CN113151513A - 基于保守序列聚类分析的微生物抗重金属功能挖掘方法 - Google Patents

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Abstract

本发明属于微生物技术领域，公开了一种基于保守序列聚类分析的微生物抗重金属功能挖掘方法，包括：目标菌株保守序列测定及分子鉴定；建立微生物抗重金属数据库并录入已知微生物抗重金属信息；基于保守序列的目标菌株聚类；目标菌株抗重金属性能验证。本发明基于数据库信息和保守序列将未知重金属抗性的微生物与已知重金属抗性的微生物进行聚类分析，挖掘该微生物可能的抗重金属种类，能够为微生物抗重金属种类挖掘指示方向，避免微生物抗重金属筛选的盲目性，为微生物重金属抗性开发提供参考。本发明是建立在遗传与功能的关系的基础上，实现了利用生物分子信息挖掘微生物的特定功能，能够对目标菌株对各类重金属的抗性特征进行潜在判断。

Description

基于保守序列聚类分析的微生物抗重金属功能挖掘方法
技术领域
本发明属于微生物技术领域，尤其涉及一种基于保守序列聚类分析的微生物抗重金属功能挖掘方法。
背景技术
目前，微生物类型多、种类复杂、功能多样，为利用微生物解决环境问题提供了众多可能途径。以微生物的抗重金属性能为基础进行环境修复，是当前利用微生物进行环境污染修复的研究热点和重点应用领域，如何声宝等利用微生物抗重金属的性能发明了一种“修复重金属污染土壤的微生物菌株及其应用”(ZL 201610655203.3)，能够有效够将土壤中的可交换态镉钝化，显著降低交换态镉含量，同时对镉具有极强的耐受性，具有较强的生物修复功能，能够应用于修复重金属污染土壤和制备重金属污染修复材料中。微生物对重金属的抗性往往具有特异性，即确定的微生物往往仅对特定的重金属具有吸附功能或者耐受性。因此，确定微生物的抗重金属种类成为开发利用微生物相关功能的基础与前提。当前主要是通过重金属胁迫筛选确定微生物抗重金属的种类及浓度，具有一定的盲目性和较大的工作量，严重制约了微生物相关功能的开发利用，十分有必要发明一种挖掘微生物抗重金属挖掘的方案。保守序列是微生物生存、进化的重要遗传基础，抗重金属功能是微生物在恶劣环境生存、适应的功能基础，微生物分子序列对其功能决定具有关键作用。
通过上述分析，现有技术存在的问题及缺陷为：当前主要是通过重金属胁迫筛选确定微生物抗重金属的种类及浓度，具有一定的盲目性和较大的工作量，严重制约了微生物相关功能的开发利用。
解决以上问题及缺陷的难度为：微生物是地球上种类最多的生命形式，通过胁迫筛选，以了解微生物的抗重金属性能，面临工作量大，失败概率高的缺点。同时，微生物遗传结构简单，遗传变异度度高，通过遗传物质直接挖掘功能往往存在较大的不确定性。
解决以上问题及缺陷的意义为：发明以保守序列是微生物与环境长期协同进化的结果，是关系微生物生存的关键遗传物质为基础展开，通过限定以保守序列对微生物进行聚类，利用已知信息挖掘目标微生物的未知重金属抗性特征。发明通过利用已知信息挖掘微生物的潜在功能，大大降低了相关实验的机会成本和实验成本，同时不断完善的已知信息还能够不断提高功能挖掘的准确率。同时重金属污染实际修复过程中，更多是复合重金属污染，传统筛选具有复合抗性微生物的过程极为复杂、繁琐，但是首先通过聚类尽可能多的了解目标微生物的抗重金属性能，能够进一步降低工作量，提高实验的目标导向。
发明内容
针对现有技术存在的问题，本发明提供了一种基于保守序列聚类分析的微生物抗重金属功能挖掘方法。
本发明是这样实现的，一种基于保守序列聚类分析的微生物抗重金属功能挖掘方法，所述基于保守序列聚类分析的微生物抗重金属功能挖掘方法包括以下步骤：
步骤一，目标菌株保守序列测定及分子鉴定。
步骤二，建立微生物抗重金属数据库并录入已知微生物抗重金属信息。
步骤三，基于保守序列的目标菌株聚类。
步骤四，目标菌株抗重金属性能验证。
进一步，步骤一中，所述目标菌株保守序列测定及分子鉴定的方法为：
