CN113061556A - 油脂分解菌制剂 - Google Patents

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刘永好
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Abstract

本发明公开了一种油脂分解菌制剂，由驯化复合菌和甘油组成。所述复合菌种由枯草芽孢杆菌、小木偶形芽孢杆菌、侧孢短芽孢杆菌、沼泽类芽孢杆菌、淤泥大洋芽孢杆菌、弯曲芽孢杆菌、韦氏芽孢杆菌、胶红酵母中的一种或者多种的混合物组成并采用驯化培养基培育。由本发明所制得的油脂分解菌制剂具有良好的油脂分解能力。

Description

油脂分解菌制剂
技术领域
本发明涉及油脂分解菌技术领域，具体涉及一种油脂分解菌制剂。
背景技术
随着经济的飞速发展和生活水平的不断提高，食品加工业和餐饮业迅速发展，为人们的日常生活带来了巨大方便。近年来动植物类油脂的消费正以惊人的数字增长，由此而产生的含油脂污水，特别是含高浓度油脂的污水量大幅度增长，已成为城市生活污水的重要组成部分。进入城市污水处理厂的油类物质包覆在填料外层，令氧的传输受阻，导致好氧微生物代谢紊乱。若油类物质进入水体，则漂浮于水体的表面，影响水体的复氧及其自然净化过程，危害水体生态系统。因此，油类化合物是城市污水中需预先处理的污染物。油类化合物不但对水资源造成了极大的污染和危害，而且也给污染物的处理带来了巨大的负担。
如何经济、快速、合理的处理含油脂污水，解决油类环境污染问题，已成为一个亟待解决的社会问题。目前对于这种污水的处理方法主要有悬浮法、磁吸附分离法、粗粒化法、化学絮凝法、化学氧化法等物理化学方法，由于这些方法对COD、BOD的去除能力较低，而且投资大、占地广，流程复杂又需要特殊设备，其结果大都是对污染物的稀释、聚集或在不同环境中的迁移，还有产生二次污染的可能，因而实际应用较少。因此，目前最主要的是找到一种简便、快速、高效的方法来处理餐饮废水中的油脂，以解决这一刻不容缓的环境问题。由于生物学方法处理污水成本低、无二次污染，因此广泛受到国内外学者的重视。因此，筛选和研发出分解油脂效果良好的微生物菌剂意义重大。
发明内容
针对上述现有技术中存在的不足，本发明提供了一种油脂分解菌制剂。
为解决上述技术问题，本发明采用的技术方案是：
一种油脂分解菌制剂，由驯化复合菌和甘油组成。
所述油脂分解菌制剂的制备方法为：将驯化复合菌与甘油混合即得。
优选的，所述油脂分解菌制剂的制备方法为：将驯化复合菌与甘油混合并以60-180rpm搅拌5-25min，保存于-60-(-75)℃，即得；其中，所述驯化复合菌的浓度为109-1010CFU/mL。
最优选的，所述油脂分解菌制剂的制备方法为：将驯化复合菌与甘油混合并以120rpm搅拌15min，保存于-70℃，即得；其中，所述驯化复合菌的浓度为1010CFU/mL。
所述驯化复合菌的制备方法如下：将复合菌种接种到驯化培养基中培养。
优选的，所述驯化复合菌的制备方法如下：将复合菌种接种到驯化培养基中培养，接种量为108CFU/mL；培养温度为32-36℃，所述驯化培养基的pH为7.1-7.3，摇床转速120-300rpm；培养完成时的驯化复合菌浓度为1010CFU/mL。
