CN113056274A

CN113056274A - 具有降低的毒性的杂化两性霉素b衍生物

Info

Publication number: CN113056274A
Application number: CN201980072996.8A
Authority: CN
Inventors: M·D·伯克; J·张; A·罕德尔瓦尔; A·桑塔马里亚
Original assignee: University of Illinois
Current assignee: University of Illinois
Priority date: 2018-09-07
Filing date: 2019-09-06
Publication date: 2021-06-29
Also published as: JP2021536462A; US20200079811A1; WO2020051465A1; AU2019335409A1; JP7477177B2; EP3846823A1; EP3846823A4; CA3111565A1; KR20210064247A; US11198705B2

Abstract

公开了两性霉素B(AmB)的衍生物，其特征在于与AmB相比改进的临床功效与降低的毒性。还公开了包含所述AmB衍生物的药物组合物、使用所述AmB衍生物的治疗方法和制备所述AmB衍生物的方法。

Description

具有降低的毒性的杂化两性霉素B衍生物

相关申请

本申请要求2018年9月7日提交的美国临时申请号62/728,203的优先权的权益，其内容通过引用以其整体并入本文。

政府支持

本发明在美国国家卫生研究院授予的资金号为GM118185的政府支持下完成。政府对本发明享有一定权利。

背景技术

两性霉素B(AmB)对广泛范围的真菌病原体具有有效的和剂量依赖性的杀真菌活性，并且已经逃避抗性超过半个世纪。与抑制真菌相反，AmB的杀真菌活性在缺乏稳健免疫系统以帮助清除感染的免疫受损患者中是必需的。当病原体的身份未知并且需要立即的经验性治疗时，广泛的抗真菌活性在危重疾病患者中尤其重要。不幸的是，AmB具有异常的毒性，这将其应用限制于通常无法根除疾病的低剂量方案。保留有效、广谱和抗性逃避的杀真菌活性但缺乏剂量限制性毒性的AmB衍生物将能够实现具有改进的临床功效的新的高剂量治疗范例。

发明内容

本发明的一个方面是式(I)表示的化合物或其药学上可接受的盐：

其中，每次出现时独立地：

X为-N(R²)-；

R¹为取代或未取代的选自以下的基团：烷基、环烷基、(环烷基)烷基、杂环基、(杂环基)烷基、芳基、杂芳基、芳烷基、杂芳烷基、酰基、氨基、酰氨基、氨基烷基和烷氧基；或者R¹和R²与它们所连接的氮一起可形成取代或未取代的3元至10元杂环，其中所述环为单环、双环、三环或螺环；

R²为氢或取代或未取代的选自以下的基团：烷基、环烷基、(环烷基)烷基、杂环基、(杂环基)烷基、芳基、杂芳基、芳烷基、杂芳烷基、酰基、氨基、酰氨基、氨基烷基和烷氧基；

R⁴选自仲氨基、叔氨基、酰氨基、叠氮基、异腈、硝基、脲、异氰酸酯、氨基甲酸酯和胍基(guanidinyl)；和

R⁵选自氢、烷基和卤代烷基。

本发明的一个方面是式(IV)表示的化合物或其药学上可接受的盐：

其中：

X为-N(R²)-；

R⁵选自氢、烷基和卤代烷基；

R⁶为C(O)OR^f；和

R^f选自2-烯-1-基、叔丁基、苄基和芴基甲基。

本发明的一个方面是式(V)表示的化合物或其药学上可接受的盐：

其中：

R⁵选自氢、烷基和卤代烷基；

-XR¹选自

本发明的一个方面是式(II)表示的化合物或其药学上可接受的盐：

其中，每次出现时独立地：

R⁴选自伯氨基、仲氨基、叔氨基、酰氨基、叠氮基、异腈、硝基、脲、异氰酸酯、氨基甲酸酯和胍基；和

R⁵选自氢、烷基和卤代烷基。

本发明的一个方面是式(III)表示的化合物或其药学上可接受的盐：

其中：

R⁵选自氢、烷基和卤代烷基；

R⁶为-C(O)OR^f；和

R^f选自2-烯-1-基、叔丁基、苄基和芴基甲基。

本发明的一个方面是药物组合物，其包含本发明的化合物和药学上可接受的载体。

本发明的一个方面是治疗真菌感染的方法，所述方法包括给予需要其的受试者治疗有效量的本发明的化合物，从而治疗所述真菌感染。

本发明的一个方面是根据方案1所示的四种转化中的任一种制备C2’epi-两性霉素B的C16脲衍生物的方法：

方案1

其中1表示

1；和

每种情况下R独立地选自氢、卤素、直链和支链烷基、环烷基、环烷基烷基、杂环基、芳基、杂芳基、芳烷基、杂芳烷基、羟基、巯基、羧基、氨基、酰氨基、叠氮基、硝基、氰基、氨基烷基和烷氧基。

附图说明

图1A表示两性霉素B、主要真菌固醇(麦角固醇)和主要人固醇(胆固醇)的化学结构。

图1B描述AmB的杀细胞作用的两步“固醇海绵”模型。

图2A表示AmB、AmdeB、C2’deOAmB和C2’epiAmB的化学结构和生物物理活性。

图2B表示AmB、AmdeB、C2’deOAmB和C2’epiAmB在原代人肾上皮细胞中的生物物理活性。

图2C表示AmB、AmdeB、C2’deOAmB和C2’epiAmB的麦角固醇和胆固醇活性。

图3A为N-碘酰基AmB的X射线晶体结构。

图3B描述对AmB-Erg复合物提出的结构模型。对胆固醇提出了类似模型。

图4表示由AmB经11步合成C2’epiAmB。

图5A描述固醇结合。用麦角固醇滴定由AmB体外形成的固醇海绵，并通过UV-Vis光谱学分析。

图5B描述固醇结合。用胆固醇滴定由AmB体外形成的固醇海绵，并通过UV-Vis光谱学分析。

图5C描述固醇结合。用麦角固醇滴定由C2’epiAmB体外形成的固醇海绵，并通过UV-Vis光谱学分析。

图5D描述固醇结合。用胆固醇滴定由C2’epiAmB体外形成的固醇海绵，并通过UV-Vis光谱学分析。

图6表示AmB-脱氧胆酸盐和C2’epiAmB-脱氧胆酸盐在小鼠中的毒性数据。

图7表示直接与C2’epiAmB比较的

的毒性数据，如通过肾基因毒性生物标志物判断。

图8A描述AmB和C2’epiAmB针对在一组假丝酵母(Candida)和曲霉属(Aspergillus)分离物中广泛的真菌病原体的体外抗真菌活性。

图8B描述AmB和C2’epiAmB针对在一组曲霉属分离物中广泛的真菌病原体的体外抗真菌活性。

图8C描述AmB和C2’epiAmB针对在一组临床相关的侵袭性霉菌中广泛的真菌病原体的体外抗真菌活性。

图9描述有和没有与麦角固醇预复合的AmB和C2’epiAmB针对白假丝酵母(C.albicans)的MIC。

图10表示AmB和C2’epiAmB在侵袭性假丝酵母病小鼠模型中的功效。

图11A表示由AmB实际三步合成AmBUrea。

图11B描述几种衍生物针对一组临床分离物的体外抗真菌活性。

图11C描述几种衍生物针对广泛范围的临床相关的病原体的体外抗真菌活性。

图11D描述AmB、AmBAU和AmBTACBU针对临床相关的假丝酵母物种和烟曲霉(A.fumigatus)的攻击菌株的体外抗真菌活性。

图12表示AmB、AmBMU和AmBAU在侵袭性假丝酵母病小鼠模型中的功效。

图13表示AmBCBU、AmBMEU、AmBAU、

和

在假丝酵母病小鼠模型中的功效。

图14描述AmB和AmBAU在小鼠、大鼠和狗中的PK性质。

图15描述AmB或衍生物与麦角固醇和胆固醇的结合，并且显示AmBMU保留结合胆固醇的能力，这与AmBUrea的保留的哺乳动物毒性一致。

图16表示具有非凡效力和最小毒性的杂化AmB衍生物C2’epiAmBAU。

图17表示合成靶向的杂化C2’epiAmBUrea。

图18描述C2’epiAmBAU杂化物与AmB、C2’epiAmB和AmBAU的体外抗真菌活性的比较。

图19显示临床定向的筛选漏斗(funnel)，以鉴定最有希望的C2’epiAmBUrea。

图20描述高剂量C2’epiAmBUrea的系统性功效评价。

具体实施方式

两性霉素B(AmB)为具有放线菌糖胺附加物的多烯大环内酯，完整的化合物具有以下结构：

AmB通常从结节链霉菌(Streptomyces nodosus)菌株获得。目前，在美国它被批准临床用于治疗进行性的、潜在威胁生命的真菌感染，包括例如系统性或深部组织假丝酵母病、曲霉病、隐球菌病、芽生菌病、球孢子菌病、组织胞浆菌病和毛霉菌病等感染。其通常配制用于静脉内注射。两性霉素B是可商购获得的，例如，作为

(Squibb)、

(Pfizer)、

(Enzon)和

(Astellas)。由于其不期望的毒性副作用，给药通常限于约1.0mg/kg/天的最大值，并且在人体中总累积剂量不超过约3g。

AmB通过形成杀细胞膜外固醇海绵而杀死真菌和人细胞两者。Anderson,T.M.等人,Nat Chem Biol 2014,10(5),400-6。这种大的聚集体位于脂质双层的表面上，并迅速提取膜固醇，这导致细胞死亡。不需要膜透化。基于该机理，基于小分子的配体选择性变构作用将能够实现麦角固醇的选择性结合超过胆固醇，并将消除AmB(C2’epiAmB形式)的哺乳动物毒性。参见B.C.等人,J Am Chem Soc 2013,135(23),8488-91。本发明公开了用于将麦角固醇和胆固醇两者结合到AmB固醇海绵上的K_D，其提供定量的和机理基础的(mechanistically-grounded)生物物理参数，以指导该临床重要的天然产物的治疗指数的合理优化。

本发明至少部分涉及发明人发现的AmB的其它衍生物，其特征还在于与AmB相比改进的治疗指数。各种衍生物(即本发明的化合物)可以是半合成的或全合成的。本发明的一个方面是开发AmB的新的合成的衍生物，其保留麦角固醇的有效结合，但没有显示胆固醇的可检测的结合。该衍生物保留针对许多酵母和霉菌的杀真菌效力，但显示零可检测的哺乳动物毒性。这证明麦角固醇与胆固醇相比不同的结合是可能的，并且提供保留所需抗真菌性质的AmB的无毒变体。本发明的化合物使得能够以显著改进的安全性分布(profile)实现新的高剂量治疗策略以根除威胁生命的侵袭性真菌感染。

本发明的化合物和本发明的药物组合物可用于抑制真菌生长。在一个实施方案中，使有效量的本发明的化合物与真菌接触，从而抑制真菌生长。在一个实施方案中，将本发明的化合物或其药学上可接受的盐加入或包括在组织培养基中。

本发明的化合物和本发明的药物组合物可用于治疗受试者的真菌感染。在一个实施方案中，将治疗有效量的本发明的化合物或其药学上可接受的盐给予需要其的受试者，从而治疗真菌感染。

酵母是分类在真菌界的真核生物体。真菌包括酵母、霉菌和较大生物体(包括蘑菇)。酵母和霉菌具有作为感染因子的临床相关性。酵母通常被描述为真菌的出芽形式。与本发明有关的特别重要的是能够在哺乳动物宿主中引起感染的酵母物种。这样的感染最常在免疫受损宿主中发生，包括对感染具有受损屏障的宿主(例如烧伤受害者)和免疫系统受损的宿主(例如接受化疗或免疫抑制治疗的宿主，和感染HIV的宿主)。致病酵母包括但不限于假丝酵母属以及隐球菌(Cryptococcus)的各种物种。在假丝酵母属的致病酵母中特别值得注意的是白假丝酵母、热带假丝酵母(C.tropicalis)、星形假丝酵母(C.stellatoidea)、光滑假丝酵母(C.glabrata)、克鲁斯假丝酵母(C.krusei)、近平滑假丝酵母(C.parapsilosis)、季也蒙氏假丝酵母(C.guilliermondii)、维斯氏假丝酵母(C.viswanathii)和葡萄牙假丝酵母(C.lusitaniae)。隐球菌属具体包括新型隐球菌(Cryptococcus neoformans)。酵母可以引起粘膜感染，例如人的口腔、食道和阴道感染，以及骨、血液、泌尿生殖道和中枢神经系统的感染。该列举是示例性的，而不是以任何方式限制。

许多真菌(除酵母外)可能在哺乳动物宿主中引起感染。这样的感染最常在免疫受损的宿主中发生，包括对感染具有受损屏障的宿主(例如烧伤受害者)和免疫系统受损的宿主(例如接受化疗或免疫抑制治疗的宿主，和感染HIV的宿主)。致病真菌(除酵母外)包括但不限于曲霉属、根霉属(Rhizopus)、毛霉属(Mucor)、组织胞浆菌属(Histoplasma)、球孢子菌属(Coccidioides)、芽生菌属(Blastomyces)、发癣菌属(Trichophyton)、小孢子菌属(Microsporum)和表皮癣菌属(Epidermophyton)的物种。上述中特别值得注意的是烟曲霉、黄曲霉(A.flavus)、黑曲霉(A.niger)、荚膜组织胞浆菌(H.capsulatum)、粗球孢子菌(C.immitis)和皮炎芽生菌(B.dermatitidis)。仅举几例，真菌可能引起肺、骨、血液、泌尿生殖道和中枢神经系统的系统性和深部组织感染。一些真菌是皮肤和指甲感染的原因。

定义

为了方便起见，本说明书、实施例和所附权利要求中使用的某些术语被收集在此。

冠词“一”和“一个”在本文中用于指一个或多于一个(即，至少一个)的冠词的语法对象。例如，“一个要素”是指一个要素或多于一个要素。

本文所用的术语“酰基”是指-C(＝O)R，其中R表示如本文所定义的烷基、芳基、杂芳基、芳烷基或杂芳烷基。酰胺(RC(O)NR₂)和酯(RC(O)OR’)是酰基化合物的类型，酮(RC(O)R)和醛(RC(O)H)也是。酰基的非限制性实例包括甲酰基、乙酰基、丙酰基和苄基。

术语“烯基”和“炔基”是本领域公认的，并且是指长度和可能的取代类似于本文所述的烷基的不饱和脂族基团，但分别含有至少一个双键或三键。

术语“烷氧基”是指通过氧原子附加到母体分子部分的如本文所定义的烷基。烷氧基的代表性实例包括但不限于甲氧基、乙氧基、丙氧基、2-丙氧基、丁氧基、叔丁氧基、戊氧基和己氧基。

术语“烷氧基羰基”是指通过由如本文所定义的-C(＝O)-表示的羰基附加到母体分子部分的如本文所定义的烷氧基。烷氧基羰基的代表性实例包括但不限于甲氧基羰基、乙氧基羰基和叔丁氧基羰基。

术语“烷基”是指含有1-10个碳原子的直链或支链烃。烷基的代表性实例包括但不限于甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、仲丁基、异丁基、叔丁基、正戊基、异戊基、新戊基和正己基。

术语“烷基”是本领域公认的，并且包括饱和脂族基团，包括直链烷基、支链烷基和环烷基(脂环族)。在某些实施方案中，直链或支链烷基在其主链中具有约30个或更少的碳原子(例如，直链为C₁-C₃₀，支链为C₃-C₃₀)，或者约20个或更少的碳原子。在某些实施方案中，直链或支链烷基在其主链中具有约10个或更少的碳原子。在某些实施方案中，直链烷基在其骨架中具有1-6个碳原子。在某些实施方案中，支链烷基在其主链中具有3-8个碳原子。直链和支链烷基的代表性实例包括但不限于甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、仲丁基、异丁基、叔丁基、正戊基、异戊基、新戊基和正己基。环烷基在其环结构中具有约3至约10个碳原子。在某些实施方案中，环烷基在环结构中具有3、4、5、6或7个碳。环烷基的代表性实例包括但不限于环丙基、环丁基、环戊基、环己基和环庚基。

