CN113116765B - 精华原液及其制备方法和胶原酶抑制剂 - Google Patents

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Abstract

本发明提供一种精华原液及其制备方法和胶原酶抑制剂。所述精华原液包括胶原酶抑制剂和促渗透剂；以所述精华原液的总质量计，所述胶原酶抑制剂的加入量为0.01‑10％；所述促渗透剂的加入量为0.01‑10％；所述胶原酶抑制剂包括茯苓提取物和金盏花提取物，以所述胶原酶抑制剂的总质量计，所述茯苓提取物的加入量为10‑49％，所述金盏花提取物的加入量为51‑90％。本发明的精华原液的配方温和，能够有效改善皮肤弹性，从而起到抗衰的作用。

Description

精华原液及其制备方法和胶原酶抑制剂
技术领域
本发明涉及一种精华原液及其制备方法和胶原酶抑制剂，属于化妆品领域。
背景技术
胶原蛋白主要由真皮层的成纤维细胞产生，是真皮层的主要成分，能够维持皮肤的结构，赋予皮肤韧性和弹性。胶原蛋白的含量及分布决定了皮肤的年轻与否。然而，胶原蛋白含量的异常减少会造成真皮层变薄，皮肤松弛，失去弹性，出现皱纹，影响人们的生活质量。随着对胶原蛋白研究的不断深入，研究者发现胶原酶在皮肤胶原蛋白的动态平衡中扮演重要角色，它的过量表达和异常激活是导致皮肤衰老的主要原因之一。因此，抑制胶原酶的活性可以阻断皮肤胶原蛋白的降解，增加胶原蛋白的含量，实现抗衰的效果。
针对影响皮肤胶原蛋白含量的因素，皮肤抗衰和皮肤护理的主要途径包括以下几个方面：(1)通过刺激真皮层成纤维细胞的增殖，增加胶原蛋白的合成；(2)通过活性因子刺激成纤维细胞合成胶原蛋白的速度，增加真皮层胶原蛋白的总量；(3)通过抑制真皮层中胶原蛋白降解的关键酶-胶原酶的催化活性，减缓胶原蛋白的降解速度，达到抗衰的目的；(4)通过防晒，防止阳光中紫外线对皮肤中胶原蛋白的破坏，减缓皮肤光老化；(5)通过使用抗氧剂清除皮肤中的过量氧自由基，减缓其对胶原酶的诱导表达和生物大分子的异常交联。
现有技术中，为了防止皮肤松弛，失去弹性，出现皱纹等，保持皮肤年轻，人们提出了混合有水解胶原蛋白、玻尿酸、多肽、视黄醇及其衍生物等各种成分的抗衰产品。可是，如果大量使用这些成分，在抗衰真实效果、使用肤感和安全性上产生诸多问题。如水解胶原蛋白分子量过大，不易透过人体的肌肤屏障到达真皮层；玻尿酸无法从本质上减缓胶原蛋白的流失；多肽和视黄醇对皮肤有一定的刺激性和安全风险等等。
随着人们对皮肤健康关注度的增高，开发具有安全稳定、效果明显且性价比高的天然抗衰剂，已成为当前医药和化妆品行业的主要研究方向之一，具有非常好的发展前景。
发明内容
发明要解决的问题
鉴于现有技术中，水解胶原蛋白分子量过大，不易透过人体的肌肤屏障到达真皮层；玻尿酸无法从本质上减缓胶原蛋白的流失；多肽和视黄醇对皮肤有一定的刺激性和安全风险等问题，本发明首先提供了一种包含胶原酶抑制剂的精华原液，其具有优异的抗衰效果。
进一步地，本发明还提供一种胶原酶抑制剂，能够抑制胶原酶的活性。
进一步地，本发明还提供一种精华原液的制备方法，该制备方法操作简单，原料易于获取。
用于解决问题的方案
本发明提供一种精华原液，其包括胶原酶抑制剂和促渗透剂；以所述精华原液的总质量计，所述胶原酶抑制剂的加入量为0.01-10％；所述促渗透剂的加入量为0.01-10％；
所述胶原酶抑制剂包括茯苓提取物和金盏花提取物，以所述胶原酶抑制剂的总质量计，所述茯苓提取物的加入量为10-49％，所述金盏花提取物的加入量为51-90％。
根据本发明的精华原液，其中，所述茯苓提取物与所述金盏花提取物的质量比为1:1.1～9，优选1:1.5～9.5，更优选1:2～9，进一步优选为1:2.5～8.5，更进一步优选1:3～8，再进一步优选1:3.5～7.5。
根据本发明的精华原液，其中，所述促渗透剂包括丙二醇、双-二乙氧基二甘醇环己烷1,4-二羧酸酯以及壳聚糖中的一种或两种以上的组合。
根据本发明的精华原液，其中，所述精华原液还包括保湿剂、增稠剂、防腐剂、皮肤调理剂、增溶剂、皮肤美白剂、舒敏剂、芳香剂、抗氧化剂、pH调节剂、和螯合剂中的一种或两种以上的组合；其中，