最优选的，所述驯化复合菌的制备方法如下：将复合菌种接种到驯化培养基中培养，接种量为108CFU/mL；培养温度为34℃，所述驯化培养基的pH为7.2，摇床转速240rpm；培养完成时的驯化复合菌浓度为1010CFU/mL。
所述复合菌种由枯草芽孢杆菌、小木偶形芽孢杆菌、侧孢短芽孢杆菌、沼泽类芽孢杆菌、淤泥大洋芽孢杆菌、弯曲芽孢杆菌、韦氏芽孢杆菌、胶红酵母中的一种或者多种组成。
优选的，所述复合菌种由枯草芽孢杆菌、小木偶形芽孢杆菌、侧孢短芽孢杆菌、沼泽类芽孢杆菌、淤泥大洋芽孢杆菌、弯曲芽孢杆菌、韦氏芽孢杆菌、胶红酵母按质量比(1-10):(1-10):(1-10):(1-10):(1-10):(1-10):(1-10)(1-10)组成。
最优选的，所述复合菌种由枯草芽孢杆菌、小木偶形芽孢杆菌、侧孢短芽孢杆菌、沼泽类芽孢杆菌、淤泥大洋芽孢杆菌、弯曲芽孢杆菌、韦氏芽孢杆菌、胶红酵母按质量比1:1:1:1:1:1:1:1组成。
所述驯化培养基的原料为：氯化钠、氯化镁、磷酸二氢钾、磷酸氢二钾、豆提取物、蒸馏水。
优选的，所述驯化培养基的原料为：3-7重量份氯化钠、0.1-1重量份氯化镁、0.1-2重量份磷酸二氢钾、0.1-2重量份磷酸氢二钾、10-15重量份豆提取物、900-1100重量份蒸馏水。
最优选的，所述驯化培养基的原料为：5重量份氯化钠、0.2重量份氯化镁、1.2重量份磷酸二氢钾、0.7重量份磷酸氢二钾、12重量份豆提取物、1000重量份蒸馏水。
所述豆提取物的制备方法为：
⑴将豆子粉碎后过筛，再加入到正己烷中并搅拌；在搅拌的同时采用超声波处理；过滤，取滤液，在75-80℃、气压为60-68kPa的条件下以180-300rpm搅拌所述滤液，待正己烷完全蒸发完毕后得到豆萃取物；
⑵将由步骤⑴所得豆萃取物、橄榄油、硫酸铵、金属盐增效剂按质量比(8-15):(15-30):(3-10):(0.1-1.3)混合并在25-33℃以240-360rpm搅拌得到所述豆提取物。
优选的，所述豆提取物的制备方法为：
⑴将豆子粉碎后过20-40目筛，再加入到正己烷中并在30-40℃以540-660rpm搅拌8-12h；在搅拌的同时采用频率35-45kHz、功率350-450W的超声波处理；所述豆子、正己烷的质量比为(0.8-1.5):(2.5-4)；过滤，取滤液，在75-80℃、气压为60-68kPa的条件下以180-300rpm搅拌所述滤液，待正己烷完全蒸发完毕后得到豆萃取物；
⑵将由步骤⑴所得豆萃取物、橄榄油、硫酸铵、金属盐增效剂按质量比(8-15):(15-30):(3-10):(0.1-1.3)混合并在25-33℃以240-360rpm搅拌得到所述豆提取物。
最优选的，所述豆提取物的制备方法为：
⑴将豆子粉碎后过30目筛，再加入到正己烷中并在35℃以600rpm搅拌10h；在搅拌的同时采用频率40kHz、功率400W的超声波处理；所述豆子、正己烷的质量比为1:3；过滤，取滤液，在76℃、气压为66.5kPa的条件下以240rpm搅拌所述滤液，待正己烷完全蒸发完毕后得到豆萃取物；
⑵将由步骤⑴所得豆萃取物、橄榄油、硫酸铵、金属盐增效剂按质量比10:20:5:1混合并在30℃以300rpm搅拌得到所述豆提取物。
所述豆子为黄大豆、黑小豆、黑芸豆、花芸豆中的一种或者多种的混合物。优选的，所述豆子为黄大豆、黑小豆、黑芸豆、花芸豆按质量比(1-10):(1-10):(1-10):(1-10)的混合物。最优选的，所述豆子为黄大豆、黑小豆、黑芸豆、花芸豆按质量比1:1:1:1的混合物。
