CN113109124B

CN113109124B - 一种负压平衡离心制片方法

Info

Publication number: CN113109124B
Application number: CN202110384046.8A
Authority: CN
Inventors: 朱思龙
Original assignee: Xinghongye Wuhan Technology Co ltd
Current assignee: Xinghongye Wuhan Technology Co ltd
Priority date: 2021-04-09
Filing date: 2021-04-09
Publication date: 2022-04-01
Anticipated expiration: 2041-04-09
Also published as: CN113109124A

Abstract

本发明提供了一种负压平衡离心制片方法，包括如下步骤：S1，制作涂覆有粘附剂的载玻片，并安装于玻片架上；S2，将制片仓安装在玻片架上并压紧载玻片，将装有处理液、细胞标本液的混合液的离心瓶安装在制片仓的另一端上形成离心套件；S3，将离心套件安装在离心机上，启动离心机；S4，将离心机转速提升至转速N2维持一段时间，其中转速N2产生的离心力使得离心瓶内的混合液经所述细小开口甩出至制片仓中并流向载玻片，直到制片仓中的混合液至少淹没过所述细小开口。本发明采用离心机多次低速、高速循环转动的方法即可有效地完成细胞标本液的比重分离、细胞浓集以及制片的过程。

Description

一种负压平衡离心制片方法

技术领域

本发明涉及细胞制片技术领域，具体地涉及一种负压平衡离心制片方法。

背景技术

目前，公知的脱落细胞制片方法往往需要先将细胞标本液进行比重分离以离心分离出杂质，然后进一步对细胞标本液进行细胞浓集离心以收集细胞沉渣，再利用少量的细胞处理液使细胞沉渣形成细胞悬浊液，最后将高浓度的细胞悬浊液加入到制片仓中进行制片，这样的制片方法步骤繁多，制片时间长，工作量大，效率低，且细胞标本液必须进行多次转移，在转移的过程中，容易丢失细胞，从而降低了检出率。

发明内容

本发明旨在至少解决现有技术中存在的技术问题之一。为此，本发明提出一种负压平衡离心制片方法，包括如下步骤：

S1，制作涂覆有粘附剂的载玻片，并安装于玻片架上；

S2，将制片仓安装在玻片架上并压紧载玻片，将装有处理液、细胞标本液的混合液的离心瓶安装在制片仓的另一端上形成离心套件，并使制片仓内腔与大气保持通畅，其中离心瓶的一端具有细小开口其余部分密封，所述细小开口朝向载玻片并与载玻片之间保持一定距离；

S3，将离心套件安装在离心机上，启动离心机；

S4，将离心机转速提升至转速N₂，维持转速N₂一段时间，其中转速N₂产生的离心力使得离心瓶内的混合液经所述细小开口甩出至制片仓中并流向载玻片，直到制片仓中的混合液至少淹没过所述细小开口。

进一步地，还包括以下步骤：

S5、离心机转速增加至转速N₁并维持一段时间。

进一步地，还包括以下步骤：

S6，将离心机的转速逐渐降低到转速N₂并维持一段时间，使得制片仓中淹没过所述细小开口的混合液被吸回离心瓶内；

S7，重复S5、S6步骤直至使足够数量的细胞附着于载玻片上。

进一步地，所述细小开口与载玻片之间的距离为0.5-15mm。

进一步地，所述细小开口的内径为1-3mm。

进一步地，所述离心瓶包括离心瓶本体，所述离心瓶本体与所述细小开口之间通过细管相连。

进一步地，所述细管与所述离心瓶本体之间通过锥形体相连。

进一步地，所述转速N₁范围为200-1000转/分钟，所述转速N₂范围为100-900转/分钟。

本发明所提供的负压平衡离心制片方法，离心机多次低速、高速循环转动的方法即可有效地完成细胞标本液的比重分离、细胞浓集以及制片的过程，本发明所提供的制片方法无需多次转移细胞标本液，进而有效地避免了细胞标本液转移过程中出现的细胞丢失的问题，从而确保了检出的准确性，制片时间短，极大地节约了时间，减小了工作量，制片效率高。