所述保湿剂的加入量为0.01-20％；所述增稠剂的加入量为0.02-0.8％；所述防腐剂的加入量为0.01-1.5％；所述皮肤调理剂的加入量为0.01-5％；所述增溶剂的加入量为0.01-0.5％；所述皮肤美白剂的加入量为0.01-5％；所述舒敏剂的加入量为0.01-5％；所述芳香剂的加入量为0.005-0.5％；所述抗氧化剂的加入量为0-2％；所述pH调节剂的加入量为0.01-1％；所述螯合剂的加入量为0.01-1％。
根据本发明的精华原液，其中，所述皮肤调理剂包括扭刺仙人掌茎提取物、神经酰胺2、尿囊素、石莼提取物、小球藻发酵产物、巨藻提取物、酵母提取物、棕榈酰三肽-5、乳酸杆菌/大豆发酵产物提取物、乙酰基六肽-8、水解胶原蛋白、燕麦肽、角蛋白氨基酸类、麦冬根提取物中的一种或两种以上的组合。
根据本发明的精华原液，其中，所述皮肤美白剂包括烟酰胺、天女木兰提取物、曲酸及其衍生物、熊果苷及其衍生物、维生素C中的一种或两种以上的组合；和/或，
所述舒敏剂包括北美金缕梅花水、红没药醇、姜根提取物、库拉索芦荟提取物、积雪草提取物、月见草油、穿心莲叶提取物中的一种或两种以上的组合。
本发明还提供一种根据本发明的精华原液的制备方法，其包括将所述精华原液的各组分混合的步骤。
本发明还提供一种胶原酶抑制剂，其包括：茯苓提取物和金盏花提取物，以所述胶原酶抑制剂的总质量计，所述茯苓提取物的加入量为10-49％，所述金盏花提取物的加入量为51-90％。
根据本发明的胶原酶抑制剂，其中，所述茯苓提取物与所述金盏花提取物的质量比为1:1.1～9，优选1:1.5～9.5，更优选1:2～9，进一步优选为1:2.5～8.5，更进一步优选1:3～8，再进一步优选1:3.5～7.5。
根据本发明的胶原酶抑制剂，其中，所述胶原酶为间质胶原酶。
发明的效果
本发明的精华原液的配方温和，能够有效改善皮肤弹性，从而起到抗衰的作用。
本发明的胶原酶抑制剂对胶原酶活性的抑制作用优异，且对人体无副作用。
本发明的精华原液的制备方法的操作简单，原料易于获取，且能够批量生产。
附图说明
图1示出了本发明对比例1-5的茯苓提取物的对数质量浓度-胶原酶活性抑制率的关系图；
图2示出了本发明对比例6-10的金盏花提取物的对数质量浓度-胶原酶活性抑制率的关系图；
图3示出了本发明实施例1-5的胶原酶抑制剂的对数质量浓度-胶原酶活性抑制率的关系图；
图4示出了本发明实施例1-5的胶原酶抑制剂中茯苓提取物的含量与相互作用系数的关系图。
图5示出了本发明应用实施例1-5以及应用对比例1-8的皮肤弹性变化率的对比图。
具体实施方式
以下将详细说明本发明的各种示例性实施例、特征和方面。在这里专用的词“示例性”意为“用作例子、实施例或说明性”。这里作为“示例性”所说明的任何实施例不必解释为优于或好于其它实施例。
另外，为了更好地说明本发明，在下文的具体实施方式中给出了众多的具体细节。本领域技术人员应当理解，没有某些具体细节，本发明同样可以实施。在另外一些实例中，对于本领域技术人员熟知的方法、手段、器材和步骤未作详细描述，以便于凸显本发明的主旨。
需要说明的是：
本说明书中，使用“可以”或“可”表示的含义包括了进行某种处理以及不进行某种处理两方面的含义。
本说明书中，使用“数值A～数值B”表示的数值范围是指包含端点数值A、B的范围。
如无特殊声明，本发明所使用的单位均为国际标准单位，并且本发明中出现的数值，数值范围，均应当理解为包含了工业生产中所允许的误差。
本说明书中，所提及的“一些具体/优选的实施方案”、“另一些具体/优选的实施方案”、“实施方案”等是指所描述的与该实施方案有关的特定要素(例如，特征、性质和/或特性)包括在此处所述的至少一种实施方案中，并且可存在于其它实施方案中或者可不存在于其它实施方案中。另外，应理解，所述要素可以任何合适的方式组合在各种实施方案中。
<第一方面>
本发明的第一方面提供了一种胶原酶抑制剂，所述胶原酶抑制剂包括：茯苓提取物和金盏花提取物，以所述胶原酶抑制剂的总质量计，所述茯苓提取物的加入量为10-49％，所述金盏花提取物的加入量为51-90％。
本发明的发明人发现，使用金盏花提取物和茯苓提取物的组合，可以产生优异的协同作用，从而可以抑制胶原酶的活性，以实现抗衰的作用。
具体地，在本发明中，所述茯苓提取物与所述金盏花提取物的质量比为1:1.1～9，优选1:1.5～9.5，更优选1:2～9，进一步优选为1:2.5～8.5，更进一步优选1:3～8，再进一步优选1:3.5～7.5。当茯苓提取物与所述金盏花提取物的质量比在上述范围内时，能够进一步具有协同作用，抑制胶原酶活性的效果优异。
