CN113122614A - 一种荧光定量pcr处理方法和系统 - Google Patents

Abstract

本申请公开了一种荧光定量PCR处理方法和系统，该方法包括：对待测样品进行扩增；控制光源发出多种波长互不相同的光，其中，不同波长的光的发射时间不同；根据不同波长的光的发射时间控制拍摄设备进行拍摄，拍摄设备拍摄的对象为不同波长的光激发扩增后的待测样品上出射的荧光；根据拍摄设备拍摄得到的图像进行分析。通过本申请解决了相关技术中多重PCR检测仪器设计复杂导致的成本过高甚至无法实现的问题，实现了在较低成本的基础上进行PCR检测。

Description

一种荧光定量PCR处理方法和系统

技术领域

本申请涉及到生物领域，具体而言，涉及一种荧光定量PCR处理方法和系统。

背景技术

聚合酶链式反应(PCR)作为一种能够在短时间内体外大量扩增特定DNA片段的分子生物学技术，已在生物医学监测、疾控筛查等领域中起到重要应用。通过PCR扩增后的琼脂糖凝胶电泳可实现DNA扩增产物的定性分析。

随着定性定量DNA检测需求的增长，实时荧光定量PCR技术因其能够精准、高灵敏度、特异性强、简便而且能定量对病毒进行检测而得到人们的青睐。它主要通过引入特异性探针和荧光信号的动态监测，从而实现对PCR进程的实时定量检测。

随着新型冠状病毒的出现，有一部分患者初次检测为阴性，但最终确诊为新冠病毒感染患者。实时荧光定量PCR准确率受到极大的挑战。利用多重PCR在一个反应体系中加入多对特异性引物，针对多个模板扩增多个目的片段的PCR技术，具有准确率高、节约时间、降低成本和提高效率的特点。提高荧光定量PCR检测的灵敏度、特异性以及抗干扰性。

但目前已经处于研制状态的检测仪器结构复杂，仪器整体较大，成本高昂，且对光学元件的性能要求特别高，几乎无法实现。

发明内容

本申请实施例提供了一种荧光定量PCR处理方法和系统，以至少解决相关技术中多重PCR检测仪器设计复杂导致的成本过高甚至无法实现的问题。

根据本申请的一个方面，提供了一种荧光定量PCR处理方法，包括：对待测样品进行扩增；控制光源发出多种波长互不相同的光，其中，不同波长的光的发射时间不同；根据不同波长的光的发射时间控制拍摄设备进行拍摄，其中，所述拍摄设备拍摄的对象为所述不同波长的光激发扩增后的所述待测样品出射的荧光；根据所述拍摄设备拍摄得到的图像进行分析。

进一步地，所述不同波长的光激发扩增后的所述待测样品上出射的荧光通过同一通道到达所述拍摄设备。

进一步地，所述不同的波长的光被第一预定角度反射到扩增后的所述待测样品上；和/或，所述荧光被第二预定角度反射到所述拍摄设备上，所述第一预定角度和所述第二预定角度相同或者不同。

进一步地，所述不同的波长的光被反射后入射到所述待测样品的入射角度值是根据所述光源倾斜角、以及所述光源同放置所述待测样品的微流控芯片之间距离得到。

进一步地，所述方法还包括：在所述光源发出所述多种波长互不相同的光之后，在所述多种波长互不相同的光到达所述待测样品之前，对所述多种波长互不相同的光进行第一带通滤波，其中，所述第一带通滤波用于过滤掉除所述多种波长之外的其余波长的光；和/或，在所述荧光到达所述拍摄设备之前，对所述荧光进行第二带通滤波和/或汇聚，其中，所述第二带通滤波用于过滤掉除所述荧光的波长之外的其余波长的光，所述汇聚用于将所述荧光聚焦到所述拍摄设备的感光面。

进一步地，所述方法还包括：同一波长光源下，同时采集在相匹配的信号接收带宽与发生串扰的信号接收带宽分别激发所述待测样品所发射的荧光强度，根据采集得到的荧光强度进行统计，得到荧光强度的规律；在发生串扰的带宽中，将串扰信号作为背景光，根据所述规律设定荧光信号阈值，以排除荧光串扰。

