甲壳素、腐植酸盐和/或腐植酸。受益于本公开的种植者或农业科学家可以确定确切的材料及其数量。

该组合物和方法还可以与其他作物管理系统组合使用。在一个实施例中，该组合物可任选地包含天然和/或化学杀虫剂和/或驱避剂，或与天然和/或化学杀虫剂和/或驱避剂一起施用，例如，与所施用的微生物组合兼容的任何已知商业和/或自制杀虫剂。在一些实施例中，该组合物还可包含诸如除草剂、肥料和/或其他兼容的土壤改良剂等，或与诸如除草剂、肥料和/或其他兼容的土壤改良剂等一起施用，包括含有营养源(例如，氮磷钾(NPK)和/或微量营养素)的商业产品。

有利地，可以在不向环境中释放大量无机化合物的情况下使用本发明。此外，该组合物和方法会利用可生物降解和毒理安全的组分。因此，本发明可作为“绿色”土壤处理使用。

附图说明

图1示出了采用包含异常威克汉姆(“STR10”)的组合物处理的柑橘幼树与未经处理对照组树之间对比研究的结果。在处理后的6个月期间内测量高度、树干直径和生长指数(GI)。

图2示出了采用包含异常威克汉姆(“STR10”)的组合物处理的柑橘幼树与未经处理对照组树之间对比研究的结果，其中，在处理后的18个月期间内测量高度。

图3示出了采用包含异常威克汉姆(“STR10”)的组合物处理的柑橘幼树与未经处理对照组树之间对比研究的结果，其中，在处理后的18个月期间内测量生长指数(GI)。

图4示出了采用包含异常威克汉姆(“STR10”)的组合物处理的柑橘幼树与未经处理对照组树之间对比研究的结果，其中，在处理后的18个月期间内测量树干直径。

图5A-5B示出了采用包含异常威克汉姆(“STR10”)的组合物处理的柑橘幼树与未经处理对照组树之间对比研究的结果，其中，测量了有芽生长的树木百分比(5A)和每棵树的平均芽数(5B)。

图6示出了采用包含异常威克汉姆(“STR10”)的组合物处理的柑橘幼树与未经处理对照组树之间对比研究的结果，其中，测量了每棵树的平均果实数。

图7A-图7B示出了采用包含异常威克汉姆(“STR10”)的组合物处理的柑橘幼树与未经处理对照植株(7A)之间对比研究的结果，并示出了采用STR10加上包含哈茨木霉和解淀粉芽孢杆菌(“ThBa”)的组合物处理的莴苣植株与未经处理对照植株(7B)之间对比研究的结果，其中，测量了莴苣头的平均重量(g)。

图8A-图8B示出了采用包含异常威克汉姆(“STR10”)的组合物处理的柑橘幼树与未经处理对照植株之间对比研究的结果，其中，测量了每30平方英尺的平均花数(8A)和平均冠层尺寸(英寸)(8B)。

图9A-图9B示出了采用异常威克汉姆(“STR10”)、STR10加上包含哈茨木霉和解淀粉芽孢杆菌(“ThBa”)的组合物处理的小西葫芦植株与未经处理对照植株之间对比研究的结果，其中，测量了叶片组织的氮含量(9A)和镁含量(9B)。

具体实施方式

本发明提供了基于微生物的产品，以及在农业应用中使用这些基于微生物的产品。有利地，本发明的基于微生物的产品和方法对环境友好、无毒和成本效益高。

在优选实施例中，本发明提供了通过诸如改善根际的营养和/或水分保持性质等方式来增强作物植株的健康状况、生长和总产量的基于微生物的土壤处理组合物及其使用方法。有利地，即使在作物中的一个或多个植株受到病原体感染的情况下或作物的免疫健康状况受到其他损伤的情况下，本发明的土壤处理组合物仍可以诸如改善作物健康状况，增强作物生长，提高作物产量等。例如，在一个实施方案中，本发明可用于改善受到诸如亚洲假丝酵母(柑橘青果病)和/或地毯草黄单胞菌(Xanthomonas axonopodis)(柑橘溃疡病)等感染的柑橘植株的健康状况、生长和/或产量。

选择的定义

本发明使用“基于微生物的组合物”，意指包含微生物或其他细胞培养物生长而产生组分的组合物。因此，基于微生物的组合物可以包含微生物本身和/或微生物生长的副产品。微生物可以处于植物状态、孢子或分生孢子形式、菌丝形式、任何其他形式的繁殖体，或它们的混合物。微生物可以是浮游生物或生物膜形式，或两者的混合物。生长的副产物可以是诸如代谢物、细胞膜组分、表达蛋白质和/或其他细胞组分等。微生物可以是完好无损的或裂解的。在优选实施例中，微生物与生长它们的生长培养基一起存在于基于微生物的组合物中。微生物可以以下列浓度存在：每克或每毫升组合物至少1x10⁴、1x10⁵、1x10⁶、1x10⁷、1x10⁸、1x10⁹、1x10¹⁰、1x10¹¹、1x10¹²或1x10¹³或更高CFU。

本发明还提供了“基于微生物的产品”，其是在实践中将被应用以实现期望结果的产品。基于微生物的产品可以简单地是从微生物培养过程中收获的基于微生物的组合物。替代性地，基于微生物的产品可以包含已经添加的其他成分。这些额外成分可以包括诸如稳定剂、缓冲剂、适当载体(例如，水、盐溶液或任何其他适当载体)、支持微生物进一步生长而添加的营养物质、非营养生长促进剂和/或有助于在应用环境中跟踪微生物和/或组合物的制剂。基于微生物的产品还可以包含基于微生物的组合物的混合物。基于微生物的产品还可以包含已经以某种方式(诸如但不限于过滤、离心、裂解、干燥、纯化等)加工过的基于微生物的组合物的一种或多种组分。

如本文所用，在基于微生物的组合物发酵的上下文中，“收获”是指从生长容器中移出部分或全部基于微生物的组合物。

如本文所用，“生物膜”是诸如细菌等微生物的复杂聚集体，其中，细胞彼此粘附。生物膜中的细胞在生理上不同于同一生物的浮游细胞，这些浮游细胞是可以在液体培养基中漂浮或游动的单个细胞。

如本文所用，“分离的”或“纯化的”化合物基本上不含天然与其连在一起的其他化合物，例如，细胞材料。纯化的或分离的多核苷酸(核糖核酸(RNA)或脱氧核糖核酸(DNA))不含处于其天然存在状态的侧翼基因或序列。纯化的或分离的多肽不含处于其天然存在状态的侧翼氨基酸或序列。在微生物菌株的上下文中，“分离的”是指将菌株从其天然存在的环境中移出。因此，分离的菌株可以以例如生物学纯的培养物或与载体结合的孢子(或菌株的其他形式)存在。

如本文所用，“生物纯培养物”是将其从天然与其连在一起的材料分离开的培养物。在优选的实施例中，已经从所有其他活细胞中分离出培养物。在另外的优选的实施例中，与天然存在的相同微生物的培养物相比，生物学上纯净的培养物具有有利的特征。有利特征可以是(例如)增强生产一种或多种生长副产物。

在某些实施例中，按重量(干重)计，纯化的化合物为感兴趣的化合物的至少60％。优选地，按重量计，制剂为感兴趣的化合物的至少75％、更优选为至少90％、以及最优选为至少99％。例如，按重量计，纯化的化合物是所需化合物的至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、98％、99％或100％(w/w)。通过任何适当的标准方法，例如通过柱色谱法、薄层色谱法或高效液相色谱法(HPLC)分析来测量纯度。

“代谢物”是指由代谢产生的任何物质(例如，生长副产物)或参与特定代谢过程所必需的物质。代谢物可以是有机化合物，它是代谢的起始材料(例如，葡萄糖)、中间产品(例如，乙酰辅酶A)或最终产品(例如，正丁醇)。代谢物的实例包括但不限于生物表面活性剂、生物聚合物、酶、酸、溶剂、醇、蛋白质、维生素、矿物质、微量元素和氨基酸。

如本文所用，“调制”意指引起改变(例如，增加或减少)。通过现有技术已知方法标准，检测这种改变。

本文提供的范围应理解为该范围内所有值的简写。例如，从1到20的范围应理解为包括选自由1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20组成的组的任何数字、数字的组合或子范围，以及上述整数之间的所有中间十进制值，例如1.1、1.2、1.3、1.4、1.5、1.6、1.7、1.8和1.9。关于子范围，特别地考虑了从该范围的任一端点延伸的“嵌套子范围”。例如，示例性范围1到50的嵌套子范围可以在一个方向上包括1到10、1到20、1到30和1到40，或者在另一个方向上包括50到40、50到30、50到20和50到10。

如本文所用，“减少”是指负改变，术语“增加”是指正改变，每项至少1％、5％、10％、25％、50％、75％或100％。

如本文所使用的，“参考”是指标准或对照条件。

如本文所用，“表面活性剂”是指降低两种液体之间或液体和固体之间的表面张力(或界面张力)的化合物。表面活性剂用作例如清洁剂、湿润剂、乳化剂、发泡剂和分散剂。“生物表面活性剂”是由活生物体产生的表面活性剂。

如本文所用，“农业”是指为食品、纤维、生物燃料、药品、化妆品、补充剂、装饰目的和其他用途而种植和培育植物、藻类和/或真菌。根据本发明，农业还可以包括园艺、园林绿化、造园、植物保护、林业和重新造林、牧场和草原恢复、果园、树木栽培和农学。农业还包括土壤的养护、监测和维护。

如本文所用，“增强”意指改进或增加。例如，增强植物健康状况意指提高植物的能力生长和茁壮成长，包括提高种子发芽率和/或出苗率，提高抵御病和/或虫害的能力，以及提高抵御诸如干旱和/或水涝等环境压力的能力。增强植物生长和/或增强植物生物质意指增加植物在地上和地下的大小和/或质量(例如，增加冠层/叶片体积、高度、树干直径、分枝长度、芽长、蛋白质含量、根系大小/密度和/或总生长指数)和/或提高植物达到所需尺寸和/或质量的能力。提高产量意指通过诸如增加每株植物的果实、叶子、根和/或块茎的数量和/或大小，和/或改善果实、叶子、根和/或块茎的质量(例如，改善口感、质地、含糖量、叶绿素含量和/或颜色)等，改善作物中植物产生的最终产品。

如本文所用，“防止”或“预防”情况或事件发生意指延迟、抑制、压制、预防和/或最小化情况或事件的开始、扩展或进展。预防可以包括但不要求不确定的、绝对的或完全的预防，这意指迹象或症状可以仍会在以后发展。预防可以包括降低这些疾病、状况或紊乱发生的严重性，和/或抑制状况或紊乱朝更严重状况或紊乱发展。

如本文所用，提及有害生物时使用的术语“控制”意指杀死、禁用、固定或减少有害生物的种群数量，或以其他方式使有害生物基本上不能造成伤害。

如本文所使用，“有害生物”是所有对人类或人类问题(例如，农业、园艺)具有破坏性、有害和/或不利的非人类生物。在某些情况下，但并非所有情况下，有害生物都可以是致病生物。有害生物可以引起或成为感染、侵染和/或疾病的媒介，或者它们可以简单地以活组织为食或对活组织造成其他物理伤害。有害生物可以是单细胞或多细胞生物，包括但不限于病毒、真菌、细菌、寄生虫、原虫和/或线虫。

