CN113125701B - 一种均相化学发光检测试剂盒及其应用 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及一种均相化学发光检测试剂盒及其应用。该试剂盒包括供体试剂和受体试剂,供体试剂含有供体颗粒,受体试剂含有受体颗粒,所述供体颗粒包括第一载体,第一载体的内部填充有敏化剂,且其表面直接或间接连接有特异性结合配对成员中的一员,每毫克所述供体颗粒中的糖含量不高于25ug,所述供体颗粒在供体试剂中的粒径分布变异系数C.V值≥5%;所述受体颗粒包括第二载体,第二载体的内部填充有发光组合物,且其表面包被有包覆层,所述包覆层的表面连接报告分子,所述报告分子能够与待测目标分子特异性结合,且每毫克所述供体颗粒中的糖含量不低于40ug。该试剂盒具有高灵敏度、高精密度和宽范围以及快速、便携等特点。
Description
技术领域
本发明属于均相化学发光技术领域,具体涉及一种均相化学发光检测试剂盒及其应用。
背景技术
均相化学发光分析是指无须对结合后生成的复合物以及剩余的游离反应物进行分离既可进行化学发光检测的方法。
现有的均相化学发光分析存在以下缺点:
A、仪器系统体积庞大,占地面积大,同时,由于测试通量大,试剂卡采用以100测试为整单位,对实验室样本规模有要求;
B、仪器系统及试剂价格昂贵,维护成本高,不适用于基层医疗机构;
C、仪器体积大,不能随身携带进入诊疗现场;
D、化学发光系统主要采用血清和血浆作为样本,一般不能采用全血,限制了其使用范围。
同时,近年来新兴起一种在病人旁边进行的临床检测(床边检测bedsidetesting)的即时检验(point-of-care testing)技术,简称POCT检测技术,POCT检测技术主流是荧光定量层析或者胶体金,主要是包裹荧光物质的荧光微球或胶体金通过膜层析的方法进行免疫检测的快诊技术。但是由于这两种技术主要是在NC膜上进行释放检测,由于膜本身的CV就有5%以上,因此固相膜法的POCT检测CV—般都要在10%以上,检测精密度很差,对于灵敏度要求很高的项目如cTnI,定量就变得极其困难。另外,采用新型技术如微流控芯片类型POCT检测技术,具有反应速度快,样本需求量小等优点,但也因为反应不充分,造成检测灵敏度低的问题。
因此,亟需提供一种高灵敏度、高精密度和宽范围,同时具有快速、便携等特点的均相化学发光POCT检测试剂盒及方法。
发明内容
本发明所要解决的技术问题是提供一种均相化学发光POCT检测试剂盒和方法,利用所述试剂盒进行的POCT检测方法兼有化学发光分析技术的高灵敏度、高精密度和宽范围,同时具有POCT检测技术快速、便携等特点。
为此,本发明第一方面提供一种均相化学发光检测试剂盒,其包括供体试剂和受体试剂,所述供体试剂含有供体颗粒,所述供体颗粒被激发后能够产生活性氧,所述受体试剂含有第二缓冲溶液和受体颗粒,所述受体颗粒能够与接收到的活性氧反应产生化学发光信号,
所述供体颗粒包括第一载体,所述第一载体的内部填充有敏化剂,所述第一载体的表面直接或间接连接有特异性结合配对成员中的一员,且每毫克所述供体颗粒中的糖含量不高于25ug;所述供体颗粒在所述供体试剂中的粒径分布变异系数C.V值≥5%;
所述受体颗粒包括第二载体,所述第二载体的内部填充有发光组合物,所述第二载体的表面包被有包覆层,所述包覆层的表面连接报告分子,所述报告分子能够与待测目标分子特异性结合,且每毫克所述供体颗粒中的糖含量不低于40ug。
在本发明的一些实施方式中,所述第一载体的表面直接键合有特异性结合配对成员中的一员。
在本发明的另一些实施方式中,所述第一载体的表面没有包被或连接有多糖物质,其直接键合特异性结合配对成员中的一员。
在本发明的一些实施方式中,所述第一载体的表面带有键合官能团,所述键合官能团用于将特异性结合配对成员中的一员直接键合在所述第一载体的表面。
在本发明的另一些实施方式中,所述键合官能团选自胺基、酰胺基、羟基、醛基、羧基、马来酰亚胺基和巯基;优选选自醛基和/或羧基。
在本发明的一些实施方式中,所述特异性结合配对成员选自抗体、抗体片段、配体、寡核苷酸、寡核苷酸结合蛋白、凝集素、半抗原、抗原、免疫球蛋白结合蛋白、抗生物素蛋白、亲和素或生物素所组成的一对能够相互特异性结合的物质。
在本发明的另一些实施方式中,所述特异性结合配对成员为亲和素-生物素,所述亲和素选自卵白亲和素、链霉亲和素、卵黄亲和素、中性亲和素和类亲和素,优选为中性亲和素和/或链霉亲和素。
在本发明的一些实施方式中,所述亲和素通过氨基与所述第一载体表面的醛基反应形成席夫碱的方式化学键合在所述第一载体的表面。
在本发明的一些优选的实施方式中,所述供体颗粒在所述供体试剂中的粒径分布变异系数C.V值≥8%;优选地,所述供体颗粒在所述供试剂中的粒径分布变异系数C.V值≥10%。
在本发明的另一些优选的实施方式中,所述供体颗粒在所述供体试剂中的粒径分布变异系数C.V值≤40%;更进一步优选地,所述供体颗粒在所述供体试剂中的粒径分布变异系数C.V值≤20%。
在本发明的一些实施方式中,所述供体颗粒在所述供体试剂中的粒径分布呈现多分散性。
在本发明的另一些实施方式中,所述供体试剂中还包括pH值为7.0~9.0的第一缓冲溶液,所述供体颗粒悬浮于所述缓冲溶液中。
在本发明的一些实施方式中,所述受体颗粒在受体试剂中的粒径分布变异系数C.V值≥5%。
在本发明的一些优选的实施方式中,所述受体颗粒在受体试剂中的粒径分布变异系数C.V值≥8%;优选地,所述受体颗粒在受体试剂中的粒径分布变异系数C.V值≥10%。
在本发明的另一些优选的实施方式中,所述受体颗粒在受体试剂中的粒径分布变异系数C.V值≤40%;更进一步优选地,所述受体颗粒在受体试剂中的粒径分布变异系数C.V值≤20%。
在本发明的一些实施方式中,所述受体颗粒在受体试剂中的粒径分布呈现多分散性。
在本发明的另一些实施方式中,所述粒径分布变异系数C.V值是通过Gaussian分布计算得到。
在本发明的一些实施方式中,所述包覆层中的包覆物选自多糖、高分子聚合物或生物大分子,优选为多糖;
进一步优选地,所述第二载体的表面包被有至少两个连续多糖涂层,所述连续多糖涂层的表面连接有特异性结合配对成员中的一员。
在本发明的一些实施方式中,所述连续多糖涂层中的每一多糖层自发地与前一多糖层相关联。
在本发明的一些具体实施方式中,所述多糖具有侧基官能团,所述连续多糖层中的任一多糖层的所述侧基官能团与前一多糖层的所述侧基官能团所带电荷相反。
在本发明的另一些具体实施方式中,所述多糖具有侧基官能团,并且所述连续多糖涂层中的任一多糖层通过所述侧基官能团与前一多糖层的所述侧基官能团之间的化学键合反应实现与所述前一多糖层共价连接。
在本发明的一些实施方式中,所述连续多糖涂层的所述侧基官能团在胺官能团和胺反应性官能团之间交替。
在本发明的另一些实施方式中,所述胺反应性官能团是醛基或羧基。
在本发明的一些实施方式中,所述连续多糖涂层的最外一层多糖层具有至少一个侧基官能团。
在本发明的另一些实施方式中,所述侧基官能团选自醛基、羧基、巯基、氨基、羟基和马来胺基中的至少一种;优选选自醛基和/或羧基。
在本发明的一些实施方式中,所述连续多糖涂层侧基官能团直接地或间接地化学键合特异性结合配对成员中的一员。
在本发明的另一些实施方式中,所述多糖选自含有三个或更多个未修饰或修饰的单糖单元的碳水化合物;优选选自葡聚糖、淀粉、糖原、菊粉、果聚糖、甘露聚糖、琼脂糖、半乳聚糖、羧基葡聚糖和氨基葡聚糖;更优选选自葡聚糖、淀粉、糖原和聚核糖。
在本发明的一些实施方式中,所述糖含量是通过蒽酮法检测的;