对于本发明的胶原酶抑制剂的制备方法，不作特别限定，可以是本领域常用的方式，例如采用混合的方式，使茯苓提取物与金盏花提取物混合均匀。
胶原酶
胶原酶属于基质金属蛋白酶(Matrix Metalloproteinase,MMPs)中的一类。基质金属蛋白酶是一类生物活性依赖于锌离子、有降解细胞外基质(Extra-Cellar Matrix,ECM)能力的内肽酶家族。胶原酶的主要作用是降解真皮中的胶原蛋白及弹性蛋白，它的组织型抑制剂(Tissue Inhibitors of Metalloproteinase,TIMPs)通过与其高度保守的锌结合位点共价结合而特异性抑制胶原酶的活性，共同调节基质代谢，维持真皮层的结构。
胶原酶包括间质胶原酶(MMP-1)、多形核胶原酶(MMP-8)以及胶原酶3(MMP-13)。其中，间质胶原酶的又称胶原酶-1，间质胶原酶具有多种功能，能作用于不同的底物。间质胶原酶能降解一些基质分子，如聚集蛋白聚糖、多能聚糖、基膜蛋白聚糖、酪蛋白、巢蛋白、丝氨酸蛋白抑制剂和黏蛋白-C。因此，间质胶原酶在细胞外基质的生理修复中起关键作用。本发明主要是基于间质胶原酶在皮肤衰老过程中的重要作用，将抑制间质胶原酶活性，从而减少皮肤炎症反应及的皱纹，作为延缓衰老的途径，以实验抗衰的作用。
需要说明的是，本发明的胶原酶抑制剂的目的是抑制胶原酶的活性，例如：抑制间质胶原酶的活性，而非胶原酶的表达。
茯苓提取物
茯苓为多孔菌科真菌茯苓(Poria cocos(Schw.)Wolf)的干燥菌核，又名茯菟、茯灵、云苓、松苓等，主要产于云南、安徽、湖北、河南、四川等地，是我国传统的中药材和营养保健益寿食品。茯苓性味甘、淡、平；归心、脾、胃、肾经，功效利水渗湿，健脾、宁心安神。
茯苓多糖和三萜类化合物是茯苓的主要化学成分，此外，茯苓中还含有甾体类成分、脂肪酸、蛋白质、腺嘌呤、氨基酸以及钙、镁、铁、钾等无机元素。茯苓具有抑制肿瘤、抗炎、调节免疫功能、保肝等多方面的药理作用。由茯苓提炼得到的茯苓提取物具有良好的美容护肤作用，能够淡化斑点、恢复皮肤弹性、改善皮肤干燥。
在本发明中，以所述胶原酶抑制剂的总质量计，茯苓提取物的加入量为10-49％。当茯苓提取物的加入量为10-49％时，可以有效抑制胶原酶的活性。
金盏花提取物
金盏花(Calendula officinalis L.)属菊科(Compositae)金盏花属(Calendula)一年生草本植物。原产于欧洲南部及地中海沿岸，现在我国四川、贵州、广东、广西等省均有栽培，可用于食品、医药和化妆品业。
金盏花主要含有挥发油、总皂苷类、多酚、色素类、黄酮等多种有效成分，有健胃、收敛、止血和愈伤的功效，对皮肤有滋润、抗炎和促进细胞再生等作用。其中，金盏花总黄酮提取液在UVA和UVB有强吸收，对紫外线有一定的防护能力；金盏花黄色素有明显地抗油脂氧化效果。
在本发明中，以所述胶原酶抑制剂的总质量计，金盏花提取物的加入量为51-90％。当金盏花提取物的加入量为51-90％时，可以有效抑制胶原酶的活性。
<第二方面>
本发明的第二方面提供了一种精华原液，其包括根据本发明第一方面所述的胶原酶抑制剂以及促渗透剂；本发明通过添加合适含量的胶原酶抑制剂，能够抑制胶原酶的活性，特别是间质胶原酶的活性，使得本发明的精华原液具有优异的抗衰效果，能够改善皮肤弹性。为了促进皮肤对胶原酶抑制剂的吸收，本发明的精华原液还使用促渗透剂。通过使用促渗透剂，可以使本发明的胶原酶抑制剂得到更大程度的发挥。
其中，以所述精华原液的总质量计，所述胶原酶抑制剂的加入量为0.01-10％，例如：0.5％、1％、2％、3％、5％、6％、7％、8％等。当胶原酶抑制剂的加入量在0.01-10％之间时，使用胶原酶抑制剂后的皮肤弹性增加。当胶原酶抑制剂的加入量小于0.01％时，不能起到抗衰的作用；当胶原酶抑制剂的加入量大于10％时，胶原酶抑制剂的含量过高，成本过高，且相应的抗衰效果的提升不明显。
以所述精华原液的总质量计，所述促渗透剂的加入量为0.01-10％。当促渗透剂的加入量小于0.01％时，促渗透效果不明显。当促渗透剂的加入量大于10％时，不能进一步起到促渗透的作用。