所述金属盐增效剂为硝酸铜、硝酸钙中的一种或者两种的混合物。优选的，所述金属盐增效剂为硝酸铜、硝酸钙按质量比(0.1-3):(0.1-3)的混合物。最优选的，所述金属盐增效剂为硝酸铜、硝酸钙按质量比1:1的混合物。
Cu2+和Ca2+对芽孢杆菌的脂肪酶有促进活性的作用，Cu2+和Ca2+二者复配使用可以显著提高豆提取物对于芽孢杆菌和胶红酵母分解油脂的能力，这与由该两种阳离子的电子亲和力差异导致的和芽孢杆菌和胶红酵母的脂肪酶的活性中心相互间的电负性差有关。并且，该两种金属阳离子与豆提取物中的特异性蛋白酶抑制剂之间的电离能差能够进一步地稳定豆提取物中特异性蛋白酶抑制剂的作用
由本发明特定方法制得的豆提取物中含有特异蛋白酶抑制剂，特异蛋白酶抑制剂可以特异性地抑制芽孢杆菌和胶红酵母中特异性水解脂肪酶的蛋白酶的活性，从而削弱了脂肪酶的水解，以此增强了芽孢杆菌和胶红酵母对于油脂的分解能力；与此同时并不会影响到发挥其他正常生理功能的蛋白酶的活性。由本发明特定方法制备的豆提取物中的Cu2+和Ca2+对芽孢杆菌和胶红酵母的脂肪酶有促进活性的作用，可以增强芽孢杆菌和胶红酵母分解油脂的能力。本发明所用到的硫酸铵和橄榄油不仅仅是起到氮源和碳源的作用：铵根离子和橄榄油中的ω-3脂肪酸、单不饱和Omega-9脂肪酸以氢键彼此联系，增强了彼此的稳定性的同时进一步地增强了豆萃取物中特异性蛋白酶抑制剂的稳定性，避免其在作为驯化培养基的原料使用之前就失去足够的反应活性。
本发明的有益效果：提供了一种油脂分解菌制剂，该油脂分解菌剂分解油脂的能力强。
具体实施方式
下面结合具体实施方式对本发明的上述发明内容作进一步的详细描述，但不应将此理解为本发明上述主题的范围仅限于下述实施例。
本申请中部分原料的介绍：
枯草芽孢杆菌：Bacillus subtilis，CGMCC：1.9083，购于中国普通微生物菌种保藏管理中心。
小木偶形芽孢杆菌：Bacillus kokeshiiformis，CGMCC：1.15356，购于中国普通微生物菌种保藏管理中心。
侧孢短芽孢杆菌：Brevibacillus laterosporus，CGMCC：1.15160，购于中国普通微生物菌种保藏管理中心。
沼泽类芽孢杆菌：Paenibacillus aestuarii，CGMCC：1.12154，购于中国普通微生物菌种保藏管理中心。
淤泥大洋芽孢杆菌：Oceanobacillus caeni，CGMCC：1.10323，购于中国普通微生物菌种保藏管理中心。
弯曲芽孢杆菌：Bacillus geniculatus，CGMCC：1.9084，购于中国普通微生物菌种保藏管理中心。
韦氏芽孢杆菌：Bacillus weiscodies，CGMCC：1.7818，购于中国普通微生物菌种保藏管理中心。
胶红酵母：Rhodotorula mucilaginosa，CGMCC：2.1281，购于中国普通微生物菌种保藏管理中心。
氯化钠，CAS：7647-14-5，购于安徽中弘生物工程有限公司，规格：食品级。作用：培养基成分。
氯化镁，CAS：7786-30-3，购于江苏奥福生物科技有限公司，规格：食品级。作用：培养基成分。
磷酸二氢钾，CAS：7778-77-0，购于上海阿拉丁生化科技股份有限公司，货号：P113042-500g。作用：培养基成分、pH缓冲剂。
磷酸氢二钾，CAS：16788-57-1，购于上海阿拉丁生化科技股份有限公司，货号：P112278-100g。作用：培养基成分、pH缓冲剂。