优选地,所述糖选自含有三个或更多个未修饰或修饰的单糖单元的碳水化合物,优选选自葡聚糖、淀粉、糖原、菊粉、果聚糖、甘露聚糖、琼脂糖、半乳聚糖、羧基葡聚糖和氨基葡聚糖;更优选选自葡聚糖、淀粉、糖原和聚核糖;
进一步优选地,所述葡聚糖的分子量分布Mw为1000~1000000KDa,优选为10000~800000KDa,更优选为30000~700000KDa。
本发明第二方面提供一种均相化学发光POCT检测试剂盒,其包括如本发明第一方面所述的试剂盒,所述POCT是指即时检验或在病人旁边进行的临床检测。
在本发明的一些实施方式中,所述试剂盒中包括试剂条,在所述试剂条上设有若干盛装试剂的孔位,所述孔位至少包括:
第一试剂孔位,其用于盛装所述的供体试剂;
第二试剂孔位,其用于盛装所述的受体试剂。
本发明第三方面提供了一种均相化学发光POCT检测方法,其利用如本发明第二方面所述的试剂盒检测待测样本中的待测目标分子。
本发明第四方面提供了一种均相化学发光POCT检测装置,其利用如本发明第二方面所述试剂盒或第三方面所述的方法检测待测样本中的待测目标分子。
在本发明的一些实施方式中,所述装置包括:
孵育模块,用于控制如权利要求30所述所述试剂条的温度;
光激发与检测模块,其设置在所述孵育模块的一侧,用于向所述试剂条发射激发光使其产生光激化学发光反应;并检测所述试剂产生的化学发光信号。
本发明第五方面提供了一种利用如本发明第四方面所述的POCT检测装置进行均相化学发光分析的方法,其包括如下步骤:
S1,将待测样本与受体试剂、供体试剂相接触,反应后生成待测混合物;
S2,利用波长为600~700nm的激发光激发所述待测混合物进行化学发光,检测所述化学发光的信号强度;所述化学发光的检测波长为520~620nm;
S3,根据分析所述化学发光的信号强度,判断所述待测样品中是否含有待测目标分子和/或待测目标分子在待测样本中的浓度。
本发明的有益效果为:本发明所述试剂盒中包含特定供体颗粒的供体试剂和/或包含特定受体颗粒的受体试剂,所述供体颗粒产生活性氧的效率高,活性氧在均相体系中更容易传递给受体颗粒,不易受其他物质的干扰,且所述供体颗粒本身的稳定性较高,在供体试剂中能够稳定存在,不容易失活;同时每毫克所述供体颗粒中的糖含量不高于25ug,每毫克所述供体颗粒中的糖含量不低于40ug,且所述供体颗粒和受体颗粒粒径分布变异系数C.V值≥5%,使得利用本发明所述试剂盒进行的相化学发光POCT检测兼有化学发光分析技术的高灵敏度、高精密度和宽范围,同时具有POCT检测技术快速、便携等特点。
附图说明
下面将结合附图对本发明作进一步说明。
图1为实施例1中制备的供体颗粒的Gaussian分布图。
图2为实施例2制备的供体颗粒的Gaussian分布图。
图3为实施例3制备的平均粒径在250nm左右的受体颗粒的Gaussian分布图。
图4为实施例4中的糖含量测定标准曲线。
图5为实施例5中试剂条的结构示意图。
图6为实施例9中血清和全血中不同浓度CRP检测的相关性系数图。
具体实施方式
为使本发明容易理解,下面将详细说明本发明。但在详细描述本发明前,应当理解本发明不限于描述的具体实施方式。还应当理解,本文中使用的术语仅为了描述具体实施方式,而并不表示限制性的。本发明的实施并不局限于下面的实施例,对本发明所做的任何形式上的变通和/或改变都将落入本发明保护范围。
在提供了数值范围的情况下,应当理解所述范围的上限和下限和所述规定范围中的任何其他规定或居间数值之间的每个居间数值均涵盖在本发明内。这些较小范围的上限和下限可以独立包括在较小的范围中,并且也涵盖在本发明内,服从规定范围中任何明确排除的限度。在规定的范围包含一个或两个限度的情况下,排除那些包括的限度之任一或两者的范围也包含在本发明中。
除非另有定义,本文使用的所有术语与本发明所属领域的普通技术人员的通常理解具有相同的意义。虽然与本文中描述的方法和材料类似或等同的任何方法和材料也可在本发明的实施或测试中使用,但是现在描述了优选的方法和材料。
Ⅰ.术语
本发明所述用语“活性氧”是指机体内或者自然环境中由氧组成,含氧并且性质活泼的物质的总称,主要为一种激发态的氧分子,包括氧的一电子还原产物超氧阴离子(O2·-)、二电子还原产物过氧化氢(H2O2)、三电子还原产物羟基自由基(·OH)以及一氧化氮和单线态氧(1O2)等。
本发明所述用语“供体颗粒”是指含有通过能量或者活性化合物的激活后能够产生与受体颗粒反应的诸如活性氧的活性中间体的敏化剂的颗粒。供体颗粒可以是光活化的(如染料和芳香化合物)或者化学活化的(如酶、金属盐等)。在本发明一些具体实施例中,所述供体颗粒为填充有光敏剂的高分子微球,所述光敏剂可以是本领域已知的光敏剂,优选相对光稳定且不与单线态氧有效反应的化合物,其非限定性的例子包括例如美国专利US5709994(该专利文献在此全文引为参考)公开的亚甲基蓝、玫瑰红、卟啉、酞菁和叶绿素等化合物,以及这些化合物的具有1-50个原子取代基的衍生物,所述取代基用于使得这些化合物更具有亲脂性或更具有亲水性、和/或作为连接至特异性结合配对成员的连接基团。本领域技术人员已知的其他光敏剂的例子也可以在本发明中使用,例如美国专利US6406913中记载的内容,该专利文献并入本文以供参考。
本发明所述用语“受体颗粒”是指含有能够与活性氧反应可以产生可检测信号的化合物的颗粒。供体颗粒被能量或者活性化合物诱导激活并释放高能态的活性氧,该高能态的活性氧被近距离的受体颗粒俘获,从而传递能量以激活所述受体颗粒。在本发明的一些具体实施方式中,所述受体颗粒包含发光组合物和载体,所述发光组合物填充于载体中和/或包被于载体表面。
本发明所述“载体”选自带、片、棒、管、孔、微滴定板、珠子、粒子和微球,其可以是本领域技术人员所公知的微球或微粒,其可以是任何尺寸的,其可以是有机的或是无机的,其可以是可膨胀或不可膨胀的,其可以是多孔的或非多孔的,其可以是磁性或非磁性的,其具有任何密度,但优选具有和水接近的密度,优选能漂浮于水中,且由透明、部分透明或不透明的材料构成。
本发明中,所述“化学发光化合物”即一种被称作为标记物的化合物,可进行化学反应以便引起发光,比如通过被转化为在电子激发态下形成的另一种化合物。激发态可以是单线态或是三重激发态。激发态可弛豫到基态直接发光,或者是通过将激发能量传递到发射能量受体,从而自身恢复到基态。在此过程中,能量受体颗粒将被跃迁为激发态而发光。
本发明所述“特异性结合配对成员”是指一对能够相互特异性结合的物质。
本发明所述“粒径分布变异系数C.V值”是指在纳米粒度仪的检测结果中,粒径在Gaussian分布中的变异系数。变异系数的计算公式为:C.V值=(标准偏差SD/平均值Mean)×100%。
本发明所述用语“Nicomp分布”是指美国PSS纳米粒度仪NICOMP中的一种算法分布。相对于Gaussian单峰算法,Nicomp多峰算法对于多组分、粒径分布不均匀液态分散体系的分析以及胶体体系的稳定性分析具有独特优势。
本发明所述用语“待测样本”是指待测的含有或疑似含有待测目标分子的一种混合物。可以被用在本发明的待测样品包括体液,如血液(可以是在收集的血液样品中通常看到的抗凝血)、血浆、血清、尿、精液、唾液、细胞培养物、组织提取物等。其他类型的待测样品包括溶剂、海水、工业水样、食品样品、环境样本诸如土或水、植物材料、真核细胞、细菌、质粒、病毒、真菌、及来自于原核的细胞。待测样品可以在使用前根据需要利用稀释液进行稀释。例如,为了避免HOOK效应,可以在上机检测前使用稀释液对待测样品进行稀释后再在检测仪器上进行检测。