本文所用的术语“烷基羰基”是指通过如本文所定义的羰基附加到母体分子部分的如本文所定义的烷基。烷基羰基的代表性实例包括但不限于乙酰基、1-氧代丙基、2,2-二甲基-1-氧代丙基、1-氧代丁基和1-氧代戊基。

本文所用的术语“烷基羰氧基”是指通过氧原子附加到母体分子部分的如本文所定义的烷基羰基。烷基羰氧基的代表性实例包括但不限于乙酰氧基、乙基羰氧基和叔丁基羰氧基。

本文所用的术语“烷硫基”是指通过硫原子附加到母体分子部分的如本文所定义的烷基。烷硫基的代表性实例包括但不限于甲硫基、乙硫基、叔丁硫基和己硫基。术语“芳硫基”、“烯硫基”和“芳基烷硫基”例如同样以相应的方式定义。

本文所用的术语“酰氨基”是指可由以下通式表示的部分：

其中R¹⁰和R¹¹各自独立地表示氢或取代或未取代的选自以下的基团：烷基、环烷基、环烷基烷基、杂环基、烯基、环烯基、氨基烷基、芳基、杂芳基、芳烷基和杂芳烷基。酰氨基的非限制性实例包括R¹⁰为氢并且R¹¹选自甲基、乙基、丙基、异丙基、丙烯基、环己基、苄基、

的那些。酰氨基的另外的非限制性实例包括R¹⁰为氢并且R¹¹选自-CH₂NH₂、-CH₂N(CH₃)₂和-CH(NH₂)(CH₂)_nNH₂的那些，其中n为整数1-6。酰氨基的又另外的非限制性实例包括R¹⁰为氢并且R¹¹选自

的那些。

术语“氨基”和“胺”是本领域公认的，并且是指未取代的和取代的胺，例如，可以由以下通式表示的部分：

其中R²⁰、R²¹和R²²各自独立地表示氢、烷基、烯基、-(CH₂)_m-R⁶¹；或者R²⁰和R²¹与它们所连接的N原子一起形成在环结构中具有4-10个原子的杂环，其中所述环为单环、双环、三环或螺环；R⁶¹表示芳基、环烷基、环烯基、杂环或多环；和m为0或在1-8范围内的整数。在其它实施方案中，R²⁰和R²¹(和任选的R²²)各自独立地表示氢、烷基、烯基或-(CH₂)_m-R⁶¹。因此，术语“烷基胺”包括具有与之附着的取代或未取代的烷基的如上所定义的胺基，即，R²⁰和R²¹中的至少一个为烷基。氨基的非限制性实例包括-NH₂、-N(H)CH₃、-N(H)CH₂CH₃、-N(H)CH₂CH₂CH₃、-N(H)CH₂CH₂CH₂CH₃、-N(CH₃)₂、-N(CH(CH₃)₂)₂、-N(CH₃)CH₂CH₃、-N(CH₃)CH₂CH₂CH₃、-N(CH₃)CH₂CH₂CH₂CH₃、-N(CH₂CH₃)₂、-N(CH₂CH₃)CH₂CH₂CH₃、-N(CH₂CH₃)CH₂CH₂CH₂CH₃、-N(CH₂CH₂CH₃)₂、-N(CH₂CH₂CH₃)CH₂CH₂CH₂CH₃、-N(CH₂CH₂CH₂CH₃)₂、

在某些实施方案中，氨基为-NH₂。在某些实施方案中，氨基为-N(H)CH₃。

本文所用的术语“氨基烷基”是指通过也如本文所定义的烷基附加到母体分子部分的如本文所定义的氨基。

术语“芳族”是指平面单环或多环结构，其特征在于含有4n+2个电子的环状共轭分子部分，其中n是整数的绝对值。在其环结构中仅包含碳原子的芳族基团称为“芳基”。在其环结构中包含一个或多个杂原子的芳族基团称为“杂芳基”或“杂芳族”基团。含有稠环或连接环的芳族基团也称为多环芳族基团。例如，在烃环结构中含有杂原子的双环芳族基团称为双环杂芳基。

可以包括0-4个杂原子的5元、6元和7元单环芳族基团的实例包括例如苯、吡咯、呋喃、噻吩、咪唑、噁唑、噻唑、三唑、吡唑、吡啶、吡嗪、哒嗪、嘧啶等。

多环芳族和杂芳族基团的非限制性实例包括喹啉、异喹啉、咔唑、萘、蒽和芘。

本发明的芳基可以任选被1、2、3、4或5个取代基取代，所述取代基独立地选自烯基、烷氧基、烷氧基羰基、烷氧基磺酰基、烷基、烷基羰基、烷基羰氧基、烷基磺酰基、烷硫基、炔基、酰氨基、氨基、羧基、氰基、甲酰基、卤素、卤代烷氧基、卤代烷基、羟基、羟烷基、巯基、硝基、氧膦基、甲硅烷基和甲硅烷氧基。术语“芳基”还包括具有两个或更多个环的多环环体系，其中两个或更多个碳为两个相邻环所共有(所述环为“稠环”)，其中至少一个环为芳族的，例如其它环可以是环烷基、环烯基、环炔基、芳基和/或杂环基。

本文所用的术语“芳基羰氧基”是指通过氧原子附加到母体分子部分的如本文所定义的芳基羰基。芳基羰氧基的代表性实例包括但不限于苯基羰氧基。

术语“亚芳基”是本领域公认的，并且如本文所用的，涉及通过去除如上所定义的芳基环的两个氢原子而获得的二齿部分。

本文所用的术语“芳基烷基”或“芳烷基”是指通过如本文所定义的烷基附加到母体分子部分的如本文所定义的芳基。芳基烷基的代表性实例包括但不限于苄基、2-苯基乙基、3-苯基丙基和2-萘-2-基乙基。

本文所用的术语“叠氮基”是指-N₃。

本文所用的术语“氨基甲酸酯”是指可由以下通式表示的部分：

其中R³⁰和R³¹各自独立地表示氢或取代或未取代的选自以下的基团：烷基、环烷基、环烷基烷基、杂环基、烯基、环烯基、芳基、杂芳基、芳烷基和杂芳烷基。氨基甲酸酯的非限制性实例包括R³⁰为氢并且R³¹选自甲基、乙基、丙基、异丙基、丙烯基、环己基、苄基、

的那些。

本文所用的术语“羰基”是指-C(＝O)-基团。

本文所用的术语“羧基”是指-CO₂H基团。

本文所用的术语“氰基”是指-CN基团。

本文所用的术语“环烷基烷基”是指通过也如本文所定义的烷基附加到母体分子部分的如本文所定义的环烷基。

本文所用的术语“胍基”是指可由以下通式表示的部分：

其中R⁴⁰、R⁴¹、R⁴²和R⁴³各自独立地表示氢或取代或未取代的选自以下的基团：烷基、环烷基、环烷基烷基、杂环基、烯基、环烯基、芳基、杂芳基、芳烷基和杂芳烷基。在一个实施方案中，R⁴⁰、R⁴¹、R⁴²和R⁴³各自表示氢。

术语“卤代”或“卤素”是指-F、-Cl、-Br或-I。

术语“卤代烷基”是指通过如本文所定义的烷基附加到母体分子部分的如本文所定义的至少一个卤素。卤代烷基的代表性实例包括但不限于氯甲基、2-氟乙基、三氟甲基、五氟乙基和2-氯-3-氟戊基。

本文所用的术语“杂芳烷基”是指通过如本文所定义的烷基附加到母体分子部分的如本文所定义的杂芳基。杂芳基烷基的代表性实例包括但不限于吡啶-3-基甲基和2-(噻吩-2-基)乙基。

本文所用的术语“杂芳基”包括芳族环体系，包括但不限于单环、双环和三环，并且具有3-12个原子，包括至少一个杂原子，例如氮、氧或硫。为了举例说明，但不应将其解释为限制本发明的范围，以下是杂芳基的实例：氮杂吲哚基、苯并(b)噻吩基、苯并咪唑基、苯并呋喃基、苯并噁唑基、苯并噻唑基、苯并噻二唑基、苯并三唑基、苯并噁二唑基、呋喃基、咪唑基、咪唑并吡啶基、吲哚基、二氢吲哚基、吲唑基、异二氢吲哚基、异噁唑基、异噻唑基、异喹啉基、噁二唑基、噁唑基、嘌呤基、吡喃基、吡嗪基、吡唑基、吡啶基、嘧啶基、吡咯基、吡咯并[2,3-d]嘧啶基、吡唑并[3,4-d]嘧啶基、喹啉基、喹唑啉基、三唑基、噻唑基、噻吩基(thiophenyl)、四氢吲哚基、四唑基、噻二唑基、噻吩基(thienyl)、硫代吗啉基、三唑基或托烷基。杂芳基可以被0、1、2、3、4或5个取代基取代，所述取代基独立地选自烯基、烷氧基、烷氧基羰基、烷氧基磺酰基、烷基、烷基羰基、烷基羰氧基、烷基磺酰基、烷硫基、炔基、酰氨基、氨基、羧基、氰基、甲酰基、卤素、卤代烷氧基、卤代烷基、羟基、羟烷基、巯基、硝基、氧膦基、甲硅烷基和甲硅烷氧基。

术语“杂原子”是本领域公认的，并且是指除碳或氢之外的任何元素的原子。说明性的杂原子包括硼、氮、氧、磷、硫和硒。

本文所用的术语“杂环基”是指非芳族环体系，包括但不限于单环、双环、三环和螺环，其可以是完全饱和的或者其可以含有一个或多个不饱和单元(为了避免疑问，不饱和度不产生芳族环体系)并且具有3-12个原子，包括至少一个杂原子，例如氮、氧或硫。为了举例说明，但不应将其解释为限制本发明的范围，以下是杂环的实例：氮杂环庚烯、氮杂环丁烷基、吗啉基、氧代哌啶基、氧代吡咯烷基、哌嗪基、哌啶基、吡咯烷基、奎宁环基(quinicludinyl)、硫代吗啉基、四氢吡喃基和四氢呋喃基。杂环基可以被0、1、2、3、4或5个取代基取代，所述取代基独立地选自烯基、烷氧基、烷氧基羰基、烷氧基磺酰基、烷基、烷基羰基、烷基羰氧基、烷基磺酰基、烷硫基、炔基、酰氨基、氨基、羧基、氰基、甲酰基、卤素、卤代烷氧基、卤代烷基、羟基、羟烷基、巯基、硝基、氧膦基、甲硅烷基和甲硅烷氧基。

本文所用的术语“羟基”是指-OH基团。

本文所用的术语“羟烷基”是指通过如本文所定义的烷基附加到母体分子部分的如本文所定义的至少一个羟基。羟烷基的代表性实例包括但不限于羟甲基、2-羟基乙基、3-羟基丙基、2,3-二羟基戊基和2-乙基-4-羟基庚基。

本文所用的术语“硝基”是指-NO₂基团。

本文所用的术语“甲硅烷基”包括甲硅烷基(H₃Si-)的烃基衍生物(即，(烃基)₃Si-)，其中烃基为通过从烃去除氢原子而形成的一价基团(例如乙基、苯基)。烃基可以是不同基团的组合，所述不同基团可以变化以提供许多甲硅烷基，例如三甲基甲硅烷基(TMS)、叔丁基二苯基甲硅烷基(TBDPS)、叔丁基二甲基甲硅烷基(TBS/TBDMS)、三异丙基甲硅烷基(TIPS)和[2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基]甲基(SEM)。

本文所用的术语“甲硅烷氧基”是指通过氧原子附加到母体分子的如本文所定义的甲硅烷基。

本文所用的术语“巯基”是指-SH基团。

术语“磺酰基”为本领域公认的并且是指-SO₂ ^-。

本文所用的术语“脲”是指可由以下通式表示的部分：

其中X为-N(R²)-；

R¹为取代或未取代的选自以下的基团：烷基、环烷基、(环烷基)烷基、杂环基、(杂环基)烷基、芳基、杂芳基、芳烷基、杂芳烷基、酰基、氨基、酰氨基、氨基烷基和烷氧基；或者-N(R¹)(R²)可以表示取代或未取代的3元至10元杂环，其中所述环为单环、双环、三环或螺环；

R²独立地为氢或取代或未取代的选自以下的基团：烷基、环烷基、(环烷基)烷基、杂环基、(杂环基)烷基、芳基、杂芳基、芳烷基、杂芳烷基、酰基、氨基、酰氨基、氨基烷基和烷氧基。

术语三氟甲磺酰基、甲苯磺酰基、甲磺酰基和九氟磺酰基是本领域公认的，并且分别指三氟甲磺酰基、对甲苯磺酰基、甲磺酰基和九氟丁磺酰基。术语三氟甲磺酸酯、甲苯磺酸酯、甲磺酸酯和九氟丁磺酸酯官能团是本领域公认的，并且分别是指三氟甲磺酸酯、对甲苯磺酸酯、甲磺酸酯和九氟丁磺酸酯官能团和含有所述基团的分子。

缩写Me、Et、Ph、Tf、Nf、Ts和Ms分别表示甲基、乙基、苯基、三氟甲烷磺酰基、九氟丁烷磺酰基、对甲苯磺酰基和甲烷磺酰基。本领域普通有机化学家使用的更全面的缩写列举出现在Journal of Organic Chemistry的每卷的第一期中；该列举通常在题为StandardList of Abbreviations的表中呈现。

包含在本发明的组合物中的某些化合物可以以特定的几何或立体异构形式存在。此外，本发明的聚合物也可以是光学活性的。本发明预期所有这样的化合物，包括顺式和反式异构体、R-和S-对映体、非对映体、(D)-异构体、(L)-异构体、其外消旋混合物和其它混合物，这些都落入本发明的范围内。另外的不对称碳原子可以存在于取代基(例如烷基)中。所有这样的异构体及其混合物都旨在包括在本发明中。

例如，如果需要本发明的化合物的特定对映体，则可以通过不对称合成或通过手性助剂衍生来制备，其中分离所得非对映体混合物并裂解助剂基团以提供纯的所需对映体。或者，当分子含有碱性官能团(例如氨基)或酸性官能团(例如羧基)时，用合适的光学活性酸或碱形成非对映体盐，然后通过本领域公知的分级结晶或色谱方法拆分这样形成的非对映体，并随后回收纯的对映体。

应当理解，“取代”或“被…取代”包括隐含的条件，即这样的取代与取代的原子和取代基的允许化合价一致，并且取代产生稳定的化合物，例如，其不会自发地经历转化，例如通过重排、环化、消除或其它反应。

术语“取代的”还预期包括有机化合物的所有可允许的取代基。在广义方面，可允许的取代基包括有机化合物的无环和环状、支链和非支链、碳环和杂环、芳族和非芳族取代基。说明性的取代基包括例如烷基、烯基、炔基、芳基、芳烷基、杂环基、(杂环基)烷基、(环烷基)烷基、烷氧基、芳氧基、烷氧基羰基、烷氧基磺酰基、芳氧基羰基、芳氧基磺酰基、烷基羰基、芳基羰基、烷基羰氧基、芳基羰氧基、烷基磺酰基、芳基磺酰基、烷基磺酰氧基、芳基磺酰氧基、烷硫基、芳硫基、酰氨基、氨基、羧基、氰基、甲酰基、卤素、卤代烷氧基、卤代烷基、羟基、羟烷基、巯基、硝基、氧膦基、酰基、酰氧基、甲硅烷基和甲硅烷氧基。对于适当的有机化合物，可允许的取代基可以是一个或多个，并且可以相同或不同。为了本发明的目的，杂原子(例如氮)可以具有氢取代基和/或本文所述的有机化合物的任何可允许的取代基，其满足杂原子的化合价。本发明不旨在以任何方式受限于有机化合物的可允许的取代基。

本文所用的短语“保护基团”是指保护潜在反应性官能团免于不希望的化学转化的临时取代基。这样的保护基团的实例分别包括羧酸的酯、醇的甲硅烷基醚、醛和酮的缩醛和缩酮。保护基团化学领域已有综述(Greene,T.W.；Wuts,P.G.M.Protective Groups inOrganic Synthesis,第2版；Wiley:New York,1991)。本发明的化合物的保护形式包括在本发明的范围内。