首先要确定保守序列，一方面可以通过序列比对确定保守序列区段，首先搜集与目标微生物近源的微生物序列信息，进行序列比对，序列相似度超过95％可定义为保守序列；另一方面，可以直接使用公认的保守序列，即可被用来建立微生物进化树的基因序列，主要包括细菌的16S序列，真菌的ITS序列、18S序列、线粒体基因组等。在确定保守序列后，利用测序技术测定微生物保守序列。利用该保守序列构建进化树，对该微生物进行分子鉴定。鉴定结果需要回复验证前面确定的微生物种类是否正确。
进一步，步骤二中，所述微生物抗重金属数据库为广义数据库，既包括专业数据库，也包括数据表。
进一步，步骤二中，所述微生物抗重金属数据库的字段包括：菌种名、抗重金属种类、抗性特征、耐受浓度、保守序列、参考文献。
进一步，步骤二中，所述微生物抗重金属信息的获取方法为：
查阅相关文献并进行整理归纳，收集不同菌株抗重金属的种类，按照数据库字段将相关信息输入数据库。
进一步，步骤三中，所述基于保守序列的目标菌株聚类的方法为：
利用目标菌株的保守序列和数据库已知菌株保守序列，选择合适的聚类方法进行聚类，确定目标菌株与哪些已知菌株被聚为一类，也可采用多种聚类方法进行聚类，记录目标菌株在多种聚类方法中与哪些已知菌株被聚为一类的概率更高。
同时通过数据库获知被聚为一类的已知菌株对不同重金属的抗性特征，所述目标菌株与被聚为一类的一种菌株具有一致的重金属抗性特征。
进一步，步骤四中，所述目标菌株抗重金属性能验证的方法为：
以确定的重金属为目标，对目标菌株开展吸附特征实验，探索目标菌株对所确定重金属的吸附特征，验证聚类结果。也可以针对现实需求，仅验证步骤三中挖掘出的众多重金属元素中的感兴趣重金属元素，并将验证结果补充进微生物抗重金属数据库。
结合上述的所有技术方案，本发明所具备的优点及积极效果为：本发明提供的基于保守序列聚类分析的微生物抗重金属功能挖掘方法，能够为微生物重金属种类挖掘指示方向，避免微生物重金属筛选的盲目性，为微生物重金属抗性开发提供参考。
(1)本发明充分利用现有研究资料，建立微生物抗重金属数据库，基于数据库信息和保守序列将未知重金属抗性的微生物与已知重金属抗性的微生物进行聚类分析，挖掘该微生物可能的抗重金属种类，避免了当前通过重金属筛选确定微生物抗重金属种类方法的盲目性，构建了微生物抗重金属种类的可能范围框架。同时，随着微生物抗重金属研究的不断深入，建立的微生物抗重金属数据库不断完善，对微生物抗重金属种类挖掘结果会愈加准确。
(2)当前，利用生物保守序列可进行生物分类研究，建立生物分子进化关系，该关系的建立是保守序列的进化本质基础之上，本发明是建立在遗传与功能的关系的基础上，实现了利用生物分子信息挖掘微生物的特定功能。
(3)当前利用重金属浓度梯度进行微生物筛选，只能判断该菌株对该重金属是否有抗性及抗性浓度，但是不能获知该菌株对其他重金属抗性性能。本发明方案能够对目标菌株对各类重金属的抗性特征进行潜在判断。
附图说明
为了更清楚地说明本申请实施例的技术方案，下面将对本申请实施例中所需要使用的附图做简单的介绍，显而易见地，下面所描述的附图仅仅是本申请的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下还可以根据这些附图获得其他的附图。
图1是本发明实施例1提供的基于保守序列聚类分析的微生物抗重金属功能挖掘方法流程图。
图2是本发明实施例2提供的基于保守序列的未知微生物种类鉴定结果示意图。
图3是本发明实施例2提供的基于保守序列的未知微生物与近源微生物聚类结果示意图。
图4是本发明实施例2提供的微生物对重金属(锰)的吸附结果示意图。
图5是本发明实施例3提供的基于保守序列的未知微生物种类鉴定结果示意图。
图6是本发明实施例3提供的基于保守序列的未知微生物与近源微生物聚类结果示意图。
图7是本发明实施例3提供的微生物对重金属(镉)的吸附结果示意图。
具体实施方式
为了使本发明的目的、技术方案及优点更加清楚明白，以下结合实施例，对本发明进行进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅仅用以解释本发明，并不用于限定本发明。
针对现有技术存在的问题，本发明提供了一种基于保守序列聚类分析的微生物抗重金属功能挖掘方法，下面结合附图对本发明作详细的描述。