如本文所用，“土壤改良剂”或“土壤调节剂”是添加到土壤中以增强土壤和/或根际特性的化合物、材料或化合物或材料的组合。土壤改良剂可以包括有机物和无机物，并且可以进一步包括诸如肥料、杀虫剂和/或除草剂等。营养丰富、排水良好的土壤对植物的生长和健康至关重要，因此，土壤改良剂可以通过改变土壤的营养物质和水分含量来提高植物的生物质。土壤改良剂也可用于改善许多不同质量的土壤，包括但不限于土壤结构(例如，防止压实)；提高营养物质浓度和储存能力；改善干土的保水性；以及，改善水淹土壤的排水性。

如本文所用，“非生物压力源”是对具体环境中的活生物体具有负面影响的非生命状态。非生物压力源对环境的影响必须超出其正常的变化范围，从而对生物种群表现或个体生理状况产生重大的不利影响。非生物压力源包括但不限于干旱、极端温度(高温或低温)、洪水、大风、自然灾害(例如，飓风、雪崩、龙卷风)、土壤pH值变化、高辐射、土壤压实、污染等。或者，“生物压力源”是另一种活生物体对活生物体造成的损害和/或有害作用。生物压力源可包括诸如有害生物引起的损害和/或疾病、与其他生物体争夺资源和/或空间以及各种人类活动等。

与“包含”或“具有”同义的过渡术语“包括”是包含性的或开放式的，并且不排除其他未叙述的要素或方法步骤。相反，过渡短语“由……组成”不包括权利要求中未指定的任何要素、步骤或成分。过渡短语“基本上由……组成”将权利要求的范围限制为指定的材料或步骤“以及实质上不影响要求保护的发明的基本和新颖特征的那些”。使用术语“包括”是考虑了“由……组成”或“基本上由……组成”所述多种)组分的其他实施例。

除非特别声明或从上下文中显而易见，否则如本文所使用的，术语“或”应理解为包括性的。除非特别说明或根据上下文显而易见，否则如本文所使用的，术语“一(a/an)”、和“该”应理解为单数或复数。

除非特别说明或从上下文中显而易见，否则如本文所使用的，术语“约”应理解为在本领域的正常公差范围内，例如在平均值的2个标准偏差之内。“约”可以理解为在规定值的10％、9％、8％、7％、6％、5％、4％、3％、2％、1％、0.5％、0.1％、0.05％或0.01％内。

在本文对变量的任何定义中列举化学基团的列举包括将该变量定义为所列基团的任何单个基团或组合。本文中对变量或方面的实施例的叙述包括该实施例作为任何单个实施例或与任何其他实施例或其部分组合。

本文引用的所有参考文献通过引用整体并入本文。

土壤处理组合物

在一个实施例中，本发明提供了土壤处理组合物，包含微生物和/或其生长副产物。土壤处理组合物可用于增强植株的健康状况、生长和/或产量，甚至增强已受病原体或疾病感染的植株的健康状况、生长和/或产量。更具体地，本发明的组合物可用于增强植物根部的免疫健康状况和/或生长，和/或增强植株的免疫健康状况。在某些实施例中，该组合物还可用于采用有益微生物培植植物根部和/或根部生长在其中的根际。

有利地，在优选实施例中，根据本发明的基于微生物的组合物是无毒的，并且可以高浓度施用而不会对诸如人类或其他非害虫动物等的皮肤或消化道造成刺激。因此，当在诸如种植者和牲畜等活生物体的存在下施用基于微生物的组合物时，本发明特别有用。

在一个实施例中，该土壤处理组合物包含非致病性酵母。优选地，该组合物包含非致病性“嗜杀酵母”(例如，异常威克汉姆酵母)或其他与其相关的酵母。

在一个实施例中，该组合物包含酵母的一种或多种生长副产物和/或代谢物。例如，异常威克汉姆能够产生多种代谢物，包括酶(例如，植酸酶和外切β-1,3葡聚糖酶)和生物表面活性剂(包括，磷脂和/或糖苷酶)。

在一些实施例中，该组合物还包含能够有助于增强根际特性和/或增强植物健康状况的一种或多种额外微生物。可以根据(例如)被处理的植物、植物生长的土壤类型、处理时植物的健康状况以及其他因素来定制该组合物中额外微生物和/或其他成分的物种和比例。因此，可以针对任何给定场所进行定制该组合。

例如，在一个实施例中，该组合物还包含木霉属真菌，例如，哈茨木霉、绿木霉、哈氏木霉和/或里氏木霉。在一个实施例中，该组合物还包含芽孢杆菌属细菌，例如，枯草芽孢杆菌和/或解淀粉芽孢杆菌。

在一个实施例中，该组合物还包含能够在土壤中固定、溶解和/或调动氮、钾、磷(或磷酸盐)和/或微量营养物质的微生物。在一个实施例中，可包括固氮细菌，例如，棕色固氮菌。在另一个实施例中，可包括钾调动细菌，例如，金黄弗拉特氏菌。

在一个实施例中，本发明组合物的微生物或微生物组合按重量计占总组合物的约5％至20％，或约8％至15％，或约10％至12％。在一个实施例中，该组合物包含的每种微生物约是1x10⁶至1x10¹²、1x10⁷至1x10¹¹、1x10⁸至1x10¹⁰或1x10⁹CFU/ml。

可以根据(例如)被处理的植物、植物生长的土壤类型、处理时植物的健康状况以及其他因素来定制该组合物中微生物和其他成分的物种的组合和比例。

本发明的微生物和基于微生物的组合物具有许多有益性质，这些有益性质有助于增强植株的健康状况、生长和/或产量。例如，该组合物可包含微生物生长产生的产物，例如，纯化或粗料形式的生物表面活性剂、蛋白质和/或酶。

在一个实施例中，本发明组合物的微生物能够产生生物表面活性剂。在一个实施例中，可由其他微生物单独产生生物表面活性剂，并以纯化形式或粗料形式添加至组合物中。粗料形式生物表面活性剂可包含诸如由生物表面活性剂产生微生物得到的发酵培养基中的生物表面活性剂和其他细胞生长产的产物。粗料形式生物表面活性剂组合物可包含自约0.001％至约90％、约25％至约75％、约30％至约70％、约35％至约65％、约40％至约60％、约45％至约55％或约50％纯生物表面活性剂。

生物表面活性剂形成一类重要的由诸如细菌、真菌和酵母等多种微生物产生的次生代谢产物。作为两亲性分子，微生物表面活性剂会降低液体、固体和气体分子之间的表面张力和界面张力。此外，根据本发明的生物表面活性剂是可生物降解的，低毒，会有效溶解和降解土壤中的不溶性化合物，并且可以使用低成本和可再生资源生产。它们可以抑制不需要的微生物粘附到各种表面上，防止生物膜的形成，并可以具有很强的乳化和破乳性质。此外，还可使用生物表面活性剂来改善土壤的润湿性，实现肥料、营养物质和水在土壤中均匀增溶和/或分配。

根据本发明方法的生物表面活性剂可选自诸如低分子量糖脂(例如，槐脂、纤维二糖脂、鼠李糖脂、甘露糖赤藓糖醇脂和海藻糖脂)、脂肽(例如，表面活性素、伊枯草菌素、丰原素、节活性素和地衣素)、黄酮脂、磷脂(例如，心磷脂质)和高分子量聚合物(例如，脂蛋白、脂多糖-蛋白质复合物和多糖-蛋白质-脂肪酸复合物。

该组合物可包含浓度为0.001％至10％、0.01％至5％、0.05％至2％和/或0.1％至1％的一种或多种生物表面活性剂。

有利地，根据本发明，该土壤处理组合物可包含每一种微生物成长的培养基。该组合物可以是生长培养基(按重量计)的(例如)至少1％、5％、10％、25％、50％、75％或100％。

该发酵培养基含有活的和/或非活性培养物、纯化的或粗料形式生长副产物(例如生物表面活性剂、酶和/或其他代谢物)和/或任何残余营养物质。该组合物中生物质的量(按重量计)可以是(例如)约0.01％至100％的任何百分比、约1％至90％的任何百分比、约5％至约80％的任何百分比或约10％至约75％的任何百分比。

可直接使用发酵产物，经过或未经提取或纯化。如果需要，可以使用文献中描述的标准提取和/或纯化方法或技术容易地实现提取和纯化。

在一个实施例中，当该组合物包含微生物菌株的组合时，将不同的微生物菌株分开培养，然后混合在一起形成土壤处理组合物。

在一个实施例中，优选地将所述组合物配制成施用于土壤、种子、整株植物或植物部分(包括但不限于根、块茎、茎、花和叶)。在某些实施例中，该组合物被配制成例如液体、粉尘、颗粒、微粒、丸剂、可湿性粉末、可流动性粉末、乳剂、微胶囊、油或气雾剂。

为了改善或稳定所述组合物的效果，可以将其与合适的佐剂混合，然后就这样使用或在必要时稀释后使用。在优选的实施例中，将所述组合物配制成液体、浓缩液、或者可以与水和其他组分混合以形成液体产品的干燥粉末或颗粒。

在一个实施例中，所述组合物可以包含葡萄糖(如，糖蜜形式)、甘油和/或丙三醇作为渗压物质或补充渗压物质，以在干燥产品的储存和运输过程中促进渗透压。

所述组合物可以单独使用或与其他化合物和/或方法组合使用，以有效地增进植物健康、生长和/或产量和/或补充第一和第二微生物的生长。例如，在一个实施例中，所述组合物可以包括营养素和/或微量营养素(诸如镁、磷酸盐、氮、钾、硒、钙、硫、铁、铜和锌)和/或一种或多种益生元(诸如昆布提取物(kelp extract)、富里酸、甲壳素、腐植酸盐和/或腐殖酸)和/或可以与其同时施用，以用于增进植物和/或微生物生长。受益于本公开的种植者或农业科学家可以确定确切的材料及其数量。

该组合物也可以与其他农业化合物和/或作物管理系统组合使用。在一个实施例中，该组合物可任选地包含诸如与所施用微生物或微生物组合兼容的天然和/或化学杀虫剂(例如，菌酯、种菌唑、甲霜林、三氟菌酯、氯噻硝基呱、VOTiVO、噻肟、氰胺酯、氟二氧嘧啶、噻恶嗪、糖脂、脂肽、避蚊胺、硅藻土、香茅、精油、矿物油、大蒜提取物、辣椒提取物)、驱避剂、除草剂、肥料、水处理剂、非离子表面活性剂和/或土壤改良剂。

可以将另外的组分添加到所述组合物中，例如缓冲剂、载体、在相同或不同设施下生产的其他基于微生物的组合物、粘度调节剂、防腐剂、微生物生长营养物质、示踪剂、杀生物剂、其他微生物、表面活性剂、乳化剂、润滑剂、溶解度控制剂、pH调节剂、防腐剂、稳定剂和抗紫外线剂。

基于微生物的组合物的pH应适合于感兴趣的微生物。在优选实施例中，该基于微生物的组合物终产物的pH值是约3.0至8.0或约3.5至7.0。

可选地，所述组合物可以在使用前储存。储存时间优选为短时。因此，储存时间可以小于60天、45天、30天、20天、15天、10天、7天、5天、3天、2天、1天或12小时。在优选实施例中，如果产品中存在活细胞，则在低温下储存产品，例如，低于20℃、15℃、10℃或5℃。

但是，可在不进一步稳定、保存和储存的情况下使用基于微生物的产品。有利地，直接使用这些基于微生物的组合物，会保持微生物的高活性，减少来自外来试剂和不需要微生物污染的可能性，并且保持微生物生长的副产物的活性。

但是，可在不进一步稳定、保存和储存的情况下使用基于微生物的产品。有利地，直接使用这些基于微生物的组合物，会保持微生物的高活性，减少来自外来试剂和不需要微生物污染的可能性，并且保持微生物生长的副产物的活性。