为了本发明的目的，化学元素根据元素周期表CAS版本,Handbook of Chemistryand Physics,第67版,1986-87,内封面鉴定。

本发明的化合物

本发明提供了许多AmB的衍生物，包括特征在于以下的衍生物：(i)在C13的某些修饰；(ii)在C3’的某些N修饰；(iii)在C16的某些脲衍生物；和(iv)在C16的某些脲衍生物和C2’epiAmB的组合。

例如，本发明提供了许多AmB的衍生物，包括特征在于以下的衍生物：(i)在C13的某些修饰；(ii)在C3’的某些N修饰；(iii)在C16的某些脲衍生物；和(iv)在C16的某些脲衍生物和C2’epiAmB的组合。

其中，每次出现时独立地：

X为-N(R²)-；

R⁴选自仲氨基、叔氨基、酰氨基、叠氮基、异腈、硝基、脲、异氰酸酯、氨基甲酸酯和胍基；和

R⁵选自氢、烷基和卤代烷基。

在某些实施方案中，R²为氢。

在某些实施方案中，-XR¹选自-NHCH₂CH₃、-NHCH₂CH₂CH₃、-NHCH(CH₃)₂、-NH(2-丁基)、-NH环丙基、-NH环丁基、-NH环戊基、-NH环己基、-NHCH₃、

其中，每次出现时独立地：

R^a为氢或取代或未取代的选自以下的基团：烷基、环烷基、(环烷基)烷基、杂环基、(杂环基)烷基、芳基、杂芳基、芳烷基、杂芳烷基、酰基、氨基、酰氨基、氨基烷基和烷氧基；

R^b为氢、卤素、羟基、巯基、硝基、氰基、或取代或未取代的选自以下的基团：烷基、环烷基、(环烷基)烷基、杂环基、(杂环基)烷基、芳基、杂芳基、芳烷基、杂芳烷基、羧基、酰基、酰氧基、氨基、酰氨基、叠氮基、氨基烷基和烷氧基；

R^c为氢或取代或未取代的选自以下的基团：烷基、环烷基、(环烷基)烷基、杂环基、(杂环基)烷基、芳基、杂芳基、芳烷基、杂芳烷基、酰基、氨基、酰氨基和氨基烷基；和

R^d为氢或取代或未取代的选自以下的基团：烷基、环烷基、(环烷基)烷基、杂环基、(杂环基)烷基、芳基、杂芳基、芳烷基、杂芳烷基、酰基、氨基、酰氨基、氨基烷基和烷氧基；或者，当-XR¹为

时，R^a和R^d与它们所连接的氮一起可形成取代或未取代的3元至10元杂环，其中所述环为单环、双环、三环或螺环。

在某些实施方案中，-XR¹选自

在某些实施方案中，-XR¹选自

在某些实施方案中，-XR¹选自-NHCH₂CH₃、-NHCH₂CH₂CH₃、-NHCH(CH₃)₂、-NH(2-丁基)、-NH环丙基、-NH环丁基、-NH环戊基、-NH环己基、

在某些实施方案中，-XR¹选自

在某些实施方案中，R⁴为仲氨基。

在某些实施方案中，R⁴为叔氨基。

在某些实施方案中，R⁴为酰氨基。

在某些实施方案中，R⁴为叠氮基。

在某些实施方案中，R⁴为异腈。

在某些实施方案中，R⁴为硝基。

在某些实施方案中，R⁴为脲。

在某些实施方案中，R⁴为异氰酸酯。

在某些实施方案中，R⁴为氨基甲酸酯。

在某些实施方案中，R⁴为胍基。

在某些实施方案中，R⁴选自

其中

R^e为氢或取代或未取代的选自以下的基团：烷基、环烷基、(环烷基)烷基、杂环基、(杂环基)烷基、芳基、杂芳基、芳烷基、杂芳烷基、酰基、氨基、酰氨基、氨基烷基和烷氧基。

在某些实施方案中，R⁵为氢。

在某些实施方案中，R⁵为烷基。

在某些实施方案中，R⁵为卤代烷基。

其中：

X为-N(R²)-；

R⁵选自氢、烷基和卤代烷基；

R⁶为C(O)OR^f；和

R^f选自2-烯-1-基、叔丁基、苄基和芴基甲基。

在某些实施方案中，R²为氢。

其中，每次出现时独立地：

在某些实施方案中，-XR¹选自

在某些实施方案中，-XR¹选自

在某些实施方案中，-XR¹选自

在某些实施方案中，-XR¹选自

在某些实施方案中，R⁵为氢。

在某些实施方案中，R⁵为烷基。

在某些实施方案中，R⁵为卤代烷基。

在某些实施方案中，R^f为2-烯-1-基。

在某些实施方案中，R^f为叔丁基。

在某些实施方案中，R^f为苄基。

在某些实施方案中，R^f为芴基甲基。

其中：

R⁵选自氢、烷基和卤代烷基；

-XR¹选自

在某些实施方案中，R⁵为氢。

在某些实施方案中，R⁵为烷基。

在某些实施方案中，R⁵为卤代烷基。

在某些实施方案中，-XR¹为

在某些实施方案中，R⁵为氢；和-XR¹为

其中，每次出现时独立地：

R⁵选自氢、烷基和卤代烷基。

在某些实施方案中，R⁴为伯氨基。

在某些实施方案中，R⁴为仲氨基。

在某些实施方案中，R⁴为叔氨基。

在某些实施方案中，R⁴为酰氨基。

在某些实施方案中，R⁴为叠氮基。

在某些实施方案中，R⁴为异腈。

在某些实施方案中，R⁴为硝基。

在某些实施方案中，R⁴为脲。

在某些实施方案中，R⁴为异氰酸酯。

在某些实施方案中，R⁴为氨基甲酸酯。

在某些实施方案中，R⁴为胍基。

在某些实施方案中，R⁴选自

其中

在某些实施方案中，R⁵为氢。

在某些实施方案中，R⁵为烷基。

在某些实施方案中，R⁵为卤代烷基。

其中：

R⁵选自氢、烷基和卤代烷基；

R⁶为-C(O)OR^f；和

R^f选自2-烯-1-基、叔丁基、苄基和芴基甲基。

在某些实施方案中，R⁵为氢。

在某些实施方案中，R⁵为烷基。

在某些实施方案中，R⁵为卤代烷基。

在某些实施方案中，R^f为2-烯-1-基。

在某些实施方案中，R^f为叔丁基。

在某些实施方案中，R^f为苄基。

在某些实施方案中，R^f为芴基甲基。

药物组合物

本发明还提供了药物组合物及其制备方法。

本发明的一个方面是药物组合物，其包含本发明的化合物；和药学上可接受的载体。在某些实施方案中，本发明为药物组合物，其包含本发明的化合物或其药学上可接受的盐和药学上可接受的载体。术语“药学上可接受的载体”是指一种或多种适合给予人或其它脊椎动物的相容的固体或液体填料、稀释剂或包封物质。术语“载体”表示天然或合成的有机或无机成分，其与活性成分组合以促进应用。药物组合物的组分也能够与本发明的化合物混合，并且彼此混合，其方式使得不存在会显著损害所需药物功效的相互作用。

在某些实施方案中，药物组合物为静脉内剂型。

在某些实施方案中，药物组合物为口服剂型。

在某些实施方案中，药物组合物为脂质体夹层的或脂质体包封的活性化合物的冻干制剂。

在某些实施方案中，药物组合物为化合物在水性悬浮液中的脂质复合物。

本发明的药物组合物的前述实施方案是为了示例性的而非限制性的。

还提供了制备这样的药物组合物的方法。所述方法包括将本发明的化合物或其药学上可接受的盐放置在药学上可接受的载体中。

本发明的方法

本发明的化合物可用于抑制真菌和酵母的生长，特别包括作为病原体的具有临床意义的真菌和酵母。有利地，与AmB相比，本发明的化合物具有改进的治疗指数，从而提供与AmB相比具有改进的功效和降低的毒性的药剂。本发明的化合物可用于治疗真菌和酵母感染的方法，特别包括系统性真菌和酵母感染。本发明的化合物还可用于制造用于治疗真菌和酵母感染(特别包括系统性真菌和酵母感染)的药物。本发明进一步提供本发明的化合物用于治疗真菌和酵母感染(特别包括系统性真菌和酵母感染)的用途。

本发明的一个方面是治疗真菌感染的方法，所述方法包括给予需要其的受试者治疗有效量的本发明的化合物，从而治疗真菌感染。

本文所用的“抑制(inhibit)”或“抑制(inhibiting)”是指与对照相比，降低客观上可测量的量或程度。在一个实施方案中，抑制(inhibit)或抑制(inhibiting)是指与对照相比降低至少统计学显著的量。在一个实施方案中，抑制(inhibit)或抑制(inhibiting)是指与对照相比降低至少5％。在各种单独的实施方案中，抑制(inhibit)或抑制(inhibiting)指与对照相比降低至少10％、15％、20％、25％、30％、33％、40％、50％、60％、67％、70％、75％、80％、90％或95百分比(％)。

本文所用的术语“治疗(treat)”和“治疗(treating)”是指进行干预，其导致(a)预防受试者中的病况或疾病发生，所述受试者可能处于发展或倾向于患有所述病况或疾病的风险但尚未被诊断为患有所述病况或疾病；(b)抑制病况或疾病，例如减缓或阻止其发展；或者(c)缓解或改善病况或疾病，例如，引起病况或疾病的消退。在一个实施方案中，术语“治疗(treating)”和“治疗(treat)”是指进行干预，其导致(a)抑制病况或疾病，例如，减缓或阻止其发展；或者(b)缓解或改善病况或疾病，例如，引起病况或疾病的消退。例如，在一个实施方案中，术语“治疗(treating)”和“治疗(treat)”是指进行干预，其导致(a)抑制真菌感染，例如，减慢或阻止其发展；或者(b)减轻或改善真菌感染，例如引起真菌感染的消退。

本文所用的“真菌感染”是指受试者体内或受试者被如本文所定义的真菌感染。在一个实施方案中，术语“真菌感染”包括酵母感染。本文所用的“酵母感染”是指受试者体内或受试者被如本文所定义的酵母感染。

本文所用的“受试者”是指活的哺乳动物。在各种实施方案中，受试者是非人哺乳动物，包括但不限于小鼠、大鼠、仓鼠、豚鼠、兔、绵羊、山羊、猫、狗、猪、马、牛或非人灵长类动物。在一个实施方案中，受试者是人。

本文所用的“患有真菌感染的受试者”是指表现出真菌感染的至少一种客观表现的受试者。在一个实施方案中，患有真菌感染的受试者是已经诊断为患有真菌感染并且需要其治疗的受试者。诊断真菌感染的方法是公知的，并且在此不需要详细描述。

本文所用的“患有酵母感染的受试者”是指表现出酵母感染的至少一种客观表现的受试者。在一个实施方案中，患有酵母感染的受试者是已经被诊断为患有酵母感染并且需要其治疗的受试者。诊断酵母感染的方法是公知的，并且在此不需要详细描述。

在某些实施方案中，化合物静脉内给予。

在某些实施方案中，化合物口服给予。

在某些实施方案中，化合物系统性给予。

在某些实施方案中，化合物肠胃外给予。

在某些实施方案中，化合物腹膜内给予。

在某些实施方案中，化合物经肠给予。

在某些实施方案中，化合物眼内给予。

在某些实施方案中，化合物局部给予。

本发明预期给予本发明的化合物的另外的路线，包括但不限于囊内(膀胱)、肺和鞘内。

本文所用短语“有效量”是指足以实现所需生物学作用的任何量。

本文所用的短语“治疗有效量”是指足以实现所需治疗作用(例如治疗真菌或酵母感染)的量。

对于本文所述的任何化合物，治疗有效量通常可以最初从体外研究、动物模型或体外研究和动物模型两者确定。体外方法是公知的，并且可以包括确定最小抑制浓度(MIC)、最小杀真菌浓度(MFC)、生长抑制50％的浓度(IC₅₀)、生长抑制90％的浓度(IC₉₀)等。治疗有效量也可以从已经在人体中测试的本发明的化合物和已知表现出相似药理学活性的化合物如其它相关活性剂(例如AmB)的人体数据确定。肠胃外给药可能需要较高剂量。可以基于给予的化合物的相对生物利用度和效力来调节施加的剂量。基于本文所述的方法和本领域公知的其它方法调节剂量以实现最大功效完全在普通技术人员的能力范围内。

对于本文所述的任何化合物，用于人类受试者的治疗有效量可以最初从体外研究、动物模型或体外研究和动物模型两者确定。用于人类受试者的治疗有效量也可以从已经在人体中测试的本发明的化合物和已知表现出相似药理学活性的化合物如其它相关活性剂(例如AmB)的人体数据确定。肠胃外给药可能需要较高剂量。可以基于给予的化合物的相对生物利用度和效力来调节施加的剂量。基于本文所述的方法和本领域公知的其它方法调节剂量以实现最大功效完全在普通技术人员的能力范围内。

给药和制剂

本发明的化合物可以与其它治疗剂组合。本发明的化合物和其它治疗剂可以同时或顺序给药。当同时给予其它治疗剂时，它们可以在相同或分开的制剂中给药，但它们基本上同时给药。当其它治疗剂和本发明的化合物暂时分开给药时，其它治疗剂彼此顺序给药并与本发明的化合物顺序给药。这些化合物的给药之间的时间间隔可以是几分钟之内或者可以更长。

其它治疗剂的实例包括其它抗真菌剂(包括AmB)以及其它抗生素、抗病毒剂、抗炎剂、免疫抑制剂和抗癌剂。

如上所述，“有效量”是指足以实现所需生物学作用的任何量。与本文提供的教导相结合，通过在各种活性化合物和加权因子(例如效力、相对生物利用度、患者体重、不良副作用的严重性和优选的给药模式)中选择，可以计划有效的预防性或治疗性治疗方案，其不引起实质上不想要的毒性，并且仍然有效治疗特定的受试者。任何具体应用的有效量可以根据这样的因素(例如所治疗的疾病或病况、所给予的本发明的具体化合物、受试者的大小或疾病或病况的严重性)而变化。本领域普通技术人员可以经验性地确定本发明的特定化合物和/或其它治疗剂的有效量，而不需要过度的实验。通常优选使用最大剂量，即根据一些医学判断的最高安全剂量。可以预期每天多次给药以实现化合物的适当系统性水平。适当系统性水平可以通过例如测量患者药物的峰值或持续血浆水平来确定。“剂量(dose)”和“剂量(dosage)”在本文中可互换使用。

通常，对于人类受试者，活性化合物的每日口服剂量为约0.01mg/kg/天至1000mg/kg/天。预期每天一次或几次给药的0.5-50mg/kg范围内的口服剂量将产生所需的结果。可以适当地调节剂量以实现所需的药物水平，局部或系统性的，这取决于给药模式。例如，预期静脉内给药将是每天低一个数量级至几个数量级的剂量。在这样的剂量下在受试者中的反应不足的情况下，甚至可以使用更高剂量(或通过不同的、更局部的递送路线的有效的更高剂量)至患者耐受性允许的程度。预期每天多次剂量以实现化合物的适当系统性水平。

在一个实施方案中，本发明的化合物的静脉内给予通常可以是0.1mg/kg/天至20mg/kg/天。因此静脉内给药可以类似于或有利地可以超过AmB的最大耐受剂量。静脉内给药也可以类似于或有利地可以超过AmB的最大耐受日剂量。静脉内给药也可以类似于或有利地可以超过AmB的最大耐受累积剂量。

静脉内给药也可以类似于或有利地可以超过AmB的最大推荐剂量。静脉内给药也可以类似于或有利地可以超过AmB的最大推荐日剂量。静脉内给药也可以类似于或有利地可以超过AmB的最大推荐累积剂量。

对于本文所述的任何化合物，治疗有效量可以最初从动物模型确定。治疗有效量也可以从已经在人体中测试的本发明的化合物和已知表现出相似药理学活性的化合物如其它相关活性剂的人体数据确定。肠胃外给药可能需要较高剂量。可以基于给予的化合物的相对生物利用度和效力来调节施加的剂量。基于本文所述的方法和本领域公知的其它方法调节剂量以实现最大功效完全在普通技术人员的能力范围内。