黄大豆，购于四川想真企业有限公司，水分≤13.0％，完整粒率≥95％，粗蛋白含量≥44.0％，粗脂肪含量≥20.0％。
黑小豆，购于上海老申坊食品有限公司，水分≤12.0％，粗蛋白含量≥40.0％，粗脂肪含量≥20.0％。
黑芸豆，购于河北泥河湾农业发展股份有限公司，完整粒率≥97％，粗脂肪含量≥21.0％，粗蛋白含量≥42.0％，水分≤14.0％。
花芸豆，购于上海老申坊食品有限公司，粗蛋白含量≥41.0％，粗脂肪含量≥22.0％。
橄榄油，购于郑州喜之丰商贸有限公司，天然酸度≤0.4％。作用：碳源。
硫酸铵，CAS：7783-20-2，购于购于上海阿拉丁生化科技股份有限公司，货号：A112104-500g。作用：萃取、氮源。
硝酸铜，CAS：3251-23-8，购于购于上海阿拉丁生化科技股份有限公司，货号：C303446-500g。作用：脂肪酶促进剂。
硝酸钙，CAS：13477-34-4，购于上海阿拉丁生化科技股份有限公司，货号：C100079-500g。作用：脂肪酶促进剂。
正己烷，CAS：110-54-3，购于上海阿拉丁生化科技股份有限公司，货号：H140380-1L。作用：萃取剂。
甘油，CAS：56-81-5，购于南京化学试剂股份有限公司，货号：C0690514023，规格：ACS。作用：油脂分解菌制剂的载体。
实施例1
一种油脂分解菌制剂，由驯化复合菌和甘油组成。
所述油脂分解菌制剂的制备方法为：将驯化复合菌与甘油混合并以120rpm搅拌15min，保存于-70℃，即得；其中，所述驯化复合菌的浓度为1010CFU/mL。
所述驯化复合菌的制备方法如下：将复合菌种接种到驯化培养基中培养，接种量为108CFU/mL；培养温度为34℃，所述驯化培养基的pH为7.2，摇床转速240rpm；培养完成时的驯化复合菌浓度为1010CFU/mL。
所述复合菌种由枯草芽孢杆菌、小木偶形芽孢杆菌、侧孢短芽孢杆菌、沼泽类芽孢杆菌、淤泥大洋芽孢杆菌、弯曲芽孢杆菌、韦氏芽孢杆菌、胶红酵母按质量比1:1:1:1:1:1:1:1组成。
所述驯化培养基的原料为：5重量份氯化钠、0.2重量份氯化镁、1.2重量份磷酸二氢钾、0.7重量份磷酸氢二钾、12重量份豆提取物、1000重量份蒸馏水。
所述豆提取物的制备方法为：
⑴将豆子粉碎后过30目筛，再加入到正己烷中并在35℃以600rpm搅拌10h；在搅拌的同时采用频率40kHz、功率400W的超声波处理；所述豆子、正己烷的质量比为1:3；所述豆子为黄大豆、黑小豆、黑芸豆、花芸豆按质量比1:1:1:1的混合物；过滤，取滤液，在76℃、气压为66.5kPa的条件下以240rpm搅拌所述滤液，待正己烷完全蒸发完毕后得到豆萃取物；
⑵将由步骤⑴所得豆萃取物、橄榄油、硫酸铵、金属盐增效剂按质量比10:20:5:1混合并在30℃以300rpm搅拌得到所述豆提取物。
所述金属盐增效剂为硝酸铜、硝酸钙按质量比1:1的混合物。
实施例2
一种油脂分解菌制剂，由驯化复合菌和甘油组成。
所述油脂分解菌制剂的制备方法为：将驯化复合菌与甘油混合并以120rpm搅拌15min，保存于-70℃，即得；其中，所述驯化复合菌的浓度为1010CFU/mL。
所述驯化复合菌的制备方法如下：将复合菌种接种到驯化培养基中培养，接种量为108CFU/mL；培养温度为34℃，所述驯化培养基的pH为7.2，摇床转速240rpm；培养完成时的驯化复合菌浓度为1010CFU/mL。