附图说明

图1是本发明使用的一种负压平衡离心瓶的结构示意图；

图2是本发明使用的另一种负压平衡离心瓶的结构示意图；

图3是本发明使用的又一种负压平衡离心瓶的结构示意图；

图4是本发明使用的再一种负压平衡离心瓶的结构示意图；

图5是本发明使用的再一种负压平衡离心瓶盛装有标本及处理液的示意图；

图6是本发明使用的再另一种负压平衡离心瓶盛装有标本及处理液的示意图；

图7是现有的一种制片仓的结构示意图；

图8是本发明使用的一种负压平衡离心瓶安装在离心机上的结构示意图；

图9是本发明使用的一种负压平衡离心瓶在离心机上运行的结构示意图；

其中，1、离心瓶本体；11、瓶盖；12、细小开口；13、细管；14、锥形体；15、盲端；16、隔断；161、细孔；162、细管二；2、端盖；3、卡接部；31、肩部；32、导向部；4、处理液；5、细胞标本液；6、制片仓；61、卡耳；62、密封圈；7、玻片架；8、载玻片；9、离心轴；91、离心臂；92、吊篮。

具体实施方式

下面详细描述本发明的实施例，所述实施例的示例在附图中示出，其中自始至终相同或类似的标号表示相同或类似的元件或具有相同或类似功能的元件。下面通过参考附图描述的实施例是示例性的，仅用于解释本发明，而不能理解为对本发明的限制。

在本发明的描述中，需要理解的是，术语“中心”、“上”、“下”、“前”、“后”、“左”、“右”、“竖直”、“水平”、“顶”、“底”“内”、“外”等指示的方位或位置关系为基于附图所示的方位或位置关系，仅是为了便于描述本发明和简化描述，而不是指示或暗示所指的装置或元件必须具有特定的方位、以特定的方位构造和操作，因此不能理解为对本发明的限制。

在本发明的描述中，需要说明的是，除非另有明确的规定和限定，术语“安装”、“相连”、“设置”应做广义理解，例如，可以是固定相连、设置，也可以是可拆卸连接、设置，或一体地连接、设置。对于本领域的普通技术人员而言，可以具体情况理解上述术语在本发明中的具体含义。

如图1所示，本发明使用的一种负压平衡离心瓶，包括：离心瓶本体1、瓶盖11、细小开口12，所述细小开口12与所述离心瓶本体1之间设置有与所述细小开口12相连的细管13以及锥形体14，所述锥形体14的大端与所述离心瓶本体1相连，所述锥形体14的小端与所述细管13相连，所述细管13的内径可与所述细小开口12的内径相同，所述细小开口12的内径为1-3mm。

所述瓶盖11可拆卸地设置在所述离心瓶本体1上，便于将处理液4、细胞标本液5加入离心瓶内之后密封离心瓶。还包括卡接部3，所述卡接部3设置在细管13、离心瓶本体1或者锥形体14的外表均可，用于与制片仓6相配合以便于将离心瓶安装在制片仓6中进行定位、支撑，所述卡接部3为具有凸肩的定位块，其肩部31与离心仓端面配合以便于固定本发明的负压平衡离心瓶，当然，卡接部3还可以如图2所示那样设置有可以伸入离心仓的导向部32以便于本发明的负压平衡离心瓶比较稳定地安装在离心仓中。

所述细小开口12的端部设置有可拆卸的端盖2，在离心制片时只需将端盖拆卸下来即可。

在另一种负压平衡离心瓶实施例中，如图2所示，与上述实施例不同的是，所述细小开口12的端部为塑料制品等容易剪掉的盲端15，在离心制片时将盲端剪掉以露出细小开口。

在又一种负压平衡离心瓶的实施例中，如图3所示，与上述实施例不同的是，细管13设置在瓶盖上11，锥形体14一端与细管13相连，另一端与离心瓶本体相连。

在再一种负压平衡离心瓶中，如图4所示，在前述实施例的基础上，进一步地还包括固定设置在所述离心瓶本体1内用于分隔标本液与处理液的隔断16，隔断16将离心瓶本体密封分隔成上腔和下腔，所述隔断为底部设置有细管二162的锥形漏斗状容器。将处理液4添加到离心瓶本体1中，然后将隔断16放入，添加细胞标本液5，如图5所示。细管二162伸入到处理液中，上腔中仅有少量空间余量，下腔有一定的空间余量。隔断可以起到分隔细胞标本液和处理液的作用，减少细胞标本液对处理液的污染。

在再另一种负压平衡离心瓶中，如图6所示，与前一种离心瓶不同的是，所述隔断16的底部设置有若干细孔161。在图6中，已经加入了处理液4、细胞标本液5。

图7为现有的一种制片仓6的结构示意图，其包括两端开口的中空的管状结构，其一端的外壁上设置有卡耳61，一端的端部上设置有向外凸出的密封圈62。

采用本发明所提供的负压平衡离心瓶进行离心制片的方法包括以下步骤：

为了便于描述，以使用图2所示的另一种负压平衡离心瓶为例来阐述，

(1)打开瓶盖，将处理液4、细胞标本液5依次加入离心瓶内并保持液面上方留有一定空间，之后，盖紧瓶盖，使得瓶盖与离心瓶本体之间保持良好的密封状态，如图8所示。处理液的密度大于细胞标本液的密度，因此，细胞标本液悬浮于处理液上方。

