CN113041351A - 一种CpG类药物与蒽环类药物复合物、制备方法和应用 - Google Patents

一种CpG类药物与蒽环类药物复合物、制备方法和应用 Download PDF

Info

Publication number
CN113041351A
CN113041351A CN201911368456.2A CN201911368456A CN113041351A CN 113041351 A CN113041351 A CN 113041351A CN 201911368456 A CN201911368456 A CN 201911368456A CN 113041351 A CN113041351 A CN 113041351A
Authority
CN
China
Prior art keywords
cpg
anthracycline
medicament
complex
drug
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Pending
Application number
CN201911368456.2A
Other languages
English (en)
Inventor
张国喜
田烽椿
程昕伟
徐凯
陈文忠
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Nanjing Luye Pharmaceutical Co Ltd
Original Assignee
Nanjing Luye Pharmaceutical Co Ltd
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Nanjing Luye Pharmaceutical Co Ltd filed Critical Nanjing Luye Pharmaceutical Co Ltd
Priority to CN201911368456.2A priority Critical patent/CN113041351A/zh
Publication of CN113041351A publication Critical patent/CN113041351A/zh
Pending legal-status Critical Current

Links

Images

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K45/00—Medicinal preparations containing active ingredients not provided for in groups A61K31/00 - A61K41/00
    • A61K45/06—Mixtures of active ingredients without chemical characterisation, e.g. antiphlogistics and cardiaca
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/13—Amines
    • A61K31/135—Amines having aromatic rings, e.g. ketamine, nortriptyline
    • A61K31/136—Amines having aromatic rings, e.g. ketamine, nortriptyline having the amino group directly attached to the aromatic ring, e.g. benzeneamine
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/70—Carbohydrates; Sugars; Derivatives thereof
    • A61K31/7028—Compounds having saccharide radicals attached to non-saccharide compounds by glycosidic linkages
    • A61K31/7034—Compounds having saccharide radicals attached to non-saccharide compounds by glycosidic linkages attached to a carbocyclic compound, e.g. phloridzin
    • A61K31/704—Compounds having saccharide radicals attached to non-saccharide compounds by glycosidic linkages attached to a carbocyclic compound, e.g. phloridzin attached to a condensed carbocyclic ring system, e.g. sennosides, thiocolchicosides, escin, daunorubicin
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/70—Carbohydrates; Sugars; Derivatives thereof
    • A61K31/7042—Compounds having saccharide radicals and heterocyclic rings
    • A61K31/7048—Compounds having saccharide radicals and heterocyclic rings having oxygen as a ring hetero atom, e.g. leucoglucosan, hesperidin, erythromycin, nystatin, digitoxin or digoxin
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/70—Carbohydrates; Sugars; Derivatives thereof
    • A61K31/7088—Compounds having three or more nucleosides or nucleotides
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/70—Carbohydrates; Sugars; Derivatives thereof
    • A61K31/715—Polysaccharides, i.e. having more than five saccharide radicals attached to each other by glycosidic linkages; Derivatives thereof, e.g. ethers, esters
    • A61K31/716—Glucans
    • A61K31/722—Chitin, chitosan
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Communicable Diseases (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Medicinal Preparation (AREA)

Abstract

本发明公开了一种CpG类药物与蒽环类药物复合物，属于癌症的免疫治疗领域。CpG类药物与蒽环类药物质量比为3：1‑20：1，其中较低剂量的蒽环类药物能够辅助CpG类药物实现更有效的肿瘤免疫治疗，并且能够降低蒽环类药物的毒副作用。本发明还包括CpG类药物与蒽环类药物复合物单独使用或与其它药物组合使用，或加入药学上可接受的药物载体制备成临床可接受的任何剂型。本发明具体提供了CpG类药物与蒽环类药物复合物制备方法以及用途。