本发明的制剂在药学上可接受的溶液中给药，所述溶液常规地可以含有药学上可接受浓度的盐、缓冲剂、防腐剂、相容的载体、佐剂和任选的其它治疗成分。

两性霉素B在许多制剂中可商购获得，包括基于脱氧胆酸盐(有时称为基于脱氧胆酸盐)的制剂和基于脂质(包括脂质体)的制剂。本发明的两性霉素B衍生物化合物类似地可以配制为例如但不限于基于脱氧胆酸盐的制剂和基于脂质(包括脂质体)的制剂。

对于在治疗中的应用，通过将本发明的化合物递送至期望表面的任何方式可以将有效量的本发明的化合物给予受试者。本发明的药物组合物的给药可以通过本领域技术人员已知的任何方法完成。给药路线包括但不限于口服、静脉内、肌内、腹膜内、皮下、直接注射(例如，注射到肿瘤或脓肿中)、粘膜、肺(例如，吸入)和局部。

对于静脉内和其它肠胃外给药路线，本发明的化合物通常可以类似于AmB配制。例如，本发明的化合物可以配制成具有脱氧胆酸的冻干制剂、脂质体夹层或包封的活性化合物的冻干制剂、在水性悬浮液中的脂质复合物或胆固醇硫酸酯复合物。冻干制剂通常在给药前不久在合适的水性溶液(例如无菌水或盐水)中重构。

对于口服给药，通过将一种或多种活性化合物与本领域公知的药学上可接受的载体组合，可以容易地配制化合物(即本发明的化合物和其它治疗剂)。这样的载体使得本发明的化合物能够配制成片剂、丸剂、糖锭剂、胶囊、液体、凝胶、糖浆、浆液、悬浮液等，用于被待治疗的受试者口服摄取。用于口服使用的药物制剂可以作为固体赋形剂获得，任选地研磨所得混合物，并且如果需要，在加入合适的助剂后加工颗粒混合物以获得片剂或糖锭剂核。合适的赋形剂特别是填料，例如糖，包括乳糖、蔗糖、甘露醇或山梨糖醇；纤维素制剂，例如玉米淀粉、小麦淀粉、米淀粉、马铃薯淀粉、明胶、黄蓍胶、甲基纤维素、羟丙基甲基纤维素、羧甲基纤维素钠和/或聚乙烯吡咯烷酮(PVP)。如果需要，可以加入崩解剂，例如交联的聚乙烯吡咯烷酮、琼脂或藻酸或其盐，例如藻酸钠。任选地，口服制剂也可以在盐水或缓冲液(例如EDTA)中配制，用于中和内部酸性条件，或者可以在没有任何载体的情况下给药。

还特别预期的是上述一种或多种组分的口服剂型。可以对一种或多种组分进行化学修饰，使得衍生物的口服递送有效。通常，所预期的化学修饰是将至少一个部分附着于组成分子本身上，其中所述部分允许(a)抑制酸水解；和(b)从胃或肠摄取到血流中。还希望增加一种或多种组分的整体稳定性和增加体内循环时间。这样的部分的实例包括：聚乙二醇、乙二醇和丙二醇的共聚物、羧甲基纤维素、葡聚糖、聚乙烯醇、聚乙烯吡咯烷酮和聚脯氨酸。Abuchowski和Davis,“Soluble Polymer-Enzyme Adducts”,In:Enzymes as Drugs,Hocenberg和Roberts编辑,Wiley-Interscience,New York,N.Y.,第367-383页(1981)；Newmark等人,J Appl Biochem 4:185-9(1982)。可以使用的其它聚合物是聚-1,3-二氧戊环和聚-1,3,6-三氧杂环辛烷。如上所述，优选用于药物用途的是聚乙二醇部分。

对于组分(或衍生物)，释放的位置可以是胃、小肠(十二指肠、空肠或回肠)或大肠。本领域技术人员具有可获得的制剂，其在胃中不溶解，但在十二指肠或肠的其它地方释放该材料。优选地，通过保护本发明的化合物(或衍生物)或通过将生物活性材料释放到胃环境之外(例如在肠中)，所述释放将避免胃环境的有害作用。

为了确保完全的胃耐受性，不能渗透至少pH 5.0的包衣是必需的。用作肠溶衣的更常见的惰性成分的实例是乙酸偏苯三酸纤维素(CAT)、邻苯二甲酸羟丙基甲基纤维素(HPMCP)、HPMCP 50、HPMCP 55、聚乙酸乙烯邻苯二甲酸酯(PVAP)、Eudragit L30D、Aquateric、乙酸邻苯二甲酸纤维素(CAP)、Eudragit L、Eudragit S和虫胶。这些包衣可以用作混合膜。

包衣或包衣的混合物也可用在片剂上，其不旨在保护免于胃的影响。这可以包括糖包衣，或使片剂更容易吞咽的包衣。胶囊可以由用于递送干燥治疗剂(例如粉末)的硬壳(例如明胶)组成；对于液体形式，可以使用软明胶壳。扁囊剂的壳材料可以是厚淀粉或其它可食用的纸。对于丸剂、锭剂、模制片剂或片剂磨碎物，可以使用湿聚集(moist massing)技术。

治疗剂可以以粒度为约1mm的颗粒或小丸形式的细的多颗粒包括在制剂中。用于胶囊给药的材料的制剂也可以是粉末、轻微压缩的栓或甚至是片剂。治疗剂可以通过压缩制备。

着色剂和调味剂都可以包括在内。例如，本发明的化合物(或衍生物)可以配制(例如通过脂质体或微球包封)并且然后进一步包含在可食用的产品(例如含有着色剂和调味剂的冷藏饮料)中。

可以用惰性材料稀释或增加治疗剂的体积。这些稀释剂可以包括碳水化合物，尤其是甘露醇、α-乳糖、无水乳糖、纤维素、蔗糖、改性葡聚糖和淀粉。某些无机盐也可以用作填料，包括三磷酸钙、碳酸镁和氯化钠。一些可商购获得的稀释剂是Fast-Flo、Emdex、STA-Rx1500、Emcompress和Avicell。

崩解剂可以包括在治疗剂的制剂中，成为固体剂型。用作崩解剂的材料包括但不限于淀粉，包括基于淀粉的可商购崩解剂Explotab。淀粉羟乙酸钠、Amberlite、羧甲基纤维素钠、超级支链淀粉(ultramylopectin)、藻酸钠、明胶、橙皮、酸性羧甲基纤维素、天然海绵和膨润土都可以使用。崩解剂的另一种形式是不溶性阳离子交换树脂。粉状树胶可以用作崩解剂和粘结剂，并且这些可以包括粉状树胶，例如琼脂、刺梧桐树胶或黄蓍胶。藻酸及其钠盐也可用作崩解剂。

粘结剂可以用于将治疗剂保持在一起以形成硬片剂，并且包括来自天然产物的材料，例如阿拉伯胶、黄蓍胶、淀粉和明胶。其它包括甲基纤维素(MC)、乙基纤维素(EC)和羧甲基纤维素(CMC)。聚乙烯吡咯烷酮(PVP)和羟丙基甲基纤维素(HPMC)都可以以醇溶液的形式使用，以使治疗剂成粒。

在治疗剂的制剂中可以包括抗摩擦剂以防止在配制过程期间粘连。润滑剂可以用作治疗剂和模具壁之间的层，并且这些润滑剂可以包括但不限于；硬脂酸(包括其镁盐和钙盐)、聚四氟乙烯(PTFE)、液体石蜡、植物油和蜡。也可以使用可溶性润滑剂，例如十二烷基硫酸钠、十二烷基硫酸镁、各种分子量的聚乙二醇、Carbowax 4000和6000。

可以加入助流剂，其可以改进在配制期间药物的流动性质，并且有助于在压缩期间的重排。助流剂可以包括淀粉、滑石、热解二氧化硅和水合硅铝酸盐。

为了帮助治疗剂溶解到水性环境中，可以加入表面活性剂作为润湿剂。表面活性剂可以包括阴离子洗涤剂，例如十二烷基硫酸钠、琥珀酸二辛酯磺酸钠和磺酸二辛酯钠。可以使用阳离子洗涤剂，并且可以包括苯扎氯铵和苄索氯铵。可以作为表面活性剂包括在制剂中的潜在的非离子洗涤剂包括聚桂醇400、聚氧乙烯40硬脂酸酯、聚氧乙烯氢化蓖麻油10、50和60、单硬脂酸甘油酯、聚山梨糖醇酯40、60、65和80、蔗糖脂肪酸酯、甲基纤维素和羧甲基纤维素。这些表面活性剂可以单独或以不同比例的混合物存在于本发明的化合物或衍生物的制剂中。

可以口服使用的药物制剂包括由明胶制成的推入配合式胶囊，以及由明胶和增塑剂(例如甘油或山梨糖醇)制成的软的密封的胶囊。推入配合式胶囊可以含有与填料(例如乳糖)、粘结剂(例如淀粉)和/或润滑剂(例如滑石或硬脂酸镁)以及任选的稳定剂混合的活性成分。在软胶囊中，活性化合物可以溶解或悬浮于合适的液体(例如脂肪油、液体石蜡或液体聚乙二醇)中。此外，可以加入稳定剂。也可以使用为口服给药而配制的微球。这样的微球在本领域中已被很好地限定。所有口服给药的制剂都应该是适于这样的给药的剂量。

对于口腔给药，组合物可以采用以常规方式配制的片剂或锭剂的形式。

对于通过吸入给药，根据本发明使用的化合物可以方便地以气溶胶喷雾的形式从加压包装或喷雾器中递送，使用合适的推进剂，例如二氯二氟甲烷、三氯氟甲烷、二氯四氟乙烷、二氧化碳或其它合适的气体。在加压气溶胶的情况下，剂量单位可以通过提供阀门以递送计量的量来确定。用于吸入器或吹入器的例如明胶的胶囊和药筒可以配制成含有化合物和合适的粉末基底(例如乳糖或淀粉)的粉末混合物。

本文还预期肺递送本发明的化合物(或其衍生物)。本发明的化合物(或衍生物)在吸入时被递送到哺乳动物的肺，并横穿肺上皮衬里到达血流。吸入的分子的其它报道包括Adjei等人,Pharm Res 7:565-569(1990)；Adjei等人,Int J Pharmaceutics 63:135-144(1990)(醋酸亮丙瑞林)；Braquet等人,J Cardiovasc Pharmacol 13(suppl.5):143-146(1989)(内皮素-1)；Hubbard等人,Annal Int Med 3:206-212(1989)(α1-抗胰蛋白酶)；Smith等人,1989,J Clin Invest 84:1145-1146(a-1-蛋白酶)；Oswein等人,1990,"Aerosolization of Proteins",Proceedings of Symposium on Respiratory DrugDelivery II,Keystone,Colorado,March,(重组人生长激素)；Debs等人,1988,J Immunol140:3482-3488(γ-干扰素和α-肿瘤坏死因子)和Platz等人,美国专利号5,284,656(粒细胞集落刺激因子)。用于系统性作用的肺药物递送的方法和组合物描述于Wong等人1995年9月19日授权的美国专利号5,451,569。

预期用于本发明实践的是设计用于肺递送治疗产品的广泛的机械装置，包括但不限于喷雾器、计量的剂量吸入器和粉末吸入器，所有这些都是本领域技术人员所熟悉的。

适合本发明实践的可商购获得的装置的一些具体实例是Ultravent喷雾器，由Mallinckrodt,Inc.,St.Louis,Mo.制造；Acorn II喷雾器，由Marquest MedicalProducts,Englewood,Colo.制造；Ventolin计量的剂量吸入器，由Glaxo Inc.,ResearchTriangle Park,North Carolina制造；和Spinhaler粉末吸入器，由Fisons Corp.,Bedford,Mass制造。

所有这样的装置都需要使用适于分配本发明的化合物(或衍生物)的制剂。通常，每种制剂对所用装置的类型是特定的，并且除了在治疗中有用的常用稀释剂、佐剂和/或载体之外，可以涉及使用适当的推进剂材料。同样，也预期使用脂质体、微胶囊或微球、包合复合物或其它类型的载体。本发明的化学修饰化合物也可以根据化学修饰的类型或所用装置的类型制备成不同的制剂。

适用于喷雾器(喷射或超声喷雾器)的制剂通常包含以每mL溶液约0.1-25mg本发明的生物活性化合物的浓度溶解于水中的本发明的化合物(或衍生物)。制剂也可以包括缓冲液和单糖(例如，用于本发明的化合物的稳定和渗透压的调节)。喷雾器制剂还可以含有表面活性剂，以减少或防止在形成气溶胶时由溶液雾化引起的本发明的化合物的表面诱导的聚集。

用于计量的剂量吸入器装置的制剂通常包含含有本发明的化合物(或衍生物)的细碎粉末，其借助于表面活性剂悬浮于推进剂中。推进剂可以是用于该目的的任何常规材料，例如氯氟烃、氢氯氟烃、氢氟烃或烃，包括三氯氟甲烷、二氯二氟甲烷、二氯四氟乙醇和1,1,1,2-四氟乙烷或其组合。合适的表面活性剂包括脱水山梨糖醇三油酸酯和大豆卵磷脂。油酸也可以用作表面活性剂。

用于从粉末吸入器装置分配的制剂将包含含有本发明的化合物(或衍生物)的细碎的干燥粉末，并且还可以包括增量剂，例如乳糖、山梨糖醇、蔗糖或甘露醇，其量为促进粉末从装置中分散的量，例如制剂的50-90重量％。本发明的化合物(或衍生物)应当有利地制备成平均粒度小于10微米(μm)、最优选0.5-5μm的颗粒形式，用于最有效地递送至肺深处。

也预期本发明的药物组合物的鼻递送。鼻递送允许在将治疗产品给予鼻后本发明的药物组合物直接通向血流，而不需要产品在肺中沉积。用于鼻递送的制剂包括含有葡聚糖或环葡聚糖的那些。

对于鼻给药，有用的装置是小而硬的瓶子，其上附着计量的剂量喷雾器。在一个实施方案中，计量的剂量通过将本发明的药物组合物溶液吸入限定体积的室中来递送，所述室具有尺寸被设计为当室中的液体被压缩时通过形成喷雾而使气溶胶制剂雾化的孔。压缩该室以给予本发明的药物组合物。在具体的实施方案中，该室是活塞布置。这样的装置是可商购获得的。

或者，使用具有尺寸被设计成当被挤压时通过形成喷雾来使气溶胶制剂雾化的孔或开口的塑料挤压瓶。开口通常位于瓶的顶部，并且顶部通常是锥形的以部分地配合在鼻通道中，用于气溶胶制剂的有效给药。优选地，鼻吸入器提供计量的量的气溶胶制剂，用于给予测量的剂量的药物。

当需要系统性递送化合物时，可以将化合物配制成通过注射(例如通过浓注注射(bolus injection)或连续输注)肠胃外给药。注射用制剂可以以单位剂型存在，例如在安瓿或多剂量容器中，其中加入防腐剂。组合物可以采取例如在油性或水性媒介物中的悬浮液、溶液或乳液的形式，并且可以含有配制剂，例如助悬剂、稳定剂和/或分散剂。

用于肠胃外给药的药物制剂包括水溶性形式的活性化合物的水性溶液。另外，活性化合物的悬浮液可以制备成适当的油性注射悬浮液。合适的亲脂性溶剂或媒介物包括脂肪油(例如芝麻油)或合成的脂肪酸酯(例如油酸乙酯或甘油三酯)或脂质体。水性注射悬浮液可以含有增加悬浮液粘度的物质，例如羧甲基纤维素钠、山梨糖醇或葡聚糖。任选地，悬浮液还可以含有合适的稳定剂或增加化合物溶解性的试剂，以允许制备高度浓缩的溶液。

或者，活性化合物可以是粉末形式，用于在使用前与合适的媒介物(例如无菌无热原水)构造。

化合物还可以配制成直肠或阴道组合物，例如栓剂或保留灌肠剂，例如含有常规栓剂基底，例如可可脂或其它甘油酯。

除了上述制剂外，化合物还可以配制成贮库制剂。这样的长效制剂可以用合适的聚合物或疏水材料(例如在可接受的油中的乳液)或离子交换树脂配制，或配制为微溶的衍生物，例如微溶的盐。