进一步地，所述多种波长互不相同的光为三种或者三种以上。

根据本申请的另一个方面，还提供了一种荧光定量PCR处理系统，包括：光激发模块，用于发出多种波长互不相同的光，其中，不同波长的光的发射时间不同；微流控芯片模块，用于对待测样品进行扩增，其中，所述不同波长的光激发扩增后的所述待测样品出射的荧光被传输到拍摄设备，所述拍摄设备用于根据所述不同波长的光的发射时间对所述荧光进行拍摄。

进一步地，还包括：单一的通道，其中，所述不同波长的光激发扩增后的所述待测样品上出射的荧光通过所述单一的通道到达所述拍摄设备。

进一步地，还包括：第一反射装置，被设置为与所述不同的波长的光成第一预定角度，用于将所述不同的波长的光反射到扩增后的所述待测样品上；第二反射装置，被设置为与所述荧光成第二预定角度，用于将所述荧光反射到所述拍摄设备上；其中，所述第一发射装置和第二反射装置为同一反射装置或不同的反射装置。

进一步地，所述不同的波长的光被反射后入射到所述待测样品的入射角度值是根据所述光源倾斜角、以及所述光源同放置所述待测样品的微流控芯片之间距离得到。

进一步地，还包括：第一带通滤波装置，设置在所述光激发模块和待测样品之间，用于对所述多种波长互不相同的光进行第一带通滤波，其中，所述第一带通滤波用于过滤掉除所述多种波长之外的其余波长的光；和/或，第二带通滤波装置，设置在所述待测样品和所述拍摄设备之间，用于对所述荧光进行第二带通滤波，其中，所述第二带通滤波用于过滤掉除所述荧光的波长之外的其余波长的光；和/或，透镜，设置在所述第二带通滤波装置和所述拍摄设备之间，所述透镜的后焦面位于所述拍摄设备的感光面。

进一步地，所述光激发模块发出的所述多种波长互不相同的光为三种或者三种以上。

进一步地，还包括：处理器，用于控制所述光激发模块发出不同波长的光和/或用于控制所述拍摄设备对所述荧光进行拍摄。

在本申请实施例中，采用了对待测样品进行扩增；控制光源发出多种波长互不相同的光，其中，不同波长的光的发射时间不同；根据不同波长的光的发射时间控制拍摄设备进行拍摄，其中，所述拍摄设备拍摄的对象为所述不同波长的光激发扩增后的所述待测样品上出射的荧光；根据所述拍摄设备拍摄得到的图像进行分析。通过本申请解决了相关技术中多重PCR检测仪器设计复杂导致的成本过高甚至无法实现的问题，巧妙地通过不同波长的激发光的发射时序差和在扩增样品上的荧光成像时序差，实现了以简单的光学系统对PCR进程进行实施多种(三种及三种以上)波长的荧光标定，通过增加靶标数量，提高荧光定量PCR检测的灵敏度和准确性，同时显著降低检测仪器的复杂程度和成本。

附图说明

构成本申请的一部分的附图用来提供对本申请的进一步理解，本申请的示意性实施例及其说明用于解释本申请，并不构成对本申请的不当限定。在附图中：

图1是根据本申请实施例的荧光定量PCR处理方法的流程图；

图2是根据本申请优选实施方式的通道复用实时荧光定量PCR仪光路系统示意图；

图3是根据本申请优选实施方式的通道复用实时荧光定量PCR仪光路系统结构图。

具体实施方式

需要说明的是，在不冲突的情况下，本申请中的实施例及实施例中的特征可以相互组合。下面将参考附图并结合实施例来详细说明本申请。

为了使本技术领域的人员更好地理解本申请方案，下面将结合本申请实施例中的附图，对本申请实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本申请一部分的实施例，而不是全部的实施例。基于本申请中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都应当属于本申请保护的范围。

需要说明的是，在附图的流程图示出的步骤可以在诸如一组计算机可执行指令的计算机系统中执行，并且，虽然在流程图中示出了逻辑顺序，但是在某些情况下，可以以不同于此处的顺序执行所示出或描述的步骤。