所述复合菌种由枯草芽孢杆菌、小木偶形芽孢杆菌、侧孢短芽孢杆菌、沼泽类芽孢杆菌、淤泥大洋芽孢杆菌、弯曲芽孢杆菌、韦氏芽孢杆菌、胶红酵母按质量比1:1:1:1:1:1:1:1组成。
所述驯化培养基的原料为：5重量份氯化钠、0.2重量份氯化镁、1.2重量份磷酸二氢钾、0.7重量份磷酸氢二钾、12重量份豆提取物、1000重量份蒸馏水。
所述豆提取物的制备方法为：
⑴将豆子粉碎后过30目筛，再加入到正己烷中并在35℃以600rpm搅拌10h；在搅拌的同时采用频率40kHz、功率400W的超声波处理；所述豆子、正己烷的质量比为1:3；所述豆子为黄大豆、黑小豆、黑芸豆、花芸豆按质量比1:1:1:1的混合物；过滤，取滤液，在76℃、气压为66.5kPa的条件下以240rpm搅拌所述滤液，待正己烷完全蒸发完毕后得到豆萃取物；
⑵将由步骤⑴所得豆萃取物、橄榄油、硫酸铵、金属盐增效剂按质量比10:20:5:1混合并在30℃以300rpm搅拌得到所述豆提取物。
所述金属盐增效剂为硝酸铜。
实施例3
一种油脂分解菌制剂，由驯化复合菌和甘油组成。
所述油脂分解菌制剂的制备方法为：将驯化复合菌与甘油混合并以120rpm搅拌15min，保存于-70℃，即得；其中，所述驯化复合菌的浓度为1010CFU/mL。
所述驯化复合菌的制备方法如下：将复合菌种接种到驯化培养基中培养，接种量为108CFU/mL；培养温度为34℃，所述驯化培养基的pH为7.2，摇床转速240rpm；培养完成时的驯化复合菌浓度为1010CFU/mL。
所述复合菌种由枯草芽孢杆菌、小木偶形芽孢杆菌、侧孢短芽孢杆菌、沼泽类芽孢杆菌、淤泥大洋芽孢杆菌、弯曲芽孢杆菌、韦氏芽孢杆菌、胶红酵母按质量比1:1:1:1:1:1:1:1组成。
所述驯化培养基的原料为：5重量份氯化钠、0.2重量份氯化镁、1.2重量份磷酸二氢钾、0.7重量份磷酸氢二钾、12重量份豆提取物、1000重量份蒸馏水。
所述豆提取物的制备方法为：
⑴将豆子粉碎后过30目筛，再加入到正己烷中并在35℃以600rpm搅拌10h；在搅拌的同时采用频率40kHz、功率400W的超声波处理；所述豆子、正己烷的质量比为1:3；所述豆子为黄大豆、黑小豆、黑芸豆、花芸豆按质量比1:1:1:1的混合物；过滤，取滤液，在76℃、气压为66.5kPa的条件下以240rpm搅拌所述滤液，待正己烷完全蒸发完毕后得到豆萃取物；
⑵将由步骤⑴所得豆萃取物、橄榄油、硫酸铵、金属盐增效剂按质量比10:20:5:1混合并在30℃以300rpm搅拌得到所述豆提取物。
所述金属盐增效剂为硝酸钙。
对比例1
一种油脂分解菌制剂，由驯化复合菌和甘油组成。
所述油脂分解菌制剂的制备方法为：将驯化复合菌与甘油混合并以120rpm搅拌15min，保存于-70℃，即得；其中，所述驯化复合菌的浓度为1010CFU/mL。
所述驯化复合菌的制备方法如下：将复合菌种接种到驯化培养基中培养，接种量为108CFU/mL；培养温度为34℃，所述驯化培养基的pH为7.2，摇床转速240rpm；培养完成时的驯化复合菌浓度为1010CFU/mL。
所述复合菌种由枯草芽孢杆菌、小木偶形芽孢杆菌、侧孢短芽孢杆菌、沼泽类芽孢杆菌、淤泥大洋芽孢杆菌、弯曲芽孢杆菌、韦氏芽孢杆菌、胶红酵母按质量比1:1:1:1:1:1:1:1组成。