在本发明中，所述促渗透剂包括丙二醇、双-二乙氧基二甘醇环己烷1,4-二羧酸酯以及壳聚糖中的一种或两种以上的组合。本发明优选使用丙二醇和双-二乙氧基二甘醇环己烷1,4-二羧酸酯的组合，丙二醇和双-二乙氧基二甘醇环己烷1,4-二羧酸酯之间具有协同作用，能够使得胶原酶抑制剂的吸收效果更加优异。
当使用丙二醇和双-二乙氧基二甘醇环己烷1,4-二羧酸酯的组合作为促渗透剂时，以所述精华原液的总质量计，丙二醇的加入量为0.01-5％，双-二乙氧基二甘醇环己烷1,4-二羧酸酯的加入量为0.01-5％。当丙二醇的加入量为0.01-5％，双-二乙氧基二甘醇环己烷1,4-二羧酸酯的加入量为0.01-5％时，可以有效改善胶原酶抑制剂的吸收效果。举例而言：丙二醇的加入量为0.1％、0.5％、1％、1.5％、2.5％、3.5％、4.5％等，双-二乙氧基二甘醇环己烷1,4-二羧酸酯的加入量为0.1％、0.5％、1％、1.5％、2.5％、3.5％、4.5％。
在本发明中，所述精华原液还包括保湿剂、增稠剂、防腐剂、皮肤调理剂、增溶剂、皮肤美白剂、舒敏剂、芳香剂、抗氧化剂、pH调节剂、和螯合剂中的一种或两种以上的组合；本发明的精华原液的配方组成温和，可以使本发明的胶原酶抑制剂的功效得到充分发挥。具体而言：
以所述精华原液的总质量计，所述保湿剂的加入量为0.01-20％，能够起到保湿作用。为了使保湿剂的功效能够进一步发挥，作为优选，本发明的保湿剂的加入量可以是1-19％，可以是3-18.5％，可以是5-18％，可以是7-17.5％，可以是8-17％等。当保湿剂的含量低于0.01％时，保湿作用不明显；当保湿剂的含量高于20％时，会使精华原液有黏腻感。
在本发明中，所述保湿剂包括丁二醇、甘油聚醚-26、甘油、双-PEG-18甲基醚二甲基硅烷、甘油聚丙烯酸酯、甘油聚甲基丙烯酸酯、乳酸钠和葡糖酸钠和水的复合物、尿素、透明质酸钠、PCA钠、海藻糖、聚季铵盐-51中的一种或两种以上的组合。
本发明中可以添加双-PEG-18甲基醚二甲基硅烷作为保湿剂使用。双-PEG-18甲基醚二甲基硅烷是一种水溶性硅蜡，具有良好的保湿及滋润性。
以所述精华原液的总质量计，所述增稠剂的加入量为0.02-0.8％。当增稠剂的加入量小于0.02％时，精华原液的质地较稀；当增稠剂的加入量大于0.8％时，精华原液过于厚重，其有效成分不易被皮肤吸收。
在本发明中，所述增稠剂包括黄原胶、卡波姆、山嵛醇、聚丙烯酰胺、丙烯酰二甲基牛磺酸铵/VP共聚物、丙烯酸羟乙酯/丙烯酰二甲基牛磺酸钠共聚物中的一种或两种以上的组合。
以所述精华原液的总质量计，所述增溶剂的加入量为0.01-0.5％。通过添加增溶剂，可以使本发明的精华原液的原料更易溶解。所述增溶剂的加入量可以为0.02-0.2％，0.04-0.2％等。在本发明中，所述增溶剂包括PEG-40氢化蓖麻油、聚山梨醇酯-20、甘油醇醚-25PCA异硬脂酸脂中的一种或两种以上的组合。
为了进一步提高本申请的精华原液的功效，本发明的精华原液还包含有所述皮肤调理剂。通过添加皮肤调理剂，进一步为皮肤补充水分，并且可以减少皱纹的产生。皮肤调理剂中有效成分，可以渗透到肌肤深处，被皮肤吸收，从而改善皮肤的状态。
以所述精华原液的总质量计，所述皮肤调理剂的加入量为0.01-5％。作为优选，所述皮肤调理剂的加入量可以是0.1-4％，可以是0.5-3％，可以是0.6-2％等。当皮肤调理剂的加入量小于0.01％时，无法起到相应的功效；当皮肤调理剂的加入量大于5％时，成本太高。
在本发明中，所述皮肤调理剂包括扭刺仙人掌茎提取物、神经酰胺2、尿囊素、石莼提取物、小球藻发酵产物、巨藻提取物、酵母提取物、棕榈酰三肽-5、乳酸杆菌/大豆发酵产物提取物、乙酰基六肽-8、水解胶原蛋白、燕麦肽、角蛋白氨基酸类、麦冬根提取物中的一种或两种以上的组合。
为了进一步提高本申请的精华原液的功效，本发明的精华原液还包含有所述舒敏剂。舒敏剂可以镇定皮肤，从而对脸部肌肤受伤红肿有一定舒缓作用。
以所述精华原液的总质量计，所述舒敏剂的加入量为0.01-5％。具体而言，所述舒敏剂的加入量可以是0.1-4％，可以是0.2-3％，可以是0.3-2％等。当舒敏剂的加入量小于0.01％时，无法起到相应的功效；当舒敏剂的加入量大于5％时，成本太高。
所述舒敏剂包括北美金缕梅花水、红没药醇、姜根提取物、库拉索芦荟提取物、积雪草提取物、月见草油、穿心莲叶提取物中的一种或两种以上的组合。