Description

一种CpG类药物与蒽环类药物复合物、制备方法和应用
技术领域
生物医药技术领域，具体涉及CpG类药物和蒽环类药物的一种复合物、制备方法和用途。
背景技术
恶性肿瘤是严重危害人类生命健康的常见病，已成为全球一个主要死亡原因。由于癌症的发生是一个逐步积累的过程，发病率与死亡率随着年龄的增大呈现指数上升的趋势。而我国随着国民经济的发展、医疗卫生的进步和预期寿命的延长，人口分布已进入老龄化阶段，且主要人口年龄分布仍在逐年增大，老龄化日趋严重，同时环境污染依然严重使恶性肿瘤已成为我国疾病死亡的第一杀手。
目前临床上治疗癌症的手段主要是手术、放疗和化疗。手术治疗是治疗肿瘤最有效的方法，但是单纯依靠手术很难防止肿瘤复发和远处转移，难以达到根治的目的；放射治疗虽然对某些肿瘤具有根治的效果，但还有一定的局限性。放射治疗是通过射线杀灭肿瘤细胞，这能对局部病灶有治疗作用，不能预防肿瘤的远处转移，对于一些射线不敏感的肿瘤细胞不能全部杀死，导致肿瘤残留和复发；化学治疗对某些肿瘤的治愈率比较高，但化学药物对肿瘤细胞杀伤的选择性不强，毒性较大。由于传统的手术、放化疗的发展已进入平台期，人们把越来越多地目光投到肿瘤的生物治疗上。“癌症免疫治疗”通过增强抗肿瘤免疫应答和打破肿瘤的免疫抑制调动机体的免疫系统，增强抗肿瘤免疫力，从而杀伤肿瘤细胞、抑制肿瘤生长，在多种类型癌症中的具有良好治疗功效，并且免疫治疗与化疗、放疗等传统治疗方法相比，具有相对毒副作用小、疗效显著等优势，因此正受到越来越多的关注。
CpG类药物是包含CpG基序的寡脱氧核苷酸，其能够整体上刺激人体免疫系统，启动先天免疫应答以及细胞免疫和体液免疫机制，增强人体抗肿瘤免疫能力。 CpG类药物经胞吞作用进人细胞，与细胞质中的TLR9(toll-like receptor 9)相互作用，并通过MyD88和TRAF6(tumor necrosis factor receptor-associated factor 6) 的活化导致IkB降解，从而激活转录因子NFkB，通过NFkB诱导某些细胞因子基因的转录。CpG也能作用于其他信号通路，如激活MAPK(mitogen-activated protein kinase)和应激激酶途径如JNKK1，并最终激活细胞因子的转录，通过细胞因子激活机体免疫应答；并且，CpG类药物能诱导单核细胞、巨噬细胞、树突状细胞等固有免疫细胞分泌多种细胞因子及趋化因子如IFN-a、IL-12、TNF-a、IP10、 NO等，并上调协同刺激分子，诸如CD80、CD86。这些变化将增强先天免疫应答非特异地杀伤肿瘤细胞，使APC(antigen presenting cell)的抗原提呈能力提高、 Th0细胞向Th1细胞型分化，从而更有效地激活T细胞介导的肿瘤特异的细胞免疫应答；同时，CpG能刺激B细胞扩增，并阻止B细胞凋亡，同时能直接激活B细胞。活化的B细胞分泌IL-6、IL-10等细胞因子和免疫球蛋白Ig M，并使细胞表面的Fcγ受体和MHCⅡ、CD80、CD86等辅助刺激分子表达上调，从而增强人体抗肿瘤体液免疫应答。
但是肿瘤自身经过DNA突变或基因表达改变调整抗原表达使某些变异肿瘤细胞耐受或抑制抗肿瘤免疫应答，从而发挥免疫逃逸。有研究表明，低剂量的蒽环类药物能够破坏恶性肿瘤并激发免疫系统识别的机制引起肿瘤免疫原性死亡，进而将肿瘤细胞转化为肿瘤疫苗，使“冷肿瘤”变成“热肿瘤”，引起适应性免疫应答。而且CpG药物药物可以和蒽环类药物自组装形成复合物，该复合物在体液中性环境下稳定存在，到达肿瘤酸性环境后解离，解离后蒽环类药物进入肿瘤细胞核使肿瘤细胞发生免疫原性死亡，CpG作用于胞内的TLR9，刺激其分泌细胞因子并激活机体免疫应答。因此将CpG类药物与蒽环类药物联合不仅能够提高肿瘤细胞的免疫应答能力，具有酸响应性，能够智能高效的消灭肿瘤。
基于CpG类药物与蒽环类药物形成复合物的机制，专利CN 101269223B发明了一种蒽环类药物纳米剂型，其中使用核酸做为蒽环类药物与阳离子化合物复合的媒介，蒽环类药物含量较高。该专利主要是通过阳离子的引入提高蒽环类药物的利用度，进而提高蒽环类药物细胞毒效果。但是较高含量的蒽环类药物存在剂量依赖的心脏毒性，表现为各种心律失常，累计剂量大时还会发生心肌坏死甚至充血性心力衰竭。并且，蒽环类药物的细胞毒性是非特异性的，其不仅可以杀死肿瘤细胞还能杀死免疫细胞及正常细胞，因此高比例的蒽环类药物将会降低CpG 类药物发挥免疫激活作用，不利于免疫治疗。
发明内容
本发明提供一种CpG药物与蒽环类药物复合物及其制备方法和用途，该复合物采用低剂量的蒽环类药物，蒽环类药物含量较低能引起肿瘤免疫原性死亡，并且不会产生广泛的细胞毒作用，从而辅助CpG药物实现更有效的肿瘤免疫治疗。
为实现上述目的，本发明采用如下技术方案：
CpG类药物与蒽环类药物复合物，所述的复合物包括CpG类药物和蒽环类药物，其中CpG类药物与蒽环类药物质量比为3：1-20：1。
所述的CpG类药物指的是含未甲基化CpG寡脱氧核苷酸。
所述的含未甲基化CpG寡脱氧核苷酸；包含A，B，C，P型CpG寡脱氧核苷酸；不仅包含其分子形式也包含其盐形式。
所述的CpG寡脱氧核苷酸不仅包含其分子形式也包含其盐形式，盐形式包括任何药学上可接受的盐、酯、和此类脂的盐。
所述的CpG寡脱氧核苷酸的药学上可接受的盐的优选实例包括金属盐诸如碱金属盐(例如钠盐、钾盐和锂盐)、碱土金属盐(例如钙盐和镁盐)、铝盐、铁盐、锌盐、铜盐、镍盐、钴盐等；胺盐诸如无机盐(例如铵盐)和有机盐(例如，叔辛基胺盐、二苄胺盐、吗啉盐、葡糖胺盐、苯基甘氨酸烷基酯盐、乙二胺盐、 N-甲基葡糖胺盐、胍盐、二乙胺盐、三乙胺盐、二环己胺盐、N，N’-二苄基乙二胺盐、氯普鲁卡因盐、普鲁卡因盐、二乙醇胺盐、N-苄基-苯乙胺盐、哌嗪盐、四甲基铵盐、三(羟甲基)氨基甲烷盐)等；无机酸盐诸如卤代氢酸盐(例如，氢氟化物、氢氯化物、氢溴化物、氢碘化物)、硝酸盐、高氯酸盐、硫酸盐、磷酸盐等；有机酸盐诸如链烷磺酸盐(例如。甲磺酸盐、三氟甲磺酸盐，乙磺酸盐)，芳基磺酸盐(例如，苯磺酸盐，对甲苯磺酸盐)、乙酸盐、苹果酸盐、富马酸盐、琥珀酸盐、柠檬酸盐、酒石酸盐、草酸盐、马来酸盐等；和氨基酸盐如甘氨酸盐、赖氨酸盐、精氨酸盐、鸟氨酸盐、谷氨酸盐和天冬氨酸盐。
所述的A型CpG寡脱氧核苷酸是指包含具有磷酸二酯(PO)骨架和硫代磷酸酯(PS)多G尾的一个回文非甲基化CpG基序的CpG寡脱氧核苷酸。
所述的B型CpG寡脱氧核苷酸是指由不含回文的多个非甲基化CpG基序及硫代磷酸酯(PS)骨架组成的CpG寡脱氧核苷酸。
