CN113155712A - 一种通过流式细胞仪检测细胞活性的方法 - Google Patents
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Abstract
本发明提供了一种通过流式细胞仪检测细胞活性的方法，包括获取待检测细胞活性的细胞，使用DPBS溶液重悬，400g离心5min；弃去上清，使用DPBS溶液重悬细胞到100ul；添加吖啶橙和溴化丙啶；取三只试管加入步骤2中的溶液样本作为对照样本；将获得的实验溶液样本和对照样本在室温下孵育2min；在实验溶液样本中添加2ml DPBS溶液，离心5min，弃去上清；使用300ul DPBS溶液重悬样本；使用流式细胞仪检测样本，调节补偿，导出数据，并计算细胞活率。本方法使用双荧光染色，流式细胞仪检测的手段来检测细胞活性，解决了部分未配备双荧光细胞计数仪的实验室无法进行细胞活性检测的难题。
Description
技术领域
本发明属于细胞活性检测技术领域，具体涉及一种通过流式细胞仪检测细胞活性的方法。
背景技术
目前在进行细胞活性的实验时，一般通过台盼蓝染色，血细胞计数板的方式来计算样本细胞的绝对计数和活性评估；或者通过吖啶橙/溴化丙啶染料染色，双荧光全自动细胞计数仪来读取细胞的活性与数量。测试方法对双荧光细胞计数仪依赖性很强，若实验室内未配备双荧光细胞计数仪则无法进行细胞活性检测。
发明内容
本发明的目的在于提供一种通过流式细胞仪检测细胞活性的方法，以解决上述背景技术中提出的问题。
为实现上述目的，本发明提供如下技术方案：一种通过流式细胞仪检测细胞活性的方法，具体包括以下步骤：
步骤1、获取待检测细胞活性的细胞，将得到的细胞使用DPBS溶液重悬，400g离心5min；
步骤2、静置后弃去上清，使用DPBS溶液重悬细胞到100ul；
步骤3、添加吖啶橙和溴化丙啶；
步骤4、取三只试管加入步骤2中的溶液样本作为对照样本；
步骤5、将步骤3中获得的实验溶液样本和对照样本在室温下孵育2min；
步骤6、在实验溶液样本中添加2ml DPBS溶液，离心5min，静置后弃去上清；
步骤7、使用300ul DPBS溶液重悬样本；
步骤8、使用流式细胞仪检测样本，调节补偿，导出数据，并计算细胞活率。
优选的，所述步骤3添加吖啶橙到终浓度10ug/ml，添加溴化丙啶到终浓度为100ug/ml。
优选的，所述步骤1和步骤6的离心速度为400g。
优选的，所述步骤1-步骤7须在II级生物安全柜内操作，并严格遵守无菌操作。
优选的，所述步骤8中细胞活率的计算公式为：细胞活率＝1-(FITC和PE双阳性细胞百分率/FITC阳性细胞百分率)。
本发明的技术效果和优点：使用双荧光染色，流式细胞仪检测的手段来检测细胞活性，解决了部分未配备双荧光细胞计数仪的实验室无法进行细胞活性检测的难题。
附图说明
图1为检测样本的前向侧向散射光散点图；
图2为细胞样本中AO/PI双荧光散点图(第四象限比例为活细胞)。
具体实施方式
实施例
一种通过流式细胞仪检测细胞活性的方法，具体包括以下步骤，并对该方法进行验证测试，其验证测试结果如图1和图2所示：
步骤1、获取待检测细胞活性的细胞，将得到的细胞使用DPBS溶液重悬，离心5min；
步骤2、静置后弃去上清，使用DPBS溶液重悬细胞到100ul；
步骤3、添加吖啶橙到终浓度10ug/ml，添加溴化丙啶到终浓度为100ug/ml；
步骤4、取三只试管加入步骤2中的溶液样本作为对照样本；
步骤5、将步骤3中获得的实验溶液样本和对照样本在室温下孵育2min；
步骤6、在实验溶液样本中添加2ml DPBS溶液，400g离心5min，静置后弃去上清；
步骤7、使用300ul DPBS溶液重悬样本；
步骤8、使用流式细胞仪检测样本，调节补偿，导出数据，并计算细胞活率，细胞活率＝1-(FITC和PE双阳性细胞百分率/FITC阳性细胞百分率)。
优选的，所述步骤1-步骤7须在II级生物安全柜内操作，并严格遵守无菌操作。
最后应说明的是：以上所述仅为本发明的优选实施例而已，并不用于限制本发明，尽管参照前述实施例对本发明进行了详细的说明，对于本领域的技术人员来说，其依然可以对前述各实施例所记载的技术方案进行修改，或者对其中部分技术特征进行等同替换,凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。
Claims (5)
1.一种通过流式细胞仪检测细胞活性的方法，其特征在于：具体包括以下步骤，
步骤1、获取待检测细胞活性的细胞，将得到的细胞使用DPBS溶液重悬，400g离心5min；
步骤2、静置后弃去上清，使用DPBS溶液重悬细胞到100ul；
步骤3、添加吖啶橙和溴化丙啶；
步骤4、取三只试管加入步骤2中的溶液样本作为对照样本；
步骤5、将步骤3中获得的实验溶液样本和对照样本在室温下孵育2min；
步骤6、在实验溶液样本中添加2ml DPBS溶液，离心5min，静置后弃去上清；
步骤7、使用300ul DPBS溶液重悬样本；