本发明的精华原液中还可以添加一些皮肤美白剂。通过添加皮肤美白剂，可以起到提亮肤色的作用，达到一定的美白效果。以所述细肤水的总质量计，所述皮肤美白剂的加入量为0.01-5％；例如可以是0.5％、1％、2％、3％、4％等。当皮肤美白剂的加入量小于0.01％时，含量过低，无法起到相应的功效；当皮肤美白剂的加入量大于5％时，成本过高。
具体地，所述皮肤美白剂包括烟酰胺、天女木兰提取物、曲酸及其衍生物、熊果苷及其衍生物、维生素C中的一种或两种以上的组合。
以所述精华原液的总质量计，所述pH调节剂的加入量为0.01-1％。通过添加pH调节剂，使精华原液的pH值更适宜人体皮肤。作为优选，本发明的pH调节剂的加入量可以是0.02-0.8％，可以是0.03-0.5％，可以是0.04-0.3％等。当pH调节剂的加入量大于1％或者小于0.01％时，均不能获得pH值合适的精华原液。在本发明中，所述pH调节剂包括氨甲基丙醇、精氨酸、柠檬酸、柠檬酸钠、氢氧化钠中的一种或两种以上的组合。
以所述精华原液的总质量计，所述螯合剂的加入量为0.01-1％。在本发明中，所述螯合剂包括EDTA二钠和/或EDTA四钠。
另外，以所述精华原液的总质量计，所述抗氧化剂的加入量为0-2％，所述防腐剂的加入量为0.01-1.5％；所述芳香剂的加入量为0.005-0.5％。所述抗氧化剂包括维生素E、生育酚乙酸酯、丁羟甲苯、番茄红素、抗坏血酸乙基醚中的一种或两种以上的组合。所述防腐剂包括苯氧乙醇、羟苯甲酯、羟苯丙酯、苯甲酸及其盐中的一种或两种以上的组合。所述芳香剂可以是香精等。
本发明的精华原液不仅能够起到抗衰的作用，而且其具有一定的导入功效，容易被肌肤吸收，增强肌肤对护肤品吸收的效果，提升促进肌肤对后续保养的吸收。其配方中的多种成分均可以带给肌肤丰富的营养，使肌肤细嫩柔滑。
<第三方面>
本发明的第三方面提供了一种第二方面的精华原液的制备方法，包括将所述化妆品的各组分混合的步骤。
具体而言，所述的精华原液的制备方法包括以下步骤：
1、将水、部分保湿剂、部分的促渗透剂、螯合剂、增稠剂、部分皮肤调理剂、部分防腐剂加入乳化锅，搅拌并加热到75-85℃，均质1-5min，保温搅拌10-30min后冷却；
2、冷却至40-50℃，加入剩余的保湿剂、皮肤美白剂、剩余的皮肤调理剂、胶原酶抑制剂、舒敏剂、剩余的防腐剂、pH调节剂，预溶好的保湿剂中的双-PEG-18甲基醚二甲基硅烷、剩余的促渗透剂、增溶剂、任选存在的抗氧化剂和芳香剂搅拌均匀；
3、冷却至30-40℃，出料，静置12-48小时；
4、检验合格后，分装、包装，再检验，成品入库。
实施例
下面将结合实施例对本发明的实施方案进行详细描述，但是本领域技术人员将会理解，下列实施例仅用于说明本发明，而不应视为限定本发明的范围。实施例中未注明具体条件者，按照常规条件或制造商建议的条件进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市购获得的常规产品。
茯苓提取物购自：南京斯拜科生化实业有限公司；
金盏花提取物购自：衢州市展宏生物科技有限公司。
对比例1-5
提供茯苓提取物作为胶原酶抑制剂。将茯苓提取物溶于5组不同体积的去离子水中，得到5组测试溶液，5组测试溶液的浓度分别为1200μg/mL、960μg/mL、720μg/mL、480μg/mL、240μg/mL。则茯苓提取物的对数质量浓度如下表2和图1所示。
对比例6-10
提供金盏花提取物作为胶原酶抑制剂。将金盏花提取物溶于与对比例1-5对应体积的5组去离子水中，得到5组测试溶液，5组测试溶液的浓度分别为4000μg/mL、3200μg/mL、2400μg/mL、1600μg/mL、800μg/mL。则金盏花提取物的对数质量浓度如下表2和图2所示。
实施例1-5
提供茯苓提取物和金盏花提取物作为胶原酶抑制剂。将茯苓提取物和金盏花提取物按质量比1:10(实施例1)、1:5(实施例2)、1:3(实施例3)、1:1(实施例4)、2:1(实施例5)混合后，得到胶原酶抑制剂。
将实施例1的胶原酶抑制剂分别溶于5组去离子水中，得到5组测试溶液，5组测试溶液的浓度分别为2000μg/mL、1600μg/mL、1200μg/mL、800μg/mL、400μg/mL。