所述的C型CpG寡脱氧核苷酸是指由一个位于5’端或近5’端的刺激性六聚 CpG基序组成，并由一个T间隔基连接到一个富含非甲基化GC的回文序列，由硫代磷酸酯(PS)骨架组成的CpG寡脱氧核苷酸。
所述的P型CpG寡脱氧核苷酸是指由两个含有两个回文非甲基化CpG基序及硫代磷酸酯(PS)骨架组成的CpG寡脱氧核苷酸。
所述的CpG寡脱氧核苷酸可以采用单链、双链和三链的任何形式，但其优选是单链。
所述的CpG类药物纯度不低于70％，优选85％以上。
所述的蒽环类药物指的是柔红霉素、多柔比星、阿柔比星、表柔比星、吡柔比星、伊达比星、戊柔比星、米托蒽醌(属衍生物蒽醌类)以及其盐形式或蒽环类药物衍生物及其盐形式中的一种或几种。
进一步的技术方案，所述的CpG类药物与蒽环类药物复合物的制备方法是将 CpG类药物和蒽环类药物按照质量比为3：1-20：1混合，搅拌5min-2h，即得CpG 类药物与蒽环类药物复合物。
进一步的技术方案，所述的CpG类药物与蒽环类药物复合物为冻干制剂或注射液。
进一步的技术方案，所述的CpG类药物与蒽环类药物复合物中包括辅料，辅料为甘露醇、蔗糖、氯化钠、HEPES或磷酸缓冲盐，溶剂为水。
进一步的技术方案，所述的CpG类药物与蒽环类药物复合物还含有一种或者是至少两种药学上可以接受的载体。
进一步的技术方案，所述的药学上可以接受的载体指的是脂质体、胶束、纳米囊、纳米晶、纳米球、微球等。
进一步的技术方案，所述的CpG类药物与蒽环类药物复合物可以单独给药或与其它药物联合给药。
进一步的技术方案，所述的CpG类药物与蒽环类药物复合物联合的其它药物为免疫检查点抑制剂或β-1,3葡聚糖。所述的免疫检查点抑制剂包括PD-1抑制剂、PD-L1抑制剂和靶向CTLA-4的药物等。β-1,3葡聚糖包括香菇多糖等。
进一步的技术方案，所述的CpG类药物与蒽环类药物复合物给药方式为静脉注射、肌肉注射、腹腔注射、皮下注射、瘤内注射和瘤旁注射，优选的，给药方式为静脉注射和瘤内注射。
进一步的技术方案，所述的CpG类药物与蒽环类药物复合物用于治疗乳腺癌、肝癌、肺癌、胃癌、结直肠癌、胰腺癌、淋巴癌、黑色素瘤、头颈癌等恶性肿瘤。
有益效果
本发明提供的CpG类药物和蒽环类药物发挥抗肿瘤作用，还能降低蒽环类药物对正常细胞的毒副作用，是一种智能、高效、低毒的治疗策略，具有良好的应用前景。本发明提供的CpG类药物与蒽环类药物复合物能够激发机体免疫应答，并引发持久的免疫记忆，在停药后仍能持续抑制肿瘤生长，这不仅能够降低蒽环类药物的毒副作用，还能抑制肿瘤的复发和转移。本发明提供的CpG类药物与蒽环类药物复合物，在生理条件下稳定存在，到达肿瘤组织酸性环境后发生解离，解离后蒽环类药物进入肿瘤细胞核使肿瘤细胞发生免疫原性死亡，CpG作用于胞内的 TLR9，刺激其分泌细胞因子并激活机体免疫应答。其中低剂量的蒽环类药物能够破坏恶性肿瘤并激发免疫系统识别的机制引起肿瘤免疫原性死亡，进而将肿瘤细胞转化为肿瘤疫苗，使“冷肿瘤”变成“热肿瘤”，引起适应性免疫应答。因此本发明提供的CpG药物核酸药物与蒽环类化疗药物联合不仅能够提高肿瘤组织对宿主的免疫性原性，防止肿瘤免疫逃逸，还能增强机体对肿瘤细胞的免疫应答能力，全方位打击肿瘤。CpG类药物与蒽环类药物复合物，巧妙地利用蒽环类药物的结构优势，低剂量的蒽环类药物复合物插入到CpG类药物的G-C碱基对中形成复合物，此制备工艺简单，操作简便，重复性好，可控性极高，产率可观，易于工业大生产。
附图说明
图1是CpG类药物(CpG-4)与蒽环类药物(米托蒽醌)不同剂量比的复合物对4T1乳腺癌模型抗肿瘤结果图。
图2、是实施例14各制剂组荷瘤鼠生存期。
图3是实施例15是各制剂组荷瘤鼠体重变化图。
图4是实施例8琼脂糖凝胶电泳实验图。
图5是实施例9的琼脂糖凝胶电泳实验图。
具体实施方式
以下实施例进一步说明本发明的内容，但不应理解为对本发明的限制。在不背离本发明精神和实质的情况下，对本发明方法、步骤或条件所作的修改和替换，均属于本发明的范围。若未特别指明，实施例中所用的技术手段为本领域技术人员所熟知的常规手段。
实施例1：称取5mg吡柔比星(道中道(菏泽)制药有限公司)，用蒸馏水配制成2mg/mL的吡柔比星储备液；称取5mg CpG-1(序列： 5’-tcgaacgttcgaacgttcgaacgttcgaat-3’(磷酸二酯键全部硫代磷酸化修饰)，生产厂家：广州锐博生物科技有限公司)用HEPES缓冲液配制成1mg/mL的CpG-1储备液。取2mL CpG-1储备液与0.2mL吡柔比星储备液混合，室温搅拌5min，即得CpG-1与吡柔比星复合物。
实施例2：称取5mg表柔比星(道中道(菏泽)制药有限公司)，用蒸馏水配制成2mg/mL的表柔比星储备液；称取5mg CpG-2(序列： 5‘-gGGGTCGTCGACGAggggG-3’(小写字母代表磷酸二酯键被硫代磷酸化修饰)，生产厂家：广州锐博生物科技有限公司)用HEPES缓冲液配制成1mg/mL 的CpG-2储备液。取2mL CpG-2储备液与0.1mL表柔比星储备液混合，室温搅拌2h，即得CpG-2与表柔比星复合物。
实施例3：称取5mg多柔比星(盐酸盐形式，道中道(菏泽)制药有限公司)，用蒸馏水配制成2mg/mL的多柔比星储备液；称取5mg CpG-2(序列： 5‘-gGGGTCGTCGACGAggggG-3’(小写字母代表磷酸二酯键被硫代磷酸化修饰)，生产厂家：广州锐博生物科技有限公司)用HEPES缓冲液配制成1mg/mL 的CpG-2储备液。取2mL CpG-2储备液与0.33mL多柔比星储备液混合，室温搅拌1.5h，即得CpG-2与多柔比星复合物。
实施例4：称取5mg伊达比星(道中道(菏泽)制药有限公司)，用蒸馏水配制成2mg/mL的伊达比星储备液；称取5mg CpG-2(序列： 5‘-gGGGTCGTCGACGAggggG-3’(小写字母代表磷酸二酯键被硫代磷酸化修饰)，生产厂家：广州锐博生物科技有限公司)用HEPES缓冲液配制成1mg/mL 的CpG-2储备液。取2mL CpG-2储备液与0.067mL伊达比星储备液混合，室温搅拌10min，加入5％甘露醇作为冻干保护剂，冻干即得CpG-2与伊达比星复合物。