所述驯化培养基的原料为：5重量份氯化钠、0.2重量份氯化镁、1.2重量份磷酸二氢钾、0.7重量份磷酸氢二钾、12重量份豆提取物、1000重量份蒸馏水。
所述豆提取物的制备方法为：
⑴将豆子粉碎后过30目筛，再加入到正己烷中并在35℃以600rpm搅拌10h；在搅拌的同时采用频率40kHz、功率400W的超声波处理；所述豆子、正己烷的质量比为1:3；所述豆子为黄大豆、黑小豆、黑芸豆、花芸豆按质量比1:1:1:1的混合物；过滤，取滤液，在76℃、气压为66.5kPa的条件下以240rpm搅拌所述滤液，待正己烷完全蒸发完毕后得到豆萃取物；
⑵将由步骤⑴所得豆萃取物、橄榄油、硫酸铵按质量比10:20:5混合并在30℃以300rpm搅拌得到所述豆提取物。
对比例2
一种油脂分解菌制剂，由驯化复合菌和甘油组成。
所述油脂分解菌制剂的制备方法为：将驯化复合菌与甘油混合并以120rpm搅拌15min，保存于-70℃，即得；其中，所述驯化复合菌的浓度为1010CFU/mL。
所述驯化复合菌的制备方法如下：将复合菌种接种到驯化培养基中培养，接种量为108CFU/mL；培养温度为34℃，所述驯化培养基的pH为7.2，摇床转速240rpm；培养完成时的驯化复合菌浓度为1010CFU/mL。
所述复合菌种由枯草芽孢杆菌、小木偶形芽孢杆菌、侧孢短芽孢杆菌、沼泽类芽孢杆菌、淤泥大洋芽孢杆菌、弯曲芽孢杆菌、韦氏芽孢杆菌、胶红酵母按质量比1:1:1:1:1:1:1:1组成。
所述驯化培养基的原料为：5重量份氯化钠、0.2重量份氯化镁、1.2重量份磷酸二氢钾、0.7重量份磷酸氢二钾、1000重量份蒸馏水、7重量份橄榄油、2重量份硫酸铵。
对比例3
一种油脂分解菌制剂，由驯化复合菌和甘油组成。
所述油脂分解菌制剂的制备方法为：将驯化复合菌与甘油混合并以120rpm搅拌15min，保存于-70℃，即得；其中，所述驯化复合菌的浓度为1010CFU/mL。
所述驯化复合菌的制备方法如下：将复合菌种接种到驯化培养基中培养，接种量为108CFU/mL；培养温度为34℃，所述驯化培养基的pH为7.2，摇床转速240rpm；培养完成时的驯化复合菌浓度为1010CFU/mL。
所述复合菌种由枯草芽孢杆菌、小木偶形芽孢杆菌、侧孢短芽孢杆菌、沼泽类芽孢杆菌、淤泥大洋芽孢杆菌、弯曲芽孢杆菌、韦氏芽孢杆菌、胶红酵母按质量比1:1:1:1:1:1:1:1组成。
所述驯化培养基的原料为：5重量份氯化钠、0.2重量份氯化镁、1.2重量份磷酸二氢钾、0.7重量份磷酸氢二钾、12重量份豆提取物、1000重量份蒸馏水、2重量份硫酸铵。
所述豆提取物的制备方法为：
⑴将豆子粉碎后过30目筛，再加入到正己烷中并在35℃以600rpm搅拌10h；在搅拌的同时采用频率40kHz、功率400W的超声波处理；所述豆子、正己烷的质量比为1:3；所述豆子为黄大豆、黑小豆、黑芸豆、花芸豆按质量比1:1:1:1的混合物；过滤，取滤液，在76℃、气压为66.5kPa的条件下以240rpm搅拌所述滤液，待正己烷完全蒸发完毕后得到豆萃取物；
⑵将由步骤⑴所得豆萃取物、橄榄油、金属盐增效剂按质量比10:20:1混合并在30℃以300rpm搅拌得到所述豆提取物。
所述金属盐增效剂为硝酸铜、硝酸钙按质量比1:1的混合物。
对比例4
一种油脂分解菌制剂，由驯化复合菌和甘油组成。
所述油脂分解菌制剂的制备方法为：将驯化复合菌与甘油混合并以120rpm搅拌15min，保存于-70℃，即得；其中，所述驯化复合菌的浓度为1010CFU/mL。