将实施例2的胶原酶抑制剂分别溶于5组去离子水中，得到5组测试溶液，5组测试溶液的浓度分别为2000μg/mL、1600μg/mL、1200μg/mL、800μg/mL、400μg/mL。
将实施例3的胶原酶抑制剂分别溶于5组去离子水中，得到5组测试溶液，5组测试溶液的浓度分别为2000μg/mL、1600μg/mL、1200μg/mL、800μg/mL、400μg/mL。
将实施例4的胶原酶抑制剂分别溶于5组去离子水中，得到5组测试溶液，5组测试溶液的浓度分别为1000μg/mL、800μg/mL、600μg/mL、400μg/mL、200μg/mL。
将实施例5的胶原酶抑制剂分别溶于5组去离子水中，得到5组测试溶液，5组测试溶液的浓度分别为1000μg/mL、800μg/mL、600μg/mL、400μg/mL、200μg/mL。
其中，胶原酶抑制剂中，茯苓提取物和金盏花提取物的含量(质量％)如下表1所示，胶原酶抑制剂的对数质量浓度如下表3所示。
表1
抑制胶原酶活性测试
福林酚试剂在碱性条件下可被酚类化合物还原呈蓝色(钼蓝和钨蓝混合物)，由于蛋白质分子中有含酚基的氨基酸(如酪氨酸、色氨酸等)，可使蛋白质及其水解产物呈上述反应，因此可利用此原理测定蛋白酶活力。通常以酪蛋白为底物，在一定pH值和温度条件下，酪蛋白被胶原酶水解，经一段时间后用三氯乙酸终止酶解反应，经离心或过滤除去酪蛋白沉淀物后取上清液，用Na2CO3碱化，再加入福林酚试剂显色，蓝色的深浅与滤液中生成产物酪氨酸量成正比，用分光光度计在650nm波长处测定，从而计算出胶原酶的活力。
测试中，所使用有胶原酶为基质胶原酶(MMP-1)，购自：上海泽叶生物科技有限公司。
胶原酶活性以催化酪蛋白生成酪氨酸的胶原酶活力来衡量。具体为：
①取1支试管，分别加入去离子水0.25mL和胶原酶0.25mL(32U/mL)，随后加入底物酪蛋白溶液0.5mL(1.0％,w/v)并立即混匀，37℃水浴保温10min，然后加入三氯乙酸溶液1mL(6.5％,w/v])混匀，静置10min后10000rpm离心5min，取该试管中的上清液样品0.5mL于另一支试管中，分别加入碳酸氢钠试液0.5ml(质量浓度：10％)，摇匀。10分钟后各加入福林酚试液0.5ml(1mol/L酸浓度的福林酚试液稀释2倍)，立即混匀，室温放置30分钟；得到实验组上清液1，在650nm的波长处检测吸光度，记作A1。
②另取1支试管，分别加入去离子水0.25mL和胶原酶0.25mL(32U/mL)，随后加入三氯乙酸溶液1mL(6.5％,w/v)并立即混匀，37℃水浴保温10min，然后加入底物酪蛋白溶液0.5mL(1.0％,w/v)混匀，静置10min后10000rpm离心5min，取该试管中的上清液样品0.5mL于另一支试管中，分别加入碳酸氢钠试液0.5ml(质量浓度：10％)，摇匀。10分钟后各加入福林酚试液0.5ml(1mol/L酸浓度的福林酚试液稀释2倍)，立即混匀，室温放置30分钟；得到对照组上清液2，在650nm的波长处检测吸光度，记作A2。
③分别在35支试管中加入胶原酶0.25mL(32U/mL)，然后分别加入0.25mL对比例1-10和实施例1-5的测试溶液并混匀，随后加入底物酪蛋白溶液0.5mL(1.0％,w/v)并立即混匀，37℃水浴保温10min后，然后加入三氯乙酸溶液1mL(6.5％,w/v)混匀，静置10min后10000rpm离心5min，分别取该35支试管中的上清液样品0.5mL于另外35支试管中，分别加入碳酸氢钠试液0.5ml(质量浓度：10％)，摇匀。10分钟后各加入福林酚试液0.5ml(1mol/L酸浓度的福林酚试液稀释2倍)，立即混匀，室温放置30分钟；得到35组实验组上清液3，分别在650nm的波长处检测吸光度，记作A3。
④分别在35支试管中加入胶原酶0.25mL(32U/mL)，然后分别加入0.25mL对比例1-10和实施例1-5的测试溶液并混匀，随后加入三氯乙酸溶液1mL(6.5％,w/v)并立即混匀，37℃水浴保温10min后，然后加入底物酪蛋白溶液0.5mL(1.0％,w/v)混匀，静置10min后10000rpm离心5min，分别取该35支试管中的上清液样品0.5mL于另外35支试管中，分别加入碳酸氢钠试液0.5ml(质量浓度：10％)，摇匀。10分钟后各加入福林酚试液0.5ml(1mol/L酸浓度的福林酚试液稀释2倍)，立即混匀，室温放置30分钟；得到35组对照组上清液4，分别在650nm的波长处检测吸光度，记作A4。