实施例5：称取5mg柔红霉素(道中道(菏泽)制药有限公司)，用蒸馏水配制成2mg/mL的柔红霉素储备液；称取5mg CpG-3(序列：5‘-gGGGACGACGICGIGgggGG-’3(小写字母代表磷酸二酯键被硫代磷酸化修饰)，生产厂家：广州锐博生物科技有限公司)用HEPES缓冲液配制成1mg/mL 的CpG-3储备液。取2mL CpG-3储备液与0.05mL柔红霉素储备液混合，室温搅拌1h，即得CpG-3与柔红霉素复合物。将摩尔比DOTAP：EPC：Chol为50: 25:25溶解于100％的乙醇中，即得脂质体溶液。将CpG-3与柔红霉素复合物溶液与脂质体溶液3：1混合，混合方式使用注射泵按设定速度(水相溶液为 300mL/h，脂相溶液为100mL/h)推注射器进行管道内混合，超滤除去乙醇，加入10％蔗糖，冻干即得CpG-3与柔红霉素复合物脂质体。CpG-3与柔红霉素复合物脂质体的体外理化性质评价见表一。
实施例6：称取5mg阿柔比星(百灵威科技有限公司)，用蒸馏水配制成2mg/mL 的阿柔比星储备液；称取5mg CpG-4(序列：5’-tctcccagcgtgcgccat-3’(磷酸二酯键全部硫代磷酸化修饰)，生产厂家：广州锐博生物科技有限公司)用HEPES 缓冲液配制成1mg/mL的CpG-4储备液。取2mL CpG-4储备液与0.08mL阿柔比星储备液混合，室温搅拌30min，即得CpG-4与阿柔比星复合物。将摩尔比 DOTAP：EPC：Tween为50:30:20溶解于100％的乙醇中，即得脂质体溶液。将CpG-4与阿柔比星复合物溶液与脂质体溶液3：1混合，混合方式使用注射泵按设定速度(水相溶液为300mL/h，脂相溶液为100mL/h)推注射器进行管道内混合，超滤除去乙醇，即得CpG-4与阿柔比星复合物脂质体。CpG-4与阿柔比星复合物脂质体的体外理化性质评价见表一。
表一、体外理化性质评价。(实施例5和6)
Figure RE-RE-GDA0002385044610000071
实施例7：
1、药物：CpG-1，序列：5’-tcgaacgttcgaacgttcgaacgttcgaat-3’(磷酸二酯键全部硫代磷酸化修饰)；CpG-2，序列：5‘-gGGGTCGTCGACGAggggG-3’(小写字母代表磷酸二酯键被硫代磷酸化修饰)，CpG-3，序列： 5‘-gGGGACGACGICGIGgggGG-’3(小写字母代表磷酸二酯键被硫代磷酸化修饰)，CpG-4，序列：5’-tctcccagcgtgcgccat-3’(磷酸二酯键全部硫代磷酸化修饰)；生产厂家：广州锐博生物科技有限公司。吡柔比星、表柔比星、柔红霉素、多柔比星、阿柔比星、伊达比星，生产厂家：道中道(菏泽)制药有限公司。
辅料：氯化钠，生产产家：阿拉丁。蔗糖，生产产家：默克。
2、动物：BALB/c小鼠
3、细胞：小鼠B细胞淋巴癌A20细胞
4、给药方案：
(1)生理盐水组，50μL/只；
(2)CpG-1与吡柔比星复合物(实施例1)50μg/只，一周2次；
(3)CpG-2与表柔比星复合物(实施例2)50μg/只，一周2次；
(4)CpG-2与多柔比星复合物(实施例3)50μg/只，一周2次；
(5)CpG-2与伊达比星复合物(实施例4)50μg/只，一周2次；
(6)CpG-3与柔红霉素复合物脂质体(实施例5)550μg/只，一周2次；
其中，CpG-3与柔红霉素复合物脂质体中含有50μg的CpG-3与柔红霉素复合物；
(7)CpG-4与阿柔比星复合物脂质体(实施例6)550μg/只，一周2次；
其中，CpG-4与阿柔比星复合物脂质体中含有50μg的CpG-4与阿柔比星复合物；
5、实验方法：
将200μL含有1×106个A20细胞悬液皮下接种于小鼠的右后背，待肿瘤平均体积约100mm3按照上述给药方案瘤内注射给药，每周测量记录肿瘤大小体积2次。
6、实验结果：
表二、抑瘤率
组别 制备方法 抑瘤率(％)
CpG-1与吡柔比星复合物 见实施例1 70
CpG-2与表柔比星复合物 见实施例2 82
CpG-2与多柔比星复合物 见实施例3 69
CpG-2与伊达比星复合物 见实施例4 75
CpG-3与柔红霉素复合物脂质体 见实施例5 76
CpG-4与阿柔比星复合物脂质体 见实施例6 78
注：抑瘤率计算方法：抑瘤率＝1-(给药组小鼠的平均肿瘤体积/生理盐水组
小鼠的平均肿瘤体积)
实施例8：琼脂糖凝胶电泳实验
使用2L超纯水溶解TAE粉末(1瓶)，即得TAE缓冲液。称取1.5g琼脂，加入到含100mL电泳缓冲液的三角锥瓶中，在液面处做好记号，然后在微波炉中加热溶解琼脂糖。微波加热2min，取出添加超纯水至记号处，混匀，此操作重复3次，直至琼脂糖完全溶解。琼脂糖完全溶解后，加入20μl gelgreen，使溶液冷却至50℃-60℃左右，将琼脂糖溶液倒入制胶模中，然后在适当位置处插上梳子。凝胶厚度一般在3～5mm之间。在室温下使胶凝固，大约半小时。取各组分样品(CpG-5(序列：5’-ggGGICGACGIACGICGAggggG-3’(小写字母代表磷酸二酯键被硫代磷酸化修饰)，生产厂家：广州锐博生物科技有限公司)、 High DOX(高剂量多柔比星，道中道(菏泽)制药有限公司)、Low DOX(低剂量多柔比星)、CpG-5&DOX 5：1、CpG-5&DOX10：1、Marker)50μL与12μL 上样缓冲液混匀，用微量移液枪小心加入样品槽中。加完样后，合上电泳槽盖，立即接通电源。控制电压保持在125V。通电30min后，停止电泳，紫外下拍照并观察，结果如图4所示。
实验结果表明，CpG-5和多柔比星剂量比为5:1和10:1均形成了稳定的复合物，在电泳实验中稳定存在，没有分离现象。
实施例9：琼脂糖凝胶电泳实验
使用2L超纯水溶解TAE粉末(1瓶)，即得TAE缓冲液，加入盐酸将pH 调到6.0。称取1.5g琼脂，加入到含100mL电泳缓冲液的三角锥瓶中，在液面处做好记号，然后在微波炉中加热溶解琼脂糖。微波加热2min，取出添加超纯水至记号处，混匀，此操作重复3次，直至琼脂糖完全溶解。琼脂糖完全溶解后，加入20μl gelgreen，使溶液冷却至50℃-60℃左右，将琼脂糖溶液倒入制胶模中，然后在适当位置处插上梳子。凝胶厚度一般在3～5mm之间。在室温下使胶凝固，大约半小时。取各组分样品(CpG-6(序列：5’-ggGTCGTCGACGAggggG-3’ (小写字母代表磷酸二酯键被硫代磷酸化修饰)，生产厂家：广州锐博生物科技有限公司)、DOX(道中道(菏泽)制药有限公司)、CpG-7(序列： 5’-gGGGACGAICGTCGgggG-3’(小写字母代表磷酸二酯键被硫代磷酸化修饰)，生产厂家：广州锐博生物科技有限公司)、CpG-6&DOX、CpG-7&DOX)50μL 与12μL上样缓冲液混匀，用微量移液枪小心加入样品槽中。加完样后，合上电泳槽盖，立即接通电源。控制电压保持在125V。通电30min后，停止电泳，紫外下拍照并观察，结果如图5所示。
