CN108624582B - 用于土壤修复的微生物制剂 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种用于土壤修复的微生物制剂，包括多孔载体和负载在多孔载体中的复合微生物菌剂；多孔载体包含硅藻土、硫酸钙和海藻酸钠；复合微生物菌剂包含节杆菌(Arthrobacter sp.)LHM7719菌剂、沼泽红假单胞菌(Rhodopseudomonas palustris)菌剂和ACC脱氨酶。本发明将节杆菌(Arthrobacter sp.)LHM7719用于土壤修复领域，并与沼泽红假单胞菌(Rhodopseudomonas palustris)以及ACC脱氨酶复合，得到的微生物土壤修复剂能够调节土壤pH值，改善土壤板结问题，并能够降低土壤中土壤中重金属的含量，降解土壤中有机污染物。

Description

用于土壤修复的微生物制剂
技术领域
本发明属于土壤修复技术领域，具体涉及一种用于土壤修复的微生物制剂。
背景技术
土壤是人类赖以生存的资源，是生态系统中物质、能量循环的重要场所。土壤环境和生态安全是可持续发展的重要保证。随着工业的快速发展，工业废弃物的大量排放造成了大面积土地重金属、有机物含量严重超标，对生态环境、农业安全和可持续发展产生较大影响。土壤的生物修复主要包括：(1)利用土壤中原本存在的微生物的代谢能力对土壤进行修复；(2)添加具有高效分解污染物的特定微生物对土壤进行修复。由于工业废弃物污染的土壤中，污染物组成复杂，土壤中原本存在的微生物对这些污染物的降解能力不高。污染物通过饮水和食物链传递危及居民健康，重金属污染事件呈高发态势。目前，能实际进行土壤污染修复的方法很少。由于污染，土壤的营养功能、净化功能、缓冲功能和有机物支持功能正在丧失，迫切需要修复和治理。
发明内容
发明目的：本发明的目的是提供一种能够高效降解土壤中有机污染物，并降低土壤中重金属含量的的微生物制剂。
技术方案：本发明提供一种用于土壤修复的微生物制剂，包括多孔载体和负载在多孔载体中的复合微生物菌剂；多孔载体包含硅藻土、硫酸钙和海藻酸钠；复合微生物菌剂包含节杆菌(Arthrobacter sp.)LHM7719菌剂、沼泽红假单胞菌(Rhodopseudomonaspalustris)菌剂和ACC脱氨酶。
上述用于土壤修复的微生物制剂的制备方法包括以下步骤：
1)将节杆菌(Arthrobacter sp.)LHM7719发酵液和沼泽红假单胞菌(Rhodopseudomonas palustris)发酵液按照质量比为1：1.2～1.5的比例混合均匀，加入ACC脱氨酶，混合均匀，即得复合微生物菌液；
2)将硅藻土、海藻酸钠、碳酸钙和氯化钙以1：1～2：0.2～0.3：0.2～0.3的质量比在水中混合，超声分散均匀，加入步骤1)制得的复合微生物菌液，混合均匀得到分散液；
3)向浓度为0.05～0.1mol/L的硫酸镁溶液中逐滴滴加步骤2)制得的分散液，生成球状颗粒沉淀，离心分离所述球状颗粒沉淀，向分离得到的球状颗粒沉淀中缓慢滴加稀盐酸溶液，直至无气泡生成，用水洗涤得到的固体物质，离心，干燥，即得微生物制剂。采用上述方法制得的微生物制剂由粒径分布在1～500微米的微粒构成，微粒为多孔结构，微粒的孔径主要分布在50～100nm范围内。制得的球状颗粒中包含硅藻土、海藻酸钠和硫酸钙等吸附能力较强的成分，可将分散液中复合微生物菌液大部分成分吸附到球状颗粒中。
步骤2)中，加入的硅藻土、海藻酸钠、碳酸钙和氯化钙的总质量与加入的复合微生物菌液的质量之比为0.2～0.3：1。