抑制率＝[1-(A3-A4)/(A1-A2)]×100％
式中：A1为不添加胶原酶抑制剂，实验组上清液1的吸光度；
A2为不添加胶原酶抑制剂，对照组上清液2的吸光度；
A3为含有胶原酶抑制剂，实验组上清液3的吸光度；
A4为含有胶原酶抑制剂，对照组上清液4的吸光度。
分别计算得到茯苓提取物(对比例1-5)和金盏花提取物(对比例6-10)各自的对胶原酶活性的抑制率。并结合对数质量浓度-胶原酶活性抑制率的关系图(图1和图2)，换算求得茯苓提取物的抑制率为50％时对应的质量浓度(IC50A)和金盏花提取物的抑制率为50％时对应的质量浓度(IC50B)，结果如表2所示。
表2
然后测出实施例1-5的胶原酶抑制剂的胶原酶活性抑制率。并结合对数质量浓度-胶原酶活性抑制率的关系图(图3)，换算求得茯苓提取物和金盏花提取物复合作用产生等效抑制率(50％)时，茯苓提取物的质量浓度(IC50a)，茯苓提取物和金盏花提取物复合作用产生等效抑制率(50％)时，金盏花提取物的质量浓度((IC50b)，结果如表3所示。
茯苓提取物和金盏花提取物的复合作用的效应，可以用相互作用系数γ来评价，具体结果如表3所示。
γ＝IC50a/IC50A+IC50b/IC50B
其中，IC50A表示茯苓提取物的抑制率为50％时对应的质量浓度；
IC50B表示金盏花提取物的抑制率为50％时对应的质量浓度；
IC50a表示茯苓提取物和金盏花提取物复合作用产生等效抑制率(50％)时，茯苓提取物的质量浓度；
IC50b表示茯苓提取物和金盏花提取物复合作用产生等效抑制率(50％)时，金盏花提取物的质量浓度。
其中，γ＝1，表示茯苓提取物和金盏花提取物表现为简单相加效应；γ＜1为茯苓提取物和金盏花提取物表现为协同效应，γ值越小，协同效应越强；γ＞1为茯苓提取物和金盏花提取物表现为拮抗效应，γ值越大，拮抗效应越大。
表3
注：表3中，实施例1和实施例4-5在本发明中作为参考例1和参考例4-5体现的，其可以与实施例2-3形成对比。
由表3可以看出，本发明的胶原酶抑制剂中的相互作用系数小于1，且其相互作用系数值可以在0.8以下，甚至可以在0.7以下，因此茯苓提取物和金盏花提取物可以表现为优异的协同效应。
应用实施例1-5
根据下表4中的应用实施例1-5的精华原液配方中各组分的含量(质量百分比)，并按照下述生产工艺步骤制备得到精华原液。生产工艺步骤如下：
1、将A相加入乳化锅，搅拌并加热到83℃，均质2min，保温搅拌15min后冷却；
2、冷却至45℃，加入B、C相和预溶好的D、E相搅拌均匀；
3、冷却至37℃，出料，静置24小时；
4、检验合格后，分装、包装，再检验，成品入库。
注：生产工艺中A、B、C、D、E相分别为
A相：水、丁二醇、丙二醇、甘油、透明质酸钠、EDTA二钠、黄原胶、卡波姆、羟苯甲酯、神经酰胺2；
B相：甘油聚醚-26、茯苓提取物、金盏花提取物、乳酸杆菌/大豆发酵产物提取物、烟酰胺、尿囊素、北美金缕梅花水、海藻糖、聚季铵盐-51、甘油聚甲基丙烯酸酯、乳酸钠和葡糖酸钠和水的复合物、PCA钠、苯氧乙醇、尿素；
C相：氨甲基丙醇；
D相：水、双-PEG-18甲基醚二甲基硅烷、双-二乙氧基二甘醇环己烷1,4-二羧酸酯；
E相：PEG-40氢化蓖麻油、香精。
其中，丁二醇、甘油、透明质酸钠、甘油聚醚-26、海藻糖、聚季铵盐-51、甘油聚甲基丙烯酸酯、双-PEG-18甲基醚二甲基硅烷、乳酸钠和葡糖酸钠和水的复合物、PCA 钠、尿素是保湿剂；
氨甲基丙醇是pH调节剂；PEG-40氢化蓖麻油是增溶剂；
EDTA 二钠是螯合剂；黄原胶、卡波姆是增稠剂；
茯苓提取物、金盏花提取物是美白化妆品添加剂；
尿囊素、乳酸杆菌/大豆发酵产物提取物、神经酰胺2是皮肤调理剂；
北美金缕梅花水是舒敏剂；烟酰胺是美白剂；
苯氧乙醇、羟苯甲酯就防腐剂；香精是芳香剂。
丙二醇、双-二乙氧基二甘醇环己烷1,4-二羧酸酯是促渗透剂；
本发明中，乳酸钠和葡糖酸钠和水的复合物，生产厂家：Corbion；牌号：MOISTXS。
表4
应用对比例1-8
根据下表5中的应用对比例1-8的精华原液配方中各组分的含量(质量百分比)，并按照与应用实施例1-5相同的方法，制备得到精华原液。