实验结果表明，CpG-6与多柔比星复合物、CpG-7与多柔比星复合物在pH 6.0 的酸性条件下的电泳实验中，CpG-6、CpG-7与多柔比星荧光均出现逐渐分离现象，说明CpG与多柔比星形成的复合物具有酸敏感性。而肿瘤组织呈酸性，因此CpG&蒽环类药物复合物到达肿瘤可以发生解聚，解离后蒽环类药物进入肿瘤细胞核使肿瘤细胞发生免疫原性死亡，CpG作用于胞内的TLR9，刺激其分泌细胞因子并激活机体免疫应答，具有肿瘤特异性。
实施例10：
1、药物：CpG-4，序列：5’-tctcccagcgtgcgccat-3’(磷酸二酯键全部硫代磷酸化修饰)，生产厂家：广州锐博生物科技有限公司。米托蒽醌，生产厂家：百灵威科技有限公司。复合物制备方法同实施例1-4。
辅料：氯化钠，生产产家：阿拉丁。甘露醇，生产产家：石家庄华旭药业股份有限公司。
2、动物：BALB/c小鼠。
3、细胞：小鼠乳腺癌4T1细胞。
4、给药方案：
(1)生理盐水组，50μL/只；
(2)CpG-4&米托蒽醌复合物51.67μg/只(CpG-4：米托蒽醌为30：1)，一周2次；
(3)CpG-4&米托蒽醌复合物52.5μg/只(CpG-4：米托蒽醌为20：1)，一周2次；
(4)CpG-4&米托蒽醌复合物55μg/只(CpG-4：米托蒽醌为10：1)，一周 2次；
(5)CpG-4&米托蒽醌复合物66.67μg/只(CpG-4：米托蒽醌为3：1)，一周2次；
(6)CpG-4&米托蒽醌复合物100μg/只(CpG-4：米托蒽醌为1：1)，一周 2次。上述复合物中CpG-4的含量均为50μg。
5、实验方法：
将200μL含有1×106个4T1细胞悬液皮下接种于小鼠的右后背，待肿瘤平均体积约100mm3按照上述给药方案瘤内注射给药，每周测量记录肿瘤大小体积2 次。
6、实验结果：
表三、抑瘤率。
组别 CpG药物:蒽环药物 抑瘤率(％)
2 30：1 45
3 20：1 68
4 10：1 80
5 3：1 71
6 1：1 58
注：抑瘤率计算方法：抑瘤率＝1-(给药组小鼠的平均肿瘤体积/生理盐水组小鼠的平均肿瘤体积)
7、结论：结合上表以及图2可以看出，CpG类药物与蒽环类药物剂量比为30：1 时抑瘤率为45％，这主要是由于蒽环类药物含量过低，两种药物没有起到协同作用导致的。当CpG类药物与蒽环类药物剂量比为1：1时抑瘤率为58％，这主要是由于蒽环类药物发挥了细胞毒作用限制了免疫作用，并受给药方式和给药剂量的限制其抑瘤效果有限。而CpG类药物与蒽环类药物剂量比为3:1、10:1和20:1时，肿瘤抑瘤率分别达到71％、80％和68％，说明在此剂量比范围内具有较高的抗肿瘤活性。
实施例11：
1、药物：CpG-3，序列：5‘-gGGGACGACGICGIGgggGG-’3(小写字母代表磷酸二酯键被硫代磷酸化修饰)，生产厂家：广州锐博生物科技有限公司。伊达比星，生产厂家：道中道(菏泽)制药有限公司。复合物制备方法同实施例1-4，脂质体的制备方法同实施例5-6。
辅料：氯化钠，生产产家：阿拉丁。蔗糖，生产产家：默克。
2、动物：BALB/c小鼠
3、细胞：小鼠B细胞淋巴癌A20细胞
4、给药方案：
(1)生理盐水组，50μL/只；
(2)CpG-3，50μg/只，一周2次；
(3)伊达比星，16.67μg/只，一周2次；
(4)CpG-3&伊达比星复合物66.67μg/只(CpG-3：伊达比星为3：1)，一周2次；
(5)CpG-3&伊达比星复合物脂质体666.67μg/只(CpG-3：伊达比星为3： 1)，一周2次；其中，CpG-3&伊达比星复合物脂质体中的CpG-3&伊达比星复合物含量为66.67μg。
5、实验方法：
将200μL含有1×106个A20细胞悬液皮下接种于小鼠的右后背，待肿瘤平均体积约100mm3按照上述给药方案瘤旁注射给药，每周测量记录肿瘤大小体积 2次。
6、实验结果：
表四、抑瘤率。
组别 抑瘤率(％)
CpG-3 37
伊达比星 41
CpG-3&伊达比星复合物 69
CpG-3&伊达比星复合物脂质体 72
注：抑瘤率计算方法：抑瘤率＝1-(给药组小鼠的平均肿瘤体积/生理盐水组
小鼠的平均肿瘤体积)
实施例12：
1、药物：CpG-2，序列：5‘-gGGGTCGTCGACGAggggG-3’(小写字母代表磷酸二酯键被硫代磷酸化修饰)，生产厂家：广州锐博生物科技有限公司。戊柔比星，生产厂家：道中道(菏泽)制药有限公司。
辅料：氯化钠，生产产家：阿拉丁。蔗糖，生产产家：默克。
2、动物：BALB/c小鼠
3、细胞：小鼠肝癌H22细胞
4、给药方案：
(1)生理盐水组，200μL/只；
(2)CpG-2，10mg/kg，一周2次；
(3)戊柔比星，0.5mg/kg，一周2次；
(4)CpG-2&戊柔比星复合物10.5mg/kg(CpG-2：戊柔比星为20：1)，一周2次；
(5)CpG-2&戊柔比星复合物微球63mg/kg(CpG-2：戊柔比星为20：1)，一周2次；
5、实验方法：
将200μL含有1×106个H22细胞悬液皮下接种于小鼠的右后背，待肿瘤平均体积约100mm3按照上述给药方案肌肉注射给药，每周测量记录肿瘤大小体积 2次。
6、实验结果：
表五、抑瘤率。
组别 抑瘤率(％)
CpG-2 40
戊柔比星 12
CpG-2&戊柔比星复合物 75
CpG-2&戊柔比星复合物微球 77
注：抑瘤率计算方法：抑瘤率＝1-(给药组小鼠的平均肿瘤体积/生理盐水组
小鼠的平均肿瘤体积)
实施例13：
1、药物：CpG-1，序列：5’-tcgaacgttcgaacgttcgaacgttcgaat-3’(磷酸二酯键全部硫代磷酸化修饰)，生产厂家：广州锐博生物科技有限公司。多柔比星(盐酸盐)，生产厂家：道中道(菏泽)制药有限公司。香菇多糖，生产厂家：南京绿叶制药有限公司。免疫检查点抑制剂为抗小鼠PD-1，生产厂家：南京绿叶制药有限公司。
辅料：氯化钠，生产产家：阿拉丁。蔗糖，生产产家：默克。
2、动物：BALB/c小鼠
3、细胞：小鼠结肠癌细胞株CT-26细胞
4、给药方案：
(1)生理盐水组，200μL/只；
(2)CpG-1，12mg/kg，一周2次；
(3)多柔比星，1.2mg/kg，一周2次；
(4)香菇多糖2mg/kg，一周2次；
(5)PD-1抑制剂250μL/只，一周2次；
(6)CpG-1&多柔比星复合物13.2mg/kg，(CpG-1：多柔比星为10：1)，一周2次；
(7)CpG-1&多柔比星复合物13.2mg/kg+香菇多糖2mg/kg，一周2次；
(8)CpG-1&多柔比星复合物13.2mg/kg+PD-1抑制剂250μL/只，一周2 次；
5、实验方法：