在其他实施例中，可将组合物(微生物、生长培养基或微生物和培养基)置于适当大小的容器中，考虑诸如预期用途、预期施用方法、发酵容器的大小，以及从微生物生长设施到使用地点的运输方式。因此，放置基于微生物的组合物的容器可以是例如1品脱至1000加仑或更多。在某些实施例中，容器是1加仑、2加仑、5加仑、25加仑或更大的。

根据本发明的微生物生长

本发明利用用于培养微生物和产生微生物代谢产物和/或微生物生长的其他副产物的方法。本发明进一步利用适合于以所需规模培养微生物和产生微生物代谢产物的培养方法。这些培养过程包括但不限于深层培养/发酵，固态发酵(SSF)及其改进、混杂和/或组合。

如本文所用，“发酵”是指在受控条件下细胞的培养或生长。所述生长可以是有氧的或厌氧的。在优选的实施例中，微生物使用SSF和/或其改进的形式生长。

在一个实施例中，本发明提供了生产生物质(例如，活细胞材料)、细胞外代谢物(例如，小分子和排出的蛋白质)、残余营养物质和/或细胞内组分(例如，酶和其他蛋白质)的材料和方法。

根据本发明使用的微生物生长容器可以是任何用于工业用途的发酵器或培养反应器。在一个实施例中，容器可以具有功能控件/传感器或可连接至功能控件/传感器以测量培养过程中的重要因素，例如pH、氧气、压力、温度、湿度、微生物密度和/或代谢物浓度。

在另一个实施例中，容器还能够监测容器内微生物的生长(例如，细胞数量和生长阶段的测量)。替代性地，可以从所述容器中取出每日样品，并通过本领域已知的技术(诸如稀释平板技术)对所述样品进行计数。稀释平板技术是一种用于估计样品中生物数量的简单技术。该技术还可以提供一个指标，通过该指标可以比较不同的环境或处理。

在一个实施例中，所述方法包括：用氮源补充培养物。氮源可以是例如硝酸钾、硝酸铵、硫酸铵、磷酸铵、氨、尿素和/或氯化铵。这些氮源可以单独使用或者以两种或更多种的组合使用。

该方法可以为生长的培养物提供氧合。一个实施例利用了空气的慢速运动去除含低氧的空气并引入含氧空气。在浸没式发酵的情况下，含氧空气可以是通过机构(包括用于机械地搅动液体的叶轮和用于向液体供应气体气泡以将氧气溶解到液体中的空气分布器)每天补充的环境空气。

所述方法还可以包括：用碳源补充培养物。碳源通常是碳水化合物，诸如葡萄糖、蔗糖、乳糖、果糖、海藻糖、甘露糖、甘露糖醇和/或麦芽糖；有机酸，诸如乙酸、富马酸、柠檬酸、丙酸、苹果酸、丙二酸和/或丙酮酸；醇，诸如乙醇、丙醇、丁醇、戊醇、己醇、异丁醇和/或甘油；油脂，诸如大豆油、低芥酸菜子油、米糠油、橄榄油、玉米油、芝麻油和/或亚麻子油；等等。这些碳源可以单独使用或两种以上组合使用。

在一个实施例中，培养基中包括微体生物的生长因子和微量营养素。这在无法产生其所需的所有维生素的微生物生长时是特别优选的。培养基中还可以包括无机营养素，包括微量元素，诸如铁、锌、铜、锰、钼和/或钴。此外，维生素、必需氨基酸和微量元素的来源可以例如以面粉或粗粉(meals)的形式(诸如玉米粉)或以提取物的形式(诸如酵母提取物、马铃薯提取物、牛肉提取物、大豆提取物、香蕉皮提取物等)或以纯化形式被包括在内。也可以包括氨基酸，诸如对于蛋白质的生物合成有用的那些氨基酸。

在一个实施例中，还可以包括无机盐。可用的无机盐可以是磷酸二氢钾、磷酸氢二钾、磷酸氢二钠、硫酸镁、氯化镁、硫酸铁、氯化铁、硫酸锰、氯化锰、硫酸锌、氯化铅、硫酸铜、氯化钙、氯化钠、碳酸钙和/或碳酸钠。这些无机盐可以单独使用或者以两种或更多种的组合使用。

在一些实施例中，用于培养的方法可以进一步包括在培养过程之前和/或期间在培养基中添加另外的酸和/或抗微生物剂。抗菌剂或抗生素用于保护培养物免受污染。

此外，还可添加消泡剂，防止在浸没培养期间形成和/或积聚泡沫。

混合物的pH值应适合感兴趣的微体生物。可以使用缓冲剂和pH调节剂(诸如碳酸盐和磷酸盐)将pH稳定在优选值附近。当金属离子以高浓度存在时，可能需要在培养基中使用螯合剂。

微生物可以以浮游形式或生物膜形式生长。在生物膜的情况下，容器中可以具有基质，微生物可以在该基质上以生物膜状态生长。该系统还可以具有例如施加激励和/或改善生物膜生长特征的刺激(诸如剪切应力)的能力。

在一个实施例中，用于培养微生物的方法在约5℃至约100℃、优选15至60℃、更优选25至50℃下进行。在另外的实施例中，可以在恒定温度下连续地进行培养。在另一实施例中，可以使培养经历温度变化。

在一个实施例中，所述方法和培养过程中使用的装备是无菌的。培养装备(诸如反应器/容器)可以与灭菌单元(如高压釜)是分开的但连接至该灭菌单元。培养设备还可以具有在开始接种前进行原位灭菌的灭菌装置。可以通过本领域已知的方法对空气进行灭菌。例如，环境空气在被引入到容器中之前可以通过至少一个过滤器。在其他实施例中，可以对培养基进行巴氏灭菌，或者任选地，根本不添加热量，其中可以利用低水分活度和低pH来控制不良细菌的生长。

在一个实施例中，本发明进一步提供了一种通过在适于生长和代谢产物生产的条件下培养本发明的微生物菌株、以及任选地纯化代谢产物来生产微生物代谢产物的方法，所述微生物代谢产物比如为生物表面活性剂、酶、蛋白质、乙醇、乳酸、β-葡聚糖、肽、代谢中间体、多不饱和脂肪酸和脂质。该方法生成的代谢物含量可为例如至少为20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％或90％。

可以将由感兴趣的微体生物产生的微生物生长副产品保留在微体生物中或分泌到生长培养基中。培养基可以包含稳定微生物生长副产物活性的化合物。

发酵培养基的生物质含量可以为例如5g/l至180g/l或更高，或10g/l至150g/l。

细胞浓度可以是诸如至少1x10⁶至1x10¹²、1x10⁷至1x10¹¹、1x10⁸至1x10¹⁰或1x10⁹CFU/ml等。

用于培养微生物和产生微生物副产物的方法和设备可以分批、准连续过程或连续过程进行。

在一个实施例中，在培养完成时(例如，在例如达到期望的细胞密度或特定代谢产物的密度时)除去所有微生物培养组合物。在该批次程序中，在收获第一批次后启动全新的批次。

在另一实施例中，在任何一次仅去除一部分发酵产品。在该实施例中，具有活细胞、孢子、分生孢子、菌丝和/或菌丝体的生物质作为新培养批次的接种剂保留在容器中。被去除的组合物可以是无细胞的培养基或包含细胞、孢子或其他繁殖繁殖体和/或其组合。以这种方式，创建了准连续系统。

有利地，该方法不需要复杂的装备或高能耗。感兴趣的微生物可以就地小规模或大规模培养并利用，甚至仍与它们的培养基混合。

有利地，可以远程生产基于微生物的产品。微生物生长设施可通过利用诸如太阳能、风能和/或水力发电等方式进行脱网外运行。

微生物菌株

根据本发明有用的微生物可以是诸如细菌、酵母和/或真菌的非植物病原菌株等。这些微体生物可以是天然的或基因修饰的微体生物。例如，可以用特定基因变换微体生物以表现出特定特征。所述微体生物也可以是所需菌株的突变体。如本文所使用的，“突变体”是指参考微体生物的菌株、遗传变异体或亚型，其中，与参考微体生物相比，突变体具有一种或多种遗传变异(例如，点突变、错义突变、无义突变、缺失、重复、移码突变或重复扩增)。制备突变体的程序是微生物学领域众所周知的。例如，为此目的广泛使用了紫外线诱变和亚硝基胍。

在一个实施例中，该微生物是酵母或真菌。适合根据本发明用途的酵母和真菌物种包括短梗霉属(例如，出芽短梗酶菌)、三孢霉属、念珠菌属(例如，假丝酵母、假丝酵母、隐球酵母)、隐球菌属、德巴利酵母属(例如，汉逊德巴利酵母)、虫霉属、有孢汉逊酵母(例如，葡萄有孢汉逊酵母)、汉逊氏酵母属、伊萨酵母、克鲁维酵母属(例如，法弗克鲁维酵母)、被孢霉属、菌根、青霉属、须霉属、毕赤酵母属(例如，异常毕赤酵母、季也蒙毕赤酵母、西方毕赤酵母、库德里阿兹威毕赤酵母)、侧耳属(例如，白腐菌)、假曲霉菌(例如，蚜虫假酵母)、酵母属(例如，布拉氏酵母继代、酿酒酵母、酿酒圆酵母)、斯塔莫酵母(例如，球拟假丝酵母)、球拟酵母属、木霉属(例如，里氏木霉、哈茨木霉、钩状木霉、绿木霉)、黑粉菌属(例如，玉蜀黍黑粉菌)、威克汉姆酵母(例如，异常威克汉姆酵母)、拟威尔酵母属(例如，姆拉克拟威尔酵母)、接合酵母(例如，拜耳接合酵母)等。

在某些实施例中，微生物是被称为“嗜杀酵母”的酵母，其特征在于它会分泌有毒蛋白质或糖蛋白，而菌株本身对这些有毒蛋白质或糖蛋白免疫。这些微生物可以包括诸如念珠菌属(例如，隐球酵母)、隐球菌属、德巴利酵母属(例如，汉逊德巴利酵母)、有孢汉逊酵母(例如，葡萄有孢汉逊酵母)、汉逊氏酵母属、克鲁维酵母属(例如，法弗克鲁维酵母)、毕赤酵母属(例如，异常毕赤酵母、季也蒙毕赤酵母、西方毕赤酵母、库德里阿兹威毕赤酵母)、酵母属(例如，酿酒酵母)、球拟酵母属、黑粉菌属(例如，玉蜀黍黑粉菌)、威克汉姆酵母(例如，异常威克汉姆酵母)、拟威尔酵母属(例如，姆拉克拟威尔酵母)、接合酵母(例如，拜耳接合酵母)等。

在某些实施例中，微生物是细菌，包括革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌。细菌可以是诸如土壤杆菌属(例如，放射形土壤杆菌)、固氮菌(棕色固氮菌、褐球固氮菌)、固氮螺菌属(例如，巴西固氮螺菌)、杆菌(例如，解淀粉芽孢杆菌、环状芽胞杆菌、坚强芽孢杆菌、侧孢短芽胞杆菌、地衣芽孢杆菌、巨大芽胞杆菌、胶质芽孢杆菌、枯草杆菌)、弗拉托菌属(例如，金黄弗拉特氏菌)、细杆菌(例如，拉氏微杆菌、粘细菌(例如，黄色粘球菌、橙色标桩菌(Stignatella aurantiaca)、纤维堆囊菌、玫瑰小囊虫(Minicystis rosea))、泛菌(例如，成团泛菌)、假单胞菌属(例如，绿脓杆菌、绿针假单胞菌金色亚种(P.chlororaphissubsp.aureofaciens)(克鲁维(Kluyver))、恶臭假单胞菌)、根瘤菌属、红螺菌属(例如，深红螺菌)、鞘氨醇单胞菌(例如，少动鞘氨醇单胞菌和/或氧化硫杆菌(嗜酸性氧化硫杆菌))等。