(2)制作涂覆有粘附剂的载玻片8，并安装于玻片架7上。

(3)将制片仓的卡耳插进玻片架7中，制片仓6的密封圈紧贴载玻片8上并压紧载玻片8，将离心瓶上的盲端15剪掉露出细小开口12，由于表面张力的作用，离心瓶内的液体并不会从细小开口12大量流出，之后将装有处理液4、细胞标本液5的混合液的离心瓶安装在制片仓的另一端上形成离心套件，其中离心瓶上的细小开口12朝向载玻片并与载玻片上表面之间的距离为0.5-15mm，由于卡接部只是一些定位块，离心瓶与制片仓之间不形成密封接触，制片仓内部与外界大气可以保持通畅。

(4)将该离心套件安放在吊篮式离心机的吊篮92中。该吊篮式离心机包括离心轴9、离心臂91、吊篮92，离心臂91水平固定设置在离心轴9上，吊篮92铰接在离心臂91上，如图8所示。

(5)启动离心机，离心机转速逐渐增加至转速N₂并维持一段时间，比如维持2-5分钟，离心轴9旋转带动离心臂91旋转，随着转速的增高，在离心力的作用下，吊篮92逐渐接近水平状态，如图9所示。此时，离心瓶内的液体在离心力的作用下不断地流入制片仓内，制片仓中的液面也逐渐呈竖直状态，随着液体不断进入制片仓，制片仓中的液面漫过了细小开口，离心瓶与制片仓形成了单端开口的联通管。

在离心机加速时，细胞、处理液、粘液及其他杂质均较快地经细管移向制片仓中，液体进入制片仓后均匀向四周分布，液体中含有的细胞在流动的液体带动下，也均匀向四周分布并向载玻片移动，最终被粘附于载玻片上。由于离心瓶与制片仓形成了单端开口的联通管，当液体不断由离心瓶流入制片仓时，离心瓶内的空间也不断增大，空间气压随之变小，由于制片仓与大气连通，制片仓内的液面始终受到大气压力，当离心瓶内的气压与液体离心力对制片仓液面产生的压强之和等于大气压时，即离心力对制片仓液面所产生的压强与离心瓶内负压相等时，即离心瓶内的负压与离心力平衡，但在离心力的作用下，细胞、粘液及其它颗粒物不断移动至处理液中，并持续向制片仓方向移动，由于细胞的比重比粘液等其它杂质的比重大，所以细胞以较粘液快的速度向制片仓方向移动，而粘液等比重较小的颗粒以较慢的速度向制片仓方向移动。

(6)维持转速N₂时间结束后，离心机转速增加至转速N₁并维持一定时间，比如维持2-5分钟，在离心机加速阶段，由于离心力加大，离心瓶内的负压与离心力的平衡被打破，离心瓶内的液体继续较快地流至制片仓，离心瓶内负压不断增加。当离心机转速不再增加时，离心瓶内的负压逐渐增加最终再一次与离心力达到平衡，离心瓶内的液体流入制片仓的总体积不再增加，但细胞依然持续通过细管流入制片仓，一部分细胞被载玻片上的粘附剂吸附。

(7)转速N₁时间结束后，离心机转速降低至转速N₂并维持一定时间，比如维持2-5分钟。减速时离心力下降，而离心瓶内负压较大，且制片仓中的液面漫过了细小开口形成了密封，故而制片仓中的液体经细小开口回流至离心瓶。由于制片仓中的细胞大多数已经被载玻片吸附，所以从制片仓回流至离心瓶的细胞浓度极低。维持转速N₂时，离心力不再下降，最终离心力与离心瓶内的负压平衡，这时流回离心瓶的液体总体积不再增加，但由于离心力的作用，且细胞、粘液及处理液的密度不同，所以离心瓶内的细胞可以在离心力与负压平衡时源源不断地经细管向细小开口的方向移动。