步骤8、使用流式细胞仪检测样本，调节补偿，导出数据，并计算细胞活率。
2.根据权利要求1所述的一种通过流式细胞仪检测细胞活性的方法，其特征在于：所述步骤3添加吖啶橙到终浓度10ug/ml，添加溴化丙啶到终浓度为100ug/ml。
3.根据权利要求1所述的一种通过流式细胞仪检测细胞活性的方法，其特征在于：所述步骤1和步骤6的离心速度为400g。
4.根据权利要求1所述的一种通过流式细胞仪检测细胞活性的方法，其特征在于：所述步骤1-步骤7须在II级生物安全柜内操作，并严格遵守无菌操作。
5.根据权利要求1所述的一种通过流式细胞仪检测细胞活性的方法，其特征在于：所述步骤8中细胞活率的计算公式为：细胞活率＝1-(FITC和PE双阳性细胞百分率/FITC阳性细胞百分率)。
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Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN113670696A (zh) * | 2021-07-28 | 2021-11-19 | 上海睿钰生物科技有限公司 | 一种用于细胞染色的染色液及其配制方法 |
Citations (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN101846626A (zh) * | 2010-05-24 | 2010-09-29 | 天津商业大学 | 一种利用流式细胞仪检测腹腔吞噬细胞活性的方法 |
| CN103712967A (zh) * | 2013-12-27 | 2014-04-09 | 首都医科大学附属北京友谊医院 | 检测nk细胞活性的方法 |
| CN104634768A (zh) * | 2013-11-08 | 2015-05-20 | 中国农业科学院蔬菜花卉研究所 | 植物病原菌活性评价和杀菌剂高通量筛选方法及试剂盒 |
| CN105445248A (zh) * | 2015-12-14 | 2016-03-30 | 上海应用技术学院 | 一种快速测定蓝藻细胞凋亡率的方法 |
| US20180180601A1 (en) * | 2014-06-13 | 2018-06-28 | Immudex Aps | General Detection and Isolation of Specific Cells by Binding of Labeled Molecules |
| CN109082455A (zh) * | 2018-09-04 | 2018-12-25 | 山东省城市供排水水质监测中心 | 一种饮用水中总大肠菌群的快速检测方法 |
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Patent Citations (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN101846626A (zh) * | 2010-05-24 | 2010-09-29 | 天津商业大学 | 一种利用流式细胞仪检测腹腔吞噬细胞活性的方法 |
| CN104634768A (zh) * | 2013-11-08 | 2015-05-20 | 中国农业科学院蔬菜花卉研究所 | 植物病原菌活性评价和杀菌剂高通量筛选方法及试剂盒 |
| CN103712967A (zh) * | 2013-12-27 | 2014-04-09 | 首都医科大学附属北京友谊医院 | 检测nk细胞活性的方法 |
| US20180180601A1 (en) * | 2014-06-13 | 2018-06-28 | Immudex Aps | General Detection and Isolation of Specific Cells by Binding of Labeled Molecules |
| CN105445248A (zh) * | 2015-12-14 | 2016-03-30 | 上海应用技术学院 | 一种快速测定蓝藻细胞凋亡率的方法 |
| CN109082455A (zh) * | 2018-09-04 | 2018-12-25 | 山东省城市供排水水质监测中心 | 一种饮用水中总大肠菌群的快速检测方法 |
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| 吕世静 等: "《干细胞实验指南》", 中央广播电视大学出版社, pages: 224 - 225 * |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN113670696A (zh) * | 2021-07-28 | 2021-11-19 | 上海睿钰生物科技有限公司 | 一种用于细胞染色的染色液及其配制方法 |
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