本发明所述用语“待测目标分子”是指检测时待检测样本中的物质。与待测目标分子具有特异性结合亲合力的一种或多种物质会被用于检测该目标分子。待测目标分子可以是蛋白、肽、抗体或可以使其与抗体结合的半抗原。待测目标分子可以是与互补核酸或寡聚核苷酸结合的核酸或寡聚核苷酸。待测目标分子可以是可形成特异性结合配对成员的任何其他物质。其他典型的待测目标分子的例子包括:药物,诸如类固醇、激素、蛋白、糖蛋白、粘蛋白、核蛋白、磷蛋白、滥用的药物、维生素、抗细菌药、抗真菌药、抗病毒药、嘌呤、抗肿瘤试剂、安非他命、杂氮化合物、核酸和前列腺素,以及任何这些药物的代谢物;杀虫剂及其代谢物;以及受体。分析物也包括细胞、病毒、细菌和真菌。
本发明所述用语“抗体”以最广含义使用,包括任何同种型的抗体,保留对抗原的特异性结合的抗体片段,包括但不限于Fab、Fv、scFv、和Fd片段、嵌合抗体、人源化抗体、单链抗体、双特异性抗体、和包含抗体的抗原结合部分和非抗体蛋白的融合蛋白。在任何需要的情况下,抗体可以进一步与其它部分,诸如特异性结合配对成员中的一员,例如生物素或亲和素(生物素-亲和素特异性结合配对成员中的一员)等缀合。
本发明所述用语“抗原”是指能够刺激机体产生免疫应答,并能与免疫应答产物抗体和致敏淋巴细胞在体内外结合,发生免疫效应的物质。
本发明所述用语“结合”指由于例如共价、静电、疏水、离子和/或氢键等相互作用,包括但不限于如盐桥和水桥等相互作用引起的两个分子间的直接联合。本发明所述用语“特异性结合”,是指两种物质之间的相互辨别和选择性结合反应,从立体结构角度上说就是相应的反应物之间构象的对应性。在本发明公开的技术思想下,特异性结合反应的检测方法包括但不限于:双抗体夹心法、竞争法、中和竞争法、间接法或捕获法。
Ⅱ.具体实施方案
下面将结合实施例更详细地说明本发明。
本申请的发明人通过对供体颗粒和受体颗粒中的糖含量以及粒径尺寸均一性进行研究后发现,供体颗粒中的糖含量不宜过高,每毫克所述供体颗粒中的糖含量不高于25ug,而受体颗粒中的糖含量不宜过低,每毫克所述供体颗粒中的糖含量不低于40ug,且通过采用粒径尺寸均一性合适的微球(如微球粒径分布的变异系数>5%),既能保障光激化学发光检测的灵敏度,又能拓宽检测量程。
因此,本发明第一方面所涉及的均相化学发光检测试剂盒,其包括:其包括供体试剂和受体试剂,所述供体试剂含有供体颗粒,所述供体颗粒被激发后能够产生活性氧,所述受体试剂含有第二缓冲溶液和受体颗粒,所述受体颗粒能够与接收到的活性氧反应产生化学发光信号,
所述供体颗粒包括第一载体,所述第一载体的内部填充有敏化剂,所述第一载体的表面直接或间接连接有特异性结合配对成员中的一员,且每毫克所述供体颗粒中的糖含量不高于25ug;
所述受体颗粒包括第二载体,所述第二载体的内部填充有发光组合物,所述第二载体的表面包被有包覆层,所述包覆层的表面连接报告分子,所述报告分子能够与待测目标分子特异性结合,且每毫克所述供体颗粒中的糖含量不低于40ug。
在本发明的一些实施方式中,所述第一载体的表面直接键合有特异性结合配对成员中的一员。
在本发明的另一些实施方式中,所述第一载体的表面没有包被或连接有多糖物质,其直接键合特异性结合配对成员中的一员。
在本发明的一些实施方式中,所述第一载体的表面带有键合官能团,所述键合官能团用于将特异性结合配对成员中的一员直接键合在所述第一载体的表面。
在本发明的另一些实施方式中,所述键合官能团选自胺基、酰胺基、羟基、醛基、羧基、马来酰亚胺基和巯基;优选选自醛基和/或羧基。
在本发明的一些实施方式中,所述第一载体表面的键合官能团的含量为100~500nmol/mg,优选为200~400nmol/mg。
在本发明的一些实施方式中,所述特异性结合配对成员选自抗体、抗体片段、配体、寡核苷酸、寡核苷酸结合蛋白、凝集素、半抗原、抗原、免疫球蛋白结合蛋白、抗生物素蛋白、亲和素或生物素所组成的一对能够相互特异性结合的物质。
在本发明的另一些实施方式中,所述特异性结合配对成员为亲和素-生物素,所述亲和素选自卵白亲和素、链霉亲和素、卵黄亲和素、中性亲和素和类亲和素,优选为中性亲和素和/或链霉亲和素。
在本发明的一些实施方式中,所述亲和素通过氨基与所述第一载体表面的醛基反应形成席夫碱的方式化学键合在所述第一载体的表面。
在本发明的一些实施方式中,所述供体颗粒在所述供体试剂中的粒径分布变异系数C.V值≥5%。
在本发明的另一些实施方式中,所述供体颗粒在所述供体试剂中的粒径分布变异系数C.V值≥8%;优选地,所述供体颗粒在所述供试剂中的粒径分布变异系数C.V值≥10%。
在本发明的一些实施方式中,所述供体颗粒在所述供体试剂中的粒径分布变异系数C.V值≤40%;更进一步优选地,所述供体颗粒在所述供体试剂中的粒径分布变异系数C.V值≤20%。
值得注意的是,本发明所述的供体颗粒粒径分布变异系数C.V值指的是供体颗粒包被上所需的物质后的粒径分布变异系数C.V值。
在本发明的一些具体实施方式中,所述供体颗粒在供体试剂中的粒径分布变异系数C.V值可以为5%、5.5%、6%、6.5%、7%、7.5%、8%、8.5%、9%、9.5%、10%、10.5%、11%、11.5%、12%、12.5%、13%、13.5%、14%、14.5%、15%、15.5%、16%、16.5%、17%、17.5%、18%、18.5%、19%、19.5%、20%、25%、30%、35%或40%等。
在本发明的另一些实施方式中,所述供体颗粒在所述供体试剂中的粒径分布呈现多分散性。
在本发明的一些具体实施方式中,所述粒径分布变异系数C.V值是通过Gaussian分布计算得到。
在本发明的另一些具体实施方式中,利用Gaussian分布分析法,所述受体颗粒在受体试剂中Gaussian分布曲线呈现两个或两个以上的峰。
在本发明的一些实施方式中,所述供体颗粒在所述供体试剂中的浓度为10μg/ml~1mg/ml,优选为20μg/ml~500μg/ml,更优选为50μg/ml~200μg/ml。
在本发明的另一些实施方式中,所述供体试剂中还包括PH值为7.0~9.0的缓冲溶液,所述供体颗粒悬浮于所述缓冲溶液中。
在本发明的一些实施方式中,所述缓冲溶液中含有多糖,所述多糖选自含有三个或更多个未修饰或修饰的单糖单元的碳水化合物,优选选自葡聚糖、淀粉、糖原、菊粉、果聚糖、甘露聚糖、琼脂糖、半乳聚糖、羧基葡聚糖和氨基葡聚糖;更优选选自葡聚糖、淀粉、糖原和聚核糖。
在本发明的另一些实施方式中,所述葡聚糖的分子量分布Mw选自10000~1000000KDa,优选选自100000~800000KDa,更优选选自300000~700000KDa。
在本发明的一些实施方式中,所述缓冲溶液中葡聚糖的含量为0.01~1wt%,优选为0.05~0.5wt%。
在本发明的另一些实施方式中,所述受体颗粒在受体试剂中的粒径分布变异系数C.V值≥5%。
在本发明的一些优选的实施方式中,所述受体颗粒在受体试剂中的粒径分布变异系数C.V值≥8%;优选地,所述受体颗粒在受体试剂中的粒径分布变异系数C.V值≥10%。
在本发明的另一些优选的实施方式中,所述受体颗粒在受体试剂中的粒径分布变异系数C.V值≤40%;更进一步优选地,所述受体颗粒在受体试剂中的粒径分布变异系数C.V值≤20%。
值得注意的是,本发明所述的受体颗粒粒径分布变异系数C.V值指的是受体颗粒包被上所需的物质后的粒径分布变异系数C.V值。
在本发明的一些具体实施方式中,所述受体颗粒在受体试剂中的粒径分布变异系数C.V值可以为5%、5.5%、6%、6.5%、7%、7.5%、8%、8.5%、9%、9.5%、10%、10.5%、11%、11.5%、12%、12.5%、13%、13.5%、14%、14.5%、15%、15.5%、16%、16.5%、17%、17.5%、18%、18.5%、19%、19.5%、20%、25%、30%、35%或40%等。