将200μL含有1×106个CT-26细胞悬液皮下接种于小鼠的右后背，待肿瘤平均体积约100mm3按照上述给药方案静脉注射给药，其中抗小鼠PD-1为腹腔注射给药，每周测量记录肿瘤大小体积2次。
6、实验结果：
表六、抑瘤率。
组别 抑瘤率(％)
CpG-1 38
多柔比星 23
香菇多糖 21
PD-1抑制剂 40
CpG-1&多柔比星复合物 81
CpG-1&多柔比星复合物+香菇多糖 85
CpG-1&多柔比星复合物+PD-1抑制剂 87
注：抑瘤率计算方法：抑瘤率＝1-(给药组小鼠的平均肿瘤体积/生理盐水组
小鼠的平均肿瘤体积)
实施例14：
1、药物：CpG-1，序列：5’-tcgaacgttcgaacgttcgaacgttcgaat-3’(磷酸二酯键全部硫代磷酸化修饰)，生产厂家：广州锐博生物科技有限公司。多柔比星(盐酸盐)，生产厂家：道中道(菏泽)制药有限公司。
辅料：氯化钠，生产产家：阿拉丁。蔗糖，生产产家：默克。
2、动物：BALB/c小鼠
3、细胞：小鼠结肠癌细胞株CT-26细胞
4、给药方案：
(1)生理盐水组，200μL/只；
(2)CpG-1，50μg/只，一周2次；
(3)多柔比星，5μg/只，一周2次；
(4)CpG-1&多柔比星复合物，55μg/只(CpG-1：多柔比星为10：1)，一周2次；
5、实验方法：
将200μL含有1×106个CT-26细胞悬液皮下接种于小鼠的右后背，待肿瘤平均体积约100mm3按照上述给药方案瘤内给药，共给药五次，停药后第七天将 200μL含有1×106个CT-26细胞悬液皮下接种于小鼠的左后背，N＝5，每周测量记录肿瘤大小体积2次。
6、实验结果：
表七、抑瘤率及对侧接种出瘤情况。
Figure RE-RE-GDA0002385044610000161
注：抑瘤率计算方法：抑瘤率＝1-(给药组小鼠的平均肿瘤体积/生理盐水组小鼠的平均肿瘤体积)
7、结论：CpG类药物与蒽环类药物复合物具有最佳的抑瘤效果；在停药后七天第二次接种肿瘤细胞后，生理盐水组在接种后第五天出瘤，并且五只小鼠全部出瘤，而CpG类药物与蒽环类药物复合物组在第10天才出瘤，仅仅两只小鼠长出瘤来，效果优于生理盐水组、CpG-1组和多柔比星组，说明CpG类药物与蒽环类药物复合物能够激发并持久保持免疫应答，使小鼠出瘤时间延长，出瘤只数减少；从图2的生存期数据可以看出，CpG类药物与蒽环类药物复合物降低其体内毒性，显著延长了小鼠的生存期。总之CpG类药物与蒽环类药物复合物具有理想的抑瘤效果并延长了小鼠生存期，是一种很有潜力的抗肿瘤治疗模式。
实施例15：
1、药物：CpG-3，序列：5‘-gGGGACGACGICGIGgggGG-’3(小写字母代表磷酸二酯键被硫代磷酸化修饰)，生产厂家：广州锐博生物科技有限公司。多柔比星(盐酸盐)，生产厂家：道中道(菏泽)制药有限公司。
辅料：氯化钠，生产产家：阿拉丁。蔗糖，生产产家：默克。
2、动物：BALB/c小鼠
3、细胞：小鼠结肠癌细胞株CT-26细胞
4、给药方案：
(1)生理盐水组；
(2)多柔比星(DOX)，5mg/kg，两天一次；
(3)CpG-3&DOX复合物，5mg/kg，两天一次；(CpG-3：多柔比星10： 1)；
(4)CpG-3&DOX复合物脂质体55mg/kg，两天一次；(CpG-3：多柔比星 10：1)；
5、实验方法：
将200μL含有1×106个CT-26细胞悬液皮下接种于小鼠的右后背，待肿瘤平均体积约100mm3按照上述给药方案静脉注射给药，每两天记录一次体重，结果如图4.
6、实验结果
表八、抑瘤率
组别 抑瘤率(％)
多柔比星 51
CpG&DOX复合物 83
CpG&DOX复合物脂质体 86
注：抑瘤率计算方法：抑瘤率＝1-(给药组小鼠的平均肿瘤体积/生理盐水组小鼠的平均肿瘤体积)7、结论：
抑瘤率数据可以看出，CpG&DOX复合物和CpG&DOX复合物脂质体抑瘤率高达83％和86％，而单独的化疗药多柔比星抑瘤率仅为51％，说明CpG和多柔比星形成的复合物及脂质体能够显著提高抑瘤效果。
图3中可以看出多柔比星由于其强烈的毒副作用，体重显著降低，体重下降27.5％。而CpG&DOX复合物和CpG&DOX脂质体体重和生理盐水相比没有显著变化，随着时间延长，体重逐渐上升，说明CpG&多柔比星复合物和CpG&多柔比星脂质体给药组小鼠状态良好，显著降低了多柔比星的毒副作用，体内安全性较高。
综上所述，CpG&蒽环类复合物和CpG&蒽环类脂质体不仅可以提高对肿瘤的抑制作用，还具有较高的体内安全性，是一种很有潜力的抗肿瘤治疗药物。
实施例16：
1、药物：CpG-4，序列：5’-tctcccagcgtgcgccat-3’(磷酸二酯键全部硫代磷酸化修饰)，生产厂家：广州锐博生物科技有限公司。表柔比星，生产厂家：道中道 (菏泽)制药有限公司。
辅料：氯化钠，生产产家：阿拉丁。甘露醇，生产产家：石家庄华旭药业股份有限公司。
2、动物：BALB/c小鼠。
3、细胞：小鼠乳腺癌4T1细胞。
4、给药方案：
(1)生理盐水组；
(2)CpG-4&表柔比星复合物10.33mg/kg(CpG-4：表柔比星为30：1)，一周2次；
(3)CpG-4&表柔比星复合物10.5mg/kg(CpG-4：表柔比星为20：1)，一周2次；
(4)CpG-4&表柔比星复合物11mg/kg(CpG-4：表柔比星为10：1)，一周 2次；
(5)CpG-4&表柔比星复合物13.33mg/kg(CpG-4：表柔比星为3：1)，一周2次；
(6)CpG-4&表柔比星复合物20mg/kg(CpG-4：表柔比星为1：1)，一周 2次。
5、实验方法：
将200μL含有1×106个4T1细胞悬液皮下接种于小鼠的右后背，待肿瘤平均体积约100mm3按照上述给药方案静脉注射给药，每周测量记录体重2次。
6、实验结果：
表九、给药后体重变化百分比。
组别 CpG药物:蒽环药物 体重变化(％) 抑瘤率(％)
1 0：0 +26.1 NA
2 30：1 +25.6 49
3 20：1 +24.1 65
4 10：1 +22.2 85
5 3：1 +2.4 67
6 1：1 -21.8 55
注：抑瘤率计算方法：抑瘤率＝1-(给药组小鼠的平均肿瘤体积/生理盐水组小鼠的平均肿瘤体积)
7、结论：CpG类药物与蒽环类药物剂量比为3：1、10:1和20:1时，体重增长率分别达到2.4％、20.2％和24.1％，在安全范围内。而CpG类药物与蒽环类药物剂量比1:1时，体重下降了21.8％，体重下降超过20％说明其产生了严重的毒副作用。综上所述，CpG类药物与蒽环类药物剂量比在3:1-20:1的范围内时，体内安全性较高。