在具体实施例中，本发明采用嗜杀酵母。优选地，这些酵母能够在植物的根的根-土界面上定植，并为根际提供许多益处。更具体地，本发明的酵母包括异常威克汉姆酵母(异常毕赤酵母)。发明人还设想了其他密切相关的物种，包括威克汉姆酵母和/或毕赤酵母单系支的其他成员，例如，季也蒙毕赤酵母(Pichia guilliermondii(Meyerozymaguilliermondii))、库德里阿兹威毕赤酵母和/或西方毕赤酵母。

异常威克汉姆具有许多对本发明有用的有益特性，包括其产生有利代谢物的能力。例如，异常威克汉姆能够生成外切-β-1,3-葡聚糖酶，外切-β-1,3-葡聚糖酶是能够控制或抑制广谱病原菌生长的酶。

在一个实施例中，异常威克汉姆能够生成一种或多种生物表面活性剂，包括诸如磷脂和/或糖脂。在某些实施例中，磷脂是心磷脂或结构类似于心磷脂的另一种磷脂。在某些实施例中，糖脂是槐脂。

除了各种生长副产物之外，这种酵母还能够生成植酸酶并提供多种蛋白质(含量高达干细胞生物质的50％)、脂质和碳源以及全谱矿物质和维生素(例如，B1；B2；B3(PP)；B5；B7(H)；B6；E)。

某些实施例中，微生物是木霉属真菌，例如哈茨木霉、绿木霉、哈氏木霉和/或里氏木霉。

除了保护植物免受病原体和害虫的侵害之外，木霉属定植的根部还可以增强根系生长和发展、作物生产力、对非生物胁迫的抗性和营养物质的生物利用度。

在某些实施例中，微生物是芽孢杆菌属细菌，例如，芽孢杆菌属细菌和/或解淀粉芽孢杆菌。在一个实施例中，该细菌是解淀粉芽孢杆菌亚种绿木霉。在一些实施例中，杆菌微生物可以溶解土壤中的磷化合物。

在一个实施例中，微生物为粘细菌或黏液形成菌。具体地，在一个实施例中，粘细菌是粘球菌属细菌，例如，黄色粘球菌。

在某些实施例中，微生物是能够固定和/或溶解土壤中氮、钾、磷和/或其他微量营养物质的微生物。

在一个实施例中，微生物是固氮微生物或固氮生物，选自：例如，固氮螺菌属、固氮菌、绿菌科、蓝杆菌、弗兰克氏菌属、克雷白杆菌属、根瘤菌、束毛藻属和一些古细菌。在具体实施例中，固氮细菌为棕色固氮菌。

在另一个实施例中，微生物为选自下列的钾调动微生物或KMB：例如，胶质芽孢杆菌、金黄弗拉特氏菌或摩西球囊霉菌。在一个具体的实施方案中，钾调动微生物是金黄弗拉特氏菌。

在一个实施例中，针对给定植物和/或环境定制施用于植物和/或其周围环境的微生物组合。有利地，在一些实施例中，微生物组合彼此协同作用以增强植物的健康状况、生长和/或产量。

基于微生物的产品的制备

本发明的一种基于微生物的产品仅是含微生物和/或微生物产生的微生物代谢物和/或任何残留营养物质的发酵培养基。发酵产品无需提取或纯化即可直接使用。如果需要，可以使用文献中描述的标准提取和/或纯化方法或技术容易地实现提取和纯化。

基于微生物产品中的微生物可以是活性或非活性形式，或者是营养细胞、生殖孢子、菌丝体、菌丝、分生孢子的形式或任何其他形式的微生物繁殖体。基于微生物的产品还可以包含这些形式微生物的组合。

在一个实施例中，将不同的微生物菌株分开培养，然后混合在一起产生基于微生物的产品。任选地，在混合之前，可以将微生物与其将生长于其中培养基混合并干燥。

在一个实施例中，不将不同的微生物菌株混合在一起，而是将其作为单独的基于微生物的产品施用于植物和/或其环境中。

无需进一步稳定、保存和储存即可使用基于微生物的产品。有利地，这些基于微生物的产品的直接使用保持了微体生物的高活力，降低了被外来试剂和不希望有的微体生物污染的可能性，并维持了微生物生长的副产品的活性。

在从生长容器中收获基于微生物的组合物时，当收获的产品被放置到容器中或以其他方式运输以供使用时，可添加其他组分。添加剂可以是诸如缓冲剂、载体、在相同或不同设施下生产的其他基于微生物的组合物、粘度调节剂、防腐剂、微生物生长营养物质、表面活性剂、乳化剂、润滑剂、溶解度控制剂、示踪剂、溶剂、杀生物剂、抗生素、pH调节剂、螯合剂、稳定剂和抗紫外线剂、通常用于此类制剂的其他微生物和其他合适的添加剂等。

在一个实施例中，可以添加包括有机酸和氨基酸或它们的盐的缓冲剂。合适的缓冲剂包括柠檬酸盐、葡萄糖酸盐、酒石酸盐、苹果酸盐、乙酸盐、乳酸盐、草酸盐、天冬氨酸盐、丙二酸盐、葡庚糖酸盐、丙酮酸盐、半乳酸盐、葡糖酸盐、丙醇二醇盐、谷氨酸盐、甘氨酸、赖氨酸、谷氨酰胺、蛋氨酸、半胱氨酸、精氨酸和它们的混合物。也可以使用磷酸和亚磷酸或其盐。适合使用合成缓冲剂，但是优选使用天然缓冲剂，例如上面列出的有机酸和氨基酸或其盐。

在另一个实施例中，pH调节剂包括氢氧化钾、氢氧化铵、碳酸钾或碳酸氢盐、盐酸、硝酸、硫酸或混合物。基于微生物的组合物的pH值应适合感兴趣的(多种)微生物。

在一个实施例中，在配方中可以包括其他组分，例如，诸如碳酸氢钠或碳酸钠、硫酸钠、磷酸钠、磷酸二钠等盐的水性化制剂。

在某些实施例中，可向组合物中添加粘结物质以延长产品对植物部分的粘附。可使用聚合物(例如，带电聚合物)或多糖基物质(例如，黄原胶、瓜尔豆胶、黎凡胶、木聚糖、结冷胶、凝胶多糖、普鲁兰多糖、右旋糖酐及其他)。

在优选实施例中，使用商业级黄原胶作为粘结剂。应根据商业产品中的胶含量来选择胶的浓度。如果黄原胶是高纯度的，那么0.001％(w/v-黄原胶/溶液)就足够了。

在一个实施例中，可将葡萄糖、丙三醇和/或甘油添加到基于微生物的产品中，例如，在储存和运输期间作为渗透剂。在一个实施例中，可以包括糖蜜。

在一个实施例中，可将益生元添加到基于微生物的产品中和/或与基于微生物的产品同时施用，以增强微生物生长。合适的益生元包括(例如)昆布提取物、富里酸、腐殖酸盐和腐殖酸。在具体实施例中，施用益生元的量为约0.1L/英亩至约0.5L/英亩，或约0.2L/英亩至约0.4L/英亩。

任选地，产品可以在使用之前被储存。储存时间优选为短时。因此，储存时间可以小于60天、45天、30天、20天、15天、10天、7天、5天、3天、2天、1天或12小时。在优选实施例中，如果产品中存在活细胞，则在低温下储存产品，例如，低于20℃、15℃、10℃或5℃。

基于微生物产品的本地生产

在本发明的某些实施例中，微生物生长设施会以期望的规模产生新鲜的、高密度的微生物和/或感兴趣的微生物生长副产物。微生物生长设施可以位于施用位置处或附近。所述设施在分批的、准连续的或连续的培养中生产高密度的基于微生物的组合物。

本发明的微生物生长设施可位于将使用基于微生物的产品的地点(例如，柑橘林)。例如，微生物生长设施可以距使用地点少于300、250、200、150、100、75、50、25、15、10、5、3或1英里。

由于可以在当地生产基于微生物的产品，而无需传统微生物生产的微生物稳定、保存、储存和运输过程，因此，可以产生更高密度的微生物，由此现场施用需要更小体积的微生物基产品，或需要取得所需效率时能够施用更高密度的微生物。这使得生物反应器能够减小规模(例如，更小的发酵容器、更小的接种体材料、营养物质和pH值控制剂的供应量)，这使得系统更有效，并且可以无需稳定细胞或将细胞从培养基中分离。当地生产基于微生物的产品还有助于将生长培养包含在产品中。培养基可含有发酵过程中产生的特别适合本地使用的制剂。

在田间，当地生产的高密度、健壮的微生物培养基比那些在供应链中保留了一段时间的微生物培养基更有效。与传统产品(其中，细胞已与发酵生长培养基中存在的代谢物和营养素分离)相比，本发明的基于微生物的产品是特别有利的。减少的运送时间允许根据本地需求以一定的时间和体积生产和递送新鲜批次的微生物和/或其代谢物。

本发明的微生物生长设施会生产新鲜的基于微生物的组合物，其包含微生物本身、微生物代谢物和/或微生物生长介质的其他组分。如果需要，该组合物可以具有高密度的营养细胞或繁殖体，或营养细胞和繁殖体的混合物。

有利地，可以定制所述组合物以用于指定位置。在一个实施例中，微生物生长设施位于或靠近施用微生物产品的场所(例如，柑橘林)。

有利地，这些微生物生长设施对目前依赖遥远的工业规模生产商的问题提供了解决方案，这些生产商的产品质量会因上游延迟加工、供应链瓶颈、不当储存和其他意外事件而受到影响，这些意外事件会阻碍及时交付和施用诸如活的、高细胞数的产品和细胞最初生长的相关培养基和代谢物。

本微生物生长设施能够定制基于微生物的产品，从而提高与目的地地理情况的协同效应，进而提供制造的多功能性。有利地，在优选实施例中，本发明的系统会利用当地自然产生的微生物及其代谢副产物的力量，改善农业生产。

单个容器的培养时间可以是诸如1至7天或更长。可以以多种不同的方式中的任何方式收获培养产品。

在例如发酵的24小时之内的本地生产和递送引致纯净的、高细胞密度的组合物并且大大降低了运输成本。鉴于在开发更有效和更强大的微生物接种剂方面有快速发展的前景，消费者将从这种快速递送基于微生物的产品的能力中受益匪浅。

增强植物根部健康状况和免疫健康状况的方法

在优选实施例中，提供了用于增强植物健康状况、生长和/或产量的方法，其中，使包含酵母和/或其生长副产物的土壤处理组合物与植物和/或其周围环境接触。优选地，酵母是异常威克汉姆酵母或与其相关的物种。在一些实施例中，根据本发明的方法处理多种植物和/或其周围环境。

在某些实施例中，在通过诸如将干燥的粉末或颗粒溶解于水中等方式来制备组合物之后，使土壤处理组合物与植物或其环境接触。为了改善或稳定处理组合物的效果，可以将其与合适的佐剂混合，然后就这样使用或在必要时稀释后使用。

在一个实施例中，额外微生物可以与酵母同时使用。例如，还可以施用诸如黄色粘球菌等的粘细菌，和/或能够在土壤中固定、调动和/或溶解氮、钾、磷(或磷酸盐)和/或其他微量营养物质的一种或多种微生物。在一个实施例中，还可以施用诸如棕色固氮菌等的固氮微生物。在另一个实施例中，还可以施用诸如金黄弗拉特氏菌的钾调动微生物。