现有技术中的检测仪器中，如果使用多重检测，则需要检测不同波长光激发出的荧光，每一个波长的光目前就是使用一套检测装置来完成的，例如，第一套装置用来检测第一波长的光，第二套检测装置用来检测第二套波长的光，需要检测多少个波长的光激发出的荧光，就需要在检测仪器中包括多少套的检测装置，这不仅仅是检测仪器成本高的问题，而是使用的元件多，导致光路复杂，稳定性降低；由于元件增多，使得对关键光学元件的性能要求提升，甚至现有光学元件的性能无法满足设计需求，从而导致很难设计一套如此复杂的光路系统实现多波长荧光检测。因此，现有的检测方法在光的波长的种类较多的情况下(例如三色光或者大于三色光)的情况下是无法实现的。另外，传统方式光路复杂，有运动部件，稳定性降低，移动之后即需要校准。以下实施例中的系统均可以固定集成化，没有运动部件，提高了稳定性，也不用频繁校准，在移动检测，现场即时检测等领域，具有更高的优势。下面对本申请实施例进行说明。

本实施例中的方法可以检测多色光，其利用了标准的PCR的特性。在标准的PCR循环过程包括：DNA变性，退火，延伸三个阶段；这三个阶段分别需要持续数秒。而在整个PCR循环过程中，不需要持续开启光源激发样品进行荧光采集，只需在特定期间(例如延伸阶段)开启光源及采集荧光信号即可。因此，本实施例中的方法利用了这个特性，在PCR循环过程中，可以在需采集荧光信号的特定时间段，采用多种(例如三种)不同波长的光依次发射的方式激发样品并采集相应荧光信号即可。

本实施例中运用了一种复用的思想，即可以在发生不同波长的光的时候在时域上错开，这样就可以使得检测仪器结构变简单，成本降低。该复用的思想可以通过本实施例中提供的一种荧光定量PCR处理方法来体现，图1是根据本申请实施例的荧光定量PCR处理系统的流程图，如图1所示，该流程包括如下步骤：

步骤S102，对待测样品进行扩增；

步骤S104，控制光源发出多种波长互不相同的光，其中，不同波长的光的发射时间不同；根据不同波长的光的发射时间控制拍摄设备进行拍摄，拍摄设备拍摄的对象为不同波长的光激发扩增后的待测样品上出射的荧光；

作为一种可选的实施方式，可以定义一种类似于帧结构的发射时间窗口，例如，在第一秒钟发射第一波长的光，在第二秒钟发射第二波长的光，依次类推，这种发射方式光是源源不断的发射出去的，可能在发射波长转换的时间点上存在干扰，还有就是相机控制也同样需要时间，考虑到这个问题，可以考虑采用间隔的发射方式：在第一波长的光发射完毕之后，间隔预定时间再发射第二波长的光，依次类推。间隔的时间可以根据第一波长和第二波长之间的差异大小来确定，或者也可以采用固定的间隔时间。如果第一波长和第二波长差值大于第一阈值，则可以采用第一时间间隔，如果第一波长和第二波长差值小于第一阈值，则采用第二时间间隔，第一时间间隔小于第二时间间隔。作为另一种可以防止干扰的发射方式，可以将波长差值超过第二阈值的波依次发射，即按照发射光的相邻波长差距尽量大的原则安排发光的时间。

步骤S106，根据拍摄设备拍摄得到的图像进行分析。进行分析的方法在现有技术中存在很多中，在本实施例中就不在一一赘述了。

在上述步骤中，可以使用一种光源发出多种不同波长的光，或者也可以使用多种不同的光源发出不同波长的光，无论是通过一种光源还是多种光源发出不同波长的光，其发出的光的发射时间是不同，这样可以通过同一个通道达到扩增后的待测样品。这里使用了一台拍摄设备，这一台拍摄设备按照不同波长的光的发射时间进行拍摄，这样就是可以得到每一种波长的光激发扩增后的待测样品上出射的荧光了。由于只使用了一个光通道、一台拍摄设备就可以实现出射荧光的捕获，因此，使用上述步骤进行测量必然会节约各种硬件的使用量，从而降低硬件的复杂程度，降低了成本。