如图1所示，本发明实施例提供的基于保守序列聚类分析的微生物抗重金属功能挖掘方法包括以下步骤：
S101，目标菌株保守序列测定及分子鉴定。
S102，建立微生物抗重金属数据库并录入已知微生物抗重金属信息。
S103，基于保守序列的目标菌株聚类。
S104，目标菌株抗重金属性能验证。
下面结合术语解释对本发明的技术方案作进一步的描述。
保守序列：保守序列指的是具有高度相似性或同一性的分子序列，这些序列可以是核酸序列(如RNA或DNA序列)，蛋白质序列，蛋白质结构或糖类中的序列。这些序列高度相似，却来自不同的物种或个体。从跨种保留的角度来看，这种序列的存在意味着在形成不同物种的进化过程中，有一段特殊的基因序列被保留了下来(百度百科，https://baike.baidu.com/item/％E4％BF％9D％E5％AE％88％E5％BA％8F％E5％88％97/10973719)。一般认为亲缘关系越近，保守序列的相似性越相近。保守序列经常被用来进行物种分类和鉴别。
聚类分析：聚类分析是一组将研究对象分为相对同质的群组(clusters)的统计分析技术(百度百科，https://baike.baidu.com/item/％E8％81％9A％E7％B1％BB％E5％88％86％E6％9E％90/3450227？fr＝aladdin)。在生物学领域，聚类分析具有重要的应用价值，如测定不同地块的环境要素，通过环境要素对地块进行聚类，又如通过对不同物种固定保守序列进行测定和聚类分析，进行生物的分子分类，分子分类成为传统的形态分类的重要补充。聚类分析是一种探索性分析方法，分析方法较多，如层次分析法、邻域法、k-means等方法。
微生物抗重金属功能：探索微生物的抗重金属功能是利用微生物进行环境修复、治理等相关功能开发的基础，如利用微生物的抗重金属性能进行土壤重金属污染恢复。微生物的抗重金属性能与基因密切相关，本发明理论基础认为保守序列是微生物生存、进化的重要遗传基础，抗重金属功能是微生物在恶劣环境生存、适应的功能基础，微生物分子序列对其功能决定具有关键作用。微生物重金属功能既包括微生物对重金属的吸附功能，也包括微生物对重金属的忍耐功能。本发明的微生物包括细菌、真菌、病毒及小型原核生物。
下面结合实施例对本发明的技术方案作进一步的描述。
实施例1
本发明实施例提供的基于保守序列聚类分析的微生物抗重金属功能挖掘方法的实施过程如下：
(1)目标菌株保守序列测定及分子鉴定。不同微生物在不同分类层次具有不同的保守序列。在本步骤中，既可以利用公认保守序列，如细菌的16S序列，真菌的ITS序列，线粒体的COX1基因序列等，也可以通过比较目标菌株所属科或属已知已知序列信息，确定该目标菌株特定保守序列区段。在确定保守序列区段后，测定目标菌株保守序列。建立进化树，对目标菌株种类进行再次确定。
(2)建立微生物抗重金属数据库并录入已知微生物抗重金属信息。建立微生物抗重金属微生物数据库，包括但不限于以下字段：菌种名、抗重金属种类、抗性特征、耐受浓度、保守序列、参考文献。本步骤中微生物抗重金属数据库为广义数据库，既包括专业数据库，如ACCESS；也包括数据表，如EXCEL。查阅相关文献并进行整理归纳，将相关信息输入数据库。
(3)基于保守序列的目标菌株聚类。利用目标菌株的保守序列和数据库已知菌株保守序列，选择合适的聚类方法进行聚类，确定目标菌株与哪些已知菌株被聚为一类，也可采用多种聚类方法进行聚类，记录目标菌株在多种聚类方法中与哪些已知菌株被聚为一类的概率更高。同时通过数据库获知被聚为一类的已知菌株对不同重金属的抗性特征。方案认为目标菌株与被聚为一类的一种菌株具有一致的重金属抗性特征。
(4)目标菌株抗重金属性能验证。以上一步确定的重金属为目标，对目标菌株开展吸附特征实验，探索目标菌株对所确定重金属的吸附特征，验证聚类结果。也可以针对现实需求，仅验证步骤3中挖掘出的众多重金属元素中的感兴趣重金属元素。同时将验证结果补充进微生物抗重金属数据库，为后续进一步更加精确开展微生物抗重金属性能挖掘奠定基础。
实施例2