药物组合物还可以包含合适的固相或凝胶相载体或赋形剂。这样的载体或赋形剂的实例包括但不限于碳酸钙、磷酸钙、各种糖、淀粉、纤维素衍生物、明胶和聚合物(例如聚乙二醇)。

合适的液体或固体药物制剂形式是例如用于吸入、微包封、encochleated、包被在微观金颗粒上、包含在脂质体中的水性溶液或盐水溶液、雾化的气溶胶、用于植入皮肤的小丸、或干燥在要被刮进皮肤的尖锐物体上。药物组合物还包括颗粒剂、散剂、片剂、包衣片剂、(微)胶囊、栓剂、糖浆剂、乳剂、混悬剂、霜剂、滴剂或活性化合物延长释放的制剂，在其制剂中，如上所述常规使用赋形剂和添加剂和/或助剂，例如崩解剂、粘结剂、包衣剂、溶胀剂、润滑剂、调味剂、甜味剂或增溶剂。药物组合物适用于各种药物递送系统。对于药物递送方法的简要综述，参见Langer R,Science 249:1527-33(1990)，其通过引用并入本文。

本发明的化合物和任选的其它治疗剂可以本身(纯的)或以药学上可接受的盐的形式给药。当用于药物时，盐应当是药学上可接受的，但可以方便地使用非药学上可接受的盐来制备其药学上可接受的盐。这样的盐包括但不限于由下列酸制备的那些：盐酸、氢溴酸、硫酸、硝酸、磷酸、马来酸、乙酸、水杨酸、对甲苯磺酸、酒石酸、柠檬酸、甲磺酸、甲酸、丙二酸、琥珀酸、萘-2-磺酸和苯磺酸。同样，这样的盐可以制备成碱金属盐或碱土金属盐，例如羧酸基团的钠、钾或钙盐。

合适的缓冲剂包括：乙酸和盐(1-2％w/v)；柠檬酸和盐(1-3％w/v)；硼酸和盐(0.5-2.5％w/v)；和磷酸和盐(0.8-2％w/v)。合适的防腐剂包括苯扎氯铵(0.003-0.03％w/v)；氯丁醇(0.3-0.9％w/v)；对羟基苯甲酸酯类(0.01-0.25％w/v)和硫柳汞(0.004-0.02％w/v)。

本发明的药物组合物含有有效量的本发明的化合物和任选的至少一种包括在药学上可接受的载体中的另外的治疗剂。

一种或多种治疗剂(具体包括但不限于本发明的化合物)可以在颗粒中提供。本文所用的颗粒是指可以全部或部分地由本发明的化合物或如本文所述的一种或多种其它治疗剂组成的纳米颗粒或微颗粒(或在一些情况下，较大的颗粒)。颗粒可以在由包衣(包括但不限于肠溶衣)包围的核中含有一种或多种治疗剂。一种或多种治疗剂也可以分散在整个颗粒中。一种或多种治疗剂也可以被吸附到颗粒中。颗粒可以具有任何级别的释放动力学，包括零级释放、一级释放、二级释放、延迟释放、持续释放、立即释放及其任何组合等。除了一种或多种治疗剂之外，颗粒可以包括药学和药物领域中常规使用的任何材料，包括但不限于易蚀、非易蚀、可生物降解或不可生物降解的材料或其组合。颗粒可以是含有溶液或半固体状态的本发明的化合物的微胶囊。颗粒实际上可以是任何形状。

不可生物降解的和可生物降解的聚合物材料均可用于制造用于递送一种或多种治疗剂的颗粒。这样的聚合物可以是天然或合成的聚合物。基于期望释放的时间段来选择聚合物。特别感兴趣的生物粘附聚合物包括在Sawhney H S等人(1993)Macromolecules26:581-7中描述的生物易蚀水凝胶，其教导并入本文。这些包括聚透明质酸、酪蛋白、明胶、明胶蛋白、聚酐、聚丙烯酸、藻酸盐、壳聚糖、聚(甲基丙烯酸甲酯)、聚(甲基丙烯酸乙酯)、聚(甲基丙烯酸丁酯)、聚(甲基丙烯酸异丁酯)、聚(甲基丙烯酸己酯)、聚(甲基丙烯酸异癸酯)、聚(甲基丙烯酸月桂酯)、聚(甲基丙烯酸苯酯)、聚(丙烯酸甲酯)、聚(丙烯酸异丙酯)、聚(丙烯酸异丁酯)和聚(丙烯酸十八烷基酯)。

一种或多种治疗剂可以包含在受控释放系统中。术语“受控释放”旨在是指任何含有药物的制剂，其中药物从制剂中释放的方式和分布是受控的。这是指立即释放制剂以及非立即释放制剂，其中非立即释放制剂包括但不限于持续释放制剂和延迟释放制剂。术语“持续释放”(也称为“延长释放”)以其常规意义使用，是指在延长的时间段内提供药物的逐渐释放的药物制剂，并且优选地，尽管不是必需的，在延长的时间段内导致药物的基本上恒定的血液水平。术语“延迟释放”以其常规意义使用，是指其中在给予制剂和药物从其中释放之间存在时间延迟的药物制剂。“延迟释放”可以涉及或可以不涉及药物在延长的时间段内的逐渐释放，并因此可以是或可以不是“持续释放”。

长期持续释放植入物的使用可能特别适合于治疗慢性病况。本文所用的“长期”释放是指构建并排列植入物以递送治疗水平的活性成分至少7天，并优选30-60天。长期持续释放植入物是本领域普通技术人员公知的，并且包括上述一些释放系统。

制备杂化两性霉素B衍生物的示例性方法

本发明描述对AmB进行原子修饰的合成平台，其导致固醇结合(而不是膜透化)主要驱动杀细胞作用的发现。在某些实施方案中，位点选择性修饰AmB的新方法包括电子调谐酰化试剂以实现酰基转移的位点区分过渡态，其实现附加到AmB的10个羟基的位点选择性酰化。参见Wilcock,B.C.等人,Nat Chem 2012,4(12),996-1003，其教导通过引用并入本文。该方法允许单个立体中心在AmB的C2’位有效差向异构化，因此打开无毒AmB衍生物的实际通路。在某些实施方案中，高度复杂的AmB大环内酯骨架服从涉及在C16的Curtius重排并通过C15-OH捕获所得异氰酸酯的串联序列。这产生可分离的但构象上应变的并因此“弹簧负载”的噁唑烷酮中间体，为一步后阶段转化成广泛范围的AmBUrea衍生物做准备。参见Davis,S.A.等人,Nat Chem Biol 2015,11(7),481-7，其教导通过引用并入本文。该化学方法允许制备新的杂化C2’epiAmBUrea衍生物(C2’epiAmBAU)。这种新的AmB衍生物显示显著改进的针对假丝酵母菌株和曲霉属菌株的活性(效力增加高达>500倍)，同时保持降低的毒性分布。因此，这些新的AmB衍生物允许新的高剂量治疗策略以显著改进的安全性分布根除威胁生命的侵袭性真菌感染。

方案1

其中1表示

1；和

实施例

现在已经详细描述了本发明，通过参考以下实施例将更清楚地理解本发明，这些实施例仅为了说明的目的而包括在本文中，并且不旨在限制本发明。

实施例1.没有哺乳动物毒性的新的化学设计

通过所公开的用于有效修饰新的AmB衍生物的前沿合成方法的开发所实现的，我们备选地发现AmB主要通过分别结合麦角固醇和胆固醇而杀死真菌和人细胞(图1A)；不需要通道形成。所有数据与“固醇海绵”模型(图1B)一致，借助该模型AmB自组装成大的膜外聚集体，并从真菌和人细胞中快速提取生理上至关重要的固醇，从而引起细胞死亡。前沿SSNMR研究(UIUC的W/Chad Rienstra)进一步揭示对AmB海绵-固醇复合物结构的关键认识。Anderson,T.M.等人,Nat Chem Biol2014,10(5),400-6。

这一关键的发现为合理开发无毒AmB变体开辟了一条路线。为了探测其在固醇结合中的预期作用，在放线菌糖胺附加物的C2’位置合成地缺失羟基。发现所得衍生物C2’deOAmB(图2A)结合麦角固醇，但在等温滴定量热法(ITC)的检测极限内，不结合胆固醇(图2C)。与固醇海绵模型一致，该衍生物保留了针对酵母的良好活性，但最重要的是，对人红细胞和原代(hECR)无毒(图2B)。

2-脱氧糖苷的合成具有众所周知的挑战性，并且缺乏对C2’deOAmB的可放大路线阻碍了其发展。然而，这些发现导致我们提出用于指导开发具有相似选择性分布的更容易合成的衍生物的预测模型。Crich,D.等人,The Journal of Organic Chemistry 2011,76(22),9193-9209；Hou,D.等人,Carbohyd Res 2009,344(15),1911-1940；Rodríguez,M.

等人,The Journal of Organic Chemistry 2005,70(25),10297-10310；和Hou,D.等人,Organic Letters 2007,9(22),4487-4490。具体地说，为了使C2’deOAmB对真菌相对于人细胞的选择性毒性合理化，提出了一种模型，其中C2’-OH稳定易于结合麦角固醇和胆固醇两者的AmB的构象异构体。该羟基的缺失有利于向不同的构象异构体或构象异构体组的转变，所述构象异构体或构象异构体组保留结合麦角固醇的能力但不保留结合空间体积更大的胆固醇的能力。或者，该模型表明AmB的C2’OH的缺失引起基于小分子的变构作用，其导致配体选择性结合。基于N-碘酰基AmB的高分辨率X射线晶体结构(图3A)，在C2’和C13处的羟基之间存在显著的水-桥连的氢键，其可以用于稳定放线菌糖胺附加物相对于多烯大环内酯核的特定构象。该观察结合我们先前的关于放线菌糖胺附加物对于麦角固醇和胆固醇两者的结合都是关键的发现，以及通过SSNMR观察到的AmB多烯和麦角固醇的A/B环之间的直接分子间接触，允许我们提出与我们的所有数据一致的两种AmB-固醇复合物的特定结构模型(图3B)。Woerly,E.M.等人,Nat Chem 2014,6(6),484-91；和erson,T.M.等人,Nat ChemBiol 2014,10(5),400-6。

受该模型的指导，更容易合成的C2’羟基的简单差向异构化同样会消除水-桥连的C2’OH-C13OH相互作用，并引起与在C2’deOAmB中预测的类似的放线菌糖胺附加物的定向的改变。所得衍生物C2’epiAmB(图2A)选择性结合麦角固醇并针对真菌而非人细胞发挥杀细胞作用。值得注意的是，C2’epiAmB与AmB的区别仅在于单个原子的立体化学。

开发了使用前沿位点选择性酰化方法的C2’epiAmB的实际11步合成(图4)。Wilcock,B.C.等人,Nat Chem 2012,4(12),996-1003；Uno,B.E.A synthesis enabledunderstanding of Amphotericin B leading to derivatives with improvedtherapeutic indices.University of Illinois at Urbana-Champaign,2014。然后确定固醇结合和细胞杀死活性。如所预测的，与C2’deOAmB类似，通过ITC发现C2’epiAmB结合麦角固醇但不(可检测地)结合胆固醇，并且最重要的是杀死真菌但不杀死人细胞(图2A-C)。

这些ITC研究未能产生S形等温线，妨碍了结合常数和其它热力学参数的确定。然而，开发了备选的方法，用于在体外可再现地形成均匀的AmB和C2’epiAmB固醇海绵聚集体。使用这些制剂，开发了基于定量UV-Vis和主要组分(PCA)的测定，用于确定AmB和C2’epiAmB与麦角固醇和胆固醇结合的表观K_D(图5A-D)。与该天然产物的小治疗指数一致，观察到AmB与麦角固醇(K_D，erg＝120nM)和胆固醇(K_D，chol＝840nM)两者的强结合。与体外评价C2’epiAmB一致，观察到C2’epiAmB与麦角固醇(K_D，erg＝150nM)的强结合(图5C)，但很少或没有胆固醇结合(图5D)。该数据不允许确信地分配后一种相互作用的K_D，但估计它至少>2000nM(如果拟合数据，则其为估计的K_D，chol)。由于C2’epiAmB未显示哺乳动物毒性，所以这些机理基础的生物物理参数可以用作优先考虑新杂化衍生物以进一步开发的基准。

实施例2.没有观察到动物毒性的AMB衍生物

制备>100mg的C2’epiAmB，将其配制成相应的脱氧胆酸盐复合物，并评价该与AmB-脱氧胆酸盐头对头的衍生物在动物模型中的毒性和功效。发现静脉内(IV)给予小鼠AmB-脱氧胆酸盐在2-4mg/kg时是致死的(图6，左)。相反，在IV注射C2’epiAmB-脱氧胆酸盐后甚至在128mg/kg(测试的最高剂量)下也未观察到死亡。IV给予大鼠AmB-脱氧胆酸盐(2.5mg/kg)引起血尿素氮(BUN)、丙氨酸转氨酶/天冬氨酸转氨酶(ALT/AST)和死亡率的显著升高(图6，右)。或者，当IV注射大鼠2、10和17.5mg/kg剂量(测试的最高剂量)的C2’epiAmB治疗时，观察到BUN或ALT/AST没有升高且没有死亡。C2’epiAmB在17.5mg/kg时的C_max比AmB在1mg/kg时的C_max高，>16倍。

直接比较C2’epiAmB对

的毒性，

是在临床上广泛使用的AmB的脂质体制剂，因为其毒性稍低于

(AmB-脱氧胆酸盐)(图7)。与先前的文献一致，我们证实

在48mg/kg时在小鼠中显示显著的毒性，如通过现有技术肾基因毒性生物标记物所判断。Kondo,C.等人,J Toxicol Sci 2012,37(4),723-37。或者，用相同的高剂量(48mg/kg)的C2’epiAmB-脱氧胆酸盐注射小鼠，并且没有观察到这些相同生物标记物显著的升高。因此，在小鼠中C2’epiAmB的毒性显著低于

在每种情况下，C2’epiAmB直到测试的最高剂量对人红细胞、原代hREC、小鼠和大鼠是无毒的。这些结果与发现一致，即在所有实验的检测极限内，C2’epiAmB不结合胆固醇。

实施例3.部分保留体外抗真菌活性

在Evotec(Oxfordshire,UK)比较C2’epiAmB与AmB针对广泛系列的假丝酵母和曲霉属临床分离物的体外抗真菌活性(图8A)。C2’epiAmB显示针对许多假丝酵母菌株和几种曲霉属菌株良好的活性。然而，有若干烟曲霉菌株(AF293、A1163和ATC204305)，C2’epiAmB对它们的功效是AmB的1/4，而在一个菌株(AF91)中C2’epiAmB的功效<1/32。C2’epiAmB也被送到UT-San Antonio的美国国家真菌测试实验室，用于针对扩展小组的尤其具有挑战性的40种曲霉属临床分离物的抗真菌测试，所述分离物包括唑类抗性烟曲霉、黄曲霉和土曲霉(A.terreus)(图8B)。发现C2’epiAmB的功效是AmB的1/2-1/16(在所有40个菌株中平均功效为1/5.6)。最近，Steinbach和Burke直接比较了AmB、

卡泊芬净、伏立康唑和C2’epiAmB针对甚至更广泛组的临床相关的侵袭性霉菌的活性(图8C)。这些研究再次显示C2’epiAmB针对包括泛唑抗性菌株(F14196)在内的许多菌株具有良好的抗真菌功效，而且还显示了针对曲霉活性改进的重要机会。