在上述步骤中，如果不同波长的光通过不同的通道达到拍摄设备，那这一部分光的通道的设计会复杂一些，当然，通过不同的通道达到会降低不同荧光的干扰。

不过，即使使用的是不同的通道，由于拍摄设备还可以使用同一个拍摄设备，因此，成本还是降低的。

另外，本发明实施例采用拍摄成像方式进行荧光采集，而不是光电探测器，更有利于多个样本在同一张微流控芯片上的荧光信号的同时采集。以一张六通道的微流控芯片为例，单张芯片可以同时检测6个样本，拍摄成像方式可以同时对6个样本的荧光图像进行成像，仅需一张照片，并结合数据处理，即可得到6个样本的荧光信号强度。而传统的光电探测器方法，则需要6组光电探测器，或者通过1组光电探测器移动的方式，才能实现6个样本的荧光信号采集，结构复杂。这一优势在微流控芯片上通道数更多的情况下，表现更明显。此外，该成像方式还适用于数字PCR芯片的成像，能够处理数字PCR芯片上成千上万个微反应腔室的荧光强度，这是光电探测器方法所无法达到的。具体的，拍摄设备可以是相机等。

作为另一种更优的实施方式，不同波长的光激发扩增后的待测样品上出射的荧光通过同一通道到达拍摄设备。为了降低荧光之间的干扰，可以按照激发出的荧光的相邻波长差距尽量大的原则安排光源发射不同波长的光的顺序和时间，这种可选的方式可以在不提高通道复杂程度的基础上降低干扰。

不同波长的光通过同一光路通道传播，除了分时序发射降低荧光之间的干扰，还可以采用另外一种可选的方式来降低荧光之间的干扰，在该可选的方式下，同一波长光源下，采集同时在相匹配的信号接收带宽与发生串扰的信号接收带宽分别激发样品所发射的荧光强度，统计荧光强度的规律。在发生串扰的带宽中，将串扰信号作为背景光，设定荧光信号阈值可排除荧光串扰问题。

例如475nm波长光源同时激发FAM和HEX两种染料，并分别统计其相应的荧光信号；通过统计分析，设定荧光信号阈值排除串扰问题。

激发出的荧光通过同一通道到达拍摄设备的方式有很多中，例如，可以设置一个反射面该反射面同发射的光的传播方向成一定角度被发射到被扩增的待测样品上。即发射出的不同的波长的光被第一预定角度反射到扩增后的待测样品上。激发出的荧光也可以通过一个反射面反射到拍摄设备上，此反射面与荧光也成预定角度，即荧光被第二预定角度反射到拍摄设备上，第一预定角度和第二预定角度相同或者不同。在一个可选的实施方式中，入射到样品的激发光角度的角度值可以根据激发光源倾斜角、以及激发光源同微流控芯片之间的距离计算得到。这两个反射面可以是同一个反射面也可以是不同的反射面。为了节约成本考虑，可以利用同一个反射面来进行反射。

作为一个可选的实施方式，考虑到在所使用的微流控芯片表面具有很高的反射率的情况下，入射到样品上的激发光会产生反射光，该反射光与激发出的荧光易发生串扰，通过设置第一和第二反射面以调节入射激发光的角度，能够有效地防止样品表面反射的激发光与所产生的荧光发生串扰。该角度可以根据激发光源倾斜角、以及激发光源同微流控芯片之间的距离来进行计算得到的。或者也可以通过实验找到合适的角度。

在上述实施方式中，为了抗干扰采用的是根据波长来排列光的发射顺序，这种方式能够降低发射光之间的干扰，考虑到还有可能被环境中的杂光干扰，可以增加带通滤波器，带通滤波器可以在发射光之后进行滤波，也可以在荧光达到拍摄设备前滤波，或者两个光路都进行滤波则效果更优。即，在光源发出多种波长互不相同的光之后，在多种波长互不相同的光到达待测样品之前，对多种波长互不相同的光进行第一带通滤波，其中，第一带通滤波用于过滤掉除多种波长之外的其余波长的光；和/或，在荧光到达拍摄设备之前，对荧光进行第二带通滤波和/或汇聚，其中，第二带通滤波用于过滤掉除荧光的波长之外的其余波长的光，汇聚用于将荧光聚焦到拍摄设备的感光面。在该优选实施方式中，还可以添加透镜对荧光进行汇聚，这种方式会提高拍摄效果，不过也会增加一个透镜的成本，在实施时可以择优选择是否增加该汇聚功能。