(1)保守序列测定及分子鉴定。选定一未知种类、未知功能的细菌，选择细菌公认保守序列16S rDNA为保守序列，利用试剂盒提取该细菌菌株DNA，以提取的总DNA为模板，利用16S rRNA引物进行PCR扩增，正向引物为：27FAGAGTTTGATCCTGGCTCAG，反向引物为：1492RGGTTACCTT GTTACGACTT。20ulTaq反应体系，其中10×TaqBuffer 2ul、2mM dNTPs2ul、25mM MgSO41.2ul、Taq酶1ul、Primer1(10pm)1ul、Primer2(10pm)1ul、Plate 1ul、PCR增强剂5ul、H2O 5.8ul，扩增后进行测序。测定该细菌的16S序列，测定结果见序列1。依据保守序列进行物种亲缘关系鉴定，构建物种进化树。鉴定该细菌为蜡样芽孢杆菌Bacilluscereus(图2)。
序列1：Bacillus cereus 16S rDNA基因序列
GCGGGGGGTGCATACATGCAGTCGAGCGAATGGATTAAGAGCTTGCTCTTATGAAGTTAGCGGCGGACGGGTGAGTAACACGTGGGTAACCTGCCCATAAGACTGGGATAACTCCGGGAAACCGGGGCTAATACCGGATAACATTTTGAACCGCATGGTTCGAAATTGAAAGGCGGCTTCGGCTGTCACTTATGGATGGACCCGCGTCGCATTAGCTAGTTGGTGAGGTAACGGCTCACCAAGGCAACGATGCGTAGCCGACCTGAGAGGGTGATCGGCCACACTGGGACTGAGACACGGCCCAGACTCCTACGGGAGGCAGCAGTAGGGAATCTTCCGCAATGGACGAAAGTCTGACGGAGCAACGCCGCGTGAGTGATGAAGGCTTTCGGGTCGTAAAACTCTGTTGTTAGGGAAGAACAAGTGCTAGTTGAATAAGCTGGCACCTTGACGGTACCTAACCAGAAAGCCACGGCTAACTACGTGCCAGCAGCCGCGGTAATACGTAGGTGGCAAGCGTTATCCGGAATTATTGGGCGTAAAGCGCGCGCAGGTGGTTTCTTAAGTCTGATGTGAAAGCCCACGGCTCAACCGTGGAGGGTCATTGGAAACTGGGAGACTTGAGTGCAGAAGAGGAAAGTGGAATTCCATGTGTAGCGGTGAAATGCGTAGAGATATGGAGGAACACCAGTGGCGAAGGCGACTTTCTGGTCTGTAACTGACACTGAGGCGCGAAAGCGTGGGGAGCAAACAGGATTAGATACCCTGGTAGTCCACGCCGTAAACGATGAGTGCTAAGTGTTAGAGGGTTTCCGCCCTTTAGTGCTGAAGTTAACGCATTAAGCACTCCGCCTGGGGAGTACGGCCGCAAGGCTGAAACTCAAAGGAATTGACGGGGGCCCGCACAAGCGGTGGAGCATGTGGTTTAATTCGAAGCAACGCGAAGAACCTTACCAGGTCTTGACATCCTCTGAAAACCCTAGAGATAGGGCTTCTCCTTCGGGAGCAGAGTGACAGGTGGTGCATGGTTGTCGTCAGCTCGTGTCGTGAGATGTTGGGTTAAGTCCCGCAACGAGCGCAACCCTTGATCTTAGTTGCCATCATTAAGTTGGGCACTCTAAGGTGACTGCCGGTGACAAACCGGAGGAAGGTGGGGATGACGTCAAATCATCATGCCCCTTATGACCTGGGCTACACACGTGCTACAATGGACGGTACAAAGAGCTGCAAGACCGCGAGGTGGAGCTAATCTCATAAAACCGTTCTCAGTTCGGATTGTAGGCTGCAACTCGCCTACATGAAGCTGGAATCGCTAGTAATCGCGGATCAGCATGCCGCGGTGAATACGTTCCCGGGCCTTGTACACACCGCCCGTCACACCACGAGAGTTTGTAACACCCGAAGTCGGTGGGGTAACCTTTTGGAGCCAGCCGCCTAAGTGCAAAGG