所述驯化复合菌的制备方法如下：将复合菌种接种到驯化培养基中培养，接种量为108CFU/mL；培养温度为34℃，所述驯化培养基的pH为7.2，摇床转速240rpm；培养完成时的驯化复合菌浓度为1010CFU/mL。
所述复合菌种由枯草芽孢杆菌、小木偶形芽孢杆菌、侧孢短芽孢杆菌、沼泽类芽孢杆菌、淤泥大洋芽孢杆菌、弯曲芽孢杆菌、韦氏芽孢杆菌、胶红酵母按质量比1:1:1:1:1:1:1:1组成。
所述驯化培养基的原料为：5重量份氯化钠、0.2重量份氯化镁、1.2重量份磷酸二氢钾、0.7重量份磷酸氢二钾、12重量份豆提取物、1000重量份蒸馏水、7重量份橄榄油。
所述豆提取物的制备方法为：
⑴将豆子粉碎后过30目筛，再加入到正己烷中并在35℃以600rpm搅拌10h；在搅拌的同时采用频率40kHz、功率400W的超声波处理；所述豆子、正己烷的质量比为1:3；所述豆子为黄大豆、黑小豆、黑芸豆、花芸豆按质量比1:1:1:1的混合物；过滤，取滤液，在76℃、气压为66.5kPa的条件下以240rpm搅拌所述滤液，待正己烷完全蒸发完毕后得到豆萃取物；
⑵将由步骤⑴所得豆萃取物、硫酸铵、金属盐增效剂按质量比10:5:1混合并在30℃以300rpm搅拌得到所述豆提取物。
所述金属盐增效剂为硝酸铜、硝酸钙按质量比1:1的混合物。
测试例1
油脂降解率测试：根据GB/T 22500-2008《动植物油脂紫外吸光度的测定标准》测量经过上述各实施例和对比例所得油脂分解菌制剂处理前后的油脂废水的中动植物油脂的紫外分光度，再根据油脂与吸光值的标准曲线计算出油脂的浓度。油脂降解率＝(初始油脂浓度-处理后油脂浓度)/初始油脂浓度×100％。其中，初始油脂浓度为40mg/L。在30℃、300rpm摇床中使用经过上述各实施例和对比例所得油脂分解菌制剂处理所述油脂废水，处理时间为48h，所述油脂分解菌制剂和所述油脂废水的质量比为1:50。测试结果如表1所示。
表1本发明各实施例和对比例所得油脂分解菌制剂的油脂降解率
油脂降解率(％)
实施例1 94.1
实施例2 91.7
实施例3 88.6
对比例1 77.5
对比例2 70.1
对比例3 81.9
对比例4 83.3
测试例2
五日生化需氧量(BOD5)测试：根据HJ 505-2009《水质五日生化需氧量(BOD5)的测定稀释与接种法》中的非稀释接种法测定经过上述各实施例和对比例所得油脂分解菌制剂处理后的BOD5。测试结果如表2所示。
表2经过本发明各实施例和对比例所得油脂分解菌制剂处理后的BOD5
Figure BDA0003034442820000141
Figure BDA0003034442820000151
实施例1-3(采用硝酸铜、硝酸钙中的一种或者两种作为所述金属盐增效剂)的油脂降解率＝(88.6-94.1)％、BOD5＝(13.5-30.1)mg/L明显优于对比例1(未采用实施例1中的金属盐增效剂)的油脂降解率＝77.5％、BOD5＝70.8mg/L，这是因为：Cu2+和Ca2+对芽孢杆菌和胶红酵母的脂肪酶有促进活性的作用；并且该两种金属阳离子可以起到稳定豆提取物中特异性蛋白酶抑制剂的作用。实施例1(采用硝酸铜、硝酸钙按质量比1:1的混合物作为所述金属盐增效剂)的油脂降解率＝93.1％、BOD5＝13.5mg/L明显优于实施例2-3(采用硝酸铜、硝酸钙中的一种作为所述金属盐增效剂)的油脂降解率＝(88.6-91.7)％、BOD5＝(15.7-16.1)mg/L，这是因为：Cu2+和Ca2+二者复配使用可以显著提高豆提取物对于芽孢杆菌和胶红酵母分解油脂的能力，这与由该两种阳离子的电子亲和力差异导致的和芽孢杆菌、胶红酵母的脂肪酶的活性中心相互间的电负性差有关。该两种金属阳离子与豆提取物中的特异性蛋白酶抑制剂之间的电离能差能够进一步地稳定豆提取物中特异性蛋白酶抑制剂的作用