上述节杆菌(Arthrobacter sp.)LHM7719发酵液的制备方法包括：将节杆菌(Arthrobacter sp.)LHM7719培养到对数期，然后按培养基体积2％～5％的接种量将培养到对数期的菌种接种到LB培养基中，25～37℃下，摇床震荡120～180rpm，培养40～48小时，得到节杆菌(Arthrobacter sp.)LHM7719发酵液。
上述节杆菌(Arthrobacter sp.)LHM7719保藏于中国普通微生物菌种保藏管理中心CGMCC，保藏编号为CGMCC NO.8181，该菌种已在公开号为CN103555620A、申请号为201310505522.2的在先专利中公开。
上述沼泽红假单胞菌(Rhodopseudomonas palustris)可以是常见的沼泽红假单胞菌(Rhodopseudomonas palustris)，其可按照常规的方法制备得到，例如，将购买得到的沼泽红假单胞菌(Rhodopseudomonas palustris)接种到种子培养基上培养得到种子培养物，将种子培养物接种到发酵罐中的发酵培养基中发酵。
上述沼泽红假单胞菌(Rhodopseudomonas palustris)优选为沼泽红假单胞菌2-8(Rhodopseudomonas palustris 2-8)。具体地，其发酵液可通过以下方法制备：
将沼泽红假单胞菌2-8(Rhodopseudomonas palustris 2-8)培养到对数期，然后按培养基体积2％～5％的接种量将培养到对数期的菌种接种到培养基A中，光照厌氧条件下，28～30℃下培养48～96小时，得到所述沼泽红假单胞菌(Rhodopseudomonaspalustris)发酵液。上述培养基A包括水和以下质量分数的组分：氯化铵0.1％、磷酸氢钠0.05％、硫酸镁或氯化镁0.02％、氯化钠0.2％、酵母膏或蛋白胨0.1～0.2％，所述培养基A的pH为6.8～7.1。
上述沼泽红假单胞菌2-8(Rhodopseudomonas palustris 2-8)保藏于中国典型培养物保藏中心CCTCC，保藏号为CCTCC NO:M 205147，该菌种已在公开号为CN100575480C、申请号200710089906.5的专利文件中公开。
复合微生物菌液中，节杆菌(Arthrobacter sp.)LHM7719发酵液的活菌含量为5×108～5×1010cfu/g，沼泽红假单胞菌(Rhodopseudomonas palustris)发酵液的活菌含量为5×109～5×1011cfu/g，ACC脱氨酶的浓度为25～35U/mg。
ACC脱氨酶的酶活定义为：在pH8.5，30℃，ACC脱氨酶存在条件下，每分钟分解ACC(1-氨基环丙烷羧酸)形成1.0μmolα-丁酮酸的酶量定义为一个酶活单位；ACC脱氨酶的浓度为25～35U/mg是指，每毫克用于土壤修复的微生物制剂中包含25～35个酶活单位的ACC脱氨酶。
步骤2)加入的碳酸钙由粒径为200～300目的碳酸钙颗粒组成；步骤3)中的硫酸镁溶液中，硫酸镁的含量以能够使步骤2)的分散液充分沉淀为准。
步骤3)中加入的稀盐酸溶液浓度优选为0.01～0.05mol/L。
有益效果：本发明的用于土壤修复的微生物制剂由粒径分布在1～500微米的微粒构成，可相对均匀地分散在土壤中，该微生物制剂使用包含硅藻土、硫酸钙和海藻酸钠的复合材料作为载体，载体对土壤中的重金属离子有较好的吸附作用；另外，本发明将节杆菌(Arthrobacter sp.)LHM7719用于土壤修复领域，并通过长时间的实验筛选，发现节杆菌(Arthrobacter sp.)LHM7719与沼泽红假单胞菌(Rhodopseudomonas palustris)以及ACC脱氨酶配合能够调节土壤pH值，改善土壤板结问题，降解土壤中有机污染物。