在本发明的一些实施方式中,所述受体颗粒在受体试剂中的粒径分布呈现多分散性。
在本发明的另一些实施方式中,所述粒径分布变异系数C.V值是通过Gaussian分布计算得到。
在本发明的一些实施方式中,利用Gaussian分布分析法,所述受体颗粒在受体试剂中Gaussian分布曲线呈现两个或两个以上的峰。
在本发明的另一些实施方式中,所述受体试剂中包含至少两种平均粒径分布的受体颗粒。
在本发明的一些实施方式中,所述包覆层中的包覆物选自多糖、高分子聚合物或生物大分子,优选为多糖;
进一步优选地,所述第二载体的表面包被有至少两个连续多糖涂层,所述连续多糖涂层的表面连接有特异性结合配对成员中的一员。
在本发明的另一些实施方式中,所述连续多糖涂层中的每一多糖层自发地与前一多糖层相关联。
在本发明的一些实施方式中,所述多糖具有侧基官能团,所述连续多糖层中的任一多糖层的所述侧基官能团与前一多糖层的所述侧基官能团所带电荷相反。
在本发明的另一些实施方式中,所述多糖具有侧基官能团,并且所述连续多糖涂层中的任一多糖层通过所述侧基官能团与前一多糖层的所述侧基官能团之间的化学键合反应实现与所述前一多糖层共价连接。
在本发明的一些实施方式中,所述连续多糖涂层的所述侧基官能团在胺官能团和胺反应性官能团之间交替。
在本发明的另一些实施方式中,所述胺反应性官能团是醛基或羧基。
在本发明的一些实施方式中,所述连续多糖涂层的最外一层多糖层具有至少一个侧基官能团。
在本发明的另一些实施方式中,所述侧基官能团选自醛基、羧基、巯基、氨基、羟基和马来胺基中的至少一种;优选选自醛基和/或羧基。
在本发明的一些实施方式中,所述连续多糖涂层侧基官能团直接地或间接地化学键合特异性结合配对成员中的一员。
在本发明的另一些实施方式中,所述多糖选自含有三个或更多个未修饰或修饰的单糖单元的碳水化合物;优选选自葡聚糖、淀粉、糖原、菊粉、果聚糖、甘露聚糖、琼脂糖、半乳聚糖、羧基葡聚糖和氨基葡聚糖;更优选选自葡聚糖、淀粉、糖原和聚核糖。
在本发明的一些实施方式中,所述糖含量是通过蒽酮法检测的;
优选地,所述糖选自含有三个或更多个未修饰或修饰的单糖单元的碳水化合物,优选选自葡聚糖、淀粉、糖原、菊粉、果聚糖、甘露聚糖、琼脂糖、半乳聚糖、羧基葡聚糖和氨基葡聚糖;更优选选自葡聚糖、淀粉、糖原和聚核糖;
进一步优选地,所述葡聚糖的分子量分布Mw为1000~1000000KDa,优选为10000~800000KDa,更优选为30000~700000KDa。
在本发明的一些实施方式中,所述第一载体和/或第二载体的材质选自天然的、人工合成的或改性天然存在的聚合物;优选为人工合成的聚合物。
在本发明的一些实施方式中,所述第一载体和/或第二载体的材质选自琼脂糖、纤维素、硝化纤维素、醋酸纤维素、聚氯乙烯、聚苯乙烯、聚乙烯、聚丙烯、聚(4-甲基丁烯)、聚丙烯酰胺、聚甲基丙烯酸酯、聚对苯二甲酸乙二醇酯、尼龙、聚丁酸乙烯或聚丙烯酸酯;优选选自聚苯乙烯、聚丙烯、聚(4-甲基丁烯)、聚丙烯酰胺、聚甲基丙烯酸酯、聚对苯二甲酸乙二醇酯或聚丙烯酸酯。
在本发明的一些实施方式中,所述第一载体和/或第二载体为聚苯乙烯乳胶微球。
在本发明的一些实施方式中,所述敏化剂是光活化的光敏剂和/或化学活化的引发剂,优选为光活化的光敏剂;进一步优选地,所述敏化剂选自亚甲基蓝、玫瑰红、卟啉、酞菁和叶绿素。
在本发明的一些实施方式中,所述发光组合物能够与活性氧反应产生可检测的化学发光信号,其包含化学发光化合物和金属螯合物。
在本发明的一些实施方式中,所述化学发光化合物选自烯烃化合物,优选选自二甲基噻吩、双丁二酮化合物、二氧杂环己烯、烯醇醚、烯胺、9-亚烷基苍耳烷、9-亚烷基-N-9,10二氢化吖啶、芳基乙醚烯、芳基咪唑和光泽精以及它们的衍生物,更优选选自二甲基噻吩及其衍生物。
在本发明的一些实施方式中,所述金属螯合物的金属是稀土金属或VIII族金属,优选选自铕、铽、镝、钐、锇和钌,更优选为铕。
在本发明的一些实施方式中,所述金属螯合物包含选自下列的螯合剂:4’-(10-甲基-9-蒽基)-2,2’:6’2”-联三吡啶-6,6”-二甲胺]四乙酸(MTTA)、2-(1’,1’,2’,2’,3’,3’-七氟-4’,6’-己二酮-6’-基)-萘(NHA)、4,4’-二(2”,3”,3”-七氟-4”,6”-己二酮-6”-基)-邻-三联苯(BHHT)、4,4’-二(1”,1”,1”,2”,2”,3”,3”-七氟-4”,6”-己二酮-6”-基)-氯代磺基-邻-三联苯(BHHCT)、4,7-联苯-1,10-菲咯啉(DPP)、1,1,1-三氟丙酮(TTA)、3-萘酰-1,1,1-三氟丙酮(NPPTA)、萘基三氟丁二酮(NTA)、三辛基氧化膦(TOPO)、三苯基氧化膦(TPPO)、3-苯甲酰-1,1,1-三氟丙酮(BFTA)、2,2-二甲基-4-全氟丁酰-3-丁酮(fod)、2,2’-联吡啶(bpy)、联吡啶基羧酸、氮杂冠醚、氮杂穴状配体和三辛基氧化膦以及它们的衍生物。
本发明第二方面所涉及的均相化学发光POCT检测试剂盒,其包括如本发明第一方面所述的试剂盒,所述POCT是指即时检验或在病人旁边进行的临床检测。
在本发明的一些实施方式中,所述试剂盒中包括试剂条,在所述试剂条上设有若干盛装试剂的孔位,所述孔位至少包括:
第一试剂孔位,其用于盛装所述的供体试剂;
第二试剂孔位,其用于盛装所述的受体试剂。
本发明第三方面所涉及的均相化学发光POCT检测方法,其利用如本发明第二方面所述的试剂盒检测待测样本中的待测目标分子。
本发明第四方面所涉及的均相化学发光POCT检测装置,其利用如本发明第二方面所述试剂盒或第三方面所述的方法检测待测样本中的待测目标分子。
在本发明的一些实施方式中,所述装置包括:
孵育模块,用于控制如本发明第二方面所述所述试剂条的温度;
光激发与检测模块,其设置在所述孵育模块的一侧,用于向所述试剂条发射激发光使其产生光激化学发光反应;并检测所述试剂产生的化学发光信号。
本发明第五方面涉及一种利用如本发明第四方面所述的POCT检测装置进行均相化学发光分析的方法,其包括如下步骤:
S1,将待测样本与受体试剂、供体试剂相接触,反应后生成待测混合物;
S2,利用波长为600~700nm的激发光激发所述待测混合物进行化学发光,检测所述化学发光的信号强度;所述化学发光的检测波长为520~620nm;
S3,根据分析所述化学发光的信号强度,判断所述待测样品中是否含有待测目标分子和/或待测目标分子在待测样本中的浓度。
在本发明的一些实施方式中,所述待测样本利用稀释液稀释后再与受体试剂相接触。
在本发明的一些实施方式中,所述待测样本选自疑似含有待测目标分子的材料,其包括但不限于:血液、血清、血浆、痰液、淋巴液、精液、阴道粘液、粪便、尿液或脊髓液。
实施例
为使本发明更加容易理解,下面将结合实施例来进一步详细说明本发明,这些实施例仅起说明性作用,并不局限于本发明的应用范围。本发明中所使用的原料或组分若无特殊说明均可以通过商业途径或常规方法制得。
实施例1:供体试剂的制备
(一)醛基聚苯乙烯乳胶微球的制备
a)准备100ml的三口烧瓶,加入40mmol苯乙烯、5mmol丙烯醛、10ml水,搅拌10min后通N2 30min。
b)称取0.11g过硫酸铵和0.2g氯化钠,溶于40ml水中配置成水溶液。将该水溶液加入到步骤a)的反应体系中,继续通N2 30min。
c)将反应体系升温至70℃,反应15小时。