实施例4.体外抗真菌活性的保留的主要机制

为固醇海绵机制提供有力证据，先前证明了，通过将AmB固醇海绵与麦角固醇预复合，因此阻断其从酵母细胞提取麦角固醇的能力，减轻AmB的抗真菌活性。Anderson,T.M.等人,Nat Chem Biol 2014,10(5),400-6。在与Susan Lindquist在MIT合作进行的后续研究中，该机制也显示其固有地逃避临床抗性，因为突变麦角固醇靶引起致病性的丧失。Davis,S.A.等人,Nat Chem Biol 2015,11(7),481-7。为了测试C2’epiAmB是否主要通过相同的固醇海绵机制杀死细胞，C2’epiAmB海绵类似地与麦角固醇预复合(图9)。观察到麦角固醇预复合后AmB和C2’epiAmB效力的相同降低。因此，C2’epiAmB类似地主要通过固醇结合而杀死酵母，并且，通过延伸，预期本申请中靶向的新化合物具有在过去50多年中用AmB观察到的类似的真菌抗性屏障。

实施例5.在鼠侵袭性假丝酵母病中的无毒性剂量依赖性功效

最后，测试C2’epiAmB-脱氧胆酸盐复合物在侵袭性假丝酵母病的鼠模型中的剂量依赖性功效(图10)。中性粒细胞减少的ICR/Swiss小鼠通过侧尾静脉注射致死的白假丝酵母接种物，然后通过单次IP注射AmB-脱氧胆酸盐(1或4mg/kg)或C2’epiAmB-脱氧胆酸盐(1、4、8或16mg/kg)治疗。Andes实验室的先前工作显示AmB-脱氧胆酸盐的剂量依赖性功效。Andes,D.等人,Antimicrobial agents and chemotherapy 2001,45(3),922-6。事实上，与结果最相关的PD参数是Cmax/MIC。随后在侵袭性曲霉病的肺模型中观察到相同的结果。Wiederhold,N.P.等人,Antimicrobial agents and chemotherapy 2006,50(2),469-73。如在图10中所示，C2’epiAmB也显示剂量依赖性功效，其中在16mg/kg剂量下真菌负担显著降低。

这些结果显示C2’epiAmB为独特的抗真菌剂，其针对几种假丝酵母和曲霉属菌株具有有效的杀真菌活性，并且没有可检测的哺乳动物毒性，对于两性霉素衍生物而言是首次。然而，C2’epiAmB在效力和病原体范围方面也有一些重要的限制。因此，下一个计划是开发一系列新的“杂化”衍生物，其设计用于改进C2’epiAmB的抗真菌效力和病原体范围，同时保持其缺乏毒性。

实施例6.导致优异的功效但保留毒性限制的化学修饰

在C16修饰的AmB脲衍生物已显示相对于AmB，在体外和体内显著增加抗真菌活性。这些化合物的水溶性比AmB高几个数量级，这可能部分地解释它们改进的效力。这些脲衍生物逃避病原体抗性，并且在小鼠、大鼠和狗中也显示优异的PK/PD性质。然而，这些衍生物具有不可接受的毒性。因此，在C2’epiAmB中发现的消除毒性的修饰与在C16的促进功效的修饰结合，以开发一类新的杂化多烯杀真菌剂，其在根除侵袭性真菌感染中是无毒且异常有效的。

Burke、Andes和Lindquist在2015年报道了一系列AmB衍生物，其中由AmB通过可放大的3步合成用脲模体替代C16酸(图11A)。Davis,S.A.等人,Nat Chem Biol 2015,11(7),481-7。在REVOLUTION Medicine(一家Burke是创始人和顾问，且Steinbach服务于临床咨询委员会(Clinical Advisory Board)的生物技术公司)研究AmBUrea。几种衍生物证明体外效力和范围与AmB针对一组临床分离物的相似(图11B)。

Steinbach和Burke最近合作以进一步比较一系列AmBurea(AmBAU、AmBMU和AmBCU)与

C2’epiAmB、卡泊芬净和伏立康唑针对广泛范围的临床相关的病原体(包括AmB抗性丝孢菌属(Scedosporium)菌株)的活性(图11C)。同样，AmBAU显示优异的效力，在宽范围的病原体中，等于或好于AmB显示的效力，重要的是，它对难治性菌株多育赛多孢子菌(Scedosporium prolificans)具有活性。

最近，鉴定了另一种具有伯胺的AmB脲AmBTACBU(图11B)，发现其在体外比AmB更有效(图11B)(AmB的平均MIC＝1.23μM，AmBTACBU的平均MIC＝0.95)。进一步测试AmBAU和AmBTACBU两者，并与AmB比较，针对临床相关的假丝酵母物种的四种菌株和烟曲霉的四种攻击菌株(图11D)。观察到功效显著增加(AmB的平均MIC＝1.33μM；AmBAU的平均MIC＝0.5；AmBTACBU的平均MIC＝0.4)。重要的是，还发现这些AmBUrea比AmB水溶性更高，这可以部分地解释它们的效力增加。

当在侵袭性假丝酵母病的鼠模型中腹膜内给药时，证明AmBAU异常有效(图12)。为了能够与AmB脲衍生物进行头对头比较，AmB作为非脱氧胆酸盐复合物递送。缺乏溶解性可能解释在这些实验中对AmB观察到的剂量反应的非典型缺乏。在EvoTeC(Oxfordshire，UK)在类似模型中也通过静脉内给药测试这些AmBUrea，并将它们的活性与IV AmB-脱氧胆酸盐

和脂质体AmB

(图13)直接比较。对于AmBCBU和AmBMEU观察到良好的活性，每种化合物在4mg/kg和16mg/kg下肾真菌负担显著降低。同样，AmBAU异常有效，导致仅用1mg/kg IV的AmBAU对多只小鼠(在测定检测的限度内)杀菌。这等于在其MTD下递送的IV

(1.5mg/kg)的活性，并且优于IV

(2.5mg/kg)。最重要的是，用16mg/kg的AmBAU实现完全杀菌。AmBAU在小鼠、大鼠、狗中证明有利的PK/PD性质(图14)，并且具有与AmB相似的逃避病原体抗性的能力。

AmBurea在体外和体内的毒性也比AmB小，但比不上对C2’epiAmB观察到的毒性完全消除(图6和7)。具体地，针对代hREC的最小毒性浓度(MTC)对于AmB为2.4μM，对于AmBAU为11.3μM，对于AmBMU为44.4μM，而对于C2’epiAmB为>80μM。在IV注射的小鼠中，对于AmBAU在32mg/kg观察到死亡，而用128mg/kg的C2’epiAmB治疗的所有小鼠存活。在大鼠中，AmBMU和AmBAU两者在6mg/kg时都引起显著的毒性，妨碍进一步的开发。如上所述，在C2’epiAmB的最高测试剂量(17.5mg/kg)下，在相同的大鼠中未观察到这样的毒性(图6)。

生物物理研究支持以下结论：结合胆固醇的不同能力是AmBUrea相对于C2’epiAmB毒性的惊人差异的基础(图15)。等温滴定量热法不能区分这两个系列中的胆固醇结合。然而，使用上述更灵敏和定量的基于UV-Vis/PCA的海绵-固醇滴定实验(参见实施例1)来定量代表性的AmB脲(AmBAU)与麦角固醇和胆固醇的结合。与AmB一样，证实AmBAU结合麦角固醇和胆固醇，这与该类化合物保持抗真菌和哺乳动物毒性一致。相反，C2’epiAmB显示与麦角固醇的保持结合，但与胆固醇的结合检测不到，并且没有哺乳动物毒性。可以推断C2’epiAmB中缺乏胆固醇与配体选择性变构作用的结合是由C2’立体中心的差向异构化引起的(参见实施例1)，并因此预测与C2’-差向异构化相关的生物物理作用应该可转用于其它AmB衍生物。

因此，目的是将C2’epiAmB中的毒性消除修饰与最具效力促进C16脲修饰杂化，以产生具有两个系列的组合的有利特征的新类型的杂化AmB衍生物(图16)。使用该策略，将产生新的杀真菌的、广谱的、抗性逃避的和无毒的多烯抗真菌剂，其使得能够以高剂量治疗模式用于侵袭性真菌感染。

实施例7.新系列的AmB衍生物的合成，该衍生物将在C2’的毒性消除差向异构化与在C16的功效促进氨基烷基脲修饰杂化

开发了两种不同的半合成路线，以由AmB合成C2’epiAmB(图4)和AmBUrea(图11A)。合并这些路线，以在单一步骤中由共同的噁唑烷酮中间体合成一系列新的约50种杂化C2’epiAmB(图17)。如在图4中所述制备1.5克C2’epiAmB，然后使用先前开发的用于AmB的方法转化为相应的噁唑烷酮中间体；制备500mg该中间体，并通过反相MPLC纯化。使用相同的路线和纯化方案，由AmB预先制备多于1克的类似的中间体。Davis,S.A.等人,Nat Chem Biol2015,11(7),481-7；Wilcock,B.C.等人,Nat Chem 2012,4(12),996-1003，其通过引用并入本文。然后将该噁唑烷酮中间体再分成20mg批次，并与少量烷基二胺(从商业来源获得或使用建立的方法合成)缩合，以得到新的目标杂化C2’epiAmBUrea(图17中的代表性实例)。这将多样化步骤放在该序列的最后，并使用可放大、易得且稳定的噁唑烷酮中间体，使该发现程序的整体效率基本最大化。

在关键的结果中，根据图17，在第一靶向杂化衍生物C2’epiAmBAU上完成小规模合成，证实这些天然产物类似物的路线的可行性。这种第一种C2’epiAmBUrea衍生物的最初生物学分析是非常令人鼓舞的，因为观察到C2’epiAmBAU的抗真菌效力相对于C2’epiAmB有实质性的增加(图18)。具体地，C2’epiAmBAU针对一系列重要病原体比C2’epiAmB更有效，高达>500倍，并且甚至在大多数情况下比AmB更有效。这些包括对C2’epiAmB显示完全或几乎完全抗性的非常具有挑战性的曲霉属菌株(烟曲霉91、烟曲霉1163和烟曲霉1100)。此外，在hREC中的初步分析证明C2’epiAmBAU的毒性相对于AmB显著降低(AmB的最小毒性浓度(MTC)＝2-4μM，而初步研究得到C2’epiAmBAU的MTC为64μM)。

将首先合成氨基烷基变体的各种集合并在下述(实施例8)的第一轮筛选漏斗中测试以快速建立该新系列的SAR。也可以制备少量没有氨基的衍生物，以抽查胺官能团是否通常赋予效力的增加。尽管没有进行与哺乳动物毒性相关的研究，但令人鼓舞的是最近描述的C2’epiAmBC41甲酯衍生物保留有效的抗真菌活性。Croatt,M.P.等人,Organic Letters2011,13(6),1390-1393。一旦鉴定出看来最有希望的脲取代基的类型，就合成这些衍生物的结构和立体异构变体的密集集合以输入临床定向的抗真菌筛选漏斗(实施例8)，使得能够鉴定用于较大动物中的深度PK/PD和毒性研究的最佳衍生物(实施例9)。

使用与我们以前用于纯化相应的AmB脲相同的方法，通过反相HPLC纯化每种衍生物。Davis,S.A.等人,Nat Chem Biol 2015,11(7),481-7。每种产物的结构将通过标准的一维和二维¹H和¹³C NMR技术(COSY,HMBC,HMQC,NOESY)以及高分辨率质谱明确地证实，如先前用AmBUrea所做的。每种产物的纯度将通过分析型HLPC在三种不同的波长(406、383、254nm)下判断，在每种情况下具有95％纯度的截止值。化合物在惰性气氛下以干粉形式储存在箔包装的小瓶中，并在干冰上运输至Steinbach和Andes实验室。

基于在合成AmBUrea和C2’epiAmBAU中的广泛经验，预期所提出的路线将提供获得所有目标衍生物的路线，并且二胺和噁唑烷酮中间体之间的缩合将产生5-10mg的各C2’epiAmB氨基烷基脲。如果用游离二胺使得任何目标缩合的产率出乎意料地低，则将合成烷基二胺的单保护的变体，并且在缩合反应中将使用更大过量的胺亲核试剂重复反应。

实施例8.表征杂化C2’epiAmBUrea的现有技术毒性、作用机制和功效筛选漏斗，以鉴定最好的2个候选物用于进一步改进

C.3.1.理据

采用在图19中所示的严格且有效的筛选漏斗，首先鉴定五个最广泛有效且无毒的C2’epiAmBUrea。然后，将确定在侵袭性假丝酵母病和曲霉病的鼠模型中对于随后的“高剂量”QD给药最有效的衍生物。图20描述高剂量C2’epiAmBUrea的系统功效评价。

科学严谨性和生物学变量：为了避免有偏见的解释，分析数据的个体将对治疗细节不知情。将小鼠随机分配到实验组，并按照NIH的指导，将包括50:50比率的雄性:雌性以解释性别作为生物学变量。这些结果将通过双向ANOVA评价，测试性别和治疗组之间的相互作用。如果性别和治疗之间有显著性，则将寻找理解性别特异性差异的潜在机制的研究。将分析来自三个独立实验的三个生物学重复的体外研究。

C.3.2.用于结合麦角固醇和胆固醇的K_D以及在代hECR中的体外毒性

C2’epiAmB在测试的最高剂量下在动物中是无毒的。作为评价C2’epiAmBUrea衍生物毒性的第一次筛选，将应用两种测定，其在机理上支持C2’epiAmB缺乏针对原代hREC的特异性体外毒性和UV-Vis固醇结合。首先，高度灵敏的海绵-固醇结合测定证明C2’epiAmB保留与麦角固醇的强结合(K_D，erg＝120nM)和很少或不结合胆固醇(K_D，chol>2000nM)。这首次允许基于与驱动细胞毒性的主要机制直接相关的生化参数的严格定量来合理地指导治疗指数的优化。具体地，将确定每个新的C2’epiAmBUrea的相应的K_D，并优先考虑那些类似地显示保持结合麦角固醇(K_D，erg≤200nM)和很少或不结合胆固醇(K_D，chol>2000nM)的衍生物。

这些研究已发现，在评价AmB衍生物的毒性方面，针对hREC(人患者中毒性的主要靶)的毒性测定优于常用的红细胞裂解测定。C2’epiAmB的体外研究也显示针对hREC的最小毒性浓度(MTC)为>80μM。在动物中证明具有不可接受的毒性的其它衍生物(例如AmBAU)在该相同的测定中具有较低的MTC(AmB和AmBAU的MTC分别为2.4μM和11.3μM)。相反，AmBAU在最高测试浓度(>500μM)下不能完全裂解红细胞。因此，推断相对于更常用的红细胞裂解测定，使用hREC的体外初始毒性是体内毒性的优异的和优越的预示。作为筛选漏斗中的互补的平行的第一步，使用如前所述的WST-8细胞增殖测定试剂盒针对hREC评价所有新的衍生物的MTC。MTC将通过计算至少两个生物学重复的平均值来确定。在该测定中证明MTC>80μM的化合物也将优先用于改进。因此，结合这些度量，在hREC中确定K_D，erg≤200nM、K_D，chol>2000nM且MTC>80μM的所有化合物将被进一步用于体外功效测试(参见C.3.3)。

C.3.3.针对假丝酵母属和曲霉菌属菌株的临床相关组的体外抗真菌活性

将评价有希望的C2’epiAmB-Urea衍生物针对一组最常见的致病假丝酵母和曲霉属物种的体外活性。该研究将按照标准CLSI M27-A3和M38-A2抗真菌敏感性方法，一式三份，平行于FDA批准的抗真菌对照(AmB、

氟康唑、卡泊芬净和伏立康唑)和C2’epiAmB，确定每种化合物针对5种最常见的假丝酵母物种(白假丝酵母、光滑假丝酵母、克鲁斯假丝酵母、热带假丝酵母和近平滑假丝酵母)和5种最常见的曲霉属物种(烟曲霉、黄曲霉、黑曲霉、土曲霉和构巢曲霉(A.nidulans))的MIC。http://shop.clsi.org/site/Sample_pdf/M27A3_sample.pdf。对两组菌株平均MIC≤2μM且没有单个MIC>8μM的化合物将被进一步用于评估作用机制(参见C.3.4)。