具体实施方式
实施例1
用于土壤修复的微生物制剂的制备方法为：
1)制备节杆菌(Arthrobacter sp.)LHM7719发酵液：
将节杆菌(Arthrobacter sp.)LHM7719置于装有种子培养基础的三角瓶中，在pH7.2、30℃的条件下进行种子培养到对数期，然后按培养基体积2％的接种量将培养到对数期的菌种接种到LB液体培养基中，pH 7.0、30℃下，摇床震荡180rpm，培养48小时，得到节杆菌(Arthrobacter sp.)LHM7719发酵液。
2)制备沼泽红假单胞菌(Rhodopseudomonas palustris)发酵液：
将活化的沼泽红假单胞菌2-8(Rhodopseudomonas palustris 2-8)接种到液体培养基A中，在光照强度为2000lux，温度为28～30℃条件下厌氧培养3天，然后按照3％的接种浓度在液体培养基A中，在光照强度为2000lux，温度为28℃条件下厌氧培养扩增2次，即得到沼泽红假单胞菌2-8发酵液。
液体培养基A由以下质量分数的成分组成：氯化铵0.1％、磷酸氢钠0.05％、硫酸镁或氯化镁0.02％、氯化钠0.2％、酵母膏0.1％，余量为水，液体培养基A的pH为7.0。
3)配制复合微生物菌液：
将步骤1)制得的节杆菌(Arthrobacter sp.)LHM7719发酵液和步骤2)制得的沼泽红假单胞菌(Rhodopseudomonas palustris)发酵液按照1：1.2的质量比混合均匀，加入ACC脱氨酶，制得复合微生物菌液。得到的复合微生物菌液中，ACC脱氨酶的浓度为30U/mg。
4)将硅藻土、海藻酸钠、200～300目的碳酸钙颗粒和氯化钙以1：1.5：0.3：0.3的质量比在水中混合，超声分散均匀，加入步骤3)制得的复合微生物菌液，使加入的硅藻土、海藻酸钠、碳酸钙和氯化钙的总质量与加入的复合微生物菌液的质量之比为0.2：1，混合均匀得到分散液；将该分散液用滴管逐滴滴加到浓度为0.1mol/L的硫酸镁溶液中，生成球状颗粒沉淀，离心分离所述球状颗粒沉淀，向分离得到的球状颗粒沉淀中缓慢滴加浓度为0.01mol/L的稀盐酸溶液，直至无气泡生成，用水洗涤得到的固体物质，离心，干燥，即得所述微生物制剂。制得的微生物制剂由粒径分布在1～500微米的微粒构成，微粒为多孔结构，微粒的孔径在50～100nm范围内。
实施例2
用于土壤修复的微生物制剂的制备方法为：
1)制备节杆菌(Arthrobacter sp.)LHM7719发酵液：
将节杆菌(Arthrobacter sp.)LHM7719置于装有种子培养基础的三角瓶中，在pH7.2、30℃的条件下进行种子培养到对数期，然后按培养基体积5％的接种量将培养到对数期的菌种接种到LB液体培养基中，pH 7.0、35℃下，摇床震荡150rpm，培养48小时，得到节杆菌(Arthrobacter sp.)LHM7719发酵液。
2)制备沼泽红假单胞菌(Rhodopseudomonas palustris)发酵液
将活化的沼泽红假单胞菌2-8(Rhodopseudomonas palustris 2-8)接种到液体培养基A中，在光照强度为2000lux，温度为28～30℃条件下厌氧培养3天，然后按照2％的接种浓度在液体培养基A中，在光照强度为2000lux，温度为30℃条件下厌氧培养扩增2次，即得到沼泽红假单胞菌2-8发酵液。
液体培养基A由以下质量分数的成分组成：氯化铵0.1％、磷酸氢钠0.05％、硫酸镁或氯化镁0.02％、氯化钠0.2％、蛋白胨0.2％，余量为水，液体培养基A的pH为7.0。
3)配制复合微生物菌液：