在某些实施例中，组合物的微生物彼此协同作用以增强植物的健康状况、生长和/或产量，和/或增强根际的性质。

在一些实施例中，该方法还包括施用具有该组合物的材料以增强微生物在施用期间的生长(例如，促进微生物生长的营养素和/或益生元)。在一个实施例中，营养源可包括诸如氮、钾、磷、镁、蛋白质、维生素和/或碳的来源等。在一个实施例中，益生元包括诸如昆布提取物、富里酸、腐殖酸盐和腐殖酸等。

在一个实施例中，所述方法可以通过增进根部的健康和生长来增进植物的健康、生长和/或产量。更具体地，在一个实施例中，所述方法可以用于改善植物根部生长的根际的性质，例如营养素和/或水分保持的性质。

另外，在一个实施例中，所述方法可以用于用一种或多种有益微体生物接种根际。例如，在优选实施例中，土壤处理组合物的微生物可定植于根际，并且向根部生长在其中的植株提供多种益处，这些益处包括保护和提供营养。

有利地，在一个实施例中，本发明的方法可用于增强由于病原体感染、或环境应激源(例如，干旱)感染而免疫健康状况受损的植物的健康状况、生长和/或产量。因此，在某些实施例中，本发明的方法还可用于改善植株的免疫健康状况或免疫应答。

如本文所用，“施用”组合物或产品是指使组合物或产品与目标或场所接触，使得该组合物或产品可以对该目标或场所产生影响。可由诸如微生物生长和/或与植物相互作用，以及代谢物、酶、生物表面活性剂或其他微生物生长副产物的作用等造成这种影响。应用还可以包括用组合物“处理”目标或场所。

应用还可以包括使基于微生物的产品直接与植物、植物部分和/或植物的周围环境(例如，土壤或根际)接触。如本文所用，植物的“周围环境”是指植物生长在其中的土壤和/或其他介质，包括根际。在某些实施例中，周围环境范围不超过诸如距离工厂的半径至少5英里、1英里、1000英尺、500英尺、300英尺、100英尺、10英尺、8英尺或6英尺等的范围。

该微生物产物可作为种子处理剂施用或施用于土壤表面，或施用于植物或植物部分的表面(例如，施用于根、块茎、茎、花、叶、果实或花的表面)。可以作为液体、粉尘、颗粒、微粒、丸剂、可湿性粉末、可流动性粉末、乳剂、微胶囊、油、凝胶、糊状物或气雾剂进行喷涂、浇注、喷洒、注射或扩散。

在具体实施例中，该组合物与植物的一个或多个根接触。可将该组合物(例如，通过喷洒或浸泡根)直接施用于根和/或(例如，通过将该组合物投药至植物生长的土壤(例如，根际))间接地施用。可在种植之前或种植时，将该组合物施用于植物的种子，或施用于植物的任何其他部分和/或其周围环境中。

在某些实施例中，在不进行机械掺合的情况下，使本发明提供的组合物施用于土壤表面。可以通过降雨、洒水、洪水或滴灌来激活土壤施用的有益效果，然后将其递送到例如植物的根部。

在植物栽培过程中的任何时候都可以对植物和/或其环境进行处理。例如，可以在将种子种植到土壤之前、同时或之后将土壤处理组合物施用于土壤。也可以在植物发育和生长后的任何时候对其施用，包括植物开花、结果、以及叶片脱落期间和/或之后。

在一个实施例中，可在大规模农业环境下使用该方法。该方法可包括将组合物投药至与灌溉系统相连的水箱中，该灌溉系统用于向作物、果园或田地供应水、肥料或其他液体组合物。因此，植物和/或植物周围的土壤可以经由例如土壤注入、土壤浸湿、或者使用中心枢轴灌溉系统、或者通过在种子犁沟上喷雾、或者通过洒水器或滴灌器用土壤处理组合物进行处理。有利地，该方法适合一次性处理数百英亩的作物、果园或田地。

在一个实施例中，可在较小规模环境下使用该方法，例如，在家庭园林或温室中使用该方法。在这种情况下，该方法可包括使用手持式草坪和花园喷雾器向植物和/或其周围环境喷洒该土壤处理组合物。可以使该组合物与水、(任选地)其他草坪和园林处理剂(例如，肥料和杀虫剂)混合。还可以将该组合物混合到标准的手持式洒水罐中，然后倾倒在土壤上。

在某些实施例中，作物植株受到的处理是健康的。有利地，本发明可用于增强(例如)由于植株受疾病和/或疾病症状影响而具有受损的免疫系统的植株的免疫应答。

例如，植物可能受到下列致病株影响：假单胞菌(例如，萨瓦斯坦假单胞菌、丁香假单胞菌)、青枯菌、农杆菌(例如，根瘤农杆菌)、黄单胞菌属(例如，水稻白叶枯菌、野油菜黄单胞菌、轴索体黄单胞菌)、欧文菌属(例如，解淀粉欧文菌)、木质部小菌属(例如，木质部难养菌)、迪基氏菌(例如，达旦提狄克氏菌和黑胫病菌)、果胶杆菌属(例如，胡罗卜软腐果胶杆菌和黑腐果胶杆菌)、棒形杆菌属(例如，密执安棒形杆菌和分离棒状杆菌)、柑橘黄龙病菌亚洲种、泛生菌、伯克霍尔德菌、嗜酸菌属、链霉菌属、螺旋质体和/或植原体，以及黄龙病(HLB，柑橘青果病)、柑橘溃疡病、柑橘细菌性斑点病、柑橘斑枯病、褐腐病、柑橘根腐病、柑橘黑斑病。

在一个实施方案中，该方法用于增强受柑橘青果病和/或柑橘溃疡病影响的柑橘树的健康状况、生长和/或产量。

本发明可用于增强诸如农业、园艺、温室、景观美化等领域中的植物和/或作物的健康状况、生长和/或产量。本发明还可用于用于改善一种或多种土壤质量，从而，提高用于农业、家庭和园艺的土壤的性能。另外，本发明可用于牧场管理中，以及用于专业草坪和景观管理中。

在某些实施方案中，为增强植株健康状况和生命力，还可施用该土壤处理组合物，从而促进根部和/或根际定植以及植物的维管系统。因此，可以促进诸如根瘤菌和/或菌根等的营养固定微生物的生长，以及促进作物生长、健康状况和/或产量的其他有益的内源和外源微生物和/或其副产物。该基于微生物的产品还可以通过诸如进入和定植所述维管系统以及贡献代谢物和对植物健康状况和生产力重要的营养物质来支持植物的维管系统。

在又一个实施例中，该方法可用于消除和/或阻止有害的或可能与有益土壤微生物竞争的土壤微生物对根际的定植。

在一个实施例中，可使用该方法增强有益分子渗透通过根细胞外层，例如在根际的根-土界面处。

可使用本发明来改善任何类型土壤的任何数目的质量，例如，粘土、砂质、粉质、泥炭质、白垩质、壤土和/或它们的组合。此外，可使用该方法和组合物，改善干燥、浸水、多孔、贫化、压实土壤和/或它们的组合的质量。土壤可包括根际土壤或根际以外的土壤。

在一个实施例中，可使用该方法来改善淹水土壤的排水和/或水扩散。在一个实施例中，可使用该方法来改善干燥土壤的保水性。

在一个实施例中，可使用该方法来改善多孔和/或贫化土壤中营养物质的保留。另外，在一个实施例中，该方法可用于向植物提供营养，和/或治疗和/或防止植物营养缺乏。例如，在一个实施例中，当土壤处理组合物的酵母死亡时，它们的细胞会为植物和或其他土壤微生物群提供丰富的营养、蛋白质、维生素和矿物质以供利用。

在另一个实施例中，其中，土壤处理组合物的酵母会生成植酸酶，该方法可用于向植物提供磷酸盐形式的磷。植酸酶能使土壤中的植酸转化为植物生物可利用(例如，根系可吸收)的磷酸盐。另外，该方法可用于治疗和/或防止植物缺磷。

在一个实施例中，该方法会控制致病菌。在一个实施例中，该方法通过增强植物的免疫健康状况和提高抵抗感染的能力来间接增强植物免疫应答。

在又一实施例中，该方法会控制可能起到致病菌介体或载体作用的害虫。对于由植物病原菌(特别是那些引起斑点、溃疡、枯萎病、瘿瘤或软腐病的病原菌)引起的大多数植物病害，细菌可以以粘性渗出物液滴或大量粘性渗出物的形式逃至寄主植物的表面。细菌渗出物会通过感染区域内的裂缝或伤口释出，或通过植物感染区域内的自然开口释出。然后，诸如苍蝇、蚜虫、蚂蚁、甲虫、粉虱等昆虫降落在植物上并与这种物质接触时，这些细菌就很可能附着在昆虫的腿上和身体上。

细菌分泌物中所含的糖分会吸引这些昆虫中的许多种，这些昆虫以这些糖分为食，并进一步涂抹在它们的身上和口器上。当昆虫移至植物的其他部位时或当昆虫移至其他易感的寄主植物时，它们身上会携带大量细菌。如果昆虫恰好落在植物的新鲜伤口或自然开口上，并且植物表面有足够的水分，则细菌可以繁殖，进入植物，并开始进行新的感染。因此，本发明的方法可以通过控制(例如，杀死)这些载体害虫来防止植物病原菌的传播。

可以单独使用基于微生物的产品，或者将基于微生物的产品与用于有效增强植物健康状况、生长和/或产量的其他化合物以及用于有效处理和预防植物病原性害虫的其他化合物组合使用。例如，该方法可以与营养素和/或微量营养素(诸如镁、磷酸盐、氮、钾、硒、钙、硫、铁、铜和锌)和/或一种或多种益生元(诸如昆布提取物(kelp extract)、富里酸、甲壳素、腐植酸盐和/或腐殖酸)的来源同时施用，以用于增进植物和/或微生物生长。受益于本公开的种植者或农业科学家可以确定确切的材料及其数量。

该组合物也可以与其他农业化合物和/或作物管理系统组合使用。在一个实施例中，该组合物可任选地包含诸如天然和/或化学杀虫剂、驱避剂、除草剂、肥料、水处理剂、非离子表面活性剂和/或土壤改良剂等，或与诸如天然和/或化学杀虫剂、驱避剂、除草剂、肥料、水处理剂、非离子表面活性剂和/或土壤改良剂等一起施用。

在一个实施例中，本发明的组合物可与表征为下列物质的农业化合物一起使用：阻垢剂，例如，羟基亚乙基二膦酸；

杀菌剂，例如，硫酸链霉素和/或

(放射形土壤杆菌K84菌株)；

抗微生物剂，例如，二氧化氯、二癸基二甲基氯化铵、卤化杂环和/或过氧化氢/过氧乙酸；

肥料，例如，N-P-K肥料、硝酸铵钙17-0-0、硫代硫酸钾、氮(例如，10-34-0、KuglerKQ-XRN、Kugler KS-178C、Kugler KS-2075、Kugler LS 6-24-6S、UN 28、UN 32)和/或钾；

杀真菌剂，例如，百菌清、代森锰锌六亚甲基四胺、三铝、嘧菌酯、芽孢杆菌(例如，地衣菌3086菌株、枯草杆菌、枯草杆菌QST 713菌株)、苯菌灵、啶酰茵胺、唑菌胺酯、克菌丹、萎锈灵、地茂散、百菌清、硫酸铜、氰霜唑、氯硝胺、烯酰吗啉、氯唑灵、甲基硫菌灵、咪唑菌酮、氯苯嘧啶醇、氟哌啶醇、氟咯菌腈、氟吡菌胺、二氯苯基甲乙基二氧咪唑烷羧酰胺、代森锰锌、代森锰、美凡诺仙、氟哌啶醇、美伐沙姆(mefanoxam)、氟咯菌腈、精甲霜灵(mefenoxam)、甲霜灵、腈菌唑、氟噻唑吡乙酮(oxathiapiproprin)、五氯硝基苯(quintozene)、磷酸、霜霉威、敌稗、唑菌胺酯、大虎杖、链霉菌属(例如，灰绿链霉菌(Streptomyces griseoviridis)K61菌株、利迪链霉菌(Streptomyces lydicus)WYEC108)、硫、尿素、噻苯咪唑、甲基硫菌灵、福美双(thiram)、三唑酮、三唑醇和/或烯菌酮；