(8)重复步骤(6)、步骤(7)多次，最终使足够数量的细胞被载玻片均匀吸附。

其中，转速N₁的范围为200-1000转/分钟，转速N₂的范围为100-900转/分钟。

在使用如图4的再一种负压平衡离心瓶制片过程中，与前述方法原理不同的是，在前述方法的基础上，隔断与离心瓶本体内壁进行密封，隔断将其分隔成上腔与下腔两个区间，在离心过程中形成了又一负压平衡。具体地，上腔加注细胞标本液、下腔加注处理液后，细管二162开口处于下腔的处理液中，下腔与上腔除通过细管二连通外其余部分相对密封，由于上腔空间余量小，离心机加速时，，上腔仅有少量的液体进入下腔，当离心机维持一定转速时，上腔形成的负压与离心力平衡，上腔液体中的细胞在离心力的作用下仍然可以进入下腔，离心机减速时，负压大于离心力，也仅有少量液体从下腔进入上腔，尽管处理液与细胞标本液具有互溶性，即使离心机经过多次高速低速循环运行，上腔的体液也不会对下腔的处理液形成较严重的污染，使用该离心瓶适合细胞标本液的量比较大而细胞浓度较低的情况。

另外，如图6所示，在再另一种负压平衡离心瓶中，隔断上的若干细孔161，特别是细孔直径较小达到100-1000μm时，本隔断适合于杂质较多的标本例如痰液标本，起撕裂粘液及过滤作用。

本发明很好地利用了液体在细小开口及细管中表面张力，结合离心力与负压的平衡，使用高低转速N₁、N₂的交替离心方法，细胞经多次淘选而充分进入到制片仓中附着在载玻片上，适于各种浓度、各种情况的标本液制片，适应性广，制片流程简单，制片效果好，节约制片时间，制片效率高。

尽管已经示出和描述了本发明的实施例，本领域的普通技术人员可以理解：在不脱离本发明的原理和宗旨的情况下可以对这些实施例进行多种变化、修改、替换和变型，本发明的范围由权利要求及其等同物限定。

Claims

1.一种负压平衡离心制片方法，其特征在于，包括如下步骤：

S1，制作涂覆有粘附剂的载玻片，并安装于玻片架上；

S2，将制片仓安装在玻片架上并压紧载玻片，将装有处理液、细胞标本液的混合液的离心瓶安装在制片仓的另一端上形成离心套件，并使制片仓内腔与大气保持通畅，其中离心瓶的一端具有细小开口其余部分密封，所述离心瓶包括离心瓶本体，所述离心瓶本体与所述细小开口之间通过细管相连，所述细小开口朝向载玻片并与载玻片之间保持一定距离；

S3，将离心套件安装在离心机上，启动离心机；

S4，将离心机转速提升至转速N₂，维持转速N₂一段时间，其中转速N₂产生的离心力使得离心瓶内的混合液经所述细小开口甩出至制片仓中并流向载玻片，直到制片仓中的混合液至少淹没过所述细小开口，离心瓶与制片仓形成了单端开口的联通管；液体不断由离心瓶流入制片仓，离心瓶内的空间不断增大，空间气压随之变小，由于制片仓与大气连通，制片仓内的液面始终受到大气压力，当离心瓶内的气压与液体离心力对制片仓液面产生的压强之和等于大气压时，即离心力对制片仓液面所产生的压强与离心瓶内负压相等时，即离心瓶内的负压与离心力平衡，在离心力的作用下，细胞不断移动至处理液中，并持续向制片仓方向移动；

S5、离心机转速增加至转速N₁并维持一段时间；当离心瓶内的负压再次与离心力达到平衡时，离心瓶内的液体流入制片仓的总体积不再增加，细胞依然持续通过细管流入制片仓，一部分细胞被载玻片上的粘附剂吸附；

S6，将离心机的转速逐渐降低到转速N₂并维持一段时间，使得制片仓中淹没过所述细小开口的混合液被吸回离心瓶内，离心瓶内的细胞可以在离心力与负压平衡时源源不断地经细管向细小开口的方向移动；

S7，重复S5、S6步骤直至使足够数量的细胞附着于载玻片上。

2.根据权利要求1所述的负压平衡离心制片方法，其特征在于，所述细小开口与载玻片之间的距离为 0.5-15mm。

3.根据权利要求1所述的负压平衡离心制片方法，其特征在于，所述细小开口的内径为1-3mm。

4.根据权利要求3所述的负压平衡离心制片方法，其特征在于，所述细管与所述离心瓶本体之间通过锥形体相连。

5.根据权利要求1所述的负压平衡离心制片方法，其特征在于，所述转速N₁范围为 200-1000转/分钟，所述转速N₂范围为 100-900转/分钟。