将步骤1)制得的节杆菌(Arthrobacter sp.)LHM7719发酵液和步骤2)制得的沼泽红假单胞菌(Rhodopseudomonas palustris)发酵液按照1：1.5的质量比混合均匀，加入ACC脱氨酶，制得微生物土壤修复剂。得到的微生物土壤修复剂中，ACC脱氨酶的浓度为35U/mg。
4)将硅藻土、海藻酸钠、200～300目的碳酸钙颗粒和氯化钙以1：2：0.3：0.2的质量比在水中混合，超声分散均匀，加入步骤3)制得的复合微生物菌液，使加入的硅藻土、海藻酸钠、碳酸钙和氯化钙的总质量与加入的复合微生物菌液的质量之比为0.3：1，混合均匀得到分散液；将该分散液用滴管逐滴滴加到浓度为0.1mol/L的硫酸镁溶液中，生成球状颗粒沉淀，离心分离所述球状颗粒沉淀，向分离得到的球状颗粒沉淀中缓慢滴加浓度为0.03mol/L的稀盐酸溶液，直至无气泡生成，用水洗涤得到的固体物质，离心，干燥，即得所述微生物制剂。制得的微生物制剂由粒径分布在1～500微米的微粒构成，微粒为多孔结构，微粒的孔径在50～100nm范围内。
实施例3
用于土壤修复的微生物制剂的制备方法为：
1)制备节杆菌(Arthrobacter sp.)LHM7719发酵液：
将节杆菌(Arthrobacter sp.)LHM7719置于装有种子培养基础的三角瓶中，在pH7.2、30℃的条件下进行种子培养到对数期，然后按培养基体积3％的接种量将培养到对数期的菌种接种到LB液体培养基中，pH 7.0、28℃下，摇床震荡120rpm，培养48小时，得到节杆菌(Arthrobacter sp.)LHM7719发酵液。
2)制备沼泽红假单胞菌(Rhodopseudomonas palustris)发酵液
将活化的沼泽红假单胞菌2-8(Rhodopseudomonas palustris 2-8)接种到液体培养基A中，在光照强度为2000lux，温度为30℃条件下厌氧培养3天，然后按照5％的接种浓度在液体培养基A中，在光照强度为2000lux，温度为30℃条件下厌氧培养扩增2次，即得到沼泽红假单胞菌2-8发酵液。
液体培养基A由以下质量分数的成分组成：氯化铵0.1％、磷酸氢钠0.05％、硫酸镁或氯化镁0.02％、氯化钠0.2％、蛋白胨0.1％，余量为水，液体培养基A的pH为7.0。
3)配制复合微生物菌液：
将步骤1)制得的节杆菌(Arthrobacter sp.)LHM7719发酵液和步骤2)制得的沼泽红假单胞菌(Rhodopseudomonas palustris)发酵液按照1：1.4的质量比混合均匀，加入ACC脱氨酶，制得微生物土壤修复剂。得到的微生物土壤修复剂中，ACC脱氨酶的浓度为25U/mg。
4)将硅藻土、海藻酸钠、200～300目的碳酸钙颗粒和氯化钙以1：1：0.2：0.2的质量比在水中混合，超声分散均匀，加入步骤3)制得的复合微生物菌液，使加入的硅藻土、海藻酸钠、碳酸钙和氯化钙的总质量与加入的复合微生物菌液的质量之比为0.2：1，混合均匀得到分散液；将该分散液用滴管逐滴滴加到浓度为0.05mol/L的硫酸镁溶液中，生成球状颗粒沉淀，离心分离所述球状颗粒沉淀，向分离得到的球状颗粒沉淀中缓慢滴加浓度为0.05mol/L的稀盐酸溶液，直至无气泡生成，用水洗涤得到的固体物质，离心，干燥，即得微生物制剂。制得的微生物制剂由粒径分布在1～500微米的微粒构成，微粒为多孔结构，微粒的孔径在50～100nm范围内。
对比例1
用于土壤修复的微生物制剂的制备方法为：
1)制备节杆菌(Arthrobacter sp.)LHM7719发酵液：