d)将反应完成后的乳液冷却至室温,用合适的滤布过滤。得到的乳液用去离子水过次离心沉降清洗,直至离心初的上清液的电导率接近去离子水,然后用水稀释,以乳液形式保存。
e)由纳米粒度仪测得该乳胶微球粒径的高斯分布平均粒径为201.3nm,变异系数(C.V.)=8.0%。
(二)敏化剂的填充
a)准备25ml的圆底烧瓶,加入0.11g酞菁铜,10ml N,N-二甲基甲酰胺,磁力搅拌,水浴升温至75℃,获得光敏剂溶液。
b)准备100ml的三口烧瓶,加入10ml 95%乙醇、10ml水和10ml浓度为10%、(一)中获得的醛基聚苯乙烯乳胶微球,磁力搅拌,水浴升温至70℃。
c)将步骤a)中的溶液缓慢滴加至步骤b)中的三口烧瓶中,70℃反应2小时后停止搅拌,自然冷却,获得乳液。
d)将上述乳液离心1小时,30000G,离心后弃去上清液,用50%乙醇重新悬浮。重复离心清洗三次后用pH值=10的50mM CB缓冲液重新悬浮,使其终浓度为20mg/ml。
(三)微球表面修饰亲和素,制备供体试剂
a)微球混悬液处理:吸取一定量步骤(二)制备的微球于高速冷冻离心机中离心,弃去上清,加入一定量MES缓冲液,超声细胞破碎仪上超声至颗粒重新悬浮,加入MES缓冲液调节微球浓度至100mg/ml。
b)亲和素溶液配制:称量一定量链霉亲和素,加MES缓冲液溶解至8mg/ml。
c)混合:将处理好的微球混悬液、8mg/ml的亲和素以及MES缓冲液,以2:5:1的体积比进行混合,迅速混匀,得到反应液。
d)反应:MES缓冲液配制25mg/ml的NaBH3CN溶液,按照与反应液1:25的体积比加入,迅速混匀。37℃旋转反应48小时。
e)封闭:MES缓冲液配制75mg/ml的Gly溶液以及25mg/ml的NaBH3CN溶液,按照与反应液2:1:10的体积比加入上述溶液中,混匀,37℃旋转反应2小时。再加入200mg/ml的BSA溶液(MES缓冲液),其与反应液体积比为5:8,迅速混匀,37℃旋转反应16小时。
f)清洗:向反应好的溶液中加入MES缓冲液,高速冷冻离心机离心,弃上清,加入新鲜MES缓冲液超声法重新悬浮,再次离心,如此清洗3次,最后用少量的供体颗粒缓冲液进行悬浮,测定固含量,并用供体颗粒缓冲液调节浓度至150μg/ml,获得包含供体颗粒的供体试剂。
g)由纳米粒度仪测得供体颗粒的高斯分布平均粒径为227.7nm,变异系数(C.V.)=6.5%,具体如图1所示。
实施例2:供体试剂的制备
醛基聚苯乙烯乳胶微球的制备以及敏化剂的填充过程同实施例1中(一)和(二)的制备步骤。
(一)氨基葡聚糖的制备
a)将500mL四口烧瓶置于油浴锅中,装好冷凝管,通氮气。
b)依次加入10g平均分子量分布为500000KDa的葡聚糖、100ml去离子水、2g NaOH、10g N-(2,3-环氧丙基)邻苯二甲酰亚胺,机械搅拌。
c)90℃油浴2小时后关闭加热,维持搅拌自然冷却。
d)反应混合液在2L甲醇中析出主要混合物,收集固体,烘干。
e)将200mL四口烧瓶置于油浴锅中,装好冷凝管,通氮气。
f)依次加入烘干后的固体、100mL去离子水,1.8g乙酸钠、5mL 50%水合肼后调pH至4,机械搅拌。
g)85℃油浴1小时后关闭加热,维持搅拌自然冷却。
h)反应液pH调至中性后过滤,收集滤液。
i)滤液置于透析袋中,去离子水4℃透析2天,每天换水3-4次。
j)透析完成后冷冻干燥,得氨基葡聚糖固体9.0g。
(二)醛基葡聚糖的制备
a)称取10g平均分子量分布为500000KDa的葡聚糖置于250烧杯中,加入100mL0.1M/pH=6.0的磷酸盐缓冲液,室温搅拌溶解。
b)称取1.8g偏高碘酸钠置于50mL烧杯中,加入10毫升0.1M/pH=6.0的磷酸盐缓冲液,室温搅拌溶解。
c)将偏高碘酸钠溶液缓慢滴加至葡聚糖溶液中,反应至无气泡产生后继续搅拌1小时。
d)将反应混合液置于透析袋中,去离子水4℃透析2天,每天换水3-4次。
e)透析完成后冷冻干燥,得醛基葡聚糖固体9.6g。
(三)微球包被葡聚糖
a)取50mg氨基葡聚糖固体于20mL圆底烧瓶中,加入5mL 50mM/pH=10碳酸盐缓冲液,30℃避光搅拌溶解。
b)取100mg供体颗粒,加入到氨基葡聚糖溶液中搅拌2小时。
c)将10mg硼氢化钠溶于0.5mL 50mM/pH=10碳酸盐缓冲液后滴加到上述反应液中,30℃避光反应过夜。
d)将反应后的混合液30000G离心后弃去上清液,加入50mM/pH=10碳酸盐缓冲液超声分散。重复离心清洗三次后用50mM/pH=10碳酸盐缓冲液定容,使其终浓度为20mg/ml。
e)取100mg醛基葡聚糖固体于20mL圆底烧瓶中,加入5mL 50mM/pH=10碳酸盐缓冲液,30℃避光搅拌溶解。
f)将上述颗粒加入到醛基葡聚糖溶液中搅拌2小时。
g)将15mg硼氢化钠溶于0.5mL 50mM/pH=10碳酸盐缓冲液后滴加到上述反应液中,30℃避光反应过夜。
h)将反应后的混合液30000G离心后弃去上清液,加入50mM/pH=10碳酸盐缓冲液超声分散。重复离心清洗三次后用50mM/pH=10碳酸盐缓冲液定容,使其终浓度为20mg/ml。
i)由纳米粒度仪测得该微球的高斯分布平均粒径为235.6nm,变异系数(C.V.)=8.1%。
(四)微球表面修饰亲和素,制备供体试剂
h)微球混悬液处理:吸取一定量步骤(三)制备的微球高速冷冻离心机中离心,弃去上清,加入一定量MES缓冲液,超声细胞破碎仪上超声至微球重新悬浮,加入MES缓冲液调节供体颗粒浓度至100mg/ml。
i)亲和素溶液配制:称量一定量中性亲和素,加MES缓冲液溶解至8mg/ml。
j)混合:将处理好的微球混悬液、8mg/ml的亲和素以及MES缓冲液,以2:5:1的体积比进行混合,迅速混匀,得到反应液。
k)反应:MES缓冲液配制25mg/ml的NaBH3CN溶液,按照与反应液1:25的体积比加入,迅速混匀。37℃旋转反应48小时。
l)封闭:MES缓冲液配制75mg/ml的Gly溶液以及25mg/ml的NaBH3CN溶液,按照与反应液2:1:10的体积比加入上述溶液中,混匀,37℃旋转反应2小时。再加入200mg/ml的BSA溶液(MES缓冲液),其与反应液体积比为5:8,迅速混匀,37℃旋转反应16小时。
m)清洗:向反应好的溶液中加入MES缓冲液,高速冷冻离心机离心,弃上清,加入新鲜MES缓冲液超声法重新悬浮,再次离心,如此清洗3次,最后用少量的供体颗粒缓冲液进行悬浮,测定固含量,并用供体颗粒缓冲液调节浓度至150μg/ml,获得包含供体颗粒的供体试剂。
n)由纳米粒度仪测得供体颗粒的高斯分布平均粒径为249.9nm,变异系数(C.V.)=11.6%。
实施例3:受体试剂的制备
1.醛基聚苯乙烯乳胶微球的制备及表征过程
1)准备100ml的三口烧瓶,加入40mmol苯乙烯、5mmol丙烯醛、10ml水,搅拌10min后通N2 30min;
2)称取0.11g过硫酸铵和0.2g氯化钠,溶于40ml水中配置成水溶液。将该水溶液加入到步骤1的反应体系中,继续通N2 30min;
3)将反应体系升温至70℃,反应15小时;
4)将反应完成后的乳液冷却至室温,用合适的滤布过滤。得到的乳液用去离子水过次离心沉降清洗,直至离心初的上清液的电导率接近去离子水,然后用水稀释,以乳液形式保存;
5)由纳米粒度仪测得此时乳胶微球粒径的Gaussian分布平均粒径为202.2nm,变异系数(C.V.)=4.60%。
2.在微球内部填埋发光组合物的过程及表征
1)准备25ml的圆底烧瓶,加入0.1g二甲基噻吩衍生物和0.1g铕(Ⅲ)配合物(MTTA-EU3+),10ml 95%乙醇,磁力搅拌,水浴升温至70℃,获得配合物溶液;