本实施例可以发射多种不同波长的波，尤其是在多种波长互不相同的光为三种或者三种以上的情况下，上述实施例的成本优势将更加明显。

基于上述方法中提到的原则，在本实施例中提供了一种荧光定量PCR处理系统，包括：光激发模块，用于发出多种波长互不相同的光，其中，不同波长的光的发射时间不同；微流控芯片模块，用于对待测样品进行扩增，其中，不同波长的光激发扩增后的待测样品上出射的荧光被传输到拍摄设备，拍摄设备用于根据不同波长的光的发射时间对荧光进行拍摄。

该处理系统结构简单，成本较低。上述方法实施例中的可选实施方式对应的实现装置在本实施例中也是可选的，例如，还可以包括以下至少之一：

单一的通道，其中，不同波长的光激发扩增后的待测样品上出射的荧光通过单一的通道到达拍摄设备；该通道可以理解为是光路以及该光路上包含的各种装置。

第一反射装置，被设置为与不同的波长的光成第一预定角度，用于将不同的波长的光反射到扩增后的待测样品上；

第二反射装置，被设置为与荧光成第二预定角度，用于将荧光反射到拍摄设备上；其中，第一发射装置和第二反射装置为同一反射装置或不同的反射装置。

第一带通滤波装置，设置在光激发模块和待测样品之间，用于对多种波长互不相同的光进行第一带通滤波，其中，第一带通滤波用于过滤掉除多种波长之外的其余波长的光；

第二带通滤波装置，设置在待测样品和拍摄设备之间，用于对荧光进行第二带通滤波，其中，第二带通滤波用于过滤掉除荧光的波长之外的其余波长的光；

透镜，设置在第二带通滤波装置和拍摄设备之间，透镜的后焦面位于拍摄设备的感光面；

处理器，用于控制所述光激发模块发出不同波长的光和/或用于控制所述拍摄设备对所述荧光进行拍摄。处理器的实现方式有多种，任何具有控制功能的硬件和/或软件均可以实现该处理器的功能，例如，在以下实施例中，使用通道复用荧光探测模块来实现该处理器的功能。

同样，本实施例在光激发模块发出的多种波长互不相同的光为三种或者三种以上的情况下，成本优势将更加明显。

下面以三色光激发为例结合一个优选实施方式进行说明。在以下优选实施方式中，三色光激发模块即上述光激发模块的具体实现，带通滤波片即上述带通滤波装置的具体实现，反射镜即上述反射装置的具体实现，聚焦透镜即上述透镜的具体实现，相机即拍摄设备的具体实现，在该优选实施方式中，还将图像分析和相机作为一个整体的图像处理模块来看待。下面结合附图来对本优选实施方式进行说明。

图2是根据本申请优选实施方式的通道复用实时荧光定量PCR仪光路系统示意图，图3是基于图2示意图的一个可选的系统架构图，如图2和图3所示，本实施例方式中提供了一种单通道实时荧光定量PCR仪光路系统，包括三色激发光模块100、微流控芯片模块200、通道复用荧光探测模块300和图像处理模块400。下面对图2和图3中涉及到的各个模块进行说明：

三色光激发模块100用于激发待测样品，使其出射荧光，并将激发光与出射荧光分离；可选一种方式，三色激发光模块100可以包括三个激发光集成的光源110、一个多带通滤光片120(可以紧邻激发光源110设置)、反射镜130(可以设置在多带通滤波片120和微流控芯片210之间)，三个激发光源波长不同。

微流控芯片模块200用于待测样品扩增，增强荧光信号；可选地，微流控芯片模块200包括微流控芯片210和升降温模块220，待测样品夹持在所述升降温模块220上

通道复用荧光探测模块300用于实现不同波长荧光在同一通道传输，通过控制三色激发模块100不同波长光源开启时间和图像处理模块400的相机拍摄时间，使得所述待测样品出射的不同波长荧光在同一台相机依次成像；可选地，通道复用荧光探测模块300可以包括多带通滤光片310(可以设置在聚焦透镜320和反射镜130之间)聚焦透镜320，其中，聚焦透镜320的后焦面位于相机感光面410。