C.3.4.固醇海绵作为杀细胞作用的主要机制和逃避抗性的保持能力的验证

本研究将确定每个剩余的C2’epiAmBUrea是否主要通过固醇海绵机制杀死酵母。基于用AmB的广泛的先前研究，本研究将测试每个C2’epiAmBUrea测试1)从酵母细胞提取麦角固醇的能力，2)通过与麦角固醇预复合从酵母提取麦角固醇的能力的损失，和3)通过与麦角固醇预复合的抗真菌效力的损失。然后将确定经证实主要通过固醇海绵机制杀死酵母的每个C2’epiAmBUrea是否保留作为AmB的标志的抗性逃避性质。基于其它广泛研究，该步骤将1)测试针对建立的一组白假丝酵母erg突变菌株保持MIC的AmB样模式，和2)在液体培养物中进行逐渐抗性选择方案，其中C2’epiAmBUrea浓度连续两倍增加，以鉴定表现出MIC大于或等于四倍增加的任何突突变体。下一步将测试是否任何这样的突变可以3)逃避以前证明的AmB抗性菌株的显著适应性缺陷，包括对氧化应激增强的Hsp90依赖性的敏感性，4)保留用胎牛血清刺激时的丝形成能力，和/或5)保留在小鼠中引起致死感染的能力。经验证主要通过固醇海绵机理操作并具有类似AmB的逃避抗性能力的C2’epiAmBUrea将被进一步用于二级体外筛选(参见C.3.5)。

C.3.5.扩展的广谱体外抗真菌活性的二级筛选

接下来将评价剩余的C2’epiAmBUrea在扩展的临床相关的病原体组中的广谱功效。具体地，Steinbach实验室将确定这些化合物的活性，针对唑类抗性白假丝酵母、棘白菌素抗性光滑假丝酵母、新型隐球菌、A.calidoustus、A.lentulus、唑类抗性烟曲霉、棘白菌素抗性烟曲霉、多育赛多孢子菌、尖端赛多孢子菌(Scedosporium apiospermum)、腐皮镰刀菌(Fusarium solani)、尖镰孢(Fusarium oxysporum)、米根霉(Rhizopus oryzae)、卷枝毛霉(Mucor circinelloides)、微小根毛霉(Rhizomucor pusillus)和宛氏拟青霉(Paecilomyces variotii)一式三份测试。这些菌株已被仔细选择以代表难以治疗的侵袭性酵母和霉菌感染，它们没有接受的或有效的抗真菌治疗或抗真菌抗性的出现。作为广谱活性的基准，化合物针对95％的测试菌株必须表现出MIC≤8μM，并且针对每类病原体表现出平均MIC≤2μM。满足上述标准的化合物基于其平均MIC进行分级，并且最好的5个候选物将被进一步用于评价体内PK和毒性(参见C.3.6)。

C.3.6.剂量递增研究中的PK和毒性

基于用AmB的先前研究，首先通过头对头表征PK和所有化合物在剂量递增研究中作为单一IP剂量的毒性，确定AmB、

伏立康唑、卡泊芬净、C2’epiAmB和最好的5个C2’epiAmBUrea的最大峰值血浆浓度。具体地，将用0.25、1、2.5、5、10、20、40、80和120mg/kg的单一剂量的AmB-脱氧胆酸盐、

伏立康唑、卡泊芬净或C2’epiAmB-脱氧胆酸盐IP注射中性粒细胞减少的[在注射第-4天的IP环磷酰胺为150mg/kg，而注射第-1天的IP环磷酰胺为100mg/kg]ICR/Swiss小鼠(每组4只)。然后，该研究将通过HPLC在0、10m、20m、30m、40m、1h、2h、4h、6h、12h、24h、48h和60h确定血清中的相应药物浓度。60小时后，将确定血清血尿素氮与肌酸酐比率(BUN/Cr)、肾基因毒性标记物(Kim1、Lcn2、Timp1和Spp1)的水平以及肾组织病理学。通过处死动物并收获肾，然后匀浆一个肾并通过RT-PCR定量Kim1、Lcn2、Timp1和Spp1表达(图7)并对另一个肾进行组织病理学评价(H&E和骨桥蛋白)来确定基因毒性标记物和肾组织病理学。使用这种多要素药代动力学和毒性策略，将鉴定AmB-脱氧胆酸盐、

伏立康唑、卡泊芬净、C2’epiAmB-脱氧胆酸盐和最好的5个C2’epiAmBUrea的最大剂量，其没有统计学显著的毒性。

C.3.7.在每日多剂量(QD)治疗研究中确定MTD

对于AmB、

伏立康唑、卡泊芬净、C2’epiAmB和最好的5个C2’epiAmBUrea，该研究接下来将在QD多剂量治疗研究中测试以下剂量的动物中毒性7天：不引起BUN/Cr或肾基因毒性标记物(参见C.3.6)统计学显著升高的最大单剂量，以及一个较高剂量和一个较低剂量。对于所选择的每个剂量，将IP QD注射中性粒细胞减少的ICR/Swiss小鼠(每组4只)7天。通过RT-PCR分析一个肾的肾基因毒性标记物Kim1、Lcn2、Timp1和Spp1，并且通过骨桥蛋白和H&E染色分析另一个肾的肾病理学。7天QD治疗方案的MTD定义为每种化合物不引起死亡且BUN/Cr、肾基因毒性标记物和肾病理学指标仅有轻微变化(增加≤20％)的剂量。

C.3.8.在QD多剂量治疗研究中MTD的PK

接下来，研究将确定在QD多剂量治疗7天后，AmB、

伏立康唑、卡泊芬净、C2’epiAmB和最好的5个C2’epiAmBUrea的MTD的PK分布。具体地，中性粒细胞减少的ICR/Swiss小鼠将IP注射每种化合物的MTD(如在研究C.3.7中确定的)QD持续7天，并将如在C.3.6中详述地产生13点PK曲线。

C.3.9.在侵袭性假丝酵母病的鼠模型中进行QD多剂量治疗的MTD的高剂量功效研究

使用AmB、

伏立康唑、卡泊芬净、C2’epiAmB和最好的5个C2’epiAmBUrea的充分表征的MTD，在Andes实验室中使用了20年的充分建立的鼠侵袭性假丝酵母病模型中使用两种不同的菌株的侵袭性假丝酵母病的鼠模型中，研究将测试各化合物在7天QD治疗方案后的功效。Andes,D.等人,Antimicrobial agents and chemotherapy2001,45(3),922-6。每个组将含有10只小鼠。简言之，在开始治疗前2小时，中性粒细胞减少的ICR/Swiss小鼠将通过侧尾静脉感染白假丝酵母。用每种化合物的MTD或载体对照QD治疗动物7天。每天监测动物的不良事件，并且最后一次注射后24小时，处死所有存活的动物，并取出两个肾脏，匀浆，并铺板以计数存活的真菌菌落。

C.3.10.在侵袭性曲霉病的鼠模型中进行QD多剂量治疗的MTD的高剂量功效研究

本研究将类似地测试在Steinbach实验室中使用15年的充分建立的侵袭性曲霉病模型中使用两种不同的菌株的7天QD处理方案后AmB、

伏立康唑、卡泊芬净、C2’epiAmB和最好的五个C2’epiAmBUrea的功效。Steinbach,W.J.等人,Antimicrobialagents and chemotherapy 2004,48(9),3217-25。然后在免疫受损的小鼠中测试这些菌株中的每一种[环磷酰胺150mg/kg(第-2天，第+3天)和曲安西龙40mg/kg(第-1天，第+6天)]并暴露于菌株的气溶胶(第0天)以发展肺侵袭性曲霉病。每个组将含有10只小鼠以获得足够的统计学强度。存活将绘制在Kaplan-Meier曲线上，以对数秩成对比较。在预定的时间点(感染后第+5天)利用半乳甘露聚糖测定的真菌负担将用Kruskal-Wallis检验和Dunn后续检验进行分析。根据我们开发的五点肺梗塞评分，评估组织病理学疾病和组织侵袭，其中肺用苏木精染色和曙红染色炎症，并且Gomori乌洛托品银染真菌侵袭。在这些实验中证明在根除侵袭性假丝酵母病和曲霉病中最有效的两个C2’epiAmBUrea将被进一步用于在更大的动物中进一步研究(参见实施例9)。

C.3.11.预期的结果、潜在的缺陷和替代策略

C2’epiAmBAU的结果强烈地支持这样的预测：与C2’epiAmB相比，C16修饰将显示改进的效力。重要的是，C2’epiAmBAU的毒性也显著低于AmB，但该研究确实观察到对hREC低但可测量的毒性。注意到AmBAU是早期AmBurea系列中毒性最大的一种，并且许多其它AmBurea的毒性远低于AmBAU，但仍证明优异的溶解性和抗真菌效力。因此，预期C2’epiAmB与其它脲侧链的杂化将产生类似的效力增加而无任何哺乳动物毒性。如果证明不是这种情况，则将寻求也增加效力的其它类型的C16修饰。例如，最近合成了C2’epiAmB C16甲酯(C2’epiAmBME)，并且发现其相对于C2’epiAmB而言，针对烟曲霉91(对于C2’epiAmB的MIC＝>64μM，而对于C2’epiAmBME为4μM)和烟曲霉1100(对于C2’epiAmB的MIC＝32μM，而对于C2’epiAmBME为4μM)也具有显著改进的效力。该研究最近还发现，AmB的C16酰胺显著改进针对广泛范围的临床相关的病原体的效力。可以在放线菌糖胺附加物处寻求替代性修饰，后者被模型预测应该类似地消除水-桥连的C2’OH至C13OH氢键，例如C2’脱氧、C2’-卤代脱氧或C2’-甲基脱氧，并因此消除胆固醇结合(参见图3A和3B)。该研究预期高剂量的无毒C2’epiAmBUrea将产生真菌负担的显著降低，并因此相对于AmB-脱氧胆酸盐

C2’epiAmB、伏立康唑和卡泊芬净，在QD给药功效研究中增加存活。

实施例9.表征最好的两个C2’epiAmBUrea在较大动物中的安全性

C.4.1.在大鼠中的安全性

将选自C.3.7的最好的两个C2’epiAmBUrea以1、10、20、40和80mg/kg IV给予Sprague Dawley大鼠(3只雄性/3只雌性，再次考虑性别作为生物学变量)以评价毒性和药代动力学性质(如在C.3.6中对小鼠所述)。评价大鼠的体重减轻、死亡以及BUN、肌酸酐和ALT/AST的升高。此外，本研究将定量尿肾生物标记物NGAL、白蛋白、簇蛋白、Kim1、半胱氨酸蛋白酶抑制剂、骨桥蛋白，并且病理学家将肾切片、染色并分析肾病理学。在本研究结束时，除了肾组织之外，所有大鼠将收集内脏[脑、肺、心脏、肝、脾、胃、小肠、大肠、膀胱和性腺器官(卵巢或睾丸)]用于组织学分析以及骨髓细胞学。将选择在这些大鼠中显示最小整体毒性和最高C_max的C2’epiAmBUrea用于在比格犬中进一步研究。

C.4.2.在比格犬中的PK和安全性

将在健康的比格犬(一种大的哺乳动物，非啮齿类物种)中进一步表征表现最好的C2’epiAmBUrea。AmB-脱氧胆酸盐的广泛临床前毒性数据存在于狗中，鉴定了连续30天每天0.625mg/kg IV的MTD与可再现的肾病理学相关。在与AmB-脱氧胆酸盐相比，表现最好的C2’epiAmBUrea在生物耐受性方面提供至少10倍的增加，同时保持有效的抗真菌活性的预期下，6只性完整的比格犬(3只雄性/3只雌性)将每天被治疗，连续14天(用于管理人的侵袭性真菌感染的临床相关的暴露持续时间)，其中最好的C2’epiAmBUrea以6.25mg/kg作为10分钟的缓慢IV浓注。然后，该研究将在C2’epiAmBUrea给药的第1天(初始)和第14天(最终)通过HPLC确定0、10m、20m、30m、40m、1h、2h、4h、6h、12h和24h时血清中的相应药物浓度。在治疗前(第0天)和给药的第7天和第14天评估系列全血计数、化学组和尿分析，用于检测相关的血液学、非血液学、肾小管毒性。每天观察比格犬与毒性相关的临床症状，包括嗜睡、食欲不振、呕吐和腹泻。在第15天，将人为处死比格犬，并进行温热尸检，其中详细称重并组织学评估以下内脏[脑、肺、心脏、胸腺、甲状腺、肝、脾、淋巴结、胃、肾、肾上腺、小肠、大肠、膀胱、性腺器官(卵巢或睾丸)和骨髓]。

C.4.3.预期的结果和替代的策略

这些研究预期最好的C2’epiAmBura在大鼠和比格犬中显示很少或没有毒性。如果在任一物种中观察到意外的毒性，本研究将备选地测试在筛选漏斗中也表现良好的其它C2’epiAmBUrea。如上所述，如果必要，本研究还将寻求其它放线菌糖胺和/或C16修饰，其共同地使效力最大化，但不产生胆固醇结合也不具有哺乳动物毒性。

实施例10.AmB的C16脲衍生物的合成和表征。

如以上讨论的，开发了从AmB到AmBUrea的半合成路线(图11A)。通过该路线合成了一系列AmB的C16脲衍生物。这些AmB脲的合成进一步支持具有C2’-epi-放线菌糖胺的噁唑烷酮试剂(方案1，化合物1)的广泛适用性，以由广泛范围的胺制备杂化AmB脲。

在圆底烧瓶中加入两性霉素B(0.5g，约1.082mmol，1当量)和Fmoc琥珀酰亚胺(0.28g，0.81mmol，1.5当量)，在室温下将它们溶解于DMF:MeOH的2:1混合物(16.9mL)中。随后加入吡啶(0.25mL，3.10mmol，5.74当量)，并将反应在室温下搅拌12小时。然后将反应混合物倒入乙醚(0.5L)中。搅拌30分钟后，使用Whatman#50滤纸通过布氏过滤分离所得黄色沉淀，以得到黄色固体。将滤饼在过滤器上干燥10分钟，然后在真空下储存一小时。

将所得粉末溶解于1:1的THF:MeOH(18mL)中并冷却至0℃。向该溶液中加入樟脑磺酸(69mg，0.30mmol，0.55当量)，并将所得混合物在0℃下搅拌1小时。然后在0℃下用三乙胺(0.07mL，0.30mmol，0.55当量)猝灭反应。真空浓缩反应，去除约一半的溶剂。将所得饱和溶液倒入1:1的己烷:乙醚(0.5L)中，并使用Whatman#50滤纸通过布氏过滤收集黄色沉淀，并用乙醚(100mL)洗涤，以得到黄色固体。

将所得固体溶解于THF(14mL，0.01M)中。向该溶液中加入三乙胺(0.075mL，0.54mmol，1当量)，然后加入二苯基磷酰基叠氮化物(0.35mL，1.63mmol，3当量)。将反应加热至50℃并搅拌12小时。12小时后，将反应冷却至室温，并加入甲胺(1.0M在THF中，2.17mL，4.4mmol，8当量)。然后将反应在室温下搅拌8小时，缓慢析出黄色沉淀。然后将反应混合物倒入乙醚(0.5L)中，并使用Whatman#50滤纸通过布氏过滤分离所得黄色沉淀，以得到黄色固体。将固体溶解于DMSO(约100mg/mL)中，并通过单一制备HPLC纯化(C18，5-μm，50×250mm，75mL/min，80:20至59:41的0.3％HCO2H(aq):MeCN，经9分钟)纯化。HPLC纯化后，在40℃下真空去除溶剂。完全去除溶剂时，通过与milliQ水(10mL)和甲苯(50mL)共沸去除残余的甲酸。将该过程重复三次以确保甲酸去除。在该HPLC纯化过程期间，甲基缩酮定量转化为半缩酮，然后得到溶解于DMSO中的化合物并在冷冻干燥机上干燥，得到AmBMU，为黄色固体。