2)准备100ml的三口烧瓶,加入10ml 95%乙醇、10ml水和10ml浓度为10%、步骤1中获得的醛基聚苯乙烯乳胶微球,磁力搅拌,水浴升温至70℃;
3)将步骤1)中的配合物溶液缓慢滴加至步骤2)中的三口烧瓶中,70℃反应2小时后停止搅拌,自然冷却;
4)将上述乳液离心1小时,30000G,离心后弃去上清液,得到填埋有发光组合物的醛基聚苯乙烯微球。
5)由纳米粒度仪测得此时微球粒径的Gaussian分布平均粒径为204.9nm,变异系数(C.V.)=5.00%。
3.在微球表面包被多糖涂层的过程及表征
1)取50mg氨基葡聚糖固体于20mL圆底烧瓶中,加入5mL 50mM/pH=10碳酸盐缓冲液,30℃避光搅拌溶解;
2)取100mg步骤2中已制备好的填埋有发光组合物的醛基聚苯乙烯微球,加入到氨基葡聚糖溶液中搅拌2小时;
3)将10mg硼氢化钠溶于0.5mL 50mM/pH=10碳酸盐缓冲液后滴加到上述反应液中,30℃避光反应过夜;
4)将反应后的混合液30000G离心后弃去上清液,加入50mM/pH=10碳酸盐缓冲液超声分散。重复离心清洗三次后用50mM/pH=10碳酸盐缓冲液定容,使其终浓度为20mg/ml;
5)取100mg醛基葡聚糖固体于20mL圆底烧瓶中,加入5mL 50mM/pH=10碳酸盐缓冲液,30℃避光搅拌溶解;
6)将上述微球加入到醛基葡聚糖溶液中搅拌2小时;
7)将15mg硼氢化钠溶于0.5mL 50mM/pH=10碳酸盐缓冲液后滴加到上述反应液中,30℃避光反应过夜;
8)将反应后的混合液30000G离心后弃去上清液,加入50mM/pH=10碳酸盐缓冲液超声分散。重复离心清洗三次后用50mM/pH=10碳酸盐缓冲液定容,使其终浓度为20mg/ml。
9)由纳米粒度仪测得此时微球粒径的Gaussian分布平均粒径为241.6nm,变异系数(C.V.)=12.90%。
4.PCT抗体的偶联过程
1)将配对PCT抗体透析至PH值=10的50mM CB缓冲液,测得浓度为1mg/ml。
2)在2ml离心管中加入0.5ml步骤3中获得的微球以及0.5ml步骤1)获得的配对抗体Ⅰ,混匀后加入100μl 10mg/ml NaBH4溶液(50mM CB缓冲液),2-8℃反应4小时。
3)反应完毕后加入0.5ml 100mg/ml BSA溶液(50mM CB缓冲液),2-8℃反应2小时。
4)反应完毕后将离心45min,30000G,离心后弃去上清液,用50mM MES缓冲液重新悬浮。重复离心清洗四次,并用缓冲溶液稀释至终浓度为50μg/ml,获得偶联抗体Ⅰ的受体试剂。
5)由纳米粒度仪测得此时受体颗粒粒径的Gaussian分布平均粒径值为253.5nm,变异系数(C.V值)=9.60%(如图3所示)。
实施例4:利用蒽酮法检测微球的糖含量
a)微球样品预处理:
分别取实施例1中含有1mg供体微球a的供体试剂A、实施例2中含有1mg供体微球b的供体试剂B和实施例3中含有1mg受体微球的受体试剂,20000g离心40min,倒去上层清液后用纯化水超声分散,重复离心分散三次后用纯化水定容至1mg/mL。
b)葡萄糖标准溶液的配制:
用纯化水将1mg/mL葡萄糖储备液配制成0mg/mL、0.025mg/mL、0.05mg/mL、0.075mg/mL、0.10mg/mL、0.15mg/mL的标准溶液。
c)蒽酮溶液的配置:用80%硫酸溶液配制成2mg/mL(此溶液室温下24h内稳定,现用现配)。
d)向离心管分别加入0.1mL各浓度的葡萄糖标准溶液及待测样品,每管各加1mL蒽酮试液。
e)85度孵育30min。
f)将样品反应管15000g离心40min,移液器枪头从管底吸取澄清液体进行吸光度的测定,避免将上部悬浮物吸出。
g)恢复至室温,测量620nm的吸光度(测量最好在2h内进行)。
h)以标准溶液浓度为X值,吸光度为Y值,进行一次直线回归,检测结果和获得的标准曲线分别如表1和图4所示,并以此检测待测样品的糖浓度。
表1
检测结果:
实施例1中供体微球a的糖含量:11.3μg/mg
实施例2中供体微球b的糖含量:40.8μg/mg
实施例3中受体微球的糖含量:60.4μg/mg
实施例5:制备试剂条及试剂盒
所制备的试剂条11如图5所示,其上设有若干盛装试剂的孔位111,所述孔位包括:
第一试剂孔位,其用于盛装实施例1或实施例2所制备的供体试剂,其中供体颗粒的浓度为150ug/ml。
第二试剂孔位,其用于盛装实施例3所制备的受体试剂,其中受体颗粒的浓度为50ug/ml;
样本孔位,其用于盛装待测样本;以及
信号检测孔位。
可选地,孔位111的横截面可以为圆形、椭圆形或矩形。优选地,多个孔位的横截面互不相同,以区别不同的所盛放的不同试剂。
可选地,试剂条11中还可设置有用于承载稀释液和/或附加试剂的第三试剂孔位和/或第四试剂孔位。在设置有用于承载有稀释液和附加试剂的孔位的情况下,稀释液、附加试剂的添加顺序如下所述。先将待测样本添加至承载有稀释液的第三试剂孔位中,使其与稀释液混合,从而进行稀释操作。稀释完成后,取一定体积稀释后的待测样本加入承载有附加试剂的第五试剂孔位中,使其与附加试剂混合。之后,继续取一定体积混合后的液体加入承载有第一试剂孔位中。经过一定时间反应后,继续取一定体积混合后液体加入承载有第二试剂孔位中,进行后续流程。
在本实施例中,孔位111的端面上均覆膜以封闭其开口。其中,覆膜可以是一次性封膜,也可以是反复使用的封膜。
在本实施例中,在试剂板条的侧部设置有条形码区112。该条形码区112包含试剂板条的信息。例如,条形码区112设有条形码,其可为一维码或二维码。
将实施例1和/或实施例2制备的供体试剂、实施例3制备的受体试剂以及上述制备的试剂条进行组装,获得本申请所述的均相化学发光POCT检测试剂盒。
实施例6:一种均相化学发光POCT检测装置
本实施例所述均相化学发光POCT检测装置的原理为:待测样本中的待测目标分子与供体颗粒和受体颗粒反应形成免疫复合物,这种相互作用会将供体颗粒和受体颗粒拉近,在激光(波长为680nm)的照射下,供体颗粒中的敏化剂将周围环境中的氧气转化为更为活跃的单体氧。单体氧扩散至受体颗粒,与受体颗粒中的化学发光剂反应,进一步激活了同样在受体颗粒上的发光基团,使之发出光,波长为520-620nm。单体氧的半衰期为4μSec,在溶液中的扩散距离为200nm左右。如果生物分子不存在相互作用,单线态氧无法扩散到受体颗粒,则不会有光信号产生。故通过测量混合物发出的光强度,能够计算出待测样品中的待测目标分子的浓度。其中,所述供体颗粒包括第一载体,所述第一载体的内部填充有敏化剂,所述第一载体的表面连接有特异性结合配对成员中的一员;所述受体颗粒包括第二载体,所述第二载体的内部填充有发光组合物,所述第二载体的表面包被有包覆层,所述包覆层的表面连接有报告分子,所述报告分子能够与待测目标分子特异性结合。
本实施例所述光激化学发光免疫分析仪的一个优选结构包括如下模块:
试剂加样模块,其用于添加待测样本、受体试剂和/或供体试剂;其中所述供体试剂包括供体颗粒,所述供体颗粒在所述供体试剂中的粒径分布变异系数C.V值≥5%;所述受体颗粒在所述受体试剂中的粒径分布变异系数C.V值≥5%;
孵育模块,用于控制所述试剂条的温度;所述孵育模块可以采用金属浴、水浴或油浴等方式;
光激发及检测模块,其设置在所述孵育模块的一侧,用于向所述试剂条发射激发光使其产生光激化学发光反应;并检测所述试剂产生的化学发光信号。
实施例7:上机检测结果及分析(检测物质:PCT抗原)