生长调节剂，例如，嘧啶醇(ancymidol)、氯化氯代胆碱、丁酰肼(diaminozide)、氯丁唑和/或烯效唑(uniconazole)；

除草剂，例如，草甘膦、乙氧氟草醚和/或二甲戊乐灵；

杀虫剂，例如，乙酰甲胺磷、印楝素、苏云金芽胞杆菌(例如，以色列亚种AM 65-52菌株)、球孢白僵菌(例如，GHA菌株)、西维因、毒死蜱、氰基咪唑啉、环丙氨嗪、三氯杀螨醇、二嗪酮、呋喃二胺、吡虫啉、玫烟色拟青霉菌(Isaria fumosorosae)(例如，Apoka菌株97)、林丹和/或马拉硫磷；

水处理剂，例如，过氧化氢(30-35％)、膦酸(5-20％)和/或亚氯酸钠；

以及糖脂、脂肽、避蚊胺、硅藻土、香茅、精油、矿物油、大蒜提取物、辣椒提取物和/或受益于本公开的技术人员确定为兼容的任何已知的商业和/或自制杀虫剂。

在某些实施例中，通过诸如增强药物化合物对植物或害虫的渗透性等方式，基于微生物的产品可用于增强其他化合物的有效性。基于微生物的产品还可用于补充其他处理，例如，抗生素处理。有利地，本发明有助于减对作物或植物的抗生素的必要给药量，从而有效地处理和/或预防细菌感染。

在一个实施例中，与在未经处理环境中生长的植物相比，根据本发明的方法和组合物会导致下列项目中的一个或多个的增加约5％、10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％、100％、150％、200％或更多：生长指数、根质量、植株高度、树干直径、芽生长、芽数、冠层密度、白利度值、叶绿素含量、果实数、果实质量、根质量、总植物生物质、植物的花数和/或叶片组织氮水平。

在某些实施例中，与未经处理的作物相比，根据本发明的方法和组合物会导致作物产量增加约5％、10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％、100％、150％、200％或更多。

在一个实施例中，与在未处理环境中生长的植物相比，根据本发明的方法和组合物会使植物或植物周围环境中害虫的数量减少约55％、10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％、100％、150％、200％或更多。

在一个实施例中，与在未处理环境中生长的植物相比，根据本发明的方法和组合物会使由害虫造成的植株受损减少约5％、10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％、100％、150％、200％或更多。

目标植物

如本文所用，术语“植物”包括但不限于木本植物、观赏植物或装饰植物、作物或谷类植物、水果或菜苗、花卉或树木、大型藻类或微藻、浮游植物和光合藻类(例如，绿藻莱茵衣藻)。“植物”还包括单细胞植物(例如，微藻)和多种植物细胞，其会大量分化成菌落(例如，团藻虫属)或在植物发育的任何阶段存在的结构。这种结构包括但不限于果实、种子、芽、茎、叶、根、花瓣等。此外，植物可以独立存在(例如，在花园中)，或者其可以是许多植物中的一种(例如，作为果园、作物或草场的一部分)。

如本文所用，“作物植物”是指可供人类食用或用作动物或鱼类或海洋动物饲料的，或供人类消费，或供人类使用(例如，纺织品或化妆品生产)，或供人类观赏(例如，景观或园林中的花或灌木)的任何物种的植物或藻类，或用于产业、商业或教育的任何植物或藻类，或它们的部分。

应用本发明的产品和方法可对下列作物类型有益，包括但不限于：行栽作物(例如，玉米、大豆、高粱、花生、土豆等)、大田作物(例如，苜蓿、小麦、谷物等)、木本作物(例如，核桃、杏、山核桃、榛子、阿月浑子树等)、柑橘作物(例如，橙、柠檬、葡萄柚等)、水果作物(例如，苹果、梨、草莓、蓝莓、黑莓等)、草场作物(例如，草皮)、观赏作物(例如，花卉、藤蔓等)、蔬菜(例如，西红柿、胡萝卜等)、藤本作物(例如，葡萄等)、林业(例如，松树、云杉、桉树、杨树等)、受管牧草(用来供应放牧动物的植物的任何混合)。

本发明对其有用的植物的额外实例包括但不限于：谷物和草类(例如，小麦、大麦、黑麦、燕麦、水稻、玉米(maize)、高粱、玉米(corn))、甜菜(例如，糖用甜菜或饲用甜菜)；水果(例如，葡萄、草莓、覆盆子、黑莓、仁果类水果、核果、软果、苹果、梨、李子、桃、杏、樱桃或浆果)；豆科作物(例如，豆、扁豆、豌豆或大豆)；油料作物(例如，油菜、芥菜、罂粟、橄榄、向日葵、椰子、蓖麻、可可或花生)；瓜类(例如，南瓜、黄瓜、南瓜小果或甜瓜)；纤维植物(例如，棉花、亚麻、汉麻或洛麻)；柑橘水果(例如，橙、柠檬、葡萄柚或橘)；蔬菜(例如，菠菜、莴苣、芦笋、卷心菜、胡萝卜、洋葱、西红柿、土豆或甜椒)；樟科植物(例如，鳄梨、肉桂或樟脑)；以及烟草、坚果、草药、香料、药用植物、咖啡、茄子、甘蔗、茶、灯笼椒、葡萄藤、蛇麻子、车前草科、橡胶植物、切花和装饰植物。

在某些实施例中，作物植株是柑橘植株。根据本发明的柑橘植株的实例包括但不限于桔树、柠檬树、酸橙树和葡萄柚树。其他实例包括柚子(Citrus maxima/Pomelo)、香橼(Citrus medica/Pomelo)、大翼橙(Citrus micrantha/Papeda)、宽皮橘(Citrusreticulata/Mandarin orange)、葡萄柚(Citrus paradisi/grapefruit)、金橘(Citrusjaponica/kumquat)、澳洲手指青柠(Citrus australasica/Australian Finger Lime)、澳洲圆柠檬(Citrus australis/Australian Round lime)、澳洲沙地橘(Citrus glauca/Australian Desert Lime)、白山青柠(Citrus garrawayae/Mount White Lime)、卡卡杜青柠或汉普蒂杜青柠(Citrus gracilis)、拉塞尔河青柠(Citrus inodora/Russel RiverLime)、新几内亚野生青柠(Citrus warburgiana/New Guinea Wild Lime)、布朗河手指青柠(Citrus wintersii/Brown River Finger Lime)、哈密橘Citrus halimii沙卡橘(limaukadangsa)、凯拉橘(limau kedut kera))、印第安野生橙子(Citrus indica/Indian wildorange)、马蜂橙(Citrus macroptera)和拉迪橘(Citrus latipes)、墨西哥青柠(Citrus xaurantiifolia/Key lime)、苦橙(Citrus x aurantium/Bitter orange)、波斯橙(Citrusx latifolia/Persian lime)、柠檬(Citrus x limon/Lemon)、黎橙(Citrus x limonia/Rangpur)、甜橙(Citrus x sinensis/Sweet orange)、红橘Citrus x tangerina/Tangerine)、皇家柠檬(Imperial lemon)、橘柚、柚橙(orangelo)橘柑、金诺橘(kinnow)、清见橘(kiyomi)、明尼橘柚(Minneola tangelo)、白金柚、丑橘、佛手柑(Buddha's hand)、香橼、香柠檬(bergamot orange)、血橙、加利蒙地亚橘(calamondin)、克莱门氏小柑橘(clementine)、梅尔柠檬(Meyer lemon)和日本柚子(yuzu)。

在一些实施例中，作物植物是柑橘植物的亲属，例如，月橘、臭橘、枸橘(枳)。

目标植物的额外实例包括属于绿色植物超科的所有植物，特别是单子叶植物和双子叶植物，包括选自下列的饲料豆科或豆科饲用植物、观赏植物、粮食作物、树木或灌木：槭树属(Acer spp.)、猕猴桃属(Actinidia spp.)、秋葵属(Abelmoschus spp.)、剑麻(Agavesisalana)、冰草属(Agropyron spp.)、匍茎剪股颖(Agrostis stolonifera)、葱属(Alliumspp.)、苋属(Amaranthus spp.)、滨草(Ammophila arenaria)、凤梨(Ananas comosus)、番荔枝属(Annona spp.)、芹菜(Apium graveolens)、落花生属(Arachis spp)、木波罗属(Artocarpus spp.)、石刁柏(Asparagus officinalis)、燕麦属(Avena spp.)(例如，燕麦(A.sativa)、野燕麦(A.fatua)、比赞燕麦(A.byzantina)、A.fatua var.sativa、杂种燕麦(A.hybrida))、阳桃(Averrhoa carambola)、簕竹属(Bambusa sp.)、冬瓜(Benincasahispida)、巴西粟(Bertholletia excelsea)、甜菜(Beta vulgaris)、芸苔属(Brassicaspp.)(例如，欧洲油菜(B.napus)、甘蓝型油菜(B.rapa ssp.)[芸苔、油菜籽油菜、芜菁])、Cadaba farinosa、大叶茶(Camellia sinensis)、美人蕉(Canna indica)、大麻(Cannabissativa)、辣椒属(Capsicum spp.)、苔草(Carex elata)、番木瓜(Carica papaya)、大果假虎刺(Carissa macrocarpa)、山核桃属(Carya spp.)、红花(Carthamus tinctorius)、栗属(Castanea spp.)、爪哇木棉(Ceiba pentandra)、苦苣(Cichorium endivia)、樟属(Cinnamomum spp.)、西瓜(Citrullus lanatus)、柑橘属(Citrus spp.)、椰子属(Cocosspp.)、咖啡属(Coffea spp.)、芋(Colocasia esculenta)、可拉属(Cola spp.)、黄麻属(Corchorus sp.)、芫荽(Coriandrum sativum)、榛属(Corylus spp.)、山楂属(Crataegusspp.)、番红花(Crocus sativus)、南瓜属(Cucurbita spp.)、香瓜属(Cucumis spp.)、菜蓟属(Cynara spp.)、胡萝卜(Daucus carota)、山马蝗属(Desmodium spp.)、龙眼(Dimocarpus longan)、薯蓣属(Dioscorea spp.)、柿树属(Diospyros spp.)、稗属(Echinochloa spp.)、油棕属(Elaeis)(例如，非洲油棕(E.guineensis)、美洲油棕(E.oleifera))、