将节杆菌(Arthrobacter sp.)LHM7719置于装有种子培养基础的三角瓶中，在pH7.2、30℃的条件下进行种子培养到对数期，然后按培养基体积2％的接种量将培养到对数期的菌种接种到LB液体培养基中，pH 7.0、30℃下，摇床震荡180rpm，培养48小时，得到节杆菌(Arthrobacter sp.)LHM7719发酵液。
2)配制复合微生物菌液：
向步骤1)制得的节杆菌(Arthrobacter sp.)LHM7719发酵液中加入ACC脱氨酶，制得复合微生物菌液。得到的复合微生物菌液中，ACC脱氨酶的浓度为30U/mg。
3)将硅藻土、海藻酸钠、200～300目的碳酸钙颗粒和氯化钙以1：1.5：0.3：0.3的质量比在水中混合，超声分散均匀，加入步骤3)制得的复合微生物菌液，使加入的硅藻土、海藻酸钠、碳酸钙和氯化钙的总质量与加入的复合微生物菌液的质量之比为0.2：1，混合均匀得到分散液；将该分散液用滴管逐滴滴加到浓度为0.1mol/L的硫酸镁溶液中，生成球状颗粒沉淀，离心分离所述球状颗粒沉淀，向分离得到的球状颗粒沉淀中缓慢滴加浓度为0.01mol/L的稀盐酸溶液，直至无气泡生成，用水洗涤得到的固体物质，离心，干燥，即得所述微生物制剂。制得的微生物制剂由粒径分布在1～500微米的微粒构成，微粒为多孔结构，微粒的孔径在50～100nm范围内。
对比例2
用于土壤修复的微生物制剂的制备方法为：
1)制备沼泽红假单胞菌(Rhodopseudomonas palustris)发酵液：
将活化的沼泽红假单胞菌2-8(Rhodopseudomonas palustris 2-8)接种到液体培养基A中，在光照强度为2000lux，温度为28～30℃条件下厌氧培养3天，然后按照3％的接种浓度在液体培养基A中，在光照强度为2000lux，温度为28℃条件下厌氧培养扩增2次，即得到沼泽红假单胞菌2-8发酵液。
液体培养基A由以下质量分数的成分组成：氯化铵0.1％、磷酸氢钠0.05％、硫酸镁或氯化镁0.02％、氯化钠0.2％、酵母膏0.1％，余量为水，液体培养基A的pH为7.0。
2)配制复合微生物菌液：
向步骤1)制得的沼泽红假单胞菌(Rhodopseudomonas palustris)发酵液中加入ACC脱氨酶，制得复合微生物菌液。得到的复合微生物菌液中，ACC脱氨酶的浓度为30U/mg。
3)将硅藻土、海藻酸钠、200～300目的碳酸钙颗粒和氯化钙以1：1.5：0.3：0.3的质量比在水中混合，超声分散均匀，加入步骤3)制得的复合微生物菌液，使加入的硅藻土、海藻酸钠、碳酸钙和氯化钙的总质量与加入的复合微生物菌液的质量之比为0.2：1，混合均匀得到分散液；将该分散液用滴管逐滴滴加到浓度为0.1mol/L的硫酸镁溶液中，生成球状颗粒沉淀，离心分离所述球状颗粒沉淀，向分离得到的球状颗粒沉淀中缓慢滴加浓度为0.01mol/L的稀盐酸溶液，直至无气泡生成，用水洗涤得到的固体物质，离心，干燥，即得所述微生物制剂。制得的微生物制剂由粒径分布在1～500微米的微粒构成，微粒为多孔结构，微粒的孔径在50～100nm范围内。
对比例3
用于土壤修复的微生物制剂的制备方法为：
1)制备节杆菌(Arthrobacter sp.)LHM7719发酵液：
将节杆菌(Arthrobacter sp.)LHM7719置于装有种子培养基础的三角瓶中，在pH7.2、30℃的条件下进行种子培养到对数期，然后按培养基体积2％的接种量将培养到对数期的菌种接种到LB液体培养基中，pH 7.0、30℃下，摇床震荡180rpm，培养48小时，得到节杆菌(Arthrobacter sp.)LHM7719发酵液。
2)制备沼泽红假单胞菌(Rhodopseudomonas palustris)发酵液：