(2)建立微生物抗重金属数据库。收集整理芽孢杆菌属不同菌株的抗重金属抗性特征信息，获取不同菌株抗重金属的种类(见表1)。
表1不同菌株抗重金属的种类
Figure BDA0002648160770000091
(3)基于保守序列的目标菌株聚类。采用N-J法利用16S rDNA将已知菌株与目标菌株进行聚类分析，聚类结果见图3，依据聚类结果初步判断目标菌株对Pb、Cd、Cr、Mn、Zn、Cu、Ni等具有抗性。
(4)目标菌株抗重金属性能验证。本发明预开发目标菌株的抗锰性能，因此通过项目验证该菌株的抗锰特性。在不同Mn2+浓度的液体培养基中接种活化后的细菌悬液(OD600＝1.0)，其中Mn2+浓度设置范围为0-10000mg/L，接种量为液体培养基的1％，pH 5.4-5.6，30℃，120r/min，震荡培养72h。结果表明Mn2+浓度在400mg/L时，去除率最大达到99.51％，Mn2+浓度为200mg/L和600mg/L时的去除率也分别达到97.97％和98.87％(图4)。通过浓度实验发现该菌株具有良好的抗锰性能。案例挖掘抗重金属微生物成功。
实施例3
(1)保守序列测定及分子鉴定。从某锑矿矿渣培养获得2株形态类似的真菌。提取真菌的基因组DNA，采用正向引物ITS1(5’-TCCGTAGGTGAACCTGCGG-3’)和反向引物ITS4(5’-TCCTCCGTTATTGATATGC-3’)PCR扩增此耐受性真菌的ITS区。PCR扩增体系条件为(50μL)：2×TaqPCR mix 25μL(包含Taq DNA聚合酶、dNTPs、MgCl2、反应缓冲液)，Forwardprimer(10μmol L-1)2μL，Reverse primer(10μmol L-1)2μL，Template 1μL，ddH2O 20μL。PCR循环条件：98°C 2min；98℃ 10s；54℃ 10s，72℃ 10s，循环35次；72℃ 5min。PCR扩增产物完成测序后，测定上述真菌的ITS序列，序列信息详见表2。将得到的基因序列在National Centerfor Biotechnology Information(NCBI)中进行BLAST分析，研究其同源性。选取同源性相近的真菌，利用最近邻域(neighbor joining，NJ)法构建进化树。根据进化树判定真菌的系统发育位置。由于进化树支持率较低，因此不能完全确定上述真菌的种类，但是依据保守序列鉴定可以确定上述2个真菌与青霉属Penicillium真菌亲缘关系较近(图5)，分别使用Cd-10、Cd-11代表。
表2所选真菌ITS序列信息
Figure BDA0002648160770000101
Figure BDA0002648160770000111
(2)建立微生物抗重金属数据库。收集整理Penicillium不同菌株的抗重金属抗性特征信息，获取不同菌株抗重金属的种类(见表3)。
表3青霉属真菌微生物抗重金属数据概要
Figure BDA0002648160770000112
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(3)基于保守序列的目标菌株聚类。采用N-J法利用ITS序列将已知菌株与目标菌株进行聚类分析，聚类结果见图6，依据聚类结果初步判断目标菌株对Mn、Cd、Cu、Pb、Zn、i等具有抗性潜能。