子(Eleusine coracana)、苔麸(Eragrostis tef)、蔗茅属(Erianthussp.)、枇杷(Eriobotrya japonica)、桉属(Eucalyptus sp.)、红仔果(Eugenia uniflora)、荞麦属(Fagopyrum spp.)、山毛榉属(Fagus spp.)、苇状羊茅(Festuca arundinacea)、无花果(Ficus carica)、金桔属(Fortunella spp.)、草莓属(Fragaria spp.)、银杏(Ginkgobiloba)、大豆属(Glycine spp.)(例如，大豆(G.max)、黄豆(Soja hispida)或大豆(Sojamax))、陆地棉(Gossypium hirsutum)、向日葵属(Helianthus spp.)(例如，向日葵(H.annuus)、营草(Hemerocallis fulva)、木槿属(Hibiscus spp.)、大麦属(Hordeumspp.)(例如，大麦(H.vulgare)、甘薯(Ipomoea batatas)、核桃属(Juglans spp.)、莴苣(Lactuca sativa)、黧豆属(Lathyrus spp.)、兵豆(Lens culinaris)、亚麻(Linumusitatissimum)、荔枝(Litchi chinensis)、百脉根属(Lotus spp.)、棱角丝瓜(Luffaacutangula)、羽扇豆属(Lupinus spp.)、地杨梅(Luzula sylvatica)、备茄属(Lycopersicon spp.)(例如，番茄(L.esculentum、(L.lycopersicum、(L.pyriforme))、硬皮豆属(Macrotyloma spp.)、苹果属(Malus spp.)、西印度樱桃(Malpighia emarginata)、曼密草果(Mammea americana)、芒果(Mangifera indica)、木薯属(Manihot spp.)、人心果(Manilkara zapota)、紫花苜蓿(Medicago sativa)、草木樨属(Melilotus spp.)、薄荷属(Mentha spp.)、芒(Miscanthus sinensis)、苦瓜属(Momordica spp.)、黑桑(Morusnigra)、芭蕉属(Musa spp.)、烟草属(Nicotiana spp.)、木犀榄(Olea spp.)、仙人掌属(Opuntia spp.)、Ornithopus spp.、稻属(Oryza spp.)(例如，稻(O.sativa)、阔叶稻(O.latifolia))、黍糜(Panicum miliaceum)、柳枝稷(Panicum virgatum)、鸡蛋果(Passiflora edulis)、欧防风(Pastinaca sativa)、狼尾草属(Pennisetum sp.)、鳄梨属(Persea spp.)、香芹(Petroselinum crispum)、萬草(Phalaris arundinacea)、菜豆属(Phaseolus spp.)、梯牧草(Phleum pratense)、刺葵属(Phoenix spp.)、南方芦苇(Phragmites australis)、酸浆属(Physalis spp.)、松属(Pinus spp.)、阿月浑子(Pistacia vera)、豌豆属(Pisum spp.)、早熟禾属(Poa spp.)、杨属(Populus spp.)、牧豆树(Prosopis spp.)、李属(Prunus spp.)、番石榴(Psidium spp.)、石榴(Punicagranatum)、西洋梨(Pyrus communis)、栎属(Quercus spp.)、萝卜(Raphanus sativus)、波叶大黄(Rheum rhabarbarum)、茶煎子属(Ribes spp.)、蓖麻(Ricinus communis)、悬钩子属(Rubus spp.)、甘蔗属(Saccharum spp.)、柳属(Salix sp.)、接骨木属(Sambucusspp.)、黑麦(Secale cereale)、胡麻属(Sesamum spp.)、白芥属(Sinapis sp.)、茄属(Solanum spp.)、(例如，马铃薯(S.tuberosum)、红茄(S.integrifolium)或番柿(S.lycopersicum))、两色蜀黍(Sorghum bicolor)、菠菜属(Spinacia spp.)、蒲桃属(Syzygium spp.)、万寿菊属(Tagetes spp.)、酸豆(Tamarindus indica)、可可树(Theobroma cacao)、车轴草属(Trifolium spp.)、鸭茅状摩擦禾(Tripsacumdactyloides)、小黑麦(Triticosecale rimpaui)、小麦属(Triticum spp.)(例如，小麦(T.aestivum)、硬粒小麦(T.durum)、圆锥小麦(T.turgidum)、T.hybernum、马卡小麦(T.macha)、面包小麦(T.sativum)、一粒小麦(T.monococcum)或普通小麦(T.vulgare))、小金莲花(Tropaeolumminus)、早金莲(Tropaeolum majus)、越桔属(Vaccinium spp.)、野豌豆属(Vicia spp.)、豇豆属(Vigna spp.)、香堇菜(Viola odorata)、葡萄属(Vitis spp.)、玉蜀黍(Zea mays)、北美洲野生稻(Zizania palustris)、枣属(Ziziphus spp.)等。

目标植物还可包括但不限于：玉米(玉蜀黍(Zea mays)、芸苔属(Brassica sp.)(例如，欧洲油菜(B.napus)、芜菁(B.rapa)、芥菜(B.juncea)，特别是用作种子油料来源的芸苔属、苜蓿((紫苜蓿(Medicago sativa)、水稻(Oryza sativa)、黑麦(Secale cereale)、高梁(两色高梁(Sorghum bicolor)、高梁(Sorghum vulgare))、稷(例如，珍珠粟(Pennisetum glaucum)、黍(Panicum miliaceum)、小米(Setaria italica)、龙爪稷(Eleusine coracana))、向日葵(Helianthus annuus)、红花(Carthamus tinctorius)、小麦(Triticum aestivum)、大豆(Glycine max)、烟草(Nicotiana tabacum)、马铃薯(Solanum tuberosum)、落花生(Arachis hypogaea)、棉花(海岛棉(Gossypiumbarbadense)、陆地棉(Gossypium hirsutum))、甘薯(Ipomoea batatus)、木薯(Manihotesculenta)、咖啡(咖啡属(Coffea spp.)、椰子(Cocos nucifera)、菠萝(Ananascomosus)、柑橘属(Citrus spp.)、可可(Theobroma cacao)、茶(Camellia sinensis)、香蕉(芭蕉属(Musa spp.))、鳄梨(Persea americana)、无花果(Ficus casica)、番石榴(Psidium guajava)、芒果(Mangifera indica)、橄榄(油橄榄(Olea europaea))、番木瓜(Carica papaya)、腰果(Anacardium occidentale)、全缘叶澳洲坚果(Macadamiaintegrifolia)、杏(扁桃(Prunus amygdalus))、甜菜(Beta vulgaris)、甘蔗(Saccharumspp.)、燕麦、大麦、蔬菜、观赏植物和针叶树。

目标蔬菜植物包括西红柿(Lycopersicon esculentum)、莴苣(例如，生菜(Lactuca sativa)、绿豆(Phaseolus vulgaris)、利马豆(Phaseolus limensis)、豌豆(Lathyrus spp.)和甜瓜属成员(genus Cucumis)，例如，黄瓜(C.sativus)、哈密瓜(C.cantalupensis)和甜瓜(C.melo)。观赏植物包括杜鹃花(Rhododendron spp.)、绣球花(Macrophylla hydrangea)、木槿(Hibiscus rosasanensis)、玫瑰(Rosa spp.)、郁金香(Tulipa spp.)、水仙花(Narcissus spp.)、矮牵牛花(Petunia hybrida)、康乃馨(Dianthus caryophyllus)、一品红(Euphorbia pulcherrima)和菊花。在实践实施例中可以采用的针叶树包括：诸如火炬松(Pinus taeda)、湿地松(Pinus elliotii)、黄松(Pinusponderosa)、坑木松(Pinus contorta)和蒙特利松(Pinus radiata)等松树；花旗松(Pseudotsuga menziesii)；西部铁杉(Tsuga canadensis)；云杉(Picea glauca)；红杉(Sequoia sempervirens)；诸如银杉(Abies amabilis)和香脂冷杉(Abies balsamea)等的冷杉；以及，诸如西部红雪松(Thuja plicata)和阿拉斯加黄雪松(Chamaecyparisnootkatensis)等的雪松。实施例的植物包括作物植物(例如，玉米、苜蓿、向日葵、芸苔、大豆、棉花、红花、花生、高粱、小麦、谷子、烟草等)，例如，玉米植物和大豆植物。

目标草坪草包括但不限于：一年生早熟禾(Poa annua)；一年生黑麦草(Loliummultiflorum)；加拿大早熟禾(Poa compressa)；多变紫羊茅(Festuca rubra)；细弱翦股颖(Agrostis tenuis))；匍匐翦股颖(Agrostis palustris)；冰草(Agropyron desertorum)；扁穗冰草(Agropyron cristatum)；硬羊茅(Festuca longifolia)；草地早熟禾(Poapratensis)；果树园牧草(Dactylis glomerate)；多年生黑麦草(Lolium perenne)；紫羊茅(Festuca rubra)；红顶草(Agrostis alba)；普通早熟禾(Poa trivialis)；羊茅(Festucaovine)；无芒雀麦(Bromus inermis)；苇状羊茅(Festuca arundinacea)；猫尾草(Phleumpretense)；绒毛翦股颖(Agrostis canine)；碱茅(Puccinellia distans)；蓝茎冰草(Agropyron smithii)；行仪芝(Cynodon spp.)；白匍草(Stenotaphrum secundatum)；结缕草(Zoysia spp.)；巴哈雀稗(Paspalum notatum)；毯草(Axonopus affinis)；蜈蚣草(Eremochloa ophiuroides)；饲用狼尾草(Pennisetum clandesinum)；海滨雀稗(Paspalumvaginatum)；格兰马草(Bouteloua gracilis)；野牛草(Buchloe dactyloids)；穗草(Bouteloua curtipendula)。

其他关注的植物包括提供关注种子的谷物植物、油料种子植物和豆科植物。关注的种子包括谷物种子，例如，玉米、小麦、大麦、水稻、高粱、黑麦、小米等。油料种子植物包括棉花、大豆、红花、向日葵、芸苔、玉米、苜蓿、棕榈、椰子、亚麻、蓖麻、橄榄等。豆科植物包括豆类和豌豆。豆类包括瓜尔豆、刺槐豆、胡芦巴、大豆、菜豆、豇豆、绿豆、利马豆、蚕豆、扁豆、鹰嘴豆等。

其他关注的植物包括大麻(例如，普通大麻、印度大麻和地大麻)和工业大麻。

所有植物和植物部分都可以根据本发明进行处理。在这种情况下，应将植物理解为是指诸如所需和不需要的野生植物或作物植物(包括天然作物植物)等的所有植物和植物种群。作物植物可以是通过传统育种和优化方法或通过生物技术和重组方法或这些方法的组合获得的植物，包括转基因植物和植物品种。

将植物部分理解为是指植物的所有地上和地下部分和器官，例如，芽、叶、花和根，可提及的实例是叶、针叶、秆、茎、花、子实体、果实和种子，还有根、块茎和根状茎。植物部分还包括作物材料和无性繁殖、有性繁殖材料，例如，插枝、块茎、根状茎、枝条(slips)和种子。

在一些实施例中，该植物是受致病性疾病或害虫感染的植物。在具体实施例中，该植物受柑橘青果病和/或柑橘溃疡病和/或携带此类疾病的害虫感染。

实施例

通过以例示的方式给出的以下实施例，可以更好地理解本发明及其许多优点。以下实施例例示了本发明的一些方法、应用、实施方式和变体。不应认为它们是对本发明的限制。可以关于本发明进行许多改变和修改。

实施例1——异常威克汉姆酵母的固态发酵

对于异常威克汉姆酵母菌种生物质生产，使用米饭培养基。将约200克大米与600毫升GUY培养基(葡萄糖、尿素和酵母提取物，pH 5.71)或250毫升浓缩GY培养基(葡萄糖和酵母提取物，pH 5.69)和水混合。将培养基铺在不锈钢盘上，形成约1到2英寸厚的层，并灭菌。

灭菌后，在盘中接种种子培养物。任选地，可包括添加的营养物，以增强微生物生长，包括诸如盐和/或碳源等，例如糖蜜、淀粉、葡萄糖和蔗糖。

然后，将异常威克汉姆酵母的种子培养物喷洒或移液到基质表面上，并将托盘在封闭的反应器内28-30℃下进行培养。将环境空气泵入反应器，使温度稳定。培养48-72小时可产生1×10⁹个细胞/克或更多的异常威克汉姆酵母。