Claims (12)

1.一种CpG类药物与蒽环类药物复合物，其特征在于，CpG类药物与蒽环类药物质量比为3：1-20：1。
2.根据权利要求1所述的CpG类药物与蒽环类药物复合物，其特征在于，所述的CpG类药物为含未甲基化CpG基序的寡脱氧核苷酸。
3.根据权利要求1所述的CpG类药物与蒽环类药物复合物，其特征在于，所述的蒽环类药物为柔红霉素、多柔比星、阿柔比星、表柔比星、吡柔比星、伊达比星、戊柔比星、米托蒽醌以及其盐形式或蒽环类药物衍生物及其盐形式中的一种或几种。
4.根据权利要求1所述的CpG类药物与蒽环类药物复合物，其特征在于，所述的CpG类药物和蒽环类药物复合物的制备方法为：按照比例的CpG类药物和蒽环类药物混合，搅拌5min-2h后，即得CpG类药物与蒽环类药物复合物。
5.根据权利要求1所述的CpG类药物与蒽环类药物复合物，其特征在于，该复合物可以直接使用或者含有一种或者是两种药学上可以接受的载体。
6.根据权利要求5所述的CpG类药物与蒽环类药物复合物，其特征在于，所述的药学上可以接受的载体为脂质体、胶束、纳米囊、纳米晶、纳米球、微球中的一种。
7.根据权利要求1所述的一种CpG类药物与蒽环类药物复合物，其特征在于，CpG类药物与蒽环类药物质量比为10:1。
8.根据权利要求1所述的CpG类药物与蒽环类药物复合物，其特征在于，该复合物可以单独给药或与其它药物联合给药。
9.根据权利要求8所述的CpG类药物与蒽环类药物复合物，其特征在于，所述的其它药物为免疫检查点抑制剂或β-1,3葡聚糖。
10.根据权利要求1所述的CpG类药物与蒽环类药物复合物，其特征在于，所述的复合物的给药方式为静脉注射、肌肉注射、腹腔注射、皮下注射、瘤内注射或瘤旁注射。
11.根据权利要求11所述的所述的CpG类药物与蒽环类药物复合物，其特征在于，复合物给药方式为静脉注射或瘤内注射。
12.权利要求1-11所述的CpG类药物与蒽环类药物复合物，其用于治疗癌症。
CN201911368456.2A 2019-12-26 2019-12-26 一种CpG类药物与蒽环类药物复合物、制备方法和应用 Pending CN113041351A (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201911368456.2A CN113041351A (zh) 2019-12-26 2019-12-26 一种CpG类药物与蒽环类药物复合物、制备方法和应用