图像处理模块400用于实时采集荧光信号，并对其进行分析；可选地，图像处理模块400可以包括相机410及图像处理分析。

在上述系统中，三个激发光集成的光源110相应波长的激发光依次直射通过多带通滤光片120。所述反射镜130将激发光源110出射的激发光束反射后斜(即以一定夹角，作为一个可选的实施方式，夹角主要通过反射镜130调节实现，具体旋转角度值由激发光源110倾斜角、激发光源110和微流控芯片210之间距离决定)入射到待测样品，之后从待测样品激发产生的荧光依次经过反射镜130、多带通滤光片310和聚焦透镜320后，汇聚于相机410的感光面。

本实例的三个激发光集成的光源110为不同波长LED光源，可依据实际待测样品及染料需要进行灵活选择。例如，该LED光源的主波长分别为475nm、530nm和630nm。

此时，本优选实施例的多带通滤光片120的带通范围分别为470-495nm、528-538nm、628-653nm。有效滤除LED光源主波长范围内其他杂散光。

本优选实施例的反射镜130为大尺寸镀银反射镜。将激发光源110出射的激发光束反射后斜入射到待测样品，实现单通道依次激发。

本优选实施例的多带通滤光片310的带通范围分别为498-521nm、543-617nm、657-751nm。样品出射的荧光透射穿过该多带通滤光片，以满足激发光与荧光分离，避免二者传输干扰。同时，有效避免出射荧光中心波长周围的杂散光，提高图像信噪比和准确度。

本优选实施例的聚焦透镜320将透射穿过该多带通滤光片140的出射荧光汇聚，以满足荧光光束宽度不超过其他光学元件，避免丢失荧光信号，提高收集效率。

在本优选实施例中，该光路系统包括三色激发光模块、微流控芯片模块、通道复用荧光探测模块和图像处理模块；三色光激发模块用于激发待测样品使其出射荧光，并将激发光源出射的激发光与待测样品出射的荧光分离；微流控芯片模块用于待测样品扩增；通道复用荧光探测模块用于不同波长荧光在同一通道传输，通过控制三色激发模块不同波长光源开启时间和图像处理模块的相机拍摄时间，使得待测样品出射的不同波长荧光在同一台相机依次成像。

通过上述实施例，采用多束激发光使待测样品出射荧光，调高了检测样品的准确率；此光学系统种使用单台相机实现不同波长荧光实时成像，降低了整体仪器成本；结合微流控芯片的高度集成化、结构简单，整体仪器精巧，便携性好；快速图像处理，实时定量分析。

本申请是参照根据本申请实施例的方法、设备(系统)、和计算机程序产品的流程图和/或方框图来描述的。应理解可由计算机程序指令实现流程图和/或方框图中的每一流程和/或方框、以及流程图和/或方框图中的流程和/或方框的结合。可提供这些计算机程序指令到通用计算机、专用计算机、嵌入式处理机或其他可编程数据处理设备的处理器以产生一个机器，使得通过计算机或其他可编程数据处理设备的处理器执行的指令产生用于实现在流程图一个流程或多个流程和/或方框图一个方框或多个方框中指定的功能的装置。

还需要说明的是，术语“包括”、“包含”或者其任何其他变体意在涵盖非排他性的包含，从而使得包括一系列要素的过程、方法、商品或者设备不仅包括那些要素，而且还包括没有明确列出的其他要素，或者是还包括为这种过程、方法、商品或者设备所固有的要素。在没有更多限制的情况下，由语句“包括一个……”限定的要素，并不排除在包括要素的过程、方法、商品或者设备中还存在另外的相同要素。

以上仅为本申请的实施例而已，并不用于限制本申请。对于本领域技术人员来说，本申请可以有各种更改和变化。凡在本申请的精神和原理之内所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本申请的权利要求范围之内。

Claims (14)