实施例2——制备基于微生物的产品

可以使用可密封袋来储存和运输产品，该产品包含含有与残余微生物发酵液(例如，按体积计10.0％微生物接种物和90％的发酵液)混合的至少1×10⁸CFU/ml的异常威克汉姆酵母的产品。可以将诸如微量营养素、大量营养素、益生元和/或其他类似产生的微生物等的其他化合物添加到产品中。

然后，向混合罐中添加水，稀释至1x10⁶至1x10⁷CFU/ml的浓度。一袋产品可以处理大约1-10英亩的作物或柑橘林。

组合物可与另外的“接种体”材料混合和/或同时施用，以促进组合物中微生物的初始生长。这些可以包括诸如益生元和/或纳米肥料(例如，Aqua-Yield，NanoGro^TM)等。

接种体组合物的一种示例性配方包含：

可溶性钾(K2O)(1.0％至2.5％，或约2.0％)

镁(Mg)(0.25％至0.75％，或约0.5％)

硫(S)(2.5％至3.0％，或约2.7％)

硼(B)(0.01％至0.05％，或约0.02％)

铁(Fe)(0.25％至0.75％，或约0.5％)

锰(Mn)(0.25％至0.75％，或约0.5％)

锌(Zn)(0.25％至0.75％，或约0.5％)

腐植酸(8％至12％，或约10％)

昆布提取物(5％至6％，或约6％)

水(70％至85％，或约77％至80％)

微生物接种剂和/或可选的促生长“接种体”材料与灌溉系统水箱中的水混合，并施用于土壤。

实施例2——佛罗里达州柑橘幼树田间研究

在使用根据本发明实施例的含异常威克汉姆(“STR10”)的组合物处理之后，对佛罗里达州柑橘幼树的生长反应进行评估。测量树干(直径)、高度和生长指数，并与采用标准种植者实践种植的对照组树进行比较。这些因素是种植者评价新栽无果柑橘树的活力的重要因素。更旺盛的生长意味着树木更健康，并将更快开始产生水果作物。因为柑橘树达到成熟的过程可能需要5年或更长时间，所以，这可能是有利的。

如图1所示，本研究的结果表明，在6个月的时间内，经STR10处理的幼树平均高度增加41％，平均树干直径测量增加126％，生长指数增加65％。对照组平均高度增加28％，平均树干直径增加57％，平均生长指数增加37％。实施例2——佛罗里达州柑橘幼树田间研究

在使用根据本发明实施例的含异常威克汉姆(“STR10”)的组合物处理之后，对佛罗里达州柑橘幼树的生长反应进行评估。

高度

两月内，向土壤施用该组合物，以每英亩1.5L进行总共7次处理。

测量树木高度，并与采用标准种植者实践种植的对照组树木进行比较。如图2所示，本研究的结果表明，在18个月的时间内，经本发明组合物处理的幼树总平均高度增加比对照组的高度增加大15％(处理组增加76％，对照组增加61％)。

生长指数

两月内，向土壤施用该组合物，以每英亩1.5L进行总共7次处理。

测量生长指数(GI)，并与采用标准种植者实践种植的对照组树进行比较。如图3所示，本研究的结果表明，在18个月的时间内，经本发明组合物处理的幼树总GI增加比对照组的GI增加大26％(处理组增加205％，对照组增加179％)。

树干直径

两月内，向土壤施用该组合物，以每英亩1.5L进行总共7次处理。

测量树干直径，并与采用标准种植者实践种植的对照组树进行比较。如图4所示，本研究的结果表明，在18个月的时间内，经本发明组合物处理的幼树总树干直径增加比对照组的树干直径增加大25％(处理组增加200％，对照组增加175％)。

芽生长

两月内，向土壤施用该组合物，以每英亩1.5L进行总共4次处理。

测量有新芽生长树木的数目，并与采用标准种植者实践种植的对照组树进行比较。如图5A所示，本研究的结果表明100％的经处理树木有新芽生长，而只有20％的对照组树有新芽生长。

还测量了经处理树的平均芽数与未处理对照组树的平均芽数。如图5B所示，本研究的结果表明，经处理树上平均有39个新芽，对照组树上平均有2个新芽。

每棵树的果实数

两月内，向土壤施用该组合物，以每英亩1.5L进行总共6次处理。

测量果实数，并与采用标准种植者实践种植的对照组树进行比较。如图6所示，本研究的结果表明，经处理树上平均每棵树有82个果实，对照组树上平均每棵树有34个果实。

实施例5——用于莴苣的STR10+额外微生物

实验1

将包含异常威克汉姆酵母的组合物(“STR10”)施用到种植奶油生菜的土壤中，并将莴苣的平均球重与未经处理的对照组莴苣进行比较。两周内，以34液体盎司/英亩总共3次施用该组合物。

如图7A所示，经处理莴苣的平均球重比对照组莴苣高105％。

实验2

将根据本发明实施例的组合物施用到种植奶油生菜的土壤中，在两周内进行总共3次处理，并与未经处理的对照组莴苣进行比较。开始两次处理包括34液体盎司/英亩的组合物，该组合物包含异常威克汉姆酵母的组合物(“STR10”)。第3次处理包括3液体盎司/英亩的组合物，该组合物包含哈茨木霉和解淀粉芽孢杆菌(“ThBa”)。

如图7B所示，经处理莴苣的平均球重比对照组莴苣高95％。

实施例6——用于乔治亚花生的STR10+接种体材料

将5液体盎司/英亩的包含异常威克汉姆酵母的组合物(“STR10”)与6.4液体盎司/英亩的如上文实施例2所述的“接种体”组合物一起一次性施用在花生种植地上。优选地，接种体组合物至少包括腐植酸和昆布提取物。就每30平方英尺的平均花数和平均冠层尺寸(英寸)，对经处理的花生植株与未经处理对照组进行对比。

如图8A所示，经处理花生植株的花数比对照组植物高65％。另外，如图8B所示，经处理花生植株的冠层尺寸比对照组植物高20％。

实施例7——营养吸收——西葫芦

对西葫芦植株进行了3组处理。第1组处理包括：首先向植株施用5液体盎司/英亩的异常威克汉姆酵母(“STR10”)，然后再3周后再进行1次。第2组处理包括：首先向植株施用5液体盎司/英亩的STR10加上3液体盎司/英亩的包含哈茨木霉和解淀粉芽孢杆菌的组合物(“ThBa”)，然后再3周后再进行1次。第3组处理是对照组，未经处理的西葫芦植株。

测量3组的每一组中叶片的氮含量，以确定氮吸收的总增加量。如图9A所示，STR10组的氮含量比对照组高0.19％，STR10/ThBa组的氮含量比对照组高0.94％。

还测量了3组的每一组中叶片的镁含量，以确定镁吸收的总增加量。如图9B所示，STR10组的镁含量比对照组高0.06％，STR10/ThBa组的镁含量比对照组高0.03％。

Claims (35)

1.一种用于增强植物免疫健康状况、生长和/或产量的土壤处理组合物，所述组合物包含异常威克汉姆酵母和/或其生长副产物。

2.根据权利要求1所述的组合物，其中，所述生长副产物是酶或生物表面活性剂。

3.根据权利要求2所述的组合物，其中，所述酶为植酸酶。

4.根据权利要求2所述的组合物，其中，所述生物表面活性剂是磷脂。

5.根据权利要求1所述的组合物，还包含一种或多种另外的微生物，所述微生物选自哈茨木霉、解淀粉芽孢杆菌、棕色固氮菌和金黄弗拉特氏菌。

6.根据权利要求1所述的组合物，还包含纳米肥料、昆布提取物、富里酸、富马酸、几丁质、几丁质衍生物、腐殖酸盐和腐殖酸中的一种或多种。

7.根据权利要求1所述的组合物，所述组合物被配制成干粉或干颗粒，所述干粉或干颗粒与水混合以制备液体制剂。

8.根据权利要求1所述的组合物，包含按体积计8-12％的异常威克汉姆细胞和按体积计88-92％的产生所述异常威克汉姆的发酵基质。

9.根据权利要求1所述的组合物，包含1x 10⁶至1x 10⁸CFU/ml的所述异常威克汉姆。

10.一种增强植物免疫力、健康状况、生长和/或产量的方法，所述方法包括：

将异常威克汉姆酵母和/或其生长副产物施用于植物和/或其周围环境中，并且，任选地，

将纳米肥料、昆布提取物、富里酸、富马酸、几丁质、几丁质衍生物、腐殖酸盐和腐殖酸中的一种或多种施用于

所述植物和/或其周围环境中。

11.根据权利要求10所述的方法，其中，采用固态发酵培养所述酵母和/或其生长副产物。

12.根据权利要求10所述的方法，其中，采用浸没式发酵培养所述酵母和/或其生长副产物。

13.根据权利要求10所述的方法，其中，使所述酵母和/或其生长副产物与所述植物的根部直接接触。

14.根据权利要求10所述的方法，其中，使所述酵母和/或其生长副产物与所述植物生长的土壤接触。

15.根据权利要求10所述的方法，其中，在施用前，将所述酵母和/或其生长副产物与水混合。

16.根据权利要求10所述的方法，其中，采用灌溉系统将所述酵母和/或其生长副产物施用于所述植物和/或其周围环境中。

17.根据权利要求10所述的方法，还包括将一种或多种另外的微生物与所述酵母和/或其生长副产物一起施用。

18.根据权利要求17所述的方法，其中，所述一种或多种另外的微生物选自哈茨木霉、解淀粉芽孢杆菌、棕色固氮菌和金黄弗拉特氏菌。

19.根据权利要求10所述的方法，所述方法用于增强所述植物的根部的所述健康状况和/或所述生长。

20.根据权利要求10所述的方法，所述方法用于改善所述植物的所述免疫健康状况、生命力与生产力。

21.根据权利要求10所述的方法，其中，施用所述土壤处理组合物的所述植物无伤或无病。

22.根据权利要求10所述的方法，其中，施用所述土壤处理组合物的所述植物已包含由于病原体或生物环境因子感染、或非生物环境应激源感染而受损的免疫健康状况。

23.根据权利要求22所述的方法，其中，所述植物是受柑橘青果病和/或柑橘溃疡病影响的柑橘植株。

24.根据权利要求10所述的方法，所述方法用于改善一种或多种土壤质量，其中，将所述酵母和/或其生长副产物施用于土壤。

25.根据权利要求24所述的方法，所述方法用于改善干燥土壤中的吸水性和保水性。

26.根据权利要求24所述的方法，所述方法用于改善泽水土壤的排水性和/或水分散性。

27.根据权利要求24所述的方法，所述方法用于改善贫瘠土壤的养分保持。

28.根据权利要求10所述的方法，所述方法用于增强植物根部的养分吸收。

29.根据权利要求10所述的方法，其中，所述植物是选自柑橘、番茄、甜菜、大豆、西葫芦、花生、草皮、玉米、烟草、马铃薯、甜瓜、甘蔗、葡萄、莴苣、杏、洋葱、胡萝卜、浆果和棉花的作物。

30.根据权利要求10所述的方法，其中，所述植物是草皮草、草坪草、牧场草或树木。

31.根据权利要求10所述的方法，其中，所述植物是选自开花植物、灌木和灌木丛的观赏植物。

32.根据权利要求10所述的方法，所述方法用于林业和/或重新造林。

33.根据权利要求10所述的方法，所述方法用于专业草坪和/或景观管理。

34.根据权利要求10所述的方法，所述方法用于牧场管理。

35.根据权利要求10所述的方法，所述方法用于家庭应用和园林应用。

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