(1)利用实施例5中的检测装置将实施例1和实施例2中的供体试剂分别同时与实施例3中的受体试剂上机,检测PCT抗原,检测结果如表2所示。本实例所用的PCT定量测定检测试剂盒(光激化学发光法)由包含第一抗PCT抗体包被的受体颗粒的试剂1(R1’)、包含生物素标记的第二抗PCT抗体的试剂2(R2’)组成,另外包括含有供体颗粒的通用液(R3’)。其中,R1’是利用实施例3中受体颗粒(粒径分布变异系数C.V值=9.6%)制备得到的受体试剂;R3’是利用实施例1和实施例2中供体颗粒制备得到的供体试剂。
表2
从表2的结果可知,本申请所提供的试剂盒的灵敏度和检测上限均较为优异。且包含实施例1中的供体试剂的试剂盒的灵敏度和检测上限均优于包含实施例2中的供体试剂的试剂盒的灵敏度和检测上限。可见,采用表面不包被多糖的供体颗粒的性能更加优异。
实施例8:
按照实施例1~3中给出的方法,制备一系列包含不同糖含量的供体微球和受体微球的试剂盒(如下表所示),然后交叉组装成如实施例5中所示的试剂盒,再在实施例6中所给出的一种相化学发光POCT检测装置上检测各试剂盒针对对同一批样本的信号水平。POCT装置的检测流程如下:在试剂条的样本孔位、附加试剂孔位、第一试剂孔位、第二试剂孔位分别加入25μL待检样本、25μL生物素标记的抗体、175μL供体试剂、25μL受体试剂后,将所述试剂条置于由博阳生物科技(上海)有限公司开发的POCT分析仪中,加样机构取相应体积待测样本,加入到附加试剂孔位,振动,37℃温育10分钟;取附加试剂孔位内温育后的液体加入到第一试剂孔位后振动,37℃温育10分钟,形成混合液体;继续将混合液体加入到第二试剂孔位,振动,37℃温育10分钟,形成待测混合物,然后移动到信号检测孔位。利用光激发及检测模块中的激发器发射的激光照射信号检测孔位中的待测混合液,并检测所产生的化学发光信号,结果如表3所示。
表3
实施例9:CRP不同浓度的临床样本的检测
在实施例6中的检测装置上,在试剂条中加入50μL CRP不同浓度临床样本(包含血清和全血),每孔平行管取均值,50μL生物素化抗CRP抗体,50μL包含偶联CRP受体颗粒的受体试剂(每毫克受体颗粒中的糖含量为59.3ug,Gaussian分布曲线中受体颗粒的平均粒径为253.6nm,粒径分布变异系数C.V值为10.9%),37℃反应7.5min,继续加入50μL供体试剂(每毫克供体颗粒的糖含量为9.5ug/mg微粒,Gaussian分布曲线中供体颗粒的平均粒径为226.7nm,粒径分布变异系数C.V值=8.1%),37℃反应5min,进行光激发检测,实验结果如表4和图6所示。从表4和图6中可以看出,利用血清和全血的相关性系数达到0.9988。从该实验结果表明,本发明的供体颗粒使得样品中非特异吸附大大降低,使得针对血清和全血的测量结果之间具有非常好的相关性,该供体试剂对于临床样品的适应性大大增强,可以直接用于临床全血样品的检测。
表4
/>
应当注意的是,以上所述的实施例仅用于解释本发明,并不构成对本发明的任何限制。通过参照典型实施例对本发明进行了描述,但应当理解为其中所用的词语为描述性和解释性词汇,而不是限定性词汇。可以按规定在本发明权利要求的范围内对本发明作出修改,以及在不背离本发明的范围和精神内对本发明进行修订。尽管其中描述的本发明涉及特定的方法、材料和实施例,但是并不意味着本发明限于其中公开的特定例,相反,本发明可扩展至其他所有具有相同功能的方法和应用。
Claims (51)
1.一种均相化学发光检测试剂盒,其包括供体试剂和受体试剂,所述供体试剂含有供体颗粒,所述供体颗粒被激发后能够产生活性氧,所述受体试剂含有第二缓冲溶液和受体颗粒,所述受体颗粒能够与接收到的活性氧反应产生化学发光信号,其特征在于,
所述供体颗粒包括第一载体,所述第一载体的内部填充有敏化剂,所述第一载体的表面直接或间接连接有特异性结合配对成员中的一员,且每毫克所述供体颗粒中的糖含量不高于25ug;所述供体颗粒在所述供体试剂中的粒径分布变异系数C.V值≥5%;
所述受体颗粒包括第二载体,所述第二载体的内部填充有发光组合物,所述第二载体的表面包被有包覆层,所述包覆层的表面连接报告分子,所述报告分子能够与待测目标分子特异性结合,且每毫克所述受体颗粒中的糖含量不低于40ug。
2.根据权利要求1所述的试剂盒,其特征在于,所述第一载体的表面直接键合有特异性结合配对成员中的一员。
3.根据权利要求2所述的试剂盒,其特征在于,所述第一载体的表面没有包被或连接有多糖物质,其直接键合特异性结合配对成员中的一员。
4.根据权利要求3所述的试剂盒,其特征在于,所述第一载体的表面带有键合官能团,所述键合官能团用于将特异性结合配对成员中的一员直接键合在所述第一载体的表面。
5.根据权利要求4所述的试剂盒,其特征在于,所述键合官能团选自胺基、酰胺基、羟基、醛基、羧基、马来酰亚胺基和巯基。
6.根据权利要求5所述的试剂盒,其特征在于,所述键合官能团选自醛基和/或羧基。
7.根据权利要求1~6中任意一项所述的试剂盒,其特征在于,所述特异性结合配对成员选自抗体、抗体片段、配体、寡核苷酸、寡核苷酸结合蛋白、凝集素、半抗原、抗原、免疫球蛋白结合蛋白、抗生物素蛋白、亲和素或生物素所组成的一对能够相互特异性结合的物质。
8.根据权利要求7所述的试剂盒,其特征在于,所述特异性结合配对成员为亲和素-生物素,所述亲和素选自卵白亲和素、链霉亲和素、卵黄亲和素、中性亲和素和类亲和素。
9.根据权利要求8所述的试剂盒,其特征在于,所述亲和素选自为中性亲和素和/或链霉亲和素。
10.根据权利要求9所述的试剂盒,其特征在于,所述亲和素通过氨基与所述第一载体表面的醛基反应形成席夫碱的方式化学键合在所述第一载体的表面。
11.根据权利要求1所述的试剂盒,其特征在于,所述供体颗粒在所述供体试剂中的粒径分布变异系数C.V值≥8%。
12.根据权利要求11所述的试剂盒,其特征在于,所述供体颗粒在所述供体试剂中的粒径分布变异系数C.V值≥10%。
13.根据权利要求12所述的试剂盒,其特征在于,所述供体颗粒在所述供体试剂中的粒径分布变异系数C.V值≤40%。
14.根据权利要求13所述的试剂盒,其特征在于,所述供体颗粒在所述供体试剂中的粒径分布变异系数C.V值≤20%。
15.根据权利要求14所述的试剂盒,其特征在于,所述供体颗粒在所述供体试剂中的粒径分布呈现多分散性。
16.根据权利要求1所述的试剂盒,其特征在于,所述供体试剂中还包括pH值为7.0~9.0的第一缓冲溶液,所述供体颗粒悬浮于所述缓冲溶液中。
17.根据权利要求1所述的试剂盒,其特征在于,所述受体颗粒在受体试剂中的粒径分布变异系数C.V值≥5%。
18.根据权利要求17所述的试剂盒,其特征在于,所述受体颗粒在受体试剂中的粒径分布变异系数C.V值≥8%。
19.根据权利要求18所述的试剂盒,其特征在于,所述受体颗粒在受体试剂中的粒径分布变异系数C.V值≥10%。
20.根据权利要求19所述的试剂盒,其特征在于,所述受体颗粒在受体试剂中的粒径分布变异系数C.V值≤40%。
21.根据权利要求20所述的试剂盒,其特征在于,所述受体颗粒在受体试剂中的粒径分布变异系数C.V值≤20%。
22.根据权利要求21所述的试剂盒,其特征在于,所述受体颗粒在受体试剂中的粒径分布呈现多分散性。
23.根据权利要求11-22中任意一项所述的试剂盒,其特征在于,所述粒径分布变异系数C.V值是通过Gaussian分布计算得到。
24.根据权利要求1所述的试剂盒,其特征在于,所述包覆层中的包覆物选自多糖、高分子聚合物或生物大分子。
25.根据权利要求24所述的试剂盒,其特征在于,所述包覆层中的包覆物为多糖。