将活化的沼泽红假单胞菌2-8(Rhodopseudomonas palustris 2-8)接种到液体培养基A中，在光照强度为2000lux，温度为28～30℃条件下厌氧培养3天，然后按照3％的接种浓度在液体培养基A中，在光照强度为2000lux，温度为28℃条件下厌氧培养扩增2次，即得到沼泽红假单胞菌2-8发酵液。
液体培养基A由以下质量分数的成分组成：氯化铵0.1％、磷酸氢钠0.05％、硫酸镁或氯化镁0.02％、氯化钠0.2％、酵母膏0.1％，余量为水，液体培养基A的pH为7.0。
3)配制复合微生物菌液：
将步骤1)制得的节杆菌(Arthrobacter sp.)LHM7719发酵液和步骤2)制得的沼泽红假单胞菌(Rhodopseudomonas palustris)发酵液按照1：1.2的质量比混合均匀，制得复合微生物菌液。
4)将硅藻土、海藻酸钠、200～300目的碳酸钙颗粒和氯化钙以1：1.5：0.3：0.3的质量比在水中混合，超声分散均匀，加入步骤3)制得的复合微生物菌液，使加入的硅藻土、海藻酸钠、碳酸钙和氯化钙的总质量与加入的复合微生物菌液的质量之比为0.2：1，混合均匀得到分散液；将该分散液用滴管逐滴滴加到浓度为0.1mol/L的硫酸镁溶液中，生成球状颗粒沉淀，离心分离所述球状颗粒沉淀，向分离得到的球状颗粒沉淀中缓慢滴加浓度为0.01mol/L的稀盐酸溶液，直至无气泡生成，用水洗涤得到的固体物质，离心，干燥，即得所述微生物制剂。制得的微生物制剂由粒径分布在1～500微米的微粒构成，微粒为多孔结构，微粒的孔径在50～100nm范围内。
实施例4
用于土壤修复的微生物制剂对土壤中重金属的降解能力测试：
1)取冶炼石废渣堆周边污染土壤，风干，捣碎，过20目筛，充分混合均匀后置于高压灭菌锅中，110℃灭菌100分钟，冷却后备用。
2)将步骤1)灭菌后的土壤平均分成18份分别置于消毒后的容器中，将18份灭菌后的土壤分成6组，每组3份。取实施例1～3和对比例1～3制得的微生物制剂，每个实施例/对比例制得的微生物制剂对应加入到其中一组土壤中，混合均匀，其中每份土壤中加入的微生物制剂的质量占土壤质量的0.5％。
3)两个月后检测经处理后的土壤中重金属的可交换态的去除率，每组3份取平均值，结果如表1所示。
表1
Figure BDA0001665449470000091
Figure BDA0001665449470000101
复合微生物土壤修复剂对土壤中石油烃的降解能力测试：
1)取加油站污染土壤，破碎，筛分，去除污染土壤中植物根系和大石块等杂质，同时将大块土进行破碎，将土壤pH调整到6.5～7.5的范围内。
2)将步骤1)处理后的土壤平均分成18份分别置于消毒后的容器中，将18份灭菌后的土壤分成6组，每组3份。取实施例1～3和对比例1～3制得的复合微生物土壤修复剂，每个实施例/对比例制得的复合微生物土壤修复剂对应加入到其中一组土壤中，混合均匀，其中份土壤中加入的复合微生物土壤修复剂的质量占土壤质量的0.5％。
3)一个月后检测经处理后的土壤中VPH、EPA和TPH去除率。VPH相当于汽油，主要为C5～C10的脂肪烃、芳烃、烯烃和环烷烃；EPH相当于柴油，主要为C10～C40间能被二氯甲烷萃取且不被硅酸镁吸附的有机物总和；TPH为总石油烃(VPH和EPH之和)。每组3份取平均值，结果如表2所示。
表2
Figure BDA0001665449470000102
Figure BDA0001665449470000111

Claims (6)