表5
皮肤弹性测试
皮肤弹性的测试方法：测试原理是基于吸力和拉伸原理，在被测试的皮肤表面产生一个负压将皮肤吸进一个特定测试探头内，皮肤被吸进测试探头内的深度是通过一个非接触式的光学测试系统测得的。测试探头内包括光的发射器和接收器，光的比率(发射光和接收光之比)同被吸入皮肤的深度成正比，这样就得到了一条皮肤被拉伸的长度和时间的关系曲线。
采用德国CK公司的探头PVM600和皮肤弹性测量仪MPA580对受试者进行皮肤弹性的测定，选择参数R2作为比较指标(R2：无负压时皮肤回弹量与有负压时的最大拉伸量之比，比值越接近1，皮肤弹性越好)，共测量3次，取平均值；通过测量产品使用前后皮肤弹性值R2的变化来评估该产品对受试区域皮肤弹性的改善作用。
受试者人数为33人，试验周期为8周，试验选取应用实施例1-5的精华原液以及应用对比例1-8的精华原液作为测试样品，在受试者的前臂划分13个不同区域，每天早晚将应用实施例1-5的精华原液以及应用对比例1-8的精华原液涂抹于前臂内侧的不同区域，涂抹量约为2mg/cm2，且试验周期内每种测试样品的涂抹位置均保持不变，然后分别测定实验前和使用8周时的受试区域的皮肤弹性，进而表征皮肤弹性的变化率，具体弹性变化率(取平均值)的结果如表6和图5所示。
表6
由表6和图5可以看出，本申请的应用实施例1-5的弹性的变化率较大，即皮肤弹性增强，因此，使用茯苓提取物和金盏花提取物能够有效改善皮肤衰老。
本申请的应用对比例1-8中，其皮肤弹性变化率小，因此，应用对比例1-8的抗衰效果相对较差。
本发明的上述实施例仅仅是为清楚地说明本发明所作的举例，而并非是对本发明的实施方式的限定。对于所属领域的普通技术人员来说，在上述说明的基础上还可以做出其它不同形式的变化或变动。这里无需也无法对所有的实施方式予以穷举。凡在本发明的精神和原则之内所作的任何修改、等同替换和改进等，均应包含在本发明权利要求的保护范围之内。

Claims (6)

1.一种精华原液，其特征在于，包括胶原酶抑制剂和促渗透剂；以所述精华原液的总质量计，所述胶原酶抑制剂的加入量为0.01-10％；所述促渗透剂的加入量为0.01-10％；
所述胶原酶抑制剂包括茯苓提取物和金盏花提取物，以所述胶原酶抑制剂的总质量计，所述茯苓提取物的加入量为10-49％，所述金盏花提取物的加入量为51-90％；
所述茯苓提取物与所述金盏花提取物的质量比为1:3.5～7.5；
所述促渗透剂包括丙二醇、双-二乙氧基二甘醇环己烷1,4-二羧酸酯以及壳聚糖中的一种或两种以上的组合；
所述精华原液还包括保湿剂、增稠剂、防腐剂、皮肤调理剂、增溶剂、皮肤美白剂、舒敏剂、芳香剂、抗氧化剂、pH调节剂和螯合剂。
2.根据权利要求1所述的精华原液，其特征在于，所述保湿剂的加入量为0.01-20％；所述增稠剂的加入量为0.02-0.8％；所述防腐剂的加入量为0.01-1.5％；所述皮肤调理剂的加入量为0.01-5％；所述增溶剂的加入量为0.01-0.5％；所述皮肤美白剂的加入量为0.01-5％；所述舒敏剂的加入量为0.01-5％；所述芳香剂的加入量为0.005-0.5％；所述抗氧化剂的加入量为0-2％；所述pH调节剂的加入量为0.01-1％；所述螯合剂的加入量为0.01-1％。
3.根据权利要求1所述的精华原液，其特征在于，所述皮肤调理剂包括扭刺仙人掌茎提取物、神经酰胺2、尿囊素、石莼提取物、小球藻发酵产物、巨藻提取物、酵母提取物、棕榈酰三肽-5、乳酸杆菌/大豆发酵产物提取物、乙酰基六肽-8、水解胶原蛋白、燕麦肽、角蛋白氨基酸类、麦冬根提取物中的一种或两种以上的组合。
4.根据权利要求1所述的精华原液，其特征在于，所述皮肤美白剂包括烟酰胺、天女木兰提取物、曲酸、熊果苷、维生素C中的一种或两种以上的组合；和/或，
所述舒敏剂包括北美金缕梅花水、红没药醇、姜根提取物、库拉索芦荟提取物、积雪草提取物、月见草油、穿心莲叶提取物中的一种或两种以上的组合。
5.根据权利要求1所述的精华原液，其特征在于，所述胶原酶为间质胶原酶。
6.一种根据权利要求1-5任一项所述的精华原液的制备方法，其特征在于，包括将所述精华原液的各组分混合的步骤。
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