1.一种荧光定量PCR处理方法，其特征在于，包括：

对待测样品进行扩增；

控制光源发出多种波长互不相同的光，其中，不同波长的光的发射时间不同；

根据不同波长的光的发射时间控制拍摄设备进行拍摄，其中，所述拍摄设备拍摄的对象为所述不同波长的光激发扩增后的所述待测样品上出射的荧光；

根据所述拍摄设备拍摄得到的图像进行分析。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述不同波长的光激发扩增后的所述待测样品上出射的荧光通过同一通道到达所述拍摄设备。

3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述不同的波长的光被第一预定角度反射到扩增后的所述待测样品上；所述荧光被第二预定角度反射到所述拍摄设备上，所述第一预定角度和所述第二预定角度相同或者不同。

4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，所述不同的波长的光被反射后入射到所述待测样品的入射角度值是根据所述光源倾斜角、以及所述光源同放置所述待测样品的微流控芯片之间距离得到。

5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述方法还包括：

在所述光源发出所述多种波长互不相同的光之后，在所述多种波长互不相同的光到达所述待测样品之前，对所述多种波长互不相同的光进行第一带通滤波，其中，所述第一带通滤波用于过滤掉除所述多种波长之外的其余波长的光；和/或，

在所述荧光到达所述拍摄设备之前，对所述荧光进行第二带通滤波和/或汇聚，其中，所述第二带通滤波用于过滤掉除所述荧光的波长之外的其余波长的光，所述汇聚用于将所述荧光聚焦到所述拍摄设备的感光面。

6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述方法还包括：

同一波长光源下，同时采集在相匹配的信号接收带宽与发生串扰的信号接收带宽分别激发所述待测样品所发射的荧光强度，根据采集得到的荧光强度进行统计，得到荧光强度的规律；在发生串扰的带宽中，将串扰信号作为背景光，根据所述规律设定荧光信号阈值，以排除荧光串扰。

7.根据权利要求1至6中任一项所述的方法，其特征在于，所述多种波长互不相同的光为三种或者三种以上。

8.一种荧光定量PCR处理系统，其特征在于，包括：

光激发模块，用于发出多种波长互不相同的光，其中，不同波长的光的发射时间不同；

微流控芯片模块，用于对待测样品进行扩增，其中，所述不同波长的光激发扩增后的所述待测样品上出射的荧光被传输到拍摄设备，所述拍摄设备用于根据所述不同波长的光的发射时间对所述荧光进行拍摄。

9.根据权利要求8所述的系统，其特征在于，还包括：

单一的通道，其中，所述不同波长的光激发扩增后的所述待测样品上出射的荧光通过所述单一的通道到达所述拍摄设备。

10.根据权利要求9所述的系统，其特征在于，还包括：

第一反射装置，被设置为与所述不同的波长的光成第一预定角度，用于将所述不同的波长的光反射到扩增后的所述待测样品上；

第二反射装置，被设置为与所述荧光成第二预定角度，用于将所述荧光反射到所述拍摄设备上；其中，所述第一发射装置和第二反射装置为同一反射装置或不同的反射装置。

11.根据权利要求10所述的系统，其特征在于，所述不同的波长的光被反射后入射到所述待测样品的入射角度值是根据所述光源倾斜角、以及所述光源同放置所述待测样品的微流控芯片之间距离得到。

12.根据权利要求8所述的系统，其特征在于，还包括：

第一带通滤波装置，设置在所述光激发模块和待测样品之间，用于对所述多种波长互不相同的光进行第一带通滤波，其中，所述第一带通滤波用于过滤掉除所述多种波长之外的其余波长的光；和/或，

第二带通滤波装置，设置在所述待测样品和所述拍摄设备之间，用于对所述荧光进行第二带通滤波，其中，所述第二带通滤波用于过滤掉除所述荧光的波长之外的其余波长的光；和/或，

透镜，设置在所述第二带通滤波装置和所述拍摄设备之间，所述透镜的后焦面位于所述拍摄设备的感光面。

13.根据权利要求8至12中任一项所述的系统，其特征在于，所述光激发模块发出的所述多种波长互不相同的光为三种或者三种以上。

14.根据权利要求8至12中任一项所述的系统，其特征在于，还包括：

处理器，用于控制所述光激发模块发出不同波长的光和/或用于控制所述拍摄设备对所述荧光进行拍摄。

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