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201911368456.2A CN113041351A (zh) 2019-12-26 2019-12-26 一种CpG类药物与蒽环类药物复合物、制备方法和应用

Publications (1)

Publication Number Publication Date
CN113041351A true CN113041351A (zh) 2021-06-29

Family

ID=76506533

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201911368456.2A Pending CN113041351A (zh) 2019-12-26 2019-12-26 一种CpG类药物与蒽环类药物复合物、制备方法和应用

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN113041351A (zh)

Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20180147224A1 (en) * 2015-05-15 2018-05-31 University Of Iowa Research Foundation Methods for treating tumors in situ including intratumor injection of cytotoxic particles and immune checkpoint blockade therapy
CN109675023A (zh) * 2019-02-19 2019-04-26 广东药科大学 一种卡介苗促进表阿霉素治疗膀胱癌的方法

Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20180147224A1 (en) * 2015-05-15 2018-05-31 University Of Iowa Research Foundation Methods for treating tumors in situ including intratumor injection of cytotoxic particles and immune checkpoint blockade therapy
CN109675023A (zh) * 2019-02-19 2019-04-26 广东药科大学 一种卡介苗促进表阿霉素治疗膀胱癌的方法

Non-Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
VAISHALI BAGALKOT等: "A Combined Chemoimmunotherapy Approach Using a Plasmid-Doxorubicin Complex" *
王瑾等: "CpG ODN对急性单核细胞白血病细胞株U937化疗敏感性的影响及其机制研究", 《西部医学》 *

Similar Documents

Publication Publication Date Title
RU2487938C2 (ru) НУКЛЕИНОВАЯ КИСЛОТА ФОРМУЛЫ (I): GlXmGn ИЛИ (II): GlXmGn, ПРЕДНАЗНАЧЕННАЯ ДЛЯ ПРИМЕНЕНИЯ ПРЕЖДЕ ВСЕГО В КАЧЕСТВЕ ИММУНОСТИМУЛЯТОРА/АДЪЮВАНТА
KR20140020900A (ko) Ｍｉｒ―34의 합성 모방체
CN103908468A (zh) 环二核苷酸cGAMP在制备抗肿瘤药物中的应用
US7125858B2 (en) Hyaluronic acid in the treatment of cancer
JP2015513897A (ja) 人工核酸分子
CN114206463A (zh) 脂质化合物和脂质纳米颗粒组合物
Brignole et al. Neuroblastoma targeting by c-myb-selective antisense oligonucleotides entrapped in anti-GD2 immunoliposome: immune cell-mediated anti-tumor activities
Aliouat et al. Pure DNA scaffolded drug delivery systems for cancer therapy
CN116456967A (zh) 可离子化脂质体、其制备及在基因递送中的应用
CN104024413B (zh) 小干扰RNA及其应用和抑制plk1基因表达的方法
WO2017162055A1 (zh) 环二核苷酸cGAMP-脂质体在抗肿瘤中的应用
US20020091095A1 (en) Modulation of Fas and FasL expression
Silvestrini et al. Nanotechnology strategies to address challenges in topical and cellular delivery of siRNAs in skin disease therapy
JP6536964B2 (ja) 免疫賦活活性を有する核酸多糖複合体の抗腫瘍薬としての応用
CN115227684A (zh) 靶向M2型巨噬细胞CpG和ELE脂质体及制法和应用
JP3824207B2 (ja) 癌細胞内ヌクレアーゼ活性化剤
CN113041351A (zh) 一种CpG类药物与蒽环类药物复合物、制备方法和应用
CN118001254A (zh) 靶向抗原呈递细胞的脂质组合物及其应用
US6342485B1 (en) Synergistic compositions useful as anti-tumor agents
EP2428228A1 (en) Use of a linear DNA expression construct with covalently closed ends
US20220202952A1 (en) Immunostimulatory lipoplex, pharmaceutical composition including immunostimulatory lipoplex, and uses thereof
US20230190653A1 (en) Method for reducing off-target uptake or accumulation of agents
US11326164B2 (en) Trimethylglycylglycerin compositions and their use in developing anti-cancer drugs and RNA vaccines
CN113041256A (zh) 一种使用CpG寡脱氧核苷酸和β-1，3-葡聚糖的联合给药系统、方法和用途
WO2024137455A1 (en) Nanoparticulate formulation

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
RJ01 Rejection of invention patent application after publication

Application publication date: 20210629

RJ01 Rejection of invention patent application after publication