1.一种用于土壤修复的微生物制剂，其特征在于，该微生物制剂包括多孔载体和负载在所述多孔载体中的复合微生物菌剂；所述多孔载体包含硅藻土、硫酸钙和海藻酸钠；所述复合微生物菌剂包含节杆菌(Arthrobacter sp.)LHM7719菌剂、沼泽红假单胞菌(Rhodopseudomonas palustris)菌剂和ACC脱氨酶；所述微生物制剂由 粒径分布在1～500微米的多孔微粒构成，所述多孔微粒的孔径在50～100nm范围内；沼泽红假单胞菌(Rhodopseudomonas palustris)为沼泽红假单胞菌2-8(Rhodopseudomonas palustris 2-8)；
所述的微生物制剂的制备方法包括以下步骤：
1)将节杆菌(Arthrobacter sp.)LHM7719发酵液和沼泽红假单胞菌(Rhodopseudomonas palustris)发酵液按照质量比为1：1.2～1.5的比例混合均匀，得到复合菌剂；向所述复合菌剂中加入ACC脱氨酶，混合均匀，即得复合微生物菌液；
2)将硅藻土、海藻酸钠、碳酸钙和氯化钙以1：1～2：0.2～0.3：0.2～0.3的质量比在水中混合，超声分散均匀，加入步骤1)制得的复合微生物菌液，混合均匀得到分散液；
3)向浓度为0.05～0.1mol/L的硫酸镁溶液中逐滴滴加步骤2)制得的分散液，生成球状颗粒沉淀，离心分离所述球状颗粒沉淀，向分离得到的球状颗粒沉淀中缓慢滴加稀盐酸溶液，直至无气泡生成，用水洗涤得到的固体物质，离心，干燥，即得所述微生物制剂；
步骤2)中，加入的 硅藻土、海藻酸钠、碳酸钙和氯化钙的总质量与复合微生物菌液的质量之比为0.2～0.3：1;
所述复合微生物菌液中，节杆菌(Arthrobacter sp.)LHM7719发酵液的活菌含量为5×10 8～5×10 10cfu/g，沼 泽红假单胞菌(Rhodopseudomonas palustris)发酵液的活菌含量为5×10 9～5×10 11cfu/ g，ACC脱氨酶的浓度为25～35U/mg。
2.根据权利要求1所述的用于土壤修复的微生物制剂，其特征在于，所述节杆菌(Arthrobacter sp.)LHM7719发酵液的制备方法包括：将节杆菌(Arthrobacter sp.)LHM7719培养到对数期，然后按培养基体积2％～5％的接种量将培养到对数期的菌种接种到LB培养基中，25～37℃下，摇床震荡120～180rpm，培养40～48小时，得到节杆菌(Arthrobacter sp.)LHM7719发酵液。
3.根据权利要求1所述的用于土壤修复的微生物制剂，其特征在于，沼泽红假单胞菌(Rhodopseudomonas palustris)为沼泽红假单胞菌2-8(Rhodopseudomonas palustris 2-8)。
4.根据权利要求1所述的用于土壤修复的微生物制剂，其特征在于，所述沼泽红假单胞菌(Rhodopseudomonas palustris)发酵液的制备方法包括：将沼泽红假单胞菌2-8(Rhodopseudomonas palustris 2-8)培养到对数期，然后按培养基体积2％～5％的接种量将培养到对数期的菌种接种到培养基A中，光照厌氧条件下，28～30℃下培养48～96小时，得到所述沼泽红假单胞菌(Rhodopseudomonas palustris)发酵液；所述培养基A包括水和以下质量分数的组分：氯化铵0.1％、磷酸氢钠0.05％、硫酸镁或氯化镁0.02％、氯化钠0.2％、酵母膏或蛋白胨0.1～0.2％，所述培养基A的pH为6.8～7.1。
5.根据权利要求1所述的用于土壤修复的微生物制剂，其特征在于，所述碳酸钙由粒径为200～300目的碳酸钙颗粒组成。
6.根据权利要求1所述的用于土壤修复的微生物制剂，其特征在于，所述稀盐酸溶液浓度为0.01～0.05mol/L。
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