实施例1(使用由特定方法制备的豆提取物)的油脂降解率＝93.1％、BOD5＝13.5mg/L明显优于对比例1-4的油脂降解率＝(70.1-83.3)％、BOD5＝(53.1-85.8)mg/L，这是因为：由本发明特定方法制得的豆提取物中含有特异蛋白酶抑制剂，特异蛋白酶抑制剂可以特异性地抑制芽孢杆菌和胶红酵母中特异性水解脂肪酶的蛋白酶的活性，从而削弱了脂肪酶的水解，以此增强了芽孢杆菌和胶红酵母对于油脂的分解能力；与此同时并不会影响到发挥其他正常生理功能的蛋白酶的活性。由本发明特定方法制备的豆提取物中的Cu2+和Ca2+对芽孢杆菌和胶红酵母的脂肪酶有促进活性的作用，可以增强芽孢杆菌分解油脂的能力。本发明所用到的硫酸铵和橄榄油不仅仅是起到氮源和碳源的作用：铵根离子和橄榄油中的ω-3脂肪酸、单不饱和Omega-9脂肪酸以氢键彼此联系，增强了彼此的稳定性的同时进一步地增强了豆萃取物中特异性蛋白酶抑制剂的稳定性，避免其在作为驯化培养基的原料使用之前就失去足够的反应活性。
需要说明的是，以上实施例仅用以说明本发明的技术方案而非限制。尽管参照较佳实施例对本发明进行了详细说明，本邻域的普通技术人员应当理解，可以对发明的技术方案进行修改或者等同替换，而不脱离本发明技术方案的范围，其均应涵盖在本发明的权利要求范围中。

Claims (8)

1.一种油脂分解菌制剂，其特征在于：由驯化复合菌和甘油组成。
2.如权利要求1所述油脂分解菌制剂，其特征在于，所述油脂分解菌制剂的制备方法为：将驯化复合菌与甘油混合即得。
3.如权利要求2所述油脂分解菌制剂，其特征在于，所述驯化复合菌的制备方法如下：将复合菌种接种到驯化培养基中培养。
4.如权利要求3所述油脂分解菌制剂，其特征在于所述复合菌种由枯草芽孢杆菌、小木偶形芽孢杆菌、侧孢短芽孢杆菌、沼泽类芽孢杆菌、淤泥大洋芽孢杆菌、弯曲芽孢杆菌、韦氏芽孢杆菌、胶红酵母中的一种或者多种组成。
5.如权利要求3所述油脂分解菌制剂，其特征在于，所述驯化培养基的原料为：氯化钠、氯化镁、磷酸二氢钾、磷酸氢二钾、豆提取物、蒸馏水。
6.如权利要求5所述油脂分解菌制剂，其特征在于，所述豆提取物的制备方法为：
⑴将豆子粉碎后过筛，再加入到正己烷中并搅拌；在搅拌的同时采用超声波处理；过滤，取滤液，在75-80℃、气压为60-68kPa的条件下以180-300rpm搅拌所述滤液，待正己烷完全蒸发完毕后得到豆萃取物；
⑵将由步骤⑴所得豆萃取物、橄榄油、硫酸铵、金属盐增效剂按质量比(8-15):(15-30):(3-10):(0.1-1.3)混合并在25-33℃以240-360rpm搅拌得到所述豆提取物。
7.如权利要求6所述油脂分解菌制剂，其特征在于：所述豆子为黄大豆、黑小豆、黑芸豆、花芸豆中的一种或者多种的混合物。
8.如权利要求6所述油脂分解菌制剂，其特征在于：所述金属盐增效剂为硝酸铜、硝酸钙中的一种或者两种的混合物。
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