精确质量计算值952.5382；HRMS(ESI)实测值[C48H77N3O16+H]⁺952.5378

将所得固体溶解于THF(14mL，0.01M)中。向该溶液中加入三乙胺(0.075mL，0.54mmol，1当量)，然后加入二苯基磷酰基叠氮化物(0.35mL，1.63mmol，3当量)。将反应加热至50℃并搅拌12小时。12小时后，将反应冷却至室温，并加入乙胺(198mg，4.4mmol，8当量)。然后将反应在室温下搅拌8小时，缓慢析出黄色沉淀。然后将反应混合物倒入乙醚(0.5L)中，并使用Whatman#50滤纸通过布氏过滤分离所得黄色沉淀，以得到黄色固体。将固体溶解于DMSO(约100mg/mL)中，并通过单一制备HPLC纯化(C18，5-μm，50×250mm，75mL/min，80:20至59:41的0.3％HCO2H(aq):MeCN，经9分钟)纯化。HPLC纯化后，在40℃下真空去除溶剂。完全去除溶剂时，通过与milliQ水(10mL)和甲苯(50mL)共沸去除残余的甲酸。将该过程重复三次以确保甲酸去除。在该HPLC纯化过程期间，甲基缩酮定量转化为半缩酮，然后得到溶解于DMSO中的化合物并在冷冻干燥机上干燥，得到黄色固体。

精确质量计算值966.5539；HRMS(ESI)实测值[C49H79N3O16+H]⁺966.4875。

将所得固体溶解于THF(14mL，0.01M)中。向该溶液中加入三乙胺(0.075mL，0.54mmol，1当量)，然后加入二苯基磷酰基叠氮化物(0.35mL，1.63mmol，3当量)。将反应加热至50℃并搅拌12小时。12小时后，将反应冷却至室温，并加入丙胺(321mg，4.4mmol，8当量)。然后将反应在室温下搅拌8小时，缓慢析出黄色沉淀。然后将反应混合物倒入乙醚(0.5L)中，并使用Whatman#50滤纸通过布氏过滤分离所得黄色沉淀，以得到黄色固体。将固体溶解于DMSO(约100mg/mL)中，并通过单一制备HPLC纯化(C18，5-μm，50×250mm，75mL/min，80:20至59:41的0.3％HCO2H(aq):MeCN，经9分钟)纯化。HPLC纯化后，在40℃下真空去除溶剂。完全去除溶剂时，通过与milliQ水(10mL)和甲苯(50mL)共沸去除残余的甲酸。将该过程重复三次以确保甲酸去除。在该HPLC纯化过程期间，甲基缩酮定量转化为半缩酮，然后得到溶解于DMSO中的化合物并在冷冻干燥机上干燥，得到黄色固体。

精确质量计算值980.5695；HRMS(ESI)实测值[C50H81N3O16+H]⁺980.5666。

将所得固体溶解于THF(27mL，0.01M)中。向该溶液中加入三乙胺(0.075mL，0.54mmol，1当量)，然后加入二苯基磷酰基叠氮化物(0.35mL，1.63mmol，3当量)。将反应加热至50℃并搅拌12小时。12小时后，加入乙二胺(0.15mL，1.67mmol，4当量)，并将反应在50℃下继续搅拌3小时，缓慢析出黄色沉淀。然后将反应混合物倒入乙醚(0.5L)中，并使用Whatman#50滤纸通过布氏过滤分离所得黄色沉淀，以得到黄色固体，将其溶解于DMSO(约66mg/mL)中，并通过制备HPLC(C18，5-μm，50×250mm，75mL/min，80:20至50:50的0.3％HCO2H(aq):MeCN，经9分钟)纯化。HPLC纯化后，在40℃下真空去除溶剂。完全去除溶剂时，通过与milliQ水(10mL)和甲苯(50mL)共沸去除残余的甲酸。将该过程重复三次以确保甲酸去除。在该HPLC纯化过程期间，甲基缩酮定量转化为半缩酮，然后得到溶解于DMSO中的化合物并在冷冻干燥机上干燥，得到黄色固体。

精确质量计算值980.5569；HRMS(ESI)实测值[C49H80N4O16+H]⁺981.4964。

将所得固体溶解于THF(27mL，0.01M)中。向该溶液中加入三乙胺(0.075mL，0.54mmol，1当量)，然后加入二苯基磷酰基叠氮化物(0.35mL，1.63mmol，3当量)。将反应加热至50℃并搅拌12小时。12小时后，加入丙烷-1,3-二胺(124mg，1.67mmol，4当量)，并且反应在50℃下继续搅拌3小时，缓慢析出黄色沉淀。然后将反应混合物倒入乙醚(0.5L)中，并使用Whatman#50滤纸通过布氏过滤分离所得黄色沉淀，以得到黄色固体，将其溶解于DMSO(约66mg/mL)中，并通过制备HPLC(C18，5-μm，50×250mm，75mL/min，80:20至50:50的0.3％HCO2H(aq):MeCN，经9分钟)纯化。HPLC纯化后，在40℃下真空去除溶剂。完全去除溶剂时，通过与milliQ水(10mL)和甲苯(50mL)共沸去除残余的甲酸。将该过程重复三次以确保甲酸去除。在该HPLC纯化过程期间，甲基缩酮定量转化为半缩酮，然后得到溶解于DMSO中的化合物并在冷冻干燥机上干燥，得到黄色固体。

精确质量计算值995.5804；HRMS(ESI)实测值[C50H82N4O16+H]⁺995.5757。

将所得固体溶解于THF(27mL，0.01M)中。向该溶液中加入三乙胺(0.075mL，0.54mmol，1当量)，然后加入二苯基磷酰基叠氮化物(0.35mL，1.63mmol，3当量)。将反应加热至50℃并搅拌12小时。12小时后，加入2-氨基乙-1-醇(102mg，1.67mmol，4当量)，并且反应在50℃下继续搅拌3小时，缓慢析出黄色沉淀。然后将反应混合物倒入乙醚(0.5L)中，并使用Whatman#50滤纸通过布氏过滤分离所得黄色沉淀，以得到黄色固体，将其溶解于DMSO(约66mg/mL)中，并通过制备HPLC(C18，5-μm，50×250mm，75mL/min，80:20至50:50的0.3％HCO2H(aq):MeCN，经9分钟)纯化。HPLC纯化后，在40℃下真空去除溶剂。完全去除溶剂时，通过与milliQ水(10mL)和甲苯(50mL)共沸去除残余的甲酸。将该过程重复三次以确保甲酸去除。在该HPLC纯化过程期间，甲基缩酮定量转化为半缩酮，然后得到溶解于DMSO中的化合物并在冷冻干燥机上干燥，得到黄色固体。

精确质量计算值982.5488；HRMS(ESI)实测值[C49H79N3O17+H]⁺982.5463。

将所得固体溶解于THF(27mL，0.01M)中。向该溶液中加入三乙胺(0.075mL，0.54mmol，1当量)，然后加入二苯基磷酰基叠氮化物(0.35mL，1.63mmol，3当量)。将反应加热至50℃并搅拌12小时。12小时后，加入(3S)-吡咯烷-3-胺(144mg，1.67mmol，4当量)，并且反应在50℃下继续搅拌3小时，缓慢析出黄色沉淀。然后将反应混合物倒入乙醚(0.5L)中，并使用Whatman#50滤纸通过布氏过滤分离所得黄色沉淀，以得到黄色固体，将其溶解于DMSO(约66mg/mL)中，并通过制备HPLC(C18，5-μm，50×250mm，75mL/min，80:20至50:50的0.3％HCO2H(aq):MeCN，经9分钟)纯化。HPLC纯化后，在40℃下真空去除溶剂。完全去除溶剂时，通过与milliQ水(10mL)和甲苯(50mL)共沸去除残余的甲酸。将该过程重复三次以确保甲酸去除。在该HPLC纯化过程期间，甲基缩酮定量转化为半缩酮，然后得到溶解于DMSO中的化合物并在冷冻干燥机上干燥，得到黄色固体。

精确质量计算值：1006.5726；HRMS(ESI)实测值[C51H82N4O16+H]⁺1007.5057。

将所得固体溶解于THF(27mL，0.01M)中。向该溶液中加入三乙胺(0.075mL，0.54mmol，1当量)，然后加入二苯基磷酰基叠氮化物(0.35mL，1.63mmol，3当量)。将反应加热至50℃并搅拌12小时。12小时后，加入(3R)-吡咯烷-3-胺(144mg，1.67mmol，4当量)，并且反应在50℃下继续搅拌3小时，缓慢析出黄色沉淀。然后将反应混合物倒入乙醚(0.5L)中，并使用Whatman#50滤纸通过布氏过滤分离所得黄色沉淀，以得到黄色固体，将其溶解于DMSO(约66mg/mL)中，并通过制备HPLC(C18，5-μm，50×250mm，75mL/min，80:20至50:50的0.3％HCO2H(aq):MeCN，经9分钟)纯化。HPLC纯化后，在40℃下真空去除溶剂。完全去除溶剂时，通过与milliQ水(10mL)和甲苯(50mL)共沸去除残余的甲酸。将该过程重复三次以确保甲酸去除。在该HPLC纯化过程期间，甲基缩酮定量转化为半缩酮，然后得到溶解于DMSO中的化合物并在冷冻干燥机上干燥，得到黄色固体。

精确质量计算值：1006.5726；HRMS(ESI)实测值[C51H82N4O16+H]⁺1007.5061。

精确质量计算值：1007.5566；HRMS(ESI)实测值[C51H81N3O17+H]⁺1008.4974。

参考引用

在以上说明书中提及的所有美国专利和公开的美国和PCT专利申请都通过引用以其整体并入本文。

等同物

为了清楚理解，通过说明和实施例已经相当详细地充分描述了本发明，对于本领域普通技术人员来说，可在不影响本发明或其任何具体实施方案的范围的情况下，通过在条件、制剂和其它参数的广泛和等同范围内修改或改变发明，来实施本发明，并且这样的修改或改变旨在包括在所附权利要求的范围内。

Claims

1.式(I)表示的化合物或其药学上可接受的盐：

其中，每次出现时独立地：

X为-N(R²)-；

R⁵选自氢、烷基和卤代烷基。

2.权利要求1所述的化合物，其中R²为氢。

3.权利要求1所述的化合物，其中-XR¹选自-NHCH₂CH₃、-NHCH₂CH₂CH₃、-NHCH(CH₃)₂、-NH(2-丁基)、-NH环丙基、-NH环丁基、-NH环戊基、-NH环己基、-NHCH₃、

其中，每次出现时独立地：

4.权利要求1所述的化合物，其中-XR¹选自

5.权利要求1所述的化合物，其中-XR¹选自

6.权利要求1所述的化合物，其中-XR¹选自-NHCH₂CH₃、-NHCH₂CH₂CH₃、-NHCH(CH₃)₂、-NH(2-丁基)、-NH环丙基、-NH环丁基、-NH环戊基、-NH环己基、

7.权利要求1所述的化合物，其中-XR¹选自

8.权利要求1-7中任一项所述的化合物，其中R⁴为仲氨基。

9.权利要求1-7中任一项所述的化合物，其中R⁴为叔氨基。

10.权利要求1-7中任一项所述的化合物，其中R⁴为酰氨基。

11.权利要求1-7中任一项所述的化合物，其中R⁴为叠氮基。

12.权利要求1-7中任一项所述的化合物，其中R⁴为异腈。

13.权利要求1-7中任一项所述的化合物，其中R⁴为硝基。

14.权利要求1-7中任一项所述的化合物，其中R⁴为脲。

15.权利要求1-7中任一项所述的化合物，其中R⁴为异氰酸酯。

16.权利要求1-7中任一项所述的化合物，其中R⁴为氨基甲酸酯。

17.权利要求1-7中任一项所述的化合物，其中R⁴为胍基。

18.权利要求1-7中任一项所述的化合物，其中R⁴选自

其中

19.权利要求1-18中任一项所述的化合物，其中R⁵为氢。

20.权利要求1-18中任一项所述的化合物，其中R⁵为烷基。

21.权利要求1-18中任一项所述的化合物，其中R⁵为卤代烷基。

22.式(IV)表示的化合物或其药学上可接受的盐：

其中：

X为-N(R²)-；

R⁵选自氢、烷基和卤代烷基；

R⁶为C(O)OR^f；和

R^f选自2-烯-1-基、叔丁基、苄基和芴基甲基。

23.权利要求22所述的化合物，其中R²为氢。

24.权利要求22所述的化合物，其中-XR¹选自-NHCH₂CH₃、-NHCH₂CH₂CH₃、-NHCH(CH₃)₂、-NH(2-丁基)、-NH环丙基、-NH环丁基、-NH环戊基、-NH环己基、-NHCH₃、

其中，每次出现时独立地：

25.权利要求22所述的化合物，其中-XR¹选自

26.权利要求22所述的化合物，其中-XR¹选自

27.权利要求22所述的化合物，其中-XR¹选自

28.权利要求22所述的化合物，其中-XR¹选自

29.权利要求22-28中任一项所述的化合物，其中R⁵为氢。

30.权利要求22-28中任一项所述的化合物，其中R⁵为烷基。

31.权利要求22-28中任一项所述的化合物，其中R⁵为卤代烷基。

32.权利要求22-31中任一项所述的化合物，其中R^f为2-烯-1-基。

33.权利要求22-31中任一项所述的化合物，其中R^f为叔丁基。

34.权利要求22-31中任一项所述的化合物，其中R^f为苄基。

35.权利要求22-31中任一项所述的化合物，其中R^f为芴基甲基。

36.式(V)表示的化合物或其药学上可接受的盐：

其中：

R⁵选自氢、烷基和卤代烷基；

-XR¹选自

37.权利要求36所述的化合物，其中R⁵为氢。

38.权利要求36所述的化合物，其中R⁵为烷基。

39.权利要求36所述的化合物，其中R⁵为卤代烷基。

40.权利要求36所述的化合物，其中-XR¹为

41.权利要求36所述的化合物，其中R⁵为氢；和-XR¹为

42.式(II)表示的化合物或其药学上可接受的盐：

其中，每次出现时独立地：

R⁵选自氢、烷基和卤代烷基。

43.权利要求42所述的化合物，其中R⁴为伯氨基。

44.权利要求42所述的化合物，其中R⁴为仲氨基。

45.权利要求42所述的化合物，其中R⁴为叔氨基。

46.权利要求42所述的化合物，其中R⁴为酰氨基。

47.权利要求42所述的化合物，其中R⁴为叠氮基。

48.权利要求42所述的化合物，其中R⁴为异腈。

49.权利要求42所述的化合物，其中R⁴为硝基。

50.权利要求42所述的化合物，其中R⁴为脲。

51.权利要求42所述的化合物，其中R⁴为异氰酸酯。

52.权利要求42所述的化合物，其中R⁴为氨基甲酸酯。

53.权利要求42所述的化合物，其中R⁴为胍基。

54.权利要求42所述的化合物，其中R⁴选自

其中

55.权利要求42-54中任一项所述的化合物，其中R⁵为氢。

56.权利要求42-54中任一项所述的化合物，其中R⁵为烷基。

57.权利要求42-54中任一项所述的化合物，其中R⁵为卤代烷基。

58.式(III)表示的化合物或其药学上可接受的盐：

其中：

R⁵选自氢、烷基和卤代烷基；

R⁶为-C(O)OR^f；和

R^f选自2-烯-1-基、叔丁基、苄基和芴基甲基。

59.权利要求58所述的化合物，其中R⁵为氢。

60.权利要求58所述的化合物，其中R⁵为烷基。

61.权利要求58所述的化合物，其中R⁵为卤代烷基。

62.权利要求58-61中任一项所述的化合物，其中R^f为2-烯-1-基。

63.权利要求58-61中任一项所述的化合物，其中R^f为叔丁基。

64.权利要求58-61中任一项所述的化合物，其中R^f为苄基。

65.权利要求58-61中任一项所述的化合物，其中R^f为芴基甲基。

66.药物组合物，其包含权利要求1-65中任一项所述的化合物；和药学上可接受的载体。

67.权利要求66所述的药物组合物，其中所述药物组合物为静脉内剂型。

68.权利要求66所述的药物组合物，其中所述药物组合物为口服剂型。

69.治疗真菌感染的方法，所述方法包括给予患有真菌感染的受试者治疗有效量的权利要求1-65中任一项所述的化合物，从而治疗所述真菌感染。

70.权利要求69所述的方法，其中所述化合物静脉内给予。

71.权利要求69所述的方法，其中所述化合物口服给予。

72.根据方案1所示的四种转化中的任一种制备C2’epi-两性霉素B的C16脲衍生物的方法：

其中1表示