(4)目标菌株抗重金属性能验证。本示例预采用镉来验证所挖掘的目标菌株的抗重金属性能的结果。将菌株活化，取1mL菌株孢子液接种于49mL PDB培养基(pH＝6)中，28℃、120rpm培养条件下，将真菌培养至对数生长期，测定真菌生物量(MLP)。然后向培养基中加入50mL Cd(II)，然后在120rpm，28℃条件下继续培养，生长若干天后，采用真空抽滤装置分离真菌和培养基，采用干重法测量真菌生物量(M)，并测定吸附体系pH变化和真菌对Cd的吸附效率。结果显示：初始镉浓度为0.1mM～0.3mM时，Cd10和Cd11对镉的去除率的变化规律相同；Cd10和Cd11对镉的去除率显著升高(P<0.05)。初始镉浓度为0.3mM～0.5mM时，Cd11对镉的去除率的变化规律与Cd10相反：Cd11对镉的去除率显著降低，Cd10对镉的去除率显著升高(P<0.05)(图3-4)。Cd10和Cd11对镉的最大去除率分别为14.7％(C0＝0.5mM)和45.6％(C0＝0.3mM)。本示例中，即使不能完全知晓该微生物的种类，但是基于本发明所述方法成功对该微生物的抗重金属特征进行了挖掘。
以上所述，仅为本发明的具体实施方式，但本发明的保护范围并不局限于此，任何熟悉本技术领域的技术人员在本发明揭露的技术范围内，凡在本发明的精神和原则之内所作的任何修改、等同替换和改进等，都应涵盖在本发明的保护范围之内。

Claims (9)

1.一种基于保守序列聚类分析的微生物抗重金属功能挖掘方法，其特征在于，所述基于保守序列聚类分析的微生物抗重金属功能挖掘方法包括：
目标菌株保守序列测定及分子鉴定；
建立微生物抗重金属数据库并录入已知微生物抗重金属信息；
基于保守序列的目标菌株聚类；
目标菌株抗重金属性能验证。
2.如权利要求1所述的基于保守序列聚类分析的微生物抗重金属功能挖掘方法，其特征在于，所述目标菌株保守序列测定及分子鉴定的方法为：保守序列包括通过序列比对确定的氨基酸序列或蛋白序列，也包括公认保守序列，既包括核基因序列，也包括细胞器基因序列；在确定保守序列的基础上对保守序列进行测定；依据保守序列进行物种亲缘关系鉴定，构建物种进化树。
3.如权利要求2所述的基于保守序列聚类分析的微生物抗重金属功能挖掘方法，其特征在于，进一步包括：首先要确定保守序列，一方面可以通过序列比对确定保守序列区段，首先搜集与目标微生物近源的微生物序列信息，进行序列比对，序列相似度超过95％可定义为保守序列；另一方面，直接使用公认的保守序列，即可被用来建立微生物进化树的基因序列，包括细菌的16S序列，真菌的ITS序列、18S序列、线粒体基因组；在确定保守序列后，利用测序技术测定微生物保守序列；利用该保守序列构建进化树，对该微生物进行分子鉴定，鉴定结果需要回复验证前面确定的微生物种类是否正确。
4.如权利要求1所述的基于保守序列聚类分析的微生物抗重金属功能挖掘方法，其特征在于，所述微生物抗重金属数据库为广义数据库，既包括专业数据库，也包括数据表。
5.如权利要求1所述的基于保守序列聚类分析的微生物抗重金属功能挖掘方法，其特征在于，所述微生物抗重金属数据库的字段包括：菌种名、抗重金属种类、抗性特征、耐受浓度、保守序列、参考文献，允许空值存在。
6.如权利要求1所述的基于保守序列聚类分析的微生物抗重金属功能挖掘方法，其特征在于，所述微生物抗重金属信息的获取方法为：查阅相关文献并进行整理归纳，获取不同菌株抗重金属的种类，将相关信息输入数据库。
7.如权利要求1所述的基于保守序列聚类分析的微生物抗重金属功能挖掘方法，其特征在于，所述基于保守序列的目标菌株聚类的方法为：利用目标菌株的保守序列和数据库已知菌株保守序列，选择合适的聚类方法进行聚类，确定目标菌株与哪些已知菌株被聚为一类，也可采用多种聚类方法进行聚类，记录目标菌株在多种聚类方法中与哪些已知菌株被聚为一类的概率更高；
同时通过数据库获知被聚为一类的已知菌株对不同重金属的抗性特征；所述目标菌株与被聚为一类的一种菌株具有一致的重金属抗性特征。
8.如权利要求1所述的基于保守序列聚类分析的微生物抗重金属功能挖掘方法，其特征在于，所述目标菌株抗重金属性能验证的方法为：以确定的重金属为目标，对目标菌株开展吸附特征实验，探索目标菌株对所确定重金属的吸附特征，验证聚类结果；也针对现实需求，仅验证挖掘出的众多重金属元素中的感兴趣重金属元素，并将验证结果补充进微生物抗重金属数据库。
9.如权利要求1所述的基于保守序列聚类分析的微生物抗重金属功能挖掘方法，其特征在于，所述微生物包括细菌、真菌、病毒及小型原核生物。
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