26.根据权利要求1所述的试剂盒,其特征在于,所述第二载体的表面包被有至少两个连续多糖涂层,所述连续多糖涂层的表面连接有特异性结合配对成员中的一员。
27.根据权利要求26所述的试剂盒,其特征在于,所述连续多糖涂层中的每一多糖层自发地与前一多糖层相关联。
28.根据权利要求27所述的试剂盒,其特征在于,所述多糖具有侧基官能团,所述连续多糖涂层中的任一多糖层的所述侧基官能团与前一多糖层的所述侧基官能团所带电荷相反。
29.根据权利要求28所述的试剂盒,其特征在于,所述多糖具有侧基官能团,并且所述连续多糖涂层中的任一多糖层通过所述侧基官能团与前一多糖层的所述侧基官能团之间的化学键合反应实现与所述前一多糖层共价连接。
30.根据权利要求29所述的试剂盒,其特征在于,所述连续多糖涂层的所述侧基官能团在胺官能团和胺反应性官能团之间交替。
31.根据权利要求30所述的试剂盒,其特征在于,所述胺反应性官能团是醛基或羧基。
32.根据权利要求27所述的试剂盒,其特征在于,所述连续多糖涂层的最外一层多糖层具有至少一个侧基官能团。
33.根据权利要求28-32中任意一项所述的试剂盒,其特征在于,所述侧基官能团选自醛基、羧基、巯基、氨基、羟基和马来胺基中的至少一种。
34.根据权利要求33所述的试剂盒,其特征在于,所述侧基官能团选自醛基和/或羧基。
35.根据权利要求30所述的试剂盒,其特征在于,所述连续多糖涂层侧基官能团直接地或间接地化学键合特异性结合配对成员中的一员。
36.根据权利要求25-32中任意一项所述的试剂盒,其特征在于,所述多糖选自含有三个或更多个未修饰或修饰的单糖单元的碳水化合物。
37.根据权利要求36所述的试剂盒,其特征在于,所述多糖选自葡聚糖、淀粉、糖原、菊粉、果聚糖、甘露聚糖、琼脂糖、半乳聚糖、羧基葡聚糖和氨基葡聚糖。
38.根据权利要求37所述的试剂盒,其特征在于,所述多糖选自葡聚糖、淀粉、糖原和聚核糖。
39.根据权利要求1所述的试剂盒,其特征在于,所述糖含量是通过蒽酮法检测的。
40.根据权利要求39所述的试剂盒,其特征在于,所述糖选自含有三个或更多个未修饰或修饰的单糖单元的碳水化合物。
41.根据权利要求40所述的试剂盒,其特征在于,所述糖选自葡聚糖、淀粉、糖原、菊粉、果聚糖、甘露聚糖、琼脂糖、半乳聚糖、羧基葡聚糖和氨基葡聚糖。
42.根据权利要求41所述的试剂盒,其特征在于,所述糖选自葡聚糖、淀粉、糖原和聚核糖。
43.根据权利要求42所述的试剂盒,其特征在于,所述葡聚糖的分子量分布Mw为1000~1000000 KDa。
44.根据权利要求43所述的试剂盒,其特征在于,所述葡聚糖的分子量分布Mw为10000~800000 KDa。
45.根据权利要求44所述的试剂盒,其特征在于,所述葡聚糖的分子量分布Mw为30000~700000KDa。
46.一种均相化学发光POCT检测试剂盒,其包括如权利要求1~45中任意一项所述的试剂盒,所述POCT是指即时检验或在病人旁边进行的临床检测。
47.根据权利要求46所述的试剂盒,其特征在于,所述试剂盒中包括试剂条,在所述试剂条上设有若干盛装试剂的孔位,所述孔位至少包括:
第一试剂孔位,其用于盛装所述的供体试剂;
第二试剂孔位,其用于盛装所述的受体试剂。
48.一种均相化学发光POCT检测方法,其利用如权利要求46或47所述的试剂盒检测待测样本中的待测目标分子。
49.一种均相化学发光POCT检测装置,其利用如权利要求46或47所述试剂盒或权利要求48所述的方法检测待测样本中的待测目标分子。
50.根据权利要求49所述的均相化学发光POCT检测装置,其特征在于,所述装置包括:
孵育模块,用于控制如权利要求47所述试剂条的温度;
光激发与检测模块,其设置在所述孵育模块的一侧,用于向所述试剂条发射激发光使其产生光激化学发光反应;并检测所述试剂产生的化学发光信号。
51.一种利用如权利要求49或50所述的POCT检测装置进行均相化学发光分析的方法,其包括如下步骤:
S1,将待测样本与受体试剂、供体试剂相接触,反应后生成待测混合物;
S2,利用波长为600~700nm的激发光激发所述待测混合物进行化学发光,检测所述化学发光的信号强度;所述化学发光的检测波长为520~620nm;
S3,根据分析所述化学发光的信号强度,判断所述待测样本中是否含有待测目标分子和/或待测目标分子在待测样本中的浓度。
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Citations (5)
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---|---|---|---|---|
US7179660B1 (en) * | 2000-03-06 | 2007-02-20 | Dade Behring Marburg Gmbh | Carriers coated with polysaccharides, their preparation and use |
CN108051585A (zh) * | 2017-11-27 | 2018-05-18 | 北京科美生物技术有限公司 | 一种均相免疫检测试剂盒、检测方法及其应用 |
CN109725153A (zh) * | 2017-10-26 | 2019-05-07 | 北京科美生物技术有限公司 | 一种均相免疫检测方法及其应用 |
CN109988333A (zh) * | 2019-04-04 | 2019-07-09 | 成都爱兴生物科技有限公司 | 一种聚苯乙烯微球 |
CN110161230A (zh) * | 2018-02-11 | 2019-08-23 | 博阳生物科技(上海)有限公司 | 快速检测降钙素原的均相免疫试剂盒、制备方法、检测方法和装置 |
-
2019
- 2019-12-31 CN CN201911414970.5A patent/CN113125701B/zh active Active
Patent Citations (5)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US7179660B1 (en) * | 2000-03-06 | 2007-02-20 | Dade Behring Marburg Gmbh | Carriers coated with polysaccharides, their preparation and use |
CN109725153A (zh) * | 2017-10-26 | 2019-05-07 | 北京科美生物技术有限公司 | 一种均相免疫检测方法及其应用 |
CN108051585A (zh) * | 2017-11-27 | 2018-05-18 | 北京科美生物技术有限公司 | 一种均相免疫检测试剂盒、检测方法及其应用 |
CN110161230A (zh) * | 2018-02-11 | 2019-08-23 | 博阳生物科技(上海)有限公司 | 快速检测降钙素原的均相免疫试剂盒、制备方法、检测方法和装置 |
CN109988333A (zh) * | 2019-04-04 | 2019-07-09 | 成都爱兴生物科技有限公司 | 一种聚苯乙烯微球 |
Non-Patent Citations (1)
Title |
---|
C肽光激化学发光免疫分析试剂盒的研制;马强;贺安;董志宁;刘天才;邹丽萍;林冠峰;李明;吴英松;;放射免疫学杂志(第02期);全文 * |
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